LIPASA

MÉTODO COLORIMÉTRICO
Para la determinación “in vitro” de Lipasa en suero o plasma

PRINCIPIO DEL TEST PROCEDIMIENTO

A pH alcalino, el substrato de lipasa 1,2-O-dilauril-rac-glicero-3-ácido glutárico-(6- Atemperar el reactivo de trabajo y llevar el instrumento a 37ºC
metilresorufina)-éster se desdobla por acción de la lipasa pancreática, formándose 1,2–O–
dilauril–rac-glicerol y ácido glutárico-(6–metilresorufina)-éster, que es un producto inesta-
ble. BL PR ST
Técnica ml
Éste, en solución alcalina, se transforma espontáneamente en ácido glutárico y metilreso- ml ml
rufina, cuya intensidad de color a 578 nm es directamente proporcional a la actividad de la Agua 0,01 --- ---
lipasa presente en la muestra.
Muestra --- 0,01 ---
UTILIDAD DIAGNÓSTICA
Standard --- --- 0,01
La lipasa se encuentra elevada en pancreatitis de cualquier origen, y estos valores perma-
necen elevados durante más tiempo que los de la amilasa. Reactivo A 1,00 1,00 1,00
En alteraciones crónicas del páncreas se encuentra un valor elevado de lipasa y lo mismo
ocurre en casos de cirrosis biliar primaria, insuficiencia renal crónica y en pacientes en Mezclar e incubar 5 min., a 37º C.
hemodiálisis. Adicionar seguidamente el Reactivo B

Reactivo B 0,6 0,6 0,6

Una única prueba de laboratorio no permite establecer un diagnóstico. Los resultados se
han de evaluar en el contexto de todos los datos clínicos y de laboratorio obtenidos. Mezclar bien. Al cabo de 60, segundos leer la absorbancia Abs1.
Pasados 90 seg. más, leer de nuevo la absorbancia Abs2.
REACTIVOS
Kit 1 x 80 ml. (Ref. 99 11 15). Contiene: Lectura
A.1 x 50 ml. Disolución tampón. Ref. 99 11 20 Longitud de onda: 578 nm.
B. 1 x 30 ml. Substrato. Ref. 99 12 15 Blanco: agua desionizada.
C. 1 x 1 ml. Standard liofilizado. Ref. 99 13 07 Cubeta termostatizada: 1 cm de paso de luz.
La concentración viene indicada en la etiqueta del vial
CÁLCULOS
PREPARACIÓN DEL REACTIVO DE TRABAJO Determinar ΔAbs para cada muestra y el ST:
Los reactivos A y B, están listos para su uso. ΔAbs = Abs2 – Abs1
El estándar liofilizado se ha de rehidratar con 1 ml. de agua desionizada.
ΔAbs PR - ΔAbs BL
COMPOSICIÓN DE LOS REACTIVOS x Conc. STD (U/L) = U/L.
ΔAbs ST - ΔAbs BL
Las concentraciones de los reactivos son:
A. Disolución tampón Resultados en μkat/L
Tampón Bicina pH 8,0 50 mM
U/L x 0,0167 = μkat/L
Colipasa ≥ 1 mg/L
Desoxicolato Na 1,8 mM
VALORES DE REFERENCIA
Cloruro cálcico 12 mM
Suero, plasma: ˂ 60 U/L.
Los valores indicados son a título orientativo. Se recomienda que cada laboratorio esta-
B. Substrato blezca sus propios valores de referencia.
Tampón Tartrato pH 4,0 12 mM
1,2-O-dilauril-rac-glicero-3- PRESTACIONES. CARACTERÍSTICAS DE FUNCIONAMIENTO
ácido glutárico-(6-metilresorufina)-ester 0,27 mM Las características de funcionamiento del producto dependen tanto del reactivo como del
Taurodesoxicolato 9,0 mM sistema de lectura manual o automático empleados.
Estabilizantes y conservantes Los siguientes datos se han obtenido manualmente

CONSERVACIÓN Y ESTABILIDAD Sensibilidad, como límite de detección: 2 U/L

Los componentes del kit almacenados a 2-8ºC, son estables hasta la fecha de caducidad Linealidad: La reacción es lineal hasta 300 U/L. Sin embargo para concentraciones supe-
indicada en la etiqueta. El estándar una vez rehidratado es estable 15 días a 2-8ºC. riores diluir la muestra 1/5 con disolución salina y multiplicar el resultado por 5.
Exactitud, como % de recuperación: 97,6%
Indicaciones de alteración de los reactivos: Precisión en la serie, como Coeficiente de Variación: 2,28 %
Presencia de turbidez o de partículas. Blanco del reactivo de trabajo ≥0,500. Precisión entre series, como Coeficiente de Variación: 2,64 %
Veracidad: Los resultados obtenidos con el reactivo no presentan diferencias significativas
MATERIAL NECESARIO NO SUMINISTRADO al compararlo con el reactivo considerado de referencia.
Material de uso general de laboratorio.
Espectrofotómetro, fotómetro o analizador automático termostatizado. Cubeta 1 cm de Los datos detallados del estudio de las prestaciones del reactivo están disponibles bajo
paso de luz. demanda.

MUESTRA INTERFERENCIAS
Se recomienda el uso de material desechable para la realización del ensayo.
Suero o plasma heparinizado. No emplear plasma con EDTA. Utilizar muestras exentas de
Evitar el uso de muestras hemolizadas.
hemólisis. La actividad lipásica en suero es estable 4 días a 2º-8º C y 24 horas a tempe-
La hemoglobina interfiere a partir de 400 mg/dl, la bilirrubina a partir de 50 mg/dl.
ratura ambiente (≤ 25ºC).
CONTROL DE CALIDAD
PRECAUCIONES Es recomendable la inclusión de sueros control, Seriscann Normal (Ref. 99 41 48) y Se-
El reactivo contiene Azida sódica al 0,09%, manipular con precaución. riscann Anormal (Ref. 99 46 85) en cada proceso de medida para verificar los resultados.
Las indicaciones de seguridad se encuentran en la etiqueta de los productos. Se aconseja Se aconseja que cada laboratorio establezca su propio programa de control de calidad y los
consultar la ficha de datos de seguridad antes de la manipulación del reactivo. procedimientos de corrección de las desviaciones detectadas.
La eliminación de residuos debe hacerse según la normativa local vigente.
AUTOANALIZADORES
Adaptaciones a distintos analizadores automáticos, disponibles bajo demanda.

BIBLIOGRAFÍA
Rick, W., (1969), Zeittschrift Clin. Chem. Clin. Biochem., 7, 530 – 536.
Ziegenhorn, J. et al., (1979), Clin. Chem., 25, 1067.
Neumann, U., Kaspar, P., Ziegenhorn, J., (1984) Meth. Enz. Anal (3rd edition), 26 - 34.
Lott, J. A. et al., (1986). Clin. Chem., 32, 1290 – 1302.

QUIMICA CLINICA APLICADA S.A.

Empresa Certificada ISO 9001 / ISO 13485
A 7 Km 1081 – P.O. Box 20 - E43870 AMPOSTA / SPAIN
Tel. ++ 34 (977) 70. 62. 30 Fax ++ 34 (977) 70. 30. 40
Revisión: Abril 2016 PRO4_REG9_LIPC_4
LIPASE
COLORIMETRIC METHOD
For the “in vitro” determination of Lipase in serum or plasma

PRINCIPLE PROCEDURE
At alkaline pH the lipase substrate 1,2-O-dilauryl-rac-glycero-3- glutaric acid-(6- Bring reagents and the analyzer to 37ºC.
methylresorufin)-esther is cleaved by the catalytic action of pancreatic lipase to form 1,2-O-
dilauryl-rac-glycerol and unstable compound glutaric acid-(6-methylresorufin)-esther. In that
BL SA ST
alkaline solution, this compound degrades to glutaric acid and methyl-resorufin. The color Technique ml ml ml
intensity of the red dye formed is directly proportional to the lipase activity. This activity can
be measured at 578 nm. Water 0.01 --- ---

DIAGNOSTIC USE Sample --- 0.01 ---

The lipase is increased in pancreatitis from any source, and these values remain high lon- Standard --- --- 0.01
ger than amylase values.
In chronic disorders of the pancreas the Lipase value is high and the same applies in cases Reagent A 1.00 1.00 1.00
of primary biliary cirrhosis, chronic renal failure and hemodialysis patients.
Single test result could not be used to make a clinical diagnosis. It should integrate clinical Mix and incubate 5 min., at 37º C.
and laboratory data. Then add Reagent B
Reagent B 0.6 0.6 0.6
REAGENTS
Kit 1 x 80 ml (Ref. 99 11 15). Contains: Mix well. After 60 seconds read (Abs1). After 90 seconds more, read again (Abs2).
A. 1 x 50 ml. Buffer solution. Ref. 99 11 20
B. 1 x 30 ml. Substrate. Ref. 99 12 15 Reading
C. 1 x 1ml. Freeze-dried Standard. Ref. 99 13 07 Wavelength: 578 nm.
The concentration is stated on the label of the vial. Blank: deionised water.
Cuvette thermostatized: 1 cm light-path.
WORKING REAGENT PREPARATION
Reagents are ready to use. CALCULATION
Rehydrate the standard with 1 ml. of deionised water. Determine ΔAbs for each sample and the standard:
ΔAbs = Abs2 – Abs1
REAGENT COMPOSITION
The concentrations in the reagents solutions are: ΔAbs SA - ΔAbs BL
A. Buffer solution x Conc. STD(U/L) = U/L.
ΔAbs ST - ΔAbs BL
Bicin buffer pH 8.0 50 mM
Colipase ≥ 1 mg/l
Results as μkat/L
Sodium deoxycholate 1.8 mM
U/L x 0.0167 = μkat/L
Calcium chloride 12 mM
REFERENCE VALUES
B. Substrate
Serum, plasma: < 60 U/L.
Tartrate buffer pH 4.0 12 mM
Each particular laboratory should establish its own normal range, obtained from samples
1,2-O-dilauryl-rac-glycero-3-glutaric acid-
of a representative population, using its own instrumentation, blood collection methods and
-(6-methylresorufin) - esther 0.27 mM
assaying procedures.
Taurodeoxy-cholate 9.0 mM
Surfactants and preservatives
PERFORMANCE CHARACTERISTICS
The performance characteristics depend on the method used. It is recommended to calcu-
STORAGE AND STABILITY
late these data for each particular test protocol. These results have been obtained using a
When stored at 2º - 8 ºC, the components of the kit will remain stable until the expiration
manual method.
date stated on the label.
The standard, once rehydrated, is stable for 15 days at 2-8 ºC.
Sensitivity, as detection limit: 2 U/L
Signs of reagent deterioration:
Linearity: Up to 300 U/L. For higher values, it is recommended to dilute the sample 1/5 in
Presence of particles or turbidity in the reagent. Working reagent blank ≥0.500.
saline (NaCl 0.9%) and assay once again. Multiply the final result by 5.
ADDITIONAL EQUIPMENT Accuracy: 97.6 %
General laboratory equipment. Within-run Precision as Coefficient of Variation: 2.28%
Spectrophotometer, automated analyzer or photometer with thermostated cuvette. Run-to-run Precision as Coefficient of Variation: 2.64%
Trueness: Results obtained with this reagent did not show systematic differences when
SAMPLE compared with reference reagent.
Serum or heparinized plasma. Use samples free from hemolysis. Do not use plasma with Details of the performance studies are available on request
EDTA.
The Lipase activity in serum is stable for 4 days at 2º-8º C and for 24 h at room temperature INTERFERENCES
(≤ 25ºC). Hemolysis interferes with the assay.
Concentrations of Hemoglobin higher than 400 mg/dl and of Bilirubin higher than 50 mg/dl
CAUTION can interfere with the assay.
The reagent contains Sodium azide at 0.09%. Handle with care. To perform this test, the use of disposable labware is highly recommended.
The safety statements are on the label. It is advisable to look at the MSDS before using
the reagent. QUALITY CONTROL
The disposal of the residues has to be made according to local regulations. Control serum, Seriscann Normal (Ref. 99 41 48) and Seriscann Anormal (Ref. 99 46 85)
should be included in each test series. Each particular laboratory should establish its own
control program.

AUTOANALYZERS
QCA has adaptation to other autoanalyzers on request.

REFERENCES
Rick, W., (1969), Zeittschrift Clin. Chem. Clin. Biochem., 7, 530 – 536.
Ziegenhorn, J. et al., (1979), Clin. Chem., 25, 1067.
Neumann, U., Kaspar, P., Ziegenhorn, J., (1984) Meth. Enz. Anal (3rd edition), 26 – 34.
Lott, J. A. et al., (1986). Clin. Chem., 32, 1290 – 1302.

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LIPASE
MÉTHODE COLORIMÉTRIQUE
Pour la détermination in vitro de la lipase dans le sérum ou le plasma

PRINCIPE TECHNIQUE
À un pH alcalin, le substrat de lipase 1,2-O-dilauryl-rac-glycéro-3-acide glutarique-(6- Mélanger puis incuber le réactif de travail et l’analyseur à 37 ºC.
méthylrésorufine) ester se scinde sous l’action de la lipase pancréatique en 1,2-O-dilauryl-
rac-glycérol et en acide glutarique-(6-méthyl-résorufine) ester, qui est un produit instable. BL ESSAI ÉTALON
Technique
Dans une solution alcaline, ce dernier se transforme spontanément en acide glutarique ml ml ml
et en méthyl-résorufine, dont l’intensité de la coloration est directement proportionnelle à Eau 0,01 --- ---
l’activité de la lipase présente dans l’échantillon quantifié à 578 nm.
Échantillon --- 0,01 ---
UTILITÉ DE DIAGNOSTIC Étalon --- --- 0,01
La lipase est élevée en cas de pancréatite de n’importe quelle origine, et ces valeurs restent
élevées plus longtemps que les valeurs de l’amylase. Réactif A 1,00 1,00 1,00
En cas de troubles chroniques du pancréas, la valeur de la lipase est élevée et la même
Mélanger et incuber pendant 5 minutes à 37 ºC.
chose s’applique dans les cas de cirrhose biliaire primitive, d’insuffisance rénale chronique
Ajouter ensuite le réactif B.
et des patients hémodialysés.
Un test de laboratoire unique ne peut pas établir un diagnostic. Les résultats doivent être Réactif B 0,6 0,6 0,6
évalués dans le contexte de toutes les données cliniques et de laboratoire obtenus.
Bien mélanger puis lire (Abs1) au bout de 60 secondes.
RÉACTIFS Effectuer une nouvelle lecture (Abs2) au bout de 90 secondes.
Kit 1 x 80 ml (Réf. 99 11 15). Contenu:
A.1 x 50 ml Solution tampon. Réf. 99 11 20 Lecture
B. 1 x 30 ml Substrat. Réf. 99 12 15 Longueur d’onde: 578 nm
C. 1 x 1 ml Étalon lyophilisé. Réf. 99 13 07 Blanc: le contenu du tube BL.
La concentration est indiquée sur l’étiquette de la fiole. CALCULS
Calculer ΔAbs pour chaque échantillon et pour l’étalon
PREPARATION DU REACTIF DE TRAVAIL ΔAbs = Abs2 – Abs1
Les réactifs A et B sont prêts à l’emploi.
Étalon: Réhydrater le contenu de la fiole avec 1 ml d’eau déionisée. ΔAbs ESSAI - ΔAbs BL
x Conc. Étalon (U/L) = U/L.
COMPOSITION DU REACTIFS ΔAbs ÉTALON - ΔAbs BL
Les concentrations des réactifs sont les suivantes:
A. Solution tampon Résults en μkat/L
Tampon Bicin pH 8,0 50 mM U/L X 0,0167 = μkat/L
Colipase ≥ 1 mg/l
Désoxycholate Na 1,8 mM VALEURS DE RÉFÉRENCE
Chlorure de calcium 12 mM Sérum, plasma: < 60 U/L
Il est recommandé que chaque laboratoire établisse ses propres valeurs de référence.
B. Substrat
Tampon tartrate pH 4,0 12 mM PERFORMANCE. CARACTÉRISTIQUES DE FONCTIONNEMENT
1,2-O-dilauryl-rac-glycéro-3- Le fonctionnement du produit dépend tant du réactif que du système de lecture manuel ou
acide glutarique-(6-méthyl-résorufine) ester 0,27 mM automatique utilisé. Les résultats suivants ont été obtenues avec une mrthode manuelle.
Taurodésoxycholate 9,0 mM
Stabilisants et conservateurs Sensibilité comme limite de détection: 2 U/L
Linéarité: L’essai est linéaire jusqu’à 300 U/L. Pour des concentrations plus élevées,
CONSERVATION ET STABILITÉ diluer l’échantillon 1/5 avec une solution saline (NaCl 0,9%). Multipliez le résultat par 5.
Conservés entre 2 et 8 ºC, les composants du kit sont stables jusqu’à la date de péremption Exactitude: le pourcentage de récupération est de 97,6 %.
indiquée sur l’étiquette. Précision dans la série, comme CV% : 2,28 %
Après réhydratation, l’étalon est stable pendant 15 jours à une température comprise entre Précision totale, comme CV% : 2,64 %
2 et 8 ºC. Justesse. Les résultats obtenus avec le réactif ne sont pas significativement différents par
Les réactifs seront altéré si: rapport au réactif de référence considéré.
Il existe une présence de particules ou de turbidité. Blanc Réactif de travail > 0,500. L’étude détaillée de la performance du réactif sont disponibles sur demande.

MATÉRIEL NÉCESSAIRE MAIS NON FOURNI INTERFÉRENCES

Matériel courant de laboratoire. L’hémoglobine et la bilirubine interfèrent à partir de 400 mg/dl et de 50 mg/dl respectivement.
Spectrophotomètre, analyseur automatique ou photomètre thermostaté à 37 °C. L’utilisation de matériel jetable est recommandée pour la réalisation de cet essai.

ÉCHANTILLON CONTRÔLE DE QUALITÉ

Sérum ou plasma hépariné. Ne pas utiliser de plasma sur EDTA. Utiliser des échantillons Nous recommandons l’inclusion de sérums de contrôle Seriscann normale (Réf. 99 41 48)
exempts d’hémolyse. L’activité lipasique est stable dans le sérum pendant 4 jours entre 2 et Seriscann anormale (Ref 99 46 85) dans chaque processus de mesure pour vérifier les
et 8 ºC et 24 heures à température ambiante(≤ 25ºC). résultats.
Nous suggérons que chaque laboratoire d’établir son propre programme et les procédures
de correction des écarts dans les mesures de contrôle qualité.
PRÉCAUTIONS D’EMPLOI
Le réactif contient de l’azide de sodium (0,09 %) comme conservateur. Manipuler avec ANALYSEURS AUTOMATIQUES
précaution. On conseille de consulter la fiche des données de sécurité avant de manipuler le Des adaptations à différents analyseurs automatiques sont disponibles sur demande..
réactif. L’élimination des déchets doit être effectuée conformément aux normes en vigueur.
BIBLIOGRAPHIE
Rick, W., (1969), Zeittschrift Clin. Chem. Clin. Biochem., 7, 530 – 536.
Ziegenhorn, J. et al., (1979), Clin. Chem., 25, 1067.
Neumann, U., Kaspar, P., Ziegenhorn, J., (1984) Meth. Enz. Anal (3e édition), 26 – 34.
Lott, J. A. et al., (1986). Clin. Chem., 32, 1290 – 1302.

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