INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL
UNIDAD PROFESIONAL INTERDISCIPLINARIA DE BIOTECNOLOGÍA
MAESTRIA EN CIENCIAS EN BIOPROCESOS
ALUMNO:
COLIN ALVAREZ BRYAN IVAN
DOCTOR:
DR. LUIS JORGE CORZO RIOS.
TEMA:
CROMATOGRAFIA
Cromatografía
La cromatografía es una técnica utilizada en química para separar, identificar y analizar
los componentes individuales de una mezcla. Se basa en las diferencias en la afinidad de
los componentes de la mezcla por dos fases: una fase estacionaria y una fase móvil.
La fase estacionaria puede ser un sólido o un líquido inmovilizado en una superficie sólida,
mientras que la fase móvil puede ser un líquido o un gas que se mueve a través o sobre
la fase estacionaria. Los componentes de la mezcla interactúan de manera diferente con
ambas fases, lo que resulta en velocidades de migración distintas y, por lo tanto, en su
separación.
Tipos de cromatografía:
1.-Cromatografía de papel
La cromatografía en papel es una técnica especializada, ideal para compuestos altamente
polares o multifuncionales. Se emplea principalmente en el análisis de azúcares,
aminoácidos y pigmentos naturales. Este método se basa en el fenómeno de partición,
donde la fase estacionaria se integra en un soporte activo, como el papel, que forma parte
esencial de dicha fase estacionaria, siendo el agua el componente principal. Durante el
proceso, las fases móvil y estacionaria interactúan en una interfaz amplia, permitiendo
una rápida distribución de equilibrio del soluto entre ellas. Si la muestra contiene varios
solutos, se separan debido a sus distintos coeficientes de partición.
La ejecución de la cromatografía en papel implica depositar la muestra en un fragmento
de papel de calidad, comúnmente Whatman N°1 para análisis cromatográficos. Luego,
este papel se introduce en una cámara de desarrollo, donde el solvente (fase móvil)
asciende por capilaridad (técnica ascendente) o desciende por capilaridad y gravedad
(técnica descendente).
La fase estacionaria, compuesta por una mezcla de celulosa y agua, posee propiedades
diferentes a las del agua pura, lo que facilita la separación y la interacción selectiva con
los solutos presentes en la muestra. Este método es valioso para separar y analizar
componentes que interactúan con la fase estacionaria de manera distinta, ofreciendo así
una herramienta efectiva para el estudio detallado de compuestos polares y
multifuncionales en diversas aplicaciones analíticas.
Fig. 1 Cromatografía en papel
2.-Cromatografía en capa fina (TLC, del inglés Thin Layer Chromatography)
Es una técnica analítica rápida y sencilla que consiste en la separación de los
componentes de una muestra debido a su migración diferencial a través de una capa
delgada de adsorbente, generalmente sostenido por una superficie plana inerte. Esta
herramienta se basa en el principio de adsorción entre dos fases, en donde la separación
se realiza de acuerdo con los coeficientes de reparto de las moléculas de la muestra. La
TLC permite determinar el grado de pureza de un compuesto, identificar y comparar
analitos y realizar el seguimiento de una reacción, razón por la que es ampliamente
usada. Asimismo, esta técnica es de fácil comprensión y ejecución, lo que permite
separaciones en corto tiempo, versátiles y de bajo costo
Fig. 2 Cromatografía ascendente en capa fina
3.- Cromatografía de columna
Es una técnica ampliamente utilizada para la separación y purificación de una variedad
de compuestos orgánicos, ya sea en estado líquido o sólido. En este método, la fase
estacionaria se dispone en el interior de una columna de vidrio equipada con una llave en
su extremo inferior para regular el flujo de sustancias.
La fase estacionaria se coloca en la parte superior de la columna, permitiendo que la fase
móvil pase a través del sistema. Los compuestos disueltos en la fase móvil se desplazan
gradualmente a lo largo de la columna cromatográfica y se recogen en fracciones a
medida que salen de la columna.
La eficacia de este tipo de cromatografía radica en la reducción del tamaño de las
partículas del absorbente, lo que mejora la interacción entre la fase estacionaria y los
compuestos presentes en la muestra, facilitando así una separación más precisa y
eficiente de los componentes.
Fig. 3 Cromatografía en columna
4.- Cromatografía de intercambio iónico
Es un procedimiento que posibilita la separación de iones y moléculas polares,
fundamentado en las propiedades de carga de dichas moléculas. Esta técnica es
aplicable a una amplia gama de moléculas cargadas, abarcando desde grandes proteínas
hasta pequeños nucleótidos y aminoácidos. La solución que se introduce suele
denominarse "muestra", mientras que los componentes separados individualmente se
conocen como analitos. Esta forma de cromatografía se emplea con frecuencia en la
purificación de proteínas, el análisis de agua y el control de calidad en diversos campos
industriales. Su capacidad para separar moléculas en función de sus cargas eléctricas la
convierte en una herramienta valiosa para estudiar y purificar compuestos cargados,
contribuyendo significativamente a la investigación científica y a la calidad de productos
en la industria.
Fig. 4 Cromatografía de intercambio iónico
5.- Cromatografía de exclusión molecular
Esta emplea una fase estacionaria compuesta por un material poroso que permite el paso
de los analitos según sus tamaños. A diferencia de otros tipos de cromatografía, en este
método no hay interacción física o química entre los analitos y la fase estacionaria. Los
analitos de mayor tamaño no se retienen en la fase estacionaria. Mientras tanto, los
analitos más pequeños quedan atrapados en los poros de la fase estacionaria y se liberan
a medida que la fase móvil (líquida) atraviesa el sistema.
Este enfoque de cromatografía es valioso para separar moléculas según sus
dimensiones físicas, permitiendo la clasificación y el análisis de componentes en función
de sus tamaños moleculares. Es una técnica comúnmente utilizada en la caracterización
de macromoléculas, como proteínas, polímeros y otros compuestos de interés, lo que
facilita su aplicación en la investigación biomédica, la industria farmacéutica y en el
análisis de materiales.
Fig. 5 Cromatografía de exclusión
Aplicaciones:
Industria Farmacéutica
Análisis de medicamentos para la determinación de los componentes activos
presentes ya sea en una tableta analgésica.
Caracterización de impurezas en productos farmacéuticos por cromatografía
líquida de alta resolución.
Determinación cuantitativa de principios activos y/o impurezas en productos
farmacéuticos por cromatografía líquida de alta resolución.
Validación de procedimientos analíticos para la determinación de productos
farmacéuticos
Industria Química
Caracterización de compuesto y materiales poliméricos
Determinación de composición, pureza, avance de reacción, distribución de
masa molar absoluta y relativa, distribución de tamaño de partícula y
potencial Zeta de compuestos y materiales poliméricos.
Bioquímica
Cuantificación de fosfolípidos en muestras de ámbito biológico.
Determinación de vitaminas hidro y liposolubles en leche por cromatografía
líquida de alta resolución- UV-Vis.
Industria de Alimentos
Detección colorimétrica para la medición simultánea de los antioxidantes.
Medición de azúcares en bebidas y zumos para la determinación de cantidad
de azúcar añadida.
Determinación de compuestos diferentes en el vino para la determinación del
color, edad y variedades de uva utilizadas.
Medio Ambiente
Determinación de hidrocarburos polinucleares como contaminantes
atmosféricos.
Análisis de contaminación de pesticidas.
Importancia
La cromatografía desempeña un papel crucial en el descubrimiento de nuevos fármacos,
el análisis de muestras ambientales para el monitoreo de contaminantes, el estudio de
compuestos naturales y la investigación forense. Su contribución a la comprensión de la
composición de mezclas complejas y la determinación precisa de sustancias ha sido
fundamental en numerosos campos científicos y tecnológicos.
En conclusión, la cromatografía es una técnica analítica poderosa y versátil que ha
revolucionado la química y otras disciplinas científicas. Su continua evolución y su
capacidad para adaptarse a nuevos desafíos hacen de esta técnica un pilar fundamental
en la investigación y la industria.
Referencias
1. Alternative bioseparation operations: life beyond packed-bed chromatography
T.M. Przybycien, N.S. Pujar and L.M. Steele Curr Opin Biotechnol, 15 (5) (2004),
pp. 469-478.
2. "Cromatografía". Autor: Dianelys Ondarse Álvarez. De: Argentina.
Para: [Link]. Disponible en: [Link] Última
edición: 15 de julio de 2021. Consultado: 01 de diciembre de 2023
3. 10. Kumar, S., Jyotirmayee, K. y Sarangi, M. Thin layer chromatography: a tool of
biotechnology for isolation of bioactive compounds from medicinal plants. Int. J.
Pharm. Sci. Rev. Res. 2013, 18(1), 126- 132.
4. EndresHN,JohnsonJAC,RossCA,WelpJK,EtzelMR:Evaluationofanionexchangem
embraneforthepurificationofplasmidDNA.BiotechnolApplBiochem2003,37:259-
266.
