INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL
ESCUELA SUPERIOR DE INGENIERÍA
QUÍMICA E INDUSTRIAS EXTRACTIVAS
LABORATORIO DE ANÁLISIS
INSTRUMENTAL
ESPECTROSCOPIA ULTRAVIOLETA-VISIBLE
PRÁCTICA No.2: “ANÁLISIS CUANTITATIVO
DE UN SOLO COMPONENTE
DETERMINACIÓN DE CAFEÍNA EN
REFRESCOS DE COLA”.
Equipo:
Ramírez Galindo Aldo.
Ramos Ramírez Juan José.
Reyes Méndez Karla Daniela.
1) PRÁCTICA No.3: “ANÁLISIS CUANTITATIVO DE UN SOLO COMPONENTE
DETERMINACIÓN DE CAFEÍNA EN REFRESCOS DE COLA”.
2) OBJETIVOS.
2.1. OBJETIVOS GENERALES.
Determinar la concentración de sustancias orgánicas en muestras problema por
medio de una curva de calibración, aplicando la ley de Lambert y Beer.
2.2. OBJETIVOS ESPECÍFICOS.
• Identificar un solo componente para después cuantificar un analito.
• Interpretar los espectros UV-Vis correctamente.
• Determinar la concentración de la cafeína en dos muestras problemas aplicando
la Ley de Lambert y Beer.
• Comparar los resultados obtenidos de la concentración de cafeína en nuestras
muestras problema a través de la curva de calibración y el método matemático.
3) CONSIDERACIONES TEÓRICAS.
Métodos de extracción de la cafeína
Proceso de descafeinación
El proceso de descafeinación se lleva a cabo
en el grano verde de café, en instalaciones
industriales. Hay cuatro métodos de
descafeinar, según cuál sea la sustancia que
se use para extraer la cafeína: agua, acetato
de etilo, CO2 supercrítico o líquido y cloruro de
metileno. Estos cuatro métodos de procesar
tienen las mismas etapas básicas de:
• Hinchar el grano verde de café con agua o Fig 3.1 Espectros de absorbancia de los
vapor para que se pueda extraer la cafeína. patrones de cafeína (referencia)
• Quitar al vapor todos los residuos de disolventes (cuando se apliquen) o regenerar
los adsorbentes (cuando se aplique).
• Extraer la cafeína del grano.
• Secar el grano descafeinado de café hasta que recupere su contenido normal de
humedad.
• En condiciones de proceso cuidadosamente controladas en cuanto a temperatura,
presión y tiempo, la etapa de extracción de la cafeína se basa en una fase física de
mecanismos de transporte. Debido a la diferencia en concentración, la cafeína se
esparce fuera de la estructura celular y entra en el disolvente que rodea al grano
hasta que la concentración de cafeína sea la misma dentro y fuera del grano.
Fig 3.2 Fases del proceso de
descafeinación
Métodos de descafeinación
Lo que de verdad diferencia a los cuatro métodos es la elección de la sustancia que
se usa para la extracción:
• Método de agua: Cuando el café verde se sumerge en agua se disuelve y se quita
el contenido de cafeína, pero junto con eso puede perderse mucho del carácter
aromático del café. Para superar ese inconveniente, se satura el líquido con los
componentes solubles en agua del café. A continuación, se quita la cafeína de la
solución usando carbón activado u otros adsorbentes que conservan la cafeína, y
después puede reciclarse el extracto al que se privó de cafeína.
• Método de acetato de etilo: El acetato de etilo se da en varios productos naturales
y contribuye al aroma característico de muchas frutas. También se encuentra el
acetato de etilo, en distintas concentraciones, en productos alimenticios entre los
que están el café verde y el tostado. En el proceso de descafeinación se usa una
combinación de agua y acetato de etilo. Para extraer la cafeína, en el recipiente de
extracción se hace circular el acetato de etilo alrededor de los granos empapados
en agua. Después, se vacía del recipiente de extracción la mezcla de acetato de
etilo y cafeína. La etapa de extracción se repite varias veces, hasta que el contenido
residual de cafeína está al nivel máximo reglamentario de 0,1% o menos.
• Método de dióxido de carbono supercrítico y dióxido de carbono líquido: El CO2
es una sustancia de gran pureza natural que se encuentra en el aire que respiramos
y en el agua burbujeante que bebemos. En determinadas condiciones puede
hacerse con esa sustancia una extracción selectiva de cafeína que deja sin alterar
la mayor parte de los demás constituyentes del grano de café. Para usar el dióxido
de carbono en su estado supercrítico (entre su estado líquido y su estado gaseoso)
se necesita una presión muy alta, de hasta 250 atmósferas. Este método exige una
producción en gran escala para ser viable desde el punto de vista económico.
También puede usarse el CO2 líquido para la extracción de cafeína con presión y
temperaturas más bajas, con lo que se necesita más tiempo para lograr la
extracción.
• Método de cloruro de metileno (esto es, bicloruro de metileno-DCM): El cloruro de
metileno extrae la cafeína selectivamente y tiene un punto de ebullición bajo. Para
extraer la cafeína, en el recipiente de extracción se pone a circular el bicloruro de
metileno alrededor de los granos empapados en agua. Después, la mezcla de
cloruro de metileno y cafeína se vacía del recipiente de extracción. Esto se repite
varias veces, hasta que el contenido residual de cafeína está al nivel máximo
reglamentario de 0,1% o de menos. Este proceso cumple garantías de que los
posibles residuos de disolventes se mantengan por debajo de los límites que se fijan
en la legislación europea.
¿Qué es una solución patrón?
Este tipo de soluciones se utilizan como referencia para calibrar instrumentos y para
comparar con las muestras desconocidas durante el análisis.
En el contexto de la espectroscopia, las soluciones patrón son particularmente
importantes para la calibración de los espectrómetros. Por ejemplo, en
espectroscopia UV-Visible, se pueden utilizar soluciones patrón de diferentes
concentraciones de un compuesto para construir una curva de calibración que
relaciona la absorbancia con la concentración. Esto permite cuantificar la
concentración de la sustancia en las muestras desconocidas.
¿Qué es una solución estándar?
En química analítica, una solución estándar es una solución cuya concentración es
conocida con precisión. Estas soluciones se utilizan como referencia en análisis
químicos para calibrar instrumentos o para comparar con muestras desconocidas.
La preparación y el uso de soluciones estándar son prácticas comunes en diversos
métodos analíticos, incluida la espectroscopia, la cromatografía y otros métodos de
análisis cuantitativo.
En resumen, mientras que ambos términos se refieren a soluciones de
concentración conocida utilizadas con fines de referencia y calibración, el uso
específico de "patrón" a veces se asocia con un mayor nivel de certificación o
confiabilidad. Sin embargo, en muchos casos, las palabras se utilizan
indistintamente para describir soluciones con propósitos similares. La elección del
término puede depender del contexto específico y las normas o prácticas de
laboratorio.
Ley de Lambert – Beer
La Ley de Lambert-Beer, también conocida como Ley de Beer o Ley de Lambert,
describe la relación lineal entre la absorbancia de una solución y la concentración
de un soluto en dicha solución. Se puede derivar a partir de la ley de Beer, propuesta
por August Beer en 1852, y la ley de Lambert, propuesta por Johann Lambert en
1760. Sin embargo, es importante destacar que Pierre Bouguer, un científico
francés, también contribuyó significativamente a los principios que llevaron al
desarrollo de esta ley.
La relación matemática entre la absorbancia y la concentración es particularmente
útil en espectrofotometría, ya que permite cuantificar la cantidad de sustancia
presente en una muestra en función de la cantidad de luz absorbida. Esta ley es
fundamental en espectroscopia y se aplica comúnmente en la medición de la
absorbancia en espectrofotometría UV-Visible. La fórmula general de la Ley de
Lambert-Beer es:
A= α∗b∗c
• A es la absorbancia de la solución.
• α es el coeficiente de extinción molar (también llamado coeficiente de
absorción molar), que es una constante para una sustancia y una longitud de
onda específicas.
• c es la concentración de la sustancia en la solución, medida en mol/L.
• b es la longitud de la celda de muestra a través de la cual pasa la luz, medida
en metros.
4) DESARROLLO EXPERIMENTAL.
4.1. EQUIPO:
• Espectrofotómetro UV-Visible. Modelo Lambda 2S.
• Celdas de cuarzo paso óptico de 1 cm.
4.2. PREPARACIÓN DE ESTÁNDARES.
• Matraz aforado del 100 ml.
• 3 matraces aforados de 10 ml clase “B”.
• Pipeta graduada de 1 ml.
• Pipeta graduada de 5 ml.
Secuencia de preparación de estándares:
1. Revisar que la gaveta de trabajo se encuentre con todos los materiales. Tomar
una foto como evidencia.
Fig 4.2.1 Revisión de la gaveta
2. Etiquetar el material.
3. Preparar la solución patrón madre,
Fig 4.2.2en este caso,
Material cafeína con una concentración
etiquetado
de 100 ppm.
4. Medir el volumen de cafeína (0.5, 1, 1.5 y 2.0 ml) y colocar cada volumen en el
matraz volumétrico de 10 ml correspondiente.
Fig 4.2.1 Revisión de la gaveta
5. Por medio de un vaso de precipitados verter cuidadosamente agua destilada
hasta el cuello del matraz, posteriormente, con una pipeta de Pasteur adicionar
gota a gota el agua destilada hasta la línea de aforo del matraz.
6. Tapar el matraz volumétrico. Agitar e invertir ligeramente el matraz para
homogenizar
4.3 MANUAL DE OPERACIÓN DEL EQUIPO.
Primera etapa
5.- Buscar el programa
1.- Conectar y encender .
lamda 2-S
el regulador de energía
Segunda etapa
6.- Programar el
software con las
condiciones indicadas
4.- Encender el monitor
2.- Prender el CPU
de la computadora1
3.- Prender el equipo 7.- Apagar el equipo en
UV/VIS Lambda 2S el arden contrario
Pasos específicos para segunda etapa (programación del software):
Primera pestaña (scan):
En la primera pestaña Scan configurar los parámetros
del equipo:
1. Seleccionar la pestaña “application” y
posteriormente la pestaña “scan”.
2. Establecer la longitud de onda inicial y final.
3. Seleccionar “display serial” para el caso de la
experimentación con filtro de óxido de holmio
(punto 1.8.1) y con el vapor de benceno (punto
1.8.2). En cambio, para realizar la linealidad
fotométrica (punto 1.8.3) seleccionar “display
overlay”.
4. Establecer el nombre.
Segunda pestaña (instrument):
5. Establecer la velocidad de barrido de acuerdo con las
condiciones de cada experimento.
6. Seleccionar las lámparas que se requieren encender
(UV y Vis para el filtro de óxido de holmio y la linealidad
fotométrica, UV únicamente para el vapor de benceno).
Tercera pestaña (sample):
7. Establecer el nombre del documento.
8. Insertar el número de muestras que se harán.
9. Identificar cada muestra con su nombre
correspondiente.
10. Seleccionar “start” para comenzar la corrida de
muestras.
5) CÁLCULOS Y RESULTADOS.
Preparación de estándares de 10, 15 y 20 ppm a partir de una solución madre de
100 ppm de cafeína.
𝑉𝑉𝑀𝑀 𝐶𝐶𝑀𝑀 = 𝑉𝑉𝑠𝑠𝑠𝑠𝑠𝑠 𝐶𝐶𝑠𝑠𝑠𝑠𝑠𝑠
𝑉𝑉𝑠𝑠𝑠𝑠𝑠𝑠 𝐶𝐶𝑠𝑠𝑠𝑠𝑠𝑠
𝑉𝑉𝑀𝑀 =
𝐶𝐶𝑠𝑠𝑠𝑠𝑠𝑠
5 𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝 ∗ 10 𝑚𝑚𝑚𝑚
𝑃𝑃𝑃𝑃𝑃𝑃𝑃𝑃 𝑒𝑒𝑒𝑒𝑒𝑒á𝑛𝑛𝑛𝑛𝑛𝑛𝑛𝑛 5 𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝 𝑉𝑉𝑀𝑀 = = 0.5 𝑚𝑚𝑚𝑚
100 𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝
10 𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝 ∗ 10 𝑚𝑚𝑚𝑚
𝑃𝑃𝑃𝑃𝑃𝑃𝑃𝑃 𝑒𝑒𝑒𝑒𝑒𝑒á𝑛𝑛𝑛𝑛𝑛𝑛𝑛𝑛 10 𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝 𝑉𝑉𝑀𝑀 = = 1.0 𝑚𝑚𝑚𝑚
100 𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝
15 𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝 ∗ 10 𝑚𝑚𝑚𝑚
𝑃𝑃𝑃𝑃𝑃𝑃𝑃𝑃 𝑒𝑒𝑒𝑒𝑒𝑒á𝑛𝑛𝑛𝑛𝑛𝑛𝑛𝑛 15 𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝 𝑉𝑉𝑀𝑀 = = 1.5 𝑚𝑚𝑚𝑚
100 𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝
20 𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝 ∗ 10 𝑚𝑚𝑚𝑚
𝑃𝑃𝑃𝑃𝑃𝑃𝑃𝑃 𝑒𝑒𝑒𝑒𝑒𝑒á𝑛𝑛𝑛𝑛𝑛𝑛𝑛𝑛 20 𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝 𝑉𝑉𝑀𝑀 = = 2.0 𝑚𝑚𝑚𝑚
100 𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝
Tabla de datos experimentales
Estándar (ppm) Absorbancia
5 0.4250
10 0.6626
15 1.0566
20 1.3781
Tabla 5.1.1 Datos experimentales de estándares
1.6 Gráfica 5.1.1
1.4 Curva de
y = 0.0651x + 0.0673 calibración
1.2
R² = 0.9918
Abosortividad (A)
0.8
0.6
0.4
0.2
0
0 5 10 15 20 25
Concentración (mg/L)
Tabla de datos de la muestra
Muestra Absorbancia
Coca-Cola 0.85894
Volt 0.66226
Vive 0.46382
Con la ecuación de la recta calculamos las concentraciones de nuestras muestras,
en dónde y= absorbancia y x=Concentración
y = 0.0651x - 0.0673
Despejamos la concentración, entonces:
Absorbancia + 0.0673
x=C=
0.0651
Para la muestra de Coca-Cola
Absorbancia + 0.0673 0.85894 + 0.0673
x=C= = = 14.2280 ppm
0.0651 0.0651
10 ml
C = 14.2280 ppm ∗ � � = 237.137 ppm
0.6 ml
Para la muestra de vive 100
Absorbancia + 0.0673 0.46382 + 0.0673
x=C= = = 8.1585 ppm
0.0651 0.0651
10 ml
C = 8.1585 ppm ∗ � � = 1359.754 ppm
0.06 ml
Para la muestra de Pepsi
Absorbancia + 0.0673 0.66226 + 0.0673
x=C= = = ppm
0.0651 0.0651
10 ml
C = 11.2070 ppm ∗ � � = 280.1690 ppm
0.06 ml
Ahora calculamos el coeficiente de absorción a partir de los datos de las soluciones
estándar. De la ley de Lamber-Beer despejamos la absortividad:
A
A= α∗b∗c∴α=
b∗c
0.4250 L
α= mg = 0.0850 mg ∗ cm
(1cm) �5 �
L
0.66267 L
α= = 0.066267
gl mg ∗ cm
(1cm) �10 �
L
1.0566 L
α= mg = 0.07044 mg ∗ cm
(1 cm)(15 L )
1.3781 L
α= mg = 0.068905 mg ∗ cm
(1 cm)(20 L )
El dato de absortividad tiende a ser constante si observamos sus resultados, por el
que tomamos su promedio:
L
α𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝 = 0.07265
mg ∗ cm
Cálculo de concentraciones a partir del dato de absortividad:
A
A= α∗b∗c∴C=
b∗α
A
C=
b∗α
Para la muestra de Coca-Cola
0.85894
C=� � = 11.823 𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝
l
(1cm) �0.07265 �
mol ∗ cm
10 ml
C = 11.823 𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝 ∗ � � = 197.05 ppm
0.6 ml
Para la muestra de vive 100
0.46382
C=� � = 6.3843 𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝
l
(1cm) �0.07265 �
mol ∗ cm
10 ml
C = 11.823 𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝 ∗ � � = 1064.1 ppm
0.06 ml
Para la muestra de Pepsi
0.66226
C=� � = 9.1158 𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝
l
(1cm) �0.07265 �
mol ∗ cm
10 ml
C = 11.823 𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝 ∗ � � = 227.89ppm
0.4 ml
Tabla de resultados
Concentración real (ppm) Concentración real (ppm)
Muestra
Curva de calibración Lambert - Beer
Coca – Cola 237.13 197.05
Vive 100 1359.75 1064.1
Pepsi 280.16 227.89
6) OBSERVACIONES.
7) CONCLUSIONES.
8) BIBLIOGRAFÍA.
