UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERÍA
FACULTAD DE INGENIERÍA AMBIENTAL
CALIBRACIÓN DEL MICRÓMETRO OCULAR Y
MEDICIÓN DE MICROORGANISMOS
CCALA GARCIA JUAN GUSTAVO 20210466K
CERVANTES TORRES RODRIGO 20212061H
DOCENTE: ING. JORGE GILBERTO TELLO CEBREROS
Lima, Perú
2022
ÍNDICE
I. RESUMEN .......................................................................................................................3
II. INTRODUCCION..............................................................................................................3
III.
OBJETIVOS......................................................................................................................3
IV. MARCO TEÓRICO...........................................................................................................4
V. RESULTADOS.................................................................................................................9
VI. DISCUSIÓN DE RESULTADOS......................................................................................9
VII. CONCLUSIONES...........................................................................................................10
VIII. RECOMENDACIONES..................................................................................................10
IX. CUESTIONARIO……………………………………………………………………………….11
X. REFERENCIA BIBLIOGRÁFICA....................................................................................14
XI. ANEXO ..........................................................................................................................15
XII. APENDICE....................................................................................................................19
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I. RESUMEN
En esta primera práctica de laboratorio “Calibración del micrómetro ocular y
medición de microorganismos” se pretende realizar el uso correcto del microscopio,
para luego realizar la calibración correcta del micrómetro ocular con el micrómetro
de platina. Donde el objetivo principal del laboratorio es la correcta calibración del
micrómetro ocular con el micrómetro de platino; los objetivos secundarios son las
mediciones correctas de la muestra (en este caso la muestra alga Mougeotia fue del
estanque de Arquitectura) el ancho y largo. Al ser una práctica de laboratorio larga,
contar con un grupo de trabajo bastante grande y con un solo micrómetro de platina
se procedió a trabajar en dos sesiones.
II. INTRODUCCIÓN
Cuando se realiza una observación en un microscopio óptico, se puede conocer el
aumento al cual se está trabajando (aumento del objetivo x aumento del ocular), que
es el aumento del sistema óptico del microscopio. Pero en muchas ocasiones es
deseable determinar las dimensiones del objeto de estudio y es necesario calibrar el
microscopio. Para ello es necesario un ocular micrométrico, que posee grabado en
su interior una reglilla con unidades arbitrarias y un objeto micrométrico, que es un
portaobjetos grabado con una reglilla de dimensiones conocidas. Al observar a
través de un microscopio con estos dos aditamentos, se sobreponen las reglillas
(ocular vs objeto) y se puede estimar la longitud de las marcas de la reglilla del
ocular.
III. OBJETIVOS
● Calibrar de manera efectiva el micrómetro ocular respecto al micrómetro de
platina para los objetivos de x10 y x43, de manera que el rango de error que
presente esté dentro de lo permitido.
● Determinar la medición de las células del alga Mougeotia de una muestra del
estanque de la Facultad de Arquitectura.
● Determinar el error de medición y el de calibración.
● Reconocer la importancia del tamaño de los microorganismos.
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IV. MARCO TEÓRICO
4.1 Microscopio
El microscopio es el instrumento más frecuentemente utilizado y el más útil en un
laboratorio de microbiología, proporciona la amplificación o agrandamiento aparente
que nos permite ver organismos y estructuras invisibles a simple vista. Los
microscopios permiten una amplia gama de amplificaciones, desde cien a veces
hasta cientos de miles de veces. Las dos categorías de microscopios disponibles
son los microscopios ópticos (con luz) y los microscopios electrónicos.
4.1.1 Categorías de microscopio
[Link] Ópticos
i) Microscopía de campo claro
En la microscopía de campo claro, el campo microscópico o área observada está
brillantemente iluminada y los objetos de estudio aparecen más oscuros que el
fondo. Generalmente los microscopios de este tipo producen un aumento útil de
unos 1000 diámetros. Con algunas modificaciones que incluyen el uso de oculares
más potentes, este aumento puede ampliarse. Sin embargo, una amplificación de
1000 a 2000 diámetros es el límite de amplificación útil que se puede obtener con un
instrumento así.
ii) Microscopía de campo oscuro
Se realiza con el mismo tipo de microscopio utilizado para la microscopía de campo
claro, a excepción de que va equipado con un condensador de campo oscuro, con
una apertura numérica baja. Esta clase de condensador dirige los rayos de luz
dentro del campo de la muestra, formando un ángulo tal que solo los rayos que
chocan contra el 6 objeto que hay en el campo de la muestra son refractados
(curvados) y penetran en el objetivo. Así el objeto queda brillantemente iluminado y
destaca sobre el fondo oscuro (campo oscuro).
iii) Microscopía de fluorescencia
Esta microscopía se ha convertido en un procedimiento importante y muy utilizado
en el laboratorio hospitalario o clínico. Se usa para examinar muestras que han sido
teñidas con colorantes de fluorocromo y permite la identificación rápida de
microorganismos. Estos colorantes absorben energía de longitudes de onda
mayores o visibles. Estos materiales se denominan fluorescentes y el fenómeno
fluorescencia.
iv) Microscopía de contraste de fases
Es un tipo de microscopía óptica que permite un mayor contraste entre sustancias
de diferente grosor o de diferente índice de refracción. Esto se logra mediante el uso
de un bien condensador y un objetivo especial que controlan la iluminación del
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objeto, de 0 0 8 manera que acentúa ligeras diferencias en el espesor o en los
índices de refracción de las estructuras celulares.
B. Microscopio Electrónico
Esta microscopía proporciona amplificaciones útiles enormemente mayores que las
de las microscopías ópticas. Es posible lograr esto gracias al mayor poder de
resolución obtenible a partir de las muy cortas longitudes de onda de los haces de
electrones que se utilizan en lugar de luz. Los haces de electrones tienen longitudes
de onda del orden de 0.005 a 0.0003 nm. muy cortas en comparación con las
longitudes de onda de la luz visible utilizada en microscopía óptica. La
extremadamente corta longitud de onda del haz de electrones permite alcanzar
poderes de resolución varios cientos de veces más elevados que los obtenidos en
microscopía óptica.
4.1.2 Tipos de microscopios según el número de lentes.
A. Microscopio simple
Este tipo de microscopio dispone de una única lente de objetivo y es más
habitualmente conocido como lupa. Aun así, con un microscopio simple pueden
conseguirse grandes aumentos.
B. Microscopio compuesto
Es un microscopio óptico que posee por lo menos 2 lentes de objetivo. Se utilizan
esencialmente para analizar objetos transparentes. Normalmente los microscopios
disponen de distintas lentes tanto en el objetivo como en el ocular para corregir las
aberraciones ópticas y alcanzar una imagen con buena calidad. Está comúnmente
compuesto por 3 sistemas:
B.1. Sistema óptico: Está formado por dos sistemas de lentes: oculares y
objetivos. Los lentes oculares van montados en la parte superior del tubo del
microscopio. Su nombre se debe a la cercanía de la pieza con el ojo del
observador y sus poderes de aumento van desde 4x hasta 20x.
Partes:
● Foco o fuente de luz: Genera un haz de luz dirigido a la muestra.
● Objetivo: Conjunto de lentes que se encuentran más cerca de la
muestra. Primera etapa de aumento. Suele tener una distancia focal
muy corta.
● Condensador: Concentra los rayos de luz provenientes del foco a la
muestra. En general, les cambia la dirección a los rayos de luz
divergentes.
● Diafragma: Pieza que permite regular la cantidad de luz incidente.
Situado debajo de la platina.
● Prisma óptico: Algunos microscopios incluyen también prismas en su
interior para corregir la dirección de la luz.
● Ocular: Elemento óptico que proporciona la segunda etapa de
ampliación. Amplía la imagen previamente aumentada con el objetivo.
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B.2. Sistema mecánico: Es el esqueleto o armazón del microscopio, el cual
proporciona soporte y estabilidad al equipo. Está integrado por: tubo de
microscopio, revólver, platina, base o pie y el brazo o columna.
Partes:
● Base o pie: Parte que se encuentra en la parte inferior del
microscopio y sobre la cual se sostienen el resto de los elementos. Es
la parte más pesada porque debe proporcionarle estabilidad a la
estructura.
● Brazo o columna: Constituye el esqueleto del microscopio, ya que
conecta todas sus partes. Principalmente conecta la superficie donde
se coloca la muestra con el ocular por donde esta se puede observar.
● Revólver: Pieza giratoria donde se montan los objetivos.
● Tubo: Pieza estructural unida al brazo del telescopio que conecta el
ocular con los objetivos.
● Platina: Superficie donde se coloca la muestra que se quiere
observar. Puede regular su posición mediante 2 tornillos.
● Pinzas: Mantienen fija la preparación una vez esta se ha colocado
sobre la platina.
● Tornillo micrométrico: Conseguir un enfoque más preciso de la
muestra. Se realiza de manera lenta.
● Tornillo macrométrico: Ajustar la posición vertical de la muestra. Se
realiza de manera rápida.
B.3. Sistema de iluminación: Formado por la fuente de iluminación, espejo,
condensador, y diafragma. La fuente de iluminación consta generalmente de
una lámpara incandescente de tungsteno.
Imagen 1: microscopio compuesto y sus partes
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4.1.3. Micrómetro ocular
La forma tradicional de realizar mediciones con el microscopio es usando un
micrómetro de ocular; éste consiste en un disco de vidrio que tiene grabado un
micrómetro de ocular. Los espacios no tienen un valor estándar por lo que deben ser
calibrados para cada juego de ocular y objetivo. Posee una escala numerada, en
este caso del 0 al 10 con 10 divisiones entre cada número. Si colocamos
simultáneamente ambos micrómetros podremos asignar a las divisiones del
micrómetro objetivo, un número de divisiones del micrómetro ocular, por ejemplo, a
10 divisiones del objetivo (10 x 0,01 mm = 0,1 mm) le corresponden 13 del
micrómetro ocular. Conocida esta equivalencia, sustituimos el micrómetro objetivo
por cualquier preparación que queramos medir, sin alterar las condiciones, bastará
contar las divisiones que ocupa del micrómetro ocular y efectuar un simple cálculo
ya que sabemos que 13 corresponden a 0,1 mm.
Imagen 2: Micrómetro ocular
4.1.4. Micrómetro de platina
Un micrómetro de platina es simplemente un portaobjetos de microscopio con una
finamente dividida escala marcada en la superficie. Consiste en una lámina de vidrio
que contiene en su centro un segmento de recta de 1 [mm] de longitud, dividido en
100 partes iguales de 10 micrones (μ) cada una. En este laboratorio, nuestra platina
tenía 10 divisiones donde cada una medía 0.1mm.
Imagen 3: Micrómetro de platina
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4.1.5 Calibración del micrómetro ocular
Calibrar micrómetros es comparar la medida de un patrón de referencia
trazable con la medida del mensurando. Al calibrar los micrómetros
estamos aportando niveles de fiabilidad y seguridad en los procesos donde
la medición resultante del uso del instrumento tenga lugar.
Mediante la calibración con el micrómetro de objeto se establece el valor
de un intervalo del retículo con respecto al aumento del objeto. Sólo
cuando se ha determinado el valor de calibración pueden establecerse las
dimensiones verdaderas de un objeto.
Mediante la calibración con el micrómetro de objeto se establece el valor
de un intervalo del retículo con respecto al aumento del objeto. Se
determina cuántas divisiones del micrómetro o del ocular coinciden con las
divisiones del micrómetro de platina con objetivos de x10 y x43. Donde <x=
es la división de la platina y <y= es la división del ocular. Con el micrómetro
del ocular se realiza la medida de microorganismos.
Imagen 4: Calibración del micrómetro ocular
V. RESULTADOS
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Se sabe que: 1X = 0.01 mm
DATOS MUESTREADOS CALIBRACIÓN MEDICIÓN ERROR
(μ M ¿ (μ M ¿
GRUPO MICROSCOPIO OBJETIVO OBJETIVO OBJETIVO 10X OBJETIVO X43 CALIBRACIÓN MEDICIÓN
X10 X43 % %
Largo Ancho Largo Ancho
1 M-3 x<>6.5y x<>29y 5y 1.5y 22y 7y - Largo=1.59%
y=15.38 μ M y=3.44 76.9 23.07 75.68 24.08 Ancho=4.38%
μM μM μM μM μM
Cuadro 1: Resultados de calibración
VI. DISCUSIÓN DE RESULTADOS
● Con la obtención de nuestros resultados podemos observar que el aumento
con el objetivo 43X se acerca más a la medida real del micrómetro de platino.
● Notamos que el error de medición es mayor en el ancho que en el largo,
también notamos que estos dos errores son mínimos.
● Es importante notar que la cantidad presentada es un error estimado de la
indicación del instrumento calibrado, o una corrección con la intención de
compensar el error como se observa en algunos grupos.
● El resultado inmediato de una medición es la indicación provista por el
instrumento de medición. Sin embargo, como hemos visto, este no es el
resultado final de una calibración, porque lo que se necesita procesarse con
más detalle, eso quiere decir que es mejor si empleamos más mediciones
para que nuestro error sea mínimo (que tienda al 0%).
● Asimismo, al realizar las mediciones, se observa una variación intermedia en
el largo y ancho, siendo que el largo hallado en objetivo de 10X sea mayor al
obtenido por el objetivo de 43X y, por el contrario, en el ancho hallado, es
ligeramente mayor en el objetivo de 43X frente al de 10X.
VII. CONCLUSIONES
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● La calibración del micrómetro del ocular depende de la percepción y
experiencia del alumno, por lo tanto, la calibración no será igual en todos los
grupos y las celdas equivalentes variarán.
● Los errores en la medición del alga se deben a una calibración errónea o una
mala medición.
● Saber el tamaño de las algas nos permitirá definir las medidas a tomar para
su control (filtros o alguicidas).
VIII. RECOMENDACIONES
● Primeramente ubicar el alga con el objetivo x10, tomar las medidas,
POSTERIORMENTE pasar al objetivo x43, teniendo en cuenta no mover el
portaobjetos, luego enfocar y tomar medidas.
● Practicar pausadamente la calibración ya que la mala postura puede generar
dolores lumbares.
● Manipular con cuidado los materiales frágiles como los micrómetros (de
platina y de ocular) y el portaobjetos ya que pueden llegar a romperse al
usarlos con excesiva fuerza o al sufrir caídas.
● Tener en cuenta que las lámparas contienen focos incandescentes, por lo
que calientan rápido y pueden quemar las extremidades.
● Asegurarse de mantener limpios los lentes del microscopio.
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IX. CUESTIONARIO
1. Indicar el tamaño de los siguientes microorganismos: bacterias,
hongos, protozoarios, algas y virus.
Los microorganismos son organismos del suelo de tamaño micro, tan
diminutos que el ojo humano no los puede ver.
El tamaño de los microorganismos se muestra a continuación:
● Virus: Entre 10 y 300 nanómetros (nm).
● Bacterias: Entre 0.1 y 5 micrómetros (µm).
● Hongos:
-Levaduras: Entre 2 y 10 micras de ancho y entre 4 y 50 micras de
largo.
-Mohos: Entre 3 y 8 mm.
● Protozoos: Entre 3 y 1000 micrómetros.
● Algas: Entre 10 a 200 micrómetros.
2. Describa las principales características de bacterias, hongos,
protozoarios, algas, rotíferos y microcrustáceos.
A) VIRUS
● Son parásitos intracelulares obligados o patógenos de las plantas, los
animales y las bacterias.
● Toda su información genética está en su genoma de ADN o ARN.
● Posee una cubierta protectora, la cápside, formada por proteínas, y
algunos, tiene una envoltura membranosa.
● No tienen partes dentro de su organización, como ribosomas y
sistemas enzimáticos, por lo tanto, parasitan dentro de las células
vivas.
● No tienen metabolismo propio.
● No poseen sistemas productores de energía ni sistemas biosintéticos
para el crecimiento y la reproducción.
B) PROTOZOARIOS
● Los protozoarios son animales unicelulares.
● Se diferencian en sus caracteres morfológicos, nutritivos y
fisiológicos.
● Su intervención en la naturaleza es muy diversa, pero las más
conocidas son las pocas especies que producen enfermedades en el
hombre y otros animales.
C) HONGOS
● Son multicelulares, no poseen raíces, ni tallos, ni hojas y su tamaño y
forma varían.
● Están desprovistos de clorofila, y por tanto, son incapaces de
sintetizar su propio alimento.
● Están compuestos de filamentos y masas de células que forman el
cuerpo del organismo llamado micelio.
● Se reproducen por fisión, gemación y por medio de esporas.
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D) BACTERIAS
● Son microorganismos procarióticos unicelulares.
● Algunas son capaces de formar una envoltura o cápsula.
● Se multiplican por fisión binaria.
● Algunas bacterias son capaces de formar endosporas más resistentes
a las formas adversas de la vida.
● El oxígeno es indispensable para las bacterias aeróbicas.
E) ROTÍFEROS
● Son animales eucariotas, pluricelulares de tamaño pequeño.
● Su ADN se encuentra empaquetado dentro del núcleo celular
conformando a los cromosomas.
● Durante su desarrollo embrionario se aprecia la presencia de las tres
capas germinativas: ectodermo, endodermo y mesodermo, razón por
la cual se denominan animales trofoblásticos.
● El tipo de simetría que poseen estos animales es bilateral, ya que
están conformados por dos mitades exactamente iguales.
● Los miembros de este filo son dioicos, es decir, existen individuos de
sexo femenino e individuos de sexo masculino.
F) MICROCRUSTÁCEOS
● La gran mayoría nada libremente; sin embargo, algunas especies se
han convertido en parásitas
● Los copépodos carecen de caparazón, y su desarrollo se inicia a
partir de una larva Nauplio. Dos géneros copépodos de agua dulce
muy estudiados son Cyclops y Diaptomus.
● Tienen un solo ojo, que evolucionó de dos ojos que se fusionaron.
● La gran mayoría de los copépodos son de cuerpo transparente, aun
cuando los hay con cierta coloración como los Anomalocera.
G) ALGAS
● Poseen pared celular y posee una vaina.
● Tienen vacuolas para que puedan flotar y estar en la superficie.
● Realizan la fotosíntesis y tienen el pigmento clorofila.
● Las algas más antiguas son unicelulares, estas son las algas verde
azuladas o cianobacterias.
● Las algas se reproducen por fisión binaria.
3. ¿Por qué es importante conocer el tamaño de los
microorganismos? Explíquelo
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● Desde el punto de vista sanitario es importante conocer que el
tamaño de los microorganismos puede causar deficiencias en los
procesos sanitarios. Por ejemplo, las algas diatomeas, quistes de
protozoarios y huevos de helmintos causan problemas en los filtros de
arena.
● Importancia del tamaño en la industria, la más fundamental, el
pequeño tamaño de la célula microbiana y su correspondiente alta
relación de superficie a volumen. Esto facilita el rápido transporte de
nutrientes al interior de la célula y permite, por consiguiente, una
elevada tasa metabólica.
4. Describa las aplicaciones sobre la medición de los
microorganismos.
a) Procesos de filtración en las plantas de tratamiento de agua
La filtración consiste en la remoción de las partículas coloidales presentes en
una suspensión acuosa que escurre a través de un [Link] el proceso de
potabilización es la operación final de clarificación y, por lo tanto, de ella
depende la producción de agua con calidad de acuerdo a los estándares de
potabilidad
b) Procesos biológicos de tratamiento de aguas residuales: filtro
percolador, Wetland.
b.1)Filtro percolador
También llamados biofiltros, es quizá el tipo de reactor más usado en nuestro
medio. A pesar de su nombre (filtro percolador) esta unidad no realiza un
proceso de filtración propiamente dicho, sino que se trata de una torre de
contacto en la que el agua residual escurre, desde arriba, por un lecho fijo en
el que la biomasa se encuentra adherida.
b.2) Wetland
Un humedal artificial consiste en una laguna impermeabilizada, con una
profundidad inferior a un metro, que puede estar empacada con grava, a la
que se conducen las aguas residuales tratadas y en la cual se siembran
diferentes tipos de plantas con capacidad para crecer en condiciones de alta
humedad y de eliminar contaminantes orgánicos e inorgánicos, aún
presentes en las aguas residuales tratadas, ya sea provenientes de la
vivienda o de un proceso agroindustrial, permitiendo realizarles un
tratamiento posterior, con el fin de mejorar su calidad, antes de ser
descargadas al suelo o a cuerpos de agua superficiales.
X. REFERENCIA BIBLIOGRÁFICA
- Cruz-Leyva, M. C. D. L. (2014, 22 agosto). Importancia y estudios de las
13
comunidades microbianas. Scielo.
[Link]
90282015000100008#:%7E:text=Los%20microorganismos%20son%20part
e%20fundamental,una%20amplia%20gama%20de%20organismos.
- Villalva, O. (2016, 3 marzo). Generalidades de los virus. Slideshare.
[Link]
- Salmerón, R. A. (2014, 18 noviembre). bacterias. Slideshare.
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- Castro M, T. (2015, 3 marzo). Características y clasificación de algas.
Slideshare.
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- Hidalgo, J. (2010, 12 noviembre). Características únicas protozoarios (juan
hidalgo). Slideshare. [Link]
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- Hongos, anatomía y clasificación. (2020, 7 mayo). Estudia en línea.
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- López, B. (2020, 18 diciembre). Rotíferos: características, hábitat,
reproducción, alimentación. Lifeder.
[Link]
constituyen%20un%20filo,la%20impresi%C3%B3n%20de%20estar%20rota
ndo.
- Colaboradores de Wikipedia. (2021, 29 enero). Copepoda. Wikipedia, la
enciclopedia libre. [Link]
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XI. ANEXO
Materiales
Micrómetro de ocular Micrómetro de platina
Portaobjetos Cubreobjetos
Pinza Placa Petri
Cuadro : Materiales
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Equipos
Microscopio M-3, lámpara.
Imagen: Microscopio M-3 y lámpara
FORMATO DE USO DE LABORATORIO
16
Rodrigo Cervantes Torres
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Juan Gustavo Ccala Garcia
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XII. APÉNDICE
Diagrama de Flujo:
Cuadro: Diagrama de flujo
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