3.
5 MICROSCOPIO
Sistemas de Laboratorio y Hemodiálisis
EC2A
Sistemas de laboratorio y hemodiálisis EC2A 1
DEFINICIÓN
El microscopio es un instrumento
óptico complejo, formado por
partes mecánicas y ópticas o
lentes, y que tiene como objetivo
principal poder visualizar
microorganismos y estructuras no
visibles a simple vista
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PARTES
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PARTES
En un microscopio óptico
distinguimos diferentes partes, las
cuales pueden clasificarse según
sean partes o sistema óptico y
partes o sistema mecánico.
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PARTES, SISTEMA ÓPTICO
El sistema óptico:
Es el encargado de formar y
aumentar la imagen que
queremos observar. El
sistema de lentes y tubos
capta y dirige el haz de luz
hasta llegar al ojo humano.
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PARTES, SISTEMA ÓPTICO
Ojo humano: El haz de luz
saliente del microscopio se
focaliza sobre el cristalino y
la retina del ojo.
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PARTES, SISTEMA ÓPTICO
Ocular: Lente que capta y
amplia la imagen formada
en los objetivos. Es la parte
del microscopio más
cercana al ojo humano.
Hay microscopios
monoculares, binoculares y
trinoculares.
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PARTES, SISTEMA ÓPTICO
Objetivo(s): Lente situada
en el revólver, capta la
imagen del portaobjetos y
amplia la imagen según el
aumento de cada objetivo
(10,40,60,100x) y la transmite
luego hacia el ocular.
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PARTES, SISTEMA ÓPTICO
Condensador: Lente que
condensa los rayos de luz y
los proyecta sobre la
preparación.
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PARTES, SISTEMA ÓPTICO
Diafragma: Regula la
cantidad (intensidad) de
luz que entra en el
condensador.
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PARTES, SISTEMA ÓPTICO
Foco: Dirige los rayos de
luz hacia el
condensador.
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PARTES, SISTEMA MECÁNICO
El sistema mecánico:
Es el que da soporte,
movimiento y enfoque a la
muestra que queremos
observar.
Tubo: Es la cámara oscura que
porta el ocular y los objetivos.
Puede estar unida al brazo para
permitir el enfoque
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PARTES, SISTEMA MECÁNICO
Revólver: Es la pieza que porta
los diferentes objetivos. Tiene un
movimiento giratorio para
poder escoger que objetivo y
aumento deseamos para la
observación.
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PARTES, SISTEMA MECÁNICO
Tornillo macro métrico: Desplaza la
platina arriba y abajo para
acercar o alejar la muestra del
objetivo y así poder enfocar la
preparación.
Tornillo micro métrico: Es el sistema
de enfoque fino del microscopio,
sirve para enfocar de forma
precisa la preparación.
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PARTES, SISTEMA MECÁNICO
Platina: Es la plataforma horizontal
dónde colocamos la preparación.
Normalmente tiene unas pinzas
para sujetar la muestra. La sujeción
de la muestra puede ser fija o bien
móvil en el eje de las X y las Y
(platina mecánica).
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PARTES, SISTEMA MECÁNICO
Brazo: Es la estructura que sujeta el
tubo, la platina y los tornillos de
enfoque.
Pie: Es la parte inferior del
microscopio, la cual sirve como
superficie de apoyo. Nos da
estabilidad.
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PARTES
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AUMENTOS
El aumento total o máximo
de un microscopio lo vamos
a obtener al multiplicar el
aumento del objetivo por el
aumento del ocular.
Así por ejemplo:
Objetivo de 40X x Ocular de
10X = 400X
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AUMENTOS
El aumento de los objetivos
es variable y podemos
encontrar objetivos de:
4X, 10X, 20X, 40X, 60X y 100X
El aumento del ocular es
siempre más limitado y lo
más habitual, son oculares
WF(wide field) de entre 10 y
15X.
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AUMENTOS
Para observar una muestra o
corte fino estándar nos valdrá
con objetivos entre los 4 y 40X.
Con estos aumentos podremos
ver corte so secciones de hojas,
tallos, tejidos y estructuras
celulares como protozoos,
amebas, bacterias, polen etc...
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AUMENTOS
Los objetivos de 60 a 100X son objetivos
de gran aumento para observación
celular a más detalle, en estos casos la
distancia de trabajo disminuye mucho y
es necesario utilizar aceite de inmersión
para aumentar el poder de resolución y
no dañar la óptica del objetivo.
Utilizaremos estos aumentos si queremos
observar células al detalle y su interior
(estructura celular).
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AUMENTOS
Los objetivos de 60 a 100X son objetivos
de gran aumento para observación
celular a más detalle, en estos casos la
distancia de trabajo disminuye mucho y
es necesario utilizar aceite de inmersión
para aumentar el poder de resolución y
no dañar la óptica del objetivo.
Utilizaremos estos aumentos si queremos
observar células al detalle y su interior
(estructura celular).
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AUMENTOS
Otra característica óptica a tener en cuenta será el
poder de resolución o capacidad de distinguir dos
puntos u objetos muy cercanos. En microscopia hay
una capacidad de resolución mínima de 0,2
micrómetros.
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AUMENTOS
Finalmente es elemental el poder de corrección de
las aberraciones ópticas que aparecen en la
observación. Hay varios tipos de objetivos según su
tratamiento óptico:
Acromáticos: Con corrección en
el campo verde y amarillo.
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AUMENTOS
Planoacromáticos: Acromáticos
con buena corrección de la
curvatura de campo visual, los
bordes aparecen enfocados.
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AUMENTOS
Apocromáticos: Corrigen todos
los errores de color
Planoapocromáticos: Corrigen
los errores de color y curvatura
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TIPOS DE MICROSCOPIO
Existen muchas variedades de
microscopios según su uso. Más
allá del microscopio óptico
simple, la tecnología durante
el siglo XX y XXI ha desarrollado
una infinidad de aplicaciones
para observar diferentes tipos
de materiales, células y tejidos.
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TIPOS DE MICROSCOPIO
La microscopia tiene y ha
tenido un papel fundamental
en el avance de la
biomedicina y en este campo
en concreto se han
desarrollado los avances más
grandes en técnicas como la
fluorescencia y el contraste de
fases.
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TIPOS DE MICROSCOPIO
Finalmente, el desarrollo de los
microscopios electrónicos a
partir del 1937 y ahora los
digitales han acabado de
completar y sofisticar el mundo
de la observación celular.
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TIPOS DE MICROSCOPIO
Microscopio simple: Un
microscopio simple es aquel que
utiliza una sola lente para ampliar
las imágenes de los objetos
observados. Es el microscopio más
básico. El ejemplo más clásico es
la lupa.
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TIPOS DE MICROSCOPIO
Microscopio compuesto:
Es aquel microscopio utilizado
para aumentar las imágenes de
especímenes y posee un
aumento limitado. La ventaja
de este es que permite observar
especímenes ubicados en
placas traslúcidas.
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TIPOS DE MICROSCOPIO
El microscopio compuesto
consiste en dos sistemas de
lentes, el objetivo y el ocular,
montados en extremos opuestos
de un tubo cerrado. El objetivo
está compuesto de varias lentes
que crean una imagen real
aumentada del objeto
examinado.
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TIPOS DE MICROSCOPIO
Las lentes de los microscopios están dispuestas de
forma que el objetivo se encuentre en el punto focal
del ocular. Cuando se mira a través del ocular se ve
una imagen virtual aumentada de la imagen real.
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TIPOS DE MICROSCOPIO
Microscopio invertido:
En comparación al microscopio
vertical, este varía en la
ubicación de la luz. Y es que
ésta se encuentra por encima
de la platina. Es usualmente
utilizado para la observación de
cultivos y dar seguimiento a
actividades de crecimiento.
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TIPOS DE MICROSCOPIO
Microscopio de luz ultravioleta:
Las lentes del objetivo, que
habitualmente se componen de
vidrio se sustituyen por lentes de
cuarzo, y la iluminación se
produce por lámparas de
mercurio. No usa filtros y se
observa en placas fotográficas. La
variedad de fluorescencia, si usa
filtros, y la observación es directa.
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TIPOS DE MICROSCOPIO
La imagen en el microscopio de luz ultravioleta
depende de la absorción de esa luz por las
moléculas de la muestra. La fuente de luz
ultravioleta tiene una longitud de onda de 200 nm,
por lo tanto, puede alcanzar una resolución de 100
nm.
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TIPOS DE MICROSCOPIO
La microscopia ultravioleta no es
muy diferente del funcionamiento
de un espectrofotómetro pero sus
resultados son registrados en
fotografías. La muestra no se
puede observar directamente a
través del ocular porque la luz
ultravioleta puede dañar la retina.
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TIPOS DE MICROSCOPIO
El método sirve para detectar
ácidos nucleicos, proteínas que
contienen determinados
aminoácidos. Mediante
longitudes de ondas específicas
para la iluminación se puede
obtener mediciones
espectrofotométricas para
cuantificar el ADN y el ARN de
cada célula.
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TIPOS DE MICROSCOPIO
Microscopio de fluorescencia:
El microscopio de fluorescencia es
una variación del microscopio de
luz ultravioleta en el que los
objetos son iluminados por rayos
de una determinada longitud de
onda
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TIPOS DE MICROSCOPIO
La imagen observada es el
resultado de la radiación
electromagnética emitida por
las moléculas que han absorbido
la excitación primaria y reemitido
una luz con mayor longitud de
onda.
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TIPOS DE MICROSCOPIO
Para dejar pasar sólo la emisión
secundaria deseada, se deben
colocar filtros apropiados debajo
del condensador y encima del
objetivo. Se usa para detectar
sustancias con autofluorescencia
(vitamina A) o sustancias
marcadas con fluorocromos.
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TIPOS DE MICROSCOPIO
Microscopio petrográfico (o
polarizador): es una de las
técnicas más utilizadas en los
trabajos geológicos. Sirve para la
determinación de las propiedades
ópticas, identificación de los
minerales, estudio de texturas y
relaciones entre los minerales y
clasificación de rocas.
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TIPOS DE MICROSCOPIO
Microscopio de campo
obscuro: es
un microscopio que utiliza un
haz enfocado de luz muy
intensa en forma de un cono
hueco concentrado sobre la
muestra.
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TIPOS DE MICROSCOPIO
El objeto iluminado dispersa
la luz y se hace así visible
contra el fondo obscuro que
tiene detrás, como las
partículas de polvo iluminadas
por un rayo de sol que se
cuela en una habitación
cerrada.
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TIPOS DE MICROSCOPIO
Por ello las porciones transparentes
del espécimen quedan oscuras,
mientras que las superficies y
partículas se ven brillantes, por la
luz que reciben y dispersan en
todas las direcciones, incluida la
del eje óptico que conecta el
espécimen con la pupila del
observador.
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TIPOS DE MICROSCOPIO
Esta forma de iluminación se utiliza
para analizar elementos biológicos
transparentes y sin pigmentar,
invisibles con iluminación normal,
sin fijar la muestra, es decir, sin
matarla.
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TIPOS DE MICROSCOPIO
Microscopio de contraste de
fases: Permite observar células sin
colorear y resulta especialmente
útil para células vivas. La mayoría
de los organismos vivos no pueden
ser teñidos debido a que los
colorantes utilizados pueden
dañar su estructura celular hasta el
punto de su muerte.
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TIPOS DE MICROSCOPIO
Esta técnica de microscopía
aprovecha las pequeñas
diferencias de los índices de
refracción en las distintas partes
de una célula y en distintas
partes de una muestra de tejido.
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TIPOS DE MICROSCOPIO
La luz que pasa por regiones de
mayor índice de refracción
experimenta una deflexión y
queda fuera de fase con
respecto al haz principal de
ondas de luz que pasaron la
muestra.
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TIPOS DE MICROSCOPIO
Microscopio de luz polarizada:
Es un microscopio óptico al que
se le han añadido dos
polarizadores (uno entre el
condensador y la muestra y el
otro entre la muestra y el
observador).
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TIPOS DE MICROSCOPIO
El material que se usa para los polarizadores
son prismas de Nicol o prismas de Glan-
Thompson (ambos de calcita), que dejan pasar
únicamente la luz que vibra en un único plano (luz
polarizada). Esta luz
produce en el campo del
microscopio claridad u
oscuridad, según que los
dos nícoles estén paralelos
o cruzados.
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TIPOS DE MICROSCOPIO
Este tipo de microscopio se usa
para poder identificar sustancias
cristalinas (minerales) o fibrosas
(como el citoesqueleto), sustancia
amiloide, asbesto, colágeno, cristal
es de uratos, queratina, sílice, polen,
etc.
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TIPOS DE MICROSCOPIO
Algunos tejidos vivos pueden ser observados bajo
microscopía óptica de luz polarizada debido a la
birrefrigencia provocada por la orientación de
sus fibroínas, tales como la actina o miosina.
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TIPOS DE MICROSCOPIO
Microscopio confocal: Es
un microscopio que emplea una
técnica óptica de imagen para
incrementar el contraste y/o reconstruir
imágenes tridimensionales utilizando un
"pinhole" espacial (colimador de
orificio delimitante) para eliminar la luz
desenfocada o destellos de la lente en
especímenes que son más gruesos que
el plano focal.
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TIPOS DE MICROSCOPIO
El pinhole es una apertura
localizada delante del
fotomultiplicador que evita el
pasaje de fluorescencia de las
regiones de la muestra que no
están en foco, la luz que proviene
de regiones localizadas por encima
o por debajo del plano focal no
converge en el pinhole y no es
detectada por el fotomultiplicador.
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TIPOS DE MICROSCOPIO
Microscopio electrónico: Un
microscopio electrónico usa
electrones en lugar
de fotones o luz visible para
formar imágenes de objetos
diminutos.
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TIPOS DE MICROSCOPIO
Los microscopios electrónicos
permiten alcanzar
amplificaciones mayores antes
que los mejores microscopios
ópticos, debido a que la longitud
de onda de los electrones es
bastante menor que la de los
fotones "visibles".
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TIPOS DE MICROSCOPIO
Microscopio electrónico de
transmisión (MET): Un microscopio
electrónico de transmisión (TEM, por
sus siglas en inglés) es un
microscopio que utiliza un haz
de electrones para visualizar un
objeto, debido a que la potencia
amplificadora de un microscopio
óptico está limitada por la longitud
de onda de la luz visible.
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TIPOS DE MICROSCOPIO
Lo característico de este
microscopio es el uso de una
muestra ultrafina y que la imagen
se obtenga de los electrones que
atraviesan la muestra.
Los microscopios electrónicos de
transmisión pueden aumentar un
objeto hasta un millón de veces.
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TIPOS DE MICROSCOPIO
Microscopio electrónico de
barrido: El microscopio
electrónico de barrido (MEB
o SEM, por Scanning Electron
Microscope) es una técnica
de microscopía electrónica
capaz de producir imágenes de
alta resolución de la superficie de
una muestra utilizando las
interacciones electrón-materia.
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TIPOS DE MICROSCOPIO
Utiliza un haz de electrones en
lugar de un haz de luz para
formar una imagen.
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TIPOS DE MICROSCOPIO
Microscopio de iones en campo:
La microscopía de iones en
campo (FIM) es una técnica
analítica empleada en ciencia
de materiales.
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TIPOS DE MICROSCOPIO
El microscopio de iones en
campo es una variedad
de microscopio que puede ser
usado para visualizar la
ordenación de los átomos que
forman la superficie de la punta
afilada de una aguja de metal.
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TIPOS DE MICROSCOPIO
Microscopio de efecto túnel:
El STM está basado en el concepto de efecto túnel.
Cuando una punta conductora es colocada muy
cerca de la superficie a ser examinada, una corriente
de polarización (diferencia de
voltaje) aplicada entre las dos
puede permitir a los electrones
pasar al otro lado mediante
efecto túnel a través del vacío
entre ellas.
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TIPOS DE MICROSCOPIO
La resultante corriente de
tunelización es una función de
la posición de la punta, el
voltaje aplicado y la densidad
local de estados (LDOS por sus
siglas en inglés) de la muestra
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TIPOS DE MICROSCOPIO
La información es adquirida
monitoreando la corriente
conforme la posición de la
punta escanea a través de la
superficie, y es usualmente
desplegada en forma de
imagen.
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TIPOS DE MICROSCOPIO
Microscopio de sonda de
barrido:
(también llamado SPM por sus
siglas en inglés Scanning
Probe Microscopy) es aquel
que tiene el transmisor en la
parte exequimal del lente
(Objetivo 4x).
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TIPOS DE MICROSCOPIO
Este microscopio electrónico
utiliza una sonda que recorre la
superficie del objeto a estudiar.
La rama de microscopios SPM se
fundó con la invención
del microscopio de efecto
túnel en 1981.
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TIPOS DE MICROSCOPIO
Su uso en investigaciones científicas es el de
regular la imagen mediante un barrido
de electrones haciendo que la imagen
aumente (10.000.000 nm).
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TIPOS DE MICROSCOPIO
Microscopio de fuerza
atómica: (AFM, de sus siglas en
inglés Atomic Force Microscope) es
un instrumento mecano-óptico
capaz de detectar fuerzas del
orden de los nanonewtons. Al
rastrear una muestra, es capaz de
registrar continuamente
su topografía mediante una sonda
o punta afilada de forma piramidal
o cónica. Sistemas de laboratorio y hemodiálisis EC2A 72
TIPOS DE MICROSCOPIO
La sonda va acoplada a un
listón o palanca microscópica
muy flexible de sólo unos 200 µm.
El microscopio de fuerza
atómica ha sido esencial en el
desarrollo de la nanotecnología,
para la caracterización y
visualización de muestras a
dimensiones nanométricas.
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TIPOS DE MICROSCOPIO
Microscopio virtual:
El estudio a distancia de las imágenes se puede
denominar telehistología,
telecitología o
telepatología dinámica
virtual dependiendo del
tipo de información
biológica.
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TIPOS DE MICROSCOPIO
Mediante un
microscopio virtual, una
persona localizada en
cualquier lugar del
mundo controlará el
área de estudio del
preparado
microscópico (lámina
virtual),
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TIPOS DE MICROSCOPIO
y analizará los tejidos o células en el aumento que
desee con el
simple uso de
periféricos como
el ratón con unos
pocos clics y sin
factores horarios
intervinientes.
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FIN
3.5 MICROSCOPIO
Sistemas de laboratorio y hemodiálisis EC2A 77
