BIOQUÍMICA
FECHA: 11de noviembre del 2023
NOMBRES: Deymer Evian Salazar Palmito, Bidney Pamela Valles Supelano,
CODIGO: 121005145………………………………….121005143
PROGRAMA DE: Medicina Veterinária y Zootecnia
Facultad De Ciencias Agropecuárias y Recursos Naturales
Universidad de los llanos
Vereda Barcelona, km 12 vía a Puerto López, Villavicencio 500017, Meta, Colombia.
ACTIVIDAD ENZIMÁTICA – ENZIMAS PROTEOLÍTICAS
1. Introducción.
Las enzimas proteolíticas son moléculas biológicas claves que desempeñan un papel
fundamental en la regulación de procesos celulares y metabólicos. Estas enzimas, también
conocidas como proteasas, son responsables del hidrolisis de enlaces peptídicos en
proteínas, descomponiéndolas en sus componentes más simples, los aminoácidos, su
presencia y actividad son esenciales para la homeostasis celular y la renovación de
proteínas.
Existen diferentes clases de enzimas proteolíticas, como las serinas, cisteínas, aparticas y
metal proteasas, cada una con mecanismos específicos de acción y sustratos
preferenciales. Estas enzimas son sintetizadas en forma de zimógeno inactivo y requieren
activación, generalmente por otras enzimas o cambios en el entorno celular.
En el laboratorio el estudio de las enzimas proteolíticas implica la evaluación de su
actividad en diversos sustratos mediante técnicas con espectrometría y la electroforesis,
comprender su funcionamiento es crucial para aplicaciones en biotecnología, medicina y la
comprensión de enfermedades relacionadas con la regulación proteolítica. Bermeo (2019)
La utilización de enzimas proteolíticas como la papaína presente en la pulpa de papaya,
ofrece una metodología detallada para evaluar su actividad en interacción con la leche. El
proceso inicia con la preparación de la solución enzimática mediante la licuación de la
papaya y su filtrado, seguido por la realización de un ensayo estándar de actividad
enzimática con leche, cuyos resultados sirven como referencia para las pruebas
subsiguientes.
En el siguiente paso se explora el efecto de compuestos químicos sobre la actividad de la
papaína, utilizando distintas mezclas en tubos de ensayo. El análisis incluye sustancias
como H2O2, AgNO3, EDTA y cisteína, de seguido por un periodo de reposo y posterior
observación de cambios de la leche a 50°c.
Además, se aborda el impacto del pH en actividad enzimática, empleando soluciones de
NaOH, HCL y NH4 (OH). La variación del pH se deja reposar antes de adicionar las
mezclas resultantes a tubos previamente etiquetados con leche, facilitando la observación
y comparación de resultados.
Este enfoque experimental, detallado proporciona una plataforma para comprender la
influencia de diversos factores en la actividad enzimática de papaína, ofreciendo
información valiosa, para aplicaciones prácticas y contribuyendo al conocimiento científico
en el campo de las enzimas proteolíticas.
2. PROCEDIMIENTO
Preparación de la solución enzimática: licuar la papaya previamente pelada con
100 mL de agua, filtrar con ayuda de la gasa, almacenar y rotular el recipiente
como ‘solución enzimática’.
Ensayo estándar actividad enzimática: en un tubo de ensayo deposite 3 mL de
leche y adicione 10 gotas de la solución enzimática. Agitar y calentar en baño de
maría a 50 °C hasta la formación de coágulo.
Los resultados obtenidos en las pruebas posteriores deben contrarrestarse con
este resultado (cantidad y característica del coágulo).
2. Efecto de compuestos químicos sobre la actividad de la papaína: preparar las soluciones de
acuerdo con las cantidades indicadas en la tabla 2.
Dejar los tubos en reposo por 5 minutos.
Rotule 5 tubos de ensayo y en cada uno coloque 5 mL de leche.
A cada tubo (con leche) adicione lentamente y con agitación el contenido del tubo
correspondiente a la mezcla de la tabla 2.
Llevar al baño de María a 50°C por varios minutos hasta observar cambios
significativos.
Observar y comparar con los resultados obtenidos para el estándar.
3. Efecto del pH sobre la actividad enzimática: preparar en 4 tubos de ensayo las mezclas
indicadas en la tabla.3
Dejar reposar por 10 min.
Medir el pH en cada tubo.
En 4 tubos de ensayo rotulados adicionar 4 mL de leche.
Adicionar en cada tubo con leche la solución correspondiente, observar y anotar
sus resultados.
ANALISIS.
El procedimiento diseñado aborda de manera efectiva los objetos del estudio, proporcionando una
metodología robusta para identificar, estudiar y evaluar la actividad de la papaína, leche. así como
para determinar su respuesta a diferentes condiciones químicas.
Los resultados obtenidos de las pruebas propuestas permitirán una comprensión más profunda de
la actividad enzimática de la papaína y su susceptibilidad a diversos factores, contribuyendo así a
la investigación biomédica y la aplicación práctica.
PRUEBAS DE PAPAYA Y LECHE SOMETÍDAS A DIFERENTES SUSTANCIAS PARA LA
OBSERVACION DE ACTIVIDAD ENZIMÁTICA Y CALCULAR SU PH
Tabla #1
PROCEDIMIENTO #1
Observación
Tubo
Observación
Tubo LP: leche + papaya a una temperatura de 50 Tras hacer el procedimiento se puede
°C observar que.
1. Hay una formación de coagulo ya que esta
presenta un cambio en la estructura
conocida como caseína que esta en la leche.
2. Se observa un cambio en la textura de la
muestra debido a la coagulación de las
proteínas.
3. Se observa una sustancia mas trasparente
por encima del coagulo.
4. Tras 5 minutos a una temperatura de 50
°C se concluye el tiempo que tarda en
presentar la eficiencia y velocidad de la
actividad enzimática
5. Presenta una coloración blanca
amarillenta completamente.
Pruebas con 5 ml de leche mas baño María a 50 Visualización
°C
Tubo n#1: papaya +H2O2 1% + EDTA Observación
Tubo #2: papaya + AgNO3 2% + agua d
Tubo #1: se presentan grumos de coagulación en
la muestra.
Su textura es un poco espesa debido al leve
cambio de coagulación que se observo.
Su coloración por encima es mas blanco con
tonalidad amarilla, mientras que por debajo se
observa una tonalidad mas blanca clara ya que
presenta una leve coagulación por debajo de
esta. No es soluble
Tubo #2: se presenta una mínima coagulación en
la muestra sin embargo esta es un poco espesa.
Se observa una macha con puntos de color negro
por el precipitado debido a la reacción con nitrato
de plata mientras que su tonalidad por debajo es
de un blanco mas claro por lo tanto se evidencia
que esta mezcla no es soluble.
Tubo #3: papaya + agua d + EDTA Observación
Tubo #4:papaya + Cisteína + agua d Tubo #3: la mezcla se observa una leve
coagulación también se observan residuos de
pulpa de papaya en el fondo del tubo, esta mezcla
es soluble, su textura es un poco espesa, su
coloración es mas blanco amarillenta por encima
mientras que por debajo es mas blanca la
coagulación presentada en esta muestra es muy
pequeña.
Tubo #4: se forma un pequeño coagulación en el
fondo del tubo y que las enzimas proteolíticas de la
pulpa de papaya actúan en reacción con la leche se
observa una pequeña separación del suero de la leche,
esta mezcla es un poco espesa, totalmente soluble con
una coloración mas blanco amarillenta por encima de
la prueba.
Tubo # 5: papaya + EDTA + Cisteína.
Observación
Tubo #5: esta muestra presenta pequeños
grumos de coágulos debido a la reacción de
la cisteína con la pulpa de papaya y la leche,
su textura es mas espesa, la mezcla es
soluble, su coloración es 50 % blanco con
tonalidad anaranjada por encima y 50 %de
tonalidad blanca por debajo.
La combinación de la acción enzimática de la
pulpa de papaya, la interacción de la cisteína
y el efecto del EDTA podría afectar la textura
de la mezcla y causar la separación de
suero. Por lo tanto en la muestra no se
observa la separación del suero
Comparación de las 5 Muestras con leche + baño Observación general
maría a temperatura de 50°C En cuanto a su coloración se puede observar que
casi todas presentan la misma colocación que es
un blanco mas claro por debajo de la muestra
mientras que por encima su coloración es mas con
tonalidad anaranjada debido al cambio de textura
y muestras de coágulos que presentan algunas de
estas pruebas también se ve que las muestras 5, 4
son mas espesas que la 3 y la 1 debido al tipo de
reacción que tuvieron al ser sometidas a diferentes
sustancias y al baño maría.
En la muestra #2 se observa una coloración mas
oscura con puntos debido a la reacción del nitrato
de plata forma precipitados insolubles en la
muestra reaccionando a iones de cloruro
presentes en la leche formando precipitados de
nitrato de plata (AgNO3).
En conclusión las 5 muestras presentan grumos
de coagulación 3n diferentes cantidades.
Comparándolo con la primera prueba que se hizo
ninguna de estas alcanzo el grado de coagulación
o actividad enzimática debido a que esta no se le
agrego ninguna sustancia quimica siendo
sometida al baño maría causando que la caseína
de la leche sufriera un cambio en su estructura
coagulando por completa la muestra
PROCEDIMIENTO# 2
Toma de pH de las muestras 10 gotas de papaya: Observación
t1: NaOH 0.25 M, t2, t3 +HCl 0.25 M, t4 + NH4(OH) Tubo #1: se presenta un pH de 12 debido a que
el NaOH es una base fuerte que al liberar el OH
0.25M. 4 gotas de cada sustancia
en las enzimas proteolíticas de la papaya
contrarrestando la concentración de acidez en la
papaya.
Tubo #2: su pH es de 5 teniendo en cuenta que
este no se sometió a ninguna sustancia quimica
dando como resultado la concentración de acidez
en la papaína.
Tubo #3: presenta un pH de 1 debido a que a esta
prueba se le agregan 4 gotas de HCL siendo esta
un acido fuerte que al mezclarse con la papaína
hace un reducción del pH en la enzima proteolítica
de esta.
Tubo #4: esta prueba presenta un pH de 8 debido
a que se le agrego 4 gotas de NH4 que es una
base el cual hizo que la acidez de la pulpa de
papaya disminuyera hasta convertirse en una
base.
Tubos con 10 gotas de papaya, 4 ml de leche : Observación
t1 + NaOH 0.25 M, t2, t3 +HCl 0.25 M, t4 + NH4(OH)
0.25M.
Fotos tomadas por pamela V (10 de
noviembre del 2023
RESULTADOS. Primer procedimiento
Tabla #2.
Muestra Actividad enzimática o reacción de coagulación %
L+P 100 %
Tubo#1 20%
Tubo #2 10%
Tubo #3 5%
Tubo #4 10%
Tubo #5 20 %
Procedimiento #2 toma de pH
Tabla #3
muestra Tubo #1 Tubo #2 Tubo #3 Tubo #4
pH 12 5 1 8
Procedimiento #3 Actividad enzimática con leche y papaya mas NaOH 0.25,
HCl, NH4(OH) en 4 tubos de ensayo
Muestra Actividad enzimática
Tubo #1
Tubo #2
Tubo #3
Tubo #4
Presentación en graficas de cada tabla de resultados
Actividad enzimática primer procedimiento
Tabla #2
grafica #1
Acti vidad enzimática o reacción de
coagulación %
120%
100%
100%
80%
60%
40%
20%
20% 20%
0% 10% 10%
5%
L+P Tubo#1 Tubo #2 Tubo #3 Tubo #4 Tubo #5
Calculo del pH en las muestras del segundo procedimiento
Tabla #3
pH (0 al 14)
14
12
12
10
8
8
6
4 5
2
0 1
Tubo #1 Tubo #2 Tubo #3 Tubo #4
pH (0 al 14)
Resultados de la tabla # 4
Actividad enzimática
RESUMEN
Este procedimiento consistió en la preparación de una solución enzimática
a partir de papaya, seguida de pruebas para evaluar la actividad de la
papaína, una enzima presente en la papaya. En el ensayo estándar, se
mezcla la solución enzimática con leche, se agita y calienta para observar
la formación de un coágulo. Este resultado se utiliza como estándar para
comparar con otras pruebas. Se investiga el efecto de compuestos
químicos, como H2O2, AgNO3, agua y EDTA, sobre la actividad
enzimática, observando cambios en tubos de ensayo con leche. Además,
se explora el impacto del pH mediante la adición de NaOH, HCl y NH4(OH)
a mezclas de leche y solución enzimática. El objetivo general es identificar
la presencia de papaína en la papaya, estudiar su actividad enzimática y
determinar cómo ácidos, bases y metales pesados afectan dicha actividad.
Este enfoque detallado permitirá comprender mejor los factores que
influyen en la actividad de la papaína y cómo puede ser inhibida en diversas
condiciones químicas y de pH.
CONCLUSIONES.
1. La preparación de la solución enzimática implico licuar papaya con agua,
filtrar y almacenar, asegurando un proceso adecuado para obtener la
enzima papaína.
2. En el ensayo estándar, se evaluó la actividad enzimática usando leche,
observando la formación de coágulo a 50 °C como referencia para
comparar con prueba #1 realizada.
3. El efecto de compuestos químicos se estudia mediante mezclas
específicas, evidenciando cómo H2O2, AgNO3, EDTA y cisteína afectan la
actividad catalítica de la papaína.
4. La observación de cambios significativos en los tubos de ensayo durante el
baño de María a 50 °C nos permitió evaluar el impacto de los compuestos
químicos en la actividad enzimática.
5. El efecto del pH fue examinado en cuatro mezclas, mostrando cómo
diferentes niveles de acidez o basicidad (NaOH, HCl, NH4(OH)) que
afectan la actividad enzimática de la papaína.
6. La medición del pH en cada tubo después de 10 minutos de reposo
proporciono información sobre la influencia del pH en la actividad
enzimática.
7. La adición de leche a los tubos antes de aplicar las soluciones nos permitió
evaluar la influencia de los cambios de pH en presencia de sustrato.
8. Los resultados obtenidos en los ensayos se compararon con el estándar
inicial, proporcionando una referencia para identificar cambios en la
actividad enzimática.
9. El experimento tuvo como objetivo identificar la presencia de papaína en
tejido vegetal, lo que implica un enfoque en la extracción y evaluación de la
enzima.
10. La investigación nos permitió determinar cómo ácidos, bases y metales
pesados afectan la actividad enzimática, lo que amplía la comprensión de
los factores que pueden modular la papaína.
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
Bermeo(2019)“actividad enzimática
“https://doi.org/10.33262/concienciadigital.v3i2.1.1231
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