346 Farmacopea do los Estados Unidos Moxicanos, undécima edicién, MGA 0331, ESPECTROSCOPIA ATOMICA. Este método se basa en la medicién de ta intensidad de radiacién absorbida 0 emitida a longitudes de onda carne~ teristicas por los étomos de tn elemento metilico, en estado gascoso (basal o excitado) que absorbers o emitrt energia. La espectroscopia atémica se puede clasificar en espec- troscopin de absorcién, de emisién y de fuorescencia, En espectroscopin de absorcién atémica (EAA), se mide In absorcién especifica de Ia radiacién electromagnética por fitomos en fase vapor no excitados. En Ia espectroscopia de emisién atémica los étomos emiten radiacién clectromagnética cuando pasan de un nivel permitido de alta energia a otro de menor energia. En Ia espectroscopin de fluorescencia atémiea los étomos en fase de vapor pasan a un estado excitado por interaccién con una fuente de radiacién clectromagnética de una determinada longitud de onda, con la posterior emisién en un pperiodo muy corto de tiempo (nanosegundos) de radiacién ‘electromagnética cuya longitud de onda puede ser igual 0 diferente a la de excitacién, Este método es mucho mis sensible que el de absorcién atémica, instrumentos de fluorescencia até generalizado como andlisis de rutina En espectroscopia atomica, se requiere que el analito pase or un proceso de atomizacién que lo convierte en étomos en estado gaseoso libre. El proceso de atomizacién se puede efectuar mediante flama, homes o plasmas, La eleccin del método de atomizacién depende de varios factores como la concentracién del analito, fen le muestra a avalizar, la sensibilidad del método y Ia presencia de interferencias. En la atomizacién con flama, la disolucién de la muestra se introduce en un nebulizador, haciendo pasar una fuerte ccorriente de oxidante por el extremo del tubo capilar por el ‘que se aspira la muestra, El Ifquido se convient en una fina niebla de gotitas a medida que sale del capilar y es proyectado contra una esfera de vidrio, originando que las Particulas se vuelvan atin mis pequefas. La niebla en aerosol se mezcla con los gases de combustion (oxidante y combustible) antes de pasar al quemador. El exceso de liquido se va al fondo de Ia cimara de ebulizacién y se elimina por el drenaje; mientras que el ‘aerosol llega a Ia flama donde finalmente mediante la ‘energia térmica se provoca Ia atomizacién. La principal ventaja de Ia atomizacién con flama es la reproducibilidad ccon que Ia muestra se introduce en el espectrofotémetro. En Ia atomizacién con homos 0 atomizadores electro térmicos; un ejemplo clisico es el homo de grafito, el cual un tubo de grafito calentado eléctricamente, y permite una mayor sensibilidad que la flama ademis de que requiere luna menor cantidad de muestra. El plasma considerado como el cuarto estado de agregacién; puede definirse como un gas fuertemente ionizado, MGA 0331. ESPECTROSCOPIA ATOMICA eléctricamente neutro pero conductor de Ia corriente, esti formado por un conjunto de electrones, iones cargados positivamente, dtomos y (0) moléculas. Los plasmas pueden estar total o parcialmente ionizados y se ttilizan mucho en espectroscopia de emisién debido a que {as colisiones de Stomos en un plasma muy caliente elevan estados electrénicos excitados, desde donde fotones espontineamente al volver a su estado La intensidad de emisién es proporcional a la concentracién del elemento en la muestra. La clevada temperatura que puede excitar a a mayoria de los ‘tomos, la estabil ico inerte del argén climinan gran parte de las interferencias; esto le confiere ventajas sobre los otros métodos de atomizacién como a flama, 0 los hornos, sin embargo los aparatos de plasma son ‘més caros, lo cual puede ser una limitante para su uso. En espectroscopia at6mica pueden presentarse interferencias, esto €s efectos que cambian Ia sefal, entre las mis comunes se encuentran las siguientes: Interferencias espectrales; cuando la linea de absorcién de un analito se superpone con Ia linea o banda de absorcién de otros elementos 0 moléculas presentes en la muestra, también existen interferencias espectrales debidas a Ia reaccién de los componentes de la matriz de la muestra en la flama 0 en los homos. La absorcién y la dispersion debidas a los componentes de la matriz de la muestra, constituyen el fondo de la muestra, y pueden dar lugar a problemas importantes. Uno de los métodos més utilizados, para la correccién de fondo es el uso de una fuente continua ‘como la lmpara Ds. Con una fuente continua se puede realizar automaticamente la correccién de fondo empleando una limpara de arco de deuterio en la zona de ultravioleta o una limpara de yoduro de tungsteno para las longitudes de onda visibles. La comeccién de Zeeman se basa en el principio de un campo magnético en el que se divide la linea espectral en dos haces de luz linealmente polarizada, paralela y perpendicular al campo magnético. Se puede comparar la absorcién en presencia y ausencia de un campo magnético, siendo la diferencia la absorcién de fondo... Interferencias quimicas; son causadas por cualquier componente de la muestra que pueda disminuir el grado de stomizacion del analito, para lo cual se emplean agentes protectores que reaccionan con el analito impidiendo su transformacién en una forma no analizable y agentes liberadores, cuya reaccién con el interferente es mis favorable que la del interferente con el analito, como es el ‘aso de la adicidn de lantano en el andlisis de calcio. En homo de grafito altas concentraciones de cloruros pueden ccausar bajos resultados, debido a la formaciOn de sales volitiles durante el proceso de pirolisis. Los efectos de matriz pueden disminuirse parcial completamente con: la adicidn de modificadores quimicos como el nitrato de magnesio 0 el fosfato de amonio, la optimizacién del‘Métodos Gonoralos do Andlisis 347 programa de temperatura y el uso de tubos recubiertos piroliticamente y/o plataformas dentro del tubo. Las interferencias de jonizacién se producen cuando la térmica de la lama 0 del homo es suficiente para y esto puede ser un problema en el anilisis de metales alealinos, por lo que es frecuente el uso de supresores de ionizacién, 0 sea reactivos que se jonizan con ris faciidad que el analito. A menudo se ulilizan potasio, sodio y cesio como supresores de ionizacién, aprovechando ‘su baja energia de ionizacién. En espectroscopia atémica se utilizan normalmente curvas de calibracién para establecer la relacién que existe entre seal y concentracién; sin embargo en ocasiones puede resultar itil el empleo del método de adicién de patrén para, ‘obtener resultados mis confiables en muestras de naturaleza desconocida y (0) compleja RECOMENDACIONES ESPECIALES, Utilizar limpara (generalmente de cétodo hueco) del elemento a analizar. Consultar el manual del proveedor para. verificar los pparamétros de: Ia intensidad elécirica (i), el ancho de la anda y los sistemas de nebulizacién y atomizacién. La longitud de onda seri Ia indicada en la monografia del producto correspondiente. Las sustancias empleadas para referencia y calibracién deben ser grado espectrofotométrico y son las indi a monografia especifica del producto correspondi El agua empleada en a calibracién y lavado del aparato, ast como en Ia preparacién de las muestras, reactivos y soluciones, debe ser agua nivel 1, a menos que se indique otra cosa en la monografia correspondiente. El compartimiento portamuestras debe lavarse con agua nivel | después de cada introduecién. Solo puede usarse material de vidrio borosilicatado para realizar anilisis inmediatos; cuando se trabaja con horno de ‘grafito es recomendable el uso de material de polipropileno, {eflén o polietileno. EI material empleado para almacenar sustancias de referencia, soluciones o reactivos, debe ser de polietileno, tefl6n o material de plistico. El instrumento debe colocarse bajo una campana de ‘extraccién, y el operador debe utilizar lentes de proteccién ‘en todo momento, EQUIPO Y REACTIVOS. Espectrofotsmetro de absorcién atémica, Gases: gencralmente airc-acetileno, aire-hidrdgeno u éxido nitroso-acetileno. Limpara de cétodo hueco del elemento a determinar 0 limpara de descarga sin electrodos. DESCRIPCION DEL APARATO (figura 0331-1). ‘Técnica de flama (medici6n de absorcién y emisién). El aparato esti compuesto como se describe a continuaci ‘A. Compartimento portamucstras, sirve para introducir la muestra al quemador. B. Nebulizador, provisto de sistema de ajuste y revestido interiormente de teflén; en donde se Heva a cabo la nebulizacién de la muestra por medio de una esfera de impacto o un deflector. CC. Quemador de acero inoxidable, provisto de sistema de ajuste horizontal, rotacional y para ascenso y descenso; en donde se Heva.a cabo la atomizacién de la muestra, D. Sistema para fluido de los gases oxidante y combustible. E. Fuente de energia, F. Fuente de radiacién, provista de sistema de ajuste constituida por la Kmpara espectfica, yor] 0a 000 = Figura 0331.1. Diograma general de un espectrofotémetro atémico. MGA 0331. ESPECTROSCOPIA ATOMICA848 Farmacopea do los Estados Unidos Moxicanos, undécima edicién. G. Corrector de fondo, integrado por dos fuentes de luz, tuna Mimparn de deuterio y_ yodo-wolframio, que cubren el intervalo espectral de absorcién atémica y cuya funcién es climinar Ins absorciones no especificas, 11 Monocromador, que selecciona In longitud de onda y elancho de banda 1. Fotomultiplieador, tipo de detector de Ia sefial producida por cl elemento a determinar, con sensibifidad en un intervalo de 190 a 850 nm. 3, Amplificador XK. Registrador, reproduce grificamente el resultado de la ‘operacién y puede o no estar integrado al aparato. ‘Técnica de horno de graft (medicién de absoreién). Se cemplea el mismo equipo, sustityyendo; compartimiento portamuestras, nebulizador y el quemador, por el homo de Erafito, que es um accesorio conteniendo un tubo o una copa de grafito en donde se deposita In muestra que es sometida 8 periodos de secado, incineracién y atomizacién, durante pperiodos de tiempo programados a diferentes temperaturas, dependiendo de la muestra a analizar. Utiliza un solo gas como acarreador que puede ser argén o nitrégeno. Técnica de generador de hidruros (medicién de absorcién), Al igual que la téenica de flama se emplea el ‘mismo equipo, adaptando una celda de cuarzo en el paso de le luz que esti a la altura de Ia flama, en ésta técnica los hhidruros gascosos de ciertos metales tales como el As, Bi, Ge, Pb, Sb, Se, Te y Sn son producidos quimicamente en un reactor mediante la adicidn de un agente reductor como el cloruro de estafio II 0 borohidruro de sodio en medio Acido, los hidruros gaseosos generados son arrastrados por argén hacia la celda de cuarzo, Estos hidruros voldtiles aiin no son capaces de dar una sefial de absorcién atémica, por lo que se requiere calentar Ia celda por Ia flama para disociar el hhidruro gascoso en étomos libres, y de esa forma generar la seal de absorcién atémica dentro de la cavidad de la celda; la sefial disminuye conforme estos étomos escapan, de Ia celda de absorcién. Medir el miximo de absorcién. Sistema para mercurio por vapor frio. Para la determinacién, de mercurio se utiliza el sistema para la generacién de hiidruros, sin calentamiento. El mercurio es reducido a Hg? y es arrastrado por el argon hacia la celda de absorein, los Homos libres incrementan Ia absorbancia medida, en relacién directa con la concentracién, Hg?* + 2NaBH, + 6H0 + Hg + 7H, + 2H,B0, + 2Na METODOS METODOI Preparacién referencia, Preparar concentraciones diferentes de la SRef del elemento que se va a utilizar, cubriendo el intervalo recomendado por el fabricante del equipo para dicho elemento. MGA 0331. ESPECTROSCOPIA ATOMICA Preparacién de la muestra, Preparar In muestra a examinar como se indica en In monografia especifica del producto correspondiente, ajustando Ia concentracién de tal forma, que esta quede dentro del intervalo de concentracién de las preparaciones de la SRef. Procedimlento, Consultar el manual del equipo que se va a utilizar, Aspirar un minimo de tres veces las soluciones de referencia, y obtener el promedio de la absorbancia, para ‘cada punto y obtener Ia curva de calibracién. Proceder de la misma manera con I muestra para obtener su absorbancia y posteriormente interpolar el valor obtenido en la curva de calibracién. CCiteulos. Preparar la curva de referencia, representando sgrificamente las lecturas promedio obtenidas, para. las reparaciones de Ia SRef contra las correspondientes concentraciones, Determinar la concentracién de fa preparacién de Ia muestra interpolando el promedio de los valores obtenidos, en In curva de referencia. Relacionar el valor obtenido con el peso de la muestra y el factor de dilucién. Nota: también es posible efectuar este cAlculo utilizando el anilisis de regresién lineal empleando una calculadora 0 una computadora que puede estar integrada al instrumento. METODO IL. ADICION DE PATRON Preparacién de referencia, Preparar una solucién de referencia de concentracién conocida, del elemento a determinar, como se indica en Ia monografia especifica del ‘producto correspondiente, Preparacién de a muestra. Preparar Ia muestra como s¢ indica en la monografia especifica del producto corres- ppondiente. Procedimiento. Cuantitativamente, colocar en no menos de tres matraces, cantidades iguales de la preparacién de la muestra y afadir a cada uno cantidades crecientes, exacta- ‘mente medidas, de la preparacién de referencia, para obtener diferentes concentraciones del elemento a determinar, evar ‘Volumen con agua y mezclar. ‘Ajustar el aparato como se indica en el manual del equipo y proceder a introducir un minimo de tres veces cada muestra dentro de la flama, 1 tubo 0 copa, registrar las lecturas cconstantes y promediarlas. Ciieulos. Preparar Ia curva de calibracién, representando sgrificamente las lecturas promedio para cada preparacién, frente a las correspondientes concentraciones de la prepara cién de referencia, unir los puntos con una linea recta y extrapolarlos hasta interceptar con el eje de concentracién. La distancia entre el inteoepto de la curva y la interseccién de los ejes, representa la concentracién del elemento a determi- nar, en la muestra. También es posible efectuar este céleulo utiizando el anilisis de regresin lineal empleando una calculadora, o una computadora que puede estar integrada al instrumento. Utilizar un valor de cero de absorbancia para hacer Ia interpolacién. Relacionar el valor obtenido (usar el valor absoluto) con el peso de la muestra y el factor de dilucién.Métodos Generales do Andlisis 349 MGA 0341, ESPECTROFOTOMETRIA DE FLUORESCENCIA ‘Se basa en Ia medicién de la intensidad de la fluorescencin cmitda por una muestra dada, con relacién ats emitida por una sustncia de referencia, bajo condiciones estblecidas. DEFINICION, Fluorescencia es In luz emitida por una sustancia quimica en estado excitado provocado por Ia absorcién de energin radiante, al ser expuesta a radiacién ultraviolets, visible u otra radiacin electromagnética RECOMENDACIONES ESPECIALES = Las celdas empleadas en la medici6n deben ser lavadas y después de su uso, con el disolvente que se emplee arse con cuidado, Cuando se requiera una lim- ‘Pieza mis profunda de las celdas, emplear los siguientes agentes en orden creciente de poder limpiador: agua tibia, solucién de fcido clorhidrico al 2% (v/v), etanol y soluci6n de écido clorhidrico al 15 % (wy). ~ Tapar las eeldas al realizar la mediciOn de Ia intensidad de fluorescencia, sobre todo cuando se empleen disolventes volatiles. = El material de vidrio usado para esta prucba, deberi estar previamente lavado con porciones. sucesivas de dcido clothidrico, agua y etanol, secéndolo perfectamente y evitando 1a contaminacion’ con particulas fluorescentes y metales = La preparacion de la muestra, la preparacién de referencia y el blanco, deben estar libres de polvo 0 cualquier otra particula, pudiendo eliminarse por centrifwencin. APARATO = Fluorémetro. = Espectrofluorémetro, Descripeién. El fluorémetro consta de: 1) Fuente de radiacién. La fuente de radiacién debe ser muy intensa y muy estable, ya que la intensidad de I fluorescencia depende directamente de la radiacién incidente, Las limparas mis comiinmente usadas son las de arco de mercurio y las de arco de xenén; estas lémparas emiten energia en las regiones visiblesy ultravioleta. La emisién de ta lémpara de xenén abarca un amplio intervalo de longitudes de onda, mientras que la emision de Ia limpara de metcurio se concentra en bandas muy fensas, de Ins cuales las de 254 nm y 365 nm son de ‘gran valor como radiaciones de exeitacién. La limpara de tungsteno se utiliza para aquellos pro- ductos que tienen una banda de excitacién muy fuerte arriba de los 450 nm. Filtro primario, Es un filtro de vidrio que transmite luz. de Ia longitud de onda descada y absorbe todas las dems radiaciones, son intercambiables y se selecciona aquel {que transmita una banda de radiacién correspondiente a la absorcién méxima del compuesto. c) Cimara para la muestra. Es el recepticulo donde se coloca la celda que contiene Ta solucén de la muestra. Las celdas usadas para medicién de fluorescencia, pueden ser de varias formas: rectangulares, para mediciones de 90° de Aispersin, similares aquellas usadas en espectrofotometria, de absorcibn, slo que se encuentran pulidas en sus cuatro caras; semioctagonales para 45°, 90° y 135° de dispersién y cilindricas para dispersin a todos los Angulos. Las celdas son generalmente de vidrio: utilizar celdas de cuarzo cuando se trabaje a menos de 230 nm. Filtro secundario. Es un filtro rigido interceptor, que permite que las longitudes de onda mis largas de fluo rescencia sean tran excitaciin, ©) Detector. En muchos fluorémetros se encuentra colocado sobre un ee a 90° con respecto al rayo exeitante, para que la radiacién de excitacién, al pasar a través de la muestra, no contami Ia sefial de salida recibida por el detector de Muorescencia. Muchos fluorémetros.usan tubos fotomultiplicadores como detectores, cada uno tiene caracteristicas especiales con respecto a Ia regién especiral de mixima sensiilidad, ganancia y nuido eléctric. 1) Amplifcador. Es et que amplifica I corriente eléetrica que 5 proporcional a Ia intensidad de la energia fluorescente. » ® uz TRANSUTIOA, BA tuzFLuoREsce WwW ( Figura 0341.1. Componentes de un fluorémetro. MGA 0341, ESPECTROFOTOMETRIA DE FLUORESCENCIA HPHAADPAPAMAADAHMMPHONAHHHHANRHAHHHKMAKHHMBAHMOARHaennaneCOOGOO44HHOOO ‘350 Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos, undécima adicién. 8) Medidor 0 registrador. El espectrofluordmetro difiere de un fluorémetro en que Ios filtros son remplazados por monocromadores, de cualquiera de los dos tipos: prismas o rejillas. Elespectrofluordmetro ¢s superior al fluoréme~ tro en la selectividad de la longitud de onda, lexibilidad yy conveniencia. En un espectrofluorémetro, los monocro- rmadores stn equipados con ranuras. Una ramura angos- ta, provee alta resolucién y pureza espectral, mientras que una ramura ancha, sacrifica esto por Ia sensibilidad alta, La seleccién del tamaiio de la ranura se determins por Ia separacién que existe entre las longitudes de onda de excitacién y emision, asi como el grado de sensi- bilidad necesari. CALIBRACION, La calibracién y ajuste del aparato se Teva a cabo como lo indica el manual de manejo, propor- cionado por el fabricant. METODO. Preparar ls preparaciones de referencia, de Ia nuestra y el blanco como se indica en la monografia del ‘producto correspondiente. PROCEDIMIENTO. Seleccionar en cl aparato la longitud de onda de excitacién y de emisién, indicada en la monografia del producto correspondiente y ajustar a cero con el blanco. Ajustar la sensiilidad del instrumento con la solucién de referencia, de tal forma que la lectura sea lige- ramente mayor de 50; si el ajuste de sensibilidad se logré variando el ancho de la ranura, volver a ajustar a cero con el blanco y determinar finalmente la intensidad de fluorescen- cia de la preparacién de referencia. Posteriormente y tan ripido como sea posible, usar la misma eelda y las mismas condiciones de prucba, determinar la intensidad de fluores- cencia de la preparacién de la muestra, Si la concentracién de Ia muestra no es directamente proporcional a Ia de la preparacién de referencia, determinar su concentracién, preparando una curva tipo ¢ interpolando en ella el dato obtenido para la muestra CALCULOS. Para determinar la concentracién de la ‘muestra, emplear la fSrmula indicada en In monografia del producto correspondiente, INTERPRETACION. El resultado obtenido debe estar comprendido dentro de los limites establecidos en la ‘monografia del producto correspondiente. MGA 0351. ESPECTROFOTOMETRIA INFRARROJA ‘Se basa en Ja medicién de la absorcién de la radiacién in frarroja debida a ln interacci6n con los enlaces que forman Jos grupos funcionales presentes en las moléculas orginicas. MGA 0351. ESPECTROFOTOMETRIA INFRARROJA Elespectto se presenta en unidades de nimero de onda (em) 1 longitud de onda (jim) en Ia abscisa y unidades de trans- rmitancia o absorbancia (andlisis cuantitativo) en la ordenada. INFRARROJO MEDIO Recomendaciones especiales. El material a emplear debe estar libre de humedad. Las celdas selladas, se conservan Ienas con disolvente en desecador. Las celdas de absorcién al infrarrojo no deben ponerse en contacto con disolventes {que contengan agua. Empleardisolventes del mismo lote en la preparacin de la solucién de Ia muestra, solucin de referen- cia y blanco. Cuando la monografia especifica del producto To indique, los disolventes y las muestras en solucién debersn pasarse a través de sulfato de sodio anhidro. INSTRUMENTO. El espectrofotémetro utilizado para regis- trar el espectro en la regién del infrarojo deberd contar con un sistema 6ptico 0 un interferémetro capaz de suministrar radiacién monocromitica_ en la regién de 12.800 3 4.000 emi! (08 a 2.5 jum) para el andlisis en el infarojo cercano y de 4 000 a 200 em (2.5 50 um) para el infrarrojo medio, y de medir y efectuar Ia adquisicién de los espectros en ‘ransmitancia o absorbancia de la lz incidente. INSTRUMENTOS DISPERSIVOS. Los componentes bisicos del espectrofotémetro de un solo haz y de doble hhaz son los que se indican tanto en Ia figura 0351.1 como en 130351.2. Fuente de radiacién infrarroja (1), porta celda (2), sistema ‘monocromador (3), generalmente consiste de: a) rejilla de ‘entrada, b) colimador, ¢) prisma o rejilla de difraccién, d) rejilla de salida, ¢) segundo sistema de lentes o espejos. istema de deteccién (4), amplificador (5), atenuador (6) y registrador (7). \STRUMENTOS NO DISPERSIVOS (FTIR) La Espectroscopia en el Infrarrojo con Transformadas de Fourier (FTIR) es hoy la técnica modema no dispersiva de preferencia sobre la Espectroscopia IR dispersiva, se aplica en el analisis cualitativo y cuantitativo de especies ‘moleculares de todo tipo. Se manejan muestras cada vez mis equefias (12 2 mg) y complejas (polvos, acuosas, opacas). La Sensibilidad, resoluci6n y exactitud de longitud de onda absoluta, superan a los instrumentos dispersivos. Tabla 0351.1. Componentes principales. Sistema ‘Componentes Fuente deradiacion __Filamento de Nemst, Fuente Globar, Tira de Nicromo Interferémetro De Michelson o de Péndulo Detector Sulfato de triglicina deuterada, ‘mercurio-cadmio-telurio © tantalato de litio Procesamiento de datos Computadora‘Métodos Genoralos do Anéiisis 351 3 Figura 0351.1. Diagrama de un espectrofotémetro de un solo haz. = — Figura 0351.2. Diagrama general de un espectrofotémetro IR de doble haz. NGA 0351, ESPECTROFOTOMETRIA INFRARROJA eee ee mm nna nanan anawannannannaenansenaeseeoeese |@ 3 3 % 3 3 ° . ° . 3 2 2 3 2 3 3 2 > > > 2 352 _Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos, undécima edicién. ZONADELAMUESTRA, Figura 0351.3. Diagrama general de un espectrofotémetro IR. con Transformadas de Fourier (FTIR). El Espectrofot6metro de Infrarrojo con Transformadas de Fourier tiene una fuente luminosa que emite radiaci6n infrarroja que Hega a un divisor de haz hecho normalmente de bromuro de potasio (KBr) 0 yoduro de cesio (CsI), colocado en una posicién de 45° y con un pequetio recubri mienio de germanio en la parte posterior. La funcién de éste, ¢ dividir el haz procedente de Ia fuente en dos partes iguales: la primera de ellas que refleja hacia un espejo fijo, colocado en la parte superior y cuya funcién es la de volver @ reflejar este haz luinoso hacia el divisor de haz. El segundo hhaz no se refleja, sino que pasa a través del divisor de haz hacia un espejo que tiene un movimiento lineal el cual serviré para introducir una variable Hamada diferencia de aso dptico. ‘Los dos haces se combinan de nuevo en el divisor de haz interfiriéndose constructiva y destructivamente, dependiendo de la diferencia de paso éptico entre el divisor de haz y los espejos. La radiacién recombinada pasa a través de la ‘muestra hacia el detector, [MGA 0351. ESPECTROFOTOMETRIA INFRARROJA El trayecto del haz infrarojo es el mismo y a igual tiempo que el rayo liser de helio-neén lo cual permite obtener exactitud nla frecuencia. La sefial que se obticne al final de este proceso 3 un inleferograma, que por uso de las. ecuaciones de transformadas de Fourier y por medio de una computadora, se convierte al final en un espectrograma (figura 0351.3). CALIBRACION La calibracién del instrumento se lleva a cabo como lo indica el manual de operacién proporcionado por el fabricante. Generalmente lo que se hace es registrar el espectro de una pelicula de poliestireno de 0.05 mm de espesor, que muestra un conjunto considerable de sefales caracteristicas bien definidas (figura 0351.4), con las que puede comprobarse o calibrarse Ia escala de longitudes de fonda del espectrofotdmetro. El ajuste de la gananc Gensibilidad), también se realiza de acuerdo al manual de ‘operacién del instrumento, optimizando Ia energia necesaria para efectuar la deteccién y evitando la produceién de ruido.Métodos Gonoralos de Andlisia 353 vp ny | "het | ot toaal L soeol Lassi seoal Ivees Figura 0351.4, Espeetr inftarrojo de la pelicula de poliestireno Tabla 0351.2, Caracteristicas de las celdas de absorcién. Material Yitindemt_g/00 de agu'a20°C Teer 0000-625 360 kB 40 000-385 os2 AgBr® 20.000 - 285 0.000012 cure 0000-1100 00181 ca 33000-200 160061°C ZaSe:Inmn-s* 1000-515 Tnsoabe Sulfa de zine. ZS inan2 1000-715 Instate KRSS* 16 600-250 < 00876 Potiileno aha Insoluble, epi para densi 25-30 inorpineos Us par el wabujo de reflexion intema, La superficie debe ser épticamente plana. Para anilisis cuan- titativo se emplean celdas de 0.1 a 1.0 mm de espesor. METODOS ENSAYOS DE IDENTIDAD Preparscién de Ia SRef y de la muestra. Emplear de tos rétodos siguientes el indicado en la monografia especifica Gel producto correspondiente. Para muestras en forma liquida Pelicula. Colocar una gota del liquido entre 2 placas de cloruro de sodio u otro material transparente a la radiacién infrarroja, formando una pelicula delgada o Hlenar direc~ tamente una celds adecuada con la muestra, evitando que queden burbuja Para liquidos 0 s6lidos En solucién. Preparar una solucién en un disolvente adecusdo. Generalmente se obtienen buenos resultados con concentraciones de | 2 10% (m/v) para un espesor de 0.05 a 0.1 mm , Llenar una cela adecuada con la solucién evitando ue queden burbujas y emplear para el blanco el mismo disolvente usado en ln preparacién de las soluciones. Para muestras sétidas 8) Parafina Uquida 0 nujol. Moler de Sa 10mg de ta rmwestra con la eantidad minima de parafina ti {aujol), en un mortero de Agata durante unos minutos, hasta obtener una dispersién fina y homogénea en forma de una pasta suave. Comprimir ia pasta obtenida entre dos placas de cloruro de sodio u otro material transpa- rente ala radiaci6n inrartoj. b) Pastilla de bromuro de potasio. Pulverizar en un rmortero de Agata de 1.0.2 3.0 mg de la muestra. Agregar 100mg de bromuro de potasio (previamente seco a 105°C durante 5), grado espectroscopia IR, moler y mezclar. Colocar correctamente el polvo homogéneo cn tuna matrz cilindrica de acero inoxidable y comprimir con Is prensa hidréulica haciendo vacio de 3 a 4 min. La presiba requerida normalmente para la preparacién de la pastillaes de 1 400 a 1 762 kg/cm? ©) Disolucién y evaporacton del disolvente. Disolver unos riligramos de la muestra, en la cantidad minima de un disolvente adccuado. Aplicar Ia solucién sobre una placa, de cloruro de sodio w otro material transparente a In radiaci6n infrarroja, calentar la placa suavemente para evaporar completamente el disolvente dejando una pelicula muy fina de 1a muestra. Cubrir con una segunda, placa de cloruro de sodio, &) Técnica de fusién. Si el sdido es pastoso, 0 son cristales de ‘bajo punto de fusién, colocar unos miligramos de 1a muestra, sobre una placa de cloruro de sodio u otro material transparente a Ia radiacién infraroja. Calentar ‘suave y directamente la placa sobre una parrilla de tal forma que Is sustancia se funda, para hacer una pelicula muy fina sobre la placa de cloruro de sodio y dejar enfriar. ©) Solucién. Para obtener el espectro de una muestra en solucién se requicre tener el disolvente adecuado, (libre de humedad y no higroscépico), usualmente se emplea cloroformo 0 tetracloruro de carbono. Las soluciones con tuna concentracién entre 0.05 a 10 % se colocan en celdas selladas de paso variable que van de 0.1a 1.0mm de cespesor, o celdas selladas de paso fijo que van de 0.1 a 0.5mm de espesor. Este manejo de la muestra es el adecuado para el anilisis cuantitativo. 1) Gases. Es posible obtener el espectro de un liquido de bajo punto de ebullicién o de un gas, permitiendo In expansin de la muestra en una celda evacuada para g28es, después de lo cual se procede a obtener el espectro NGA 0351. ESPECTROFOTOMETRIAINFRARROJA, Fee a a ee