INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

UNIDAD PROFESIONAL INTERDISCIPLINARIA DE

BIOTECNOLOGÍA

PRACTICA 9
Producción de biomasa en
Cultivo por lote alimentado

Profesores:
Integrantes:
M. en C. Yolanda Vázquez Dávila
Argueta Martínez Emiliano
M. en C. Jonás Martínez Limón
Feregrino Castillo Sergio
Olivares Garcia Andrea Alexandra
Regalado Baltazar Angélica
Rivas Puente Damian 05 DE DICIEMBRE DE 2022
1
 1.- Objetivo.
AGENDA 2.- Clasificación de Sistema
s
Fermentativos.
3.- Características de un sis
tema
semicerrado
4.- Clasificación de los siste
mas
semicerrados.
5.- Ecuaciones que describ
en el
CLA-AC
6.- Sacharomices cerevicea
7.-. Diagrama de bloques
8.- Referencias 2
Objetivo
Realizar un cultivo por lote alimentado
con alimentación constante (CLA-AC)
empleando una cepa de levadura
Candida Utilis o Saccharomyces
cerevisiae y comparar la productividad
de este sistema respecto a un cultivo
por lote.
3
 Clasificación de Sistemas
Fermentativos (cerrados,
semicerrados y abiertos)
La fermentación es un proceso catabólico de oxidación incompleta, totalmente anaeróbico,
siendo el producto final un compuesto orgánico.

Es aquel proceso en el que microorganismos producen metabolitos o biomasa, a partir de la

utilización de sustancias orgánicas.

4
ABIERTO CERRADO
Un sistema de cultivo es Un sistema cerrado es aquel
abierto cuando hay entrada donde no hay entrada ni
(sustratos) y salida (biomasa y salida de materiales.
productos) de material. Una fermentación
En la fermentación continua discontinua (cultivo en lote)
(cultivo continuo) se puede ser considerada como
establece un sistema abierto. un "sistema cerrado".

5
 ABIERTO CERRADO
La solución nutritiva estéril se Al inicio de la operación se añade la
añade continuamente al solución esterilizada de nutrientes y se
biorreactor y una cantidad inocula con el microorganismo.
equivalente de solución utilizada A lo largo de toda la fermentación no
de los nutrientes, con los se añade nada, excepto oxígeno, un
microorganismos, se saca agente antiespumante y ácidos o
simultáneamente del sistema. bases para controlar el pH.

6
Características de un sistema
semicerrado.
Un sistema semicerrado es el cultivo por lote alimentado.
En este sistema:
Los sustratos se añaden escalonadamente a medida
que progresa la fermentación. La formación de
muchos metabolitos secundarios está sometida a
represión catabólica.
Los elementos críticos de la solución de nutrientes
se añaden en pequeñas concentraciones al
principio de la fermentación y continuan
añadiéndose a pequeñas dosis durante la fase de 7
producción.
Características de un sistema
semicerrado.
Permite la entrada de materia prima pero no de salida.
Se presenta un área de vaciado, puesto que todas las
fermentaciones son anaerobias.
El punto de mezcla que se lleva acabo es importante para
la fermentación.
Altamente productivos, su instalación no es muy costosa.
Evitan la degeneración del microorganismo.
Bajo ciertas condiciones se puede controlar la velocidad
específica de crecimiento para mejorar la producción.
8
 Clasificación de los sistemas semicerrados.
El cultivo por lote alimentado se clasifica en:

DE VOLUMEN FIJO VOLUMEN VARIABLE DISCONTINUO ALIMENTADO

REPETIDO O CÍCLICO
Consiste en alimentar el Implica la adición de Cuando alcanza la fase
sustrato limitante al alimentación de estacionaria y no hay
reactor muy sustrato que cambia el cambios significativos en el
concentrado para que crecimiento de las células,
volumen de trabajo con
no se produzca un se retira una cierta
el tiempo de
cantidad de caldo gastado
aumento de volumen fermentación. del fermentador, seguido
notable.
de la adición de medio
nutritivo fresco.
9
Clasificación de los sistemas semicerrados.
De acuerdo a la forma de alimentación a su vez se
clasifica en:

ALIMENTADO
ALIMENTADO LINEALMENTE
EXPONENCIALMENTE
Implica hacer coincidir la Implica agregar un flujo
tasa de alimentación con constante de
la tasa de consumo de alimentación durante
alimentación, de modo todo el proceso.
que a medida que las
células crecen
exponencialmente, la tasa
de alimentación aumenta
exponencialmente.
10
Ecuaciones que describen el CLA-AC (crecimiento
celular, consumo de sustrato y producción de
metabolito).
Las ecuaciones matemáticas que describen a estos procesos son resultado de
balances de materia de los componentes que entran en juego y su solución
implica sofisticados y complicados métodos numéricos con ayuda de
computadoras.

En este tipo de CLA, tanto Fa como Sa son constantes

Las condiciones iniciales de todo tipo de CLA establecen las tres

soluciones posibles respecto a la oferta y demanda del cultivo:

1) que DN0 < ON

2) que DN0 > ON
3) que DN0 = ON
(el subíndice “cero” denota condiciones iniciales). 11
 12 Ecuaciones que describen el CLA-AC (crecimiento
celular, consumo de sustrato y producción de
metabolito).
Fase de Crecimiento Exponencial (FCE)
Si Fa y Sa son constantes y para el caso en que la ON es mayor que la DN
inicial, la integración de las ecuaciones 3, 1 y 2 dan origen respectivamente a:

Con las cuales se puede calcular el volumen, masa celular y sustrato, respectivamente, con respecto al
tiempo.
13 Ecuaciones que describen el CLA-AC (crecimiento
celular, consumo de sustrato y producción de
metabolito).
Fase de Crecimiento Exponencial (FCE)
Dado que la concentración celular se define como la biomasa total por unidad de volumen de cultivo,
ésta se puede calcular utilizando las ecuaciones 7, 9 y 10. Dando como resultado la siguiente
ecuación:

En igual forma se puede calcular la concentración del sustrato con las ecuaciones 8, 9 y 11 dando
como resultado:
Investigación bibliográfica de Saccharomyces
cerevisiae y sus parámetros cinéticos, condiciones
optimas de crecimiento y requerimientos nutricionales.
El crecimiento de levaduras está compuesto por tres fases importantes:
La fase de latencia (o adaptación), que dura unas 15 horas.
La fase de crecimiento, donde tiene lugar un crecimiento exponencial de la levadura, y que dura entre
1 y 4 días.
La fase de acondicionamiento, de entre 3 y 10 días.
Requerimientos nutricionales
Las levaduras requieren nutrientes específicos para su desarrollo, requiere de minerales propios de su
composición (Ver tabla 1). El medio es suplementado con 𝑵𝑯𝟒𝑪𝒍,𝑴𝒈𝑺𝑶𝟒,𝑪𝒂𝑪𝒍𝟐,𝑲𝑯𝟐𝑷𝑶𝟒. En la industria,
solo se necesita añadir sales de amonio y fosfato.

14
Tabla 1. Composición cenizas de levadura de Saccharomyces cerevisiae.
Saccharomyces cerevisiae y sus requerimientos nutricionales. 15
Fuente de carbono: Para que ocurra la fermentación debe existir una fuente de carbono. Comúnmente
es utilizada la glucosa.La levadura convierte las hexosas en etanol y dióxido de carbono mediante la
glucólisis. La concentración inicial de glucosa tiene un efecto importante en la producción de etanol.
Concentraciones de glucosa sobre los 100 𝑔/𝑚𝑙 son inhibidores para la levadura porque satura a la
levadura por lo tanto se reduce la velocidad de crecimiento de biomasa y formación de producto (Shuler,
2002).
Nitrógeno: Las fuente de nitrógeno pueden se orgánicas o inorgánicas. Se utiliza para la biosíntesis de
proteínas, ácidos nucleicos y polímeros de la pared celular de la levadura (Ertola, Yantorno , & Mihnone,
1994).
Fósforo y azufre: Son macronutrientes que se agregan al medio en forma de fosfatos y sulfatos. El
fósforo se incorpora en ácidos nucleicos y polímeros celulares.
El azufre es asimilado para la biotina, coenzima A, tiamina y otros componentes (Ertola, Yantorno , &
Mihnone, 1994).
Potasio y Magnesio: Los requerimientos de potasio están ligados al RNA (Ácido ribonucleico), ya que un
aumento de potasio en el medio influye en el aumento de RNA de las células y esto aumenta la velocidad
de crecimiento. Por otro lado, el ion magnesio es un cofactor en numerosas reacciones del metabolismo
celular de la levadura y da estabilidad a los ribosomas. Tanto el potasio como magnesio se incorporan a
los medios en forma de sales como fosfato y sulfato (Ertola, Yantorno , & Mihnone, 1994).
 Saccharomyces cerevisiae y sus parámetros cinéticos,
condiciones optimas de crecimiento y requerimientos
nutricionales.
pH: El pH óptimo para el crecimiento de la levadura va de 4 a 6, es decir e microorganismo
acidófilo.
Temperatura: la temperatura óptima para las levaduras, siendo un microorganismo mesófilo,
es de 35+-2 ℃ y su temperatura optima es de 37 °C (Shuler, 1992).
Oxígeno: La producción de etanol es desencadenada en condiciones anaerobias. Sin embargo
pequeñas cantidades de oxígeno son requeridas por la levadura para la biosíntesis de lípidos y
mantenimiento de procesos celulares.
Ks: Constante de saturación Ks= 25 mg/L y al ser pequeño Ks µmax es igual a µ= 0.188 h-1.
Td: Como el tiempo de duplicación es igual a Td = ln 2/µ entonces Td = 3.68 horas.

Tabla 2. Parámetros de la cinética de crecimiento de Saccharomyces cerevisiae en 16

caldo melaza mas lactosuero y jugo de uva.
Tabla 3. Resumen del crecimiento celular tipo Batch de Saccharomyces cerevisiae. 17
 El tiempo de cultivo en
un sistema batch inicia
en el momento de la
inoculación, y termina
cuando se agotan los
nutrientes, el sustrato
se agota y por
inhibición del
crecimiento por el
producto formado
(Ertola, Yantorno , &
Mihnone, 1994.).

18
Figura 1. Fases del crecimiento celular.
Diagrama de bloques

19
Diagrama de bloques
Preparación y desarrollo de inóculo.

20
 Diagrama de bloques
Preparación, eterilización e inoculación del
biorreactor

21
Diagrama de bloques
Preparación de medio de cultivo alimentar
2 3

4 5

22
 Diagrama de bloques
Calibración de la bomba peristaltica de
alimentación.

Se calibra con el cabezal adecuado al diámetro de la

manguera utilizada, a un punto en el que el flujo sea
constante e igual a 300 mL/h (se utiliza agua)
23
Diagrama de bloques
Inicio y desarrollo del cultivo por lote
alimentado con flujo de alimentación
constante

24
 Diagrama de bloques
Seguimiento de la Biorreacción

Tomar muestras de La alimentación en el cultivo

aproximadamente 10 ml
por lote alimentado durará
del medio agotado cada Las
aprox. 10 horas durante las
hora (a las que determinaciones
cuales se controlará el pH a
denominaremos “mma”) se harán por
duplicado
4.0 con una solución de
para determinar la
NH4OH, 2N y la temperatura a
concentración celular (x)
y la de glucosa residual 30°C.
(s)

25
[1] (PDF) PROCESOS
Referencias
FERMENTATIVOS. (2022, July 5). ResearchGate;
26
ResearchGate.
https://www.researchgate.net/publication/261983467_PROCESOS_FERMENTATIVOS
[2] Figueiras, S. (2021, November 12). ¿Qué es la Fermentación? Ceupe.mx. https://www.ceupe.mx/blog/que-es-la-
fermentacion.html
[3] Sanjogta Thapa Magar. (2021). Fed-batch Culture- Definition, Principle, Process, Types, Applications, Limitations. Microbe
Notes. https://microbenotes.com/fed-batch-culture/
[4] Hernández, A. (2015) Sistema de control de alimentación para cultivo lote alimentado exponencial. Revista de Análisis
Cuantitativo.
https://www.ecorfan.org/bolivia/researchjournals/Analisis_Cuantitativo_y_Estadistico/vol3num6/Revista_de_Analisis_Cuantitati
vo_V3_N6_6.pdf
[5]Are, W. (2021). What Are the Different Bioreactor Processes? Pall. https://www.pall.com/ar/es/biotech/blog/bioreactor-
processes.html
‌[6] Sandoval Agama, E. (2019). Obtención de parámetros cinéticos para el crecimiento del microorganismo Saccharomyces
cerevisiae en reactor CSTR. Trabajo de titulación previo a la obtención del Título de Ingeniero Químico. Carrera de Ingeniería
Química.http://www.dspace.uce.edu.ec/handle/25000/18785
[7] Muñoz, M. (2013). Estimación de parámetros cinéticos de Saccharomyces cerevisiae en sistema de fermentación Batch bajo
distintas condiciones de crecimiento. Universidad Tecnológica de chile. https://www.researchgate.net/profile/Miguel-Munoz-
Flores/publication/257310255_Estimation_of_kinetic_parameters_of_Saccharomyces_cerevisiae_in_batch_fermentation_during_
different_growth_conditions/links/00463524e576d9f2fc000000/Estimation-of-kinetic-parameters-of-Saccharomyces-cerevisiae-
in-batch-fermentation-during-different-growth-conditions.pdf
 Referencias 27
[8] Aguilar, J.(2015). Evaluación de la cinética de crecimiento de saccharomyces cerevisiae utilizando un medio de cultivo a base de
melaza de caña y suero lácteo. Universidad Nacional de
Trujillo.https://revistas.unitru.edu.pe/index.php/agroindscience/article/view/932/866
[9] (S/f-c). Studocu.com. Recuperado el 4 de diciembre de 2022, de https://www.studocu.com/es-mx/document/instituto-
politecnico-nacional/ingenieria-de-biorreactores/capitulo-2-cultivo-lote-alimentado/23429269