SEMANA 1 PRACTICA MEMBRANA PLASMATICA

La membrana celular juega un papel importante en la regulación del contenido celular, pues tanto los elementos
nutritivos como los productos de desecho deben pasar a través de la ella. La ósmosis es el proceso en el cual se produce
la difusión de moléculas de agua a través de una membrana semipermeable. La presión ejercida por las moléculas de
agua en su tendencia a difundir durante la ósmosis se llama presión osmótica.

Las células se hallan por lo general rodeadas de medio líquido. Si en ese medio la concentración de sustancias es mayor
que la existente dentro de la célula, el medio se denomina hipertónico y el agua tiende a salir de la célula. Si el líquido
extracelular tiene menor concentración de sustancia que el interior celular, el medio se denomina hipotónico y el agua
tiende a entrar a la célula. Cuando la concentración de sustancia en el medio extracelular es igual a la del medio
intracelular, el medio se denomina isotónico y no se produce un desplazamiento neto de moléculas de agua,
manteniendo la célula su forma normal.

-Transporte a través de la membrana celular.

-Ósmosis y permeabilidad de la membrana.

ACTIVIDADES: GRUPAL

- Desarrollo del cuestionario:

1. ¿Qué es la presión osmótica?

La presión osmótica es la fuerza necesaria para evitar que el agua se mueva a través de una membrana semipermeable
desde una solución menos concentrada hacia una solución más concentrada. Esta presión se debe a la tendencia del
agua a igualar las concentraciones de solutos a ambos lados de la membrana. Se calcula utilizando la Ley de van't Hoff,
que relaciona la presión osmótica con la concentración de solutos y la temperatura. La presión osmótica es importante
en biología para la absorción de agua en las células y en aplicaciones industriales como la purificación de agua y la
conservación de alimentos.

2. Defina qué es diálisis y explique los tipos de diálisis.

La diálisis es un procedimiento médico utilizado cuando los riñones no pueden eliminar adecuadamente desechos y
sustancias tóxicas del cuerpo. Hay dos tipos principales de diálisis:

1. Hemodiálisis: Implica extraer sangre, purificarla fuera del cuerpo a través de un filtro llamado dializador y luego
devolverla al organismo. Esto se hace para eliminar toxinas y mantener el equilibrio químico en la sangre.
2. Diálisis Peritoneal: Utiliza la membrana peritoneal en la cavidad abdominal para filtrar los desechos. Se introduce
una solución de diálisis en la cavidad abdominal, que luego se drena junto con los desechos absorbidos.

La elección entre los tipos de diálisis depende de la situación médica del paciente y su estilo de vida. La
hemodiálisis se realiza en un centro, mientras que la diálisis peritoneal puede hacerse en casa. Ambos métodos son
vitales para mantener la salud en personas con problemas renales.

3. ¿Qué significa homeostasis?

Proceso mediante el cual los organismos mantienen un equilibrio interno constante y estable, a pesar de los cambios en
el entorno externo.

La homeostasis implica la regulación y el control de diversos parámetros fisiológicos, como la temperatura corporal, el
pH, la presión arterial, el equilibrio de electrolitos y la concentración de glucosa en la sangre, entre otros. Estos
parámetros deben mantenerse dentro de un rango relativamente estrecho para que las células y los tejidos funcionen de
manera óptima.

Para lograr la homeostasis, los organismos utilizan sistemas de retroalimentación (feedback) que monitorean
constantemente los niveles de ciertos parámetros y ajustan las respuestas del cuerpo en consecuencia. Hay dos tipos
principales de retroalimentación:

1. Retroalimentación negativa: En este tipo de retroalimentación, cualquier desviación de los valores normales de
un parámetro desencadena una respuesta que actúa para corregir esa desviación y volver a llevar el sistema al
equilibrio. Un ejemplo es la regulación de la temperatura corporal: si la temperatura aumenta, el cuerpo activa
mecanismos para enfriarse, como la sudoración.
2. Retroalimentación positiva: En este caso, una desviación del valor normal provoca una respuesta que amplifica
aún más esa desviación, en lugar de corregirla. La retroalimentación positiva es menos común en la homeostasis
y a menudo se encuentra en situaciones donde el organismo necesita una respuesta rápida y fuerte, como en el
caso de la coagulación sanguínea.

3. ¿En qué consisten los fenómenos de crenación y hemólisis?

Los fenómenos de crenación y hemólisis están relacionados con la respuesta de las células sanguíneas, especialmente los
glóbulos rojos, a cambios en la concentración de solutos en su entorno.

1. Crenación: La crenación es un proceso que ocurre en los glóbulos rojos cuando son expuestos a soluciones con
una concentración alta de solutos (hipertónicas). En este caso, el agua en el interior de las células se moverá
hacia el exterior debido a la diferencia en la concentración de solutos. Como resultado, los glóbulos rojos se
encogen y suelen desarrollar una superficie irregular con pequeñas espinas o proyecciones. Este proceso es
reversible; cuando los glóbulos rojos se colocan en una solución isotónica o hipotónica (donde la concentración
de solutos es similar o menor a la del interior celular), recuperarán su forma y tamaño normales.
2. Hemólisis: La hemólisis es el proceso opuesto a la crenación. Sucede cuando los glóbulos rojos están en un
medio hipotónico (con menor concentración de solutos que el interior de la célula). En esta situación, el agua
fluye hacia las células en un intento de igualar las concentraciones de solutos. Si el flujo de agua es excesivo, los
glóbulos rojos pueden hincharse y finalmente estallar debido a la presión osmótica. Esto resulta en la liberación
de su contenido, incluyendo hemoglobina, en el plasma sanguíneo.

Ambos procesos están relacionados con la tendencia del agua a moverse a través de membranas celulares en respuesta
a las diferencias de concentración de solutos. La crenación y la hemólisis pueden tener implicaciones en la salud,
especialmente en condiciones médicas donde la concentración de solutos en la sangre se altera, como en ciertas
enfermedades renales o en transfusiones sanguíneas.

RESUMEN: Los fenómenos de crenación y hemólisis están relacionados con la respuesta de los glóbulos rojos a cambios
en la concentración de solutos en su entorno. La crenación ocurre cuando los glóbulos rojos se encogen y desarrollan
una superficie irregular al ser expuestos a soluciones concentradas de solutos. La hemólisis, en cambio, se da cuando los
glóbulos rojos se hinchan y pueden estallar al estar en un medio con menor concentración de solutos. Ambos procesos
están influenciados por la tendencia del agua a moverse en respuesta a las diferencias de concentración de solutos y
tienen implicaciones en la salud en contextos de desequilibrios de concentración en la sangre.
SEMANA 2 PRACTICA
MEMBRANA PLASMÁTICA
Introducción
Las células están separadas del medio que las rodea por una delgada lámina
denominada membrana plasmática, que define los límites de las mismas.

Hace 3700 millones de años, la formación espontánea de una estructura

similar a la membrana plasmática de las células actuales permitió aparición
de los primeros seres vivos. Sin esta barrera protectora, las células
estarían expuestas a los rigores del mundo externo, no podrían regular su
medio interno y, en consecuencia, no serían viables. La membrana
plasmática no aísla a la célula completamente sino que constituye
una barrera altamente selectiva, que tiene la propiedad de regular el
intercambio de materiales entre la célula y el medio que la rodea.

La membrana es una estructura muy delgada: sólo tiene un espesor de 6 a

10 nm (1nm=10-9m). Por lo tanto, se necesitarían mil membranas plasmáticas
apiladas, una sobre otra, para igualar el espesor de esta hoja de papel.
Precisamente debido a su delgadez, cuando se examina una célula al
microscopio óptico convencional, puede observarse sin dificultad el
interior de la misma; en el mejor de los casos podrá apreciarse el contorno
de la membrana, pero nunca podrá distinguirse su ultraestructura. Recién
las primeras microfotografías al microscopio electrónico demostraron que
la ultraestructura las membranas era siempre la misma. Esta estructura se denominó unidad de membrana y la misma no
sólo es válida para la membrana plasmática, sino para casi todas las membranas celulares.

Funciones de la membrana plasmática

Como ya se mencionó, las membranas no son simples barreras sino que:

· Definen la extensión de la célula y establecen sus límites.

· Constituyen barreras selectivamente permeables, dado que impiden el intercambio indiscriminado de sustancias entre
el citoplasma y el medio extracelular. La membrana plasmática, gracias a sus propiedades fisicoquímicas, está capacitada
para transportar de un lado a otro de la misma determinados solutos, macromoléculas y complejos macromoleculares. Sin
embargo, hay moléculas, que a pesar de ser toxicas para la célula, pueden ingresar sin dificultad a la misma a través de
la membrana. Un ejemplo seria el CO (monóxido de carbono).

· Controlan las interacciones de la célula con el medio extracelular (tanto con la matriz extracelular como con otras
células vecinas). Permite a las células reconocerse, adherirse entre sí cuando sea necesario e intercambiar materiales e
información.

· Intervienen en las respuestas a señales externas a la célula. La membrana posee receptores, que son moléculas o
conjuntos de moléculas, capaces de reconocer y responder a señales provenientes del medio extracelular portando
información especifica. Cuando dichas señales llegan hasta la membrana plasmática, se desencadenan señales internas en
la célula, tanto activadoras como inhibitorias de distintos procesos celulares. Como ejemplos de estas señales externas
podemos citar a los factores de crecimiento que favorecen la división celular o diversas hormonas como por ejemplo la
insulina, que aumenta la síntesis de glucógeno.

Singer y Nicholson propusieron en 1972 un modelo estructural para las

membranas al cual denominaron modelo del mosaico fluido. De acuerdo al
mismo las membranas son “disoluciones bidimensionales de lípidos y proteínas.”
Según este modelo, la estructura de la membrana sería una
delgada lamina formada por dos capas superpuestas de lípidos (también
llamadas hemimembranas), con la fluidez propia de los aceites, en la cual se
encuentran insertadas proteínas. Esto le confiere el aspecto de un “mosaico”.

Las membranas no son estructuras estáticas ni rígidas. Están formadas por un conjunto de
moléculas hidrofóbicas e hidrofílicas que se mantienen unidas por enlaces, en general, no covalentes. Una de las
principales características de las membranas biológicas es su alto grado de fluidez. Esto implica que sus lípidos y
proteínas pueden desplazarse libremente en todas las direcciones, pero siempre sobre el plano de la membrana. De allí
entonces la denominación de “mosaico fluido”; a esta propiedad también se la conoce como difusión lateral.

Como puede observarse en el esquema, las membranas también presentan glúcidos unidos por enlaces covalentes a
lípidos y proteínas. Esto da lugar a los llamados glucolípidos y glucoproteínas, respectivamente.

Estas membranas carecen de resistencia mecánica y en muchas células, como en el caso de hongos, bacterias y plantas
están reforzadas por paredes celulares.

1. COMPOSICIÓN DE LAS MEMBRANAS BIOLÓGICAS

Todas las membranas biológicas de los seres vivos, tanto la membrana plasmática, como las de las organelas, están
formadas por:

A. Lípidos

B. Proteínas

C. Glúcidos

La proporción de cada uno de estos

componentes varía de acuerdo a la
función que realiza cada tipo de
membrana. Por ejemplo, las
membranas mitocondriales tienen una
proporción muy elevada de proteínas
(ver Tabla 1).

A. Lípidos
La variedad de lípidos presentes en las membranas es muy amplia; sin embargo, todos poseen una característica en
común: son moléculas anfipáticas. Esto significa que sus moléculas contienen una zona hidrofílica o polar y
una hidrofóbica o no polar.

Los fosfolípidos son los lípidos más abundantes en las

membranas. Debido a su carácter anfipático, los fosfolípidos, en un
medio acuoso se organizan espontáneamente conformando la
denominada bicapa lipídica. Las cabezas polares están orientadas
hacia el medio acuoso (intra y extracelular) y las
colas hidrofóbicas hacia el medio lipídico, es decir, al interior de
la bicapa, constituyendo la matriz de la membrana. A su vez,
estas bicapas tienden a cerrarse espontáneamente sobre sí mismas
formando vesículas, es decir, compartimientos cerrados en toda su
extensión tridimensional, similares a una esfera.

La bicapa de fosfolípidos funciona principalmente como armazón estructural de la membrana y como barrera que impide
el pasaje de sustancias hidrosolubles a través de la misma; esto último es debido al carácter
fuertemente hidrofóbico de la matriz de la membrana.

Los fosfolípidos más frecuentes de las membranas son la fosfatidiletanolamina, la fosfatidilcolina, la fosfatidilserina y
la esfingomielina. Los fosfolípidos de las membranas son DIACILGLICERIDOS.

La estabilidad de las bicapas lipídicas esta dada por:

 interacciones hidrofóbicas entre las colas hidrocarbonadas.

 fuerzas de van der Waals entre las colas hidrofóbicas.
  fuerzas electrostáticas y puentes hidrogeno entre las cabezas polares de los lípidos, ya sea entre ellos mismos y
con las moléculas de agua de los medios extra e intracelular.

Como se notará todas estas son uniones débiles (no covalentes) y le confieren simultáneamente estabilidad y fluidez a la
membrana.

Las cadenas hidrocarbonadas de los ácidos grasos que forman parte los fosfolípidos (también denominadas “colas” o
grupos acilo), pueden presentarse:

 saturados (sin dobles enlaces)

 monoinsaturados (con un único doble enlace)
 poliinsaturados (más de un doble enlace)

En general, los lípidos de membrana contienen un grupo acilo insaturado y otro saturado en su estructura.

La presencia de ácidos grasos insaturados aumenta la fluidez de la membrana, debido al ”quiebre” de las colas a la
altura de los dobles enlaces. Esto impide, o al menos dificulta, que las colas hidrocarbonadas se compacten,
restringiendo así las interacciones entre ellas. El hecho de que uno de los grupos acilo de los fosfolípidos esté saturado
y el otro no, garantiza una buena fluidez dentro del rango de temperaturas fisiológicas. Por otro lado, cuando las
cadenas hidrocarbonadas son cortas, tienen menor superficie para interactuar entre sí; esto último también favorece la
fluidez de las membranas.

El colesterol es un esteroide que se encuentra en un alto porcentaje en la membrana plasmática de las células animales.
Su concentración varía mucho de un tipo de membrana a otro; en animales hay membranas donde el colesterol constituye
hasta el 50% del total de los lípidos. Contrariamente, la mayoría de las células vegetales y bacterianas carecen de
colesterol.

El colesterol, al ser también una molécula anfipática, presenta una orientación similar a la de los fosfolípidos: el grupo
hidroxilo (polar) se orienta hacia el exterior de la bicapa y el sector hidrofóbico hacia el interior de la misma.
 Fig. 4.7 - Esquema de la ubicación del colesterol en la membrana
plasmática

Las funciones del colesterol se pueden resumir de la siguiente mane

 Inmoviliza los primeros carbonos de las cadenas hidrocarbonadas. Esto hace a la membrana menos
deformable y menos fluida, es decir, la estabiliza. Sin colesterol, la membrana necesitaría de una pared celular
que le otorgue contención mecánica.
 Previene el compactamiento de las cadenas hidrocarbonadas a bajas temperaturas, ya que evita que las colas se
junten, aumenten las interacciones débiles entre las mismas y se “cristalicen” (adopten una estructura muy
compacta).

La cardiolipina es un derivado de los fosfolípidos que se encuentra en la membrana interna de la mitocondria.

El dolicol es un lípido que se halla en el REG e interviene en la glicosilación de las proteínas.

B. Proteínas (Fig.4.8)

Mientras que los lípidos ejercen principalmente una función estructural, las proteínas no sólo desempeñan un rol
estructural sino que además son las responsables de las funciones específicas de las membranas biológicas. Estas según
su función pueden agruparse en: enzimáticas, de transporte, receptoras y de reconocimiento. Diferentes
membranas tienen distinta proporción y composición de proteínas, de acuerdo a sus funciones. En otras palabras, son
justamente las proteínas las que le otorgan distintas funciones a las membranas. Estas en su mayoría son proteínas
globulares (estructura terciaria o cuaternaria).

Según su ubicación en la membrana se clasifican en:

-Proteínas intrínsecas, integrales o transmembrana: Pueden atravesar total o parcialmente la bicapa, asomando a una o
ambas superficies de la misma. Únicamente pueden ser extraídas de la membrana por medio de detergentes que rompen
la bicapa. Tienen un sector hidrofóbico, que es el que esta insertado en la membrana y una o dos regiones hidrofílicas,
expuestas a los medios intra y extracelulares (ambos acuosos). De lo anterior se deduce que estas proteínas son
moléculas anfipáticas. La porción que atraviesa la membrana suele presentar una estructura de alfa hélice con una
elevada proporción de aminoácidos hidrofóbicos que interaccionan con las colas hidrocarbonadas de la matriz de la
membrana. El sector proteico (también llamado dominio) expuesto a los medios acuosos suele tener estructura globular e
interacciona con las cabezas polares de los fosfolípidos y con otras moléculas a través de uniones iónicas y puente de
hidrógeno.

Dentro de las proteínas integrales encontramos:

 Proteínas monopaso: La proteína “atraviesa” una sola vez la membrana.

 Proteínas multipaso: La cadena polipeptídica atraviesa dos o más veces la bicapa lipídica. Por lo tanto, esta posee
varias regiones hidrofóbicas insertadas en la matriz de la membrana alternadas con sectores hidrofílicos que se
exponen hacia los medios acuosos.
 Fig. 4.8 -Asociación de proteínas de membrana con la bicapa lipídica: Transmembrana,
atraviesan la membrana como -helice o como láminas plegadas cerradas. Periféricas
unidas a proteínas transmembrana por interacciones no covalentes débiles y
Periféricas unidas a lípidos mediante uniones covalentes.

Algunas
proteínas multip aso atraviesan muchas
veces la membrana y forman
un cilindro hueco con un
interior hidrofíli co por el que pueden
pasar moléculas pequeñas solubles en
agua. Este es el principio de las
proteínas canal que se analizaran mas
adelante.

Las proteínas integrales pueden difundir lateralmente y rotar sobre su propio eje, pero no pueden realizar movimientos
a través del plano de la membrana, o más sencillamente movimiento flip-flop (ver más adelante). Las proteínas integrales
suelen desplazarse acompañadas de los lípidos que las rodean ya que estos le ayudan a mantener su conformación.

Sin embargo, algunas proteínas integrales están ancladas a componentes del citoesqueleto y no pueden trasladarse. De
esta manera intervienen en la morfología de la célula, por ejemplo alargada (o ahusada), cúbica, cilíndrica, etc.

-Proteínas extrínsecas o periféricas: Se encuentran sobre la cara externa o también interna de la membrana y pueden
estar ligadas tanto a las proteínas integrales como a los fosfolípidos por uniones débiles. Se pueden extraer fácilmente
con tratamientos no drásticos. Cuando estas se ubican del lado citoplasmático de la membrana suelen interactuar con
el citoesqueleto.

C. Hidratos de carbono

Las membranas celulares contienen entre un 2-10% de glúcidos. Estos se asocian covalentemente a los lípidos
(glicolípidos) y a las proteínas (glicoproteínas).

Los glicolípidos (o glucolipidos) presentes en las membranas son los gangliósidos y cerebrósidos. Los gangliósidos se
forman por la unión de un oligosacárido con la ceramida. La estructura de los cerebrósidos es similar, sólo que el hidrato
de carbono no es un oligosacárido sino una galactosa o una glucosa. (ver capítulo de lípidos)

Los hidratos de carbono de los glucolípidos y las glucoproteínas, en su mayoría oligosacáridos, suelen ubicarse en la
cara no citosólica de la membrana plasmática formando una estructura llamada glicocálix (Fig. 4.9 y 4.10), cuyas
funciones se pueden resumir de la siguiente manera:

· Proteger a la superficie de la célula de agresiones mecánicas o físicas. Como ejemplo podemos citar a las células
situadas en la luz del intestino delgado que presentan un glicocálix muy pronunciado.

· Poseer muchas cargas negativas, que atraen cationes y agua del medido extracelular.

· Intervenir en el reconocimiento y adhesión celular. Actúan como una “huella dactilar” característica de cada célula,
que permite distinguir lo propio de lo ajeno.

· Actuar como receptores de moléculas que provienen del medio extracelular y que traen determinada información
para la célula, por ejemplo, receptores de hormonas y neurotransmisores.
 Fig. 4.9 - Microfotografía electrónica de un glicocalix de
epitelio intestinal (izquierda).

Fig.4.10 Esquema del glicocalix de una célula eucariota

Las diferencias entre los grupos sanguíneos se hallan determinadas por ciertos oligosacáridos muy cortos, presentes en
las membranas plasmáticas de los glóbulos rojos o eritrocitos. Estos oligosacáridos sólo difieren en sus monómeros
terminales y están ligados a una proteína transmembranosa o a una ceramida de la membrana plasmática. Por ejemplo, los
eritrocitos pertenecientes al grupo sanguíneo A, presentan como monosacárido terminal una N-acetilgalactosamina y los
del grupo B una galactosa. Cuando ambos monosacáridos terminales están ausentes estamos en presencia del grupo 0
(Fig.4.11).
 Fig. 4.11 - Grupos sanguíneos

2. FLUIDEZ DE LA MEMBRANA

Como ya se mencionó, las membranas son estructuras dinámicas donde los componentes pueden desplazarse en todas las
direcciones sobre el plano de la bicapa. De ahí que el modelo reciba el nombre de mosaico fluido.

Fig. 4.12 - Movimientos de los fosfolípidos en una bicapa liplídica

2.1. MOVILIDAD DE LOS COMPONENTES DE LAS MEMBRANAS

Existen tres tipos de movimientos posibles en las membranas:

 rotación (sobre su propio eje)

 traslación (o difusión lateral) sobre el plano de la membrana.
 flip-flop

El movimiento de flip-flop es el intercambio de fosfolípidos de una monocapa (o hemimembrana) a la otra; esta

sumamente restringido, debido a la dificultad que posee la cabeza polar para atravesar el medio hidrofóbico de la matriz
de la membrana. De allí que no sea un movimiento que ocurra de manera espontánea sino que está mediado por enzimas
denominadas flipasas.

Tanto los movimientos de difusión lateral como el de rotación se llevan a cabo sobre la misma hemimembrana de
la bicapa lipídica.

2.2. FACTORES QUE AUMENTAN LA FLUIDEZ DE LAS MEMBRANAS

-Ácidos grasos insaturados

-Baja concentración de colesterol

-Altas temperaturas

-Colas hidrocarbonadas cortas (dificultan el empaquetamiento)

Factores que favorecen la viscosidad Factores que favorecen la fluidez

 Alto grado de saturación y mayor longitud de  Alto de grado de insaturación y menor
las colas hidrocarbonadas. longitud de las colas hidrocarbonadas.

 Menor temperatura del medio  Mayor temperatura del medio

Fig. 4.13 - Esquema de los fosfolípidos de membrana en estado

viscoso y fluído.

2.3. EFECTO DE LA TEMPERATURA SOBRE LA FLUIDEZ

El ascenso de la temperatura aumenta la energía cinética entre las moléculas y, por lo tanto, el movimiento de las
colas hidrocarbonadas. Esto lleva a una disminución de las interacciones atractivas entre las mismos y a un aumento de
los movimientos de rotación y de difusión lateral. Por el contrario, una disminución de la temperatura vuelve más rígida a
la membrana ya “empaqueta” las colas hidrofóbicas de los fosfolípidos e impide sus movimientos. Si la temperatura
desciende significativamente, la membrana puede llegar a “cristalizarse”, con la pérdida consiguiente de muchas
funciones vitales de la membrana.

Los organismos que habitan regiones donde hay grandes amplitudes térmicas estacionales varían la composición de
los fosfolípidos de sus membranas en forma periódica, asegurando así una fluidez más o menos constante durante todo
el año. Por otra parte, organismos que habitan ambientes extremos poseen composiciones fosfolipídicas muy particulares
en sus membranas, por ejemplo, los que viven a temperaturas inferiores a los 0ºC tienen membranas muy ricas en
lípidos poliinsaturados.

2.4.. DETERMINACIÓN DE LA FLUIDEZ DE LA BICAPA LIPÍDICA

La fluidez de la membrana se pudo determinar experimentalmente tratando células con anticuerpos fluorescentes que
eran reconocidos y se unían a las proteínas (receptores) presentes en la membrana plasmática. Gracias a esta técnica,
se pudo observar, a través del microscopio, el desplazamiento de los receptores sobre la superficie de la membrana y su
agrupamiento en un polo de la célula, donde posteriormente ingresaban por endocitosis ( internalización a la célula, ver
más adelante).

3. ASIMETRIA DE MEMBRANA

En ambas caras de la bicapa (también denominadas hemimembranas o monocapas) no se encuentran los mismos tipos
de fosfolípidos. Si bien estos en su mayoría se sintetizan en la cara citosolica del retículo endoplasmático liso, luego,
por medio de movimientos del tipo flip-flop (únicamente permitidos en el REL, gracias a la presencia de flipasas), se van
ubicando del lado de la bicapa que les corresponda. Por ej., la fosfatidilcolina y la esfingomielina predominan en la cara
no citosolica de la membrana (Fig. 4.7).

La asimetría estructural de las membranas suele manifestarse a través de una asimetría funcional . Esto significa que las
funciones presentes en la cara citosolica no son las mismas que aparecen en la cara no citosólica. Por ejemplo, en el caso
de la membrana plasmática, las moléculas que intervienen en el reconocimiento celular se ubican casi exclusivamente en
la cara expuesta hacia el medio extracelular, pues no tendría mucho sentido que dichas moléculas estuviesen expuestas
hacia el citoplasma.

4. FUSIÓN DE MEMBRANAS

Las membranas tienen una elevada capacidad para fusionarse entre sí. Por ejemplo, cuando una vesícula se aproxima a la
membrana plasmática, a una cisterna o, inclusive, a otra vesícula, al entrar en contacto ambas superficies, las dos
membranas se fusionan, constituyendo a partir de ese momento una sola membrana. Este fenómeno explica el transito
de sustancias desde un compartimiento celular a otro, y desde las endomembranas a la membrana plasmática. (ver más
adelante endo y exocitosis). Este es el principio en el que se basa la administración de fármacos vehiculizadas dentro
de liposomas, que son vesículas fosfolipídicas artificiales que contienen alguna droga de interés terapéutico. Cuando
el liposoma se aproxima a la célula blanco (o target), la membrana del liposoma se fusiona con la membrana plasmática
liberando su contenido directamente en el citoplasma de la célula. Este fenómeno permite que el contenido
del liposoma sólo sea captado por ciertos tipos celulares y no por otros. Técnicas basadas en esta propiedad de las
membranas se utilizan, por ejemplo, para combatir células tumorales.

Fig. 4.14 -Fusión de dos membranas

5. PERMEABILIDAD DE LAS MEMBRANAS CELULARES

Como ya se ha mencionado la membrana plasmática es una barrera con permeabilidad selectiva que regula el intercambio
de sustancias entre el citoplasma y el medio extracelular. Sus propiedades aseguran que las sustancias esenciales, como
la glucosa, los aminoácidos y los lípidos entren a la célula fácilmente, que los intermediarios metabólicos permanezcan en
la célula y que los productos de desecho, como la urea, abandonen la misma. Todo esto permite a la célula mantener
el medio interno relativamente constante. La membrana, debido a sus características hidrofóbicas, es impermeable a
la mayor parte de las moléculas hidrosolubles, como la glucosa, los aminoácidos y los iones en general. En cambio, las
moléculas hidrofóbicas, siempre y cuando su tamaño no sea demasiado grande, pueden atravesarla fácilmente.

Podemos observar en la figura 4.15, que únicamente atravesarán la membrana las moléculas no polares y pequeñas como
el O2, CO2, N2 e incluso el CO (tóxico), compuestos liposolubles como los ácidos grasos y esteroides y, además, a pesar de
ser moléculas polares, el glicerol, la urea y el agua. El resto de las moléculas se transfiere de un lado a otro de la
membrana gracias a proteínas integrales que actúan como transportadores; sin estos transportadores dichas moléculas
no pueden difundir a través de las membranas.
 Fig. 4.15 - Permeabilidad de la membrana a los diferentes solutos

6. MECANISMOS DE TRANSPORTE TRANSMEMBRANA

Fig. 4.16 - Distintos mecanismos y estructuras utilizados por los

solutos para atravesar las mem-branas de una célula.

Antes de continuar con los mecanismos de transporte es preciso hacer una breve aclaración acerca del fenómeno
de difusión. Si colocamos un soluto en un solvente, las moléculas de soluto, debido a la energía cinética de las moléculas
presentes en la solución, difundirán desde la zona donde se encuentran en mayor concentración hacia la zona donde se
hallan en menor concentración. Al cabo de un tiempo toda la solución presentará la misma concentración de soluto. Por
ejemplo, si agregamos una gota de tinta a un vaso con agua, la tinta difundirá a través del líquido y al cabo de un tiempo
todo el vaso presentara una tinción pareja.

Fig. 4.17 - Difusión de una sustancia disuelta en un

solvente.

Para lograr esto no se requiere aporte externo de energía, sino que es suficiente con la energía cinética propia de las
moléculas. Si tenemos en cuenta que la temperatura de un medio es, de alguna manera, un índice de la energía cinética de
las moléculas presentes en el mismo, es fácil deducir que a mayor temperatura, más importante será el fenómeno de
difusión.

Podemos definir entonces a la difusión como el movimiento de moléculas desde una zona de mayor concentración hacia
una de menor concentración. A la diferencia de concentración que existe entre una zona y otra se la denomina gradiente.
a) DIFUSION SIMPLE

Cuando la difusión se realiza entre compartimientos separados por una membrana permeable a ese soluto, se
denomina difusión simple y, como ya se dijo, no requiere de otra energía adicional que no sea el movimiento de las
moléculas, desplazándose éstas a favor de su gradiente de concentración. En otras palabras, la difusión simple no
requiere gasto de ATP, ya que es un fenómeno espontáneo. Las moléculas que se movilizan por difusión simple a través
de la membrana son las no polares y pequeñas, las liposolubles y las polares pequeñas, pero sin carga eléctrica neta, como
el H2O.

En el caso particular del H2O, la difusión simple se denomina ósmosis. El pasaje de agua a través de la membrana u
ósmosis se lleva a cabo siempre en forma espontánea y muy rápidamente. El H 2O difundirá desde el compartimiento de
menor concentración de solutos o medio hipotónico, al de mayor concentración de solutos o medio hipertónico, de modo
tal de igualar las concentraciones en ambos compartimientos. Al cabo de un tiempo, el resultado serán dos
medios isotónicos, o sea, la concentración a ambos lados de la membrana será la misma.

Fig. 4.18 -Efecto del proceso osmótico sobre una célula viva.

Si colocamos una célula, por ejemplo un glóbulo rojo, en una solución hipertónica (agua salada, por ejemplo) el H 2O
tenderá a salir por ósmosis hacia el medio extracelular, encogiendo o crenando al glóbulo rojo. En cambio, si el medio
extracelular es hipotónico (agua destilada, por ejemplo) el H 2O penetrará en la célula, hinchándola y, finalmente,
ocasionando su ruptura o lisis. Cabe hacer aquí una breve aclaración: un medio no es por sí mismo ni hipertónico ni
hipotónico; siempre que se use esta terminología lo que se esta haciendo es comparar un medio con respecto a otro. Por
ejemplo, A puede ser hipertónico con respecto a B y, al mismo tiempo, A también puede ser hipotónico con respecto a C.
Es decir, A tiene una concentración de solutos intermedia. Por otra parte, se dice que dos medios son isotónicos cuando
su concentración de solutos es la misma.

Más adelante veremos (en Acuaporinas) que además de la ósmosis existen otros tipos de transporte de H 2O a través de
las membranas biológicas.

Fig. 4.19 - Osmosis. Efecto de los cambios de concentración de soluto en (a) células
animales y (b) células vegetales

b) DIFUSIÓN FACILITADA
Aquellas moléculas que no pueden atravesar fácilmente las membranas por difusión simple debido a su polaridad y/o a su
tamaño (por ej. glucosa, aminoácidos, iones, etc.), podrán hacerlo si están presentes sus respectivos transportadores. Dichos
transportadores son proteínas integrales de membrana y se los puede agrupar del siguiente modo:

· Proteínas canal o canales iónicos

· Proteínas “carrier” o permeasas

La difusión facilitada ocurre siempre a favor del gradiente, por lo tanto no requiere gasto de energía adicional. Sin
embargo, puede tratarse de un gradiente de concentración (las moléculas se dirigen del compartimiento de mayor
concentración hacia el de menor concentración) o de un gradiente de potencial eléctrico (el soluto con carga eléctrica,
independientemente de su signo, se desplazará de una zona donde la carga sea mayor hacia otra donde la carga sea menor).

Estas proteínas transportadoras presentes en las membranas presentan características muy similares a las enzimas:

· Saturabilidad (se saturan al alcanzar la máxima velocidad de transporte)

· Especificidad (reconocen a sus ligandos a través de un sitio específico)

· Pueden ser inhibidas por determinadas sustancias.

Cuando las proteínas transportadoras se saturan de solutos a transportar, alcanzan su máxima velocidad de transporte y por lo
tanto las moléculas a ser transportadas deberán esperar a que se desocupen los sitios de unión.

b1) Canales iónicos: Los canales iónicos son “poros” o “túneles” formados por una o varias proteínas transmembrana. En
general, son de tipo multipaso, con un interior hidrofilico. Existen canales iónicos en todas las células, tanto en la membrana
plasmática como en las membranas de los organoides. Son altamente selectivos, porque cada canal sólo puede transportar un
tipo de ion (K+, Na+, etc.). Los iones se mueven a través del canal a una velocidad muy elevada (10 8 iones por segundo).

El transporte de un ion es impulsado por el gradiente electroquímico. O sea que un ion puede difundir de un lado a otro de la
membrana, gracias a la diferencia de concentración como a la diferencia de carga eléctrica a ambos lados de la membrana.

La mayoría de los canales no permanecen abiertos permanentemente, sino que se abren en respuesta a estímulos. Estos
estímulos pueden ser tanto la presencia de una sustancia inductora como una modificación de la carga eléctrica de la
membrana (modificación del potencial eléctrico). Los canales que se abren o cierran en presencia de sustancias inductoras
(ligandos) son llamados dependientes de ligando y los otros, dependientes de voltaje.

Fig. 4.20 - Diferentes tipos de canales.

b2) Carriers o permeasas: Al igual que los canales iónicos, las permeasas están formadas por
proteínas transmembrana multipaso. Suelen transportar una gran variedad de iones como el HCO3 -
y otras moléculas
polares sin carga como la glucosa.
 Este tipo de proteínas fijan una única molécula de sustrato (o unas pocas) a la vez, y a continuación sufren un
cambio conformacional reversible que les permite transportar el soluto de un lado al otro de la membrana
(translocación). Aquí vale hacer otra aclaración: para entender la difusión facilitada no hay que pensar si una sustancia
“entra o sale” de la célula, lo importante es considerar que se está movilizando algo a favor del gradiente (químico o
eléctrico) gracias a la acción de proteínas transportadoras . Por esta razón es que no se requiere de energía adicional, no
se requiere gasto de ATP, ya que es el propio gradiente el que impulsa el pasaje a través de los transportadores.

Este tipo de transporte es siempre sin gasto de energía y a favor del gradiente electroquímico. La velocidad de
transporte es muy inferior al de los canales iónicos.

Fig. 4.21 -Transporte facilitado por medio de una

permeasa.

Existen tres tipos de permeasas:

-MONOTRANSPORTADORA O UNIPORTE: Transfieren UN solo tipo de soluto de un lado al otro de la membrana. ( ej.:
transporte de glucosa en la mayoría de las células animales, desde el medio extracelular, la sangre, donde la
concentración es mayor, hacia el interior de las mismas donde es menor)

-COTRANSPORTADORA O SIMPORTE: Transfieren DOS tipos de solutos, ambos en el mismo sentido.

-CONTRATRANSPORTADORA O ANTIPORTE: Transfiere DOS tipos distintos de solutos en sentidos contrarios. Es

decir, uno ingresa al citoplasma si, y solo si, simultáneamente el otro sale.

Fig. 4.22 - Tres tipos de transporte mediados por proteínas

transportadoras

Los uniportes transportan las moléculas a favor de su gradiente de concentración. Como ejemplo podemos citar la
glucosa y distintos aminoácidos. En cambio, los otros dos tipos de transporte acoplan el movimiento de un tipo de ion o
molécula a favor de su gradiente de concentración con el de otro tipo de molécula o ion en contra de su gradiente de
concentración. O sea lo que hacen es acoplar un transporte energéticamente favorable con otro que no lo es. Un ejemplo
de COTRANSPORTE sería el transporte de Na+ y glucosa en la membrana plasmática de las células intestinales (ver más
adelante) y uno de CONTRATRANSPORTE, el transporte de Cl- y HCO3- en la membrana de los glóbulos rojos.
Tanto el cotransporte como el contratransporte, son también llamados transportes acoplados, ya que no se pueden
llevar a cabo si no están presentes ambos tipos de solutos.

Casos particulares de transporte pasivo: Ionóforos y Aquaporinas

IONOFOROS

Fig. 4.23 - Mecanismo de pasaje de iones a través de ionóforos

transportadores móviles

Estas sustancias tienen la propiedad de poder incorporarse a las membranas y aumentar la permeabilidad a ciertos
iones. En general son fabricados por bacterias como mecanismos defensivos. Existen dos tipos distintos:

-Transportadores móviles: Se unen reversiblemente a un ion que se encuentra en el medio con mayor concentración,
giran en la bicapa y lo liberan en el otro lado de la membrana. Ejemplo: Valinomicina (Fig.4.23).

- Formadores de canales: Son proteínas con estructura helicoidal, en cuyo interior de la hélice hay una
región hidrofílica que permite el paso de iones monovalentes (con una sola carga eléctrica). Ejemplo: Gramidicina (Fig.
4.24).

Fig. 4.24 - Esquema de la estructura del canal de

gramicidina

ACUAPORINAS

Son canales especiales con estructura helicoidal que permiten el paso selectivo de H 20. No son canales iónicos. En
ciertas clases de células, por ejemplo en algunas células renales, se requiere un mayor transporte de H 20 que el logrado
exclusivamente con la difusión simple (osmosis). La estructura de las acuaporinas es semejante a la de
los ionoforos formadores de canales.

c) TRANSPORTE ACTIVO

Las células no pueden depender únicamente del transporte pasivo dado que deben importar, por un lado, moléculas que
están en menor concentración en medio extracelular que en el citoplasma y, por otro, necesitan mantener constante la
composición iónica intracelular. Ambas funciones se llevan a cabo por medio del transporte activo.

Es un transporte que se realiza en contra del gradiente, ya sea este de concentración o eléctrico y, en consecuencia, se
requerirá gasto de energía en forma de ATP.

El transporte activo se realiza por medio bombas y también presenta formas

de monotransporte, cotransporte y contratransporte.
Posee las mismas características de especificidad y saturabilidad que la difusión facilitada, aunque difiere de ésta por
realizarse contra el gradiente electroquímico. El transporte activo esta desfavorecido termodinámicamente
(es endergónico) y se da solamente cuando está acoplado (directa o indirectamente) a un proceso exergónico como,
por ej., la conversión de ATP a ADP + Pi. Debido a esto, las bombas se suelen denominar ATPasas de transporte.

Existen muchos tipos de ATPasas distintas. Aquí vamos a hablar de las más importantes, que son la Bomba
de Na+-K+ (bomba sodio –potasio)y la de K+/H+.

Fig. 4.25 - Esquema de la ATPasa.

Las sustancias que se movilizan por transporte activo son en muchos casos las mismas que lo hacen a través de difusión
facilitada, la diferencia fundamental es que en el primer caso lo hacen en contra del gradiente mientras que en el
segundo lo hacen a favor.

Bomba Na+/K+

Está presente en todas las membranas plasmáticas de las células animales. También se la conoce como Na+-K+ ATPasa.
Es un complejo proteico formado por cuatro subunidades, todas ellas proteínas integrales de la membrana plasmática.

Su función es expulsar Na+ al espacio extracelular e introducir K+ al citosol. Ambos son movilizados en contra de su
gradiente electroquímico, estableciendo así diferencias de concentración y carga entre el espacio extra e intracelular
para ambos iones. Debido a que se esta transportando simultáneamente dos solutos distintos en sentidos opuestos,
estamos en presencia de un sistema de contratransporte. Es importante recordar que, si bien el Na+ sale y el K+ ingresa
a la célula, ambos lo hacen en contra de su gradiente y, en consecuencia, hace falta hidrolizar ATP para movilizarlos.

La Bomba Na+-K+ tiene simultáneamente funciones de proteína transportadora y de ATPasa (hidroliza ATP para obtener
energía). Por lo menos un tercio de la energía que consume una célula animal se destina para impulsar esta bomba. En las
células nerviosas, donde la actividad eléctrica es sumamente importante, este valor asciende al 60%. Cada ATPasa puede
hidrolizar hasta 100 moléculas de ATP

Mecanismo de acción de la Bomba Na+/K

1) Tres iones de Na+ se unen al dominio citoplasmático de la ATPasa, debido a la gran afinidad que existe entre ambos.

2) Luego se hidroliza el ATP y se fosforila la proteína. Esto lleva a un cambio conformacional en la misma.

3) Esto permite la translocación de los iones Na+ hacia el espacio extracelular.

4) A continuación, dos iones K+ del medio extracelular, donde su concentración es menor, se unen a un sitio receptor
de K+ accesible ahora desde el exterior de la célula. La unión del K+ con la proteína induce la liberación del fosfato.

5) La desfosforilación de la bomba, restituye la conformación original.

6) Esto permite la translocación de los iones K+ hacia el citoplasma. Se puede comenzar nuevamente el proceso. Por
cada molécula de ATP que se hidroliza se posibilita el transporte de 3 iones Na+ hacia espacio extracelular y de 2
iones K+ al citoplasma.
Las transferencias de iones se hallan acopladas, y por lo tanto no pueden realizarse una independientemente de la otra.
 Fig. 4.26 Mecanismo de acción de la ATPasa Na+/K+

Las funciones de la bomba de Na+/K+ son:

a) Mantener diferencias en las concentraciones de Na+ y K+ intra y extracelulares.

b) Generar un potencial eléctrico de membrana, que es una diferencia de voltaje, o sea de carga, entre ambos lados de
la membrana. Al bombear tres iones en una dirección y sólo dos en otra, se genera un potencial eléctrico negativo del
lado interno de la membrana con respecto al externo. El lado citosólico es normalmente más negativo que el espacio
extracelular.

c) Intervenir en la regulación del volumen celular.

d) Generar diferencias de concentración de Na+ o K+ para que otros transportadores pasivos utilicen indirectamente la
energía potencial acumulada en este gradiente. Como ejemplo podemos citar al:

-COTRANSPORTE Na+/GLUCOSA (ya citado en difusión facilitada). Esta situación se da en las membranas apicales de
las células del intestino delgado o en membranas de células renales, donde deberá absorberse glucosa desde la luz del
intestino o de los túbulos renales, aunque las concentraciones extracelulares sean bajas. Gracias a la acción de la
bomba Na+-K+ se expulsan iones Na+ a través de la membrana basal de la célula. De este modo, la concentración
de Na+ intracelular se mantenida baja. En la región apical de la membrana se encuentra
una permeasa pasiva cotransportadora de Na y glucosa. El Na ingresa de este modo a favor de su gradiente
+ +

electroquímico al interior de la célula y arrastra a la glucosa con él, que ingresa de este modo en contra de su gradiente
de concentración, gracias al sistema de cotransporte. Este tipo de transporte también se denomina transporte acoplado
a gradientes iónicos o TRANSPORTE ACTIVO SECUNDARIO (ya que indirectamente está ligado a una bomba).

Posteriormente, la glucosa atravesará la célula y saldrá por difusión facilitada, a favor de su gradiente de
concentración, hacia el torrente sanguíneo.
 Fig. 4.27 Mecanismo de co-transporte
Na+/glucosa en epitelio intestinal

Hay otro tipo de ATPasa, presente en las membranas internas mitocondriales y de cloroplastos, que juega un papel muy
importante en la obtención de la energía. Actúa como una ATPsintetasa (sintetiza ATP), gracias al gradiente de H+ que
se genera a ambos lados de las membranas internas de cloroplastos y mitocondrias. Dicho proceso se verá con
detenimiento en los capítulos de Respiración y fotosíntesis.

Existen otro tipo de bombas, como las de las membranas del Retículo endoplasmático liso de las células musculares, que
se encargan de bombear iones Ca++ hacia el interior del REL y mantener baja la concentración citosólica Ca++ , o las de los
lisosomas, que bombean H+ hacia el interior de los mismos, disminuyendo así el pH intralisosomal.

d) TRANSPORTE EN MASA (Fig. 4.28)

Hasta aquí analizamos el modo en el que los iones y las pequeñas moléculas atraviesan la membrana celular. Pero como
ingresan o abandonan la célula partículas de mayor tamaño. Esto se realiza por medio del TRANSPORTE EN MASA. Este
tipo de transporte involucra siempre gasto de ATP, ya que la célula realiza un movimiento general de su estructura (en
particular de la membrana plasmática y del citoesqueleto -ver funciones del citoesqueleto-).

El mecanismo por medio del cual los materiales entran a la célula se denomina endocitosis y aquel por el cual la
abandonan, exocitosis.

d1) ENDOCITOCIS
En este proceso una extensión de la membrana rodea progresivamente al material que será internalizado, luego se
produce una gemación o invaginación de la membrana, y finalmente ésta se separa de la membrana, formando
una vesícula endocítica. Posteriormente, el material incorporado es digerido por los lisosomas.

Las fibras de actina y miosina del citoesqueleto intervienen en este proceso.

Se distinguen 3 tipos de endocitosis:

-Fagocitosis -Pinocitosis -Endocitosis mediada por receptor

A) Fagocitosis: Implica la ingestión de partículas de gran tamaño, como microorganismos, restos celulares, inclusive de
otras células, por medio de vesículas llamadas fagosomas. Estos fagosomas suelen presentar un gran tamaño.

La fagocitosis sólo se da en determinados tipos de células. En algunos organismos unicelulares (protistas) constituye un
modo de alimentación: engloban grandes partículas, por ej. bacterias, por medio de prolongaciones de la membrana
plasmática llamados pseudópodos y las internalizan, formándose así un fagosoma o vesícula fagocítica. Posteriormente
será degradada por las enzimas lisosomales. Para ampliar consultar en la bibliografía: Lisosomas.
En los animales sólo se da en algunas células altamente especializadas, llamadas células fagocíticas (macrófagos de los
tejidos y glóbulos blancos sanguíneos denominados neutrófilos). En estos casos la función no es de índole nutricional, sino
defensiva. Las células fagocíticas defienden nuestro organismo contra infecciones, ingiriendo microorganismos
patógenos. Otra función sería eliminar células muertas o dañadas, o restos celulares (por ejemplo glóbulos rojos no
funcionales). El proceso fagocítico se desencadena por la unión del material a endocitar con ciertos receptores de la
membrana plasmática que reconocen al mismo.

B) Pinocitosis: Es la incorporación de fluído y de partículas disueltas en él por medio de pequeñas vesículas. Es un

proceso inespecífico y la velocidad de ingestión es muy elevada. Por ejemplo, un macrófago puede ingerir por hora un
cuarto de su volumen celular. El tamaño de estas vesículas endocíticas en mucho menor que el de los fagosomas.

C) Endocitosis mediada por receptor: En muchos aspectos es similar a la anterior, salvo que en este proceso, la
endocitosis es mucho más selectiva. Determinadas moléculas (ligandos) que la célula desea incorporar son reconocidos
por receptores específicos, ubicados en la membrana plasmática. Los ligandos se unen a estos receptores y
estos complejos ligando-receptor confluyen, gracias a la fluidez de la membrana, a determinadas zonas de la misma,
donde serán endocitados. La invaginación de la membrana se denomina en este caso fosita revestida. Esto se debe a que
las vesículas presentan en su cara citosolica un revestimiento de proteínas características, en este caso de clatrina. La
función de la misma, sería entre otras, permitir que se produzca la invaginación.

A continuación se forma la vesícula recubierta o revestida que se fusionará con un conjunto de vesículas
llamadas endosomas, donde se clasifican las moléculas endocitadas y se las separa de los receptores.

Este proceso puede incrementar mil veces la eficiencia de internalización de un determinado ligando, sin tener que
incrementar la absorción de fluido extracelular.

Un ejemplo importante de este proceso es la captación de colesterol por las células animales. El colesterol, debido a su
carácter hidrofóbico, es transportado por la sangre unido a proteínas, formando complejos llamados lipoproteínas de
baja densidad (LDL). Estas LDL se unen a receptores ubicados en la superficie celular y los complejos LDL-
receptor son internalizados en vesículas revestidas y luego transferidas a los endosomas, previa liberación de la
cubierta de clatrina. En el interior de los endosomas, el LDL se disocia del receptor y este es reciclado nuevamente a la
membrana plasmática para captar nuevamente LDL.

Fig.4.28- Tipos de transporte en masa

d2) EXOCITOSIS

Es el proceso inverso a la endocitosis. En este caso, material contenido en vesículas intracelulares también
llamadas vesículas de secreción es vertido al medio extracelular.

La secreción de sustancias comienza generalmente con estímulos provenientes del medio extracelular, que inducen a las
vesículas de secreción, ubicadas en las cercanías de la membrana, a fusionarse con la misma y volcar su contenido al
medio extracelular. Así por ejemplo se liberan las proteínas de exportación (ver funciones del Aparato de Golgi) y los
neurotransmisores (para ampliar esto ultimo consultar Sinapsis nerviosa en la bibliografía)

En este caso, la membrana de la vesícula pasa a “formar parte” de la membrana plasmática. Es decir, hay ganancia de
membrana, mientras que en la endocitosis hay pérdida de membrana.

AUTOEVALUACIÓN

Responda las siguientes preguntas de opción múltiple:

1. En que se diferencian las membranas de una célula eucariótica:

a- los fosfolípidos se encuentran solo en algunos tipos de membrana.

b- solo algunas membranas tienen permeabilidad selectiva.

c- solo algunas membranas tienen lípidos anfipáticos.

d- algunas proteínas son propias de cada membrana.

e- todas son correctas.

2. ¿Cuál de los siguientes procesos incluye todos los demás de la lista?

a- ósmosis.

b- difusión de un soluto a través de la membrana.

c- difusión facilitada.

d- transporte pasivo.

e- transporte de un ion a favor de gradiente.

3. Si una ameba es isotónica respecto a una solución que es hipertónica para un cangrejo, ¿en cuál de estos
organismos ocurrirá un ingreso netos de agua al sumergir ambos en la solución?

a- en la ameba. b- en el cangrejo. c- en ninguno de los dos.

4.¿Cuál de los siguientes factores podrían influir en la fluidez de la membrana?

a- una proporción grande de fosfolípidos insaturados. b- una baja temperatura.

c- una proporción grande de fosfolípidos saturados. d- un potencial alto de membrana.

e- ninguna es correcta.

5. Las células incorporan lipoproteínas utilizando:

a- fagocitosis b- endocitosis mediada por receptor. c- exocitosis.

d- transporte activo. e- endocitosis a granel.

 SISTEMA DE ENDOMEMBRANAS

INTRODUCCIÓN

Una de las características distintivas de las células eucariotas respecto de las procariotas es su alto grado
de compartimentalización. La presencia de un núcleo bien diferenciado, con una envoltura nuclear que confina
el material genético al interior del núcleo, es sólo un aspecto de la separación espacial de funciones dentro de
la organización celular. El citoplasma, a su vez, se encuentra recorrido en todas direcciones por un sistema de
sacos y túbulos, cuyas paredes de membrana ofician de límite entre la matriz citoplasmática y la luz o cavidad
del sistema. Este conjunto de estructuras membranosas, incluida la envoltura nuclear, se conoce como
sistema de endomembranas (SE) o sistema vacuolar citoplasmático (SVC).

COMPONENTES DEL SISTEMA DE ENDOMEMBRANAS

Dentro del sistema de endomembranas se distinguen los siguientes elementos:

a) Retículo endoplasmático granular o rugoso (REG o RER). Es un grupo de cisternas aplanadas que se
conectan entre sí mediante túbulos. Presente en todos los tipos celulares, se halla especialmente desarrollado
en las células secretoras de proteínas. El REG ofrece una cara citosólica tachonada de ribosomas, a los que
debe su aspecto rugoso. Los ribosomas se unen a las membranas del REG por su subunidad mayor, mediante
receptores específicos, las proteínas integrales de las membranas cisternales conocidas como riboforinas.

b) Retículo endoplasmático agranular o liso (REA o REL). Su aspecto es más tubular y carece de ribosomas.
Es poco conspicuo en la mayoría de las células, pero alcanza un notable desarrollo en las células secretoras de
hormonas esteroides.

c) Aparato o complejo de Golgi. Constituido por sacos discoidales apilados, como mínimo en número de tres,
rodeados por pequeñas vesículas. Cada saco presenta una cara convexa y otra cóncava, esta última orientada
hacia la superficie celular. En las células animales se ubica típicamente entre el núcleo y el polo secretor de la
célula, en tanto en las células vegetales aparece fragmentado en varios complejos denominados dictiosomas o
golgiosomas.

d) Envoltura nuclear. Doble membrana que encierra una cavidad, la cisterna perinuclear, en directa
continuidad con la luz del REG, del cual se considera una dependencia. Al igual que éste, presenta ribosomas
sobre la cara citosólica. Durante la división celular se desorganiza y se fragmenta en cisternas que se
incorporan al REG. Al finalizar la división, la envoltura nuclear se reconstituye a partir de aquél.
FUNCIONES DEL SISTEMA DE ENDOMEMBRANAS

El sistema de endomembranas es asiento de enzimas que participan en la síntesis de diversos tipos de macromoléculas:
proteínas y glucoproteínas en el REG, lípidos en el REL y glúcidos complejos en el aparato de Golgi. A la vez, el SVC
proporciona una vía intracelular para la circulación de sus productos y una sección de “empaque” para la exportación de
algunos de ellos. Por último, maneja un sistema de señales que le permite dar a los mismos el destino final para el cual
fueron sintetizados,

ya sea en el interior de la célula o en el medio extracelular. Algo así como un “estampillado”, un sistema de códigos
postales que guía a las moléculas en la dirección correcta.

La vía de tránsito intracelular implica un transporte desde el RE hasta el aparato de Golgi; a partir de éste hay dos
caminos posibles: hacia las vesículas de secreción y desde allí a la membrana plasmática, o bien hacia los lisosomas.
 Fig. 5.2 - Vías de tránsito intracelular en el SE

El transporte vesicular

El transporte en el SVC se lleva a cabo por medio de vesículas, pequeñas bolsas limitadas por membrana que se
desprenden como brotes de un compartimento dador y viajan por el citosol hasta alcanzar el compartimento receptor;
entonces se fusionan a este último.

Hay varios aspectos que interesa destacar con respecto al transporte vesicular:

Fig. 5.3- Transporte vesicular

¿Qué transportan las vesículas? Cada vesícula tiene un continente (la membrana) y un contenido (su naturaleza
dependerá de cuál sea el compartimento dador); ambos se desplazan de un compartimento a otro. Cuando se produce la
fusión al compartimento receptor, el contenido de la vesícula se vuelca al lumen del mismo. La membrana vesicular, por
su parte, se incorpora a la membrana receptora. Si la estructura diana es la membrana plasmática, entonces el contenido
es vertido al medio.

¿Qué mueve a las vesículas? En su trayecto de una cisterna a otra, las vesículas son movidas por elementos del
citoesqueleto.

Fig. 5.4- Vesículas revestidas

¿Qué causa la brotación? Las vesículas que participan en el transporte, cualquiera sea el compartimento de origen,
son vesículas revestidas. Se entiende por tales a las vesículas que llevan una cubierta formada por subunidades proteicas
ensambladas a modo de enrejado sobre la cara externa de la membrana vesicular. Dicho revestimiento es adquirido en el
momento en que se produce la gemación o protrusión de la vesícula y es su misma causa: a medida que las subunidades se
ensamblan generan la curvatura de la membrana que da origen al brote. El revestimiento se desensambla inmediatamente
después de la brotación; este paso es necesario, pues mientras las vesículas se hallan revestidas no pueden fusionarse
con otra membrana.

¿Cómo reconocen las vesículas al compartimento receptor? Las membranas de las cisternas poseen pares de moléculas
complementarias: v-SNARE (en la vesícula de transporte) y t-SNARE (en la cisterna destino o target). La fusión de una
vesícula con una cisterna sólo se produce previo reconocimiento del par v-SNARE /t-SNARE adecuado.
 Fig. 5.5 - Reconocimiento del compartimento receptor: v-SNARE = vesicle-SNAP receptor, t-SNARE = target-SNAP
receptor

¿Cómo se mantiene constante la cantidad de membrana en cada compartimento? Las membranas

vesiculares incorporadas a un compartimento receptor forman un nuevo brote (causado por proteínas de revestimiento)
y se desprenden para regresar al compartimento de origen, como vesículas de reciclaje. El compartimento de origen,
obviamente, ha de poseer las mismas t-SNARE que la cisterna receptora. El reciclaje no sólo permite mantener
constante la cantidad de membrana de los distintos sectores del sistema, también hace posible que cada uno de ellos
conserve su identidad, recuperando las moléculas que le son propias y le otorgan sus funciones particulares.

Fig. 5.6- Reciclaje de membrana

¿Puede la membrana transportada permanecer como componente del compartimento receptor? Sí. De
hecho, éste es el mecanismo por el cual las cisternas y la membrana plasmática incorporan nuevos componentes y crecen.

¿Cómo se corresponden las caras del sistema de endomembranas con las caras de la membrana
celular? Como consecuencia del tránsito vesicular, las moléculas de membrana sintetizadas en el RE (liso y rugoso) o en
el aparato de Golgi, llegan a integrarse a la membrana celular. Sabemos, por otra parte, que la membrana plasmática es
asimétrica: los componentes lipídicos de ambas monocapas – la citosólica y la extracelular – son diferentes, los dominios
proteicos tienen una orientación definida dentro de la bicapa y los restos glucídicos de glucolípidos y glucoproteínas sólo
se orientan hacia el medio extracelular. ¿Dónde se genera esta asimetría? Se genera en los compartimientos de origen,
donde los componentes de membrana adoptan su orientación definitiva; luego, el transporte vesicular se limita a
mantener dicha orientación. De esta forma, todo aquello que tiene una posición luminal en el sistema de endomembranas,
pasa a una ubicación extracelular en la membrana celular, en tanto que los componentes de la cara citosólica del sistema
se integran a la cara citosólica de la membrana celular.

Fig. 5.7- Asimetría de las membranas. Correspondencia entre el SE y la membrana plasmática.

VESÍCULAS REVESTIDAS

Se conocen hasta el momento dos tipos de vesículas revestidas: las vesículas con revestimiento de clatrina y las
vesículas con revestimiento de coatómero.

El revestimiento de clatrina se ensambla a partir de subunidades constituidas por seis cadenas proteicas enlazadas, los
trisqueliones, que forman alrededor de la vesícula un enrejado donde alternan hexágonos y pentágonos, con el aspecto
de una cúpula geodésica. Llevan cubierta de clatrina las vesículas que brotan del aparato de Golgi hacia los lisosomas, las
vesículas de secreción regulada y las formadas por endocitosis.

El revestimiento de coatómero se forma a partir de las COP (por proteínas del coatómero). Está presente en las
vesículas que viajan del RE al aparato de Golgi, las que realizan transporte dentro de este complejo, las destinadas a la
secreción continua y en todas las vesículas recicladoras.

Tanto la cubierta de clatrina como la de coatómero se unen a membrana sólo después de que otra molécula, el ARF
(factor de ribosilación del ADP) se haya fijado a la misma. El revestimiento promueve la deformación de la membrana y
la gemación de la vesícula, en tanto que el ARF le señala dónde y cuándo hacerlo.

Si la cubierta sólo es importante para la gemación -proceso que es básicamente el mismo en cada orgánulo- ¿por qué
necesita diversos tipos de cubierta la célula? La razón más probable es que la cubierta seleccione la carga que ha de
empacarse en cada vesícula. En algunos casos, las proteínas transportadas se localizan en la membrana, directamente
unidas a la cubierta. En otros, la carga se fija a la cubierta a través de un intermediario, un receptor, localizado en el
espesor de la membrana. El uso de cubiertas distintas posibilitaría el flete de cargas diferentes desde un mismo punto
de origen y desde diferentes departamentos.
 Fig. 5.8- Participación de la clatrina y las COP en la selección del cargamento

FUNCIONES DEL RETÍCULO ENDOPLASMÁTICO LISO

a) Síntesis de lípidos. En las membranas del REL se sitúan las enzimas responsables de la síntesis de la mayor
parte de los lípidos celulares: triglicéridos, fosfoglicéridos, ceramidas y esteroides. Los precursores para la síntesis
provienen del citosol, hacia el cual se orientan los sitios activos de las respectivas enzimas. Por lo tanto, los lípidos
recién sintetizados quedan incorporados en la monocapa citosólica del REL. Sin embargo, gracias a la participación de las
flipasas del retículo, se logra el movimiento hacia la monocapa luminal de los lípidos correspondientes, asegurándose de
esta forma la asimetría entre ambas capas, que será mantenida de aquí en más.

b) El REL en las células musculares. El REL actúa como reservorio de calcio, el cual –frente a la llegada de un
estímulo - es liberado al citosol, donde dispara una respuesta específica. Esta función es particularmente importante en
las células musculares. Allí el REL, que toma el nombre de retículo sarcoplásmico, adopta una conformación muy
especializada. El calcio es liberado frente al impulso nervioso desencadenado por la acetil colina en la unión
neuromuscular, y una vez en el citosol participa en la contracción muscular. Cuando retorna al REL, por la acción de una
bomba de calcio, se produce la miorrelajación.

c) El REL en las células hepáticas. Está involucrado en dos funciones: detoxificación y glucogenólisis. La
detoxificación consiste en la transformación de metabolitos y drogas en compuestos hidrosolubles que puedan ser
excretados por orina.

La glucogenólisis (degradación del glucógeno) tiene lugar en el citosol, donde los gránulos de glucógeno se encuentran en
íntima relación con el REL. El producto de la glucogenólisis, la glucosa 6-fosfato (glucosa 6-P), es atacada entonces por
la glucosa 6-fosfatasa, enzima de la membranas del retículo. Ésta cataliza la hidrólisis del grupo fosfato, permitiendo
así que la glucosa atraviese la membrana celular hacia el torrente circulatorio. La glucosa 6-fosfatasa no se expresa en
las células musculares, razón por la cual el glucógeno muscular no contribuye a la mantención de la glucemia.

FUNCIONES DEL RETÍCULO ENDOPLASMÁTICO GRANULAR

a) Síntesis de proteínas. Todas las proteínas sintetizadas en la célula (excepto las codificadas por ADN de
mitocondria y cloroplasto) son iniciadas por ribosomas libres del citosol. Muchas de ellas, las proteínas nucleares, las
citosólicas y las que están destinadas a cloroplastos, mitocondrias o peroxisomas, concluyen su síntesis en dichos
ribosomas para luego dirigirse, por el citosol, hacia sus compartimentos diana. Otras, en cambio, como las proteínas
integrales de membrana, las de secreción y las enzimas lisosomales, terminan su síntesis en el REG. ¿Cómo se dirige la
síntesis hacia uno de estos dos ramales? ¿Existen diferentes poblaciones de ribosomas? ¿Dónde radica la señal que
conduce a determinadas proteínas hacia el REG?
 Fig. 5.9- Síntesis de proteínas en el REG. Hipótesis de la señal.

La respuesta a estos interrogantes fue proporcionada por Blobel y Sabatini, en el año 1971, cuando propusieron
su hipótesis de la señal, ampliamente corroborada después. Las proteínas que se sintetizan en el REG tienen en su
extremo aminoterminal una seguidilla de aproximadamente treinta aminoácidos cuyos radicales son predominantemente
hidrófobos. Este primer fragmento de las proteínas recibe el nombre de péptido señal o péptido guía. No aparece
péptido guía en las proteínas del citosol, núcleo, mitocondria, cloroplasto ni peroxisoma. Cuando el péptido guía está
presente, es reconocido por la PRS (partícula de reconocimiento de la señal) situada en el citosol. La PRS interactúa con
el péptido señal y detiene la síntesis temporariamente. Entonces el ribosoma se une a las membranas del REG.
Recordemos que allí se ubican las riboforinas (receptores de ribosomas). También hay receptores para la PRS. Una vez
que el ribosoma se adhiere a las membranas reticulares, entonces el péptido guía ingresa en un canal transmembranar, la
PRS se separa y la traducción se reanuda. A medida que la proteína crece, se vuelca hacia el lumen del REG: la síntesis
proteica y la translocación a través de la membrana son simultáneas (cotraslación).

Fig. 5.10- Sïntesis de proteínas en el REG. Cotraslación

Las proteínas que carecen de péptido señal no son reconocidas por la PRS; por este motivo no se dirigen hacia el sistema
de endomembranas y su síntesis se completa en el citosol. Muchas de ellas atraviesan otras membranas con
posterioridad (postraslación) para alcanzar su localización definitiva. Se han encontrado otras secuencias aminoacídicas,
distintas del péptido señal, que actúan como marcas para dirigirlas a sus respectivos destinos.
Las proteínas sintetizadas en el REG pueden dividirse en dos grandes grupos: membranares y luminales o solubles. Las
membranares permanecen incluidas en la membrana, en algunos casos ligadas a ella mediante el péptido señal; en otras,
secuencias de aminoácidos internas a la cadena funcionan como péptidos de anclaje, deteniendo la translocación de la
proteína por el canal. Según la cantidad de secuencias de anclaje que presentan, hay proteínas de paso único o proteínas
multipaso. Las proteínas intrínsecas insertas en la membrana a nivel del REG se retienen como componentes de este
organoide o son transportadas en vesículas, formando parte del “envase”, hasta incorporarse a otras membranas del
sistema o a la propia membrana plasmática.

Fig. 5.11 a - Inserción de proteínas integrales en la membrana del REG

Fig. 5.11 b- Inserción de proteínas integrales de multiple paso en la membrana del REG

Las proteínas solubles no conservan el péptido señal ni poseen otros péptidos de anclaje. Cuando el péptido señal es
escindido de la cadena (en este corte actúa una peptidasa señal ubicada en la cara luminal de las cisternas), ésta pierde
contacto con la membrana y se vuelca por completo al lumen. Si las proteínas solubles no son residentes del REG,
entonces siguen su ruta, en este caso como contenido de las vesículas transportadoras. Podemos citar en este grupo a
las proteínas de secreción y a las hidrolasas lisosomales.

Glicosilación. La mayor parte de las proteínas sintetizadas en el REG incorporan cadenas glucídicas a su paso por el
mismo. La presencia en la cadena polipeptídica de la secuencia de aminoácidos asparagina–x-serina o asparagina–x–
treonina (x es otro aminoácido cualquiera), señal de glicosilación, marca el sitio donde se unirá el glúcido. Todas las
glucoproteínas sintetizadas en el REG reciben el mismo oligosacárido: una cadena ramificada de doce unidades de
monosacárido.
 Fig. 5.12- Glicosilación nuclear.

Ésta se sintetiza sobre un lípido de membrana -el dolicol-fosfato -, y luego es transferida en bloque a la asparagina de
la señal de glicosilación (se forma un enlace N-glicosídico). En la síntesis del oligosacárido y su posterior transferencia
participan las enzimas glicosiltransferasas. El glúcido se adiciona tantas veces como aparezca en la proteína la señal de
glicosilación. Mientras la glucoproteína aún se halla en el REG, enzimas glicosidasas remueven algunas unidades de
monosacárido, al tiempo que distintas glicosiltransferasas añaden otras nuevas. Se produce así la diversidad de cadenas
a partir del primer bloque transferido. Un núcleo del oligosacárido original, no obstante, se conserva hasta el final en
todas las glucoproteínas, de allí que esta glicosilación reciba el nombre de glicosilación nuclear.

FUNCIONES DEL APARATO DE GOLGI

El aparato de Golgi es la estación distribuidora final del sistema. Las macromoléculas sintetizadas en REL y REG llegan a
él mediante transporte vesicular y son recibidas en la cara convexa del aparato o cara de recepción, donde se encuentra
una zona de transición con el RE, la red cis. Desde allí, por el mismo mecanismo, son enviadas a la cisterna cis, luego a la
medial, y por último al compartimento trans del complejo de Golgi, que se corresponde con su cara cóncava. A partir de
otra zona de transición, la red del trans Golgi, brotan las vesículas que contienen los productos definitivos.
El complejo de Golgi no se limita al transporte de las sustancias recibidas. En este sector, por el contrario, se da la
forma final a las moléculas que ingresan. En el aparato de Golgi tienen lugar las siguientes reacciones:

Glicosilación terminal. Es la modificación secuencial, por remoción y adición de monosacáridos, de las glucoproteínas
sintetizadas en el REG. También se adicionan nuevos bloques oligosacarídicos construidos por completo en el aparato de
Golgi, proceso denominado O-glicosilación (el enlace entre el glúcido y el resto de aminoácido es unión O-glicosídica).

Síntesis de heteropolisacáridos. Los heteropolisacáridos constituyentes de los glicosaminoglicanos (GAG) se

sintetizan en el aparato de Golgi y se unen a las proteínas provenientes del REG, ensamblando moléculas complejas como
el ácido hialurónico o el condroitín-sulfato destinados a la matriz extracelular de las células animales. En las células
vegetales, el aparato de Golgi sintetiza polisacáridos de la pared celular, por ejemplo hemicelulosas y pectinas.

Síntesis de glucolípidos. Se adiciona la porción glucídica a la ceramida sintetizada en el REL.

Secreción
Las vesículas que brotan de la cara trans portan los productos acabados destinados al medio extracelular. La fusión de
dichas vesículas con la membrana plasmática –exocitosis- da como resultado la secreción o exportación de diversas
sustancias: enzimas, hormonas, moléculas de la matriz extracelular o de la pared celular, anticuerpos y otras, según el
tipo celular.
Hay dos rutas secretorias: la continua o constitutiva y la discontinua o regulada.

La secreción continua o constitutiva está presente en todos los tipos celulares. Las vesículas que siguen esta ruta se
exocitan en forma continua, a medida que brotan del aparato de Golgi. Por ejemplo, se secretan por esta vía las
moléculas que se incorporan a la matriz extracelular.

Fig. 5.13- Secreción

La secreción regulada, en cambio, es propia de células secretoras especializadas. En estos casos, las vesículas se
acumulan en el polo secretor de la célula, como gránulos de secreción, y la exocitosis se dispara sólo ante señales muy
específicas. Por ejemplo, las células b de los islotes de Langerhans (en el páncreas), contiene gránulos de insulina que son
exocitados en respuesta a una elevación de la glucemia. La secreción regulada requiere también un aumento de la
concentración de calcio citosólico.

Formación de lisosomas primarios

Los lisosomas primarios son organoides derivados del sistema de endomembranas. Cada lisosoma primario es una vesícula
que brota del aparato de Golgi, con un contenido de enzimas hidrolíticas (hidrolasas). Las hidrolasas son sintetizadas en
el REG y viajan hasta el aparato de Golgi por transporte vesicular. Allí sufren una glicosilación terminal de la cual
resultan con cadenas glucídicas ricas en manosa-6-fosfato (manosa 6-P). La manosa 6-P es el marcador molecular, la
“estampilla” que dirige a las enzimas hacia la ruta de los lisosomas. Se ha estudiado una enfermedad en la cual las
hidrolasas no llevan su marcador; las membranas del aparato de Golgi no las reconocen como tales y las empacan en
vesículas de secreción para ser exocitadas. Quienes padecen esta enfermedad acumulan hidrolasas en el medio
extracelular, mientras sus células carecen de ellas.

Lisosomas y digestión: heterofagia y autofagia

Los lisosomas primarios contienen una variedad de enzimas hidrolíticas capaces de degradar casi todas las moléculas
orgánicas. Estas hidrolasas se ponen en contacto con sus sustratos cuando los lisosomas primarios se fusionan con otras
vesículas. El producto de la fusión es un lisosoma secundario. Por lo tanto, la digestión de moléculas orgánicas se lleva a
cabo en los lisosomas secundarios, ya que éstos contienen a la vez los sustratos y las enzimas capaces de degradarlos.

Existen diversas formas de lisosomas secundarios, según el origen de la vesícula que se fusiona con el lisosoma primario:

Fagolisosoma: se origina de la fusión del lisosoma primario con una vesícula procedente de la fagocitosis. Se
encuentran, por ejemplo, en los glóbulos blancos, capaces de fagocitar partículas extrañas que luego son digeridas en
estos cuerpos.

Endosoma tardío: surge al unirse los lisosomas primarios con materiales provenientes de los endosomas tempranos.
Los endosomas tempranos contienen macromoléculas que ingresan por los mecanismos de endocitosis inespecífica y
endocitosis mediada por receptor. Este último es utilizado por las células para incorporar, por ejemplo, las lipoproteínas
de baja densidad o LDL.

Fig. 5.14- Endosoma temprano y tardío

Autofagolisosoma: es el producto de la fusión entre un lisosoma primario y una vacuola autofágica. Algunos
organoides citoplasmáticos son englobados en vacuolas, con membranas provistas por las cisternas del RE, para luego
ser reciclados cuando estas vacuolas autofágicas se unen con los lisosomas primarios.

La digestión que tiene lugar en los lisosomas secundarios, ya se trate de una heterofagia- hidrólisis de sustancias de
origen exógeno- o de una autofagia –degradación de componentes celulares- da origen a moléculas más sencillas que
atraviesan la membrana lisosomal, es decir son absorbidas por el citosol para su posterior asimilación.

Lo que queda del lisosoma secundario después de la absorción es un cuerpo residual. Los cuerpos residuales contienen
desechos no digeribles que en algunos casos se exocitan y en otros no, acumulándose en el citosol a medida que la célula
envejece. Un ejemplo de cuerpos residuales son los gránulos de lipofuscina que se observan en células de larga vida,
como las neuronas.

La activación de las hidrolasas requiere un medio más ácido que el citosol, de pH 5, que se logra por la acción de una
bomba de protones situada en la membrana lisosomal. Por otra parte, la membrana de los lisosomas es impermeable a las
enzimas y resistente a la acción de éstas. Ambos hechos protegen normalmente a la célula de una batería enzimática que
podría degradarla. Existen, sin embargo, algunos procesos patológicos, como la artritis reumatoidea, que causan la
destrucción de las membranas lisosomales, con la consecuente liberación de las enzimas y la lisis celular. En otros casos,
la liberación de las hidrolasas cumple un papel fisiológico, permitiendo la reabsorción de estructuras que ya no son útiles,
por ejemplo la cola de los renacuajos durante la metamorfosis.
 Fig. 5.15-
Autofagia y
Heterofagia

PEROXISOMAS
Los peroxisomas, organoides presentes en todas las células eucariontes, son vesículas ovoideas de aproximadamente 0,5 mm,
que al igual que los lisosomas están rodeadas por una membrana simple y contienen enzimas en su interior. Esta quizá sea la
única similitud, pues se originan al igual que las mitocondrias por un proceso de fisión binaria, en este caso de peroxisomas
preexistentes. Las enzimas que contienen en su matriz se incorporan desde el citosol, siendo sintetizadas en ribosomas libres.
Según el tipo de enzimas que posean, existen muchos tipos de peroxisomas.

La principal enzima de los peroxisomas es la catalasa, que descompone el peróxido de hidrógeno producido en el peroxisoma
o el originado en otras localizaciones, como el citosol, RE y las mitocondrias. La actividad de la catalasa es la única común a
todos los tipos de peroxisomas.

En el peroxisoma, se reduce el oxígeno molecular en dos pasos. En el primero una oxidasa elimina los electrones de varios
sustratos, como aminoácidos o ácido úrico. En el segundo, la catalasa, convierte el peróxido de hidrógeno, formado en el primer
paso en agua.

La catalasa también participa en la neutralización de los aniones superóxido, O 2- (radicales libres). Estos radicales son primero
eliminados con formación de H 2O2 por la superóxido dismutasa, y luego la catalasa de los peroxisomas convierte al H 2O2 en H2O
y O2.

La catalasa también neutraliza con consumo de H 2O2, sustancias tóxicas, como fenoles, formaldehído y el etanol de las bebidas
alcohólicas, por eso son más numerosos en el tejido hepático y renal.

Contiene además diferentes oxidasas, como la D-aminooxidasa, urato oxidasa y las responsables de la b-oxidación de los ácidos
grasos (este proceso tiene lugar principalmente en la mitocondria). Todas estas enzimas oxidan sus sustratos produciendo
energía térmica en lugar de ATP.

En las células vegetales, encontramos glioxisomas, que son peroxisomas especializados en el metabolismo de los
triacilgliceridos.

Las enzimas de los glioxisomas, transforman los ácidos grasos de las semillas en hidratos de carbono por la vía del glioxilato.

Los glioxisomas, también juegan un papel central en la fotorrespiración (se denomina así dicho proceso por requerir luz y O 2 y
liberar CO2), que tiene lugar en las hojas de las plantas verdes en los días de calor intenso y baja humedad ambiente.
En los glioxisomas, se cataliza la oxidación del glicocolato a H 2O2 y glioxilato con consumo de oxígeno. Luego el H 2O2 formado
es descompuesto y el glioxilato es transformado en glicina, la cual ingresa al ciclo de Krebs.

CUESTIONARIO DE AUTOEVALUACIÓN

1. El crecimiento de la membrana plasmática se debe a la incorporación de moléculas sintetizadas en:

a. REG b. REL c. aparato de Golgi

d. todas son correctas

2. La asimetría de los lípidos de la membrana plasmática se genera en:

a. REG b. REL c. aparato de Golgi

d. membrana plasmática

3. En células secretoras de esteroides se encuentra muy desarrollado:

a. el REL b. el REG c. el aparato de Golgi

d. todos los anteriores

4. ¿Cuáles de las siguientes moléculas son residentes del REL?

a. glicosiltransferasas b. riboforinas c. glicosidasas

d. flipasas

5. El calcio es un “segundo mensajero” intracelular. Su reservorio en la célula es:

a. el REL b. el aparato de Golgi c. los lisosomas

d. las vesículas de secreción

6. La fusión de una vesícula con el compartimento diana apropiado depende de:

a. el revestimiento de clatrina b. el revestimiento de coatómero c. el contenido de la vesícula

d. un par de v-SNARE/ t-SNARE complementarias

7. El recorrido de una proteína intrínseca de la membrana celular, desde que se inicia su síntesis hasta alcanzar
su localización definitiva es:

a. REG- Golgi- membrana plasmática b. citosol- REG- Golgi- membrana plasmática

c. citosol-REL -Golgi- membrana plasmática d. Golgi-REL-citosol-membrana plasmática

8. Un lisosoma secundario se diferencia de uno primario en:

a. el tipo de enzimas b. el origen de los sustratos c. la localización celular

d. la presencia de sustratos

9. Al inicio de su traducción, llevan péptido señal hidrofóbico aminoterminal, las proteínas:

a. mitocondriales codificadas por ADN nuclear b. residentes del citosol

c. lisosomales d. nucleares
10. La síntesis de glucolípidos se lleva a cabo en:

a. REG b. REL c. Golgi d. b y c son correctas

11. El marcador de las hidrolasas ácidas es:

a. el péptido señal b. la señal de glicosilación c. la manosa –6-P d. la clatrina

12. La ruta secretoria discontinua se caracteriza por:

a. presentarse en células muy especializadas b. requerir la participación de señales específicas

c. causar una acumulación de gránulos secretorios d. todas son correctas

13. Una glucoproteína secretada, probablemente se diferencie de su precursora en el REG en los siguientes
aspectos:

a. su secuencia aminoacídica carboxiterminal y sus restos glucídicos

b. su secuencia aminoacídica aminoterminal y sus restos glucídicos

c. sólo en su secuencia de aminoácidos d. sólo en sus cadenas glucídicas

14. Se denomina cotraslación a:

a. el traslado de las proteínas en el interior de las vesículas b. el ingreso de las proteínas al REG simultáneo a
su síntesis

c. el desplazamiento de las proteínas desde el REG al aparato de Golgi d. todas son correctas

CITOESQUELETO
• Es un sistema compuesto por
proteínas que se hallan en las
células y que posibilita el
desplazamiento celular y además
este entramado contribuye a la
organización de las estructuras de la
célula, a la cual le brinda un soporte
para que conserve su forma.
 CITOESQUELETO

Introducción

El citoesqueleto es propio de las células eucarióticas. Es una estructura tridimensional dinámica que se extiende a través
del citoplasma. Por lo tanto la idea de que el citoplasma de la célula es una masa amorfa y gelatinosa es equivocada.

Esta matriz fibrosa de proteínas se extiende por el citoplasma entre el núcleo y la cara interna de la membrana
plasmática, ayudando a definir la forma de la célula e interviniendo en la locomoción y división celular. Es decir que el
citoesqueleto no sólo da estabilidad a la célula como un esqueleto, sino que es también como el músculo interviene en el
movimiento celular. Por lo tanto podríamos llamarlo también “citomusculatura”. Podemos agregar que el citoesqueleto
condiciona el movimiento de las organelas del interior de la célula y tiene gran importancia metabólica, dando un
andamiaje a los procesos moleculares que se realizan en el citoplasma.

El citoesqueleto es característico de las células eucariontes ya que ESTA AUSENTE EN LOS PROCARIONTES. Por lo
que podría ser un factor esencial en la evolución de los eucariotas

De esta forma podemos enunciar las siguientes funciones del citoesqueleto:

Ø Estabilidad celular y forma celular

Ø Locomoción celular

Ø División celular

Ø Movimiento de los orgánulos internos

Ø Regulación metabólica

Sistemas de Filamentos
En los años 1950-1960, la microscopia electrónica consiguió sacar a luz tres sistemas distintos de filamentos del
citoplasma. Estudios bioquímicos e inmunológicos posteriores identificaron el conjunto específico de proteínas que
caracteriza a cada sistema de filamentos. Los tres sistemas primarios de fibras que componen el citoesqueleto
son: microfilamentos, microtúbulos y filamentos intermedios.

Proteínas Accesorias

Estos sistemas primarios de filamentos (microfilamentos , filamentos intermedios y microtúbulos), están asociados a un
conjunto de proteínas llamadas proteínas accesorias. Las proteínas accesorias cumplen distintas funciones y de acuerdo
a estos roles se las clasifican en:

Ø Proteínas reguladoras: regulan los procesos de alargamiento (polimerización) y acortamiento (despolimerización) de

los filamentos principales.

Ø Proteínas ligadoras: conectan los filamentos entre si y con distintas estructuras celulares

Ø Proteínas motoras: sirven para la motilidad, contracción y cambios de forma celulares. También trasladan
macromoléculas y organoides de un punto a otro del citoplasma.

Microfilamentos
Son las fibras más delgadas de 3-6 nm (nanómetros=milmillonésimas de metro= 10 -9), están formados por la proteína
actina. La actina es una proteína con funciones contráctiles, es también la proteína celular más abundante. La asociación
de estos microfilamentos de actina con la proteína miosina es la responsable de la contracción muscular. Los
microfilamentos también pueden llevar a cabo los movimientos celulares, incluyendo desplazamiento, contracción y
citiocinesis.
 Fig. 6.1- Polimerización y despolimerización de los filamentos de actina. (a) actina G, (b) nucleación, (c) polimerización y
despolimerización.

La actina es la proteína base de los microfilamentos. El monómero es conocido como actina G, o actina globular. En
presencia de ATP, se polimeriza formando largas hélices dobles, denominadas actina F, o actina filamentosa. Para que se
lleve a cabo esta polimerización el ATP debe convertirse en ADP, liberando la energía necesaria para el proceso. La
actina, presenta polaridad, tiende a polimerizarse (alargarse) y despolimerizarse (acortarse) a gran velocidad por un
extremo más (el extremo positivo), y a realizar los mismos procesos por el otro extremo, menos (extremo negativo), a
menor velocidad.

Fig. 6.2 - Esquema de una célula en movimiento. (1) Filopodios (prolongaciones digitiformes); (2) Lamelipodios (láminas citoplasmáticas)

Fig. 6.3 - Distribución de los filamentos de actina en los filopodios

Distribución celular

1. Filamentos Transcelulares (atraviesan el citoplasma en todas las direcciones).

2. Filamentos Corticales (por debajo de la membrana plasmática)

En las células epiteliales , los filamentos transcelulares transportan organoides, asociados a la proteína motora miosina
I.

En las células del tejido conectivo los filamentos de actina transcelulares se llaman fibras tensoras y están asociadas a
la proteína motora miosina II.
Los filamentos de actina cumplen un rol principal en la motilidad celular , decisiva en el desarrollo embrionario. En las
células musculares los filamentos de actina no se acortan ni se alargan.

La droga citocalasina B provoca la despolimerización de los filamentos de actina, debido a que se une a sus dos extremos
y bloquea su crecimiento.

Microtúbulos
Los microtúbulos son tubos cilíndricos de 20-25 nm de diámetro. Están compuestos de subunidades de la proteína
tubulina , estas subunidades se llaman alfa y beta. Los microtúbulos actúan como un andamio para determinar la forma
celular, y proveen un conjunto de “pistas” para que se muevan las organelas y vesículas. Los microtúbulos también
forman las fibras del huso para separar los cromosomas durante la mitosis y la meiosis. Cuando se disponen en forma
geométrica dentro de cilios y flagelos, son usados para la locomoción (autopropulsión) o para mover líquido circundante o
partículas (motilidad).

Fig. 6.4- Polimerización de la tubulina a partir de las tubulinas alfa y beta

Como mencionamos anteriormente la tubulina forma polímeros. La tubulina es una proteína globular, de la que existen dos
polipéptidos distintos aunque similares, la alfa tubulina y la beta tubulina. La alfa y la beta tubulina se asocian y forman
dímeros. En presencia de GTP, los dímeros de tubulina se unen y forman un tubo cuya parte central se mantiene vacía. Al
igual que la actina F, los microtúbulos manifiestan polaridad, un extremo tiende a la polimerización o despolimerización a
mayor velocidad (extremo +) y en el otro extremo ocurre lo mismo pero a menor velocidad (extremo).

Los microtúbulos se organizan a partir de centros organizadores especializados, que controlan su localización y
orientación en cel citoplasma. El centro organizador principal en las células animales es el centrosoma, próximo al núcleo.
El centrosoma esta formado por estructuras en forma de anillo que contiene otra tipo de tubulina, la gama tubulina.
Estos anillos actuan como centros de nucleación (crecimiento) de microtúbulos. Los dímeros de tubulina se añaden al
anillos de gama tubulina con una orientación específica, siempre el "extremo -" de cada microtúbulo queda dentro del
centrosoma y el crecimiento se produce por el "extremo +" .

Fig. 6.5- Extremos + y - de un microtúbulo

Las proteínas asociadas a los microtúbulos reciben el nombre de proteínas MAP (proteínas asociadas a los microtúbulos).

Por su localización, podemos clasificarlos en:

1. Citoplasmáticos (célula en interfase)

2. Mitóticos (fibra del huso)

3. Ciliares (en el eje de los cilios)

4. Centriolares (en cuerpos basales y centríolos)

Los microtúbulos citoplasmáticos son necesarios como vías de transporte de macromoléculas y organoides (vesículas,
mitocondrias, etc.), intervienen dos proteínas motoras quinesina y dineína. En la neurona existe otra proteína motora
asociada a los microtúbulos, la dinamina.
También establecen la forma celular. En las neuronas se hallan en las dendritas y en el axón, donde son esenciales para el
crecimiento de éste último, que depende del alargamiento de sus microtúbulos. Este alargamiento es dependiente de la
proteína motora dinamina, que provoca el deslizamiento de los microtúbulos, unos sobre otros.

En las neuronas se ha descubierto una MAP reguladora, denominada tau, que estabiliza los microtúbulos. En la enfermedad de
Alzheimer, caracterizada por el deterioro neuronal progresivo, esta alterado el funcionamiento normal de esta proteína y por
lo tanto se ve incrementada la inestabilidad de los microtúbulos imposibilitando el transporte axónico.

Los microtúbulos mitóticos movilizan los cromosomas durante la mitosis y la meiosis.

Los microtúbulos de cilias y flagelos crecen a partir de un cuerpo basal o cinetosoma de estructura idéntica a la de
un centrosoma que actua como centro de nucleación de dímeros de alfa-beta tubulina. El cuerpo basal se encuentra por debajo
de la membrana plasmática.

Existen diversas drogas que afectan a los microtúbulos, por ejemplo, la colchicina que se une a las tubulinas e impide su
polimerización, lo que en definitiva produce la despolimerización de los microtúbulos. También pueden hacerse desaparecer los
microtúbulos mitóticos mediante el uso de las drogas vinblastina y vincristina, que actúan de forma semejante a la colchicina,
pero en forma selectiva, sobre los microtúbulos del huso mitótico. Por lo tanto estas drogas bloquean la división celular. Otra
droga que produce los mismos efectos es el taxol, que impide la despolimerización de los microtúbulos, lo que induce su
crecimiento descontrolado volviéndose imposible la división celular.

Filamentos intermedios
Los filamentos intermedios tienen 10 nm de diámetro y proveen fuerza de tensión (resistencia mecánica) a la célula. Según el
tipo celular varían sus proteínas constitutivas. Podemos decir que existen seis tipos de filamentos intermedios:

1) Neurofilamentos (en la mayoría de las neuronas).

2) Filamentos de desmina, en el músculo.

3) Filamentos gliales, en las células del mismo nombre , que sirven de soporte en el cerebro, médula espinal y sistema
nervioso periférico.

4) Filamentos de vimentina en células del tejido conjuntivo y en los vasos sanguíneos.

5) Queratinas epiteliales, (o filamentos de queratina o también llamados tonofilamentos), en células epiteliales.

6) Laminofilamentos, forman la lámina nuclear, una delgada malla de filamentos intermedios sobre la superficie
interna de la envoltura nuclear. Son los únicos que no se encuentran en el citoplasma.

A diferencia de los microfilamentos y microtúbulos, los filamentos intermedios al agruparse pierden polaridad, por lo tanto no
presentan extremo + y extremo - (ver Fig. 6.6).
 Fig. 6.6- Estructura de los filamentos intermedios

Distribución celular

Los filamentos intermedios forman redes que conectan la membrana plasmática con la envoltura nuclear, formando una
red continua a su alrededor. Una red similar se encuentra en la cara interna de la envoltura (lámina nuclear).

Fig. 6.7- Distribución de los componentes del citoesqueleto en la célula. 1- Filamentos intermedios unidos a desmosomas,
2- Microtúbulos partiendo del centrosoma, 3- Microfilamentos en el polo apical de la célula-(actina en
microvellosidades).

Ejemplos de la función y estructura del citoesqueleto en células epiteliales

Motilidad y movimiento celular

La motilidad y movimiento celular se logra por medio de cilias y flagelos.

Las cilias son apéndices delgados, que surgen de la superficie de distintos tipos celulares. Los cilios de mayor longitud se
llaman flagelos. Las estructuras ciliares se encuentran en epitelios especializados en eucariontes. Por ejemplo, las cilias
barren los fluidos sobre células estacionarias en el epitelio de la tráquea y tubos del oviducto femenino (trompas de
Falopio).

Los flagelos, son importantes para el movimiento celular. Son más largos que las cilias pero sus estructuras internas de
microtúbulos son similares. Los flagelos procarióticos y eucarióticos poseen estructuras muy diferentes.

Fig. 6.8 - (a) Corte transversal de un centrosoma o cuerpo basal con su estructura típica, "9+0". Nueve tripletes periféricos y ninguno
en el centro. Cada triplete esta formado por tres microtúbulos. (b) Esquema de un centrosoma o cuerpo basal, recordemos que posee
idéntica estructura.

Fig. 6.9 - Distribución de los microtúbulos en cilios y cuerpos basales.

Ambos, flagelos y cilias tienen una disposición de túbulos de “9+2”. Esta disposición se refiere a los 9 pares fusionados
de microtúbulos periféricos y de 2 microtúbulos no fusionados en el centro. Brazos de dineína sirven como motores
moleculares (proteína accesoria motora). Si los brazos de dineína son defectuosos ( a causa de una mutación en los genes
de la dineína), las cilias y los flagelos son inmóviles, lo que provoca problemas en el tracto respiratorio (bronquitis
crónicas), e infertilidad en la mujer y el varón (flagelos de los espermatozoides inmóviles y cilias de las trompas
uterinas inmóviles).
 Fig. 6.10(a) - Esquema de un cilio (corte transversal)

Fig. 6.10 (b) Microfotografías electrónicas del flagelo de un espermatozoide normal y con dineína defectuosa

La célula en movimiento puede tomar también un aspecto poligonal por modificaciones en los filamentos de actina
corticales, formándose láminas citoplasmáticas, llamadas lamelipodios con prolongaciones denominadas filopodios.
Lamelipodios y filopodios alteran períodos de crecimiento y acortamiento, base de la motilidad celular.

Los axones crecen en su extremo distal por una especialización, llamada cono de crecimiento que responde a estímulos
físicos y químicos.

Movimiento de organelos internos

Anteriormente hemos mencionado que el citoesqueleto actúa como un andamiaje sobre el cual, con la ayuda de las
proteínas accesorias (como por ejemplo las proteínas motoras) es posible mover organelas, cromosomas, provocar flujos
citoplasmáticos y lograr la división celular (citocinesis).

Para tener una visión mas precisa de estos y otros fenómenos celulares veremos como actúan las proteínas accesorias
motoras.

Las proteínas accesorias motoras, son motores proteicos que ligan dos moléculas y que utilizando ATP , provocan el
desplazamiento de una molécula con respecto a la otra. Estas proteínas tienen un extremo motor que unen al
citoesqueleto (microtúbulos y actina) y por el extremo ligante pueden unirse a diferentes tipos de estructuras
moleculares, como por ejemplo organelas, vesículas u otras proteínas del citoesqueleto.
Ejemplos de proteínas motoras:

Ø Miosina que se une a actina

Ø Quinesina o Kinesina que se une a microtúbulos

Ø Dineína que se une a microtúbulos

Cuando se conectan a otros microtúbulos, las proteínas motoras pueden causar movimiento si los extremos están fijos
(cilias y flagelos) o extender la longitud de los paquetes de fibras si los extremos están libres.

Fig. 6.11 - Movimiento de proteínas motoras sobre los microtúbulos

Fig. 6.12 - Disposición de los microtúbulos en el axón de una neurona. Observe los distintos tipos de transporte, uno
anterógrado del cuerpo celular a la terminal sináptica y un transporte retrógrado, de la terminal al cuerpo celular. Los
microtúbulos junto con las proteínas motoras transportan los distintos materiales, por ejemplo vesículas con
neurotransmisores. (De Kinesin and Dynein Superfamily Proteins and the Mechanism of Organelle Transport. Nobutaka
Hirokawa Science.279:519-526)
 Fig. 6.13 - Microtúbulos asociados a proteínas motoras. (a) Los extremos fijos de los microtúbulos permiten a los
motores proteicos mover las fibras. (b) Los extremos libres de los microtúbulos permiten a los motores proteicos
extender la longitud de las fibras.

Fig. 6.14 - Asociaciones de las miosinas I y II con los filamentos de actina. (a) Los filamentos de actina transcelulares
(que atraviesan toda la célula), sirven como vías de transporte para organoides en el citoplasma. Para esto necesitan de
la proteína motora miosina, que consume ATP para provocar el movimiento. (b) En los filamentos de actina que actuán
como fibras tensoras, se localizan numerosas unidades de miosina II. Estos filamentos de actina se unen a estructuras
localizadas en la membrana plasmática, llamadas contanto focales. De esta forma se generan leves movimientos pero
continuos

MATRIZ EXTRACELULAR
Bajo el nombre de matriz extracelular (MEC) se agrupan los elementos intercelulares presentes en los organismos
pluricelulares. La composición de la MEC es única para cada tipo de tejido.

La MEC es un medio dinámico que juega un rol central en la regulación de las funciones celulares durante la remodelación
y el crecimiento celular normal y patológico, como en el desarrollo embrionario y toda una serie de procesos que
acontecen en el organismo adulto por ejemplo, la coagulación sanguínea, la curación de heridas, la inflamación, la
reparación de tejidos dañados, y la erradicación de infecciones. Paradójicamente, la adhesividad a la MEC puede
facilitar también, la aparición de artritis reumatoide, ataques cardíacos, los accidentes cerebro vasculares (ACV), la
invasión tumoral y la metástasis.
Las células del cuerpo se mantienen pegadas unas a otras y a un material cohesivo extracelular (la MEC), que las
circunda. Esta cohesión es esencial para la supervivencia, ya que mantiene unidos a los tejidos. Las células normales no
logran sobrevivir si no están adheridas a algún tipo de sustrato o entre ellas.

Los componentes de la MEC pueden clasificarse en fluidos y fibrosos. Los componentes fluidos son los
glicosaminglicanos (polisacárido) y proteoglicanos (glicoproteína). Por otro lado, los componentes fibrosos se dividen en
proteínas estructurales (colágenos) y proteínas adhesivas (fibronectina, laminina).

Componentes Fluidos
La MEC posee glicosaminoglicanos, un heteropolisacárido que se hallan asociados entre sí o a glicoproteínas
llamadas proteoglicanos.

Los glicosaminoglicanos y los proteoglicanos se asocian entre sí formando agregados moleculares de gran tamaño. Estos
agregados tienen un papel estructural debido a que presentan excelente resistencia mecánica a los golpes debido a sus
propiedades viscoso elásticas.

Todos los glicosaminoglicanos, son moléculas ácidas con numerosas cargas negativas. Además, todos los
glicosaminoglicanos, excepto el ácido hialurónico, poseen grupos sulfatos (también un grupo ácido). Por lo tanto podemos
decir que el carácter ácido de los proteoglicanos y los glicosaminoglicanos, los conduce a fijar cationes (Na+, K+), en
consecuencia constituyen una reserva de estos. Por otra parte los cationes están rodeados de agua, esto aumenta el
volumen (turgencia) de la MEC. Debido a que los proteoglicanos retienen agua, son directamente responsables del grado
de hidratación de la matriz extracelular (ver otros polisacáridos en Composición química de los seres vivos).

6.15 - Agregado molecular compuesto por: proteoglicanos; glicosaminoglicanos y ácido hialurónico

Componentes Fibrosos

Colágeno

Es un grupo de glucoproteínas fibrilares presentes en los tejidos conjuntivos. Existen varios tipos que se denominan con
números romanas.

Principales tipos de colágenos:

Ø Tipo I: presente en la dermis, los huesos y en los tendones.

Ø Tipo II: presente en el cartílago.

Ø Tipo III: existe en la dermis

Ø Tipo IV: se encuentra en la membrana basal

La subunidad de colágeno, se llama tropocolágeno (tropos, en griego significa bastoncito). Está formado por tres cadenas
polipeptídicas de 1050 aminoácidos cada una. Uno de cada tres aminoácidos es una glicina, seguido muy probablemente
de una prolina o hidroxiprolina.

Cada cadena polipeptídica se denomina alfa. Por lo tanto deben unirse tres hélices alfa (alfa 1, alfa 2 y alfa 3), para
formar el bastoncito de tropocolágeno.
Proteínas adhesivas: Fibronectina y Laminina

La fibronectina, es una glicoproteína encontrada en la mayoría de las matrices extracelulares en forma de agregados o
fibrillas. Esta importante proteína adhesiva, cumple funciones que involucran procesos de adhesión, como la migración y
la invasión celular. La fibronectina media una variedad de adhesiones uniéndose al fibrinógeno/fibrina (coagulación
sanguínea), colágeno, heparán sulfato y al ácido hialurónico (Fig.6.16).

La laminina es una glicoproteina de adhesión que se encuentran en todas las membranas basales (se encuentra asociada
al colágeno IV). La laminina cumple una función estructural muy importante. Participa en la migración, proliferación y
diferenciación celular.

Es la primera proteína adhesiva que aparece en la MEC, durante el desarrollo embrionario.

Receptores de la matriz extracelular y moléculas de adhesión celular (MAC)

Son glicoproteínas transmembranosas que intervienen en el reconocimiento y la adhesión celular. Las moléculas de
Adhesión se encuentran en la superficie celular y solo se unen a moléculas idénticas a ellas mismas (uniones homófilicas).
Mediante las MAC (o CAM en inglés) la célula migratoria busca una célula del mismo tipo, para formar un tejido. (Cuadro
6.1)

Los receptores de la matriz extracelular, las integrinas|(glicoproteínas transmembrana heterodiméricas), forman parte
de los denominados contactos focales. La integrina por sus dominios extracelulares se une a las fibras de colágeno a
través de una proteína adhesiva, la fibronectina o laminina. Por sus dominios citosólicos se une a los filamentos de actina
a través de un conjunto de proteínas ligadoras, como la talina, vinculina, paxilina y a-actinina. La unión de las integrinas
es dependiente de calcio y magnesio.

Cuadro 6.1 - Moléculas de Adhesión calcio dependientes

Tipo de Cadherina Localización Estructura Proteina intracelular de Filamento citoplasmático

unión

E-Cadherina Células Cinturón Cateninas, a-actinina Actina

epiteliales adhesivo
P-Cadherina

Cadherina Epidermis Desmosomas Desmoplaquinas I, II; Keratina; desmina

desmosomal
Placenta Placoglobina

N-Cadherina Nervio, Cinturón Cateninas, a-actinina, Actina.

músculo adhesivo vinculina.
 Fig. 6.16 - Integración del citoesqueleto con la matriz extracelular. Las integrinas que atraviesan la membrana
plasmática, por uno de sus extremos se unen a moléculas de la MEC, en este caso fibronectina. Por el lado intracelular,
se unen al citoesqueleto. La unión al citoesqueleto esta formada por el agregado molecular complejo (contacto focal)

Degradación y recambio de la matriz extracelular (MEC)

La degradación de la matriz extracelular y su recambio son importantes procesos en la remodelación de tejidos durante
el desarrollo, curación de heridas, necrosis tumoral e inflamación. Factores clave del recambio de la matriz extracelular
son las metaloproteasas de la matriz (MPM) y sus inhibidores. Estas moléculas degradan las moléculas de la matriz
extracelular, proteoglicanos, glicoproteínas y varios tipos de colágenos. Las metaloproteasas son secretadas por las
células en una forma inactiva (prometaloproteasa), activándose luego en la matriz, por una cascada de metaloproteasas.

Miniglosario:

Tejido conjuntivo: Constituye el compartimiento extracelular o matriz extracelular, en el que se encuentran sumergidas
fibras y células especializadas. Las moléculas que se encuentran en esta matriz son sintetizadas en el interior celular.
Este compartimiento, es muy importante pues constituye del 15-20 % del volumen del organismo según las especies.

Lamina o membrana basal: Se denomina membrana basal a una formación de membrana constituida por moléculas que
pertenecen al tejido conjuntivo y que sostienen los epitelios y los endotelios. Esta membrana no es de naturaleza
fosfolipídica sino glucoproteica.

DIFERENCIACIONES DE MEMBRANA
Se denominan diferenciaciones de membrana a las regiones de la membrana plasmática adaptadas a diferentes
funciones, como la absorción, la secreción, el transporte de líquidos, la adherencia mecánica o la interacción con células
adyacentes. La Fig. 6.18 corresponde a una célula epitelial ideal que ilustra los distintos tipos de diferenciaciones.
 Fig. 6.17 - Distribución de los filamentos de actina en una microvellosida.

MICROVELLOSIDADES

La superficie apical de la célula se proyecta en delgadas prolongaciones denominadas microvellosidades (fig. 6.19). Estas
son muy abundantes en el epitelio intestinal en el que aumentan la superficie efectiva de absorción considerablemente.
Cada célula puede tener hasta 3000 microvellosidades de 0,6 a 0,8 m de longitud. Las recorren internamente finos
filamentos de actina.

Uniones Intercelulares

En organismos multicelulares, virtualmente toda célula actúa en íntimo contacto con sus vecinas y con componentes de la
matriz extracelular. Tales interacciones ocurren de varias formas y se inician luego de la fertilización. De hecho, el
proceso de embriogénesis puede en algún sentido ser resumido, como un complejo y exquisitamente orquestado juego de
agrupamientos en diferentes poblaciones celulares. Desde el inicio, las interacciones específicas célula - célula y célula
- matriz son necesarias para que el mantenimiento de la integridad epitelial y la producción de la respuesta
imflamatoria ante una agresión, entre muchos otros procesos. La ruptura de los contactos celulares es incompatible con
la supervivencia y es un signo característico en la patogénesis del cáncer y de los estados de deficiencia inmunes.

Las moléculas de adherencia celular y las uniones intercelulares son las dos razones por las que las células actúan
recíprocamente y con su ambiente extracelular. Algunas de las proteínas de adherencia de las células son componentes
de las uniones intercelulares. En casi todos los tipos de uniones, dichas moléculas relacionan superficies de membrana
contiguas y terminan fijando a las células al citoesqueleto.

Las uniones intercelulares son clasificadas típicamente en tres grupos que varían físicamente en su composición
molecular y apariencia ultrastructural y funcionalmente en la relación que establecen entre células adyacentes.

· En las uniones estrechas , oclusivas o zona ocludens se unen células epiteliales formando una capa continua que
restringe la permeabilidad.
· Los Desmosomes, hemidesmosomes y uniones adherentes fijan células entre si y con la matriz extracelular,
contribuyendo a la formación y mantenimiento de los tejidos.

· Las uniones del hendidura, comunicantes, uniones gap o nexus forman poros entre células que permiten el
acoplamiento químico y/o eléctrico facilitando la comunicación intercelular.

Mientras que las moléculas de adherencia celular son un grupo de proteínas que como su nombre lo indica, unen
flojamente a manera de un "Velcro" a células vecinas, constituyen un preludio necesario al establecimiento de las uniones
intercelulares que proporcionan áreas más fuertes de contacto, a manera de "cierres" y "remaches".

Uniones estrechas

Los epitelios son hojas celulares que separan dos compartimientos actuando como una barrera selectivamente
permeable entre ellos. El epitelio del intestino delgado, por ejemplo, separa el lumen del intestino del lecho vascular y
permite sólo que determinadas moléculas puedan ingresar del lumen a la sangre. Las uniones estrechas "pegan" de
manera individual a las células vecinas manteniéndolas juntas dentro de la misma capa de epitelio (Fig. 6.18). Las
moléculas e iones del lumen deberán atravesar las células del epitelio (vía transcelular) o difundir a través de las
uniones (vía paracelular).

La barrera de permeabilidad de un epitelio es definida por dos características de las uniones estrechas:

a) Estas uniones impiden a la mayoría de las moléculas cruzar el epitelio entre las células. El agua puede difundir a
través ellas, pero la mayoría de los iones y incluso las moléculas pequeñas, como azúcares simples y aminoácidos no
pueden ingresar.

b) Mantienen la asimetría de la membrana en las células epiteliales, que es una condición necesaria para el transporte
transcelular. En las células de los epitelios polarizadas, la composición de la membrana celular que enfrenta un
compartimiento es diferente a la que enfrenta al otro . Estas dos caras normalmente se llaman apical y basolateral. Las
uniones estrechas abrazan las células y funcionan como un cerco para prevenir la difusión de proteínas entre los
compartimientos apical y basolateral contribuyendo a mantener la asimetría. Esto es importante porque permiten el
transporte vectorial (en un sentido) de moléculas a través de los epitelios. Por ejemplo, se transporta glucosa del lumen
del intestino delgado a la sangre, pero nunca de la sangre al lumen. Esto es porque los transportadores de glucosa en la
membrana apical (en contacto con el lumen) transportan dentro de la célula, mientras otros transportadores en la
basolateral (enfrentados al capilar) transportan fuera de la célula. Si ambos tipos de transportadores estuvieran
presentes en ambas membranas, no se absorbería glucosa eficazmente del lumen a la sangre.

Fig. 6.18 - Uniones estrechas y asimetría de membrana

Estructuralmente, estas uniones son regiones de contacto célula-célula muy íntimo. La hoja de plástico que une las
latitas de gaseosa es un análogo de esta estructura. Observando al ME, se ven las uniones estrechas como regiones de
membrana celular que se tocan o incluso se funden sin espacio intercelular discernible .
La naturaleza molecular de la unión es poco conocida. Recientemente se purifico una proteína integral que forma parte
de las mismas, la ocludina. Las ocludinas de las membranas de células contiguas se adhieren firmemente entre si, y
generalmente se encuentran en grupos, formando una hilera de dos o tres uniones estrechas paralelas.

También se observan uniones similares en todas las células que forman revestimientos en órganos internos como la
vejiga.

Uniones de anclaje: Desmosomas, hemidesmosomas y uniones adherens

Fig. 6.19 - Uniones de anclaje en un epitelio

Las células que conforman tejidos y órganos deben fijarse entre si y a la matriz extracelular. Para tal fin, han
desarrollado varios tipos de complejos de unión, y en cada caso, diferentes proteínas transmembrana se extienden a
través de la membrana celular uniendo proteínas del citoesqueleto de una célula con proteínas del citoesqueleto de su
vecina.

Se observan tres tipos de uniones, y difiere entre si por la proteína del citoesqueleto a la que se unen, así como por la
proteína transmembrana .

Las uniones de anclaje no sólo mantienen las células juntas, también proporcionan cohesión estructural a los tejidos.
Estas uniones son muy abundantes en los tejidos que están sujeto a tensión mecánica constante como la piel y el
miocardio.

Proteína
Uniones de Anclaje Proteína del citoesqueleto Ejemplos
transmembrana

Desmosomas Filamentos intermedios Cadherina Otras células

Hemidesmosomas Filamentos intermedios Integrinas Matriz extracelular

Cadherinas e Otras células

Uniones adherentes Filamentos de actina
Integrinas Matriz extracelular
 Fig. 6.20 - Estructura del desmosoma

Desmosomas

Los desmosomas puede visualizarse a manera de remaches a través de la membrana de células adyacentes. Están
compuestos por glicoproteínas integrales de la familia de las cadherinas, cuyos dominios extracelulares se unen con
iguales dominios de células vecinas. Por sus dominios citosólicos se fijan a filamentos intermedios compuestos de
queratina y desmina. Esta última unión es mediada por proteínas de unión asociadas a la membrana o ligadoras, que
forman un placa densa en la cara citoplasmática de la membrana. Las moléculas de cadherina forman un ancla que
extendiéndose a través de la membrana se fija a la placa y a la vez se liga fuertemente a las cadherinas que se
proyectan sobre la membrana de la célula adyacente.

El número de desmosomas es proporcional al grado de tensión que soporta un tejido.

Uniones adherentes, cinturón adhesivo o zonula adherens

Las uniones adherentes comparten la característica de fijar células a través de componentes del citoesqueleto, en este
caso los filamentos corticales de actina. De manera similar a los desmosomas y hemidesmosomas, sus proteínas
transmembrana son cadherinas, cuando se unen a otras células e integrinas, cuando la unión es a la matriz extracelular.

Los filamentos de actina que forman parte de las uniones adherentes son proteínas contráctiles que además poseen
función de fijación.

Se piensa que las uniones adherentes participan plegando y doblando las hojas de los epitelios.

Uniones en hendidura, uniones comunicantes, uniones gap o nexus

En contraste con las uniones estrechas y las adherentes, las uniones en hendidura no sellan céluas entre si, ni
restringen el pasaje de material entre las células. Más bien, este tipo de uniones esta compuesta de series de cauces
pequeños que permiten el pasaje de pequeñas moléculas a través de ellos. Las uniones en hendidura permiten el
acoplamiento eléctrico y metabólico entre las células, porque la señal iniciada en una célula puede propagarse
rápidamente a las células vecinas. En general, el límite superior para el pasaje a través de las uniones en hendidura es de
1000 daltons (Da). Además de los iones, los ejemplos importantes de moléculas que pasan incluyen AMPcíclico (329 Da),
glucosa-6-fosfato (259 Da) y nucleótidos (250-300 Da).

Se observan al ME como parches de tamaño variable, donde las membranas celulares de las dos células implicadas en la
unión, están separadas por un espacio uniforme de 2-3 nm . En el espacio se observan tubos hexagonales
llamadas conexones que forma poros acuosos de 2 nm de diámetro entre las dos células.

La proteína del conexón es la conexina que, cuando se expresa en células que normalmente no tienen uniones en
hendidura, les permite formarlas. Se ven especies diferentes de conexinas entre organismos diferentes y entre los
distintos tejidos de un organismo. Sin embargo, todos las conexinas comparten una estructura común. Poseen cuatro
dominios transmembrana, estando los extremos amino y carboxilo en la cara citoplasmática. La fosforilación del dominio
contiguo al extremo carboxilo, provoca el cierre del conexón, al modificar la disposición de las conexinas. Un conexón
esta formado por seis moléculas del conexina que se extienden fuera de la célula a distancia uniforme. La alineación de
los conexones de cada célula provoca la formación de los poros que funcionalmente definen esta unión.

Las uniones en hendidura son estructuras dinámicas, porque los conexones pueden abrirse y cerrarse
independientemente. Se cierran cuando la concentración intracelular de calcio se eleva o desciende el pH intracelular.
Esta autonomía funcional del conexón de una célula dentro de un grupo de células, permite el cierre de las uniones en
hendidura en una célula dañada aislándola eficazmente y previniendo la extensión de la lesión.

Se ven estas uniones en virtualmente todas las células. Algunos ejemplos representativos de su importancia fisiológica
incluyen:

Acoplamiento eléctrico: Las uniones en hendidura son abundantes en el músculo cardíaco y liso. La despolarización de un
grupo de células musculares rápidamente se extiende a las células adyacentes, causando contracciones coordinadas de
todo el músculo.

Fig. 6.21 - Unión en hendidura o nexus

Acoplamiento metabólico: Muchas hormonas actúan elevando las concentraciones intracelulares de AMP cíclico, que
inicia una vía de señalización dentro de la célula. El AMP cíclico rápidamente pasa a través de las uniones en hendidura y
así, el estímulo hormonal en una célula puede propagarse a un grupo de células .

Plasmodesmos

Las células vegetales a diferencia de las animales, carecen de uniones especializadas. Sin embargo, se conectan entre si
por medio de conductos cilíndricos, llamados plasmodesmos. Estos plasmodesmos se extienden entre células contiguas a
través de la pared celular. El interior del plasmodesmo se encuentra revestido por membrana plasmático y contiene un
desmotúbulo, especie de varilla densa derivada del retículo endoplasmático liso. Solo son permeables a las moléculas de
pesos inferiores a los 1000 Da, las cuales se mueven en el espacio delimitado entre la membrana periférica y el
desmotúbulo central.

Los plasmodesmos son sitios de comunicación, permitiendo la integración metabólica en los tejidos vegetales

CITOSOL O MATRIZ CITOPLASMÁTICA

El citosol, hialoplasma o matriz citoplasmática, consiste fundamentalmente en un sistema coloidal con grandes
biomoléculas como lo son las proteínas, los polisacáridos y los ácidos nucleicos.

Sin embargo no debemos olvidar que también es una solución acuosa que tiene disueltos iones orgánicos e inorgánicos y
pequeñas moléculas como monosacáridos, aminoácidos, pequeños ácidos orgánicos, etc.

En esta matriz tienen lugar muchísimos procesos metabólicos, por tal motivo entre las biomoléculas encontramos muchas
enzimas, como las que participan en el proceso de glucólisis o el de síntesis de las proteínas. Para éste último, son
imprescindibles los ribosomas, organoides también presentes en el citosol de todas las células y en el estroma o matriz
de cloroplastos y mitocondrias.

En resumen podemos asegurar que el citosol no debe ser considerada una matriz amorfa y que además contiene
elementos muy variados, la mayor parte de ellos importantes para el mantenimiento de la vida.
 · Componentes del citoesqueleto

· Enzimas

· Moléculas de señalización
Elementos del citosol · Maquinaria de la síntesis proteíca
(ribisomas, [Link], etc.
en eucariotas
· Proteosomas

· Chaperonas

· Inclusiones, etc.

A continuación daremos una breve descripción de algunos de estos componentes.

Inclusiones

Generalmente corresponden a la acumulación citoplasmática de diferentes tipos de sustancias en grandes

cantidades. Podemos mencionar a los glicosomas que corresponden a la acumulación de glucógeno, como así también las
gotitas de grasa comunes en los hepatocitos, en fibras musculares estriadas y en las células secretoras de leche.

Fig. 6.22 - Microfotografía de célula secretora apócrina de alvéolo mamario. BM, membrana basal, RER, retículo endoplasmático
rugoso; SV, vesícula secretora; LD, gota de lípido.

En algunos tipos celulares el citosol contiene pigmentos fabricados por la misma célula o provenientes del exterior. Por
ejemplo la lipofuscina, de color marrón, constituida por fosfolípidos y proteínas. También encontramos cristales de
proteínas cuya función todavía no es del todo conocida.

Ribosomas

Como ya lo indicáramos estos organoides están presentes en todos los tipos celulares y su estructura será descripta
oportunamente.

Debemos señalar que, con excepción de algunas proteínas mitocondriales que se sintetizan en los ribosomas de la matriz
mitocondrial, todas las proteínas se sintetizan en el citoplasma, y en el proceso intervienen siempre los ribosomas. Sin
embargo, a pesar de la ubicación del proceso, no todas las proteínas permanecen en el citoplasma.
 Fig. 6.23- Destino de las proteínas en los ribosomas citosólicos

El tránsito de proteínas desde el citosol hasta los diferentes destinos, requiere como ya hemos mencionado de un
sistema de señalización preciso, que asegure la llegada de las proteínas al lugar adecuado. Estas señales se encuentran
en la mismas proteínas. Como ejemplo podemos mencionar al péptido señal y las señales de anclaje (ver Sistema de
endomembranas). Obviamente las proteínas destinadas al citosol no necesitan señales.

Chaperonas

Las chaperonas asisten a las proteínas para su oportuno y adecuado plegamiento. Son proteínas que aumentan durante
los “estrés térmico” y en condiciones de estrés metabólico, siendo estas situaciones que producen la desnaturalización
de un gran número de proteínas. Las chaperonas ayudan a la renaturalización de las proteínas afectadas. Como ejemplo
mencionaremos a las chaperonas HSP60 y HSP70 (por las iniciales de Heath Shock Protein). Ambas chaperonas
consumen energía para realizar su tarea. (Fig. 6.24).

Fig. 6.24 - Modelo de la actividad reparadora de las chaperonas sobre las proteínas desnaturalizadas

Proteasomas
Podríamos decir que los proteasomas desempeñan funciones opuestas a los ribosomas, pues se encargan de la
degradación de las proteínas endógenas dañadas (por ej. Factores de transcripción, ciclinas, proteínas codificadas por
ADN viral o proteínas mal plegadas), obteniéndose de este modo oligopéptidos.

Los proteosomas están formados por un complejo enzimático, de más de una docena de proteínas diferentes, que se
organizan en cuatro anillos apilados, que limitan una cámara central. En ambos extremos de este canal, se localiza la
partícula regulatoria, formada por diferentes ATPasas y los varios sitios de reconocimiento de la proteína ubiquitina.

Las proteínas dañadas, que han cumplido su ciclo dentro de la célula, o que se plegaron inadecuadamente son marcadas
con ubiquitina, una pequeña proteína de 76 aminoácidos, altamente conservada y virtualmente idéntica en secuencia en
bacterias, levaduras y mamíferos.

La proteína ubiquitinizada, es reconocida por la partícula regulatoria del proteosoma. La proteína pierde su plegamiento
por la acción de las ATPasas, con gasto de energía. La proteína desenrollada es translocada dentro de la cámara central,
donde las proteasas la degradan. Se producen oligopéptidos de aproximadamente 8 aminoácidos de longitud. La partícula
regulatoria libera la ubiquitina para ser nuevamente utilizada.

Fig. 6.25 - Modelo de la actividad de un proteosoma sobre las proteínas dañadas

AUTOEVALUACIÓN

1) Los componentes del citoesqueleto que se relacionan con los estados SOL-GEL del citosol son:

a- Los filamentos intermedios b- Los microfilamentos de actina

c- Los microfilamentos de miosina d- Los microtúbulos

2) La actina de los microfilamentos:

a- Es una proteína fibrilar b- Es una proteína globular

c- No es una proteína d- Se contrae activamente

3) Los filamentos intermedios están formados principalmente por:

a- Desmina b- Vimentina

c- Desmina y vimentina d- Queratina

4) -¿Cuál de las siguientes NO es función de los microtúbulos?:

a- formar el axonema de cilios y flagelos b- intervenir en el transporte vesicular

c- participar en la emisión de lamelipódios d- formar cuerpos basales

5) la proteína asociada con el movimiento ciliar es:

a- la dineína b- la queratina
c- la vimentina d- la tubulina

6) El citosol es:

a- El espacio comprendido entre la membrana plasmática y el núcleo

b- El medio interno celular, que rellena los espacios existentes entre compartimientos

c- El conjunto de organelas de la célula y el medio que las rodea

d- El medio interno de la célula, metabólicamente inerte

7) En las células animales la comunicación entre las células vecinas se establece a través de:

a- nexus o uniones gap b- desmosomas

c- plasmodesmos. d- hemidesmosomas

8) La principal función de las microvellosidades es:

a- aumentar la superficie celular b- actuar como barrera a la difusión entre células

c- aumentar la adherencia entre células de un mismo tejido

d- aumentar la hermeticidad en los tejidos epiteliales

9) En el transporte de vesículas con neurotransmisores desde el cuerpo de la neurona hasta el final del axón,
participan:

a- microtúbulos y dineína b- microtúbulos y quinesina

c- filamentos de actina d- filamentos intermedios

10) La matriz extracelular y el citoesqueleto tienen en común:

a- Estar constituidos por proteínas fibrosas que son polímeros de tubulina.

b- Estar constituidos por colágeno y proteoglucanos.

c- Estar relacionados funcionalmente en la migración celular.

d- Estar relacionados funcionalmente en la respiración celular

11) Las membranas basales se caracterizan por presentar un alto contenido de:

a- colágeno tipo I b- colágeno tipo II

c- colágeno tipo IV d- colágeno tipo V

 INTRODUCCIÓN AL METABOLISMO
La célula viva se asemeja a una industria química donde miles de reacciones ocurren dentro de un espacio, en este caso,
un espacio microscópico. Por ejemplo, los azúcares son convertidos en aminoácidos y viceversa. El glucógeno es
ensamblado a partir de miles de moléculas de glucosas; las proteínas a partir de aminoácidos. Por otro lado, estos
polímeros serán hidrolizados cuando las necesidades de la células así lo requieran.

El metabolismo (del griego “metabole”, cambio) es la totalidad de los procesos químicos de un organismo. El metabolismo
es “el mapa de rutas” de miles de reacciones químicas que ocurren en la célula. Las enzimas dirigen dichas rutas
metabólicas, acelerando diferencialmente reacciones determinadas.

Como un todo, el metabolismo maneja las fuentes de materia y energía de la célula. Algunas rutas metabólicas liberan
energía por ruptura de los enlaces químicas de moléculas complejas a compuestos más simple. Estos procesos de
degradación constituyen el catabolismo celular o vías catabólicas. Por otro lado, existen vías anabólicas o reacciones
químicas del anabolismo, las que consumen energía para construir moléculas de mayor tamaño a partir de moléculas más
simples. Las vías metabólicos se interceptan de tal forma que la energía liberada de reacciones catabólicas ( reacciones
exergónicas) puede utilizarse para llevar a cabo reacciones anabólicas ( reacciones endergónicas)

Así, la transferencia de energía del catabolismo al anabolismo se denomina acoplamiento energético.

LOS ORGANISMOS SON TRANSFORMADORES DE ENERGÍA

La energía ha sido definida como la capacidad de realizar trabajo, de producir una modificación en la materia. Puede
adoptar la forma de calor, luz, electricidad, movimiento, etc.

Se reconocen dos clases principales de energía:

l Energía potencial

l Energía cinética

La energía potencial es la capacidad de realizar trabajo en virtud de la posición o el estado de una partícula. Por
ejemplo, una piedra en la cima de una montaña tiene energía potencial, a medida que rueda por su ladera, la energía
potencial se transforma en cinética. La energía derivada en última instancia del sol, se almacena en las moléculas de los
alimentos como energía química. Esta última es un tipo de energía potencial. Luego dentro del organismo, se producen
reacciones químicas que transforman la energía potencial en calor, movimiento o alguna otra forma de energía cinética.

Todas las formas de energía son, por lo menos en parte, interconvertibles. Los sistemas vivientes constantemente
transforman energía potencial en cinética o viceversa.

La energía química que los organismos utilizan en las reacciones metabólicas, proviene de los enlaces químicos de los
glúcidos, lípidos y proteínas. Esta energía potencial que guardan los enlaces químicos, puede ser aprovechada
parcialmente por el organismo cuando se rompen esos enlaces químicos. La energía que no puede ser atrapada por el
organismo, se disipa como calor.

En condiciones experimentales controladas, puede medirse y compararse la cantidad de energía que entra y sale de
un sistema determinado.

LA TERMODINÁMICA ES EL ESTUDIO DE LA ENERGÍA

El análisis de las transformaciones energéticas que ocurren en la materia viva se llama termodinámica.

Los investigadores llaman sistema para denotar una porción de materia bajo estudio. El resto del universo (todo aquello fuera
del sistema) es el entorno.

Los organismos son sistemas termodinámicos obligatoriamente abiertos , es decir intercambian materia y energía con el
entorno.

La termodinámica tiene dos leyes fundamentales que gobiernan las transformaciones energéticas de la materia y por lo tanto
también rigen para los seres vivos.
La Primera Ley de Termodinámica o de la Conservación de la Energía establece que la energía puede convertirse de una
forma en otra, pero no se la puede crear ni destruir. La energía total de un sistema y su ambiente, por lo tanto se mantiene
constante a pesar de todos los cambios de forma.

En todas las conversiones energéticas, cierta energía útil se convierte en calor y se disipa. De todos modos, en una reacción
química, la energía de los productos de la reacción más la energía liberada en la misma, es igual a la energía inicial de las
sustancias que reaccionan.

Fig. 3.1 - Flujo de energía y materia en un ecosistema. Las mitocondrias de los

eucariotas (¡incluso plantas!) utiliza las moléculas orgánicas producto de la
fotosíntesis como combustible para la respiración celular, pero también
consume el oxígeno liberado en la fotosíntesis. La respiración libera la
energía almacenada en las moléculas orgánicas y genera ATP, el cual se utiliza
para el trabajo celular. Los productos de desecho de la respiración, CO 2 y
H2O, son las moléculas que los cloroplastos utilizan como sustrato de la
fotosíntesis. Por lo tanto, las moléculas esenciales de la vida son recicladas,
pero la energía no. La energía ingresa al ecosistema como energía lumínica y
sale como energía calórica.

La Segunda Ley de la Termodinámica establece que todos los intercambios

y conversiones de energía, si no entra ni sale energía del sistema en estudio,
la energía potencial del estado final siempre será menor que la energía
potencial del estado inicial. Por ejemplo las piedras ruedan siempre cuesta
abajo, nunca lo hacen hacía arriba.

En termodinámica se designa como energía dependiente de un alto grado

de ordenamiento a la energía potencial, mientras que a la energía cinética
molecular se la considera como energía con un grado reducido de ordenamiento. A medida, entonces, que la energía
potencial se transforma en cinética, el desorden aumenta y utilizamos la expresión ENTROPÍA, para caracterizar el
grado de desorden de un sistema (las células NO están desordenadas, así que tienen baja entropía).

En la naturaleza, el desorden es un estado más probable que el orden y la entropía, como medida del desorden, se
convierte en una función que tiende a crecer constantemente.

Sabemos que el contenido de energía potencial de los compuestos químicos está representados por la fuerza que
mantiene unidos a los átomos y moléculas y cuando las sustancias químicas reaccionan, parte de esta energía se libera
como calor y otra parte puede ser convertida en trabajo. Esta fracción de energía disponible para el trabajo se
denomina ENERGÍA LIBRE O ENTALPÍA. En otras palabras es el monto máximo de trabajo que puede obtenerse de un
sistema.

La energía libre: un criterio para cambio espontaneo

Los organismos solamente pueden vivir a expensas de la energía libre adquirida del entorno.

La cantidad de energía libre de un sistema se simboliza con la letra G. Hay dos componentes para G: la energía total del
sistema (H) y su entropía (S). La energía libre se relaciona con estos factores de la siguiente manera:

G = H - TS
con T (temperatura, en grados Kelvin) para temperaturas absolutas. Como se ve, la temperatura aumenta el término de
la entropía en la ecuación. Esto tiene sentido si se recuerda que la temperatura mide la intensidad del movimiento de las
moléculas al azar (calor), lo que provoca desorden. Entonces, esta ecuación enuncia que no toda la energía almacenada en
un sistema (H) está disponible para el trabajo. El desorden del sistema, el factor de entropía (S), se resta a la energía
total para calcular la máxima capacidad del sistema para realizar trabajo útil.

¿Cómo el concepto de energía libre ayuda a determinar si un proceso determinado puede ocurrir espontáneamente? En la
ecuación de más arriba, la energía libre (G) es considerada como una medida de inestabilidad del sistema, o sea su
tendencia a cambiar a un estado más estable. Por lo tanto, aquellos sistemas que tienden a cambiar espontáneamente a
uno más estable son los que tienen mayor energía, baja entropía o ambos. La ecuación de G considera estos dos factores
los cuales están consolidados en el contenido de G del sistema en estudio. Ahora se puede establecer un criterio para
cambio espontáneo: en cualquier proceso espontáneo la energía libre de un sistema decrece.

Los cambios de energía libre cuando un sistema va desde un estado inicial a un estado final es representado por :

= G estado final - G estado inicial

o, también:

Finalmente, para que un proceso ocurra espontáneamente, el sistema debe ceder energía (decrece H) o perder orden (se

incrementa S), o ambos. Cuando los cambios en H o en S son grandes, tiene un valor negativo.

LAS REACCIONES METABÓLICAS SON EXERGÓNICAS O ENDERGÓNICAS

Las reacciones metabólicas pueden ser clasificadas en exergónicas (aquellas que liberan energía) o endergónicas
(aquellas que consumen energía) tomando en cuenta sus cambios de energía libre.

En una reacción exergónica hay una liberación neta de energía libre. Puesto que los reactantes pierden energía libre

(G), es negativa para una reacción exergónica. En otras palabras, las reacciones exergónicas ocurren
espontáneamente.

Las reacciones endergónicas toman G de su entorno. Esto se debe a que esta clase de reacciones almacenan más energía

libre (G) en las moléculas, por lo tanto es positivo. Tales reacciones no son espontáneas.

De lo anterior, se concluye que si un proceso químico es exergónico en una dirección, entonces el proceso inverso debe
ser endergónico.

Desequilibrio Metabólico: Clave de la vida

Las reacciones químicas del metabolismo son reversibles y podrían equilibrarse sólo en un medio aislado como un tubo de
ensayo. En los sistemas químicos en equilibrio ?G es cero y sin energía libre no hay trabajo, por lo tanto una célula que ha
alcanzado su equilibrio está muerta.

Este desequilibrio metabólico es una de las características que define a la vida y esto se mantiene gracias a que en las
vías metabólicas los productos no se acumulan , siendo sutratos de otras reacciones y por lo tanto no alcanzándose nunca
el equilibrio. Por ejemplo, durante la respiración celular, la glucosa y otros combustibles energéticos son degradados y el
dioxido de carbono es eliminado al medio interno y luego expelido al exterior con lo cual la célula no alcanza nunca su
equilibrio y continua trabajando. Este simple ejemplo nos sirve para comprender la importancia que reviste para los
organismos vivos ser sistemas abiertos.

LA MOLÉCULA DE ATP ES RESPONSABLE DE LA MAYORÍA DE LOS PROCESOS DE ACOPLAMIENTO ENERGÉTICO

EN LAS CÉLULAS

Como se recordará, una estrategia clave de la bioenergética es el acoplamiento energético, es decir el uso de un proceso
exergónico para llevar a cabo uno endergónico.

El adenosín trifosfato (ATP),”la moneda de la célula”, transfiere la energía liberada por la ruptura de las uniones
químicas en los procesos exergónicos hacia las reacciones endergónicas, es decir las reacciones que consumen energía.

La célula puede realizar tres clases principales de trabajo donde se requiere energía:

· Trabajo Mecánico: como el batido de cilias y flagelos, la contracción de las células musculares, el fluir del citoplasma
dentro de la célula o el movimiento de los cromosomas durante la división celular.

· Trabajo de Transporte: el bombeo de sustancias e iones a través de la membrana en contra de la dirección del
movimiento espontáneo.
· Trabajo Químico: El impulso de reacciones endergónicos, que no ocurrirían espontáneamente, como la síntesis de los
polímeros a partir de sus monómeros.

Fig. 3.2 - Tipos de trabajo celular que utilizan ATP

En la mayoría de los casos, la fuente inmediata de energía que potencia el trabajo celular es el ATP.

Esta molécula es también conocida como un transportador o intermediario energético.

Fig. 3.3 - Molécula de ATP. (a) Estructura del ATP. (b) Hidrólisis de la molécula de ATP

El enlace entre el segundo y el tercer fosfato es un enlace rico en energía. Para establecerlo se necesitó de un gran
aporte energético, esto es, de la energía libre obtenida del entorno por la célula.

Por otro lado, su ruptura resulta en la liberación de esta energía, la que puede ser empleada para los distintos tipos de
trabajos celulares.

Fig. 3.4 - El ciclo del ATP. La energía liberada en las reacciones catabólicas se usan para fosforilar ADP, generando ATP.
La energía almacenada en el ATP se utiliza en la mayoría de los trabajos celulares. Por lo tanto, el ATP acopla los
procesos productores de energía de la célula a los consumidores de energía.

Muchos de las reacciones del metabolismos son reacciones de oxido-reducción

Los electrones poseen distintas cantidades de energía potencial según su distancia respecto del núcleo del átomo y la
atracción del núcleo por los electrones. Al aportar energía, el electrón pasa a un nivel energético más alto, pero sin la energía
adicional, el electrón permanece en el nivel energético más bajo disponible para él.

Las reacciones químicas son transformaciones energéticas en las cuales la energía almacenada en los enlaces químicos se
transfiere a otros enlaces químicos recién formados. En estas transformaciones los electrones pasan de un nivel energético a
otro. En muchas reacciones los electrones se transfieren de un átomo o molécula a otro. Estas reacciones muy importantes en
los sistemas vivientes, se conocen como reacciones de oxidación-reducción (REDOX). La pérdida de un electrón se conoce
como oxidación y el átomo o molécula que pierde el electrón se ha oxidado. La perdida de electrones se llama oxidación porque
el oxígeno que atrae con fuerza a los electrones, es la mayoría de las veces el receptor de los mismos.

Reducción, por el contrario, es la ganancia de electrones. La oxidación y la reducción siempre ocurren simultáneamente,
porque el electrón que pierde un átomo es aceptado por otro, que se ha reducido en el proceso.

En los sistemas vivientes muchas veces los electrones son transferidos con un protón, es decir, es un átomo de hidrógeno.
En tal caso la oxidación implica una perdida de átomos de hidrógeno y la reducción la ganancia de estos.

LA ENERGÍA DE LAS MOLÉCULAS ES LIBERADA EN EL TRANSCURSO DE LAS REACCIONES DE OXIDACIÓN

Durante el transcurso de sucesivas y graduales reacciones de oxidación, la mayor parte de la energía química contenida en los
alimentos es liberada de manera secuencial. De esta manera, se logra la eficaz captación de la energía liberada en enlaces de
alta energía como los del ATP.

Como se ha dicho, toda oxidación de un átomo o de una molécula está asociada a la reducción de otro átomo u otra molécula.
Durante las reacciones de oxidación pueden perderse hidrógenos (H). Estos se pueden disociar en un protón (H +) y en un
electrón (e-). En un sentido general, toda remoción de e- de cualquier átomo o molécula constituye una reacción de oxidación.
Este e- pudo haber sido removido de un H. Luego el H+ puede permanecer en la molécula a la que conformaba o puede pasar al
medio.

Por otro lado, la reducción de un átomo o molécula puede implicar la ganancia de hidrógeno o e-.

Existen moléculas intermediarias en las reacciones de oxido-reducción: la nicotinamida adenina dinucleótido (NAD+),
la nicotinamida adenina dinucleótido fosfato (NADP+) y la flavina adenina dinucleótido (FAD).

Las siglas de las coenzimas anteriormente expuestas representan las moléculas oxidadas. Las formas reducidas se
representan: NADH + H+ ; NADPH + H+ ; FADH2 , respectivamente.

Por ejemplo, el compuesto XH2 es oxidado, NAD+ es reducido:

XH2 + NAD+ -> X+ + NADH + H+

Fig. 3.5 - Oxido-reducción de la coenzima NAD+

ENZIMAS
INTRODUCCIÓN

Todas las reacciones que se efectúan en los seres vivos son catalizadas por enzimas. Estas hacen posible que las
reacciones metabólicas se desarrollen a un ritmo razonable, compatible con la vida.

El término catalizador se emplea para referirse a cualquier sustancia que acelera el transcurso de una reacción química,
sin intervenir en ella ni como reactivo ni como producto. El catalizador no provoca la reacción solo afecta la velocidad
con que ocurre la misma. Esto es posible porque los catalizadores disminuyen la energía de activación como lo indica el
siguiente gráfico.
Fig. 3.6 - Perfil de energía de una reacción exergónica. La curva punteada indica el curso de la reacción sin enzima. La curva
continua el curso de la reacción en presencia de la enzima

Según su naturaleza los catalizadores pueden ser químicos o biológicos (Tabla 3.1)

Tabla 3.1 - Diferencias entre catalizadores biológicos y químicos

BIOLÓGICOS QUÍMICOS

Son específicos para una determinada reacción química o para Aceleran cualquier reacción inespecíficamente.
un grupo de reacciones químicas a para un sustrato o grupo de
sustratos.

Son proteínas mayoritariamente ( hay ARN (Ribozimas) con Son sustancias simples finamente divididas.
función enzimática).

Son saturables No son saturables.

Son altamente eficaces (son eficaces en bajas Son medianamente eficaces.

concentraciones).

Puede ser regulada su actividad catalítica. No pueden ser regulados.

Son termolábiles y su actividad puede variar también de No son termolábiles ni se alteran con cambios de pH.
acuerdo al pH del medio.

Una enzima puede estar formada por una sola cadena de polipéptido, consistir en subunidades múltiples o requerir de
componentes no proteicos. En general las reacciones catalizadas por enzimas se llevan a cabo a presión, temperatura y pH
moderado.

CLASIFICACIÓN: Desde el punto de vista estructural podemos clasificar a las enzimas en simples y conjugadas (de la misma
forma que hemos clasificado a las proteínas).

Cuadro 3.1 - Clasificación de las enzimas según su estructura

l Enzimas simples: son aquellas que constan solo de una estructura proteica. Pueden estar formadas por una o varias
cadenas polipeptídicas.

Enzimas conjugadas: también llamadas holoenzimas poseen en su estructura una parte no proteica
denominada cofactor y una parte proteica que se denomina apoenzima. Para que estas enzimas actúen como
catalizadores es necesario que la apoenzima se una al cofactor. El término cofactor puede aplicarse tanto a un Ión como
a una molécula orgánica de naturaleza variable (grupo prostético y coenzimas). Las coenzimas funcionan como
portadores de grupos químicos pequeños como ser acetilo, metilo o bien protones y electrones. Las coenzimas se unen
no covalentemente a la apoenzima permitiendo que la holoenzima así formada lleve a cabo reacciones que la apoenzima
sola no puede efectuar. Por ejemplo, ninguna de las cadenas laterales de los aminoácidos es capaz de transportar
electrones pero cuando se agrega por ejemplo la coenzima FAD +, la proteína adquiere esta función. Las moléculas
orgánicas que están fuertemente unidas a la apoenzima se denominan grupos prostéticos. Muchas coenzimas derivan de
vitaminas solubles en agua como ser las del grupo B (Tabla 3.2).

Tabla 3.2 - Vitaminas hidrosolubles , sus coenzimas derivadas y sus funciones

Vitamina Coenzima derivada Abreviatura Función

Pirofosfato de tiamina TPP Descarboxilación y transferencia de grupos

Tiamina (B1)
acilo.

Flavina mononucleótido FMN Portadores de hidrógeno y electrones en

Riboflavina (B2)
Flavina y adenina dinucleótido FAD oxido-reducciones

Nicotinamida y adenina NAD+

dinucleótido Portadores de hidrógeno y electrones en
Ácido Nicotínico
Nicotinamida y adenina NADP+ oxido-reducciones
dinucleótido fosfato

Piridoxina, piridoxal y Transaminación y decarboxilación

piridoxamina (B6)

Ácido Pantoténico Coenzima A CoASH Transferencia de acilos

Enlazada covalentemente a
Biotina Carboxilación
carboxilasas

Ácido Fólico Tetrahidrofolato TH4 Transferencia de un carbono

Cobalamina (B12) Coenzima de cobamida Reordenamientos, transferencia de metilos

Otra forma de clasificarlas es de acuerdo con las reacciones que catalizan, como se indica en la Tabla 3.3, a
continuación.

Tabla 3.3 - Clasificación de las Enzimas (según International Union of Biochemestry)

CLASE TIPO DE REACCIÓN CATALIZADA

Síntesis de componentes a tráves de la ruptura oxidativa o reductora de un enlace de alta

energía.
1 - Oxidorreductasas
p. ej. alcohol deshidrogenasa

alcohol + NAD+ -> colina + glutamato

Transferencia de un grupo funcional de una molécula a otra.

2 - Transferasas p. ej. aspartato aminotransferasa

L-aspartato + 2-oxoglutarato -> 2- oxalacetato + 1-L-glutamato

 Ruptura de enlaces por hidrólisis
3 - Hidrolasas
p. ej. Acetilcolina + H2O -> 2 oxalacetato + L- glutamato

Ruptura de enlaces por eliminación

4 - Liasas p. ej. Piruvato descarboxilasa

2 oxoácido -> aldehído + CO2

Modificación de la forma o del ordenamiento espacial de las moléculas .

5 - Isomerasas p. ej. Fosfoglicerato mutasa

2-fosfoglicerato -> 3- fosfoglicerato

Unión de moléculas usando la energía que se deriva de la hidrólisis de los enlaces de alta energía

6 - Ligasas p. ej. Acetil- CoA ligasa

ATP + acetato+ CoA -> AMP + acetato + CoA + pirofosfato + acetil-CoA

SITIO ACTIVO

Es el sitio en el cual el o los sustratos se unen a la enzima. En general estos sitios se encuentran en el interior de la
estructura proteica, formando hendiduras o bolsas, de manera que el sustrato pueda experimentar un máximo de
interacciones con la enzima. De toda la estructura de la enzima, que en realidad son moléculas enormes, solo una parte
muy pequeña interactúa con el sustrato en general solo participar cinco o seis aminoácidos.

La especificidad de una enzima hacia su sustrato es una de las características más notables, normalmente se propone el
modelo de llave y cerradura para explicar la forma complementaria en que interactúan la enzima y el sustrato, sin
embargo esto nos hace pensar en una estructura rígida. Actualmente se sabe que las enzimas son moléculas flexibles,
por lo tanto el modelo más correcto sería el llamado ajuste o encaje inducido, en donde el sitio activo se modifica para
hacerse complementario al sustrato. Una manera de graficar este modelo sería la forma en que un guante se ajusta a la
mano, es decir el guante tiene una forma particular, que al momento de “interactuar” con la mano se modifica,
haciéndose complementaria con la misma.

MECANISMO DE ACCIÓN

Como hemos visto las propiedades químicas de una enzima dependen casi enteramente de las cadenas laterales. La
actividad catalítica de una enzima resulta de la unión de la molécula de sustrato al sitio activo de la enzima por medio de
interacciones generalmente débiles. Al parecer, las más significativas son las interacciones puente hidrógeno. También
debemos recordar que esta unión es sumamente específica.

Fig. 3.7 - Ciclo catalítico de una enzima

Una vez que la enzima reconoce al sustrato y se ajusta a él, se forma un complejo que recibe el nombre de complejo
enzima-sustrato. La ruptura y la formación de los enlaces se llevan a cabo por las interacciones entre las cadenas
laterales de la enzima y los enlaces dentro del sustrato. Una vez que se han formado los productos obtenemos un
complejo que recibe el nombre de complejo enzima–producto, finalmente los productos se separarán de la enzima
recuperándose esta para reaccionar con otra molécula de sustrato, es decir que en el transcurso de la reacción la
enzima no se modifica.

FACTORES QUE MODIFICAN LA VELOCIDAD DE LAS REACCIONES QUÍMICAS

Una determinada reacción química ocurre solo en condiciones termodinámicas favorables, esto es cuando la energía de
los reactivos o sustratos es mayor que la energía de los productos. La velocidad con que dicha reacción ocurrirá
depende de distintos factores como ser la cantidad de reactivo o sustrato que interviene, la temperatura, el pH, etc.

Como hemos mencionado, las enzimas aumentan la velocidad de las reacciones químicas, sin embargo no las provocan, por
lo tanto la concentración de enzimas es otro de los factores que modifican la velocidad de la reacción así como también
aquellas sustancias que pueden inhibir la acción de la enzima (inhibidores).

1. Concentración de sustrato

En general a medida que aumenta la cantidad de reactivos o sustratos la velocidad también aumenta. En el caso de las
reacciones químicas conviene aclarar que la velocidad se mide como cantidad de producto formado por unidad de tiempo,
las unidades serán: gr/seg, moles/seg, moles/min, etc. De este modo cuanto más reactivo tenemos, más producto se
formará.

En el caso de las reacciones catalizadas por enzimas, el efecto de la cantidad de sustrato es el siguiente:

A medida que aumenta la cantidad de sustrato la velocidad aumenta en forma lineal (zona proporcional), luego si bien la
velocidad continúa aumentando ya no lo hace en forma lineal (zona mixta) hasta que finalmente la reacción alcanza una
velocidad máxima que es constante, se vuelve independiente de la cantidad de sustrato (zona de saturación). Esto
ocurre debido a que los sitios activos de las enzimas se encuentran todos interactuando con las moléculas de sustrato,
por lo tanto hasta que no finalice la reacción la enzima no puede unirse a otro sustrato.

Fig. 3.8 - Efecto de la concentración de sustrato sobre la cinética enzimática

2. Concentración de enzimas

La concentración de enzimas es otro de los factores que modifica la velocidad, cuanto mayor cantidad de enzima este
presente, mayor será la velocidad que se alcanzará, debido a que necesito más cantidad de sustrato para alcanzar la
saturación.

3. Temperatura

En general las reacciones ocurren más rápidamente cuando se le otorga calor, ya que el aumento de la temperatura hace
que aumente la energía cinética de las moléculas y de esta manera reaccionen con facilidad.

Cuando las reacciones están catalizadas por enzimas se produce primero un efecto complementario, es decir, la
velocidad va aumentando conforme al aumento de temperatura, sin embargo la velocidad llega a un punto óptimo a partir
del cual la velocidad comienza a decaer. No nos olvidemos que las enzimas son proteínas, por lo tanto son susceptibles a
la desnaturalización, es decir que la velocidad decae porque las enzimas pierden su actividad biológica como consecuencia
de la desnaturalización. Algunas enzimas son termoestables, es decir su actividad biológica permanece aun a
temperaturas mayores a 90 °C.

4. pH

El gráfico de actividad en función del pH es similar al de la temperatura, es decir a pH extremos las proteínas se
desnaturalizan, por lo tanto la actividad biológica decae. Algunas enzimas no varían su actividad con el pH sino que esta
se mantiene constante en un amplio rango. Otra tendrán el pH óptimo ácido o básico teniendo en cuenta el medio en
donde actúan.

Fig. 3.9 - Efecto de la temperatura (a) y el pH (b) sobre la actividad enzimática

5. Inhibidores

Aunque hay muchos ejemplos de inhibidores, los mecanismos de inhibición pueden ser de dos clases: reversibles e
irreversibles, también hay mecanismos intermedios.

Fig. 3.10 - Perfil de una reacción en presencia de inhibidor COMPETITIVO y sin inhibidor

5.1. Inhibidores irreversibles: estos inhibidores se enlazan con fuerza a la enzima, generalmente se unen
covalentemente a algún aminoácido del sitio activo. Existen algunos inhibidores que se conocen como sustrato suicida,
que se enlazan al centro activo y químicamente se transforma en una especie reactiva que modifica en forma irreversible
al aminoácido del sitio activo.

5.2. Inhibidores reversibles: este tipo de inhibidores se disocian fácilmente de las enzimas, dentro de este grupo
encontramos los inhibidores competitivos y los no competitivos.

5.2.a. Los inhibidores competitivos compiten con el sustrato por el sitio activo de la enzima, y si aumentamos la
cantidad de sustrato, el efecto inhibidor se revierte alcanzándose la velocidad máxima.
 Fig. 3.11 - Perfil de una reacción en presencia de inhibidor NO COMPETITIVO y sin inhibidor

5.2.b. Los inhibidores no competitivos se enlazan a un sitio distinto del sitio activo, de manera que el inhibidor se
puede unir a la enzima libre o bien al complejo enzima sustrato, pero en ninguno de los casos obtendremos productos. El
efecto de estos inhibidores no se revierte por el agregado de mayor cantidad de sustrato, de manera que se llega a una
velocidad máxima menor que si no tuviera el inhibidor.

No es raro observar algunos inhibidores a los cuales no se les puede comprobar el mecanismo exacto de inhibición,
siendo en algunos casos un tipo de inhibición mixta.

REGULACIÓN DE LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA

Dentro de las células se llevan a cabo infinidad de procesos metabólicos, todos ellos relacionados entre sí, de manera
que deben estar controlados en forma precisa, para que a cada instante la célula disponga de los metabolitos necesarios
para su funcionamiento. Para lograr esta coordinación metabólica es preciso disponer de mecanismos de control o
regulación adecuados.

Existen distinto tipos de mecanismos regulatorios de la actividad enzimática:

1. Inhibición por producto final

2. Regulación alostérica

3. Regulación por modificación covalente

4. Regulación genética

1. Inhibición por producto final: Con frecuencia las enzimas son inhibidas en forma competitiva por los productos de
las reacciones que catalizan. Esto es predecible, ya que la estructura del producto es muy similar a la del sustrato.
Esta inhibición ocurre en las últimas etapas de la reacción cuando hay una gran cantidad de producto y baja
concentración de reactivo o sustrato. En la mayoría de los casos, las reacciones metabólicas no ocurren en un solo paso,
sino que son varias y encadenadas formando parte de una ruta metabólica, en donde el producto de una reacción es el
sustrato de la siguiente. Generalmente en estos casos el producto final, es decir el producto de la última reacción de esa
vía, actúa inhibiendo a las enzimas que intervienen en los primeros pasos.

Fig. 3. 12 - Retroalimentación negativa (feedback negativo) en una ruta metabólica. Cuando el producto final Z se
acumula, inhibe alguno de los primeros pasos de la ruta.
Fig. 3.13 - Regulación alostérica. (a) La mayoría de las enzimas alostéricas se ensamblan a partir de 2 o más subunidades.
Cada una posee un sitio activo. La enzima oscila entre dos estados: activo e inactivo. Alejado del sitio activo esta el sitio
alostérico, que actúa como un receptor específico regulando la actividad enzimatica. (b) Se observa el efecto opuesto de
un activador y un inhibidor sobre las cuatro subunidades de la enzima. (c) Efecto de cooperación: un sustrato unido a uno
sólo de los sitios activos (encaje inducido), puede activar toda la enzima.

2. Regulación alostérica: Este tipo de regulación ocurre solo en las enzimas alostéricas, que son enzimas que por lo
general tienen estructura cuaternaria y además del sitio activo poseen otro capaz de reconocer efectores, que se
denomina sitio alostérico. Los efectores son sustancias que pueden modular la actividad de las enzimas, algunos
efectores aumentan la actividad enzimática, de modo que se conocen como efectores positivos y otros tienen efecto
inhibitorio que se denominan efectores negativos.

Las enzimas alostéricas presentan curvas de saturación del sustrato distintas a lo que vimos anteriormente, dan una
curva sigmoidea en lugar de una hipérbola (Fig. 3.14).

Fig. 3.14 - Curva de saturación de una enzima alostérica.

Como otro ejemplo de este tipo de regulación, podemos mencionar la enzima fosfofructoquinasa que cataliza la siguiente
reacción:

FRUCTOSA 6 FOSFATO + ATP -> ADP + FRUCTOSA 1,6 DI-FOSFATO

El ATP es un modulador negativo, es decir que disminuye la actividad de la enzima , mientras que el AMP y el P son
moduladores positivos

3. Regulación por modificación covalente: en este mecanismo algún aminoácido de la enzima se une covalentemente a
algún grupo químico y de esta forma se activa o se inactiva la enzima. El grupo que más frecuentemente interviene en
este tipo de regulación es el grupo fosfato (P) y los aminoácidos que normalmente intervienen son la serina y la treonina.

Algunas enzimas se activan al unirse al grupo fosfato y se inactivan si lo pierden

Enzima A (inactiva) + P Enzima A + P (activa)

Otras se activan al perder el grupo P y se inactivan al ganarlo

 Enzima B ~ P (inactiva) Enzima B (activa) + P

El ejemplo más característico lo constituyen las enzimas que intervienen en la síntesis y degradación de glucógeno.

Proteína quinasa ~P (inactiva) Proteína quinasa (activa) + P

Fosforilquinasa (inactiva) Fosforilasa quinasa ~P (activa)

Fosforilasa (inactiva) Fosforilasa ~ P (activa)

Glucógeno Glucosa

4. Regulación genética: Involucra el control a nivel del ADN. El ADN es la molécula que almacena la información para
la síntesis de proteínas de acuerdo al siguiente flujo de información:

Fig. 3.15 - Flujo de la información genética

De manera que si podemos impedir el pasaje de ADN a ARN (transcripción) impedimos la síntesis de la enzima y por ende
no se catalizará la reacción en la que dicha enzima interviene.

EL ARN COMO CATALIZADOR BIOLÓGICO

Hasta hace poco tiempo se suponía que los catalizadores biológicos siempre eran proteínas. Recientemente se demostró
que el ARN puede actuar como catalizador en el corte y empalme de intrones (proceso que veremos en otro capítulo).
Además se ha demostrado que la especie de ARN llamado ARN L19 posee todas las propiedades características de las
enzimas, tales como la saturación, inhibición competitiva, especificidad de sustrato, etc., con la excepción de que no es
una proteína. Estos ARN catalíticos reciben el nombre de ribozimas.

ACTIVIDADES DE AUTOEVALUACIÓN

1. ¿Qué es una enzima? ¿Cuál es su importancia biológica?

2. ¿Qué tipos de catalizadores conoce?

3. ¿Qué es una ribozima?

4. Mencione y explique brevemente los mecanismos de regulación enzimática.

PREGUNTAS DE OPCIÓN MÚLTIPLE

1. La temperatura:

a. aumenta el efecto catalítico de las enzimas siempre b. disminuye el efecto catalítico de las enzimas
siempre

c. aumenta el efecto hasta alcanzar un máximo a temperatura ambiente

d. disminuye la acción catalítica a partir de los 80° C

e. ninguna es correcta.

2. Una enzima alostérica:

a. se puede regular b. no se puede regular

c. aumenta su efecto catalítico al unirse a un efector positivo d. a y c son correctas

e. b y c son correctas

3. Un inhibidor competitivo:

a. siempre se une al sitio alostérico b. se une al sitio activo

c. es parecido al sustrato d. a y c son correctas

e. b y c son correctas.

4. Un cofactor es:

a. una molécula orgánica que aumenta el efecto catalítico

b. una molécula orgánica que disminuye el efecto catalítico

c. una molécula inorgánica que se une covalentemente a la enzima

d. una molécula necesaria para que la apoenzima actúe

e. ninguna es correcta

5. Las enzimas son:

a. específicas b. saturables c. termolábiles

d. regulables e. todas son correctas

6. Un grupo prostético:

a. es una secuencia de aminoácidos que forman parte del sitio activo.

b. forma parte de la estructura de ciertas enzimas, pudiendo disociarse de ellas fácilmente.

c. es un grupo químico no protéico unido covalentemente a ciertas enzimas y proteínas.

d. es la parte protéica de una holoenzima.

7. La formación del complejo enzima-sustrato:

a. implica necesariamente la unión covalente del sustrato al sitio activo de la enzima.

b. se lleva a cabo mediante interacciones débiles entre el sustrato y el sitio de unión de la enzima.

c. es un proceso irreversible, que conduce indefectiblemente a la formación del producto.

d. es bloqueada por los inhibidores competitivos, aún frente a altas concentraciones del sustrato.

8. El FAD y el FMN son:

a. grupos prostéticos característicos de los citrocromos

b. cofactores enzimáticos metálicos

c. coenzimas derivadas de la riboflavina

d. holoenzimas

9. La hidrólisis del ATP para dar ADP + Pi es :

a. una reacción no espontánea b. una reacción endergónica

c. posible acoplarla a las reacciones exergónicas d. una reacción exergónica

10. ¿Cuál de las siguientes afirmaciones no es cierta acerca de las conversiones energéticas?

a. Algo de energía útil siempre se disipa hacia el entorno como calor.

b. La energía total de un sistema y su entorno permanece constante.

c. Las reacciones exergónicas se llevan a cabo espontáneamente.

d. El energía potencial de un sistema siempre permanece constante después de una conversión energética.

e. Las reacciones exergónicas usualmente resulta en un estado final que tiene menos energía potencial que el estado
inicial.

11. Las reacciones que requieren consumo de energía se conocen como:

SEMANA 3 PRACITCA LISOSOMAS
Los lisosomas son orgánulos formados por una vesícula membranosa procedente del aparato de Golgi. Fueron descubiertos
por Christian Duve por lo que este investigador recibió el Premio Nobel de Medicina en 1974. En el interior de los lisosomas
se encuentran enzimas hidrolíticas procedentes del retículo endoplasmático mantenidas en el interior de estas vesículas a un
pH ácido entre 4.6 y 5. Esta es la condición principal para que las enzimas se activen dentro de los lisosomas. La mayoría de
las enzimas entran en los lisosomas vía receptor manosa 6-fosfato.

La función principal la digestión celular, ya sea de cuerpos propios dañados (autofagia), de invasores exógenos (heterofagia),
de nutrientes o desechos e incluso juegan un papel importante en la propia célula en el momento de la muerte celular
programada (apoptosis).

Dentro de los errores innatos del metabolismo se encuentran las enfermedades de almacenamiento lisosomales, las cuales
se caracterizan por un déficit enzimático específico, la excreción de metabolitos por la orina y la acumulación de los
compuestos no degradados en diferentes órganos y tejidos que ocasionan la disfunción de éstos.

Los lisosomas son los organelos digestivos de una célula

animal.
Un lisosoma típico contiene cerca de 50 enzimas hidrolíticas
diferentes que se producen en el retículo endoplásmico rugoso y
se dirigen a estos organelos.
El pH óptimo de estas enzimas se sitúa por debajo del pH del
compartimiento lisosómico, que se aproxima a 4.6.
La elevada concentración interna de protones se mantiene
mediante una bomba de protones (una ATP-asa de H+) presente
en la membrana que limita al organelo.
Las membranas lisosómicas contienen diversas proteínas
integrales muy glucosiladas cuyas cadenas de carbohidratos se
cree que forman un recubrimiento protector para la membrana
contra el ataque de las enzimas que encierra.
Esquema que muestra las vías que
sigue una enzima lisosómica
desde el sitio de síntesis en el ER
hasta su entrega al lisosoma.
Los residuos de manosa de la
enzima lisosómica se fosforilan en
las
cisternas de Golgi y luego se
incorporan en forma selectiva en la
vesícula cubierta con clatrina en la
TGN (red TRANS Golgi).
Desarrollo del cuestionario:
1. Explique por qué el pH en el interior de los lisosomas es ácido.
 Descomposición de sustancias: Los lisosomas son orgánulos que contienen una variedad de enzimas hidrolíticas,
como proteasas, lipasas y nucleasas. Estas enzimas son responsables de descomponer macromoléculas, como
proteínas, lípidos y ácidos nucleicos, en sus componentes más pequeños. Para que estas enzimas funcionen de
manera eficaz, requieren un entorno ácido, ya que su actividad óptima se encuentra en un rango de pH ácido.
  Protección de la célula: El entorno ácido en los lisosomas ayuda a proteger a la célula de la acción destructiva de las
enzimas hidrolíticas. Estas enzimas pueden ser muy peligrosas si se liberan al citoplasma, donde podrían dañar
componentes celulares esenciales. Manteniendo un pH ácido dentro de los lisosomas, se asegura que las enzimas
sean activas solo en su compartimento específico y no en otros lugares de la célula.
 Reciclaje de materiales celulares: Los lisosomas desempeñan un papel fundamental en la degradación y reciclaje de
componentes celulares desgastados o dañados, un proceso conocido como autofagia. El pH ácido es esencial para la
eficiencia de la autofagia, ya que permite la actividad óptima de las enzimas que digieren los materiales reciclados.
 Eliminación de patógenos: Los lisosomas también pueden fusionarse con endosomas que contienen partículas
extrañas, como bacterias o virus, y ayudar en su degradación. El pH ácido en los lisosomas contribuye a la actividad
antimicrobiana al crear un ambiente hostil para estos patógenos.

2- Explique el mecanismo del procesamiento de las enzimas lisosomales

El proceso de procesamiento de las enzimas lisosomales se puede dividir en varios pasos:

-Síntesis en el retículo endoplasmático: Las enzimas lisosomales se sintetizan como precursores inactivos en los
ribosomas unidos al retículo endoplasmático (RER), una estructura celular especializada. Estas preenzimas contienen
un péptido señal que las dirige al RER para su síntesis.
-Modificación en el aparato de Golgi: Las preenzimas se transportan desde el RER hasta el aparato de Golgi, otro
sistema de orgánulos celulares. En el aparato de Golgi, las preenzimas experimentan varias modificaciones post-
traduccionales, que incluyen la glicosilación, la fosforilación y la adición de azúcares. Estas modificaciones son
esenciales para la actividad de las enzimas.
-Activación: Las preenzimas lisosomales son convertidas en sus formas activas en el aparato de Golgi o en el
lisosoma. Esta activación implica la eliminación de ciertas secuencias o fragmentos que inhiben su actividad
enzimática. Las proteasas específicas realizan estas escisiones proteolíticas.
-Etiquetado con manosa-6-fosfato (M6P): Una vez que las enzimas lisosomales están activadas, se les agrega una
etiqueta llamada manosa-6-fosfato (M6P) en el aparato de Golgi. El M6P sirve como una señal de tráfico que marca a
las enzimas para su transporte a los lisosomas.
-Transporte a los lisosomas: Las enzimas lisosomales etiquetadas con M6P se transportan desde el aparato de Golgi
hacia los lisosomas a través de vesículas de transporte. Estas vesículas se fusionan con la membrana del lisosoma y
liberan su contenido en el lumen del lisosoma.
-Función en los lisosomas: Una vez en el lisosoma, las enzimas lisosomales están en un ambiente ácido y rico en
enzimas. Este entorno ácido es esencial para su actividad enzimática óptima. Las enzimas lisosomales descomponen
y digieren macromoléculas, como proteínas, lípidos, carbohidratos y ácidos nucleicos, en productos más pequeños
que pueden ser reciclados o eliminados por la célula.

En resumen, el procesamiento de las enzimas lisosomales es un proceso crucial para garantizar que estas enzimas sean
activas y lleguen a los lisosomas para llevar a cabo su función de degradación intracelular. Este proceso es fundamental para
el reciclaje de materiales celulares y el mantenimiento de la homeostasis celular.

3. Explique el mecanismo de la autofagia y su importancia.

La autofagia es un proceso celular altamente regulado y conservado en el cual las células degradan y reciclan componentes
celulares propios, como proteínas, orgánulos y otros materiales, para mantener la homeostasis y la supervivencia celular. El
término "autofagia" proviene del griego y significa "comerse a uno mismo". Este proceso es esencial para diversas funciones
celulares y su importancia se refleja en su capacidad para mantener la salud y la funcionalidad de las células.

El mecanismo de la autofagia se puede dividir en varios pasos:

 Inducción: La autofagia se inicia en respuesta a señales celulares que indican la necesidad de degradar y reciclar
componentes celulares. Estas señales pueden incluir el hambre, el estrés celular, la acumulación de componentes
dañados o la falta de nutrientes. La proteína clave que regula la autofagia es la mTOR (diana de rapamicina en
mamíferos).
 Formación del fagosoma autofágico: Una vez que se inicia la autofagia, se forman membranas especiales llamadas
"fagosomas autofágicos". Estos fagosomas rodean las estructuras celulares o los materiales a ser degradados y los
aíslan del resto de la célula.
 Captura selectiva o no selectiva: La autofagia puede ser selectiva o no selectiva, dependiendo de si se dirige
específicamente a componentes celulares específicos o si engloba una porción al azar del citoplasma. La autofagia
 selectiva implica la unión de etiquetas específicas, como proteínas dañadas o orgánulos defectuosos, a las
membranas de los fagosomas para su eliminación selectiva.
 Fusión con lisosomas: Los fagosomas autofágicos se fusionan con los lisosomas, orgánulos que contienen enzimas
digestivas ácidas. Esta fusión forma una estructura llamada autofagolisosoma. La acidificación del interior del
autofagolisosoma es esencial para la actividad óptima de las enzimas lisosomales.
 Degradación y reciclaje: Una vez que los componentes celulares llegan al interior del autofagolisosoma, son
sometidos a la acción de las enzimas lisosomales, que los descomponen en productos más pequeños. Estos
productos se liberan nuevamente en el citoplasma y pueden ser utilizados para generar energía o reconstruir nuevas
estructuras celulares.

La autofagia es importante por varias razones:

 Mantenimiento de la homeostasis celular: La autofagia permite eliminar componentes celulares dañados o no

deseados, lo que ayuda a mantener la salud y el funcionamiento adecuado de la célula.
 Adaptación a condiciones de estrés: La autofagia se activa en condiciones de hambre o estrés celular para
proporcionar nutrientes y energía necesarios para la supervivencia celular.
 Eliminación de patógenos: La autofagia puede dirigirse a patógenos intracelulares, como bacterias y virus, para su
eliminación.
 Desarrollo y diferenciación celular: La autofagia también juega un papel en el desarrollo embrionario y la
diferenciación celular, ayudando a dar forma a los tejidos y los órganos.

4. Explique las causas de las enfermedades por depósito lisosomal mencionando ejemplos.

Las enfermedades por depósito lisosomal, también conocidas como enfermedades de almacenamiento lisosomal (EAL), son
un grupo de trastornos genéticos raros que se caracterizan por la acumulación anormal de sustancias no degradadas dentro
de los lisosomas, orgánulos celulares encargados de la digestión intracelular. Estas acumulaciones de material no digerido
interfieren con el funcionamiento normal de las células y pueden provocar una amplia variedad de síntomas y problemas de
salud. Las causas subyacentes de las EAL se relacionan con mutaciones genéticas que afectan a las enzimas lisosomales o a
las proteínas involucradas en el tráfico de lisosomas. A continuación, se describen las causas de las EAL con ejemplos de
enfermedades específicas:

A. Deficiencia enzimática: La causa más común de las EAL es la deficiencia de una enzima lisosomal específica, lo que
impide que dicha enzima degrade adecuadamente su sustrato. Como resultado, los sustratos se acumulan en los
lisosomas. Ejemplos de EAL causadas por deficiencias enzimáticas incluyen:
 Enfermedad de Gaucher: Causada por la deficiencia de la enzima glucocerebrosidasa, que conduce a la
acumulación de glucocerebrósido en los lisosomas. Se caracteriza por problemas en los huesos, el bazo y el
sistema nervioso.
 Enfermedad de Pompe: Provocada por la deficiencia de la enzima alfa-glucosidasa ácida, lo que resulta en la
acumulación de glucógeno en los lisosomas. Puede afectar músculos y órganos, causando debilidad muscular
y problemas cardíacos.
B. Trastornos del tráfico de lisosomas: Algunas EAL se deben a mutaciones que afectan el tráfico normal de lisosomas
dentro de la célula. Esto puede resultar en la acumulación de lisosomas en ubicaciones inapropiadas o la
interferencia con otras funciones celulares. Un ejemplo es la:
 Enfermedad de Niemann-Pick tipo C: Causada por mutaciones en los genes NPC1 o NPC2, que conducen a la
acumulación de colesterol y glicoesfingolípidos en los lisosomas. Esta enfermedad afecta principalmente al
sistema nervioso y puede provocar retraso en el desarrollo y problemas neurológicos.
C. Deficiencias de proteínas cofactoras: Algunas EAL son el resultado de mutaciones que afectan a las proteínas
cofactoras necesarias para la función de las enzimas lisosomales. Un ejemplo es la:
 Mucopolisacaridosis tipo I (Síndrome de Hurler): Causada por la deficiencia de la enzima alfa-L-iduronidasa
y su proteína cofactora, lo que lleva a la acumulación de mucopolisacáridos en los lisosomas. Esta
enfermedad afecta varios sistemas del cuerpo y puede causar deformidades óseas y discapacidad intelectual.
D. Errores en la degradación de lípidos: Algunas EAL involucran errores en la degradación de lípidos específicos, lo que
resulta en la acumulación de estos lípidos en los lisosomas. Ejemplo:
 Enfermedad de Tay-Sachs: Causada por la deficiencia de la enzima hexosaminidasa A, que lleva a la
acumulación de gangliósidos en el sistema nervioso central. Esto provoca discapacidad intelectual y
problemas neurológicos graves.
Estas son solo algunas de las causas de las enfermedades por depósito lisosomal, y existen muchas otras EAL diferentes, cada
una causada por mutaciones en genes específicos relacionados con el funcionamiento de los lisosomas y la degradación de
sustancias intracelulares. Estas enfermedades suelen tener un carácter hereditario y pueden tener manifestaciones clínicas
variadas, lo que hace que su diagnóstico y tratamiento sean un desafío médico.

SEMANA 4 PRACTICA TRÁFICO VESICULAR INTRACELULAR

El transporte intracelular de proteínas es una actividad esencial para las células eucariotas. La vía secretora ejecuta el
transporte de proteínas hacia el exterior celular y participa en el transporte de proteínas y lípidos entre los diferentes
compartimentos de membrana que integran la vía. La coordinación de las distintas etapas de transporte entre los
compartimentos intracelulares es necesaria para permitir el flujo de membranas y mantener el tamaño de las organelas y la
homeostasis celular.

La endocitosis es el proceso que permite incorporar dentro de las células diversas moléculas a través de las vesículas de
membranas. Por el contrario, la exocitosis es el movimiento de los materiales que se encuentran dentro de las vesículas de
membrana hacia afuera. Es decir, se libera el contenido de las vesículas de membrana, esta acción es de suma importancia ya
que cumple con diversas funciones.

ENDOCITOSIS: En la vía endocítica, segmentos de la membrana plasmática se invaginan para formar vesículas citoplasmáticas
que se transportan al interior de la célula. -Se consideran dos
procesos básicos, la endocitosis y la fagocitosis, que ocurren por mecanismos distintos.
-La endocitosis es un proceso por el cual la célula interioriza los receptores de la superficie celular y los ligandos
extracelulares unidos a ellos. -La
fagocitosis describe la captación de partículas.

En términos amplios, la endocitosis puede dividirse en dos categorías:

ENDOCITOSIS POR VOLUMEN (también conocida como pinocitosis): es la captación inespecífica de líquidos extracelulares.
Cualquier molécula, grande o pequeña, que esté presente en el líquido abarcado también entra a la célula.
ENDOCITOSIS MEDIADA POR RECEPTOR: se refiere a la captación de macromoléculas extracelulares específicas (ligandos)
después de su unión con receptores en la superficie externa de la membrana plasmática.

LA PINOCITOSIS es un proceso de endocitosis no selectivo en el cual la célula ingiere pequeñas partículas disueltas en el
medio extracelular, como líquidos y moléculas solubles. A diferencia de la endocitosis mediada por receptor, en la cual se
requiere la interacción con receptores específicos, la pinocitosis ocurre de manera continua y no requiere una unión
específica de las moléculas a la membrana celular.

El proceso de pinocitosis comienza con la formación de invaginaciones en la membrana celular, formando pequeñas
vesículas llamadas vesículas pinocíticas. Estas vesículas contienen el líquido y las moléculas disueltas que fueron
incorporadas. A medida que las vesículas pinocíticas se forman, se desprenden de la membrana celular y se mueven hacia el
interior de la célula.

Una vez en el interior de la célula, las vesículas pinocíticas se fusionan con endosomas tempranos y luego con endosomas
tardíos. Estos endosomas están involucrados en el procesamiento y clasificación de los materiales endocitados. Dependiendo
del contenido de las vesículas pinocíticas, los endosomas pueden dirigir las moléculas hacia la degradación en los lisosomas o
hacia rutas de reciclaje intracelular.

La pinocitosis desempeña varios roles importantes en la célula y en el organismo en general. Permite la captación de
nutrientes, como azúcares y aminoácidos, a través del líquido extracelular. Además, puede participar en la regulación del
equilibrio de líquidos y en la eliminación de productos de desecho.

Es importante destacar que la pinocitosis difiere de la fagocitosis, otro tipo de endocitosis, en la cual la célula ingiere
partículas sólidas más grandes, como bacterias y restos celulares. Mientras que la fagocitosis es realizada principalmente por
células especializadas del sistema inmunológico, la pinocitosis es un proceso más generalizado que ocurre en diferentes tipos
celulares.
ENDOCITOSIS MEDIADA POR RECEPTOR Y LA FUNCIÓN DE LAS CONCAVIDADES CUBIERTAS
La endocitosis mediada por receptor proporciona un medio para la captación selectiva y eficiente de macromoléculas que
pueden estar presentes en concentraciones relativamente bajas en el líquido extracelular.

Las células tienen receptores para la captación de muchos tipos diferentes de ligandos, incluidas hormonas, factores de
crecimiento, enzimas y proteínas sanguíneas que transportan ciertos nutrientes.

Las sustancias que ingresan a la célula mediante la endocitosis mediada por receptor se unen con los receptores que se
reúnen en dominios especializados de la membrana plasmática, conocidos como concavidades cubiertas. Los receptores se
concentran en dichas concavidades con un nivel 10 a 20 veces mayor que en el resto de la membrana plasmática.

ENDOCITOSIS DEL COLESTEROL MEDIADA POR RECEPTOR

Es un proceso mediante el cual las células toman el colesterol circulante en la sangre y lo internalizan para su uso en
diferentes funciones celulares. El receptor principal implicado en este proceso se llama receptor de lipoproteínas de baja
densidad (LDLR, por sus siglas en inglés).

El colesterol es una molécula lipídica esencial para la función celular, pero su exceso puede ser perjudicial. El LDLR es una
proteína de membrana presente en la superficie de muchas células en diferentes tejidos, como el hígado, las células
intestinales y las células esteroidogénicas en las glándulas suprarrenales y los ovarios.

El proceso de endocitosis del colesterol mediada por receptor comienza con la unión del colesterol transportado en las
lipoproteínas de baja densidad (LDL) a los receptores LDLR en la superficie celular. Esta interacción promueve la formación de
una vesícula llamada endosoma, que contiene el colesterol unido a las lipoproteínas.

El endosoma se internaliza en el interior de la célula a través de la invaginación de la membrana celular, formando una
vesícula recubierta llamada endosoma recubierto de clatrina. Una vez en el interior de la célula, el endosoma se fusiona con
un compartimento llamado lisosoma, que contiene enzimas que degradan las lipoproteínas y liberan el colesterol.

El colesterol liberado en el lisosoma puede ser utilizado por la célula para diferentes procesos biológicos, como la síntesis de
hormonas esteroides, la producción de membranas celulares y la regulación del metabolismo lipídico. Además, las células
también tienen mecanismos para regular la expresión y reciclaje de los receptores LDLR, controlando así la cantidad de
colesterol que se toma del torrente sanguíneo.

La endocitosis del colesterol mediada por receptor es un mecanismo clave para mantener el equilibrio de colesterol en el
organismo y asegurar que las células tengan la cantidad adecuada para funcionar correctamente. Sin embargo, en ciertas
condiciones patológicas, como la hipercolesterolemia familiar, pueden ocurrir alteraciones en este proceso, lo que lleva a
niveles elevados de colesterol en la sangre y aumenta el riesgo de enfermedades cardiovasculares.

FAGOCITOSIS: La fagocitosis es la captación de partículas relativamente grandes (>0.5 μm de diámetro) del ambiente.

Muchos protistas unicelulares, como las amebas y los ciliados, atrapan partículas de alimento y microorganismos más
pequeños y

los encierran dentro de pliegues de su membrana plasmática. Los pliegues se fusionan para formar una vacuola (o fagosoma)
que se separa de la membrana plasmática hacia el interior.

El fagosoma se fusiona con un lisosoma y el material se digiere dentro del

FAGOLISOSOMA resultante. En la mayoría de los animales, la fagocitosis es un mecanismo protector en lugar de una forma de
alimentación.

En mamíferos, los macrófagos y neutrófilos fagocitan microorganismos invasores, células dañadas o muertas y detritos.

EXOCITOSIS
La exocitosis es el proceso mediante el cual una célula dirige el contenido de las vesículas secretoras al espacio extracelular.
La exocitosis se encuentra en la base de procesos fisiológicos fundamentales como la neurotransmisión y la segregación de hormonas.

Vías endocíticas potencialmente involucradas en la internalización

del SARS‐CoV‐2.
 Las flechas gruesas representan el flujo direccional de las
vías de tráfico de la membrana.
 Una flecha negra delgada representa la trayectoria viral que
sigue a la finalización de su itinerario endocítico putativo.
 Las líneas rojas con cuadrados en sus extremos indican un
probable bloqueo farmacológico de los procesos.
 La línea negra con un cuadrado al final indica el efecto
sugerido de la cloroquina y la hidroxicloroquina sobre la
fusión viral en el endosoma.
 Los nombres de los fármacos bloqueantes candidatos están
en cursiva.

SEMANA 5
MARCO TEÓRICO:
Las células poseen estructuras contenidas en el citoplasma principalmente en eucariotas, las cuales
tienen una forma y función definida. El mayor sistema de endomembranas en eucariotas corresponde al
retículo endoplasmático el cual se relaciona con el aparato de Golgi y éste con los lisosomas, que
contienen hidrolasas ácidas (enzimas que degradan polímeros en sus unidades monoméricas) son de
tamaño y forma variable. Los lisosomas intervienen en la digestión celular.
Las mitocondrias son una de las organelas más grandes de la célula, presenta doble membrana una
externa y una interna que forman dos compartimentos: espacio intermembrana y la matriz mitocondrial.
Las membranas y compartimentos de la mitocondria sirven para separar los mecanismos bioquímicos
que ocurren en su interior: ciclo del ácido cítrico, transferencia de electrones y fosforilación oxidativa: Se
considera como verdaderos sistemas transductores de energía; en esta organela se sintetiza la mayor
cantidad de ATP.
Las mitocondrias pueden ser observadas en células vivas con el colorante Verde de Janus,
tiñéndose de un color azul verdoso, debido al sistema citocromo oxidasa que posee.
MITOCONDRIAS Y ACTIVIDAD DE LA SUCCINATO DESHIDROGENASA
Las mitocondrias son orgánulos presentes en casi todas las células
eucariotas y desempeñan un papel fundamental en la producción
de energía celular. Son conocidas como las "centrales eléctricas"
de la célula debido a su capacidad para generar la mayor parte de
la energía necesaria para el funcionamiento celular a través de un
proceso llamado respiración celular.

La respiración aeróbica es un proceso complejo que ocurre en las mitocondrias, las cuales son las organelas
encargadas de generar la mayor parte de la energía necesaria para las células. Durante la respiración aeróbica, se
llevan a cabo una serie de actividades clave en las mitocondrias para producir ATP (adenosín trifosfato), la forma de
energía utilizada por las células. A continuación, se describen las principales etapas y actividades involucradas en
este proceso:

1. Glicólisis: La respiración aeróbica comienza en el citoplasma de la célula con la glicólisis. Este proceso implica una serie

diez reacciones químicas. Durante la glicólisis, una molécula de glucosa (un azúcar de seis carbonos) se descompone
en dos moléculas de piruvato (cada una con tres carbonos). Se invierten dos ATP al principio para iniciar la reacción,
pero se generan cuatro ATP y dos moléculas de NADH (Nicotinamida Adenina Dinucleótido reducido es una
coenzima crucial en numerosas reacciones bioquímicas que ocurren en las células) a lo largo de la glicólisis.
Esto resulta en un saldo neto de dos ATP y dos NADH por molécula de glucosa.
 2. Transporte del piruvato: El piruvato (el piruvato es una molécula central en el metabolismo celular y puede seguir
diversas rutas metabólicas en función de las condiciones en la célula) generado en la glicólisis se transporta desde el
citoplasma hasta la matriz mitocondrial, donde continuará su descomposición en un proceso conocido como el
complejo de piruvato deshidrogenasa.

3. Complejo de Piruvato Deshidrogenasa: En la matriz mitocondrial, el piruvato se somete a una serie de reacciones
catalizadas por el complejo de piruvato deshidrogenasa. Estas reacciones convierten el piruvato en acetil-CoA (acetil
coenzima A), liberando una molécula de dióxido de carbono (CO2) y generando una molécula de NADH por cada
piruvato.
4. Ciclo de Krebs (ciclo del ácido cítrico): El acetil-CoA producido se une a una molécula de oxalacetato para iniciar el
ciclo de Krebs, también conocido como ciclo del ácido cítrico. Este ciclo consta de ocho reacciones enzimáticas que
completan la oxidación del acetil-CoA, liberando dos moléculas adicionales de CO2 y generando ATP, NADH y
FADH2. En resumen, por cada ciclo de Krebs completo (que involucra a dos moléculas de acetil-CoA), se producen
dos ATP, seis NADH y dos FADH2.
5. Cadena de Transporte de Electrones (ETC): Los NADH y FADH2(Dinucleótido de adenina y flavina reducido)
generados en las etapas anteriores transportan electrones hacia la cadena de transporte de electrones en la
membrana interna de la mitocondria. Esta cadena consta de una serie de complejos proteicos, donde los electrones
son transferidos de uno a otro. A medida que los electrones se mueven a través de la cadena, se libera energía, que
se utiliza para bombear protones (iones H+) desde la matriz mitocondrial hacia el espacio intermembrana.
6. Gradiente de Protones (Potencial de Membrana): La acumulación de protones en el espacio intermembrana crea un
gradiente de protones o potencial de membrana. Esto significa que hay una diferencia en la concentración de
protones y en la carga eléctrica a través de la membrana mitocondrial interna.
7. Síntesis de ATP: Los protones regresan a la matriz mitocondrial a través de la enzima ATP sintasa, que utiliza la
energía liberada por este flujo de protones para sintetizar ATP a partir de ADP y fosfato inorgánico (Pi) en un
proceso llamado fosforilación oxidativa. Este proceso es la fuente principal de ATP en la respiración aeróbica y puede
generar alrededor de 26-28 ATP por cada molécula de glucosa, dependiendo de ciertos factores.
En resumen, la respiración aeróbica es un proceso altamente detallado y eficiente que descompone la
glucosa en una serie de pasos, generando ATP y capturando energía en forma de NADH y FADH2. La cadena
de transporte de electrones y la fosforilación oxidativa son cruciales para la producción de la mayor parte del
ATP en las células eucariotas aeróbicas.

La succinato deshidrogenasa (SDH) es una enzima clave que se encuentra en la membrana interna de las
mitocondrias y participa en el ciclo de Krebs, también conocido como ciclo del ácido cítrico o ciclo del ácido
tricarboxílico. El ciclo de Krebs es una serie de reacciones químicas que ocurren en las mitocondrias y es
parte fundamental de la respiración celular aeróbica.

La función de la succinato deshidrogenasa es catalizar la reacción de oxidación del succinato a fumarato, mientras
reduce la coenzima FAD (flavín adenín dinucleótido) a FADH2. Esta reacción es importante para la generación de
energía, ya que el FADH2 producido se utiliza más adelante en la cadena de transporte de electrones para la
producción de ATP, la molécula de energía de la célula.

Además de su papel en la producción de energía, la succinato deshidrogenasa también está implicada en la

regulación de la homeostasis celular y en la síntesis de intermediarios metabólicos. Además, la SDH se ha
relacionado con la función de detección y respuesta a condiciones de bajo oxígeno, conocidas como hipoxia.

Es importante destacar que las mutaciones en los genes que codifican para las subunidades de la succinato
deshidrogenasa han sido asociadas con trastornos hereditarios, como el síndrome de paraganglioma y
feocromocitoma, los cuales son tumores neuroendocrinos.

En resumen, las mitocondrias son orgánulos esenciales para la producción de energía celular y la succinato
deshidrogenasa es una enzima clave en el ciclo de Krebs que participa en la generación de energía a través de la
oxidación del succinato. Además, la SDH también desempeña otros roles importantes en la célula, como la
regulación metabólica y la respuesta a condiciones de hipoxia.
 ACTIVIDAD DE LA SUCCINATO DESHIDROGENASA
La actividad de la succinato deshidrogenasa (SDH) se refiere a la capacidad de esta enzima para catalizar la reacción
de oxidación del succinato a fumarato en el ciclo de Krebs. La actividad de la SDH se mide típicamente mediante
ensayos enzimáticos in vitro.

Los ensayos de actividad de la succinato deshidrogenasa generalmente implican la extracción de mitocondrias o

tejidos que contienen mitocondrias, como el hígado o el músculo, y la preparación de una fracción enriquecida de
mitocondrias. A continuación, se añade una solución que contiene succinato y un aceptor de electrones, como una
sal de tetrazolio, que se reduce en presencia de la enzima activa. La reacción se lleva a cabo en condiciones
específicas de pH y temperatura.

Después de un período de incubación, se detiene la reacción y se mide la reducción del aceptor de electrones
mediante espectrofotometría. La disminución en la absorbancia a una longitud de onda específica es proporcional
a la actividad de la SDH presente en la muestra. La actividad enzimática se puede expresar en unidades de
actividad enzimática por miligramo de proteína (U/mg) o en otras unidades específicas.

Es importante mencionar que la actividad de la succinato deshidrogenasa puede verse afectada por varios factores,
como la presencia de inhibidores o activadores específicos, condiciones de pH y temperatura, y la disponibilidad de
cofactores y sustratos necesarios para la reacción.

La determinación de la actividad de la succinato deshidrogenasa es importante para comprender el funcionamiento

de la vía del ciclo de Krebs y su papel en la producción de energía celular. Además, los cambios en la actividad de la
SDH pueden estar asociados con diversas enfermedades metabólicas y trastornos mitocondriales.

OBSERVACIÓN DE MITOCONDRIAS EN EPITELIO BUCAL

1. Obtener un raspado suave de la mucosa bucal.
2. Realizar un frotis extendiendo la muestra sobre una lámina.
3. 3. Dejar secar la lámina con la muestra al medio ambiente y luego cubrir la muestra con verde de Janus durante 5 minutos.
4. Eliminar el exceso de colorante y dejar secar al medio ambiente, observar al microscopio con objetivos de 10x y 40x.
5. Reconocer las mitocondrias teñidas de verde y refringentes al movimiento del tornillo micrométrico.
En un mortero preparar un homogenizado de hígado con la solución de NaCl 0.9%.
-Disponer de 2 tubos de 13x100 mm y roturarlos (tubo 1 y tubo 2).
Colocar en cada tubo: 1 mL de succinato y luego 1 mL de tampón fosfato.
-El succinato es sustrato de la succinato deshidrogenasa, enzima presente en el homogenizado de hígado.

-Añadir 2 gotas de azul de metileno, agitar y anotar el color observado.

Mientras hay oxígeno disuelto en la disolución, el azul de metileno está en su forma oxidada de color azul.

-Al tubo1 incorporar 0.5 mL de aceite por las paredes y dejar en la gradilla. No mover.
La capa de aceite en la superficie evita la entrada de oxígeno.

-Al tubo 2 agregar 1 mL de homogenizado de hígado e inmediatamente incorporar 0.5 mL de aceite por las paredes. No mover.
Hacer el seguimiento de la decoloración de los tubos por 20 min.

-Debido a la acción de la succinato deshidrogenasa, los electrones del succinato son transferidos al azul de metileno.
De esta manera, el azul de metileno estará en su forma reducida al ganar electrones.

1- Describa el mecanismo de la síntesis de ATP en las mitocondrias.

- Oxidación de combustibles: El proceso comienza en la matriz mitocondrial, donde las moléculas de glucosa, ácidos
grasos y otros sustratos metabólicos son descompuestas en una serie de reacciones. La glucólisis, que tiene
lugar en el citosol, degrada la glucosa en dos moléculas de piruvato, generando un pequeño número de
moléculas de NADH y ATP. El piruvato luego ingresa a la matriz mitocondrial, donde se convierte en acetil-
CoA, que alimenta el ciclo de Krebs (ciclo del ácido cítrico). Durante el ciclo de Krebs, se generan más NADH y
FADH2, que son portadores de electrones ricos en energía.
 Transferencia de electrones en la cadena respiratoria: Los electrones generados en las reacciones de oxidación
de combustibles son transferidos a través de la cadena respiratoria, que consiste en una serie de complejos
proteicos en la membrana interna mitocondrial. Los complejos I, II, III y IV de la cadena respiratoria facilitan las
reacciones de transferencia de electrones en una serie de pasos. A medida que los electrones se mueven a
través de estos complejos, liberan energía.
- Bombeo de protones: La energía liberada durante la transferencia de electrones se utiliza para bombear
protones (iones de hidrógeno, H+) desde la matriz mitocondrial hacia el espacio intermembrana, que es la
región entre la membrana interna y la membrana externa de la mitocondria. Este proceso crea un gradiente
de protones o un potencial electroquímico, con una acumulación de protones en el espacio intermembrana y
una deficiencia de protones en la matriz.
- ATP sintasa (complejo V): La ATP sintasa, también conocida como complejo V, es una enzima compleja que se
encuentra en la membrana interna mitocondrial. Tiene dos componentes principales:
a. F1 (cabeza): En el lado de la matriz mitocondrial, F1 contiene tres sitios de unión para el ADP y el fosfato
inorgánico (Pi). La ATP sintasa es una enzima sintetizadora de ATP, y aquí es donde ocurre la síntesis real del
ATP.
b. F0 (base): Atraviesa la membrana interna y forma un canal a través del cual los protones pueden fluir de
regreso a la matriz. El flujo de protones a través de F0 proporciona la energía necesaria para impulsar la
síntesis de ATP en F1.
- Producción de ATP: Cuando los protones fluyen desde el espacio intermembrana hacia la matriz a través de F0, esta
energía se utiliza para convertir el ADP y el Pi en ATP en F1. La ATP sintasa funciona como una turbina
molecular, donde la energía de los protones que fluyen a través de F0 impulsa la rotación de F1 y la unión
del grupo fosfato al ADP para formar ATP.

Este proceso de síntesis de ATP, conocido como fosforilación oxidativa, es altamente eficiente en la producción de
ATP, ya que acopla directamente la producción de ATP al flujo de electrones a través de la cadena respiratoria y el
gradiente de protones. Es la principal fuente de energía celular en organismos aeróbicos, proporcionando ATP para
una variedad de procesos celulares esenciales.

2. ¿Cómo se originan las enfermedades mitocondriales?

Mutaciones en el ADN mitocondrial (mtADN): Las mitocondrias tienen su propio conjunto de ADN,
conocido como mtADN, que es esencial para la producción de proteínas necesarias para la función
mitocondrial. Las mutaciones en el mtADN pueden ocurrir espontáneamente o transmitirse de una
generación a otra. Estas mutaciones pueden afectar directamente a los componentes de la cadena
respiratoria y la fosforilación oxidativa, lo que reduce la capacidad de las mitocondrias para producir
energía. Un ejemplo de una enfermedad mitocondrial causada por mutaciones en el mtADN es la
enfermedad de Leigh.
Mutaciones en genes nucleares: Aunque la mayoría de las proteínas mitocondriales son codificadas por el
núcleo de la célula, algunas mutaciones en genes nucleares pueden afectar la función mitocondrial. Estas
mutaciones pueden influir en la síntesis de proteínas mitocondriales, su importación a las mitocondrias o su
ensamblaje en complejos proteicos funcionales. Un ejemplo de una enfermedad mitocondrial causada por
mutaciones en genes nucleares es el síndrome de Leigh relacionado con el complejo piruvato
deshidrogenasa.
Herencia materna: La mitocondria tiene una característica única en la herencia: se hereda exclusivamente de
la madre. Esto se debe a que, durante la fertilización, solo el óvulo aporta mitocondrias al cigoto, mientras
que los espermatozoides no contribuyen con mitocondrias. Como resultado, si una mujer lleva una
mutación en su mtADN que causa una enfermedad mitocondrial, todas sus descendientes (tanto hijas como
hijos) heredarán la mutación, pero solo las hijas podrán transmitirla a la siguiente generación.
Impacto en múltiples sistemas: Las mitocondrias son responsables de la producción de energía en todas las
células del cuerpo. Por lo tanto, las enfermedades mitocondriales pueden afectar una amplia variedad de
sistemas y órganos, incluyendo músculos, sistema nervioso, corazón, hígado y otros tejidos. Los síntomas
pueden ser muy diversos y pueden incluir debilidad muscular, retraso en el desarrollo, problemas
neurológicos, fatiga extrema, problemas cardíacos y más.
 Diagnóstico: El diagnóstico de enfermedades mitocondriales puede ser desafiante debido a la variedad de
síntomas y a la heterogeneidad genética. Suele requerir un enfoque multidisciplinario que incluye análisis
de ADN mitocondrial, secuenciación genética y evaluación de la función mitocondrial en tejidos relevantes.
Además, se realiza una evaluación clínica de los síntomas y una historia familiar detallada.
Manejo: Actualmente, no existe una cura definitiva para las enfermedades mitocondriales. El tratamiento se
centra en aliviar los síntomas y mejorar la calidad de vida de los pacientes. Puede incluir terapias de apoyo,
como fisioterapia, terapia ocupacional y medicamentos para controlar síntomas específicos. La investigación
sobre terapias potenciales, como terapias génicas o farmacológicas, está en curso.

3. ¿Por qué las mitocondrias fijan el colorante Verde de Janus?

El verde de Janus es un colorante monoazoico que tiende a oxidar especialmente a las mitocondrias debido a la gran cantidad
de electrones presentes en ellas. Al colocarlo en presencia de mitocondrias, emplea en su reducción los electrones de la
cadena respiratoria que se encuentra emplazada en la membrana mitocondrial interna y las colorea de “verde brillante"

4. ¿Qué reacción cataliza la enzima succinato deshidrogenasa y cuál es su papel en el mecanismo de

transporte de electrones?

La enzima succinato deshidrogenasa (SDH), también conocida como complejo II, es una de las proteínas
involucradas en la cadena de transporte de electrones en la mitocondria y en la cadena respiratoria en las células
procariotas. Su función principal es catalizar la reacción de oxidación del succinato a fumarato en el ciclo de Krebs
(ciclo del ácido cítrico o ciclo de los ácidos tricarboxílicos). La reacción catalizada por la succinato deshidrogenasa
es la siguiente:

Succinato + Ubiquinona (Coenzima Q) ⇌ Fumarato + Ubiquinol

En esta reacción, el succinato se oxida a fumarato, y la ubiquinona se reduce a ubiquinol. La ubiquinona (Coenzima
Q) es una molécula que actúa como un transportador de electrones en la cadena de transporte de electrones y se
encuentra en la membrana interna de la mitocondria.

El papel de la succinato deshidrogenasa en el mecanismo de transporte de electrones es único en comparación con

otros complejos de la cadena respiratoria. A diferencia de los complejos I, III y IV, que bombean protones desde la
matriz mitocondrial al espacio intermembrana durante la transferencia de electrones, la succinato deshidrogenasa
no participa en el bombeo de protones. En cambio, su función principal es regenerar la ubiquinona (Coenzima Q)
reducida (ubiquinol), que luego transporta los electrones a lo largo de la cadena de transporte de electrones hacia
el complejo III.

El ciclo de Krebs (ciclo del ácido cítrico) en el que actúa la succinato deshidrogenasa también desempeña un papel
importante en la generación de moléculas transportadoras de electrones, como el NADH y el FADH2, que
alimentan la cadena de transporte de electrones. El NADH y el FADH2 generados en el ciclo de Krebs transfieren
sus electrones a través de la succinato deshidrogenasa a la ubiquinona, lo que finalmente contribuye a la
producción de ATP mediante la fosforilación oxidativa.

En resumen, la succinato deshidrogenasa cataliza la oxidación del succinato a fumarato en el ciclo de Krebs
y, al hacerlo, regenera la ubiquinona reducida (ubiquinol), que es un componente crucial en el transporte de
electrones a lo largo de la cadena de transporte de electrones en la cadena respiratoria mitocondrial.
Aunque no bombea protones, su función es esencial para el flujo de electrones y la generación de ATP en la
respiración celular.

RESPIRACIÓN CELULAR
El proceso por el cual las células degradan las moléculas de alimento para obtener energía recibe el nombre
de RESPIRACIÓN CELULAR.

La respiración celular es una reacción exergónica, donde parte de la energía contenida en las moléculas de
alimento es utilizada por la célula para sintetizar ATP. Decimos parte de la energía porque no toda es
utilizada, sino que una parte se pierde.

Aproximadamente el 40% de la energía libre emitida por la oxidación de la glucosa se conserva en forma de
ATP. Cerca del 75% de la energía de la nafta se pierde como calor de un auto; solo el 25% se convierte en
formas útiles de energía. La célula es mucho más eficiente.

La respiración celular es una combustión biológica y puede compararse con la combustión de carbón, bencina,
leña. En ambos casos moléculas ricas en energía son degradadas a moléculas más sencillas con la consiguiente
liberación de energía.

Tanto la respiración como la combustión son reacciones exergónicas.

Sin embargo existen importantes diferencias entre ambos procesos. En primer lugar la combustión es un
fenómeno incontrolado en el que todos los enlaces químicos se rompen al mismo tiempo y liberan la energía en
forma súbita; por el contrarío la respiración es la degradación del alimento con la liberación paulatina de
energía. Este control está ejercido por enzimas específicas.

En segundo lugar la combustión produce calor y algo de luz. Este proceso transforma energía química en
calórica y luminosa. En cambio la energía liberada durante la respiración es utilizada fundamentalmente para
la formación de nuevos enlaces químicos (ATP).

La respiración celular puede ser considerada como una serie de reacciones de óxido-reducción en las cuales
las moléculas combustibles son paulatinamente oxidadas y degradadas liberando energía. Los protones
perdidos por el alimento son captados por coenzímas.

La respiración ocurre en distintas estructuras celulares. La primera de ellas es la glucólisis que ocurre en el
citoplasma. La segunda etapa dependerá de la presencia o ausencia de O2 en el medio, determinando en el
primer caso la respiración aeróbica (ocurre en las mitocondrias), y en el segundo caso la respiración
anaeróbica o fermentación (ocurre en el citoplasma).

GLUCÓLISIS

La glucólisis, lisis o escisión de la glucosa, tiene lugar en una serie de nueve reacciones, cada una catalizada
por una enzima específica, hasta formar dos moléculas de ácido pirúvico, con la producción concomitante de
ATP. La ganancia neta es de dos moléculas de ATP, y dos de NADH por cada molécula de glucosa.

Las reacciones de la glucólisis se realizan en el citoplasma, como ya adelantáramos y pueden darse en

condiciones anaerobias; es decir en ausencia de oxígeno.

Los primeros cuatro pasos de la glucólisis sirven para fosforilar (incorporar fosfatos) a la glucosa y
convertirla en dos moléculas del compuesto de 3 carbonos gliceraldehído fosfato (PGAL). En estas reacciones
se invierten dos moléculas de ATP a fin de activar la molécula de glucosa y prepararla para su ruptura.

Paso 1

La serie de reacciones glucolíticas se inicia con la activación de la glucosa

 Glucosa + ATP glucosa 6 fosfato + ADP

La reacción del ATP con la glucosa para producir glucosa 6-fosfatoy ADP es exergónica. Parte de la energía liberada se
conserva en el enlace que une al fosfato con la molécula de glucosa que entonces se energiza.

Paso 2

La glucosa 6-fosfato sufre una reacción de reordenamiento catalizada por una isomerasa, con lo que se forma fructosa
6-fosfato.

Paso 3

La fructosa 6-fosfato acepta un segundo fosfato del ATP, con lo que se genera fructosa 1,6-difosfato; es decir
fructosa con fosfatos en las posicio-nes 1 y 6.
La enzima que regula esta reacción es la fosfofructocinasa.

Nótese que hasta ahora se han invertido dos moléculas de ATP y no se ha recuperado energía.

La fosfofructocinasa es una enzima alostérica, el ATP es un efector alostérico que la inhibe. La interacción alostérica
entre ellos es el principal mecanismo regulador de la glucólisis. Si existe ATP en cantidades suficientes para otros fines
de la célula, el ATP inhibe la actividad de la enzima y así cesa la producción de ATP y se conserva glucosa. Al agotar la
célula la provisión de ATP, la enzima se desinhibe y se reanuda la degradación de la glucosa. Este es uno de los puntos
principales del control de la producción de ATP.

Paso 4

La fructosa 1,6 -difosfato se divide luego en dos azúcares de 3 carbonos, gliceraldehído 3-fosfato y dihidroxiacetona
fosfato. La dihidroxiacetona fosfato es convertida enzimáticamente (isomerasa) en gliceraldehído fósfato. Todos los
pasos siguientes deben contarse dos veces para tener en cuenta el destino de una molécula de glucosa.

Debemos recordar que hasta el momento no se ha obtenido ninguna energía biológicamente útil. En reacciones
subsecuentes, la célula recupera parte de la energía contenida en el PGAL.

Paso 5

Las moléculas de PGAL se oxidan es decir, se eliminan átomos de hidrógeno con sus electrones, y el NAD+ se reduce a
NADH. Esta es la primera reacción de la cual la célula cosecha energía. El producto de esta reacción es el
fosfoglicerato. Este compuesto reacciona con un fosfato inorgánico (Pi) para formar 1,3 difosfoglicerato. El grupo
fosfato recién incorporado se encuentra unido por medio de un enlace de alta energía.
Paso 6

El fosfato rico en energía reacciona con el ADP para formar ATP. (en total dos moléculas de ATP por molécula de
glucosa). Esa transferencia de energía desde un compuesto con un fosfato, de alta energía se conoce como
fosforfiación.

Paso 7

El grupo fosfato remanente se transfiere enzimáticamente de la posición 3 a la posición 2 (ácido 2-fosfoglicérico).

Paso 8

En este paso se elimina una molécula de agua del compuesto 3 carbono. Este reordenamiento interno de la molécula
concentra energía en la vecindad del grupo fosfato. El producto es el ácido fosfoenolpirúvico (PEP).

Paso 9

El ácido fosfoenolpirúvico tiene la capacidad de transferir su grupo fosfato a una molécula de ADP para formar ATP y
ácido pirúvico. (dos moléculas de ATP y ácido pirúvico por cada molécula de glucosa).
RESUMEN DE LA GLUCÓLISIS

Fig. 9.1 - Resumen de las dos etapas de la glucólisis. En la primera etapa se utilizan 2 ATP y la segunda produce 4 ATP y 2 NADH.
Otros azúcares, además de la glucosa, como la manosa, galactosa y las pentosas, así como el glucógeno y el almidón, pueden ingresar en
la glucólisis una vez convertidos en glucosa 6-fosfato.

ECUACIÓN DE LA GLUCÓLISIS

Glucosa + 2 ADP + 2 Pi + 2 NAD+ 2 piruvato + 2 ATP + 2 NADH + 2 H+ + 2 H2O

VÍAS ANAERÓBICAS

El ácido pirúvico puede tomar por una de varias vías. Dos son anaeróbicas (sin oxígeno) y se denomina FERMENTACIÓN
ALCOHÓLICA y FERMENTACIÓN LÁCTICA.

A la falta de oxígeno, el ácido pirúvico puede convertirse en etanol (alcohol etílico) o ácido láctico según el tipo de
célula. Por ejemplo, las células de las levaduras pueden crecer con oxígeno o sin él. Al extraer jugos azucarados de las
uvas y al almacenarlos en forma anaerobia, las células de las levaduras convierten el jugo de la fruta en vino al convertir
la glucosa en etanol. Cuando el azúcar se agota las levaduras dejan de fermentar y en este punto la concentración de
alcohol está entre un 12 y un 17 % según sea la variedad de la uva y la época en que fue cosechada.

La formación de alcohol a partir del azúcar se llama fermentación.

Fermentación alcohólica

El ácido pirúvico formado en la glucólisis se convierte anaeróbicamente en etanol. En el primer caso se libera dióxido de
carbono, y en el segundo se oxida el NADH y se reduce a acetaldehído.

Otras células, como por ejemplo los glóbulos rojos, las células musculares y algunos microorganismos transforman el
ácido Pirúvico en ácido láctico.

En el caso de las células musculares, la fermentación láctica, se produce como resultado de ejercicios extenuantes
durante los cuales el aporte de oxígeno no alcanza a cubrir las necesidades del metabolismo celular. La acumulación del
ácido láctico en estas células produce la sensación de cansancio muscular que muchas veces acompaña a esos ejercicios.

Fermentación láctica

En esta reacción el NADH se oxida y el ácido pirúvico se reduce transformándose en ácido láctico.

La fermentación sea ésta alcohólica o láctica ocurre en el citoplasma.

ESQUEMA BIOQUÍMICO DEL PROCESO DE FERMENTACIÓN

A) Alcohólica : 2 ácido pirúvico + 2 NADH Þ 2 etanol + 2 CO2 + 2 NAD+

B) Láctica : 2 ácido pirúvico + 2 NADH Þ 2 ácido láctico + 2 NAD+

La finalidad de la fermentación es regenerar el NAD+ permitiendo que la glucólisis continúe y produzca una provisión
pequeña pero vital de ATP para el organismo.
RESPIRACIÓN AERÓBICA

En presencia de oxígeno, la etapa siguiente de la degradación de la glucosa es la respiración, es decir la oxidación

escalonada del ácido pirúvico a dióxido de carbono y agua.

La respiración aeróbica se cumple en dos etapas: el ciclo de Krebs y el transporte de electrones y la fosforilación
oxidativa (estos dos últimos procesos transcurren acopladamente).

En las células eucariotas estas reacciones tienen lugar dentro de las mitocondrias; en las procariotas se llevan acabo en
estructuras respiratorias de la membrana plasmática.

Estructura de las Mitocondrias

Las mitocondrias están rodeadas por dos membranas, una externa que es lisa y una interna que se pliega hacia adentro
formando crestas. Dentro del espacio interno de la mitocondria en torno a las crestas, existe una solución densa (matriz
o estroma) que contiene enzimas, coenzimas, agua, fosfatos y otras moléculas que intervienen en la respiración.

La membrana externa es permeable para la mayoría de las moléculas pequeñas, pero la interna sólo permite el paso de
ciertas moléculas como el ácido pirúvico y ATP y restringe el paso de otras. Esta permeabilidad selectiva de la
membrana interna, tiene una importancia crítica porque capacita a las mitocondrias para destinar la energía de la
respiración para la producción de ATP.

La mayoría de las enzimas del ciclo de Krebs se encuentran en la matriz mitocondrial. Las enzimas que actúan en el
transporte de electrones se encuentran en las membranas de las crestas.

Las membranas internas de las crestas están formadas por un 80 % de proteínas y un 20 % de lípidos.

En las mitocondrias, el ácido pirúvico proveniente de la glucólisis, se oxida a dióxido de carbono y agua, completándose
así la degradación de la glucosa.

El 95 % del ATP producido se genera, en la mitocondria.

Las mitocondrias son consideradas organoides semiautónomos, porque presentan los dos ácidos nucleicos (del tipo
procarionte)
Fig. 9.2 - Esquema de la ultraestructura de una mitocondria. (a) Esquema tridimensional, (b) Esquema de un corte al
M.E.T. (c) Cresta mitocondrial (detalle).

Fig.9.3- Microfotografía electrónica de una mitocondria. Se observan las invaginaciones de la membrana interna que
forman las características crestas, que identifican esta organela
Como puede apreciase en la fig. 9.2 (c), las crestas mitocondriales aparecen cubiertas por partículas en forma de hongo,
que tienen un tallo más fino que las unen a la membrana. Estas estructuras son las llamadas partículas F1 y representan
una porción de la ATPasa especial que interviene en el acoplamiento entre la oxidación y la fosforilación. Las partículas
F1 se encuentran en la membrana interna, del lado relacionado con la matriz; le confieren una asimetría característica
relacionada con la función de la ATPasa (este punto se verá más detalladamente al referirnos a la hipótesis
quimiosmótica).

Para concluir, es importante destacar que el ciclo de Krebs se lleva a cabo en la matriz mitocondrial; mientras que el
transporte de electrones y la fosforilación oxidativa se producen a nivel de las crestas mitocondriales.

Ingreso al CICLO DE KREBS

El ácido pirúvico sale del citoplasma, donde se produce mediante glucólisis y atraviesa las membranas externa e interna
de las mitocondrias. Antes de ingresar al Ciclo de Krebs, el ácido pirúvico, de 3 carbonos, se oxida. Los átomos de
carbono y oxígeno del grupo carboxilo se eliminan como dióxido de carbono (descarboxilación oxidativa) y queda un grupo
acetilo, de dos carbonos. En esta reacción exergónica, el hidrógeno del carboxilo reduce a una molécula de NAD+ a
NADH.

Ahora la molécula original de glucosa se ha oxidado a dos moléculas de CO2, y dos grupos acetilos y, además se formaron
4 moléculas de NADH (2 en la glucólisis y 2 en la oxidación del ácido pirúvico).

Cada grupo acetilo es aceptado por un compuesto llamado coenzima A dando un compuesto llamado acetilcoenzima A
(acetil CoA). Esta reacción es el eslabón entre la glucólisis y el ciclo de Krebs.

CICLO DE KREBS
El ciclo de Krebs también conocido como ciclo del ácido cítrico es la vía común final de oxidación del ácido pirúvico,
ácidos grasos y las cadenas de carbono de los aminoácidos.

La primera reacción del ciclo ocurre cuando la coenzima A transfiere su grupo acetilo (de 2 carbonos) al compuesto de 4
carbonos (ácido oxalacético) para producir un compuesto de 6 carbonos (ácido cítrico).

El ácido cítrico inicia una serie de pasos durante los cuales la molécula original se reordena y continúa oxidándose, en
consecuencia se reducen otras moléculas: de NAD+ a NADH y de FAD+ a FADH2. Además ocurren dos carboxilaciones y
como resultado de esta serie de reacciones vuelve a obtenerse una molécula inicial de 4 carbonos el ácido oxalacético.

El proceso completo puede describirse como un ciclo de oxalacético a oxalacético, donde dos átomos de carbono se
adicionan como acetilo y dos átomos de carbono (pero no los mismos) se pierden como CO2.
Fig. 9.4- Esquema simplificado del Ciclo de Krebs
Dado que por cada molécula de glucosa inicial se habían obtenido dos de ácido pirúvico y, por lo tanto dos de acetil CoA,
deben cumplirse dos vueltas del ciclo de Krebs por cada molécula de glucosa. En consecuencia los productos obtenidos de
este proceso son el doble del esquema que se detalla a continuación.

Cuadro 9.1 - BALANCE PARCIAL DE LA RESPIRACIÓN

PROCESO SUSTRATO PRODUCTOS

2 ácido pirúvico

GLUCÓLISIS Glucosa 2 ATP

2 NADH

2 Acetil CoA

ENTRADA AL CICLO DE KREBS 2 ácido pirúvico 2 CO2

2 NADH

4 CO2

2 GTP (equivalentes a 2 ATP)

CICLO DE KREBS 2 Acetil CoA
6 NADH

2 FADH2

6 CO2

2 ATP

Glucosa 2 GTP

10 NADH

2 FADH2

Observando el balance parcial del ciclo de Krebs, se comprueba que en este proceso no se obtiene energía directamente
bajo la forma de ATP (sólo se obtiene 1 GTP que es equivalente a 1 ATP). En cambio se obtienen cantidades de coenzimas
reducidas (NADH y FADH2), y es a través de la oxidación posterior que se obtendrá la energía para sintetizar ATP.

Cada coenzima NADH equivale a 3 ATP y cada coenzima FADH2 equivale a 2 ATP.

TRANSPORTE DE ELECTRONES O CADENA RESPIRATORIA

En esta etapa se oxidan las coenzimas reducidas, el NADH se convierte en NAD+ y el FADH2 en FAD+. Al producirse
esta reacción, los átomos de hidrógeno (o electrones equivalentes), son conducidos a través de la cadena respiratoria
por un grupo de transportadores de electrones, llamados citocromos. Los citocromos experimentan sucesivas
oxidaciones y reducciones (reacciones en las cuales los electrones son transferidos de un dador de electrones a un
aceptor).

En consecuencia, en esta etapa final de la respiración, estos electrones de alto nivel energético descienden paso a paso
hasta el bajo nivel energético del oxígeno (último aceptor de la cadena), formándose de esta manera agua.

Cabe aclarar que los tres primeros aceptores reciben el H+ y el electrón conjuntamente. En cambio, a partir del cuarto
aceptor, sólo se transportan electrones, y los H+ quedan en solución.

FOSFORILACIÓN OXIDATIVA

El flujo de electrones está íntimamente acoplado al proceso de fosforilación, y no ocurre a menos que también pueda
verificarse este último. Esto, en un sentido, impide el desperdicio ya que los electrones no fluyen a menos que exista la
posibilidad de formación de fosfatos ricos en energía. Si el flujo de electrones no estuviera acoplado a la fosforilación,
no habría formación de ATP y la energía de los electrones se degradaría en forma de calor.
Puesto que la fosforilación del ADP para formar ATP se encuentra acoplada a la oxidación de los componentes de la
cadena de transporte de electrones, este proceso recibe el nombre de fosforilación oxidativa.

En tres transiciones de la cadena de transporte de electrones se producen caídas importantes en la cantidad de energía
potencial que retienen los electrones, de modo que se libera una cantidad relativamente grande de energía libre en cada
uno de estos tres pasos, formándose ATP.

Fig.9.5- Diagrama de la cadena respiratoria y de la fosforilación oxidativa asociada

HIPÓTESIS QUIMIOSMÓTICA

Durante mucho tiempo se intentó explicar la naturaleza del enlace entre la cadena respiratoria y el sistema de
fosforilación. En 1961, Mitchell propuso la hipótesis quimiosmótica, que es la que actualmente se acepta en general.

Esta hipótesis ha sido apoyada por las evidencias experimentales encontradas en distintos laboratorios, lo que le valió a
Mitchell el premio Nobel en 1978.

La misma propone que el transporte de electrones y la síntesis de ATP están acopladas por un gradiente protónico a
través de la membrana mitocondrial.

Según este modelo, el transporte de electrones paso a paso, desde el NADH o el FADH2 hasta el oxígeno a través de los
transportadores de electrones, da por resultado el bombeo de protones a través de la membrana mitocondrial interna
hacia el espacio entre las membranas mitocondriales interna y externa.

Este proceso genera un potencial de membrana a través de la membrana mitocondrial interna, ya que el medio que ocupa
el espacio intermembranoso se carga positivamente.

La diferencia en concentración de protones entre la matriz y el espacio intermembranoso representa energía potencial,
resultado en parte de la diferencia de pH y en parte de la diferencia en la carga eléctrica de los lados de la membrana.
Cuando los protones pueden fluir de regreso a la matriz, descendiendo por el gradiente protónico, se libera energía
utilizable en la síntesis de ATP a partir de ADP y Pi.
Los protones regresan a la matriz a través de conductos especiales situados en la membrana interna. Estos conductos
están dados por un gran complejo enzimático, llamado ATP SINTETASA. Este complejo consta de dos proteínas: F0 y
F1.

Las partículas F0 están incluidas en la membrana mitocondrial interna y la atraviesan desde afuera hacia adentro. Se
presume que poseen un conducto o poro interior que permite el paso de los protones. Las partículas F1 (que ya habíamos
mencionado, al describir la estructura mitocondrial) son proteínas globulares grandes consistentes en nueve subunidades
polipeptídicas unidas a las partículas F0 en el lado de la membrana que linda con la matriz. Se comprobó que propulsa la
síntesis de ATP a partir de ADP y Pi. Conforme los protones descienden a lo largo del gradiente de energía, dicha
energía utiliza para sintetizar ATP. De esta manera, el gradiente protónico que existe a través de la membrana
mitocondrial interna acopla la fosforilación con la oxidación.

Fig. 9.6 - Esquema comparativo de la quimiósmosis en la mitocondria y el cloroplasto. Observe el bombeo de protones desde la matriz
mitocondrial al espacio intermembrana (sombreado). El ATP se forma del lado de la membrana que mira a la matriz, por la difusión de
los H+ a través del complejo ATPsintetasa. En el cloroplasto, a través de la membrana tilacoidal se bombean protones desde el
estroma al compartimiento tilacoidal (sombreado). Como los H + atraviesan la membrana a través de la ATPsintetasa, la fosforilación
del ADP tiene lugar del lado de la membrana que mira al estroma.

Cuadro 9.2 - RESUMEN DE LA GLUCÓLISIS Y DE LA RESPIRACIÓN

En el citoplasma: 2 ATP 2 ATP

Glucólisis

En las mitocondrias: 2 NADH 6 ATP 6 ATP*

De la glucólisis: 1 NADH 3 ATP (x 2) 6 ATP

De la respiración 1 ATP 24 ATP

Ácido pirúvico acetil CoA: 3 NADH 9 ATP (x

2)
Ciclo de Krebs:
1 FADH2 2 ATP
Rendimiento total de ATP 36 a 38 ATP
* en algunas células el costo energético de transportar los electrones desde el NADH formado en la
glucólisis a través de la membrana mitocondrial interna deprime el rendimiento neto de estos 2
NADH a sólo 4 ATP

Fig. 9.7 - Resumen de la Glucólisis y de la Respiración. La glucosa se degrada a ácido pirúvico, en el citoplasma con un
rendimiento de 2 moléculas de ATP y la reducción (flechas entrecortadas) de dos moléculas de NAD + a NADH. El ácido
pirúvico se oxida a acetil CoA y se reduce una molécula de NAD +, esta reacción y la siguiente ocurren 2 veces por cada
molécula de glucosa (pasaje de e - con línea entera). En el ciclo de Krebs, el grupo acetilo se oxida y los aceptores de
electrones NAD+ y FAD se reducen. El NADH y FADH 2 transfieren sus electrones a la serie de transportadores de la
cadena de transporte de electrones. Al circular los electrones hacia niveles energéticos menores se liberan cantidades
relativamente grandes de energía libre . Esta liberación transporta protones a través de la membrana mitocondrial
interna estableciendo el gradiente de protones que propulsa la síntesis de ATP a partir del ADP.

OTRAS VÍAS CATABÓLICAS

Sí la mayoría de los organismos no se alimentan directamente de glucosa. ¿cómo obtienen energía a partir de las grasas o
proteínas?. La respuesta está en que el ciclo de Krebs es un gran nudo del metabolismo energético. Otras sustancias
alimenticias son degradadas y convertidas en moléculas capaces de ingresar al ciclo.

Las grasas se desdoblan en sus componentes glicerol y ácidos grasos. Estos últimos son fraccionados en fragmentos de
dos carbonos e introducidos en el ciclo de Krebs como acetil CoA.

Las proteínas se degradan a aminoácidos, estos son desaminados (se les eliminan los grupos amino) y el esqueleto de
carbonos se convierte en un grupo acetilo, ingresando al ciclo de Krebs. Los grupos amino si no se utilizan, se excretan
como urea u otros desechos nitrogenados
 .

Fig.9.8- Vías principales del catabolismo y anabolismo en la célula, Se observan las tres etapas, la primera tiene lugar en
el lumen del tubo digestivo, la segunsa en el citosol y la última en las mitocondrias.

RESUMEN

En el afán de analizar detenidamente cada paso de las reacciones metabólicas de fotosíntesis y respiración, perdemos la
noción de estos procesos globalmente.

En la fotosíntesis, la energía lumínica se convierte en química y se fija carbono en compuestos orgánicos.

Los fotosintetizadores o autótrofos elaboran hidratos de carbono a partir de CO2 y agua y liberan O2 a la atmósfera.
Son estos organismos los que mantienen estables las concentraciones de CO2, y O2 atmosféricos.

En la respiración aeróbica los compuestos orgánicos son degradados a CO2 y H2O con la concomitante producción de
energía química bajo la forma de ATP.
FOTOSÍNTESIS

En la primera etapa o etapa lumínica, la energía del sol es captada por la clorofila y otros pigmentos accesorios,
provocando una serie de reacciones de óxido--reducción que propulsan la síntesis de ATP; la reducción de la coenzima
NADP a NADPH y la oxidación de moléculas de H2O liberando O2 al medio. En la siguiente etapa o ciclo de Calvin el
NADPH y el ATP (productos de la anterior etapa) se utilizan para reducir al CO2 que el vegeta1 toma del medio, a
carbono orgánico. Si falta alguno de estos sustratos, el proceso se detiene.

Son necesarias 6 vueltas al c1clo para formar una molécula de glucosa partir de 2 moléculas de PGAL.

Este compuesto también se puede utilizar como material inicial para elaborar otros compuestos orgánicos que la célula
necesita.

RESPIRACIÓN

La oxidación de la glucosa es una fuente principal de energía en la mayoría de las células.

La primera fase de este proceso es la glucólisis, en la cual la molécula de glucosa (6C), se escinde en dos moléculas de
ácido pirúvico (3C). Este paso produce un rendimiento neto de 2 moléculas de ATP y dos moléculas de NADH.

La segunda fase de la degradación de la glucosa es la respiración aeróbica que ocurre en tres etapas: ciclo de Krebs,
transporte de electrones y fosforilación oxidativa.

En ausencia deO2 el ácido pirúvico de la glucólisis se convierte en etanol o ácido láctico mediante fermentación. En el
curso de la respiración las moléculas de ácido pirúvico se fraccionan en grupos acetilos; los cuales ingresan al ciclo de
Krebs. En este ciclo los grupos acetilos se oxidan por completo a CO2, se reducen cuatro aceptores de electrones (tres
NAD+ y Un FAD) y se forma GTP.

La etapa final de la respiración es el transporte de electrones y la fosforilación oxídativa (se dan acopladamente). En
este paso intervienen una cadena de transportadores de electrones que transportan los electrones de alta energía
aceptados por el NADH y el FADH2 viajando cuesta abajo hacia el oxígeno.

En tres puntos de su descenso por toda la cadena transportadora, se liberan grandes cantidades de energía que
propulsan el bombeo de fotones hacía el espacio intermembranoso de la mitocondria. Esto crea un gradiente
electroquímico a través de la membrana interna. Cuando los protones atraviesan el complejo ATP sintetasa hacia la
matriz, la energía liberada se utiliza para sintetizar moléculas de ATP. Este mecanismo por el cual se cumple la
fosforilación oxidativa se conoce como hipótesis quimiosmótica.
Fig.9.9- Resumen del metabolismo de los glúcidos en células eucariotas

ACTIVIDADES DE AUTOEVALUACIÓN

1) Esquematiza la estructura de una mitocondria y describe donde tienen lugar las diversas etapas de la degradación de
la glucosa, en relación con estructura mitocondrial. ¿Qué moléculas e iones atraviesan las membranas mitocondriales en
estos procesos?

2) Distingue lo siguiente: glucólisis / respiración / fermentación / vías aeróbias / vías anaerobias: FAD / FADH2; ciclo
de Krebs / transporte de electrones.

3) Sigue una molécula de glucosa desde su ingreso a la célula hasta la formación de CO2 y H2O. Diferencia las etapas.

4) Complete el siguiente cuadro:

Respiración Aeróbica
Proceso Glucólisis Ciclo de Krebs Cadena Respiratoria Fosforilación
Oxidativa

Ubicación

Sustrato

Producto

Ganancia

5) Al retirar de la membrana mitocondrial la porción F1 del complejo ATPsintetasa y estudiarla en solución, funciona
como una ATPasa. ¿Por qué no funciona como una ATPsintetasa?

6) En caso de agotarse las reservas de glúcidos y lípidos. ¿A qué compuestos recurre la célula y a qué etapa del
metabolismo se incorpora?.
6) Si la glucosa está constituida por: carbono, hidrógeno y oxígeno, explica:

a) ¿ Cuál es el destino del H+ que se desprende en el proceso?

b) ¿ En qué se transforman los átomos de C y O que se liberan?

c) ¿De dónde proviene la energía almacenada en la glucosa y liberada parcialmente en la glucólisis?

PREGUNTAS MULTIPLE OPCIÓN

1- En la siguiente reacción : " Piruvato + NADH + H+ Þ lactato + NAD":

a- el piruvato se reduce a lactato b- el piruvato y NADH son reducidos a lactato y NAD

c- el piruvato se hidroliza a lactato d- el NAD+ se reduce a NADH

e- el piruvato dona 2e- del lactato

2- La membrana externa de la mitocondria :

a- es más permeable que la interna b- es menos permeable que la interna

c- es donde se localizan las proteínas de la cadena de transporte de electrones

d- sintetiza la matriz intermembranosa e- presenta pliegues que proveen una mayor superficie de contacto

3- ¿Cuál de las siguientes reacciones es común a la respiración aeróbica y a la fermentación?:

a- malato Þ ácido oxalacético b- fosfoenolpiruvato Þ piruvato

c- piruvato Þ lactato d- piruvato Þ acetil CoA

e- fosfoenolpiruvato Þ ácido oxalacético

4- ¿Cuál de los siguientes compuestos no se encuentra en la matriz mitocondrial?

a- enzimas de la vía glucolítica

b- enzimas del ciclo de Krebs

c- ADN

d- Ribosomas

e- a y c son correctas

5- La b-oxidación de ácidos grasos :

a- es un proceso citosólico de síntesis

b- tiene menor rendimiento energético por mol de sustrato oxidado que la glucólisis aeróbica

c- se lleva a cabo en la matriz mitocondrial

d- es un proceso de síntesis peroxisomal

e- ninguna es correcta
 SEMANA 6
MARCO TEÓRICO:
Los linfocitos son células fundamentales de las respuestas inmunitarias que nos protegen de los agentes
infecciosos. Existen dos clases de linfocitos: los linfocitos B que producen anticuerpos y los linfocitos T, cuyas
funciones son la destrucción de células infectadas o la producción de mediadores solubles (citosinas o
también llamadas citoquinas) que activan a otras células inmunitarias, como por ejemplo a los macrófagos y
a los linfocitos B. Los linfocitos expresan receptores complejos en la superficie celular, los llamados
receptores de antígeno, que les confieren la capacidad de reconocer una vasta variedad de moléculas
(“antígenos”) de los agentes infecciosos. Al receptor de antígeno de los linfocitos T se le denomina TCR (del
inglés “T cell receptor”). El receptor antigénico de los linfocitos B se denomina BCR (B cell receptor) y está
constituido por una inmunoglobulina (Ig) asociada con un heterodímero formado por las moléculas Ig e Ig. La
Ig que forma parte del BCR no es otra cosa que una molécula de anticuerpo anclada a la membrana.
Mientras que esta molécula es la responsable del reconocimiento antigénico, la transducción de la señal al
interior de la célula B se lleva a cabo por el heterodímero Ig-Ig.

RECEPTORES DE LINFOCITOS
Las células del sistema inmunitario participan en un tipo de detección molecular mediante el cual reconocen
macromoléculas “extrañas”, es decir, aquellas cuya estructura es diferente a la de las macromoléculas normales del cuerpo. Si se identifica
material extraño, el sistema inmunitario establece un ataque específico y concertado contra éste.
Los elementos del sistema inmunitario incluyen: 1) células que destruyen o ingieren a células infectadas o alteradas y 2) proteínas solubles
que pueden neutralizar, inmovilizar, aglutinar o destruir a los patógenos.

El repertorio de linfocitos se genera por la existencia de tres familias de receptores que mediante recombinaciones génicas son capaces de
generar una diversidad que les permita reconocer a casi cualquier antígeno existente.

Estos receptores son:

- Los receptores de linfocitos B (BCR)
- Los receptores de linfocitos T (TCR)
- Las moléculas de histocompatibilidad

LINFOCITOS B
Receptores de linfocitos B implicados en la captación de patógenos. Los linfocitos B muestran un gran número de receptores capaces de
reconocer patógenos; incluyen receptores innatos intra y extracelulares como TLR (receptores tipo toll), Dec-1, receptores del complemento
(CR) y el receptor adaptativo BCR (receptores del linfocito B).

VÍAS ENDOCÍTICAS EN LOS LINFOCITOS B RESPONSABLES DE LA CAPTACIÓN BACTERIANA.

En los linfocitos B, las vías endocíticas desempeñan un papel crucial en la captación y presentación de antígenos
bacterianos. Los linfocitos B son células del sistema inmunológico responsables de la producción de anticuerpos y
de la respuesta humoral.

Existen varias vías endocíticas implicadas en la captación bacteriana por los linfocitos B, siendo las
principales:

1. Fagocitosis: En la fagocitosis, los linfocitos B pueden actuar de manera similar a las células fagocíticas, como los
macrófagos y los neutrófilos. Los receptores de membrana de los linfocitos B, como los receptores de anticuerpos
(inmunoglobulinas) y los receptores del complemento, pueden reconocer y unirse a las bacterias. Posteriormente,
se forma una vesícula de fagocitos llamada fagosoma que contiene la bacteria. El fagosoma se fusiona con los
lisosomas, donde las enzimas lisosómicas degradan la bacteria y generan péptidos antigénicos que pueden ser
presentados a otras células del sistema inmunológico.
2. Endocitosis mediada por receptor: Los linfocitos B también pueden utilizar receptores de membrana específicos
para la captación de bacterias. Por ejemplo, los receptores de tipo Toll (TLR) son receptores de reconocimiento de
patrones que reconocen componentes microbianos específicos. La unión de los TLR a los componentes bacterianos
activa la endocitosis mediada por receptor y conduce a la formación de endosomas que
contienen las bacterias. Los endosomas pueden fusionarse con los lisosomas, donde
ocurre la degradación y posterior presentación antigénica.

Modelo de un receptor de tipo Toll (TLR3) unido a una molécula de RNA

bicatenario (dsRNA).
 Los dominios extracelulares para union a ligando de los TLR contienen una superficie curva amplia compuesta
sobre todo por repeticiones abundantes en leucina que brindan flexibilidad en la union con el ligando.
El ligando dsRNA (doble helice azul y naranja) se une a un dimero de TLR cuyos dominios transmembrana y
citoplasmatico estan en contacto estrecho.
El complejo esta “listo” para enviar una senal intracelular que alerte a la celula sobre la presencia de una molecula
de acido nucleico extrana.

3. Endocitosis mediada por clatrina: La endocitosis mediada por clatrina es una vía común de captación de
antígenos en muchas células, incluidos los linfocitos B. En esta vía, los receptores de membrana específicos
reconocen los componentes bacterianos y se produce la formación de vesículas recubiertas de clatrina. Estas
vesículas se internalizan en la célula y se fusionan con los endosomas, donde ocurre la degradación de los
antígenos bacterianos.

En resumen, los linfocitos B utilizan diversas vías endocíticas, como la fagocitosis, la endocitosis mediada por
receptor y la endocitosis mediada por clatrina, para la captación de bacterias y la presentación de antígenos. Estas
vías endocíticas les permiten reconocer, internalizar y degradar las bacterias, y presentar los antígenos resultantes a
otras células del sistema inmunológico para desencadenar una respuesta inmune específica.
LINFOCITOS T
Clases principales de linfocitos T
Linfocitos T citotóxicos efectores: eliminan directamente las células
que han sido infectadas por un virus o por algún otro patógeno
intracelular.
Linfocitos T colaboradores (helper):
contribuyen a estimular las respuestas de otras células,
principalmente macrófagos, células dendríticas, linfocitos B, y
linfocitos T citotóxicos.
Linfocitos T reguladores: suprimen la actividad de otras células, en
especial de los linfocitos T efectores autorreactivos.

Receptor

heterodimérico de linfocitos T
RESPUESTAS INMUNITARIAS INNATAS
Las respuestas inmunitarias innatas son las que establece el cuerpo de inmediato, sin necesidad de un contacto previo con el
microbio. Confieren una PRIMERA LÍNEA DE DEFENSA.

Un microbio invasor casi siempre establece el contacto inicial con el sistema inmunitario innato cuando loencuentra una
célula fagocítica, como un macrófago o una célula dendrítica.

Estos fagocitos tienen diversas proteínas receptoras en su superficie que reconocen ciertos tipos de macromoléculas muy
conservadas con funciones esenciales en virus o bacterias, pero que no producen las células del cuerpo.

Se han identificado varios de estos receptores de reconocimiento de patrón, los más importantes son los RECEPTORES TIPO
TOLL.

En la familia de receptores tipo toll humanos existen receptores que reconocen componentes lipopolisacáridos o
peptidoglucanos de la pared celular bacteriana, la proteína flagelina que se encuentra en los flagelos bacterianos y los
dinucleótidos CpG no metilados (característicos del ADN bacteriano).

La activación de un receptor tipo toll por una de estas moléculas derivadas de patógeno inicia una cascada de señalización en
la célula que puede conducir a diversas reacciones inmunitarias protectoras, incluida la activación de células del sistema
inmunitario adaptativo.
RESPUESTAS INMUNITARIAS ADAPTATIVAS
A diferencia de las respuestas innatas, las respuestas inmunitarias adaptativas (o adquiridas) requieren un período durante el cual el
sistema inmunitario se prepara para un ataque contra el agente extraño.
A diferencia de las respuestas innatas, las adaptativas son muy específicas y pueden discriminar entre dos moléculas muy similares.
Por ej., la sangre de una persona que acaba de recuperarse del sarampión contiene anticuerpos que reaccionan contra el virus que causa el
sarampión, pero no con un virus relacionado, como el que ocasiona la parotiditis.
A diferencia del sistema innato, el adaptativo además tiene “memoria”, lo cual casi siempre significa que la persona no sufrirá una
reinfección por el mismo patógeno en su vida.
En tanto que todos los animales tienen algún tipo de inmunidad innata contra microbios y parásitos, se sabe que solo los vertebrados
establecen una reacción adaptativa.
De qué manera el sistema inmunitario innato colabora en la activación del sistema inmunitario adquirido. Las celulas
dendríticas ingieren microorganismos invasores o sus productos en el lugar de la infeccion. Los PAMP (patrones
moleculares asociados a patogeno) microbianos inducen a las celulas dendriticas a expresar en su superficie proteinas
coestimuladoras y a migrar a traves de los vasos linfaticos a un ganglio linfatico proximo. En el ganglio, las celulas
dendriticas activan la pequena fraccion de linfocitos T que expresan un receptor para los antigenos microbianos mostrados
por la celula dendritica en su superficie. Estos linfocitos T proliferan y algunos de ellos migran al lugar de la infeccion, donde
colaboran en la eliminacion de los microorganismos, ayudando en la activacion de los macrofagos o eliminando las celulas
infectadas.

Hay dos grandes categorías de

inmunidad adaptativa:

■ Inmunidad humoral, que se

establece mediante anticuerpos
que son proteínas sanguíneas
globulares de la superfamilia de la
inmunoglobulina.

■ Inmunidad mediada por células.

LINFOCITOS T:
ACTIVACION Y
MECANISMO DE
ACCIÓN
Del mismo modo que la célula B
produce solo una especie de
anticuerpo, cada célula T tiene
solo una especie de receptor de
la misma.

A diferencia de los linfocitos B

que se activan por antígenos
intactos y solubles, los linfocitos
T se activan por fragmentos de
antígenos que se presentan en la superficie de otras células
llamadas

CÉLULAS PRESENTADORAS DE ANTÍGENO (APC) como las

células dendríticas y los macrófagos.

MHC: complejo mayor de

histocompatibilidad

Tras activarse, la célula T prolifera para formar un clon de linfocitos T con el mismo receptor de célula T.

Se estima que una sola célula T activada puede dividirse 3 a 4 veces al día durante varios días, lo que genera una enorme
población de linfocitos T capaces de interactuar con el antígeno extraño.

Una vez que se elimina el antígeno extraño, la gran mayoría de la población extendida de linfocitos T muere por apoptosis y
deja una población relativamente pequeña de linfocitos T de memoria, capaces de responder con rapidez en caso de un
contacto futuro con el mismo patógeno.

A diferencia de los linfocitos B que secretan anticuerpos, los linfocitos T realizan su función mediante interacciones directas
con otras células (linfocitos B, otros linfocitos T o células blanco localizadas en todo el cuerpo).
Esta interacción entre células puede conducir a la activación, desactivación o muerte de la otra célula. Además del contacto
directo, muchas interacciones de los linfocitos T tienen la mediación de mensajeros químicos llamados CITOCINAS.

Las citocinas se unen con receptores específicos en la superficie de una célula que responde, lo que genera una señal
interna que altera la actividad de la célula. Como respuesta a
una citocina, es posible que una célula se prepare para
dividirse, se diferencie o secrete sus propias citocinas.

Esquema que muestra la función de los linfocitos

cooperadores o helper (TH) en la formación de
anticuerpos.
El macrofago interactua con el antigeno complejo. El
antigeno se lleva al interior del macrofago y se divide en
fragmentos, los cuales se presentan en la superficie
celular.
El macrofago interactua con una celula TH cuyo TCR se
une con uno de los fragmentos del antigeno presentados
(la proteina verde es una molecula MHC). Esta interaccion
activa al linfocito T.
El linfocito TH activado interactua con una celula B,
cuyo receptor para antigeno esta unido con un antigeno
soluble intacto.
La activacion del linfocito B se estimula por CITOCINAS
(p. ej., IL-4, IL-5 e IL-6) liberadas por el linfocito TH hacia el
espacio que lo separa del linfocito B adyacente.
La interaccion con el linfocito TH activa al linfocito B, lo que
induce la proliferacion de este ultimo.
La progenie de linfocitos B activada se diferencia en
células plasmaticas que sintetizan anticuerpos que pueden
unirse con el antigeno.

Enfermedades causadas por anticuerpos y por complejos antígeno-anticuerpo

Los anticuerpos contra las células o los componentes de la matriz extracelular pueden depositarse en cualquier tejido que exprese el
antígeno diana relevante.

Las enfermedades causadas por tales anticuerpos

suelen ser específicos contra un tejido particular.

Los inmunocomplejos a menudo se depositan en los

vasos sanguíneos, especialmente en aquellos a
través de los cuales se filtra el plasma a una elevada
presión (ej., glomérulos renales y sinovial articular).

Las enfermedades por inmunocomplejos tienden a

ser sistémicas y con frecuencia se manifiestan como
una vasculitis generalizada, artritis y nefritis.

Los anticuerpos específicos contra antígenos

celulares y tisulares pueden depositarse en tejidos y
producir lesión al inducir una inflamación local, unirse
a las células y promover su destrucción, o interferir
en las funciones celulares normales.
COMUNICACIÓN INTERCELULAR Y TRANSMISIÓN DE SEÑALES
BASES MOLECULAR DE LA COMUNICACIÓN INTERCELULAR

Los organismos unicelulares pueden realizar todas las funciones necesarias para mantener la vida. Por ejemplo, una
ameba, organismo unicelular, asimila los nutrientes del medio, se mueve, lleva a cabo las reacciones metabólicas de
síntesis y degradación y se reproduce. En los organismos pluricelulares, la situación es mucho más compleja, ya que las
diversas funciones celulares se distribuyen entre distintas poblaciones de células , tejidos y órganos. De este modo en
un organismo pluricelular, cada célula depende de otras y las influye. Por lo tanto la mayoría de las actividades celulares,
solo se desarrollan, si las células involucradas son alcanzadas por estímulos provenientes de otras. Para coordinar todas
estas diversas funciones deben existir mecanismos de comunicación intercelular.

Cuando una célula recibe un estímulo puede responder con alguno de los siguientes cambios, dependiendo de las
características del estímulo y el tipo de célula receptora del mismo: por ejemplo, se puede diferenciar, reproducir,
incorporar o degradar nutrientes, sintetizar, secretar o almacenar distintas sustancias, contraerse, propagar señales o
morir.

Inducción
En la mayoría de los organismos superiores existen dos métodos fundamentales de comunicación intercelular: un sistema
fundado en las neuronas o células nerviosas y otro basado en las hormonas. En ambos sistemas las células se comunican
entre si a través de mensajeros químicos.

Las neuronas envían mensajes a sus células efectoras (células blanco), que pueden ser células musculares, células
glandulares u otras neuronas. Para enviar su mensaje, la neurona libera una sustancia química, un neurotransmisor. El
neurotransmisor es liberado en sitios específicos llamados sinapsis [1] . Las moléculas de neurotransmisor se unen
a receptores, situados en la superficie de la célula blanco, y provocan de esta forma cambios físicos y químicos en la
membrana celular y en el interior celular.

Por lo tanto diremos que en general, la acción de estimular a las células desde el exterior se llama inducción y se realiza
a través de sustancias producidas por células inductoras. La célula que es sensible al inductor se denomina célula
inducida, blanco o diana y presenta para el mismo receptores específicos (fig. 7.1), que pueden ubicarse en la
membrana plasmática, el citoplasma o en el núcleo. Estos receptores son proteínas o complejos proteicos.
 Fig. 7.1- Efecto de un mismo inductor sobre diferentes células blanco. Un inductor puede tener varios receptores,
causando distintas respuestas celulares

Cuando el receptor se encuentra en el citoplasma o en el núcleo, el inductor debe ser pequeño e hidrófobo, de modo que
pueda atravesar la membrana plasmática sin dificultad, mientras que los receptores de membrana pueden recibir
inductores de cualquier tipo.

La acción de las hormonas, puede darse básicamente de acuerdo a uno de estos cinco tipos de inducción:

1. Endocrina: una glándula libera hormonas (inductor) que pueden actuar sobre células u órganos situados en cualquier
lugar del cuerpo (células blanco). Por lo tanto podemos decir que células inductoras e inducidas se encuentran distantes.
Las glándulas endocrinas liberan hormonas al torrente sanguíneo: las células o tejidos blanco poseen receptores que
reconocen exclusivamente los diferentes tipos de moléculas hormonales. Así un receptor reconoce exclusivamente una
hormona. Una célula puede tener distintos tipos de receptores, y así reconocer diferentes hormonas. Ej. Insulina,
glucagón, hormonas adenohipofisiarias, etc.

2. Paracrina: Una célula o un grupo de ellas liberan una hormona que actúa sobre las células adyacente que presenten
el receptor adecuado. De esta forma la célula inductora e inducida se encuentran próximas. Ej. Prostaglandinas

3. Autocrina: Una célula libera una hormona que actúa sobre la misma célula. Ej. prostaglandinas
4. Neuroendocrina: Una neurona libera su neurosecreción al torrente sanguíneo. Ej. Oxitocina, ADH, hormonas
liberadoras e inhibidoras hipotalámicas

5. Por contacto directo: La hormona o molécula inductora es retenida en la membrana plasmática de la célula
inductora, por lo tanto no se secreta. Las células deben ponerse en contacto, para que la sustancia inductora tome
contacto con el receptor localizado en la membrana plasmática de la célula inducida. Ejemplo de este tipo de
comunicación tienen lugar en algunas respuestas inmunológicas.

6. Yuxtacrina ( a través de uniones comunicantes, nexus o gap: Las células conectadas a través del establecimiento
de este tipo de uniones firmes, puede responder de forma coordinada ante un inductor que se une a alguna de las
células que están comunicadas. A través de estas uniones pasan pequeñas moléculas como los segundos mensajeros.

Fig. 7.2 - Algunas formas de inducción por moléculas secretadas

Fig. 7.3- Inducción via uniones gap

Como vemos existen importantes diferencias entre la comunicación hormonal y la nerviosa. Las neuronas tienden a actuar
sobre una célula en particular o sobre un grupo de ellas. Generalmente los axones recorren distancias cortas , aunque
existen excepciones a esta regla. La comunicación entre neuronas puede desarrollarse en cuestión de milisegundos.
Por el contrario, una hormona liberada al torrente sanguíneo por una glándula, puede alcanzar células y tejidos en
cualquier parte del cuerpo, siempre que estas tengan el receptor adecuado, además la comunicación hormonal puede
prolongarse por espacio de minutos o varias horas.

Fig. 7.4 - Inducción endócrina versus inducción sináptica. Observe como la hormona vehiculizada por la sangre alcanza a todas las
células del cuerpo, uniendose sólo a las que presentan receptores específicos. En la sinapsis, el neurotransmisor transportado a las
terminales nerviosas por flujo axónico, es liberado en el espacio sináptico, alcanzando sólo a las células efectoras próximas a la
terminal nerviosa.

Características del complejo inductor- receptor

Cuando una hormona pasa a la circulación sanguínea, puede alcanzar todos los tejidos del cuerpo, sin embargo, por lo
general su acción sólo se evidencia en un limitado número de células. Como señaláramos, el receptor es por lo general un
complejo proteico específico al que cada inductor se une selectivamente, de este modo la sustancia inductora y su
receptor forman un complejo que presenta las siguientes características:

Encaje inducido: La unión inductor- receptor supone una adaptación estructural entre ambas moléculas, similar al
complejo enzima-sustrato.

Saturabilidad: ya que el número de receptores en una célula es limitado, un eventual aumento en las concentraciones del
inductor, pondría en evidencia la saturabilidad del sistema.

Reversibilidad: El complejo inductor-receptor se disocia después de su formación.

La interacción inductor-receptor es la primera de una serie de reacciones consecutivas

que se propagan por el interior de la célula, mientras que el último eslabón de esta serie puede considerarse cómo la
respuesta.

Como ya lo adelantáramos y de acuerdo a la ubicación de los receptores específico, los inductores se pueden clasificar
en dos grupos: a) los que se unen a receptores de membrana y b) los que ingresan a la célula y se unen a receptores
citosólico.

A su vez las moléculas que actúan como hormonas pueden clasificarse de acuerdo a su estructura química en cuatro
categorías:

1. Esteroides: Las hormonas esteroides son derivados del colesterol. Ejemplos de las hormonas esteroides son los
glucocorticoides, los mineralocorticoides, los esteroides sexuales, la vitamina D y el ácido retinoico.

2. Derivados de aminoácidos: hormonas derivadas del aminoácido tirosina. Conocidas como aminohormonas. Existen dos
tipos de aminohormonas las que interactúan con receptores de membrana (adrenalina y noradrenalina, producidas por la
glándula suprarrenal) y las que se unen a receptores citosólicos (por ejemplo, la hormona tiroidea producida por la
glándula tiroides).
3. Péptidos o proteínas: Son cadenas de aminoácidos. Ejemplos de hormonas peptídicas son la oxitocina y la hormona
antidiurética. Ejemplos de hormonas proteicas son la Insulina y la hormona del crecimiento. Estas proteínas y otros
factores de crecimiento son mitógenos potentes. (es decir activan la mitosis).

4. Derivados de ácidos grasos: Las prostaglandinas y las hormonas juveniles de los insectos son hormonas derivadas de
ácidos grasos.

Debemos recordar que estas moléculas son mensajeros químicos, cuya función es coordinar las respuestas de las
distintas poblaciones celulares en un organismo pluricelular. Sin embargo, estos mensajeros químicos no actúan de la
misma forma. Por ejemplo las hormonas peptídicas y proteicas debido a su tamaño y polaridad, no pueden atravesar la
membrana plasmática y deben unirse a receptores dispersos en la superficie externa de la célula. Estos son los llamados
receptores de membrana, que en general son glicoproteicos. Los receptores de membrana detectan la llegada de una
hormona y activan una ruta de transmisión de señales intracelular, que en ultima instancia regula los procesos celulares.
Por lo tanto en este caso podemos decir, que la membrana plasmática celular constituye una barrera que se opone al
flujo de información. En la membrana plasmática se alojan mecanismos que transducen las señales externas, en otras
internas, responsables últimos de la regulación de las funciones celulares. En general vamos a denominar a las señales
externas (hormonas), como primeros mensajeros, y a las señales internas como segundos mensajeros. El proceso de
generar los segundos mensajeros, depende de una serie de proteínas de la membrana celular. Los segundos mensajeros
son en general moléculas de pequeño tamaño, cuya rápida difusión permite que la señal se propague rápidamente por todo
el interior celular.

El otro tipo de señales extracelulares (inductores) son las hormonas esteroideas y las hormonas tiroideas, que por su
naturaleza hidrofóbica (liposoluble), pueden difundir a través de la membrana plasmática, e interactuar directamente
con receptores que se encuentran en el interior de la célula, por ejemplo en el citosol . Una vez que el inductor,
interactua con el receptor citosólico, formando un complejo Hormona-Receptor, este complejo ingresa al núcleo donde
activan genes específicos.

BASE MOLECULAR DE LA COMUNICACIÓN INTRACELULAR

Inducciones celulares mediadas por receptores de membrana asociados a proteínas G

Podemos decir que las rutas de transmisión de información intracelular comparten una secuencia de procesos. Los
mensajeros externos (primer mensajero), se unen a las moléculas receptoras que activan a las proteínas
transductoras asociadas al receptor. Estas proteínas una vez activadas, transportan señales a través de la membrana a
las enzimas amplificadoras, que generan las señales internas transportadas por los segundos mensajeros.

En este caso de inducción, el receptor de membrana, transmite la información a través de la membrana plasmática, hacia
el interior de la célula, por medio de una proteína transductora, la proteína G. Las proteínas G poseen tres subunidades,
alfa, beta y gamma. La subunidad alfa puede unir GTP y también puede degradarlo (actividad GTPasa). El dímero beta-
gamma mantiene a la proteína G unida a la membrana. Estas proteínas G, solo pueden activarse cuando unen Guanosin
trifosfato (GTP). Por lo tanto la interacción del receptor unido al ligando provoca la activación de la proteína G y su
unión al GTP. La proteína G activada, provoca la activación de una enzima amplificadora. Esta enzima convierte las
moléculas precursoras ricas en fosfato en los segundos mensajeros. Por ejemplo, la enzima amplificadora adenilato
ciclasa convierte el ATP en AMPc, mientras que la enzima amplificadora fosfolipasa C corta el fosfolípido de membrana
4,5-difosfato fosfatidil inositol (PIP2) en diacilglicerol (DAG) e inositol trifosfato (IP3). Como dijimos anteriormente la
proteína G tiene actividad GTPasa (degrada el GTP), es decir que pasado un tiempo la misma proteína G se desactiva,
terminando con la señal. En el estado inactivo la proteína G esta unida a GDP.
Fig. 7.5 - Secuencia de reacciones producidas a partir de la unión de la sustancia inductora con un receptor de membrana que activa a
la proteína G, vía Adenilato ciclasa.

Fig. 7.6 - Secuencia de reacciones producidas a partir de la unión de la sustancia inductora con un receptor de membrana que activa a
la proteína G, vía Fosfolipasa C (vía de los Fosfato inositoles).
 Cuadro 7.1- Cuadro comparativo de las vías de transmisión a través de segundos mensajeros

LOCALIZACIÓN VÍA ADENILATO CICLASA (AC) Pasos generales VÍA DE LOS FOSFATO DE INOSITOL

CELULAR

Adrenalina Inductor (Primer mensajero) Adrenalina

Espacio extracelular
¯ ¯ ¯

Receptor b-adrenérgico Receptor Receptor a1-adrenérgico

¯ ¯ ¯

Proteína Gs Transductor Proteína Gq

Membrana plasmática
¯ ¯ ¯

Adenilato ciclasa (AC) Amplificador Fosfolipasa C (PLC)

¯ ¯ ¯

ATP Precursor Fosforilado PIP2

¯ ¯ ¯

AMPc Segundo mensajero DAG - IP3 - Ca2+

¯ ¯ ¯

Citosol Proteinquinasa A (PKA) Fosforilación de Proteinquinasas Proteinquinasa C (PKC)

¯ ¯ ¯

Fosforilación de Fosforilquinasas Fosforilaciónes enzimáticas Liberación de Ca2+ al citosol

¯ ¯ ¯

Glucógeno ® Glucosa Respuesta Celular Vasoconstricción

Resumiendo, existen dos rutas principales de transmisión por medio de segundos mensajeros:

La primera vía utiliza como segundo mensajero al adenosin monofosfato cíclico (AMPc). El AMPc es generado por la
enzima amplificadora Adenilato ciclasa.

La segunda vía utiliza una combinación de tres segundos mensajeros: iones calcio (Ca2+), inositol trifosfato (IP3) y
diacilglicerol (DAG). En este caso la enzima amplificadora es la fosfolipasa C que genera el IP3 y el DAG a partir del
fosfolípido de membrana el fosfatidil inositol difosfasto (PIP2). El IP 3 provoca la liberación del Ca ++ intracelular, de sus
reservorios, como por ejemplo el REL.

Existen dos tipos de Proteínas G, las proteínas G estimuladoras (Gs y Gq) y las proteínas G inhibitorias (Gi)

La Proteína Gs (s, stimulatory G protein) unida a GTP activa a la AC (adenilato ciclasa) aumentando la cantidad de AMPc
en el interior celular.

La proteína Gi (i, inhibitory G protein) unida a GTP inactiva a la adenilato ciclasa, disminuyendo indirectamente la
cantidad de AMPc intracelular.

La proteína Gq unida a GTP activa a la fosfolipasa C, aumentando la cantidad de DAG, IP 3 y Ca++ intracelular.
 Fig. 7.7 - Activación de la proteinaquinasa A dependiente de AMPc

El AMPc regula la actividad de la proteinquinasa A (PKA)

Como vimos anteriormente la activación de la AC (adenilato ciclasa) por una proteína Gs aumenta la concentración de
AMPc en el citosol. Este AMPc puede unirse a un sitio regulador de una proteinquinasa especifica denominada
proteinquinasa A (PKA). Toda proteinquinasa A consta de dos subunidades una catalítica y otra regulatoria. La unión del
AMPc a la subunidad regulatoria, provoca la activación de la PKA y la liberación de las subunidades catalíticas activas.
Esta proteinquinasa inicia una cascada de fosforilaciones que determinan las respuestas celulares especificas de cada
tipo celular, como se observa en el ejemplo de la Fig. 7.8.

Fig. 7.8 - Efecto de la proteinquinasa A sobre la gluconeogénesis

EL diacilglicerol (DAG) activa a la proteinquinasa C (PKC)

La proteinquinasa C (por Ca2+ dependiente) es una enzima de membrana activada por el DAG. La PKC es una serin-treonin
quinasa (agrega fósforo a los aminoácidos serina y treonina), que inicia una cadena de fosforilaciones, cuyos productos
finales actúan a nivel del núcleo celular. Allí actúan como factores de transcripción celular que regulan la multiplicación
celular. Cuando el DAG se degrada la PKC se inactiva.

El Inositol trifosfato (IP3), provoca la liberación de Ca2+ del retículo endoplásmico liso (REL)

EL IP3 provoca la apertura de los canales de Ca 2+ dependientes de ligando (en este caso el IP 3) del REL (retículo
endoplásmico liso). Esto provoca la salida del Ca 2+ del REL hacia el citosol. El calcio citosólico se comporta como segundo
mensajero.

El Ca2+ citosólico se une a la calmodulina

La calmodulina es una proteína pequeña que une calcio. La unión del calcio a la calmodulina provoca un cambio
conformacional en esta proteína. El complejo calcio-calmodulina se une a otras proteínas, activándolas. De esta forma el
calcio por intermedio de su unión a la calmodulina puede actuar sobre varias vías de señalización. Por ejemplo, el
complejo calcio-calmodulina puede unirse a una quinasa, calcio dependiente, para iniciar una cascada de fosforilaciones o
a la enzima fosfodiesterasa que degrada el AMPc.

Ejemplos de respuestas inducidas por AMPc

Activación génica: La activación de la proteinquinasa A (PKA) por el AMPc, provoca la fosforilación de un factor de
transcripción denominado, CREB (por elemento relacionado a proteínas que responden al AMPc) en las células que
secretan el péptido somatostatina (hormona inhibidora de la hormona del crecimiento). El CREB fosforilado (CREBP) se
une al ADN en sitios específicos denominados amplificadores regulados por AMPc, activando la transcripción de los
genes que codifican esta hormona.

Sentido del olfato. Este sentido depende de receptores que responden a moléculas inductoras
denominadas odorantes, que se encuentran en el aire. Los receptores de los odorantes de encuentran ubicados en
neuronas ciliadas, que forman el epitelio olfatorio. Estas neuronas cuando mueren son reemplazadas regularmente por
otras nuevas que se reproducen en el epitelio basal. El odorante se une al receptor, que es una proteína multipaso, y
esto provoca la activación de una proteina G, asociada al receptor. Esto a su vez produce la activación de la enzima
Adenilato ciclasa, con la consiguiente producción de AMPc (segundo mensajero) a partir del precursor fosforilado ATP.
El aumento del AMPc en el citosol provoca la apertua de los canales de Na + metabotrópicos. La apertura de estos canales
permite la entrada de Na + al interior celular, lo que provoca la despolarización de la membrana y la eventual generación
de un potencial de acción. El potencial de acción es conducido por el nervio olfatorio hasta el cerebro, donde la señal es
evaluada como un olor determinado.

Amplificación de señales

La unión del inductor al receptor de membrana activa a varias proteínas G, cada proteína G puede activar a su vez una
AC por un período prolongado, generándose muchas moléculas de AMPc, cada molécula de AMPc activa una
proteinquinasa A, que a la vez pueden fosforilar muchas moléculas de enzima, activándolas. Cada enzima puede producir
muchas moléculas de producto.

De esta simple secuencia deducimos, que de la unión de un inductor a su receptor de membrana, se obtiene una
respuesta celular amplificada, pues obtenemos varias unidades de producto, partiendo de una unidad de inductor.

En algunos casos, la disociación entre el receptor y el ligando es tan rápida que no tiene lugar esta amplificación. En
general las respuestas pueden ser rápidas, sólo si el mecanismo de inactivación también es rápido.
 Fig. 7.9 - Amplificación en una cascada catalítica en respuesta a la formación del complejo inductor/receptor

Inducciones en las que participan receptores de membrana con actividad enzimática

Los receptores de membrana con actividad enzimática, poseen en general tres dominios:

· Un dominio extracelular (extracitoplasmático), que une al primer mensajero (ligando)

· Un dominio transmembrana

· Un dominio intracelular (citoplasmático), con actividad enzimática.

Fig. 7.10- Esquema de un receptor tirosinquinasa (RTK) de la insulina

Esta actividad enzimática es en general una quinasa.
En este caso nos referiremos a los receptores que cuando se activan por unión del ligando, la quinasa activada es
una tirosinquinasa, es decir una enzima que fosforila específicamente aminoácidos tirosina. La actividad tirosinquinasa del
receptor puede fosforilar tirosinas localizadas en el receptor (autofosforilación), como aminoácidos tirosina de otras
proteínas citoplasmáticas.

La generación de múltiples señales simultaneas a partir de la activación de los receptores tirosinquinas (RTK), depende de
tres factores:

· Organización Modular en la generación de señales. Los receptores activados fosforilan residuos de tirosina. Estos
aminoácidos fosforilados son reconocidos por múltiples proteínas que poseen dominios SH2 (se unen a fosfotirosinas). Estas
proteínas al unirse al receptor se activan y generan señales intracelulares.

· Moléculas Adaptadoras sin actividad enzimática, que se unen a los receptores por sus dominios SH2. Estas proteínas
enganchan a su vez otras proteínas a los receptores activados. Estas proteínas unidas al receptor por medio de los
adaptadores, activan nuevas vías de señalización.

· Proteínas Scaffolds (andamio, armazón, soporte) que permiten la activación simultanea (coordinada) de múltiples vías de
señalización.

El receptor de insulina
Entre los RTK mas importantes encontramos al receptor de insulina. Recordemos que la insulina cumple múltiples funciones, es
hipoglucemiante es decir que permite la entrada de glucosa a los tejidos insulinodependientes, disminuyendo de esta forma la
cantidad de glucosa en sangre. Es un potente estimulante de la síntesis de lípidos en las células adiposas. También potencia la
síntesis proteica y estimula el crecimiento y la división de todas las células del organismo.

Como vimos anteriormente el receptor de insulina se autofosforila en el aminoácido tirosina y fosforila también a otras
proteínas que se asocian a él del lado citoplasmático. Estos sitios fosfotirosina sirven de enganche a proteínas que poseen
dominios llamados SH2. La interacción de estas proteínas que poseen dominios SH2 y el receptor de insulina puede activar
diferentes respuestas dependiendo de la proteína en particular. Si se trata de una molécula con actividad enzimática puede
activarse, en cambio si se trata de una molécula adaptadora puede activar otras proteínas que se unen a ella.

La estructura del receptor de insulina es tetramérica. Dos subunidades alfa y dos subunidades beta. Las subunidades alfa unen
la insulina y las subunidades beta, atraviesan la membrana y poseen la actividad tirosinquinasa.

Otros receptores con actividad tirosinquinasa

Entre otros RTKs podemos nombrar a los receptores del factor de crecimiento epidérmico (EGF) y el factor de crecimiento
derivado de plaquetas (PDGF). Estos receptores a diferencia del receptor de insulina son monoméricos, mientras no están
unidos al inductor. Cuando se activan, por unión del ligando, interactúan entre si para formar dímeros. La dimerización activa la
función tirosinquinasa y la siguiente autofosforilación del receptor.

Proteina Ras

Fig. 7.11- Activación de la proteína Ras

La proteína Ras es una pequeña proteína G citosólica. Es monomérica a diferencia de la proteína G de membrana que es
trimérica. Al igual que otra proteínas G, tiene actividad GTPasa y por lo tanto muestra ciclos activos (unidos al GTP) e
inactivos (unidos al GDP).

Esta proteína cumple un rol fundamental en varias vías de señalización internas. Una de las más importantes vías en la
que interviene Ras es la cascada de proteinquinasa activada por mitógeno (MAPK). En esta vía un mitógeno (insulina,
algún factor de crecimiento), activa a su RTK que se autofosforila, esto crea sitios fosfotirosina que actúan de anclaje
para proteínas que poseen dominios SH2. En este caso se une al receptor, un complejo adaptador cuya función es
activar a la proteína Ras. La proteína Ras activada (Ras-GTP), estimula a su vez a una tirosinquinasa llamada Raf que
inicia una cadena de fosforilaciones, que culmina con la activación de genes que están involucrados en la síntesis de ADN
y en la activación de la división celular.

Inducciones en las que participan receptores citosólicos

Las hormonas esteroideas, tiroxina (T4) y triiodotironina (T3) , calcitriol (vitamina D) y el ácido retinoico son ejemplos
de inductores que tienen sus receptores en el citosol de las células inducidas. Los tres primeros se vehiculizan por la
sangre y entran en la categoría de inductores endocrinos, mientras que el ácido retinoico interviene en inducciones
parácrinas, sobre todo durante el desarrollo embrionario. En el citosol, el inductor se une a su correspondiente
receptor, formando un complejo que ingresa en núcleo uniéndose a la secuencia reguladora de un gen específico,
conocida como elemento de respuesta a la hormona, el cual se activará, desencadenándose la transcripción del mismo.
Como resultado se formará un ARNm y a partir de este la síntesis de una proteína, como respuesta de la célula inducida.

Fig. 7.12 - Inducción celular a través de un receptor citosólico. Modo de acción de las hormonas esteroides, T3 y T4,
calcitrioll y ácido retinoico.

El óxido nitrico (NO) como inductor

Otro ejemplo, lo constituye el oxido nítrico (NO). Este último cuando es secretado por las células endoteliales de los
vasos sanguíneos o por algunas neuronas, se comporta como un inductor. Su acción dentro de la células es muy breve,
pues es metabolizado en el lapso de breves segundos.

El óxido nítrico secretado por las células endoteliales tiene como blanco a las células musculares lisas de los mismos
vasos, las cuales se relajan, produciendo por lo tanto una vasodilatación.

Durante el proceso de erección del pene, la acetilcolina es liberada por los terminales axónicos del sistema
parasimpático e interactúa con los receptores de membrana de las células endoteliales. Como respuesta se activa en
estas células la enzima óxido nítrico sintetasa que genera óxido nítrico a partir del aminoácido arginina, este inductor
pasa al espacio intercelular hasta alcanzar el citoplasma de las células musculares lisas, promoviendo la vasodilatación y
la consiguiente erección del pene.
Otro ejemplo es el de la nitroglicerina, utilizada para tratar la angina de pecho, una afección cardiaca. Luego de su
administración la nitroglicerina se convierte gradual y lentamente en óxido nítrico, que dilata los vasos coronarios por
períodos relativamente largos.

Un descubrimiento reciente, es la participación del oxido nítrico, en el proceso de fertilizacion. En este complejo
proceso el citoplasma del espermatozoide posee la enzima oxido nítrico sintetasa (NOS), que se activa con la reacción
acrosómica, de esta forma se activa la síntesis del NO. Una vez producida la fusión entre el óvulo y el espermatozoide,
tanto la enzima que lo sintetiza como el NO son liberados dentro de la célula huevo, donde el NO produce la liberación
del Ca2+ intracelular en el citoplasma, acontecimiento que activa al zigoto que comienza a dividirse y crecer en un
embrión.

ACTIVIDADES DE AUTOEVALUACIÓN

Preguntas multiple opción

1) La función del AMPc es la de:

a- primer mensajero b- segundo mensajero

c- transportador de electrones d- transportador de energía

2) Las hormonas esteroides tienen sus receptores en:

a- la monocapa intracelular de la membrana plasmática b- la monocapa intracelular de la membrana plasmática

c- el citoplasma d- las chaperonas

3) ¿Cuál de las siguientes hormonas disminuye la concentración de ázucar en sangre?

a- Glucagón b- Aldosterona

c- Insulina d- Todas las hormonas esteroideas

4) ¿Cuál de las siguientes puede representa la secuencia precisa de componentes en una respuesta celular a una
hormona peptídica?

a- Hormona unida a la adeniciclasa (AC) proteína G proteinquinasa fosforilación de enzimas

b- Hormona unida al receptor proteína G factor de transcripción proteinquinasa

c- Hormona unida a proteina G AC proteinquinasa fosforilación de proteínas

d- Hormona unida al receptor proteína G AC proteinquinasa fosforilación de proteínas

5) Un segundo mensajero derivado de la estructura lipídica de la membrana plasmática es:

a- AMPc b- Calmodulina

c- IP3 d- Ca++

6) La principal diferencia en el mecanismo de acción entre las hormonas esteroideas y peptídicas es que:

a- Las hormonas esteroideas principalmente afectan la síntesis proteica mientras que las peptídicas afectan
mayormente la actividad de las proteínas ya existentes en la célula

b- Las células blanco reaccionan más rápido a las hormonas esteroideas que peptídicas

c- Las hormonas esteroideas entran en el núcleo mientras que las peptídicas permanecen en el citoplasma

d- Las hormonas esteroideas se unen a un receptor proteico mientras que las peptídicas se unen a la proteína G
 CICLO CELULAR Y DUPLICACIÓN DEL ADN

Ciclo celular
Las células de los distintos organismos pasan durante su vida por distintos períodos, cada uno de ellos característico y
claramente diferenciado.

Cada tipo celular cumple con sus funciones específicas durante la mayor parte de su vida, creciendo gracias a la asimilación de
materiales provenientes de su ambiente y con ellos sintetiza nuevas moléculas por medio de complejos procesos regulados por
su material genético.

Cuando una célula aumenta hasta llegar a un determinado tamaño, su eficiencia metabólica se torna crítica, entonces se divide.
En los organismos pluricelulares, se produce un crecimiento a partir de una célula (huevo o cigoto) como así también se aumenta
la masa tisular y se reparan los tejidos lesionados o desgastados, por aumento del número de células.

Las nuevas células originadas en esta división poseen una estructura y función similares a las células progenitoras, o bien
derivadas de ellas.

Fig. 12.1 - Ciclo de División Celular

En parte son similares porque cada célula nueva, recibe aproximadamente la mitad de organoides y citoplasma de la célula
madre, pero en términos de capacidades estructurales y funcionales lo importante es que cada célula hija, reciba una réplica
exacta del material genético de la célula madre.

Durante la vida celular, las células pasan por un ciclo regular de crecimiento y división. A esta secuencia de fases se la
denomina ciclo celular y en general consta de un período donde ocurre un importante crecimiento y aumento de la cantidad de
organoides (interfase) y un período de división celular (mitosis o meiosis).

La interfase involucra períodos donde la célula realiza los procesos vitales propios de su función. Durante ella, se producen
también fenómenos a nivel nuclear imprescindibles para la división posterior. Cronológicamente podemos dividir la interfase en
tres etapas G1, S y G2.

Haciendo un esquema del ciclo celular, el tiempo en que transcurre cada una de las etapas se representa en la Fig. 12.2.

Es necesario señalar que existen excepciones a este ciclo, ya que no en todas las células los períodos tienen la misma duración.
Incluso si consideramos una población celular homogénea (células del mismo tipo), existen variaciones particulares. Siempre
que se habla de tiempos determinados, se hace considerando los promedios de cada tipo celular.

También existen células que dejan de dividirse por largos períodos o bien permanentemente. Por ejemplo, las neuronas
permanecen luego de la maduración del tejido nervioso en una etapa especial denominada G 0, donde las células entrarían como
alternativa a G1. En la actualidad es frecuente referirse a este tipo de células como "no cíclicas" o detenidas en G 1, ya que no
es seguro que las células que no se dividen pasen por un solo estadío.
 Fig. 12.2 - Fases del Ciclo Celular

ETAPAS Y CARACTERÍSTICAS

Como ya se mencionó, una célula tipo pasa a lo largo de su vida por etapas (G 1, S y G2) antes de dividirse. Las características
más relevantes de cada una de las mismas son:

Etapa G1: Esta etapa que sucede a la división celular es la más variable en duración. Las células hijas recientemente originadas
presentan una gran actividad metabólica produciéndose un aumento acelerado del tamaño celular. Los organoides de la célula
precursora han sido repartidos de manera más o menos equitativa entre las células hijas, deben entonces aumentar de tamaño
y también en número para mantener las características de su tipo celular. Se sintetizan así ribosomas y microtúbulos a partir
de las proteínas y otras moléculas que la conforman. Los organoides del sistema de endomembranas, aumentan
considerablemente de tamaño, ya que ambas células hijas han recibido parte de estos organoides. Sin embargo, pueden ser
sintetizados de nuevo en caso de no existir precursores. Esto no ocurre con mitocondrias y cloroplastos que se originan por
división de estas estructuras preexistentes. Como se recordará ambos organoides contienen ADN y ribosomas que les permite
dividirse de forma relativamente independiente del núcleo celular.

Todos los procesos de síntesis de nuevos organoides o aumento de tamaño de los existentes, son regulados mediante activación
de complejos enzimáticos en un momento determinado.

En este período se observa, a su vez, una gran síntesis de ARNm como así también ARNt y ARNr. Estos ácidos serán utilizados
para la síntesis de proteínas estructurales, para la construcción y o aumento de los organoides, como así también la producción
de enzimas necesarias para dicha síntesis. Cabe destacar que durante este período también se sintetizan las enzimas que
serán utilizadas en la etapa siguiente, es decir en la duplicación del ADN, como así también moléculas precursoras de los ácidos
nucleicos.

Cuando las células dejan de crecer (si se agotan los nutrientes o por inhibición por contacto) lo hacen en G1. Esto
implica que también se sintetizan las sustancias que estimulan o inhiben distintas fases del ciclo celular.

Etapa S: el período S o de síntesis de ADN tiene como característica fundamental la síntesis de nuevo material genético, para
que las células hijas tengan la misma dotación. Sin embargo persisten los altos índices de síntesis de ARN para obtener
enzimas requeridas en la síntesis de histonas que formarán parte de la macroestructura del ADN y tubulinas relacionadas con
el proceso de división celular.

Etapa G2: En esta fase, ya con el ADN duplicado, la célula ensambla las estructuras necesarias para la separación de las
células hijas durante la división celular y la citocinesis (separación del citoplasma).

Etapa M: Durante M, la envoltura nuclear se desintegra, la cromatina se condensa en forma creciente hasta ser visible los
cromosomas al microscopio óptico. Estos cromosomas formados cada uno por dos cromátidas (cromosomas duplicados) pasaran
por cada una de las fases de la división celular (mitosis o meiosis) para concluir con la formación de las células hijas, cada una
con una única copia de su ADN (cromosomas sin replicar) , que marcan el inicio de un nuevo ciclo.

SISTEMA DE CONTROL DEL CICLO CELULAR

El sistema de control del ciclo celular es un dispositivo bioquímico compuesto por un conjunto de proteínas
reguladoras interactivas: las ciclinas y las quinasas dependientes de ciclinas que inducen y coordinan los procesos básicos del
ciclo, como la duplicación de ADN y la división celular, a los que denominamos procesos subordinados.
Durante un ciclo típico, el sistema de control está regulado por factores de retraso que pueden frenar el ciclo en puntos
determinados denominados puntos de control. En estos puntos, las señales de retroalimentación que contienen información
sobre los procesos subordinados pueden detener momentáneamente el avance del ciclo, evitando el inicio del proceso siguiente
antes que el precedente haya terminado. Sobre dichos factores también actúan señales del entorno como puede ser una
hormona o un factor de crecimiento.

Una analogía que puede ayudarnos a comprender este mecanismo es comparar al sistema de control del ciclo celular con el
funcionamiento de una lavadora automática (1. Alberts y col -pág929-930), el programador de la lavadora sólo avanza a través
de los diferentes pasos del ciclo de lavado (etapas del ciclo celular), si recibe determinadas señales. Adentro de la lavadora
hay sensores que miden el nivel de agua o jabón que ingresan. Estos sensores envían señales que pueden provocar el retraso o
la interrupción del ciclo de lavado. De igual manera en la célula, las señales generadas en los procesos subordinados (por ej. la
síntesis de ADN) o por el entorno, detienen el ciclo.

A continuación pasaremos a describir las proteínas reguladoras, el mecanismo de regulación y los puntos de control del ciclo
celular.

PROTEÍNAS REGULADORAS DEL CICLO CELULAR

El pasaje de una célula a través del ciclo es controlado por proteínas citoplasmáticas. Los principales reguladores del ciclo en
células animales son:

1. Las ciclinas, proteínas que controlan la actividad de sus proteinquinasas dependientes. La concentración de ciclinas
varía en forma cíclica, aumentando o disminuyendo durante el transcurso del ciclo celular. Esto se debe a variaciones en la
velocidad de degradación de la ciclina, dado que la velocidad de síntesis es casi constante durante todo el ciclo. En los
mamíferos existen 6 ciclinas como mínimo, denominadas A, B, C, D, E y F (Fig. 12.4b), pero nosotros las clasificaremos como
ciclinas de G1 y ciclinas mitóticas. Las ciclinas G1 se unen a sus quinasas dependientes de ciclinas (Cdk2) durante G1 siendo
necesarias para superar el punto de control G1 y pasar a la fase S. Las ciclinas mitóticas se fijan a la quinasa Cdk1 durante G2,
siendo necesaria su presencia para que el ciclo supere el punto de control G2 y se inicie la mitosis. (Fig. 12.3 )

2. Las quinasas dependientes de ciclinas (CDK), enzimas que mediante la fosforilación de determinadas proteínas
desencadenan los procesos subordinados del ciclo celular. En los mamíferos se conocen 5 CDK las cuales forman tres grupos
principales:

Fig. 12.3 - Complejo ciclina-quinasa dependiente de ciclina activo (ciclina-CDK)

· CDK de G1 (Cdk2)

· CDK de fase S (Cdk2)

· CDK de fase M (Cdk1)

A diferencia de la concentración de ciclinas, la concentración de CDK se mantiene durante todo el ciclo celular, por
permanecer constantes tanto la velocidad de síntesis como la de degradación (Fig. 12.4 y 12.5)

Las CDK se activan sólo cuando se unen a las ciclinas para formar complejos, por lo que requieren un nivel umbral para
desencadenar la transición a la fase siguiente del ciclo celular.

3. El Complejo Promotor de la Anafase (APC) y otras enzimas proteolíticas. El APC desencadena los eventos que
conducen a la destrucción de las cohesinas [1] permitiendo a las cromátidas hermanas separarse e iniciando la degradación de
las ciclinas mitóticas.
 Fig. 12.4 -Generalización del sistema de control del ciclo celular en eucariotas

Fig. 12. 5 - Ciclinas y CDK en un ciclo celular de vertebrados

MECANISMO DE REGULACIÓN DEL CICLO CELULAR

Al finalizar la mitosis aumenta la expresión de la ciclina G1 (E), esta ciclina se unirá a la su quinasa (Cdk2) formando un
complejo activo conocido como factor promotor de Fase S (FPS ). Este FPS sólo puede actuar sobre cromosomas en
estado Pre-Replicativo. Así se denominan por poseer sobre cada origen de replicación un complejo multiproteico llamado Pre-
Replicativo.

Los orígenes de replicación (ORI) se presentan en número de 20 a 80 sobre cada lazo de cromatina y se caracterizan por
poseer una secuencia común denominada secuencia de replicación autónoma (ARS) formada por dos secuencias "GAGGC"
sobre las que se halla unido a lo largo de todo el ciclo celular, el complejo de reconocimiento del origen de replicación
(ORC), uno de los complejos proteícos que forma parte del complejo Pre-Replicativo (PreR). El segundo componente del
complejo PreR es la proteína Cdc6p (cell division cycle protein), que se sintetiza en G1 e inserta sobre los orígenes de
replicación al último componente, las proteínas de mantenimiento de los minimicrosomas (MCM). (Fig. 12.6)

El nivel creciente de FPS al inicio de la fase S induce la apertura de los orígenes de replicación, activando a las moléculas
responsables de la síntesis de ADN e induciendo la separación del complejo Pre-R del componente Cdc6p y MCM.
Separados estos componentes, se inicia la síntesis, y por lo tanto el FPS no se requiere más, siendo su componente lábil, la
ciclina de G1, degradada en los proteosomas.
Los cromosomas a partir de este momento se denominarán cromosomas Post-Replicativos (sólo presentan asociado a los
orígenes de replicación el ORC). Los cromosomas se mantendrán en estado Post-R hasta el inicio de la anafase.

Degradadas las ciclinas G1, el nivel de ciclinas mitóticas aumenta.

Un nuevo participante entra al ciclo, el complejo promotor de la mitosis, FPM, formado por las ciclinas mitóticas más las
quinasas dependientes de ciclinas de M (Cdk1). Éste inicia el ensamblado del huso mitótico, la desintegración de la envoltura
nuclear y la condensación de los cromosomas, al inducir la fosforilación de diferentes sustratos como las láminas nucleares,
conduciendo a la célula a la metafase.

A esta altura del ciclo, el FPM activa el complejo promotor de la Anafase, APC, que permite la separación de las cromátides
hermanas y su migración a los polos (anafase). Así se completa la mitosis, se destruyen las ciclinas de fase M y se activan las
ciclinas de G1 para el próximo ciclo celular.

Fig. 12.6 - Modelo simplificado propuesto para la replicación de cromosomas eucariotas

CONTROL DE CALIDAD DEL CICLO CELULAR (Fig. 12.7)

Durante el ciclo celular, la célula pasa al menos tres puntos de control (checkpoints):

· Punto de control G1, en este punto el sistema de control de la célula pondrá en marcha el proceso que inicia la fase S. El
sistema evaluará la integridad del ADN (que no este dañado), la presencia de nutrientes en el entorno y el tamaño celular. Aquí
es donde generalmente actúan las señales que detienen el ciclo (arresto celular) .

· Punto de control G2, en él se pone en marcha el proceso que inicia la fase M. En este punto, el sistema de control verificará
que la duplicación del ADN se halla completado (que no este dañado), si es favorable el entorno y si la célula es lo
suficientemente grande para dividirse.

· Punto de control de la Metafase o del Huso, verifica si los cromosomas están alineados apropiadamente en el plano
metafásico antes de entrar en anafase. Este punto protege contra pérdidas o ganancias de cromosomas, siendo controlado por
la activación del APC.
 Fig. 12.7 - Puntos de Control e Ingreso de la información Reguladora al Sistema de Control del Ciclo Celular

Proteína p53, el guardián del genoma

Como hemos mencionado en los párrafos precedentes, tanto en el punto de control G1 como G2 se verifica la integridad del
ADN. Ante la presencia de ADN dañado se genera una señal que retrasa la entrada en fase M. El mecanismo depende de una
proteína llamada p53, que se acumula en la célula en respuesta a las alteraciones de ADN, deteniendo el sistema de control en
G1 y por lo tanto impidiendo la posterior entrada en mitosis. El gen p53 es uno de los genes supresores de
tumores más conocidos, que no sólo detiene el ciclo (arresto celular), sino también participa en la apoptosis (muerte celular
programada) forzando a las células al suicidio cuando el daño en el ADN es irreparable.

Las células que presentan los dos alelos del gen p53 mutados, tendrán proteína p53 no activa y por lo tanto continuarán
dividiéndose a pesar del daño en su genoma, por lo tanto desarrollarán cáncer. Las mutaciones del gen p53 presenta una alta
incidencia en la mayoría de los cánceres humanos.

¿Cómo actúa la p53?

Cuando el ADN presenta un daño "limitado", aumentan los niveles de proteína p53. Dicha proteína activa la transcripción del
gen p21, que codifica a la proteína p21. Esta última proteína ejerce su efecto inhibidor uniéndose al complejo ciclina-Cdk2 y
deteniendo el ciclo. Cuando el ADN es reparado, la proteína p53 se libera del promotor del gen p21, provocando el descenso en
los niveles de p21. Esto permite restaurar la actividad del complejo ciclina-Cdk2.

Fig. 12.8 - Acción de la Proteína p53 en el Control del Ciclo Celular

ONCOGENES Y CÁNCER
Los genes supresores de tumores, codifican para productos celulares que inhiben la proliferación celular. Para impedir el
efecto protector que ejercen sobre el genoma, se requiere la mutación de sus dos alelos.

Los genes conocidos como protooncogenes codifican proteínas que estimulan la división celular, por ejemplo, factores del
crecimiento o receptores de factores del crecimiento.

La mutación de uno de los dos alelos que codifican para un protooncogen, lo transforma en un oncogen capaz de originar
productos celulares que estimulan la división celular de forma incontrolada conduciendo al cáncer, con alteración de los
mecanismos de control del ciclo celular.
 Tabla 12.1 - ALGUNOS GENES RELACIONADOS CON CÁNCERES EN HUMANOS

Genes para factores de crecimiento o sus receptores

PDGF Codifica el Factor de crecimiento derivado de las plaquetas. Responsable de glioma (un
cáncer del cerebro)

erb-B Codifica al Factor de crecimiento epidérmico. Relacionado con gliobastoma (cáncer del cerebro) y
ONCOGENES
cáncer de mama.

erb-B2 Codifica receptor de factor de crecimiento. Relacionado con cáncer de mama, glándulas salivales y
ovario.

RET Codifica receptor de Factor del crecimiento. Relacionado con cáncer de tiroides.

Genes para transductores citoplasmáticos en vías estimuladoras

Ki-ras Responsable de cáncer de pulmón, ovario, colon y páncreas.

N-ras Relacionado con leucemias.

Genes para factores de transcripción que activan genes promotores del crecimiento

c-myc Relacionado con leucemias y cánceres de estómago, pulmón y mamas

N-myc Relacionado con neuroblastoma (cáncer de células nerviosas) y glioblastoma

ONCOGENES
L-myc Relacionado con cáncer de pulmón.

Genes para otros tipos de moléculas

Bcl-2 Codifica para una proteína que normalmente bloquea la apoptosis. Relacionado con linfoma de células
foliculares B.

Bcl-1 También llamado PRADI. Codifica la ciclina D1, un ciclina reguladora del ciclo celular. Relacionada
con cáncer de mama, cabeza y cuello.

MDM2 Codifica un antagonista de la proteína p53. Participa en sarcomas y otros cánceres.

GENES Genes de proteínas citoplasmáticas

SUPRESORES DE
TUMORES APC Relacionada con cáncer de colón y estómago.

DPC4 Codifica para una molécula transductora en una vía que inhibe la división celular. Relacionada con
cáncer pancreático.

NF-1 Codifica para una proteína que inhibe a la proteína Ras. Relacionada con neurofibroma y
feocromocitoma (cáncer del sistema nervioso periférico) y leucemia mieloide.

NF-2 Relacionado con meningioma y ependinoma (encéfalo) y schwanoma (nervios periféricos)

Genes de proteínas nucleares

MTS1 Codifica para la proteína p16, uno de los frenos del sistema de control del ciclo celular. Relacionada
con muchos cánceres.

RB Codifica para la proteína RB (retinoblastoma). Esta proteína es uno de los principales frenos en el
ciclo celular.

p53 Codifica para la proteína p53, la cual detiene la división celular e induce a las células anormales al
suicidio (apoptosis). Relacionado con la mayoría de los cánceres .

WT1 Relacionado con el Tumor de Wilms del riñón.

Genes que codifican proteínas de ubicación aún no determinada

BRCA1 Relacionado en cánceres de mama y ovario.

BRCA2 Relacionado con cáncer de mama.

 VHL Relacionado con cáncer de células renales.

DUPLICACIÓN DEL ADN

CARACTERÍSTICAS DE LA DUPLICACIÓN DEL ADN

Aunque los principios generales de la duplicación o replicación del ADN son sencillos y pueden considerarse como
consecuencia directa de su estructura, el proceso requiere una maquinaria compleja que contiene una gran cantidad de
enzimas y proteínas que actúan en conjunto.

Fig. 12.9 - La duplicación del ADN se produce previo desenrollamiento de las dos cadenas de la doble hélice, usando cada
una como molde para sintetizar las nuevas cadenas.

1. MÚLTIPLES PUNTOS DE ORIGEN

Los cromosomas eucariontes tienen una gran cantidad de ADN, el cual se halla contenido en dos moléculas lineales, una
para cada cromátide. Si estas moléculas se replicasen a partir de un sitio único de origen, la etapa “S” de la Interfase
sería extremadamente larga. Las células eucariontes resuelven este problema disponiendo de múltiples sitios de origen
de la replicación en cada cromosoma. En ellos, el ADN presenta secuencias especiales de nucleótidos. Además todos los
orígenes tienen en común secuencias conservadas de aproximadamente doce pares de nucleótidos, llamados ARS
(autonomus replication secuence).

Fig. 12.10 - La replicación siempre comienza en los sitios de origen en cada cromosoma. En ellos el ADN presenta
secuencias especiales de nucleótidos

2. DESENROLLAMIENTO DE LAS CADENAS DE ADN

En cada cromosoma, las dos cadenas del ADN se encuentran arrolladas una a la otra como los hilos de una soga. Si
tratamos de separarlas, la soga debe apretarse más en las vueltas restantes o girar. Algo similar ocurre en el ADN,
cuando las cadenas complementarias se separan para iniciar la duplicación. En ese momento aumenta la tensión torsional
en el sector no duplicado de la doble hélice.
 Fig. 12. 11 - Separación progresiva de las dos cadenas de ADN a nivel de la horquilla de replicación y su posible
consecuencia biológica.

El desenrollamiento es realizado por las enzimas ADN-helicasas, las cuales recorren la hélice desenrollando las hebras
del ADN a medida que avanzan. Una vez separadas, las cadenas se combinan con las proteínas SSB, llamadas también
proteínas desestabilizadoras, que evitan el autoapareamiento entre las bases complementarias libremente expuestas.

Fig. 12.12 - Cadenas adelantada y retrasada del ADN durante la replicación. La helicasa separa a las dos cadenas del
ADN y las proteínas SSB evitan autoapareamientos entre las bases complementarias libremente expuestas en la cadena
atrasada.

A medida que la enzima helicasa abre la doble hélice, dos enzimas complementarias: la topoisomerasa I y
la topoisomerasa II o girasa, van disminuyendo la tensión torsional acumulada por el superenrollamiento en el sector no
replicado de la doble hélice.

La topoisomerasa I primero corta una de las cadenas del ADN, luego la cadena cortada gira una vuelta en torno a su
propio eje y finalmente vuelve a unir los extremos cortados.

La topoisomerasa II corta las dos cadenas, las cuales luego de girar una vuelta alrededor del eje de la doble hélice,
restablecen sus uniones.

Ambas enzimas utilizan energía del ATP y se comportan como nucleasas (cortando las cadenas de ADN) y luego
como ligasas (restableciendo las uniones fosfodiéster).

Las topoisomerasas I y II se diferencian no sólo porque la primera corta una de las cadenas y la segunda corta las dos,
sino también porque la topoisomerasa I realiza desenrollamientos de corto alcance y la girasa abarca una extensión de
ADN bastante mayor.

Fig. 12.12 - Efecto hipotético de la topoisomerasa II para evitar el superenrollamiento que se produce en el ADN como consecuencia
de la separación progresiva de sus cadenas.
3. LA DUPLICACIÓN DEL ADN ES BIDIRECCIONAL

Al abrirse la doble hélice se forma una “burbuja” de replicación, cuyo tamaño aumenta a medida que avanza la separación
de las dos cadenas del ADN, fenómeno que se produce en ambos extremos de la burbuja en forma simultánea. Se
establece de este modo, en cada uno de los extremos, una estructura en forma de Y, a la que llamamos horquilla de
replicación, cuyos brazos representan a las cadenas ya separadas de ADN y el tronco la doble hélice en vías de
separación. Así cada burbuja tiene dos horquillas de replicación que a partir de un punto de origen común avanzan en
direcciones opuestas. Las horquillas desaparecen cuando se van integrando a las burbujas contiguas. Las horquillas que
recorren los telómeros desaparecen cuando se separa el último par de nucleótidos.

El segmento de ADN que se sintetiza a partir de un origen de replicación (con sus dos horquillas), lo
llamamos replicón. De este modo la replicación del ADN termina cuando se ensamblan los sucesivos replicones. Esto
permite que el ADN se sintetice en un tiempo bastante breve para el ciclo de vida de una célula.

Fig. 12. 14 - Esquema que muestra dos replicones contiguos y los puntos donde se origina la replicación (flechas). Puede
observarse el carácter bidireccional de la replicación y los sectores donde el ADN se sintetiza en forma continua y
discontinua.

4. LA SÍNTESIS DE ADN ES DISCONTINUA

Una de las características de las ADN-polimerasas es que sólo pueden actuar en dirección 5’ 3’, por agregado de
nucleótidos en el extremo 3’ de las cadenas nuevas. Como vimos, a medida que se separan las cadenas progenitoras en la
horquilla de replicación, una presenta sus nucleótidos en dirección 5’ 3’ y la otra en dirección 3’ 5’. De manera
que la primera al ser copiada debería formar una cadena hija en sentido 3’ 5’, algo que las polimerasas no pueden
hacer.

Las células solucionan esta situación utilizando estrategias distintas en la construcción de cada una de las nuevas
cadenas. La cadena hija que se formó en dirección 5' 3’ se construye en forma continua mediante el agregado de
nucleótidos en el extremo 3’ a medida que avanza la horquilla de replicación. En cambio la otra cadena hija es sintetizada
de manera discontinua, en pequeños tramos, llamados fragmentos de Okazaki, los cuales se unen entre sí a medida que se
sintetizan, por acción de la enzima ADN-ligasa.

Por lo expuesto, podemos decir que la síntesis del ADN es un proceso bidireccional, no sólo porque se produce en dos
direcciones divergentes a partir de una misma burbuja de replicación, sino también porque las cadenas de la doble hélice
son sintetizadas en direcciones opuestas.

Fig. 12. 15 - Replicación semiconservativa del ADN.

5. MODELO SEMICONSERVATIVO

Como las nuevas hélices de ADN están formadas por una cadena original (preexistente) que sirvió de molde y una cadena
nueva (recién sintetizada) decimos que el mecanismo de replicación es semiconservativo.

INICIO DE LA SÍNTESIS DE ADN

Para iniciar la síntesis de las cadenas complementarias se requiere además del ADN molde un cebador o primer, que
consiste en una pequeña cadena de ARN de unos diez nucleótidos de largo. La síntesis del cebador es catalizada por una
enzima llamada ARN-primasa y el cebador queda unido al ADN temporariamente. Una vez sintetizado el cebador la
síntesis continúa si la ADN-polimerasa tiene disponibles suficientes desoxirribonucleótidos trifosfatados (dATP, dGTP,
dCCP y dTTP). Éstos se agregan en la cadena nueva de acuerdo a la secuencia de nucleótidos de la cadena que sirve de
molde.

Gran parte de la energía requerida durante la replicación la aportan los desoxirribonucleótidos trifosfatados, que
hidrolizan los últimos dos grupos fosfato (liberando energía) cuando se unen entre sí.

Iniciada la síntesis de ADN a partir del cebador, la ADN-polimerasa a (alfa) es reemplazado por la ADN-
polimerasa e (epsilon), enzima de alta procesividad (más rápida), que elonga la hebra continua, mientras que la ADN-
polimerasa d (delta) se encarga de elongar los fragmentos de Okazaki de la hebra discontínua.
Las ADN-polimerasa e (epsilon) y d (delta) catalizan la síntesis de las cadenas nuevas agregando nucleótidos en el
extremo 3’ de las hebras en formación. Mientras tanto los cebadores de la cadena rezagada son removidos por la
actividad nucleasa reparadora de la ADN-polimerasa d (delta) y su lugar es reemplazado por un fragmento de ADN
equivalente. Como vimos la cadena continua requiere un solo cebador que se forma a comienzo de la replicación, en
cambio la cadena discontinua necesita muchos cebadores, uno para cada fragmento de Okazaki. Cabe señalar que las
ADN-polimerasas d (delta) y e (epsilon) son sostenidas por un anillo proteico llamado PCNA (Proliferating Cell Nuclear
Antigen) mientras realiza el deslizamiento por la cadena de ADN. Está asociación entre polimerasas y PCNA hace posible
el aumento en la velocidad de síntesis. Al inicio, la síntesis es lenta debido a que el complejo ADN polimerasa a (alfa)-
primasa no se asocia al anillo de PCNA.

Fig. 12.16 - Doble hélice de ADN desenrrollándose. Cada cadena servirá de molde para la síntesis de cadenas nuevas
Fig. 12.17 - La energía para el proceso de replicación la proveen los mismos desoxirribonucleótidos trifosfatados, con la
hidrólisis de los últimos dos grupos fosfato-

Fig. 12. 18 - Unión del aro de PCNA a la ADN polimerasa

Los fragmentos de Okazaki alcanzan una longitud de 200 nucleótidos. Una vez completa la síntesis de un fragmento
ambas enzimas se liberan y vuelven juntas hacia el ángulo de la horquilla de replicación, dejando atrás los 200
nucleótidos del segmento que acaban de sintetizar y otros tantos del ADN molde que se usará para copiar el próximo
fragmento de Okazaki.

Como ocurre con la polimerasa d en movimiento, la ADN-polimerasa a no se desprende del ADN debido a que se le asocia
un aro de PCNA. Luego el cebador es hidrolizado por una nucleasa, la que se encarga también de reparar errores
(segundo sistema de reparación) y los huecos son rellenados con desoxirribonucleótidos por la ADN-
polimerasa b (beta). Finalmente los fragmentos de Okazaki son unidos por la ADN-ligasa.

La discontinuidad de la síntesis hace que la hebra mal orientada crezca más lentamente que la otra, que lo hace en
forma continua, por esta razón se les asignó el nombre de cadena rezagada y cadena adelantada respectivamente.

Replicación de la heterocromatina

La heterocromatina por estar muy compactada se replica tardíamente durante la fase “S” del ciclo celular.

Síntesis de histonas

Hemos señalado que el ADN se replica en forma semiconservativa, es decir que las cadenas de la doble hélice
progenitora, al separarse para su replicación, se comparten por igual en ambos cromosomas hijos. En cambio no se sabe
como se segregan las histonas. Es posible que al cabo de la replicación sean heredadas totalmente por uno de los
cromosomas hijos, en este caso el otro cromosoma hijo debe procurarse de la totalidad de histonas nuevas.

En su mayor parte las histonas se sintetizan durante la fase “S” de la interfase y se incorporan al cromosoma apenas es
duplicado el ADN

Replicación en Procariontes

Muchas de las características esenciales de la duplicación del ADN son universales, aunque existen algunas diferencias
entre procariontes y eucariontes debido a que su material genético está organizado de manera distinta.

En las bacterias casi todo el ADN se encuentra formando una cadena circular, en cambio en los eucariontes cada
cromosoma no duplicado contiene una cadena lineal asociada a una gran cantidad de proteínas y algo de ARN.

En procariontes al existir un único punto de origen se forma sólo un ojal de replicación. Aquí actúan tres ADN-
polimerasas:

ADN-polimerasa I, es la que elimina el cebador y reemplaza los ribonucleótidos de éste por desoxirribonucleótidos,
rellenando los huecos dejados por la ADN-polimerasa II. Adiciona 10 nucleótidos/seg.

ADN-polimerasa II, tiene actividad de nucleasa, es decir que retira nucleótidos de la cadena de ADN en los sitios
donde se produjeron errores o desemparejamientos.

ADN-polimerasa III, es la enzima responsable de alargar las cadenas en el proceso de replicación. Adiciona 500
nucleótidos/seg.
Fig. 12.19 - Mecanismo de replicación del ADN en células procariontes

Fig. 12.20 - Mecanismo de replicación en procariotas

 Cuadro 12.1 - MÚLTIPLES FUNCIONES DE LAS ADN-POLIMERASA EN E. COLI

· Síntesis de ADN en sentido 5’ 3’

Poli. I y Poli. III · Exonucleasa en sentido 3’ 5’

· Corrección de errores, removiendo nucleótidos en sentido 5’ 3’

Poli. I · Exonucleasa en sentido 5’ 3’

Cuadro 12.2 - PRINCIPALES ENZIMAS QUE ACTUAN EN LA REPLICACIÓN

Enzimas Reacciones que catalizan

Elimina el cebador, reemplazando los ribonucleótidos por

ADN-polimerasa I (procariontes)
desoxirribonucleótidos. Rellena los huecos del ADN.

ADN-polimerasa II (procariontes) Nucleasa, corrige errores.

Principal enzima de la replicación. Sintetiza la cadena nueva a

ADN-polimerasa III (procariontes)
partir del cebador. Realiza corrección de pruebas.

La primasa del complejo sintetiza un "primer" de ARN y a

Complejo ADN-polimerasa a-primasa (eucariontes) partir de dicho primer, la polimerasa a del complejo inicia la
síntesis de ADN.

Polimerización de desoxirribonucleótidos de la cadena

ADN-polimerasa e (eucariontes)
adelantada.

Polimerización de desoxirribonucleótidos de la
ADN-polimerasa d (eucariontes)
cadena rezagada.

ADN-polimerasa b, q, l Reparación del ADN.

ADN-polimerasa g (eucariontes) Duplicación y reparación del ADN mitocondrial.

Rompen los puentes de hidrógeno, separando las cadenas del

Helicasas
ADN.

Primasas Sintetizan el primer o cebador.

Se extienden sobre las hebras del ADN evitando

Proteínas SSB
autoapareamientos entre las bases libremente expuestas

Topoisomerasas I y II Corrigen el superenrollamiento

[1] Cohesinas: proteínas que mantienen unidas transitoriamente a las cromátidas hermanas.
SEMANA 7: OBSERVACIÓN DEL-- NÚCLEO CELULAR EN ELEMENTOS--FORMES DE LA SANGRE

MARCO TEÓRICO:
Es un orgánulo membranoso que se encuentra en las células eucariotas. Contiene la mayor parte del
material genético celular. La principal estructura que constituye el núcleo es la envoltura nuclear, una doble
membrana que rodea completamente al orgánulo y separa ese contenido del citoplasma, además de contar
con poros nucleares que permiten el paso a través de la membrana para la expresión genética. Durante su
ciclo vital, el núcleo sufre cambios morfofisiológicos muy importantes que permiten mantener la estabilidad
celular (núcleo interfásico) por un lado y también originar otras células (núcleo en división). La forma del
núcleo interfásico determina la forma de la célula, así las células cúbicas tienen un núcleo redondo, las
células alargadas tienen un núcleo ovalado, las células aplanadas tienen un núcleo plano. Sin embargo,
existe una variedad de formas de núcleos en células altamente especializadas tal como los glóbulos blancos.

1. LEUCOCITOS GRANULARES:
a) Neutrófilo segmentado: presenta un núcleo con varios lóbulos (2-5) unidos por bandas de cromatina.
b) Neutrófilo en banda o abastonado: presenta un núcleo no dividido en forma de
S o en cayado O.
c) Eosinófilo: redondo, voluminoso, con granulaciones acidófilas de color anaranjado, núcleo con dos lóbulos.
d) Basófilo: es escaso, presenta un núcleo difícil de observar, pues se halla cubierto por granulaciones
basófilas gruesas de color violeta o morado oscuro.
2. LEUCOCITOS AGRANULARES:
a) Linfocito: De forma redonda o irregular, su núcleo es morado, voluminoso y ocupa la mayor parte de la
célula, el citoplasma es azul y sin granulaciones. Su número aumenta con las infecciones.
b) Monocito: De forma redonda u ovalada, núcleo variable generalmente en forma de riñón, citoplasma sin
gránulos. Presenta una gran actividad fagocitaria.

El núcleo celular
Es una de las estructuras que caracteriza a las celulas
eucariotas.

Es el compartimento donde se encuentra el ADN y toda la

maquinaria necesaria para transcribir su informacion a ARN.

Normalmente aparece un solo nucleo por celula, aunque en

algunos casos hay mas de uno, como ocurre en los
osteoclastos, en las fibras musculares esqueleticas o en los
epitelios de algunos invertebrados.

La forma nuclear suele ser redondeada y adaptada a la

forma celular, aunque no siempre es asi y puede ser muy
variable.

La localizacion habitual del nucleo es en el centro de la

celula, pero tambien puede situarse en otras posiciones mas
perifericas.
VIAS DE DIFERENCIACION DE UNA CELULA MADRE
HEMATOPOYETICA DE LA MEDULA OSEA.

Una celula madre hematopoyetica puede dar origen a dos celulas

progenitoras diferentes: una mieloide que se diferencia en la mayoría
de las celulas sanguineas diversas (p. ej., eritrocitos, basofilos y
neutrofilos), macrófagos o células dendriticas; o una linfoide que puede
diferenciarse en cualquiera de los diversos tipos de linfocitos (NK, B o
T).

Las precursoras de linfocitos T migran al timo, donde se diferencian en

dichas celulas. En cambio, los linfocitos B se diferencian en la medula
osea.

VARIEDAD DE FORMAS - NÚCLEO EN CÉLULAS ESPECIALIZADAS:

GLÓBULOS BLANCOS O LEUCOCITOS
GRANULOCITOS: 70 – 75% poblacion total de leucocitos. El nombre es por el contenido de pequenos y visibles granulos dentro del citoplasma.

Neutrofilos: 40 - 75 % del total, parte del sistema inmune innato, granulos finos (ligeramente rosados), tamano: 10 – 12 μm.
Neutrofilos segmentados: nucleo con varios lobulos (2-5) unidos por bandas de cromatina.
Neutrofilos en banda o abastonado: el nucleo no esta dividido, tiene forma de S o en cayado.

Basofilos: ˂ proporcion (0.5 – 1%) del total, ˃ tamano, nucleo (bilobulado o trilobulado), granulaciones
gruesas oscuras a la tincion, tamano: 12 – 15 μm. Nucleo redondeado o lobulado, dificil de observar
(cubierto de granulaciones).

Eosinofilos: 2 – 4% del total, tamano: 10 – 12 μm, nucleo bilobulado (conectados por un cordon delgado),
granulaciones acidofilas citoplasmaticas rosa-naranja (tincion eosina).

VARIEDAD DE FORMAS - NÚCLEO EN CÉLULAS ESPECIALIZADAS

GLÓBULOS BLANCOS O LEUCOCITOS

AGRANULOCITOS: 25% poblacion total de leucocitos. Sin granulos citoplasmaticos.

Monocitos: 5.3% del total, generalmente abandonan el flujo sanguineo → macrofagos de tejidos (eliminan
restos de celulas muertas y se encargan del ataque de microorganismos. Tamano: 12-15 μm.
Caracteristica del nucleo: forma variable, generalmente forma de rinon (color violeta).

Linfocitos: mas comunes en el sistema linfatico que en el sanguineo. Tres tipos: NK, T y B. Tamano: grandes
(12 – 15 μm) y pequenos (7 - 8 μm). Caracteristica del nucleo: morado oscuro, voluminoso y ocupa la mayor
parte de la celula. El nucleo es redondo, ligeramente hendido. El nucleo es denso, rico en heterocromatina.

PARTE EXPERIMENTAL
1. MATERIALES:
• Guantes
• Alcohol yodado
• Algodon esteril
• Lancetas hematologicas esteriles
• Laminas portaobjetos limpias y desengrasadas con alcohol
• Colorante Wright o Giemsa
• Agua destilada
• Papel lente
• Aceite de inmersion
• Microscopio optico

2. PROCEDIMIENTO:
I. PREPARACION DEL FROTIS DE SANGRE
1. Desinfectar el dedo anular con una torunda de algodon embebida en alcohol yodado y con una lanceta esteril punzar el dedo.
2. Dejar caer una gota de sangre sobre un extremo de la lamina portaobjetos. 3. Inmediatamente con ayuda de otra lamina portaobjetos formar un angulo
de 45° y realizar un frotis, tratando de extender homogeneamente la gota de sangre sobre la superficie de la lamina.
4. Dejar secar la preparacion y proceder luego a la coloracion.

II. COLORACION WRIGHT o GIEMSA

1. Cubrir el frotis con colorante Wright o Giemsa por 1 min.
2. Sin eliminar el colorante agregar agua destilada y dejar actuar por 10 min.
3. Eliminar luego el colorante y lavar suavemente con agua de cano.
4. Dejar secar la lamina coloreada.
5. Observar la preparacion con el objetivo de 100x y aceite de inmersion.

PARA LA PRÁCTICA DE LA SEMANA 9 DIVISIÓN

CELULAR-MITOSIS
Traer cebolla con raíces.
Mitosis en Celulas (de meristemo) de la Raiz de Cebolla
1. Llena un vaso con agua y coloca un bulbo de cebolla sujeto con dos o tres palillos de manera que la parte inferior quede inmersa en el agua (vease la
figura). Al cabo de 3-4 dias apareceran numerosas raicillas en crecimiento de unos 3 o 4 cm de longitud.
2. El agua del vaso debera cambiarse cada 24 h, ser mantenido en oscuridad, a temperatura ambiente y sometido a aireación constante.
3. El dia de la practica transportar la cebolla manteniendo las raices sumergidas en el agua.

EL NÚCLEO CELULAR

INTRODUCCIÓN
El núcleo es la estructura más destacada de la célula eucarionte, tanto por su morfología como por sus funciones. Su
tamaño es variable (5 a 10 mm) al igual que su ubicación siendo en la mayoría de los tipos celulares central.

El núcleo tiene tres funciones primarias, todas ellas relacionadas con su contenido de ADN. Ellas son:

1. Almacenar la información genética en el ADN.

2. Recuperar la información almacenada en el ADN en la forma de ARN.

3. Ejecutar, dirigir y regular las actividades citoplasmáticas, a través del producto de la expresión de los genes: las
proteínas.

En el núcleo se localizan los procesos a través de lo cuales se llevan a cabo dichas funciones. Estos procesos son:

1. La duplicación del ADN y su ensamblado con proteínas (histonas) para formar la cromatina.

2. La transcripción de los genes a ARN y el procesamiento de éstos a sus formas maduras, muchas de las cuales son
transportadas al citoplasma para su traducción y

3. La regulación de la expresión genética.

ESTRUCTURA DEL NÚCLEO (Fig. 10.1)

El núcleo está rodeado por la envoltura nuclear, una doble membrana interrumpida por numerosos poros nucleares. Los
poros actúan como una compuerta selectiva a través de la cual ciertas proteínas ingresan desde el citoplasma, como
también permiten la salida de los distintos ARN y sus proteínas asociadas.
La envoltura nuclear es sostenida desde el exterior por una red de filamentos intermedios dependientes del
citoesqueleto, mientras que la lámina nuclear, la cual se localiza adyacente a la superficie interna de la envoltura
nuclear, provee soporte interno.

El núcleo también tiene un nucleoplasma, en el cual están disueltos sus solutos y un esqueleto filamentoso, la matriz
nuclear la cual provee soporte a los cromosomas y a los grandes complejos proteicos que intervienen en la replicación y
transcripción del ADN.

Los cromosomas aparecen ocupando lugares específicos. Los genes que codifican productos relacionados, aunque estén
localizados en diferentes cromosomas, pueden estar ubicados próximos en el núcleo interfásico. Por ejemplo, los
cromosomas humanos 13, 14, 15, 21 y 22 poseen un gran número de genes que codifican para ARNr. Dichos cromosomas
están agrupados de tal forma que los genes de los ARNr están todos juntos y confinados en el nucléolo, el lugar donde se
sintetizan, procesan y ensamblan los ARNr. Esta separación física asegura que los ARNr puedan ser eficientemente
ensamblados dentro de las subunidades ribosomales.

En el núcleo, los genes transcripcionalmente activos tienden a estar separados de los inactivos. Los activos se
encuentran ubicados centralmente, mientras que los silentes están confinados próximos a la envoltura nuclear.

Tan pronto como las células entran en mitosis o meiosis, los fragmentos de la matriz nuclear dirigen la condensación de
los cromosomas, constituyéndose en la parte central de los mismos.

Fig. 10.1 - Esquema de un núcleo interfásico

LA ENVOLTURA NUCLEAR

La envoltura está formada por dos membranas concéntricas interrumpidas por poros nucleares y por la lámina nuclear.

Fig. 10.2- Microfotografía electrónica de la envoltura nuclear

Las membranas delimitan un espacio de 10 a 50 nm, el espacio o cisterna perinuclear. La membrana externa en
contacto con el citoplasma tiene ribosomas adheridos, que sintetizan las proteínas que se vuelcan al espacio
perinuclear. El espacio perinuclear se continua con el REG.

La membrana interna posee proteínas integrales que le son propias, que se unen a la lámina nuclear y a los cromosomas.
La lámina nuclear, capa fibrosa de 10 a 15 nm en la que apoya la membrana interna, está formada por proteínas del tipo
de los filamentos intermedios, polímeros de lamina o laminina nuclear. Ellas se unen a las proteínas integrales de
membrana.

La fosforilación de las laminas provoca el desensamble de la lámina nuclear causando la ruptura de la envoltura al inicio
de la división celular.

La lámina nuclear confiere estabilidad mecánica a la envoltura nuclear. Además, al interactuar con la cromatina participa
en la determinación de la organización tridimensional del núcleo interfásico.

Si bien la formación de la lámina no se requiere durante los pasos iniciales, la organización de la envoltura es
indispensable para el crecimiento posterior y el mantenimiento de su integridad. Las laminas se incorporan luego que la
cisterna perinuclear rodea al ADN y se inicia el transporte entre el núcleo y el citoplasma. (Fig. 10.3)

La envoltura nuclear es un derivado del sistema de endomembranas, siendo esto evidente al inicio de la división celular,
cuando la envoltura se desorganiza y pasa a formar parte del sistema de cisternas y vesículas del retículo endoplásmico.

La aparición de la envoltura nuclear permitió que los eucariontes aislaran los procesos genéticos principales, como la
autoduplicación del ADN o la síntesis de ARN. Además esto posibilitó que el ARNm se modifique dentro del núcleo antes
de ser traducido en los ribosomas. Estas modificaciones no ocurren en los procariontes, ya que a medida que la ARN
polimerasa sintetiza el ARN, simultáneamente el extremo 5’ se une al ribosoma y comienza la traducción.

Fig. 10.3 - Mecanismo de formación y desintegración de la membrana nuclear

COMPLEJOS DE PORO NUCLEAR

La envoltura nuclear presenta estructuras discoidales llamadas complejos de poro nuclear (CPN) (Fig. 10.4).

El número de CPN es variable, incrementándose a medida que aumenta la actividad celular. En una célula de mamífero hay
entre 3000 a 4000 complejos de poro. Cada CPN es una estructura macromolecular compleja constituida por un gran
número de proteínas de disposición octamérica. Está formado por:

· Ocho columnas proteicas, que forman las paredes laterales del poro.

· Un anillo externo, formado por ocho unidades proteicas.

· Un anillo interno, también con estructura octamérica.

· Proteínas de anclaje que fijan cada columna al espacio perinuclear.

· Proteínas radiales que se proyectan desde las columnas hacia la luz del poro, a manera de diafragma

· Proteínas fibrilares fijas al anillo interno y externo. En la cara nuclear convergen para formar una canastilla o cesta.
A lo largo de estas fibrillas se ubican nucleoporinas que intervienen en el transporte de sustancias a través del poro.
· Un poro central o abertura.

Fig. 10.4 - Esquema del complejo de poro nuclear

La luz de los CPN suele presentarse obturada por las proteínas que circulan a través del poro, como por las carioportinas
(Kap) que actúan como eficientes transportadores en el tráfico núcleo/citoplasma.

Los CPN presentan uno o varios canales acuosos a través de los cuales las pequeñas moléculas solubles en agua difunden
(transporte no regulado). Las moléculas de mayor peso molecular son transportadas en forma activa, por lo que
requieren energía y moléculas transportadoras.

Se importan dentro del núcleo:

· Las proteínas sintetizadas en el citoplasma necesarias para ensamblar los ribosomas.

· Los factores de transcripción requeridos en la activación o inactivación de los genes.

· Los factores de empalme necesarios en el proceso de maduración de los ribosomas.

Las moléculas y macromoléculas ensambladas y exportadas desde el núcleo al citoplasma incluyen:

· Las subunidades ribosomales

· ARNm

· ARN de transferencia

· Factores de transcripción que son devueltos al citoplasma para ser reutilizados.

Los mecanismos implicados en el transporte a través del poro son diferentes al transporte de proteínas en las
membranas de otros organelos . Por ejemplo, las proteínas nucleares son transportadas a través del poro manteniendo
su conformación plegada, por el contrario las proteínas que no se localizarán en el núcleo se despliegan durante el
transporte.

Los complejos de poro nuclear hacen de la envoltura nuclear una barrera selectiva entre el núcleo y el citoplasma. Estos
complejos constituyen la principal vía de comunicación entre el compartimiento nuclear y citoplasmático de la célula ante
el pesado tráfico molecular. Aun cuando las proteínas pequeñas y otras moléculas viajan a través de los canales
periféricos, las proteínas de gran tamaño deben poseer una etiqueta para ingresar por el canal central. Estas proteínas
sintetizadas en el citoplasma contienen la señal de localización nuclear (nuclear signal localization, NSL).

Tampoco los ARN pueden salir de núcleo por sí mismos. Ellos salen a través del complejo de poro con una proteína
especial que posee una señal nuclear de exportación (nuclear export signal, NES). Ambas NSL y NES consisten en una
secuencia corta de aminoácidos, muchos de los cuales tienden a estar ubicados centralmente dentro de las proteína.

Observemos en la Fig. 10.4, como las proyecciones filamentosas desde la cara citosólica del complejo pueden enlazar
proteínas, conduciéndolas dentro del poro central. Los filamentos citosólicos, el poro central y la canasta nuclear se
proyectan dentro del compartimiento nuclear. Se cree que la canasta puede ser un área importante de paso para la
preparación de las ribonucleoproteínas (RNP) antes de ser exportadas.

Las moléculas de mayor tamaño requieren de una proteína “transbordadora” o carioportina. La superfamilia de
carioportinas esta integrada por: importinas . exportinas y transportinas .

IMPORTACIÓN DE PROTEÍNAS (Fig. 10.5)

Las importinas son heterodímeros, formados por dos subunidades, la subunidad-a se une a la NSL de la proteína nuclear
permitiendo la unión con la subunidadad-b. Esta unión origina una “importina funcional” que lleva unida a la proteína
nuclear a ser transportada.

El complejo importina funcional se pone en contacto con los filamentos citosólicos, donde guiado por las nucleoporinas
(Nup), llega al poro central. La translocación de complejo importina/carga es regulado por la pequeña RanGTPasa [1] ,
que se une a la subunidad b de la importina. Esta b-importina es la encargada de interactuar con el poro provocando su
dilatación y posibilitando el ingreso de la proteína nuclear. La translocación de proteínas es un proceso activo. Cuando el
complejo penetra al interior del núcleo, las subunidades de importina se separan y la carga es liberada. La disociación de
las subunidades causa entonces un nuevo cambio en su forma, dejando al descubierto la NES de cada subunidad. Otras
proteínas en el poro central reconocen la NES y retornan las subunidades al citoplasma.

Fig. 10.5 - Modelo de mecanismo de importación a través del CPN

EXPORTACIÓN DE ARN

Los ARN maduros se asocian a proteínas llamadas transportinas, las cuales actúan como transbordadores permitiendo el
pasaje de ARN al citoplasma. En la fig. 10.6 se esquematiza como el ARNm es llevado fuera del núcleo. Los ARNm
maduros que presentan la poli A se asocian con varias proteínas, formando una partícula de ribonucleoproteína (RNP).
Estas partículas se mueven linealmente a través de la canasta nuclear. Al igual que las importinas, las RNP son
recicladas hacia el núcleo. En el citoplasma, las CRBP ( del inglés, cytoplasmic RNA-binding proteins) reemplazan a las
RNP para guiar a los ARNs a sus destinos citosólicos correctos.

Fig. 10.6 - Modelo de mecanismo de exportación de ARNm a través del CPN

CROMOSOMAS Y CROMATINA
El núcleo contiene los cromosomas de la célula. Cada cromosoma consiste en una molécula única de ADN con una cantidad
equivalente de proteínas. Colectivamente, el ADN con sus proteínas asociadas se denomina cromatina. La mayor parte
de las proteínas de la cromatina consisten en copias múltiples de cinco clases de histonas.

Estas proteínas básicas son ricas en residuos de arginina y lisina cargados positivamente. Por esta razón se unen
estrechamente con los grupos fosfatos (cargados negativamente) del ADN.

La cromatina también contiene pequeñas cantidades de una amplia variedad de proteínas no histónicas y RNP. La
mayoría de ellas son factores de transcripción (por ej., el receptor esteroide), siendo su asociación con el ADN pasajera.
Estos factores regulan que parte del ADN será transcripta en ARN.

NIVELES DE ORGANIZACIÓN DE LA CROMATINA

La observación a través del microscopio óptico de un núcleo interfásico, nos permite distinguir dos tipos de cromatina.
La eucromatina o cromatina laxa, de localización central, y la heterocromatina o cromatina densa, en la periferia del
núcleo (Fig.10.7). La heterocromatina representa aproximadamente el 10% del total de cromatina y es considerada
transcripcionalmente inactiva (Fig. 10.8).

La eucromatina se encontraría al menos en dos estados, la eucromatina accesible, que representa alrededor del 10%,
donde se encuentran los genes que se están transcribiendo y la eucromatina poco accesible, más condensada (pero
menos que la heterocromatina), donde están los genes que la célula no está transcribiendo.

Si el núcleo celular se incuba con nucleasas, enzimas que digieren el ADN, las secuencias que primero se digieren son las
que portan los genes expresados por la célula, lo que corrobora el menor grado de condensación de la eucromatina.
 Fig. 10.7 - Microfotografía electrónica del núcleo de un hepatocito. a. eucromatina; b. RER

Fig. 10.8 - Microfotografía electrónica del núcleo de un linfocito. a. eucromatina; b. heterocromatina, c. mitocondria

Fig. 10.9 - H1 y formación de la fibra de 10 nm

Cuando el cromosoma en interfase se esparce artificialmente sobre agua, tiene la apariencia de un collar de perlas. Las
perlas son los nucleosomas, las unidades de enrollamiento de la cromatina. (Fig. 10.10b)
Los nucleosomas están formados por un centro o "core" de histonas. Dicho centro posee dos copias de cada una de las
siguientes histonas: H2A; H2B; H3 y H4

Alrededor del centro de histonas, 146 pares de bases del ADN se enrollan en dos vueltas. La unión de las histonas al
ADN no depende de una secuencia particular de nucleótidos, sino de la secuencia de aminoácidos de la histona. Las
histonas son unas de las moléculas más conservadas durante el transcurso de la evolución. La histona H4 en el ternero
difiere de la H4 de la planta de poroto en sólo 2 residuos de aminoácidos de una cadena de 102. Alrededor de 60 pares
de bases de ADN unen un nucleosoma con el próximo. Cada región de unión es el ADN espaciador. La quinta histona, la
H1, conecta a los nucleosomas y actúa como una banda de goma, manteniéndolos juntos dentro de una misma cuerda
enrollada. Esta estructura se conoce como fibra de 10nm, siendo el primer grado del empaquetamiento de la cromatina.
(Fig. 10.9)

Los nucleosomas se organizan, a su vez, en fibras de 30nm (solenoide), girando a manera de resorte alrededor de un
eje virtual. Esta estructura es mantenida por la interacción de las H1 de nucleosomas cercanos. (Fig. 10.10c)

En el siguiente nivel de empaquetamiento, las fibras de 30 nm se organizan en una serie de bucles o asas
superenrolladas (Fig. 10.10d; Fig. 10.11). Estos bucles se estabilizan gracias a la interacción con las proteínas de la
matriz nuclear o andamiaje nuclear (“scaffold”).

Fig. 10.10 - Modelo de empaquetamiento de la cromatina

Cada bucle de cromatina representa un dominio funcional o unidad de replicación (Fig. 10.10e). Estos dominios contienen
alrededor de 100.000 pares de bases, extensión de ADN suficiente para acomodar varios genes de tamaño promedio.
Algunos genes, sin embargo, pueden abarcar varios dominios adyacentes de un cromosoma. Cada cromosoma puede tener
cien o más [Link] la profase, los cromosomas aparecen en forma más condensada, alcanzando la cromatina su
mayor nivel de condensación en metafase(Fig. 10.10f). La organización de los cromosomas envuelve la fosforilación de la
H1 y otras proteínas, lo cual causa el plegamiento y empaquetamiento aún más compacto de la cromatina. El andamiaje o
matriz nuclear se convierte en el centro de la estructura del cromosoma, y como la compactación continúa, éste se pliega
modo de acordeón.

Fig. 10.11- Empaquetamiento de la fibra de 30 nm

El grado de condensación de los dominios de cromatina se mantiene principalmente debido a la asociación con la matriz
nuclear y a proteínas asociadas como la topoisomerasa II o girasa, encargada de controlar el grado de
superenrollamiento del ADN (Fig. 10.11). La unión entre la cromatina y la matriz se da a nivel de zonas altamente
conservadas, denominadas secuencias SAR o MAR (scaffold associated regions/ matrix attachment regions). Las SAR
son regiones de varios cientos de pares de bases ricas en residuos de adenina y timina, abundantes en la
heterocromatina.

Con coloraciones especiales los cromosomas, revelan diferencias estructurales de importancia funcional. Las bandas
oscuras consisten en cromatina altamente condensada, mientras que las bandas claras se corresponden con cromatina
más laxa.

El examen de la cromatina en bandas claras y oscuras revela que ambos tipos de cromatina están acomodados en bucles
de distintos tamaños y que a su vez se proyectan desde el andamiaje plegado. El andamiaje está muy plegado en la
heterocromatina, y es más lineal en las bandas de eucromatina, formando bucles más amplios. Las histonas de la
eucromatina están fuertemente acetiladas. Estos cambios afectarían el grado de empaquetamiento de la eucromatina,
haciéndola más accesible para la transcripción de sus genes.

Las características de la hetero y eucromatina son:

Tabla 10.1 - Características de la Cromatina

Tipo de cromatina Estado físico Cambio químico Tipo de genes Replicación

Eucromatina Laxa Acetilada Activos Fase S temprana

Heterocromatina condensada Metilada Silentes Fase S tardía

Los cromosoma en metafase también poseen un revestimiento de RNP. Dicho revestimiento deriva de los componentes
del nucléolo. Estos cromosomas se constituyen en el vehículo para dividir el material nucleolar entre las futuras células
hijas. El empaquetamiento de la cromatina permite confinar al ADN dentro del núcleo La molécula de ADN de un
cromosoma humano contiene 50 x 106 pares de nucleótidos en el cromosoma más pequeño (1.7 cm con la molécula
extendida) a 250 x 106 pares de nucleótidos en el más largo ( 8.5 cm). Midiendo extremo con extremo el total de
cromosomas de una célula humana diploide, el ADN se extiende más de 2 metros. El empaquetamiento del ADN en forma
de cromatina, no solamente le permite entrar dentro de los límites del núcleo, sino también lo protege del ataque de las
nucleasas.
EL CROMOSOMA EUCARIOTA (Fig. 10.12)

Cada cromosoma eucariota consiste en una molécula simple de ADN de alrededor de 150 millones de pares de
nucleótidos.

La molécula de ADN en el cromosoma eucariota es lineal, por lo tanto posee dos extremos (en contraste con el
cromosoma bacteriano que es circular).

La molécula de ADN de un cromosoma típico eucariota contiene:

· Un conjunto lineal de genes que codifican para ARN y proteínas interrumpido por

· Muchas secuencias de ADN no codificante.

El ADN no codificante incluye:

· Secuencias de aproximadamente 170 nucleótidos de ADN satélite, repetidas miles de veces, que corresponden
al centrómero.

· Secuencias repetitivas en los extremos del cromosoma llamadas telómeros.

· Múltiples secuencias señalizadoras altamente conservadas, denominadas origen de replicación (ORI) , necesarias para
que se realice la duplicación del ADN en un tiempo breve.

Fig. 10.12- Secuencias de un cromosoma eucariota estable en las diferentes etapas del ciclo celular

El centrómero es una constricción primaria localizada centralmente o hacia los extremos de cada cromosoma.

El ADN centromérico como ya mencionamos es altamente repetitivo y se encuentra siempre condensado siendo parte de
la heterocromatina.
 Fig. 10.13- Síntesis de telómeros por la telomerasa. a) La telomerasa se une al telomero; b) La telomerasa alarga los
extremos de la cadena 3`; c) La telomerasa avanza; d) La ADN polimerasa sintetiza la cadena retrasada.

Los telómeros son cruciales en la vida de la célula. Ellos son necesarios para la duplicación completa del cromosoma, los
protegen de las nucleasas, evitan que los extremos del cromosoma se fusionen entre sí y facilitan la interacción del
cromosoma con la envoltura nuclear.

Los telómeros de las células humanas contienen la secuencia 5'TTAGGG3, que se repite aproximadamente 2000 veces.

5 '... ..TTAGGG TTAGGG TTAGGG TTAGGG TTAGGG TTAGGG..... 3 '

3 '... ..AATCCC AATCCC AATCCC AATCCC A..... 5 '

La cadena rica en guanosina corre en dirección 5' a 3', extendiéndose 12 a 15 nucleótidos más allá de la cadena rica en
citosina, formando un apéndice en una de las cadena en cada extremo del cromosoma. Este desnivel se mantiene de
generación en generación por medio de una enzima especial, la telomerasa, que agrega nuevas unidades al extremo 3' de
la cadena rica en guanosina (Fig. 11.13).

La telomerasa es una ribonucleoproteína, la cual provee un molde de AAUCCC que guía la inserción de la secuencia
TTAGGG. Entonces la telomerasa es una retrotranscriptasa, sintetiza ADN a partir de un molde de ARN.

Las células con telomerasa activa pueden compensar el acortamiento de los telómeros durante la duplicación del ADN.

La telomerasa activa se encuentra solamente en:

· Las células de la línea germinal, incluyendo células troncales embrionarias

· Eucariotas unicelulares

· Células cancerosas
Los cromosomas se diferencian por la ubicación del centrómero

Durante la mayor parte de la vida de la célula, los cromosomas son demasiado largos y tenues para ser vistos bajo un
microscopio.

Fig. 10.14- Microfotografía electrónica de un cromosoma metafásico

Antes de que una célula se divida, cada cromosoma se duplica (durante la fase S del ciclo celular).

Al inicio de la división celular, los cromosomas duplicados se condensan en estructuras que pueden teñirse con facilidad
(por ello denominadas cromosomas), pudiéndose observar bajo el MO.

La condensación es tal que el cromosoma es aproximadamente 10.000 veces más corto que la molécula de ADN que
contiene (Fig. 10.14). A primera vista, los cromosomas duplicados se mantienen juntos por el centrómero. Mientras están
juntos, es común llamar a cada parte del cromosoma duplicado, cromátida hermana.

Esto no debe confundirnos, cada una de las "cromátidas hermanas" es un cromosoma completo. El cinetocoro es una
estructura proteica discoidal que forma parte del centrómero y ayuda a separar las cromátidas hermanas. Es el sitio de
unión con los microtúbulos del huso, que contienen los motores de dineína que tiran a los cromosomas en la anafase.
Además proveen una plataforma para ensamblar y movilizar las proteínas que construyen el huso.

La posición del centrómero, determina el largo de los brazos del cromosoma; en base a esto se puede clasificar a los
cromosomas en: (Fig. 10.15)

· Metacéntricos: el centrómero en posición central determina brazos de igual longitud

· Submetacéntricos: un par de brazos es más corto que el otro, pues el centrómero se encuentra alejado del centro.

· Acrocéntricos: el centrómero se halla próximo a uno de los extremos, por lo tanto uno de los brazos es casi
inexistente.

Fig. 10.15- Tipos de cromosomas

Los cromosomas acrocéntricos poseen una masa de cromatina llamada satélite, en el extremo del brazo corto. El satélite
se halla aislado del resto del cromosoma por la constricción secundaria. La zona aledaña al satélite de los cromosomas
acrocéntricos contribuye a formar el nucléolo (Fig. 10.16)

El más corto de los dos brazos del cromosoma se llama p; el más largo es el brazo q.

Fig. 10.16- Partes de un cromosoma mitótico.

Todas las especies tienen un número característico de pares de cromosomas homólogos llamado número diploide (2n). El
número diploide del hombre es 46.

El cariotipo es una representación gráfica o fotográfica de los cromosomas presentes en el núcleo de una sola célula
somática de un individuo. Cada miembro del par de cromosomas homólogos proviene de cada uno de los padres del
individuo cuyas células examinamos.

El cariotipo de la mujer contiene 23 pares de cromosomas homólogos, 22 pares son autosomas y el par
restante, cromosomas sexuales, ambos " X".

El cariotipo del hombre contiene los mismos 22 pares de autosomas y 1 par de cromosomas sexuales, un cromosoma
sexual "X" y un cromosoma sexual "Y" (un gen en el cromosoma Y designado SRY es el que pone en marcha el desarrollo
de un varón, por lo tanto determina el sexo).

El análisis del cariotipo involucra la comparación de cromosomas por su longitud, la ubicación de los centrómeros y la
ubicación y los tamaños de las bandas G.

Durante la mitosis, los 23 pares de cromosomas humanos se condensan y son visibles con un microscopio óptico.

Preparación de un Cariotipo: La preparación de un cariotipo normalmente involucra bloquear las células (glóbulos
blancos) durante la mitosis con colchicina y marcar los cromosomas condensados con tinción Giemsa. La tinción marca las
regiones de los cromosomas que son ricos en pares de nucleótidos entre A -T produciendo una banda oscura, la banda G.
Luego de la tinción, los cromosomas se fotografían, se recortan y se ordenan de acuerdo a su longitud. Los de igual
tamaño se aparean según la ubicación de su centrómero.

Una error común es suponer que cada banda representa un sólo gen. En realidad las bandas más pequeñas contienen más
de un millón de pares de nucleótidos y potencialmente cientos de genes. Por ejemplo, el tamaño de una banda pequeña es
igual a toda la información genética de una bacteria.

El análisis del cariotipo es una de muchas técnicas que nos permiten investigar las miles de enfermedades genéticas que
se pueden encontrar en los seres humanos.
Fig. 10.17 - Cariotipo femenino normal: Los autosomas se ordenan en grupos por tamaño y posición del centrómero.

Fig. 10.18 - Mapa estándar (Idiograma) de patrones de bandeo del cromosoma 2. Los números corresponden a las
regiones y bandas. A la derecha , idiograma del cariotipo humano masculino.

El nucléolo
En el nucléolo tiene lugar la formación de subunidades ribosómicas, la síntesis y procesamiento de ARNr y actualmente
se considera que desempeña un importante papel en la regulación del ciclo celular. [2]

El nucléolo es un aglomerado de fibras de cromatina de distintos cromosomas. En el hombre, los pares 13,14, 15, 21 y 22,
aportan sectores de cromatina que forman el nucléolo. Todos estos cromosomas son acrocéntricos y presentan
constricciones secundarias denominadas organizadores nucleolares (NOR), donde están los genes que codifican ARNr
(Fig. 10.19).
 Fig. 10.19 - Esquema de nucléolo indicando los bucles de los 10 cromosomas con los genes para el ARNr

Fig. 10.20 - Microfotografía electrónica del nucléolo. NE, Envoltura nuclear; NO. Organizador nucleolar; PG, Zona
granular; PF, Zona fibrilar.

El nucléolo aparece como una estructura simple carente de componente membranoso, en la que diferenciamos dos
regiones:

· Una zona fibrilar central, formada por ADNribosómico y ARNr naciente

· Un zona granular periférica donde los gránulos están formados por las subunidades ribosómicas en proceso de
ensamblado (Fig. 10.20).

Los nucléolos, al igual que la envoltura nuclear desaparecen en la mitosis y se reorganizan alrededor de los segmentos de
ADNr, que como su nombre lo indica, codifica ARNr. Siendo el ARNr el más abundante dentro de los tipos de ARN,
existen múltiples copias del gen que lo codifica. El genoma humano presenta alrededor de 200 copias del gen para ARNr.
Estos genes que promedian los 10.000 nucleótidos se localizan en tándem. Cada gen está separado por ADN espaciador y
presenta asociado una molécula de ARN polimerasa I. De cada enzima parten perpendicularmente los ARNr nacientes,
tomando la apariencia característica de un árbol de navidad. Cada gen produce un transcripto llamado ARNr 45S que
será luego procesado (Fig. 10.21)

El tamaño del nucleólo varía entre células y en la misma célula según su actividad, pues si bien la velocidad de
transcripción puede acelerarse, el ensamblado de las subunidades ribosomales requiere de un tiempo más o menos
constante; es por ello que en los nucléolos grandes observamos mayor proporción de componente granular.
 Fig. 10.21 - Microfotografía electrónica de los genes nucleolares (ADNr) durante la transcripción. Observe como la longitud de los
transcriptos primarios aumenta a medida que nos alejamos del punto de inicio.

AUTOEVALUACIÓN
1) La eucromatina se caracteriza por:

a- ser transcripcionamente inactiva

b- teñirse debilmente

c- presentarse altamente condensada

d- formar parte de genes que no se expresan

2) En el nucléolo se sintetizan:

a- Precursores de ARNr

b- ARNt

c- Pre ARNm

d- ARNm

3) Los organizadores nucleolares aportan información para la síntesis de:

a- ARNm

b- ARNr

c- ARNt

d- Ribosomas

4) La composición química y función de las histonas son respectivamente:

a- proteínas básicas y forman parte en la estructura de la cromatina

b- proteínas básicas cuya única función es regular la expresión de los genes

c- son proteínas ácidas e intervienen en la estructura de la cromatina

d- son proteínas ácidas e intervienen en la síntesis de ADN polimerasa.

5) El andamiaje o matriz nuclear:

a- está formado exclusivamente por láminas

b- se asocia a la cromatina a nivel de las SAR/MAR del ADN

c- está más replegado en la eucromatina

d- se desorganiza durante la división celular

6) Presentan señal de localización nuclear:

a- las hormonas esteroides

b- todas las riboproteínas

c- los factores de transcripción

d- todas las anteriores son correctas

7) Los dominios funcionales de la cromatina:

a- aparecen por empaquetamiento de la fibra de 10 nm

b- dependen exclusivamente de la interacción con la H1

c- representan individualmente un gen

d- funcionan como unidades de replicación del cromosoma.

8) El pasaje de moléculas a través de los CPN:

a- no es regulado y requiere de etiquetas o señales en las moléculas transportadas

b- no es regulado para moléculas pequeñas y solubles que circulan por los canales periféricos

c- siempre es regulado y no depende del tamaño de la molécula a transportar

d- requiere que todas las moléculas a ser transportadas tengan una NSL

9) ¿Cuál de las siguientes afirmaciones es FALSA con respecto a la telomerasa?

a- es la enzima encargada de formar los telómeros

b- es una ARN polimerasa

c- se inactiva poco después del nacimiento

d- las células cancerosas conservan la telomerasa siempre activa

10) Un investigador inyecto un cultivo celular con suero anti-laminina, y observó:

a- que la células no pudieron dividirse

b- que las células luego de la mitosis no pudieron organizar su envoltura nuclear

c- que los complejos laminina/antilamina se acumularon dentro del núcleo

d- que la envoltura nuclear formada resulto frágil e inestable

 SEMANA 9

DIVISIÓN CELULAR
MITOSIS

INTRODUCCIÓN

Fig. 12.21 - Etapas del ciclo celular

La división celular es un fenómeno complejo por el que los materiales celulares se dividen en partes iguales entre las dos
células hijas. En una serie de pasos que en conjunto se llaman MITOSIS se asigna a cada célula hija un juego completo
de cromosomas. Hacia el final de este proceso, se produce la división o clivaje del citoplasma ( citocinesis ) y las dos
células hijas se separan, de modo que cada una no sólo contiene un complemento cromosómico completo, sino también
más o menos la mitad del citoplasma y de los organoides de la célula madre.

Este proceso es sólo la fase final y microscópicamente visible de cambios ocurridos a nivel molecular y bioquímico.

En los organismos unicelulares, la MITOSIS es el modo de reproducción asexual. En los organismos multicelulares, es el
medio por el cual el organismo crece a partir de una sola célula y también por el que los tejidos lesionados se reponen y
reparan.

EL MECANISMO MITÓTICO

El mecanismo de la mitosis ( del griego “ mitos”, filamento, hilo ) es semejante en todas las células eucariontes, aún
cuando existen diferencias entre células animales y vegetales. Haremos primero una descripción del proceso mitótico en
células animales, para marcar luego las diferencias que se manifiestan en las vegetales.
La serie de fenómenos que constituyen el ciclo mitótico comienza al finalizar el período G 2 de la interfase y termina al
iniciarse el período G 1 de una nueva interfase. Las principales fases de la mitosis son: Profase, Metafase, Anafase y
Telofase; de éstas la de mayor duración suele ser la profase.

Cuando una célula está en interfase, el material cromosómico está disperso y se observan como finos cordones. Al
iniciarse la mitosis, la cromatina se arrolla lentamente y se condensa en forma compacta. Esta condensación sería
necesaria para los complejos movimientos y separación de los cromosomas durante la mitosis. Cuando los cromosomas
condensados se tornan visibles, cada uno consiste en dos réplicas llamadas cromátides unidas entre sí por el centrómero.
Dentro de éste hay estructuras proteicas, los cinetocoros.

Fig. 12.22- Esquema de un cromosoma replicado

ETAPAS DE LA MITOSIS

PROFASE

Al comienzo de la profase la cromatina empieza a condensarse visualizandosé los cromosomas individuales. Cada
cromosoma consta de dos cromátidas duplicadas conectadas a nivel del centrómero. Al mismo tiempo, la célula adopta
una forma esferoidal y se hace más refringente y viscosa.

Por fuera de la envoltura nuclear y próximos a ella, se encuentran dos pares de centríolos. Cada par consiste en un
centríolo maduro y un centríolo recién formado que se ubica perpendicularmente al primero. Los pares de centríolos
comienzan a separarse, un par migra hacia el polo apical o superior de la célula y el otro lo hace hacia el polo basal o
inferior. A medida que se separan, se organiza entre ambos pares un sistema de microtúbulos que constituyen el huso
acromático o huso mitótico. Rodeando a cada par de centríolos, aparecen unas fibras adicionales conocidas como ásteres
( el nombre de áster deriva de su aspecto estrellado ), que irradian hacia fuera de los centríolos. Otro cambio es la
reducción de los nucléolos, que finalmente se fragmentan y aparecen desintegrados en el nucleoplasma.

La envoltura nuclear se desintegra a medida que se condensan los cromosomas. Al final de la profase, la envoltura
nuclear desaparece, los cromosomas se han condensado por completo y ya no están separados del citoplasma.

Al término de esta fase, el aparato mitótico está totalmente organizado.

El APARATO MITÓTICO

El aparato mitótico comprende el huso y los ásteres que rodean a los centríolos. El áster aparece como un grupo de
microtúbulos radiales (microtúbulos astrales) que convergen hacia el centríolo, alrededor del cual se observa una zona
clara llamada centrosoma.

Las fibras del huso se clasifican en tres tipos: continuas (polares), que se extienden de polo a polo de la
célula; cromosómicas (cinetocóricas), que unen a los cromosomas a los polos; e interzonales, que se observan en anafase
y telofase entre los cromosomas hijos.

Los centríolos, el huso y los cinetocoros presentan tubulina ( proteína principal de cilias y flagelos ).

Los cinetocoros son los sitios donde se implantan los microtúbulos en los cromosomas y actúan en el armado de los
microtúbulos.

Fig. 12.23 - Las tres clases de microtúbulos que forman el aparato mitótico.

METAFASE

Algunas veces se denomina prometafase a la transición entre la profase y la metafase. Se trata de un período muy
corto durante el cual se termina de desintegrar la envoltura nuclear y se acaba de armar el aparato mitótico.

En la metafase, los cromosomas unidos a las fibras del huso por sus cinetocoros; sufren movimientos oscilatorios hasta
que se ordenan en el plano central o ecuatorial, formando la placa ecuatorial.
ANAFASE

Al comienzo de la anafase, los centrómeros se separan simultáneamente en todos los pares de cromátidas. Los
cinetocoros y las cromátidas se separan y comienzan su migración hacia los polos. El cinetocoro siempre precede al
resto de la cromátida o cromosoma hijo, como si éste fuera traccionado por las fibras cromosómicas del huso.

El cromosoma puede adoptar la forma de una V de brazos iguales si es metacéntrico o de brazos desiguales si es
submetacéntrico.

Durante la anafase, los microtúbulos de las fibras cromosómicas se acortan a un tercio o a un quinto de su longitud
original. Simultáneamente, aumenta la longitud de los microtúbulos de las fibras continuas, algunas de las cuales
constituyen las llamadas fibras interzonales.

TELOFASE
El final de la migración de los cromosomas hijos indica el principio de la telofase. Los cromosomas comienzan ha
desenrollarse y se vuelven cada vez menos condensados, mediante un proceso que en cierta forma es inverso a la
profase.

El huso se dispersa en subunidades de tubulina y se desintegra. Los cromosomas se agrupan en masas de cromatina
rodeadas de segmentos discontinuos de envoltura nuclear provenientes del REG (retículo endoplásmico rugoso ), hasta
que la envoltura nuclear queda reconstituida, en cada grupo cromosómico.

Los nucléolos aparecen en las etapas finales a nivel de los organizadores nucleolares de algunos cromosomas.

Hasta este momento hemos considerado la división nuclear ( cariocinesis ), a ésta le suele seguir la segmentación y
separación del citoplasma ( citocinesis ).

CITOCINESIS

Es el proceso de clivaje y separación del citoplasma. Puede producirse simultáneamente a la anafase y telofase, o en una
etapa posterior.

El clivaje se produce siempre en la línea media de la célula. La membrana celular comienza a estrecharse en el área
donde se situaba el ecuador del huso. Al principio aparece un surco en la superficie, que luego se profundiza hasta que la
célula se divide. Se supone que en esta constricción intervienen microfilamentos de actina, pues se los observa en
grandes cantidades cerca de los surcos.

Durante la citocinesis, los distintos organoides citoplasmáticos se distribuyen equitativamente en ambas células hijas.
MITOSIS EN CÉLULAS VEGETALES

En la división de las células vegetales, el comportamiento cromosómico es igual al descripto en las células animales.

Fig. 12.24 - Formación de la placa celular

Una de las diferencias más notables es que las células vegetales no poseen centríolos ni derivados centriolares. Pero
este no es un impedimento para la formación del huso mitótico, en este caso se lo denomina “huso anastral “. La
formación de microtúbulos está relacionada con los cinetocoros. Otra de las diferencias está dada por la citocinesis, en
las células vegetales, el citoplasma se divide en la línea media por un tabique que comienza a formarse en la anafase,
llamado fragmoplasto, que estaría formado por microtúbulos y vesículas derivadas de dictiosomas. Con el tiempo, las
vesículas se fusionan y dejan un espacio limitado por una membrana, la placa celular (Fig. 12.24). A medida que se
fusionan más vesículas, los bordes de la placa en crecimiento se juntan con la membrana celular y de este modo se
establece un espacio entre las dos células hijas, completando así su separación. Por último, este espacio se impregna de
pectinas que constituyen la laminilla media. Cada célula hija construye entonces su propia pared celular depositando
celulosa y otros polisacáridos contra su membrana. Una vez completada la división celular, quedan dos células hijas
idénticas.

MEIOSIS

Todas las células corporales de un organismo contienen un número determinado de cromosomas, característico de la
especie a la que pertenece.

En los organismos eucariontes más complejos los cromosomas siempre existen en pares, hay invariablemente dos de cada
clase formando parejas, cada uno de ellos se llama homólogo. Así los 46 cromosomas humanos, constituyen 23 pares.
 Fig. 12.25 - Ciclo vital sexual: se observa alternacia de generaciones haploides y diploides

En las gametas la cantidad de cromosomas es exactamente la mitad, existiendo sólo uno de cada clase. Esto ocurre
porque son células destinadas a unirse, así cuando un espermatozoide fecunda a un óvulo se reconstituye el número
normal de cromosomas de la especie.

Como en las células somáticas tenemos dos cromosomas de cada clase decimos que son diploides, en cambio a las
gametas las llamamos haploides. Habitualmente designamos el número haploide como “ n “ y al diploide como “ 2 n “.

Por ejemplo para la especie humana, n = 23 y 2n = 46.

La constancia del número de cromosomas en las sucesivas generaciones queda asignado por el proceso de MEIOSIS, un
tipo particular de división nuclear propia de los eucariontes, que consiste en dos divisiones consecutivas, que comienzan
en células diploides en las cuales el número de cromosomas se reduce a la mitad.

La reducción del número de cromosomas en la meiosis no se produce al azar, sino que se separan los miembros de pares
de cromosomas para pasar a células hijas diferentes.

La meiosis tiene lugar en algún momento del ciclo vital de todos los organismos de reproducción sexual, porque los
gametos deben ser haploides para compensar el número doble de cromosomas producto de la fecundación. En animales y
algunas algas se produce durante la formación de gametas. En muchos hongos, algas verdes y esporozoarios se lleva a
cabo inmediatamente después de la fecundación. En la mayoría de las plantas se realiza después de la fecundación, pero
antes de la formación de las gametas, durante la formación de esporas.

De todos modos, a pesar de las variaciones particulares, el proceso es muy parecido en las diferentes especies.

DESCRIPCIÓN GENERAL DE LA MEIOSIS

MEIOSIS I - División reduccional

Para su mejor estudio describimos varios períodos: Profase I, Metafase I, Anafase I y Telofase

PROFASE I: Es el período más prolongado de la meiosis, a la vez para su mayor comprensión consideramos varias
subetapas:

a. Leptonema: Los cromosomas se presentan como largas fibras, delgadas, poco espiralizadas. Las
cromátidas no son visibles.

b. Cigonema: Los cromosomas homólogos se alinean y aparean de una manera

altamente específica, este proceso es llamado sinapsis.
El apareamiento comprende la formación del complejo sinaptonémico, una estructura proteínica que se halla interpuesta
entre los homólogos. Al par de cromosomas homólogos apareados lollamamos bivalente.

Fig. 12.26 - Complejo Sinaptonémico

c. Paquinema: Los homólogos se aparean íntegramente ( en toda su longitud ). Los cromosomas se

visualizan más cortos y gruesos debido al alto grado de espiralización. Cada unidad es ahora una
tétrada, compuesta por dos homólogos, es decir cuatro cromátidas. Las dos cromátidas de cada
cromosoma se denominan cromátidas hermanas.

Durante el Paquinema es característico el intercambio de segmentos, proceso

llamado entrecruzamiento o crossing-over. Este intercambio de material cromosómico es una fuente
importante de variabilidad genética.

a. Diplonema: Los cromosomas apareados empiezan a separarse, aunque permanecen unidos en los
puntos de intercambio o quiasmas.

b. Diacinesis: La contracción de los cromosomas llega a su máximo, los cromosomas homólogos

siguen unidos por los quiasmas que ahora se ubican en los extremos ( terminalización de los
quiasmas ).

Mientras ocurren los procesos antes mencionados, se desorganiza la envoltura nuclear y se organiza el huso acromático.
 Fig. 12.27 - Relación entre las diferentes etapas de la profase I: Sinapsis y Desinapsis de los cromosomas homólogos

METAFASE I

Los homólogos unidos como en diacinesis se asocian por sus centrómeros a las fibras del huso, ubicándose en el plano
ecuatorial de la célula.

ANAFASE I

Se separan los homólogos cada uno hacia polos distintos de la célula. Hacia finales de esta etapa puede observarse el
comienzo de la citocinesis ( división del citoplasma ). Cabe aclarar que la migración de los cromosomas hacia polos
opuestos de la célula es al azar.

TELOFASE I

Los cromosomas ubicados en los polos de la célula se reagrupan. Cada polo recibe la mitad del número de cromosomas de
la célula origina. Se completa la citocinesis. Luego de este período puede existir un intervalo llamado intercinesis.

MEIOSIS II - División ecuacional

Esta segunda división es muy parecida a la Mitosis, excepto que no va precedida por una duplicación del ADN.

Al comienzo de esta división los cromosomas pueden haberse dispersado un poco, pero vuelven a condensarse.

También aquí describimos varios períodos.

PROFASE II

Se organiza nuevamente el huso acromático. Los cromosomas se unen a las fibras del mismo por sus centrómeros.
METAFASE II

Los cromosomas ( cada uno formado por dos cromátidas ) se ubican en el plano ecuatorial.

ANAFASE II

Al igual que en la anafase mitótica las cromátidas hermanas de cada cromosoma se separan, migrando hacia polos
distintos de la célula.

TELOFASE II

Se desorganiza el huso acromático, se forman las envolturas nucleares. Ahora hay cuatro núcleos hijos, cada uno de los
cuales tiene la mitad del número de cromosomas de la célula progenitora.

La citocinesis ocurre del mismo modo que tras la mitosis.

CONSECUENCIAS DE LA MEIOSIS

La meiosis desde el punto de vista genético se considera un mecanismo destinado a distribuir al azar los genes maternos
y paternos en las gametas. Esta distribución al azar es la consecuencia de dos procesos que tienen exclusivamente
durante la meiosis. Ellos son:

· La recombinación genética o crossing over.

· La segregación al azar de los cromosomas homólogos. (Fig. 12.28)

 Fig. 12.28 - Esquematización de las dos contribuciones de la meiosis a la variabilidad genética

Ambos sucesos son fuente de variabilidad genética. A su vez las fallas en la segregación al azar de los homólogos en la Anafase
I y II, conduce a aberraciones cromosómicas que provocan graves patologías (por ej. El Sindrome de Down).

GAMETOGÉNESIS

El proceso antes descripto es el que ocurre en aquellas células destinadas a formar células sexuales. Según el tipo de
organismo del que se trate, podemos hablar de una gametogénesis (es decir que la meiosis produce gametas ) o esporogénesis
( cuando los productos son esporas ). En el caso de las gametas, se originan por meiosis los óvulos femeninos y los
espermatozoides masculinos. En ambos casos, se trata de células especiales, las gametogonias, las que en los órganos
reproductivos (ovarios y testículos ) van a experimentar la meiosis y así originar las gametas.
La serie de cambios que conducen a la formación de espermatozoides, empieza con la conversión de las espermatogonias en
espermatocitos I, son éstos los que experimentan la primera división meiótica, originando dos espermatocitos II, estas células
ya son haploides.

Cada uno de los espermatocitos II experimentan la segunda división meiótica, dando origen así a cuatro espermátidas.
Posteriormente estas células se diferencian en espermatozoides a través de un proceso denominado espermiogénesis (Fig.
12.29).

Para la formación de los óvulos en los ovarios, la célula primordial es la ovogonia que se diferencia en ovocito I. Éste pasa por
una división meiótica para producir un ovocito II y un cuerpo polar, que es una célula de pequeño tamaño. Esta primera división
comienza en la mujer en el tercer mes de vida fetal, se detiene en profase I avanzada reiniciándose en el momento de la
ovulación. La segunda división meiótica que produce el óvulo y un segundo cuerpo polar, sólo ocurre después de la fecundación.
El cuerpo polar también puede dividirse pero de todas formas son células que no intervienen directamente en la fecundación.
(Fig. 12.30)
Fig. 12.29 - Esquema de las etapas de la espermatogénesis
 Fig. 12. 30- Esquema de las etapas de la ovogénesis

COMPARACIÓN ENTRE MITOSIS Y MEIOSIS

Fig. 12.31 - Comparación entre las divisiones meióticas y mitóticas

AUTOEVALUACIÓN

PREGUNTAS DE MULTIPLE OPCIÓN

1- Si una célula en cultivo, incorpora notablemente timidina al ADN, dicha célula se encuentra en:

a. G1. b. S.

c. G2. d. Mitosis.

2- La etapa del Ciclo Celular

a. G2 es la más larga del ciclo. b. G1 contiene el doble de ADN que G2.

c. G0 es la que sigue inmediatamente a la división celular y es previa a G1. d. G2 contiene el doble de ADN que G1.

3- En el ciclo celular:

a. el ADN comienza a pasar al estado compactado durante la etapa G1.

b. se sintetizan histonas y ADN durante la etepa S.

c. se duplica el número de cromosomas durante G2. d. la interfase comprende G1, S, G2 y cariocinesis.

4- La ADN polimerasa cataliza la formación de uniones fosfodiéster entre:

a. el –OH del carbono 3’ de un nucleótido y el fosfato del carbono 5’ del nucleótido siguiente

b. el –OH del carbono 5’ de un nucleótido y el fosfato del carbono 3’ del nucleótido siguiente

c. un fosfato de un nucleótido y un fosfato del nucleótido siguiente

d. un –OH de un nucleótido y un –OH del nucleótido siguiente

5- En la replicación del ADN hay una cadena adelantada y retrasada debido a :

a. la distinta velocidad de copia de la nueva cadena b. el tipo de enzima que actúa sobre cada cadena

c. el carácter antiparalelo de las cadenas molde d. la formación de horquillas de duplicación

6- Durante la prometafase mitótica ocurre:

a. movimiento y ubicación de los cromosomas en el plano ecuatorial.

b. desorganización de la envoltura nuclear.

c. duplicación de los centríolos. d. recombinación genética entre pares de homólogos.

7- Si al observar una célula en división se pueden contar 7 cromosomas en cada polo, la célula:

a. es 2n=14 y está en metafase II meiótica. b. es 2n=14 y está en anafase I mitótica.

c. es n=7 y está en anafase mitótica. d. es 2n=7 y está en anafase mitótica.

8- Si al observar una célula en división se pueden contar 7 cromátides en cada polo, la célula :

a. es 2n=7 y está en metafase II meiótica. b. es 2n=14 y está en anafase mitótica.

c. es 2n=14 y está en anafase II meiótica. d. es n=7 y está en metafase mitótica.

9- En la meiosis, una célula 2n=12 en la profase II tendrá:

a. 12 cromosomas duplicados. b. 6 bivalentes.

c. 12 cromosomas con una cromátide cada uno. d. 6 cromosomas duplicados.

10- Durante la meiosis, los sucesos que contribuyen a la variabilidad genética se producen en:

a. Profase I, Anafase I y Anafase II. b. Profases I y II.

c. Profase I y Telofase I. d. Profase II y Telofase II.

MARCO TEÓRICO:
La división celular constituye uno de los eventos interesantes de los procesos reproductivos en la naturaleza; uno de los
acontecimientos previo a la mitosis está determinado por la replicación del ADN en los cromosomas.
La mitosis es el proceso por el cual los cromosomas duplicados se distribuyen por igual entre las células hijas. Los
cromosomas son estructuras que contienen la información genética, cada cromosoma de nuestras células está formado por
una molécula de ADN asociada a proteínas. Es un proceso continuo, ocurre en las células somáticas y concluye con la
formación de dos núcleos separados (cariocinesis) seguido de la separación del citoplasma (citocinesis) para formar dos
células hijas. Las fases de la mitosis son: profase, metafase, anafase y telofase. Entre dos divisiones celulares se tiene la
interfase, en donde los cromosomas no se observan al microscopio debido a que son demasiados delgados y no pueden
absorber suficiente colorante para ser visibles.
1. Profase: Fase en la cual los cromosomas se observan con sus dos cromátidas hermanas.
2. Metafase: Se observa el huso acromático, los cromosomas están más condensados y cortos y se ubican en el centro de la
célula.
3. Anafase: Los cromosomas (cromátidas hermanas) se dirigen a los polos.
4. Telofase: Los cromosomas (cromátidas hermanas) están en los polos, empieza la formación de la envoltura nuclear.

MITOSIS
La mitosis (del griego mitos, hebra) es un proceso de reparto equitativo
del material hereditario (ADN) característico de las células eucarióticas.

A nivel genético representa un sistema de reparto equitativo e idéntico

de la información genética. Ambas células hijas tendrán la misma
información genética, la célula madre.

A nivel celular permite la perpetuación de una estirpe celular y la

formación de colonias de células (clones celulares).

A nivel orgánico la mitosis permite el crecimiento y desarrollo de los

tejidos y de los órganos de los seres pluricelulares y la reparación y regeneración de los mismos.

El proceso de mitosis se puede dividir en varias etapas distintas: profase, prometafase, metafase, anafase y telofase.

1- PROFASE
· El material cromosómico se condensa para formar cromosomas mitóticos compactos.
Se observa que los cromosomas se componen de dos cromátidas hermanas unidas en el centrómero.
· El citoesqueleto se desensambla y el huso mitótico se ensambla.
· El aparato de Golgi y el retículo endoplasmático se fragmentan. La envoltura nuclear se dispersa.

REPASO: PROFASE - CEBOLLA

· Tipo de muestra: raíces en crecimiento de Allium cepa
· Tipo de tejido observado: tejido meristemático
· Tipo de célula observada: meristemática
· N° de cromosomas que tiene: 2n = 16
· Fase mitótica identificada: Profase
· La cromatina se condensa o se descondensa: se condensa y se forman los cromosomas dobles.
· Qué estructuras se desensamblan: citoesqueleto, RE, Golgi y la carioteca.
· Tinción (colorante usados): Orceína
· Aumento del objetivo usado: 100x (inmersión)/ aceite de cedro o de inmersión.

Inmediatamente después de la replicación, las hélices de ADN de un par de cromátidas hermanas

se mantendrían juntas por efecto de moléculas de cohesina que rodean las hélices de ADN
hermanas

Al entrar en mitosis la célula comenzaría el proceso de compactación, con la ayuda de moléculas de

condensina.

La condensina induce la compactación del cromosoma formando un anillo alrededor de lazos

superenrollados de ADN dentro de la cromatina.

2- PROMETAFASE -Los microtúbulos cromosómicos se unen con los cinetocoros

de los cromosomas.2: Los cromosomas se mueven al ecuador del huso.

3- METAFASE: Los cromosomas están alineados en la placa de la metafase, unidos por microtúbulos cromosómicos a ambos polos.

El huso mitótico de una célula animal

Cada polo del huso contiene un par de centriolos rodeados por material pericentriolar amorfo, en el que se forman los núcleos de los microtúbulos.
Pueden verse tres tipos de microtúbulos del huso: astrales, cromosómicos y polares.
 4-

ANAFASE Los centrómeros se dividen y las cromátidas hermanas se separan.

· Los cromosomas se mueven a los polos opuestos del huso.
· Los polos del huso se separan.

5- TELOFASE: Los cromosomas se aglomeran en los polos opuestos del huso.

· Los cromosomas se dispersan.

· La envoltura nuclear se ensambla alrededor de los cúmulos de cromosomas.
· El aparato de Golgi y el retículo endoplasmático se reforman.

CITOCINESIS

Formación y operación del anillo contráctil durante la citocinesis.

Citocinesis en las células vegetales: formación de la placa celular

El primer signo de la formación de la placa celular se observa en la etapa final de la anafase con la aparición del fragmoplasto en el centro de la célula en
división.
 Œ Los microtúbulos del fragmoplasto, que surgen de remanentes del huso mitótico, sirven como pistas
para el movimiento de vesículas secretorias derivadas del aparato de Golgi en la región.

 Las vesículas emiten túbulos digitiformes que tocan y se fusionan con las vesículas vecinas para
formar una red tubular entretejida en el centro de la célula.
Más vesículas se dirigen sobre los microtúbulos a los bordes laterales de la red y continúan el proceso de
formación de túbulos y fusión, lo que extiende la red hacia fuera.

Ž El borde líder de la red creciente toca la membrana plasmática y el límite de la célula madre

OBJETIVO Estudiar la mitosis y el ciclo de división celular en las células meristemáticas de la raíz de
Allium cepa (cebolla) (2n =16).

PROCEDIMIENTO
1. Cultivar los bulbos de cebolla en vasos pequeños conteniendo agua corriente, la que deberá cambiarse cada 24
h, mantenidos en oscuridad, a 25°C y sometidos a aireación constante.

2. Después de 48 a 72 h, arrancar con ayuda de una pinza 2 a 3 raíces del bulbo, cortar 2
cm de la parte apical y colocarla sobre una placa Petri que contenga Orceína.

3. Calentar la placa en la llama de un mechero de alcohol hasta aprox. 60°C y observar la

emisión de vapores blancos evitando la ebullición del colorante.

4. Dejar enfriar y repetir esta operación cuatro veces.

5. Enfriar y dejar reposar durante 15 min.

6. Colocar la raicilla en la lámina portaobjeto, cortar 2 mm de la punta, añadir una gota de

Orceína fría, cubrir la preparación con laminilla.

7. Con la punta de un lápiz golpear suavemente la preparación describiendo círculos concéntricos

para permitir la extensión del tejido meristemático.

8. Eliminar el exceso de colorante usando una tira de papel filtro.

9. Observar la preparación con objetivo de 100x y aceite de inmersión.

Un portaobjetos de microscopio con una sección

longitudinal de una punta de raíz de cebolla.
Muestra la estructura típica de la punta de la raíz joven. Sección delgada (1.5 - 2 micras).

DESARROLLO DE LA PRÁCTICA:
La práctica se desarrolla de forma grupal y de acuerdo a la metodología de la asignatura.
1. Cultivar los bulbos de cebolla en vasos pequeños conteniendo agua corriente, la que deberá cambiarse
cada 24 h, mantenidos en oscuridad, a 25°C y sometidos a aireación constante.
2. Después de 48 a 72 h, arrancar con ayuda de una pinza 2 a 3 raíces del bulbo, cortar 2 cm de la parte
apical y colocarla sobre una placa Petri que contenga orceína.
3. Calentar la placa en la llama de un mechero de alcohol hasta aproximadamente los 60°C y observar la
emisión de vapores blancos evitando la ebullición del colorante.
4. Dejar enfriar y repetir esta operación cuatro veces.
5. Enfriar y dejar reposar durante 15 minutos.
6. Colocar la raicilla en la lámina portaobjeto, cortar 2 mm de la punta, añadir una gota de orceína fría, cubrir
la preparación con laminilla.
7. Con la punta de un lápiz golpear suavemente la preparación describiendo círculos concéntricos para
permitir la extensión del tejido meristemático.
8. Eliminar el exceso de colorante usando una tira de papel filtro.
9. Observar la preparación con objetivo de 100x y aceite de inmersión.
ACTIVIDADES: GRUPAL
1. ¿Qué diferencias existen entre la mitosis y la meiosis?
2. ¿Qué es índice mitótico e índice interfásico?
3. Defina cariocinesis y citocinesis.
4. ¿Qué es la colchicina y cuál es su relación con la mitosis?

SEMANA 10
NECROSIS
MARCO TEÓRICO:
El término necrosis hace referencia a un espectro de cambios morfológicos que siguen a la muerte celular en
el tejido vivo, derivados en gran parte de la acción degradativa progresiva de las enzimas sobre las células
mortalmente lesionadas.
 El aspecto morfológico de la necrosis es el resultado de dos procesos esencialmente concurrentes: Digestión
enzimática de la célula y desnaturalización de las proteínas. En el núcleo se observa picnosis, cariolisis y
cariorrexis, y en el citoplasma se observa condensación e intensa eosinofilia, pérdida de la estructura y
fragmentación.

A diferencia de la apoptosis, que es una forma de muerte celular programada y controlada, la necrosis se considera un
proceso patológicos

Ejemplos de estos factores son el calor, el frío, los estímulos mecánicos, varias sustancias químicas, la hipoxia, la radiación ionizante y la irradiación UV.

En algunos casos, la necrosis puede disolver el tejido muerto, pero en otras ocasiones el tejido mantiene su arquitectura normal y los cambios celulares
pueden observarse únicamente a nivel microscópico.
Cuando una célula se encuentra en estado necrótico presenta hinchamiento de orgánulos, dilatación del retículo endoplásmico, ruptura temprana de la
membrana plasmática y liberación del contenido citoplasmático al espacio extracelular.

Debemos diferenciar entre dos tipos de muerte: necrosis y apoptosis

Una célula que entra en necrosis toma incontrolablemente agua del exterior, con lo cual se hincha. Este
hinchamiento hace que la membrana plasmática reviente y se libere a los alrededores todo el contenido citoplasmático, consecuencia cuanto menos
desagradable para las células vecinas.

Se caracteriza por una serie de cambios morfológicos, que incluyen:

1. Inflamación: La necrosis puede desencadenar una respuesta inflamatoria localizada debido a la liberación de sustancias
proinflamatorias que atraen células del sistema inmunitario.
2. Hinchazón celular: La célula afectada puede aumentar de tamaño debido a la acumulación de agua y la incapacidad de
mantener el equilibrio osmótico.
3. Ruptura de la membrana plasmática: La membrana celular se daña, lo que provoca la salida de componentes celulares al
entorno extracelular.
4. Infiltración de células inflamatorias: Los leucocitos y otros componentes del sistema inmunitario pueden infiltrarse en la
zona afectada para eliminar los restos celulares y promover la curación.
5. Formación de una cicatriz: En algunos casos, después de la necrosis, puede formarse tejido de cicatrización para reemplazar
el área dañada.

La apoptosis es
un proceso ordenado y aseado, la célula decide que quiere morir, y lo hace sin molestar a las vecinas, es el suicidio silencioso.
Es esencial para el desarrollo, el mantenimiento del equilibrio y la eliminación de células dañadas o innecesarias en el
cuerpo. A diferencia de la necrosis, la apoptosis es un proceso ordenado y no desencadena una respuesta inflamatoria.

Durante la apoptosis, las células activan una serie de vías de señalización interna que conducen a la autodestrucción
controlada. Estas son algunas de las características y eventos clave asociados con la apoptosis:

1. -Encogimiento celular: La célula apoptótica se encoge y se contrae debido a la redistribución de su contenido citoplasmático.
2. -Fragmentación del ADN: El ADN de la célula apoptótica se fragmenta en fragmentos regulares y definidos. Estos fragmentos
pueden ser detectados mediante técnicas de laboratorio, como la electroforesis en gel de agarosa.
3. -Formación de cuerpos apoptóticos: La célula apoptótica se divide en fragmentos más pequeños llamados cuerpos
apoptóticos. Estos cuerpos apoptóticos contienen orgánulos celulares y fragmentos de ADN y son fagocitados por células
vecinas o células especializadas del sistema inmunológico.
4. -Ausencia de inflamación: A diferencia de la necrosis, la apoptosis no induce una respuesta inflamatoria. Esto se debe a que
las células apoptóticas se descomponen de manera ordenada y son eliminadas sin liberar sustancias dañinas al entorno.
 La apoptosis es esencial en una variedad de procesos biológicos, como el desarrollo embrionario, la renovación de tejidos, la
regulación del sistema inmunológico y la eliminación de células dañadas o potencialmente cancerosas. Además, la apoptosis
defectuosa puede contribuir a enfermedades como el cáncer, las enfermedades neurodegenerativas y las enfermedades
autoinmunes.

La apoptosis se controla mediante una compleja red de señalización molecular que involucra proteínas reguladoras clave,
como las caspasas. Estas enzimas desempeñan un papel crucial en la activación y ejecución de la apoptosis.

Moléculas DAMP ("Damage-Associated Molecular Patterns"), liberadas por células que sufren necrosis que actúan como
señales de peligro endógenas para promover y exacerbar la respuesta inflamatoria.
El aumento de los niveles séricos de estos DAMP se ha asociado con muchas enfermedades inflamatorias, que incluyen sepsis, artritis, aterosclerosis,
lupus, enfermedad de Crohn y cáncer.

Las moléculas DAMP pueden incluir una variedad de componentes celulares, como ADN, ARN, proteínas, péptidos y
metabolitos intracelulares. Algunos ejemplos de moléculas DAMP conocidas son:

1. HMGB1 (High Mobility Group Box 1): Es una proteína nuclear que, cuando
es liberada al medio extracelular, puede actuar como una señal de peligro para
activar respuestas inflamatorias.
2. ATP (Adenosín Trifosfato): El ATP liberado de las células dañadas puede
funcionar como una molécula DAMP, activando receptores en las células del
sistema inmunológico y desencadenando respuestas inflamatorias.
3. Ácido úrico: El ácido úrico, un producto de desecho del metabolismo de las
purinas, puede actuar como una molécula DAMP cuando se acumula en tejidos
dañados o inflamados, desencadenando respuestas inflamatorias.
4. ADN y ARN: La liberación de ADN y ARN celular puede desencadenar
respuestas inmunitarias, ya que estas moléculas pueden ser reconocidas por
receptores específicos en células del sistema inmunológico.

Las moléculas DAMP se reconocen principalmente por receptores de

reconocimiento de patrones (PRRs, por sus siglas en inglés) presentes en las
células del sistema inmunológico, como los receptores tipo Toll (TLRs) y los
receptores de tipo NOD-like (NLRs). La unión de las moléculas DAMP a estos
receptores activa vías de señalización que conducen a respuestas inflamatorias
y a la activación de células del sistema inmunológico.
El reconocimiento de las moléculas DAMP y la activación subsiguiente del sistema inmunológico desempeñan un papel
fundamental en la respuesta inmune innata, la inflamación y la reparación tisular. Sin embargo, una respuesta inflamatoria
excesiva o inadecuada a las moléculas DAMP puede contribuir a la patogénesis de enfermedades inflamatorias crónicas o
autoinmunes.

La necrosis puede ser:

AUTÓLISIS: Cuando son los lisosomas intracelulares los que provocan la destrucción celular.

También conocida como autodigestión, es un proceso de descomposición de células o tejidos que ocurre de manera natural
después de la muerte o durante ciertas condiciones patológicas. Durante la autolisis, las enzimas digestivas intracelulares se
activan y comienzan a descomponer los componentes celulares.

Cuando una célula muere o se produce una lesión grave en un tejido, las membranas celulares pierden su integridad y las
enzimas lisosómicas, que normalmente están confinadas en los lisosomas, se liberan al citoplasma. Estas enzimas, como las
proteasas, nucleasas y lipasas, comienzan a degradar las proteínas, ácidos nucleicos y lípidos celulares.

A medida que la autolisis progresa, los componentes celulares se descomponen y se forman productos de degradación. Estos
productos pueden incluir aminoácidos, ácidos nucleicos y metabolitos intracelulares. A medida que las enzimas continúan su
acción, la estructura y la integridad celular se pierden gradualmente.

Es importante destacar que la autolisis es un proceso diferente a la apoptosis o a la necrosis. La apoptosis es un proceso
programado y ordenado de muerte celular, mientras que la necrosis es una muerte celular no programada causada por daño o
lesión. La autolisis, por otro lado, es un proceso que ocurre después de la muerte celular y no está controlado o regulado.

En el contexto clínico, la autolisis puede ser un problema en la conservación de tejidos o en la interpretación de muestras en
patología. En el caso de la conservación de órganos para trasplante, por ejemplo, la autolisis puede afectar la viabilidad y la
calidad de los tejidos donados.

En resumen, la autolisis es un proceso de descomposición celular que ocurre después de la muerte o en condiciones
patológicas. Las enzimas lisosómicas liberadas en el citoplasma degradan los componentes celulares, lo que lleva a la
descomposición de la célula o del tejido.
HETERÓLISIS
Cuando son otras células como los macrófagos o los polimorfonucleados los encargados de la destrucción celular.
Es la mayor cantidad de necrosis de las células vecinas, producida por la liberación de enzimas lisosomales de células muertas y de células
inflamatorias.
Cuando los macrófagos o los polimorfonucleares se encuentran con células extrañas, dañadas o infectadas, utilizan sus
mecanismos de fagocitosis para rodear y engullir a estas células. Una vez que las células objetivo son fagocitadas, los
lisosomas dentro de los macrófagos o los polimorfonucleares liberan enzimas digestivas para degradar y destruir el material
fagocitado.

Este proceso de degradación de células objetivo por parte de otras células se puede denominar "heterólisis"
La muerte celular necrótica es un proceso pasivo que no requiere síntesis de novo de proteínas y emplea una cantidad mínima de energía. Se
caracteriza por el aumento en el calcio intracelular (Ca2+), la disfunción mitocondrial, el aumento en las especies reactivas de oxígeno y la proteólisis
inducida por CALPAINAS y CATEPSINAS.
Las calpainas son enzimas proteolíticas que tienen una cisteína en su sitio catalítico (por lo que también se les llama cisteína-peptidasas), no son
lisosomales, y su actividad depende de calcio. Las catepsinas son proteasas que requieren un medio ligeramente ácido para funcionar.

Cambios celulares bioquímicos durante la muerte celular por necrosis.

Los niveles tanto de las especies reactivas de oxígeno (ROS) como del
calcio intracelular (Ca2+) aumentan. Los niveles elevados de calcio
sostenidos alteran la permeabilidad celular de las membranas, lo que
lleva a la disfunción y rotura de las membranas. Durante la necrosis, se
lleva a cabo el agotamiento de ATP.

EL PATRÓN DE DEGRADACIÓN DEL TEJIDO

NECROSIS
•Cubre las células contiguas
•Bordes mal definidos
•Muchas células son involucradas en el área afectada
•Hay una marcada respuesta inflamatoria

CAMBIOS FUNDAMENTALES EN LAS CÉLULAS NECRÓTICAS

En el citoplasma:
-Eosinofilia
-Desaparición de organelas
-Vacuolización generalizada
-Rotura de membranas
-Densidades floculentas en las mitocondrias.
-Disolución del tejido con calcificación
final a largo plazo.

En el núcleo:
Picnosis: condensación de la cromatina (retracción y aumento de la
basofilia).
Cariorrexis: fragmentación del núcleo picnótico.
Cariólisis: el núcleo se lisa y desaparece (DNAasas).
Rotura de las membranas
 Bioquímicos:
- Liberación de K
- Liberación de enzimas a la sangre, del tipo de las
creatincinasas, láctico deshidrogenasa y aspartato
amino transferasa
- Liberación de proteínas intracitoplasmáticas a la
sangre, como mioglobina, en caso de necrosis muscular.

TIPOS DE NECROSIS

Necrosis por coagulación: En este tipo de necrosis, se produce una

coagulación de las proteínas estructurales de la célula, hay pérdida de agua que
condiciona la momificación de la célula. Es producida por causa isquémica. Es la
causa más frecuente de necrosis. Generalmente ocurre debido a una
interrupción en el suministro de sangre al tejido, como en el caso de
la isquemia (falta de flujo sanguíneo) o la hipoxia severa (falta de
oxígeno). Estas condiciones pueden ser causadas por factores como
la obstrucción de vasos sanguíneos, trombosis, embolia, lesiones
traumáticas o infecciones graves

Necrosis caseosa: En esta los elementos celulares quedan destruidos

completamente, perdiendo su forma, fundiéndose entre sí y formando una
materia de color blanco amarillento o grisáceo, de consistencia untuosa
(similar al queso fresco) y pegajosa (caseum: queso blando.

Necrosis colicuativa o licuefactiva

En este tipo de necrosis las proteínas no quedan coaguladas sino que
sufren un proceso de reblandecimiento y se transforman en una papilla
gelatinosa al tacto.
Predominan los fenómenos de autólisis o heterólisis por activación de
enzimas proteolíticas, en particular las enzimas lisosómicas.
Durante la necrosis licuefactiva, las células mueren
debido a una falta de suministro sanguíneo
(isquemia) o debido a la infección bacteriana. En
ambos casos, las células mueren y liberan enzimas
lisosómicas al medio ambiente circundante. Estas
enzimas incluyen proteasas, lipasas y glucosidasas,
entre otras.

Las proteasas son enzimas que descomponen las

proteínas en péptidos más pequeños. Las lipasas
descomponen los lípidos en ácidos grasos y glicerol,
y las glucosidasas descomponen los carbohidratos complejos en azúcares más simples. Estas enzimas son altamente activas y
pueden digerir el tejido circundante, lo que conduce a la formación de una masa líquida.
El proceso de descomposición química en la necrosis licuefactiva está influenciado por la presencia de líquidos inflamatorios
y células inflamatorias, como los neutrófilos y los macrófagos. Estas células también liberan enzimas proteolíticas y contribuyen
a la descomposición del tejido necrótico.

Necrosis grasa: Necrosis por traumatismo del tejido graso, también conocida como esteatonecrosis: generalmente es de pocos centímetros y
es frecuente en las células adiposas del tejido celular subcutáneo, sobre todo en la mama femenina, ocasionando hemorragias en el foco traumático.
Ocurre cuando hay una interrupción en el suministro
sanguíneo o una lesión directa en el tejido adiposo, lo
que lleva a la muerte de las células grasas.
En la necrosis grasa, las células adiposas mueren y
liberan su contenido lipídico, que puede ser liberado al
tejido circundante o formar áreas de grasa licuada. La
liberación de los lípidos puede desencadenar una
respuesta inflamatoria en el área afectada, lo que atrae
células inflamatorias como macrófagos y neutrofilos.
 Necrosis gangrenosa: Normalmente ocurre en alguna de las extremidades, más frecuente en las inferiores. Consiste pues, en la asociación de dos
procesos: la necrosis y la putrefacció[Link] caracteriza por la muerte extensa de tejido, generalmente en las extremida des,
debido a una falta de suministro sanguíneo adecuado.
Existen dos tipos principales de necrosis gangrenosa: la gangrena seca y la gangrena húmeda.
1. Gangrena seca: También conocida como gangrena isquémica, se produce cuando hay una obstrucción en las arterias que
suministran sangre a la extremidad. Esto puede ocurrir debido a la enfermedad arterial periférica, trombosis o embolia arterial.
La falta de flujo sanguíneo adecuado priva al tejido de oxígeno y nutrientes, lo que resulta en la muerte del tejido. En la
gangrena seca, el tejido afectado se vuelve seco, arrugado y de color oscuro.
2. Gangrena húmeda: También conocida como gangrena enfisematosa o gangrena úmida, se produce cuando el tejido muerto
se ve infectado por bacterias anaerobias, lo que acelera la descomposición del tejido. La infección puede propagarse
rápidamente y causar una mayor destrucción del tejido. En la gangrena húmeda, el tejido afectado está hinchado, blando,
descompuesto y puede tener un olor desagradable. Además, en algunos casos, puede haber presencia de gas en los tejidos
afectados debido a la producción de gases por las bacterias.

NECROPTOSIS
Presenta características híbridas entre: el proceso de apoptosis o proceso de
muerte celular (por ser programada) y el proceso de la necrosis (por sus
características morfológicas) y los mecanismos que hacen efectiva la muerte
celular.
Después de que ocurre la necroptosis, el contenido celular se libera y causa
una respuesta inmune, y luego se detectan DAMPs y ADN mitocondrial en la
sangre, que son signos de necroptosis.

RIP1 interactúa con RIP3 y MLKL para formar el complejo

IIb que participa en la mediación de la necroptosis.
La actividad quinasa de RIP1 es esencial para el complejo
IIb.
RIP3 y MLKL se fosforilan en el complejo IIb y se trasladan
a la membrana plasmática, donde el complejo media la
permeabilización de la membrana.

ACTIVIDADES GRUPAL
1. ¿Qué diferencias existen entre
apoptosis y necrosis?
2. ¿Qué características presenta una
célula necrótica?
3. Defina qué es cariólisis.
4. ¿Qué es la necroptosis?
 SEMANA 11
EXTRACCIÓN DEL ADN
MARCO TEÓRICO:
El ADN es el material que tiene la información genética. Es de doble cadena unidad y los pares de bases del
nucleótido están unidos por puentes de hidrógeno. Estas bases nitrogenadas son Adenina (A), Timina (T),
Guanina (G) y Citosina (C), cualquiera de ellas se une a la pentosa (desoxirribosa) formándose un
nucleósido, al cual luego se une por enlace éster el ácido fosfórico formándose la unidad monomérica
nucleótido.
Las moléculas de ADN en una célula eucariota se encuentran dispersas en el núcleo y enrolladas alrededor
de moléculas de proteínas para formar la cromatina. Para la extracción del ADN de una célula se requiere
homogenizar la muestra del tejido para proceder al lisado de membrana, la liberación del ADN, la separación
de proteínas asociadas a dicha macromolécula y su posterior obtención bajo la forma de fibras.
El ADN es extraído empleando diferentes métodos para luego sometido a un análisis cualitativo y
cuantitativo.

ACIDO DESOXIRRIBONUCLEICO- ADN

Es una biomolécula que almacena la información genética de la mayor parte de los organismos vivos (una excepción son los retrovirus, que utilizan el
ARN para guardar su información genética).

w Los nucleótidos se unen mediante enlace fosfodiéster.

w Los grupos fosfato están cargados negativamente y son polares, lo que le confiere al ADN una carga neta negativa y lo hace altamente polar,
características que son aprovechadas para su extracción.
w Tienen una fuerte tendencia a repelerse, debido a su carga negativa, lo que permite disolver al ADN en soluciones acuosas y formar una capa
hidratante alrededor de la molécula.

Funciones del
material genético
1. Almacenamiento
de información
genética. El DNA
debe contener un
registro grabado de
instrucciones que
determina todas las
características
heredables de un
organismo. El DNA
debe contener la información para el orden específico de aminoácidos de todas las proteínas que
sintetiza el organismo.

2. Replicación y herencia. El DNA debe contener la información para la síntesis de nuevas cadenas de
DNA (replicación).

3. Expresión del mensaje genético. El DNA también funge como director de la actividad celular. La
información codificada en el DNA tiene que expresarse de alguna forma que participe en los sucesos
internos de la célula. La información del DNA debe usarse para dirigir el orden por medio del cual los
aminoácidos específicos se incorporan a una cadena polipeptídica.
EXTRACCION DEL ADN
SSD

1. En un mortero colocar la muestra (3

fresas sin hojas y/o un trozo de plátano de 3
cm) e incorporar 2 mL de NaCl 0.9%
triturando por 1 min.
NaCl neutraliza la carga negativa de los
grupos fosfato.

2. Añadir 10 mL de la solución de lisis y

seguir triturando (~5 min) hasta obtener una
masa homogénea y semilíquida.
Componentes de solución de lisis: dodecil
sulfato de sodio (SDS), EDTA, NaCl.
El SDS es un detergente que rompe las
membranas y desnaturaliza proteínas.

El detergente ayuda a romper la bicapa de

fosfolípidos de las membranas plasmáticas y la
envoltura nuclear.
Cuando el detergente se pone en contacto con los
lípidos éstos se separan de la membrana
rompiéndola.
La estructura de los lípidos es similar a la del
detergente y eso hace que se combinen,
formando micelas.
EDTA: Se emplean para proteger el ADN de la acción de enzimas nucleasas; ellos capturan los Mg2+ y no permiten que actúen como
cofactores de las nucleasas.

Las altas concentraciones (5 M) de NaCl se emplean para prevenir la contaminación de la muestra con polisacáridos que afectan la pureza del ADN,
pudiendo inhibir la actividad de algunas enzimas como polimerasas, ligasas y endonucleasas de restricción; la base para la separación de los
polisacáridos de los ácidos nucleicos, es su solubilidad diferencial en presencia de las altas concentraciones de NaCl los polisacáridos precipitan bajo la
acción de fuerzas centrifugas.

3. Agregar 2mL de acetato de sodio a la preparación, mezclar, para luego dejar reposar por 5 min. El acetato renaturaliza las cadenas de ADN.
4. Filtrar la preparación en un tubo de 16x150mm con la ayuda de un embudo cubierto con gasa.

5. Trasvasar 5-8mL del filtrado a un beaker pequeño e incorporar por las paredes 2 volúmenes de etanol frio e introducir rápidamente una bagueta
delgada y girar sobre su mismo eje a fin de recuperar el ADN bajo la forma de fibras.

El DNA es una molécula polar, pero la reacción con el etanol a muy baja temperatura hace que se vuelva apolar e insoluble en el etanol formándose un
precipitado.

El etanol formará una capa en la superficie por ser menos denso que la solución acuosa.
En presencia de etanol, se rompe la capa hidratante del ADN y quedan expuestos los grupos fosfato.

Bajo estas condiciones se favorece la unión con cationes como Na+ que reducen las fuerzas repulsivas entre las cadenas de nucleótidos y permiten que
el ADN precipite.
Por otro lado, la carga neta negativa del ADN le permite unirse a moléculas y matrices inorgánicas cargadas positivamente.

6. Colocar la bagueta con el ADN extraído en un tubo 16x150mm conteniendo 1 mL de solución salina citratada para resuspenderlo y reservarlo para su
uso en el siguiente experimento.

7. Obtener más fibra de ADN para reconocer su carácter ácido. Para ello dejar caer en las hebras un colorante básico como el azul de metileno.

IDENTIFICACION DE PENTOSAS----- REACCION DE BIAL

Las pentosas se deshidratan en una solución ácida dando furfural que al reaccionar con el orcinol del reactivo de Bial y en presencia de FeCl3, dan un
producto de condensación de color verde-azulado.
1. En un tubo 16x150 mm colocar 1 mL de ADN extraído en el experimento anterior y en otro tubo colocar 1 mL agua destilada.
2. Agregar a cada tubo 3 mL de Reactivo de Bial.
3. Calentar cuidadosamente cada tubo en la llama de un mechero hasta que la solución comience a hervir.
4. Observar y anotar el color que aparece en cada tubo de ensayo determinando si la reacción es positiva o negativa.

I. Extracción de ADN
1. En un mortero colocar la muestra (3 fresas sin hojas o un trozo de plátano de 3 cm) e incorporar 2 mL de
NaCl 0.9% triturando por 1 minuto.
2. Añadir 10 mL de la solución de lisis y seguir triturando (por aproximadamente 5 minutos) hasta obtener una
masa homogénea y semilíquida.
3. Agregar 2 mL de acetato de sodio a la preparación, mezclar, para luego dejar reposar por 5 minutos.
4. Filtrar la preparación en un tubo de 16x150mm con la ayuda de un embudo
cubierto con gasa.
5. Trasvasar 5-8 mL del filtrado a un vaso de precipitado pequeño e incorporar por las paredes 2 volúmenes
de etanol frio (10 a 16 mL) e introducir rápidamente una bagueta delgada y girar sobre su mismo eje a fin de
recuperar el ADN bajo la forma de fibras.
6. Colocar la bagueta con el ADN extraído en un tubo 16x150 mm conteniendo 1 mL de solución salina
citratada para resuspenderlo y reservarlo para su uso en el siguiente experimento.
7. Obtener más fibra de ADN para reconocer su carácter ácido. Para ello dejar caer en las hebras un
colorante básico como el azul de metileno.

ACTIVIDADES: GRUPAL
1. ¿Qué métodos existen para la lisis celular?
2. De qué está constituida la solución de lisis utilizada en la práctica y cuál es el papel de cada uno de sus
componentes?
3. ¿Cómo se realiza la purificación del ADN extraído?
4. Explique el proceso de cuantificación del ADN.
 SEMANA 12-
CODIGO GENETICO

MARCO TEÓRICO:
El ADN contenido en el núcleo celular almacena la información hereditaria bajo la forma de genes. Dichos genes
deben expresarse, por ello deben ser copiados en una molécula: ARN mensajero (proceso de transcripción) y
luego interaccionar con los ribosomas para la formación de proteína (Traducción). Tales proteínas van a
determinar las características morfológicas y fisiológicas que un organismo uni- o pluricelular presenta.
Es sabido que el ADN tiene 4 bases nitrogenadas y que por lo menos existen 20 aminoácidos capaces de ligarse
para formar las proteínas, para ello se debe tener en cuenta el Código Genético que relaciona los nucleótidos de
un ARN mensajero (ARNm) con los aminoácidos de una proteína.

Revisión del flujo de información en una célula eucariota.

El DNA de los cromosomas localizados dentro del núcleo contiene toda la información genética almacenada.

Los sitios seleccionados del DNA se transcriben en pre-RNAm (1) y se procesan en RNA mensajeros (2).
Los RNAm se desplazan fuera del núcleo (3) hacia el citoplasma, donde los ribosomas que se mueven a lo largo del RNAm (4) los traducen en
polipéptidos.

Después de la traducción, el polipéptido se pliega para adquirir su conformación nativa (5).

EL CODIGO GENETICO

El código asocia a cada triplete de bases del ADN (CODÓN), un aminoácido

concreto.

Se pueden formar 64 codones.

Cada codón se atribuye a uno de los 20 aminoácidos posibles.

No todos los codones codifican a un aminoácido (Hay tres: UAG, UAA y UGA
que señalan el final de la parte codificadora).

PROPIEDADES DEL CÓDIGO GENÉTICO

u UNIVERSAL: Todos los seres vivos lo emplean.
u DEGENERADO: El código genético tiene redundancia pero no ambigüedad.
Ej. Los codones GAA y GAG especifican el ácido glutámico (redundancia), sin embargo, ninguno de éstos dos especifica otro aminoácido (no
ambigüedad).
u POSEE TRIPLETES SIN SENTIDO: Existen tres tripletes que no codifican ningún aminoácido, son los tripletes “sin sentido”, de “paro” o “stop”.
u ESPECIFICIDAD Y CONTINUIDAD: Ningún codón codifica mas de un aminoácido.
Tampoco presenta solapamiento: los tripletes se hallan dispuestos de manera lineal y continua.
u UNIDIRECCIONAL: Los tripletes se leen en el sentido 5´à3´. Su lectura se hace en un solo sentido (5´à3´), desde el codón de iniciación hasta
el codón de parada (stop).
DESARROLLO DE LA PRÁCTICA
1. Analice y complete las siguientes secuencias:
Ejemplo:

Sitio de N-glicosilación: Asparagina-X-Serina o Asparagina-X-Treonina.

X: es cualquier aminoácido excepto Prolina
Sitio de O-glicosilación: Serina o Treonina

ACTIVIDADES: GRUPAL
- Desarrollo de las preguntas del cuestionario (de acuerdo a las secuencias dadas).
DESARROLLO DE LA PRÁCTICA: .
1. Analice y complete las siguientes secuencias
Ejemplo:
 NATURALEZA MOLECULAR DEL GEN Y DEL GENOMA
INTRODUCCIÓN
Desde que el hombre se ha dedicado al cultivo o ha criado animales, resulta obvio que cada semilla o cada óvulo
fecundado ha de contener un plan o diseño para el desarrollo del organismo. En la época moderna, la ciencia de la
genética se desarrolló alrededor de la premisa de que existen unos elementos invisibles portadores de información,
denominados genes, que son distribuidos a las células hijas cuando la célula madre se divide. Por consiguiente, antes de
dividirse una célula debe de hacer una copia de sus genes para poder ceder a sus células hijas una colección completa de
ellos. Los genes de los espermatozoides y de los óvulos transmiten la información genética de una generación a la
siguiente.

Hacia finales del siglo XIX, los biólogos habían reconocido ya que los transportadores de la información hereditaria eran
los cromosomas que resultan visibles en el núcleo cuando una célula comienza a dividirse. Pero la evidencia de que es el
ADN de estos cromosomas la sustancia de la que están formados los genes, se obtuvo mucho más tarde a partir de
estudios sobre microorganismos. Hasta entonces se había creído que sólo las proteínas presentaban una complejidad
conformacional suficiente como para ser portadoras de la información genética. El modelo del ADN propuesto por
Watson y Crick en 1953 brindó una explicación satisfactoria de la forma en que pueden operar los procesos relacionados
con una molécula depositaria de la información genética: el almacenamiento de información, su replicación, su expresión,
la mutación y la recombinación.

El presente capítulo tratará acerca de la naturaleza de los genes y su expresión en dos pasos: la transcripción y la
traducción; asimismo nos ocuparemos de los mecanismos de regulación que controlan la expresión genética.

EL CONCEPTO DE GEN
El genoma es el conjunto de genes de una especie. Pero ¿qué es un gen?. En principio es una unidad informativa
discreta, responsable de una característica transmisible, vg. el color de ojos, la textura de la semilla, la longitud del
tallo. Este es el concepto mendeliano del gen, acuñado en el siglo XIX, cuando aún se desconocía su verdadera naturaleza
química. Esta definición del gen sigue siendo útil en determinado contexto, con la salvedad de que hoy identificamos a
dicha unidad de información con un fragmento de ADN localizado en determinado lugar de un cromosoma. Una segunda
concepción del gen surgió cuando los genetistas demostraron de forma concluyente que los genes especifican la
estructura de las proteínas individuales. A principios de los años 1950 se llegó a conocer la secuencia de aminoácidos de
la proteína insulina y se descubrió que cada proteína consiste en una secuencia de aminoácidos típica, de la cual, se
supuso, dependerían sus propiedades. Al mismo tiempo se correlacionaron mutaciones (alteraciones en la secuencia de
nucleótidos del ADN) con alteraciones de la secuencia de aminoácidos en las proteínas. Resultó evidente que la secuencia
del ADN especifica, mediante algún código, la secuencia proteica. Un gen es, entonces, una secuencia de ADN con la
información necesaria para la síntesis de una proteína particular.

Dado que el ADN es una molécula relativamente inerte, su información se expresa indirectamente, a través de otras
moléculas. El ADN dirige la síntesis de proteínas y éstas determinan las características físicas y químicas de la célula.

Como ya adelantáramos, las instrucciones genéticas contenidas en el ADN se expresan en dos pasos. El primero de ellos,
la transcripción, consiste en la síntesis de ARN a partir del ADN. El ARN contiene toda la información de la secuencia
de bases del ADN de la que ha sido copiado. El segundo paso de la expresión genética es la traducción, momento en el
cual el ARN ejecuta las instrucciones recibidas cristalizándolas en la síntesis de una proteína específica.

Existen diversos tipos de ARN: el ARNm (mensajero), el ARNr (ribosómico), el ARNt (de transferencia) y los ARN
pequeños. De todos ellos, tan sólo el ARNm es portador de información acerca de la secuencia aminoacídica de una
proteína; sin embargo todos ellos son transcriptos de ADN. Por lo tanto, resulta necesario revisar la segunda definición
del gen.

Hoy se acepta que un gen es una secuencia de ADN transcripta que genera un producto con función celular
específica.

Cabe aclarar, no obstante, que esta definición no es completamente satisfactoria, en la medida en que existen regiones
reguladoras de los genes, que no se transcriben, y otras regiones (llamadas intrones) que se transcriben pero se eliminan
sin cumplir ninguna función aparente.
LA ORGANIZACIÓN DEL GENOMA

Con la excepción de ciertos virus, que contienen un genoma de ARN, el resto de los genomas utiliza el ADN como
depositario de la información genética.

Sin embargo, debemos señalar algunas diferencias significativas en cuanto a la organización del genoma en
procariontes y eucariontes.

· En primer lugar, el ADN procarionte se presenta como una única molécula circular, en tanto el ADN eucarionte
es de estructura lineal. Además las células eucariotas poseen usualmente más de una molécula de ADN en sus
núcleos. Cada molécula corresponde a un cromosoma, cuyo número es constante para todas las células de una misma
especie (con excepción de las gametas).

· El ADN eucarionte, por otro lado, se halla asociado íntimamente a diferentes proteínas, entre las cuales las
histonas juegan el papel más importante en lo que respecta al empaquetamiento del ADN. Esta asociación a
histonas no se verifica en el ADN procarionte, por lo cual se lo ha denominado “ADN desnudo”.

En las células eucariotas los cromosomas están confinados en el compartimiento nuclear, donde tiene lugar la
transcripción, mientras que la traducción se localiza en el citoplasma; por lo tanto, ambos procesos se encuentran
separados espacial y temporalmente. Esto permite que los transcriptos de ARN experimenten en el núcleo un
proceso de maduración previo a la traducción. En las células procariotas, donde no existe la envoltura nuclear, el
ADN está en contacto directo con el citosol, y los procesos de transcripción y traducción no se hallan separados
en espacio ni en tiempo. Los ARNs no son sometidos a modificaciones postranscripcionales.

· Los eucariontes tienen genomas mucho más grandes que los procariontes. Aunque el valor C (cantidad haploide
de ADN de una especie) es muy variable entre los mismos eucariontes (ver tabla 1), es siempre notablemente
mayor que el de los procariontes. No necesariamente un mayor valor C refleja una mayor complejidad genética
(véase en tabla 11.1 valores de Salamandra y Homo sapiens).

· En los procariontes se da una máxima economía de información: en casi todos los casos cada cromosoma
contiene una sola copia de cualquier gen particular, y, con excepción de las secuencias reguladoras y señaladoras,
prácticamente se expresa todo el ADN. En cambio, en toda célula eucariota parecería haber un gran exceso de
ADN, o por lo menos de ADN cuyas funciones se desconocen por completo. Por ejemplo, la estimación del ADN
“innecesario” en los seres humanos llega a ser tan elevada como el 95% del genoma.

EL CÓDIGO GENÉTICO

Hemos visto que los genes son segmentos de ADN situados en los cromosomas, que se comportan como unidades de
transcripción. Hemos señalado también que muchos de los ARN transcriptos son productos celulares finales con
función propia (al margen de las modificaciones postranscripcionales que requieran para completar su maduración),
es decir que, en alguna medida, la transcripción es un paso terminal de la expresión de ciertos genes. Sin embargo,
sabemos que muchos otros genes contienen la información necesaria para especificar la secuencia de aminoácidos
de las tantas proteínas que una célula es capaz de sintetizar. En estos casos, la transcripción es tan sólo el primer
paso de la expresión genética. Los ARN obtenidos, ARN mensajeros, son, como su nombre lo indica, meros
transportadores de información que aún debe ser decodificada, información que debe traducirse en la síntesis de
una proteína. La traducción es el segundo paso de la expresión genética.
 Fig. 11.1 - Flujo de información genética

¿De qué manera la estructura de una molécula de ARNm lleva implícita la información para construir una proteína?
La información reside en la secuencia de bases y está “escrita” en un código propio al que llamamos código
genético.

Muchas de las características del código genético fueron anticipadas en forma teórica a partir del descubrimiento
del ARNm. Pero en el año 1961, Nirenberg y Matthaei desarrollaron una técnica que abrió el camino para que en los
siguientes cuatro años el código genético fuera enteramente descifrado.

Podemos pensar al código genético como un idioma. Los idiomas utilizan una cierta cantidad de letras, éstas se
combinan para formar palabras, y cada palabra tiene un significado, designa a un objeto particular. En el código
genético están presentes todos estos elementos: las letras son las 4 bases que forman las cadenas de ARN (A, U,
C, G); las palabras son siempre agrupaciones de 3 letras o tripletes de bases, llamadas codones en la molécula del
ARNm, y los objetos designados por dichas palabras son cada uno de los 20 aminoácidos que componen las
proteínas.

¿Por qué las palabras-codones se forman con 3 bases? Si cada palabra constara de 1 base, habría 4 palabras, y si
se formara con 2, las palabras posibles serían 16. En ninguno de los casos alcanzarían para designar a todos los
aminoácidos. Pero se pueden obtener 64 combinaciones diferentes si las bases se combinan de a 3; 64 codones son
más que suficientes para nombrar a los 20 aminoácidos.

¿Cuál es la función de los 44 codones restantes? Así como en cada idioma existen palabras distintas con un mismo
significado, el código genético emplea codones diferentes para nombrar a un mismo aminoácido. La mayoría de los
aminoácidos están codificados por más de 1 codón: existen codones sinónimos.

La presencia de codones sinónimos en el código genético habla de una degeneración, característica que, lejos de
resultar desventajosa, reporta a las células sus beneficios. Los codones sinónimos son muy similares entre sí, por
lo tanto la sustitución de una sola base en un codón frecuentemente da por resultado otro codón que especifica al
mismo aminoácido. Por otra parte, aminoácidos de propiedades semejantes son codificados por codones
semejantes. Si en una proteína se reemplaza un aminoácido hidrófobo por otro de iguales características a
consecuencia de una mutación, las chances de que el cambio sea viable son mayores.

Esta flexibilidad del código no debe confundirse con ambigüedad: el código no es ambiguo, en tanto cada codón
especifica a uno y sólo a un aminoácido. Así no da lugar a error en el momento de ser traducido.

Los codones que codifican aminoácidos suman en total 61. Los 3 codones que no especifican ningún aminoácido,
UGA, UAG y UAA, actúan como señales de terminación en la traducción o síntesis de proteínas. Son
llamados codones de terminación o stop.

La tabla del código que se halla a continuación es válida para los seres vivos más diversos: el hombre, las bacterias,
las levaduras, las plantas. El código genético es universal, lo cual da prueba de que todos los organismos
comparten un mismo origen. Una de las contadas excepciones a la universalidad del código es el ADN mitocondrial,
en el cual algunos codones son leídos de manera diferente.
 TABLA 11.2 - Código genético

SEGUNDA LETRA

U C A G

UGU cisteína
UUU fenilalanina UCU serina UAU tirosina U
UGC cisteína
UUC fenilalanina UCC serina UAC tirosina C
U UGA stop
UUA leucina UCA serina UAA stop A
UGG
UUG leucina UCG serina UAG stop G
triptófano

CUU leucina CCU prolina CAU histidina CGU arginina U

CUC leucina CCC prolina CAC histidina CGC arginina C

C
CUA leucina CCA prolina CAA glutamina CGA arginina A

CUG leucina CCG prolina CAG glutamina CGG arginina G

PRIMER TERCER
A LETRA AAU A LETRA
AUU isoleucina ACU treonina asparagina AGU serina U

AUC isoleucina ACC treonina AAC AGC serina C

A asparagina
AUA isoleucina ACA treonina AGA arginina A
AAA lisina
AUG metionina ACG treonina AGG arginina G
AAG lisina

GUU valina GCU alanina GAU aspartato GGU glicina U

GUC valina GCC alanina GAC aspartato GGC glicina C

G
GUA valina GCA alanina GAA glutamato GGA glicina A

GUG valina GCG alanina GAG glutamato GGG glicina G

EL MARCO DE LECTURA

¿De qué manera se leen los codones durante la síntesis proteica?

Consideremos la siguiente secuencia de bases de un ARNm:

5’-----GUUCCCAUA----3’

Si comenzamos la lectura en la G situada hacia el extremo 5’, este mensaje podría ser traducido como una secuencia de
tres aminoácidos (las palabras del código se leen de corrido, sin ningún “signo de puntuación” entre ellas):

Valina - prolina - isoleucina

¿Cuál sería la traducción del mensaje si en cambio la lectura se iniciara en la primera U desde el extremo 5’?

fenilalanina - prolina

Con este simple ejemplo resulta evidente que el sitio de inicio de la traducción es de importancia capital para la correcta
traducción del mensaje.

¿Qué determina que la lectura comience en el sitio correcto?

Los ARNm portan un codón, el AUG (codifica metionina), que es interpretado por los ribosomas como codón de iniciación.
Este codón da el marco o cuadro de lectura que será empleado de allí en más. En adelante, el ribosoma se desplazará a
lo largo del ARNm en bloques consecutivos de tres bases, garantizando la lectura de los codones apropiados.
Las mutaciones que implican ganancia o pérdida de un nucleótido resultan más destructivas que las sustituciones, pues al
modificar el marco de lectura, alteran por completo el mensaje.

Por último hemos de señalar que el código es leído sin solapamiento. Esto significa que cada nucleótido del mensaje es
utilizado como componente de un solo codón (aunque nuevamente existen excepciones).

Fig. 11.2 - Solapamiento del código

Características del Código Genético

 El código genético consta de 64 codones o tripletes de bases.61 codones codifican aminoácidos.

 3 codones funcionan como señales de terminación.
 El código no es ambiguo, pues cada codón especifica a un solo aminoácido.
 El código es degenerado, ya que un aminoácido puede estar codificado por diferentes codones.
 Es universal, debido a que sus mensajes son interpretados de la misma forma por todos los organismos.
 Utiliza un marco de lectura establecido al inicio de la traducción y no lo modifica.
 No se produce solapamiento de codones.

EL PROCESO DE LA TRANSCRIPCIÓN

La transcripción consiste en la síntesis de ARN a partir de un molde de ADN.

A continuación realizaremos una descripción general del proceso de transcripción tomando en cuenta los aspectos
comunes a la síntesis de los distintos tipos de ARN.

La transcripción, tanto en células procariotas como eucariotas, involucra la participación de una enzima ARN polimerasa
ADN dependiente. Ésta sintetiza una cadena de ARN cuyos inicio, terminación y secuencia de bases vienen
determinados por el propio gen.

El primer paso de la transcripción es la unión de la enzima ARN polimerasa a una región del gen llamada promotor. El
promotor es una secuencia específica de bases con alta afinidad por la enzima, por lo que proporciona a la misma su sitio
de unión al ADN. Es asimismo una señal que indica cuál cadena se ha de transcribir. La transcripción es asimétrica, pues
usualmente sólo se transcribe una de las dos cadenas que forman cada gen. La cadena que actúa como plantilla es la
cadena molde, negativa o no codificante; la hebra no transcripta, complementaria de la anterior, se denomina antimolde,
positiva o codificante. La ARN polimerasa se desplaza sobre la cadena molde, recorriéndola en dirección 3’ => 5’ o “río
abajo” y transcribiéndola a partir del nucleótido que el promotor señala como punto de inicio de la transcripción. Este
nucleótido se nombra +1 y los siguientes, río abajo, siguen la numeración correlativa (+2, +3, etc.). Partiendo desde el
punto de inicio en la dirección contraria, es decir “río o corriente arriba”, los nucleótidos se numeran –1, -2, etc.

La ARN polimerasa sólo puede desplazarse y transcribir si previamente la doble hélice sufre un desenrollamiento y
fusión (separación de las cadenas complementarias por ruptura de los puentes de hidrógeno entre las bases). La misma
enzima cataliza ambos procesos, generando hacia el extremo 3´ una burbuja de transcripción, un tramo de
aproximadamente 12 nucleótidos de longitud, en el cual las cadenas permanecen desapareadas. La burbuja de
transcripción aparenta avanzar río abajo junto con la enzima, pues a medida que progresa la fusión por delante de ella, la
doble hélice se recompone por detrás.
La formación de la burbuja causa una supertorsión o superenrollamiento de la doble hélice en los sectores ubicados hacia
el extremo 5’ del molde. Este fenómeno es corregido por la acción de una enzima topoisomerasa I.

Fig. 11.3 - Burbuja de transcripción

Cuando el molde ya ha sido desapareado en la burbuja de transcripción y expone sus bases, éstas son reconocidas por la
ARN polimerasa. A medida que la enzima “lee” la plantilla, coloca junto a cada base de la misma el ribonucleótido
trifosfato portador de la base complementaria. A los desoxirribonucleótidos de A, T, C y G se le aparean,
respectivamente, los ribonucleótidos de U (recordemos que el ARN no contiene T), A, G y C mediante puentes de
hidrógeno. Una vez ubicados los dos primeros ribonucleótidos, la enzima cataliza la formación del puente fosfodiéster
entre ambos, iniciándose la cadena de ARN.

Fig. 11.4 - Dirección de la transcripción

El enlace fosfodiéster se produce entre el hidroxilo en posición 3’ del primer nucleótido y el grupo fosfato interno, en
posición 5’, del segundo. Un grupo pirofosfato de este último es liberado como producto y escindido rápidamente en dos
fosfatos por la acción de una pirofosfatasa. Dicha ruptura es tan exergónica que la reacción inversa se torna
prácticamente imposible. Así, desde el punto de vista termodinámico, se favorece la síntesis de la nueva cadena. Por lo
tanto, son los mismos sustratos los que, por estar trifosfatados, aportan la energía necesaria para su polimerización.
 Fig. 11.5 - Incorporación de ribonucleótidos en el extremo 3' de ARN

Este procedimiento se repite tantas veces como nucleótidos contenga el molde, de tal manera que el ARN va creciendo en
forma antiparalela a aquél, es decir, desde su extremo 5’ (el que quedó libre en el primer nucleótido) hasta su extremo 3’ (que
quedará libre en el último nucleótido añadido). La dirección de la síntesis del ARN es 5´ => 3´.

Siempre los nucleótidos recién incorporados al ARN forman una hélice corta ARN-ADN con su plantilla. Esta hélice híbrida es
transitoria, pues conforme el polímero se alarga por su extremo 3’, el extremo 5’ se separa del molde, el cual vuelve a
emparejarse con su hebra de ADN complementaria.

La transcripción concluye cuando la ARN polimerasa alcanza una señal (una secuencia específica de bases del ADN) que actúa
como señal de terminación.

El producto obtenido, un ARN transcripto primario, resulta una copia complementaria y antiparalela de una región del gen
comprendida entre el punto de inicio y la señal de terminación.

Fig. 11.6- ARN en distintos estadios de transcripción sobreel mismo gen

El transcripto primario repite la dirección y la secuencia (excepto porque lleva U en vez de T) de la hebra no copiada o
antimolde, lo que justifica que a esta última se apliquen las denominaciones de hebra positiva o codificante. Es la cadena
convencionalmente elegida para representar un gen.

Cabe aclarar que al describir la transcripción en forma general, hemos omitido la mención de regiones reguladoras de los
genes, bajo cuyo control se encuentran los acontecimientos analizados. Este aspecto del tema será desarrollado más adelante
en el mismo capítulo.
En el siguiente cuadro resumimos los requisitos de la transcripción:

Una molécula de ADN molde, con región promotora, que indica el inicio de la transcripción, con secuencia de terminación,
que marca el fin del proceso, y un segmento que será expresado.

· Una enzima ARN polimerasa que:

-reconoce las secuencias señalizadoras,

-abre la hélice,

-lee el molde (de 3´a 5´),

-reconoce y ubica los sustratos complementarios,

-polimeriza los sustratos(de 5´a 3´).

· Cofactores enzimáticos de la ARN polimerasa: Mg++ o Mn++.

· Sustratos: UTP, ATP, GTP Y CTP.

· Una fuente de energía: los mismos sustratos.

· Una pirofosfatasa.

· Una topoisomerasa I.
 Fig. 11.7 - El proceso de transcripción

A partir de distintos genes se transcriben diferentes clases de ARN: ARN mensajero(ARNm),ARN de

transferencia(ARNt),ARN ribosómico(ARNr),ARN pequeños nucleares y citoplasmáticos (ARNpn/ARNpc
respectivamente).

Si bien el proceso transcripcional es básicamente similar en procariotas y eucariotas, existen diferencias que
detallaremos a continuación:
 EUCARIOTAS PROCARIOTAS

1- La transcripción es llevada a cabo

por tres tipos de enzima ARN polimerasa, cada
una especializada en la síntesis de los distintos
tipos de ARN: 1- La transcripción es llevada a cabo por un solo tipo de ARN
polimerasa que sintetiza las diversas clases de ARN.
La ARN polimerasa I transcribe genes del ADN
nucleolar que codifican para los ARNr 45S La ARN pol. bacteriana es un complejo proteico oligomérico
constituido por cinco subunidades. Excepto la subunidad sigma (s),
La ARN polimerasa II transcribe genes del
el resto conforma un núcleo enzimático. Todo el complejo
ADN no nucleolar que codifican para todos los
constituye una holoenzima capacitada para leer las secuencias
ARNm y para la mayoría de los ARNpn.
promotoras.
La ARN polimerasa III transcribe genes del
ADN no nucleolar que codifican para los ARNt,
los ARNr 5S,los ARNpc y para el resto de
los ARNpn.

2- Las ARN polimerasas eucariotas no se unen al

ADN molde en su sitio promotor si no están
presentes proteínas denominadas factores
basales de transcripción. Estos son específicos 2- Si bien la ARN polimerasa bacteriana no requiere de factores de
de cada polimerasa y se encuentran en todos los transcripción, se considera a la subunidad s como un factor de
tipos celulares. Las células eucariotas también inicio de la transcripción, ya que el núcleo enzimático despojado de
cuentan con factores de transcripción la subunidad s no puede por sí mismo leer adecuadamente las
específicos los cuales relacionan a los factores secuencias promotoras y efectuar la transcripción.
basales con las regiones reguladoras de un gen.
Los factores específicos controlan la tasa de
transcripción de los genes. Cada tejido presenta
una combinación particular de los mismos.

3- Cada ARN polimerasa reconoce una secuencia

particular de nucleótidos o señal para la
transcripción ,que es diferente para cada
enzima. Por ejemplo la ARN polimerasa II, que 3- La ARN polimerasa bacteriana también reconoce secuencias
trasncribe los genes que codifican para ARNm, consenso indispensables para la unión de la holoenzima y la
reconoce varias secuencias de nucleótidos en el señalización del punto de inicio. Una de las secuencias más
promotor, entre las cuales se encuentran las conocidas es la caja TATAAT o caja Pribnow y TTGACA, ubicadas
secuencias llamadas caja TATA o caja siempre río arriba del punto de inicio de la transcripción.
Hogness-Goldberg, caja CAAT y GC. Éstas
-35 -10 +1
secuencias se encuentran "río arriba" respecto
del punto de inicio de la transcripción. El 5' -----TTGACA----TATAAT----inicio--3'
reconocimiento de dichas secuencias por parte
Promotor procariota
de la ARN polimerasa II y los factores basales
de transcripción son prerequisitos para iniciar la
copia del gen.

Cabe destacar que las secuencias consenso que

reconocen las distintas ARN polimerasas y sus
correspondientes factores basales difieren en
composición y ubicación dentro del gen, esto
significa que no siempre se localizan delante del
promotor.

CAAT--GGGCCGGG--GGGCCGGG-TATA--inico

Promotor eucariota
Resumiendo, las principales diferencias en la transcripción en células procariotas y eucariotas:

· Existe una sola ARN polimerasa procariota y tres ARN polimerasas eucariotas.

· La ARN polimerasa procariota no requiere factores de transcripción. Las eucariotas requieren la presencia de
factores de transcripción basales y su actividad es regulada por factores de transcripción específicos.

· Las secuencias señalizadoras son diferentes.

LA MAQUINARIA TRADUCCIONAL

La traducción implica el funcionamiento coordinado de un gran número de moléculas entre las que se encuentran los
distintos tipos de ARN. Una vez transcriptos cada ARN sufre una serie de modificaciones cuyas características difieren
según hablemos de células procariotas y eucariotas. Describiremos cada ARN en general y luego sus variantes en ambos
tipos celulares.

ARNm (MENSAJERO)

Los ARNm son moléculas lineales de cadena simple en donde residen las instrucciones para la elaboración de un producto
proteico.

Los ARNm eucariotas y procariotas son esencialmente iguales en el sentido que presentan, una vez listos para la
traducción, una secuencia continua de codones que se extienden desde el principio al fin del mensaje genético dictando
con exactitud la secuencia lineal de aminoácidos de una cadena polipeptídica en particular. Esta secuencia se lee en la
dirección 5' => 3'. El principio de la secuencia presenta un codón iniciador (casi siempre AUG), y el final de la secuencia
o región codificadora es un codón de terminación o stop (UGA, UAA, UAG).

Además de la región codificadora presenta sectores extra en los extremos 5' y 3' del mensajero denominados
secuencias directora y seguidora respectivamente. Estas regiones no se traducen en proteína aun cuando forman parte
del ARNm transcripto del gen.

Fig. 11.8 - Correspondencia entre las regiones del gen eucariota, su transcripto maduro y la cadena polipeptídica

Existen diferencias entre los ARNm procariota y eucariota

ARNm EUCARIOTA

1- La mayoría de los ARNm eucariotas presentan la secuencia del mensaje interrumpida, es decir coexisten a lo largo de
la molécula sectores que codifican para la proteína llamados EXONES, con secuencias intercaladas sin información
denominadas INTRONES (Fig. 12.9).
 Fig. 11.9 - Estructura en mosaico del ARNm transcripto primario eucariota

2- Los ARNm transcriptos primarios sufren una serie de modificaciones antes de salir al citoplasma como ARNm
maduro.

Algunos cambios consisten en el agregado de moléculas en los extremos 5' y 3' llamados capping y poliadenilación.

Capping: Ésta es la denominación del proceso por el cual se adiciona en el extremo 5' del ARNm una molécula de 7 metil-
guanosina (un nucleótido metilado) a la que se conoce como cap (del inglés, capuchón). Ésta molécula se agrega al ARNm
naciente cuando éste alcanza, aproximadamente, los 30 nucleótidos de longitud. Por ser esta modificación simultánea a
la transcripción se la considera co-transcripcional. La cap impide la degradación del ARNm inmaduro por nucleasas y
fosfatasas nucleares. También participa en la remoción de intrones y en el inicio de la traducción.

Fig 11.10- El agregado del cap

Poliadenilación: Este proceso consiste en el agregado de alrededor de unas 250 adenosinas

o cola poli A , en el extremo 3' del ARNm. El ARNm presenta una secuencia de

nucleótidos específica AAUAAA conocida como señal de poliadenilación. Una nucleasa corta

al pre-ARNm a unos 20 nucleótidos después de la señal. Una vez liberado el pre-ARNm, la enzima poliA-polimerasa le
agrega las adenosinas de a una por vez. Por otra parte la ARN pol II continúa transcribiendo un tramo más del molde,
para finalmente disociarse del gen. Este último tramo de ARN es totalmente infructuoso, pues resulta rápidamente
degradado por nucleasas y fosfatasas.

Las funciones de la cola poli A son: proteger el extremo 3' de la degradación y ayudar a los ARNm a salir del núcleo.

Carecen de cola poli A los ARNm de histonas, dado que como ya se mencionó, no presentan la señal de poliadenilación.
Otra excepción la ejemplifican algunos genes que presentan más de una señal de poliadenilación. Cuando así ocurre, el
mismo gen puede ser transcripto en dos productos diferentes, dependiendo de cuál sea la señal reconocida.
 Fig. 11.11 - El agregado de la cola poli A

Otra modificación significativa afecta a la secuencia codificadora, que sufre un acortamiento producto de la eliminación
de los intrones, quedando como producto final los exones empalmados en secuencia continua. Este tipo de procesamiento
se llama empalme (splicing) y fue descubierto en 1977.

Para que se lleve a cabo este tipo de maduración del pre-ARNm se necesita una batería de ribonucleoproteínas
nucleares: las RNPpn ( snRNP, del inglés, small nuclear ribonucleoprotein). Estas partículas ricas en uridinas y diversas
proteínas se denominan U1, U2, U4, U5, U6 y se combinan de a una por vez en los extremos de cada intrón (lindantes a
sendos exones). El complejo resultante del ensamblado de las distintas RPNpn se denomina espliceosoma. La actividad
enzimática residiría en los ARNpn del espliceosoma. Éstos serían los responsables de reconocer las secuencias
señalizadoras de corte, escindir a los intrones y empalmar a los exones entre ellos, produciendo una molécula de ARNm
maduro.

Mecanismo molecular del splicing

El corte de intrones y el empalme de exones deben ser muy exacto, pues de lo contrario un error pequeño, causaría un corrimiento del
marco de lectura del ARNm. Los intrones son clivados del transcripto primario por las RNPpn que reconocen cortas secuencias
conservadas dentro del intrón y en los límites con los exones. Estas secuencias, muy similares en todos los intrones estudiados, son:

· Secuencia GU en el extremo 5' o sitio dador

· Secuencia AG en el extremo 3' del intrón o sitio aceptor

· Secuencias conocida como sitio de ramificación que se localiza en el interior del intrón

Estas secuencias participan en las reacciones de clivado y empalme que ocurren en dos etapas:

En la primer etapa, una RNPpn reconoce al sitio dador y otra se enlaza al sitio de ramificación. El extremo 5' es clivado y ligado a un
nucleótido(A) del sitio de ramificación.

En la segunda etapa, se da el reconocimiento del extremo 3’ por parte de otra RNPpn y se produce el corte en el extremo 3' del
intrón, seguido por el empalme de los dos exones. Así se libera el ARNm maduro del espliceosoma. El intrón queda eliminado en forma
de lazo y será degradado posteriormente en el núcleo.
 Fig. 11.12 - Acción del espliceosoma

Como citáramos anteriormente, la presencia del capuchón en el extremo 5' es requerida para que las RNPpn trabajen, no
así la cola poli A.

3- Los ARNm maduros son monocistrónicos, es decir el sector codificador dicta la secuencia para una sola cadena
polipeptídica.

Fig. 11.13 - Estructura de la molécula de ARNm maduro eucariota

ARNm PROCARIOTA

1-Los ARNm procariotas presentan las secuencias codificadoras continuas, pues carecen de intrones .

2-No sufren modificaciones post-transcripcionales.

3-Muchos ARNm procariotas son policistrónicos, es decir que una sola molécula de ARNm contiene información para
varias proteínas. Este ARNm contiene codones para la terminación y para la iniciación de la traducción entre las
secciones codificadoras de proteínas, de modo que se traduce como varias moléculas de proteína distintas.
 Fig. 11.14 - Estructura de la molécula de ARNm procariota

ARNt (TRANSFERENCIA)

Los ARNt son moléculas "adaptadoras" ya que interactúan por un lado con la cadena polinucleotídica (ARNm) y por el
otro con los aminoácidos que formarán parte de la cadena polipeptídica, así alinean a los aminoácidos siguiendo el orden
de los codones del ARNm.

Cada ARN t es una molécula de 70 a 93 ribonucléotidos. Enlaces puente hidrógeno entre sus bases repliegan la molécula
dando origen a una disposición espacial en forma de trébol (Fig.11.15). Cada brazo presenta una zona de doble cadena y
un asa o bucle de cadena simple sin apareamiento de bases. Interacciones posteriores doblan la estructura de trébol
formando una "ele".

¿Por qué existen 64 codones y aproximadamente 31 ARNt, si en la naturaleza hay 20 aminoácidos ?

Existen 64 combinaciones posibles en que las 4 bases pueden ordenarse en tripletes o codones. De ellos, 3 son codones stop. Los 61
tipos restantes codifican para los 20 aminoácidos, existiendo para varios de ellos codones sinónimos (ver tabla 11.2).

Los anticodones de los ARNt reconocen a los codones del ARNm, sin embargo no hay 61 tipos distintos de ARNt porque no se requiere
la complementaridad exacta entre los 3 nucleótidos del codón y el anticodón.

En muchos casos, mientras coincidan las 2 primeras bases del codón, hay suficiente "balanceo"en la tercera posición para permitir el
acoplamiento con más de un tipo de nucleótido en el anticodón, de manera que existen aproximadamente 31 tipos de ARNt.

Por ejemplo el aminoácido fenilalanina es codificado por dos codones sinónimo: UUU / UUC. Sin embargo un solo
anticodón AAG puede complementarse indistintamente con UUU y UUC, realizando el trabajo de llevar a la fenilalanina
al ribosoma para ser incorporada a la cadena polipeptídica en formación .

Todos los ARNt presentan un porcentaje significativo de bases poco frecuentes que surgen por modificación post-
transcripcional de los cuatro ribonucleótidos estándar A, G, C y U (Fig. 11.16).
 Fig. 11.15 - Estructura del ARNt

Fig. 11.16 - Bases raras en el ARNt

En esta molécula se distinguen básicamente dos extremos:

En el extremo 3' o extremo aceptor de la molécula se encuentra el trinucleótido CCA que representa el sitio de unión
donde se liga el aminoácido. Esta unión es catalizada por una enzima aminoacil ARNt sintetasa específica y apropiada
para cada uno de los 20 aminoácidos.

En el otro extremo de la "ele" se localiza un triplete de nucleótidos conocido como anticodón, cuya secuencia varía en
cada tipo de ARNt. Cada anticodón es complementario de un codón del ARNm, aunque podría acoplarse a más de un codón
(sinónimo).

Por lo hasta aquí expuesto, podemos concluir que el ARNt debe poseer varias propiedades específicas:

· Debe ser reconocido por una aminoacil ARNt sintetasa que lo una al aminoácido correcto.

· Debe tener una región que actúe como sitio de unión para el aminoácido.

· Debe tener una secuencia complementaria (anticodón) específica para el codón del ARNm correcto.

Las modificaciones que sufren los pre-ARNt son semejantes en procariotas y en eucariotas en cuanto en ambos se
producen escisiones y modificaciones químicas, por ejemplo se elimina un dinucleótido 3' del precursor y se agrega el
triplete CCA a los ARNt que no poseen todavía esta secuencia terminal. También aparecen bases raras (Fig.11.16) por
modificación enzimática de nucleótidos estándar del ARNt precursor.

Algunos genes para ARNt presentan un intrón que interrumpe la secuencia codificadora, él cual es removido post-
transcripción. (Fig.11.17)

Fig. 11.17 - Intrón en el ARNt

ARNr (RIBOSÓMICO)

Los ARNr, junto a proteínas, son los componentes de los RIBOSOMAS. Los ribosomas y los ARNt intervienen en la
traducción de la información codificada en el ARNm por lo cual los primeros son considerados fábricas de proteínas.

Cada ribosoma consta de dos subunidades: la subunidad MAYOR y la subunidad MENOR (Fig. 11.18)

Fig. 11.18 - Modelo tridimensional del ribosoma bacteriano visto desde distintos ángulos

La subunidad mayor contiene una depresión en una de sus superficies, en la cual se ajusta la subunidad menor. El ARNm
se inserta en el surco formado entre las superficies de contacto de las subunidades. (Fig. 11.19).

Dentro de cada ribosoma existen tres huecos llamados sitios A (AMINOACÍDICO), P (PEPTIDÍLICO) y E (EXIT), para
el ingreso de los ARNt unidos a sus correspondientes aminoácidos. (Fig. 11.20)
 Fig. 11.19- Modelo de ribosoma que representa la ubicación tentativa del ARNm y de la proteína naciente

Fig. 11.20- Modelo esquemático del ribosoma y sus sitios A, P y E.

Las subunidades ribosómicas trabajan conjuntamente para la síntesis proteica. La subunidad menor aloja al ARNm sobre
el cual se acomodan los ARNt para que puedan unirse los aminoácidos que transportan.

La subunidad mayor cataliza la unión peptídica de los aminoácidos gracias a la acción de la peptidil transferasa ( enzima
que forma parte de la estructura de esta subunidad). [1]

Si bien cumplen idéntica función, los ribosomas procariotas y eucariotas se diferencian en su tamaño, coeficiente de
sedimentación [2] , y en el tipo y número de moléculas de ARNr y proteínas que los forman:

Fig. 11.21- Comparación de las estructuras de los ribosomas procariotas y eucariotas

Todos los ARNr procariotas y eucariotas sufren modificaciones post-transcripción.

En eucariotas los ARNr 18S; 5,8S y 28S son transcriptos de un mismo gen que codifica para un pre-ARNr 45S. La
síntesis del este transcripto primario se realiza en la zona fibrilar del nucléolo a partir de la ARN pol I. Una vez
obtenido el largo transcripto primario, se eliminan las secuencias espaciadoras(tramos de ARN inútiles para integrar la
estructura ribosómica), las que serán degradadas por enzimas. Las secuencias resultantes utilizables de ARNr (28S, 18S
y 5,8S) son metiladas y junto con ARNr 5S extranucleolar, se ensamblan a proteínas importadas del citoplasma para
conformar la subunidades ribosómicas (Fig. 11.22).

Fig. 11.22 - Procesamiento de los ARN 45S

Las subunidades ribosómicas en distintos estadios de ensamblaje, se localizan en la periferia del nucléolo, conformando
la zona granular del mismo.

Finalmente, las subunidades ribosómicas por separado y antes de completar sus respectivos ensambles, son exportadas
al citoplasma a través del complejo del poro, concluyendo el procesamiento de cada subunidad en el citosol.

Respecto del ARNr 5S no transcripto en el nucléolo, una vez sintetizado se incorpora al resto de los componentes para
conformar la subunidad mayor del ribosoma (Fig.11.23).
 Fig. 11.23 - Ensamblaje de subunidades ribosómicas

LOS ARN PEQUEÑOS

Los ARN pequeños forman complejos con proteínas específicas dando lugar a la formación de partículas
ribonucleoproteicas (RNP).

Las RNP localizadas en el núcleo se denominan RNPpn: partícula ribonucleoproteica pequeña ( sn RNP/s: small -
pequeña- /n: nuclear-RNP:ribonucleoproteica). Varios RNPpn conocidos como U1 a U6 participan en el procesamiento de
los ARNm. Estas partículas forman un complejo multienzimático denominado espliceosoma, encargado de realizar cortes
y empalmes en los ARNm transcritos primarios (splicing) .
 Las RNP localizadas en citoplasma se denominan RNPpc: partícula ribonucleoproteica pequeña citoplasmática

(scRNP/s: small/ c:cytosolic-citosol-/RNP:ribonucleoproteica). La función más conocida de cualquier RNPpc es la que

desempeña el complejo ARN /proteínas que componen la partícula de reconocimiento de la señal o SRP. Estas

partículas participan en el reconocimiento de secuencias específicas de las proteínas de secreción, membranares y

lisosomales, deteniendo su traducción hasta que el ribosoma en donde se están sintetizando se contacte con la

membrana del retículo endoplasmático granular, en donde finalizan su traducción.

EL PROCESO DE LA TRADUCCIÓN O SÍNTESIS PROTEICA

La síntesis proteica consiste en la traducción de la información codificada en la secuencia de nucleótidos del ARNm, en
la secuencia correspondiente de aminoácidos en una cadena polipeptídica.

La síntesis proteica se lleva a cabo en los RIBOSOMAS y si bien en esencia es un proceso similar en todos los
organismos, la maquinaria traduccional es más compleja en eucariotas.

La síntesis proteica incluye las siguientes etapas:

1. ACTIVACIÓN DE LOS AMINOÁCIDOS O AMINOACILACIÓN

2. TRADUCCIÓN DEL ARNm

1. ACTIVACIÓN DE LOS AMINOÁCIDOS

Antes de la traducción cada ARNt se engancha a su aminoácido específico. Esta reacción de aminoacilación es catalizada
por las enzimas aminoacil ARNt sintetasas. Existen 20 tipos distintos de enzimas, una para cada aminoácido.

El proceso de aminoacilación ocurre en dos etapas:

a- En la primera fase se utiliza la energía de la hidrólisis del ATP para unir cada aminoácido a un AMP, con un enlace de
alta energía. Esta reacción da origen a un complejo intermediario denominado aminoacil- AMP:

b- Sin abandonar la enzima, se transfiere el aminoácido del complejo aminoacil-AMP al ARNt específico, con lo cual se
origina la molécula final: AMINOACIL -ARNt
 Fig. 11.24 - Etapas de la aminoacilación

En resumen, la aminoacilación o activación de los aminoácidos tiene dos funciones :

1- proporcionar el primer paso en la traducción del mensaje genético a una secuencia

de aminoácidos ;

2- activar al aminoácido antes de incorporarlo a la proteína. El enlace entre el ARNt y el aminoácido libera al
hidrolizarse la energía necesaria para propulsar la formación del enlace peptídico durante la traducción.

Fig. 11.25- Resumen del modelo de aminoacilación

2. TRADUCCIÓN

El mecanismo por el cual se traduce el mensaje del ARNm puede describirse en tres etapas:

· Iniciación

· Elongación

· Terminación

En todas las fases se requiere la presencia de un complejo sistema de proteínas citoplasmáticas conocidas
como factores de iniciación, factores de elongación y factores de terminación respectivamente. Dichos factores son
diferentes en procariotas y eucariotas aunque sus funciones son semejantes.

INICIACIÓN DE LA TRADUCCIÓN

En esta etapa se reúnen los componentes que constituyen el complejo de iniciación, disparador de la síntesis proteica. El
complejo está compuesto por una molécula de ARNm, una subunidad mayor, una subunidad menor, el ARNt iniciador
(cargado con N-formilmetionina en procariotas y con metionina en eucariotas) y factores proteicos de iniciación (IF).
Dicho complejo comienza a formarse cuando se acoplan el ARNm y la subunidad menor del ribosoma. El ARNt iniciador
ingresa al sitio P uniéndose por complementariedad de bases al codón AUG más próximo al extremo 5’ del ARNm. Este
evento constituye una instancia crucial de la etapa de iniciación, pues garantiza que el mensaje genético se lea en sentido
5´=> 3´en el marco de lectura correcto para el resto de los codones que contenga la región codificadora del ARNm. La
incorporación posterior de la subunidad mayor cierra el complejo de iniciación, originando un ribosoma completo y
funcional.
Como todas las cadenas polipeptídicas son iniciadas por un ARNt iniciador, todas las proteínas recién sintetizadas tienen
N-formil-metionina (o metionina en eucariotas) como residuo amino terminal. En ambos casos este aminoácido inicial
puede ser eliminado por una aminopeptidasa específica, aunque a veces se mantiene en la proteína final.

Fig. 11.26 - Fases de la etapa de iniciación de la síntesis proteica

En eucariotas, en cuanto se ha reconocido el codón AUG en el extremo 5' del mensaje, ningún otro codón AUG del ARNm
será utilizado como lugar de iniciación, por lo tanto por cada molécula de ARNm se sintetiza una sola cadena proteica.
Los ARNm eucariotas son monocistrónicos (Fig. 11.13 ).
En procariotas, dado que la secuencia de reconocimiento entre el ARNm y el ARNr de la subunidad menor puede
aparecer varias veces a lo largo del mensaje, pueden originarse varias cadenas polipeptídicas a partir de un ARNm. La
mayoría de los ARNm procariotas son policistrónicos (Fig. 11.14 ).

En conclusión, tres clases de interacciones determinan el inicio de la síntesis proteica:

- Reconocimiento del codón de iniciación AUG en la subunidad menor del ribosoma
- Acoplamiento de bases del codón AUG con el ARNt iniciador
- Acoplamiento de la subunidad mayor del ribosoma cerrando el complejo de iniciación
Las principales diferencias en la iniciación de la traducción en procariotas y eucariotas son:

Eucariotas Procariotas

Modelo de selección: Modelo de emparejamiento:

La subunidad menor se desliza sobre el ARNm El acoplamiento de bases codón-anticodón iniciador se

hasta localizar al codón de iniciación. produciría por un emparejamiento de bases que preceden a
AUG del ARNm con el extremo 3' del ARNr 16S de la
subunidad menor.

El ARNt iniciador transporta metionina. El ARNt iniciador transporta metionina formilada (N-
formilmetionina).

Se requiere la presencia de cap en el extremo No existe cap.

5'.

La secuencia de iniciación aparece una vez a lo La secuencia de iniciación puede aparecer varias veces a lo
largo del mensaje (ARNm monocistrónico). largo del mensaje(ARNm policistrónico).

Participan factores de iniciación eIF Participan factores de iniciación IF (I=iniciación; F=factor)

específicos de este tipo celular.
(e= eucariota;I=iniciación;F=factor) específicos
de este tipo celular

ELONGACIÓN DE LA CADENA POLIPEPTÍDICA

El proceso de elongación o crecimiento de la proteína se inicia cuando una nueva molécula de aminoacil~ARNt ingresa al
sitio A vacante del ribosoma (adyacente al sitio P que está ocupado) acoplándose por complementariedad de bases al
segundo codón del ARNm expuesto en ese lugar. Esta reacción requiere la intervención de un factor de elongación y
GTP.

Fig. 11.27a- Ingreso del ARNt al sitio P durante la etapa de elongación.

El aminoácido iniciador se desacopla del ARNt del sitio P, liberando energía que se utiliza en la formación del enlace
peptídico entre los dos aminoácidos alineados (reaccionan el carboxilo del primer aminoácido con el grupo amino del
segundo aminoácido). Esta reacción es catalizada por una peptidil transferasa, ribozima integrante de la subunidad
mayor. Como consecuencia de esta reacción, el ARNt iniciador del sitio P queda sin aminoácido y el dipéptido resultante
queda enganchado al ARNt del sitio A (peptidil ARNt).
 Fig. 11.27b - Formación de la unión peptídica durante la etapa de elongación.

El nuevo peptidil ARNt del lugar A es translocado al lugar P cuando el ribosoma se desplaza tres nucleótidos a lo largo de
la molécula de ARNm. Esta etapa requiere energía y la presencia de un factor de elongación.
Como parte del proceso de translocación, la molécula libre de ARNt que se ha generado en el sitio P se libera del
ribosoma, puesto que su lugar pasa a ser ocupado por el peptidil ARNt. El sitio de salida del ARNt descargado se
denomina “E” (de “exit” o salida). Así el sitio A, que se halla desocupado, puede aceptar una nueva molécula de
aminoacil~ARNt, con lo cual se vuelven a iniciar los pasos anteriormente analizados.

Fig. 11.27c - Translocación del ribosoma y elongación de la cadena peptídica.

Durante la elongación, como durante la aminoacilación, se ponen en marcha mecanismos correctores. En esta etapa se
garantiza que el apareamiento de bases codón-anticodón sea correcto. Una equivocación en la correspondencia de
nucleótidos daría como resultado la incorporación del aminoácido incorrecto. En este punto de control participa un
factor de elongación que forma un complejo con el aminoacil ARNt y el GTP; este complejo y no el ARNt libre es el que
se une al codón correspondiente en el ARNm. Recién después del correcto apareamiento codón-anticodón, el factor se
disocia posibilitando la unión del aminoácido a la cadena polipeptídica. Este retraso en la unión del aminoácido posibilita
que se elimine el ARNt incorrecto, antes que el residuo aminoacídico que transporta pueda enlazarse a la proteína en
crecimiento.

Resumiendo, el ciclo de elongación de la síntesis se caracteriza por:

- La unión del aminoacil-ARNt (reconocido por el codón)
- La formación del enlace peptídico
- La translocación del ribosoma

TERMINACIÓN DE LA SÍNTESIS PROTEICA

La finalización de la síntesis proteica ocurre ante la llegada al sitio A del ribosoma, de uno de los tres codones stop o de
terminación: UGA, UAG, UAA. Éstos son reconocidos por un factor de terminación o liberación. El factor de liberación
se une al codón stop, estimulando la hidrólisis del enlace entre la cadena polipeptídica y el ARNt ubicado en el sitio P.
Como consecuencia de esta reacción el polipéptido se desacopla del ARNt, liberándose en el citoplasma. El ARNm se
separa del ribosoma y se disocian las dos subunidades, las cuales podrán volverse a ensamblar sobre otra molécula de
ARNm reiniciándose el proceso de traducción.

Fig. 11.28 - La etapa de terminación de la traducción

Los acontecimientos que caracterizan la terminación de la síntesis son:
- El reconocimiento del codón stop
- La disociación de las subunidades ribosómicas, el ARNm y la cadena polipeptídica.

EL COSTO ENERGÉTICO DE LA SÍNTESIS PROTEICA

La síntesis proteíca requiere más energía que cualquier otro proceso anabólico. Para formar cada enlace peptídico se
consumen en total 1 ATP y 2 GTP, los que aportan cuatro enlaces de alta energía: - dos en la activación del aminoácido;
- el tercero en la unión del aminoacil ~ARNt a la subunidad menor del ribosoma;
- el cuarto en la translocación del ribosoma. Consideran éste cálculo, la síntesis de una cadena polipeptídica de 250
aminoácidos consume un total de 1.000 enlaces de alta energía. Si a esto sumamos el gasto que implica la transcripción
de un ARNm que contenga como mínimo 250 codones, el costo energético se potencia aún más.

POLIRRIBOSOMAS:

Una molécula de ARNm dirige la síntesis simultánea de varias moléculas de una misma proteína. En cuanto un ribosoma ha
traducido una secuencia de aminoácidos suficientemente larga como para dejar libre el extremo 5' del ARNm, un nuevo
ribosoma puede iniciar la traducción. Al grupo de ribosomas que traducen simultáneamente el mismo mensaje se lo
denomina polirribosoma o polisoma. Cada ribosoma en esta unidad estructural opera independientemente sintetizando
una molécula de la misma cadena polipeptídica en distintos grados de crecimiento.

Fig. 11.29 - Esquema de un polirribosoma

DIFERENCIAS EN LA TRADUCCIÓN EN PROCARIOTAS Y EUCARIOTAS

En eucariotas la envoltura nuclear y la maduración que sufren los ARNm impiden su traducción inmediata. El ARNm es
"leído" después de que haya abandonado el núcleo a través de los poros nucleares. La traducción es por lo tanto post-
transcripcional.

Fig. 11.30 - Transcripción, maduración y traducción en eucariotas

 Fig. 11.31 - Transcripción y traducción en procariotas

En procariotas la traducción es simultánea a la transcripción, esto es, mientras se está terminando de transcribir el
extremo 3', el extremo 5' libre del ARNm se asocia a un ribosoma y al ARNt iniciador comenzando la traducción.

LA FIDELIDAD DE LA TRADUCCIÓN

La precisión en la incorporación de los aminoácidos en la secuencia apropiada durante la síntesis proteica, depende
básicamente de dos mecanismos: La unión del aminoácido a su ARNt correspondiente o aminoacilación. En esta etapa la
actividad correctora de las enzimas aminoacil - ARNt sintetasa minimizan los errores en la selección del aminoácido
correcto. Muchas enzimas tienen dos sitios activos distintos, uno que lleva a cabo la reacción de carga, y otro que
reconoce un aminoácido incorrecto que se haya colocado en el ARNt y lo libera por hidrólisis. El apareamiento de bases
codón - anticodón, donde una equivocación en la correspondencia de nucleótidos daría como resultado la incorporación
del aminoácido incorrecto. En este punto de control participa un factor de elongación que forma un complejo con el
aminoacil ARNt y el GTP; este complejo y no el ARNt libre es el que se une al codón correspondiente en el ARNm. Recién
después del correcto apareamiento codón - anticodón, el factor se disocia posibilitando la unión del aminoácido a la
cadena polipeptídica. Este retraso en la unión del aminoácido posibilita que se elimine el ARNt incorrecto, antes que el
residuo aminoacídico que transporta pueda enlazarse a la proteína en crecimiento.

REGULACIÓN DE LA EXPRESIÓN GENÉTICA

Regulación en procariotas: el operón

Las células procariotas pueden regular de varias formas la cantidad de proteínas que van a ser sintetizadas. No obstante
se considera que la expresión génica está regulada principalmente a nivel de la transcripción .La mayoría de los
procariotas, tales como Esclerichia coli, están expuestos a una gran variedad de condiciones en su medio y exhiben una
notable capacidad para adaptarse a las mismas, esto es consecuencia de una gran habilidad para regular la expresión de
genes específicos que codifican aquellas moléculas que responden a los estímulos de su entorno. Así, esta capacidad de
un organismo para regular la expresión de sus genes incrementa su aptitud para crecer y dejar progenie en cualquier
tipo de condiciones [Link] síntesis de transcriptos de genes y proteínas requiere un considerable gasto de
energía. Si se "apaga" la expresión de estos genes (cuando sus productos no son necesarios). Un organismo puede evitar
gastar energía o utilizarla en vías metabólicas de moléculas que maximicen la tasa de crecimiento en su medio
circundante.¿Cuáles son los mecanismos por los cuales estos organismos regulan la expresión de genes en respuesta a
cambios en el ambiente?En bacterias, los genes que codifican para la síntesis de enzimas que participan en una vía
metabólica, se agrupan en el cromosoma en un complejo denominado OPERÓN. Todos los genes del operón actúan como
unidades coordinadas mediante un mecanismo de control descripto por primera vez por Jacob y Monod en [Link]
operón típico consta de: · Genes estructurales :son los genes que codifican para las enzimas de la vía metabólica. Tienen
la particularidad de situarse próximos entre sí, de manera tal que son transcriptos en una sola molécula de ARNm
policistrónico. Cuando éste se traduce se obtienen las diferentes enzimas de la vía metabólica. · Promotor: como
analizáramos anteriormente, es la secuencia de nucleótidos del ADN en donde se une la ARN polimerasa para iniciar la
transcripción. · Operador : es una secuencia de nucleótidos que se interpone entre el promotor y los genes
estructurales, en donde se inserta una proteína reguladora denominada proteína [Link] proteína represora es
codificada por el gen regulador, localizado en una región distinta del cromosoma bacteriano, aguas arriba del sitio
operador.

Fig. 11.32 - Esquema de los componentes de un operón

Uno de los ejemplos de operón más conocido es el operón lac. Este es un conjunto de genes que intervienen en la
utilización de la lactosa, por parte de la bacteria, como fuente de energía. Las tres enzimas que intervienen en la vía de
degradación de la lactosa son: la enzima permeasa , la beta galactosidadsa y la [Link] operón lac está
formado por tres genes estructurales dispuestos en serie(z, y, a). La trasncripción de estos genes da origen a una
molécula de ARNm que codifica para la tres enzimas que participan de la misma vía metabó[Link] ausencia de lactosa el
represor se enlaza al operador e impide a la ARN polimerasa insertarse en el sitio promotor con lo cual se interrumpe la
transcripción (Fig. 11.33) .El represor ejerce su influencia mediante control negativo, puesto su interacción con el ADN
inhibe la expresión del operón.

Fig. 11.33 - El operón lac inhibido

En presencia de lactosa, este disacárido se une a la proteína represora, provocándole un cambio conformacional e
incapacitándola para unirse al ADN del operador. En estas condiciones, se transcriben los genes estructurales,
apareciendo en el citosol las enzimas que degradarán a la lactosa. En este ejemplo de operón el represor solo puede
unirse al operador en ausencia del inductor (Fig.11.34).

Fig. 11.34 - El operón lac activado

El operón lac es un ejemplo de operón inducible, es decir aquel en el cual la presencia de una sustancia específica (en
este caso la lactosa) induce la transcripción de los genes [Link] operón lac también se encuentra bajo control
positivo. Este efecto se da cuando en el medio hay glucosa, así la bacteria metaboliza este monosacárido ignorando
cualquier otra fuente de carbono disponible. Cuanto menor es la concentración de glucosa en el medio, mayor es la
concentración de AMPc , el cual tiene influencia en el "encendido" del operón [Link] AMPc actúa uniéndose a una proteína
fijadora de AMPc denominada CAP (proteína activadora de catabolitos). Cuando la concentración de este complejo es
alta (pues el medio contiene poca glucosa), el CAP-AMPc se fija a un sitio específico del promotor lac, aumentando la
afinidad de la región promotora para la ARN polimerasa, lo que estimula la transcripción del operón (Fig. 11.35).

Fig. 11.35 - Control positivo CAP-AMPc

Por lo expuesto concluimos que:

Para que se exprese el operón lac deben darse dos condiciones en el medio: que esté presente la lactosa y que la
concentración intracelular de glucosa sea baja.

Existen otros tipos de operones en bacterias, como por ejemplo el operón triptofano, el que se caracteriza por ser
un operón [Link] operón triptofano consiste en cinco genes estructurales que codifican para las enzimas
involucradas en la biosíntesis del aminoácido triptofano. Dichos genes se agrupan en una unidad de transcripción con un
solo promotor y un operador. Un gen regulador se localiza fuera del operón y codifica para la síntesis de una proteína
represora. Esta proteína difiere del represor lac en que se sintetiza en forma inactiva siendo incapaz de unirse al
[Link] ausencia de triptófano, la ARN polimerasa se une al promotor y transcribe los genes estructurales en un
ARNm policistrónico. Esto es posible pues el represor inactivo no logra unirse por si solo al operador (Fig. 11.36).
 Fig. 11.36 - El operón triptófano activado

En presencia de triptófano en el medio circundante, el aminoácido (molécula denominada co-represor) se une a la

proteína represora constituyendo el complejo represor/co-represor. Dicho complejo reconoce a la zona operadora a la
que se fija, impidiendo a la ARN polimerasa transcribir los genes estructurales (Fig. 11.37).

Fig. 11.37 - El operón triptófano inhibido

Con este mecanismo de regulación la bacteria ahorra energía sintetizando triptófano solamente cuando esta sustancia
esencial en su crecimiento, está ausente en el medio ambiente.

COMPARACIÓN ENTRE EL OPERÓN LAC Y EL OPERÓN TRIPTÓFANO

OPERÓN LAC OPERÓN TRIPTÓFANO

Operón inducible, se expresa en presencia de Operón reprimible, se expresa en ausencia de

lactosa. triptófano.

La lactosa es el inductor El triptófano es el co-represor

El represor se sintetiza en forma activa. El represor se sintetiza en forma inactiva.

Actúa solo Actúa en presencia del co-represor

Sus enzima participan en un vía catabólica Sus enzima participan en una vía anabólica

REGULACIÓN EN EUCARIOTAS

Las células eucariotas presentan estrategias más complejas que las bacterias para regular la actividad de sus genes. Los
organismos eucariotas pluricelulares poseen el mismo genoma en todas sus células, sin embargo los distintos tipos
celulares se diferencian entre sí porque fabrican y acumulan distintos ARNm y por lo tanto distintas proteínas . ¿Por qué
si el gen para la hemoglobina está presente en el genoma de una célula epitelial, no se encuentra esta proteína ni su
ARNm en el citoplasma de este tipo celular?. ¿Cómo logran las células epiteliales mantener "apagado" el gen para la
hemoglobina? .Para responder a estas preguntas debemos tener en cuenta no solo que el genoma eucariota es más
complejo que el procariota, sino que existen más niveles en dónde ejercer el control de la expresión génica. Cada etapa
en el flujo de información propuesto por el dogma de la biología molecular:

"ADN ARN PROTEÍNAS" puede ser regulada.

Si bien los mecanismos más importantes de control son los que actúan a nivel transcripcional, es importante
destacar que pueden producirse regulaciones durante el procesamiento o maduración del ARNm o bien controlando: su
pasaje a citoplasma o su supervivencia en el citosol. En algunos casos los controles actúan a nivel traduccional o
regulando la actividad de la proteína.

Desarrollaremos particularmente, aquellos mecanismos que operan a nivel transcripcional es decir en el comienzo de la
síntesis del ARNm ya que actúan sobre las secuencias reguladoras del gen.

Fig. 11.38 - Niveles de control de la expresión génica

CONTROL TRANSCRIPCIONAL

A) Los factores de transcripción y la expresión genética: Para la transcripción de un gen eucariota se requiere:

· Una secuencia promotora o promotor: secuencias de nucleótidos necesarias para la fijación de la ARN polimerasa.

· Secuencias reguladoras: existen dos tipos

Intensificadoras (del inglés, enhancers):secuencias que estimulan la transcripción y cuya localización puede ser a miles
de nucleótidos de distancia "río arriba o abajo" del [Link] (del inglés silencers) : secuencias que
inhiben la transcripción. También pueden hallarse muy distantes del promotor.

· Factores basales de transcripción: complejo proteico que interacciona con el sitio promotor. Son esenciales para la
transcripción pero no pueden aumentar o disminuir su ritmo. De esto se encargan: · Factores específicos de la
transcripción: complejo de proteínas reguladoras que pueden ser activadoras o represoras.

Proteínas activadoras : interaccionan con las secuencias intensificadoras del [Link]ínas represoras: interactúan con
las secuencias silenciadoras del gen.

Estas proteínas reguladoras interactúan con regiones específicas del surco mayor del ADN que corresponden a las
zonas reguladoras del gen. La geometría de la molécula, y los diseños característicos de los factores de transcripción
(Fig. 11.39), posibilitan dichas interacciones las que se producen por uniones no covalentes del tipo puente hidrógeno,
uniones iónicas e hidrofóbicas.
 Fig. 11.39 - Ejemplos de diseños de factores de transcripción

Para comprender el mecanismo por el cual los factores de transcripción regulan la expresión de un gen eucariota,
consideremos una analogía propuesta por Robert Tjian3 : " si el promotor fuese el encendido de un coche, los
intensificadores serían el acelerador y los silenciadores los frenos, así las proteínas activadoras pisarían el acelerador y
las represoras pisarían el freno". Entonces, la transcripción de un gen depende de la actividad conjunta de los factores
de transcripción unidos a las secuencias reguladoras.

Cada gen tiene una combinación particular de intensificadores y silenciadores. Dos genes distintos pueden compartir
idénticas secuencias intensificadoras y silenciadoras, pero no existen dos genes que posean la misma combinación de
estas secuencias reguladoras.

Las diferencias entre los distintos tipos celulares que comparten el mismo genoma se deben a que cada célula
transcribe y expresa distintas proteínas. Esto es consecuencia de que cada tipo celular contiene conjuntos de
proteínas reguladoras de la expresión de diferentes genes.¿Cómo logran los activadores y silenciadores regular la
transcripción si se encuentran a mucha distancia del promotor del gen ?La unión de los factores al sitio promotor
provoca un cambio conformacional que pliega al ADN entre las secuencias reguladoras y promotora, formando un asa.
Este plegamiento permite contactar a los factores específicos ,unidos a las regiones reguladoras con una o más
proteínas "blanco" asociadas al complejo de transcripción basal. Cuando esto ocurre, se estimula la transcripción por
parte de la ARN polimerasa la que se desplaza copiando la región codificadora del [Link]í como los factores de
transcripción se asocian a las secuencias reguladoras, también se disocian. Dice Alberto Kornblihtt4: “Debilidad,
reversibilidad y especificidad de unión son características primordiales de las interacciones entre moléculas para
producir efectos biológicos. Una complicada red de interacciones entre macromoléculas, principalmente del tipo ADN-
proteína y proteína-proteína, es la que enciende diferencialmente los genes en los distintos tipos celulares”.
 Fig. 11.40 - Interacción entre los factores de transcripción basales y específicos

B) La estructura de la cromatina y la expresión genética

En cada tipo celular solo se expresan determinados conjuntos de genes mientras el resto del genoma se mantiene
"silencioso". Se supone que el grado de compactación de la cromatina desempeña un importante papel en la expresión
gé[Link] dos tipos de cromatina: la eucromatina, transcripcionalmente activa, más desplegada y la
heterocromatina, transcripcionalmente inactiva, más condensada. La transcripción solo ocurre cuando el ADN está
desplegado. Por lo tanto, las regiones de cromatina condensada y dispersa varían según el tipo celular, reflejando,
según se cree, la síntesis de proteínas diferentes por distintos tipos celulares, es decir: el gen para la
hemoglobina estaría en estado heterocromático en la célula epitelial y por lo tanto no disponible para su
expresión.

C) El grado de metilación y la expresión genética

En algunos eucariotas la presencia de grupos metilo (CH 3) en el gen afecta su expresión. La metilación ocurre en la
citosinas que forman parte del dinucleótido -CG- dentro de secuencias específicas, con frecuencia localizadas dentro o
próximas a la zona reguladora del gen. No todos los lugares CG están metilados. La mayoría de los genes que no se
expresan están metilados, mientras que en otra célula en donde esos genes se expresan se advierte una
disminución de sus niveles de metilación. Por ejemplo, en las células de mujeres, el cromosoma X condensado (el
corpúsculo de Barr) presenta alto grado de metilación en los CG de los promotores de los genes que porta, inactivando
así esta parte del genoma.

CONTROL A NIVEL DEL PROCESAMIENTO DEL ARNm

Se han descubierto formas de regulación que implican el procesamiento del ARNm. En algunos casos un mismo gen
produce una proteína en un tejido y un tipo distinto de producto proteico en otro [Link] mecanismo por el cual puede
obtenerse de un mismo gen dos proteínas relacionadas se denomina empalme alternativo. Este proceso consiste en unir
covalentemente diferentes combinaciones de exones del pre-ARNm obteniéndose dos ARNm maduros con distinta
información y por lo tanto dos productos proteicos que difieren en uno o más tramos de su secuencia aminoacídica.
 Fig. 11.41 - Empalme alternativo

MECANISMOS DE CONTROL A NIVEL DE LA TRADUCCIÓN

Entre los ejemplos de mecanismos regulatorios de la traducción o síntesis proteica, explicaremos cómo se modifica la
tasa de traducción del ARNm que codifica para la proteína ferritina. Esta proteína funciona capturando átomos de
hierro del medio intracelular, ya que en estado libre, el hierro es tóxico para la cé[Link] traducción del ARNm para la
ferritina es regulada por una proteína represora, la aconitasa, cuya actividad depende de la concentración de hierro
libre en el [Link] la concentración intracelular de hierro es baja, la aconitasa se une a una secuencia nucleotídica
específica en el ARNm, llamada elemento de respuesta al hierro (ERH), provocando un plegamiento del mensaje a modo
de bucle, que bloquea la traducción (Fig.11.42).Cuando aumenta la concentración de hierro en el citosol, éste se asocia a
la aconitasa, la cual cambia su conformación y pierde afinidad por el ERH. Una vez liberado el ARNm, comienza la
síntesis de ferritina y su asociación con el hierro [Link] mecanismo importante es el control de la
estabilidad del ARNm. Se conocen algunos casos en donde la integridad de la cola poli A es determinante para la
supervivencia del mensaje. El acortamiento gradual de la cadena de adeninas por acción de nucleasas, reduce en algunos
casos la vida media del ARNm.

Fig. 11.42 - Control de la traducción del ARNm de la ferritina

MECANISMOS DE CONTROL DESPUÉS DE LA TRADUCCIÓN

La vida media de las proteínas puede ser considerada una forma indirecta de la expresión gené[Link] factores son
determinantes de la vida media de una proteína citosólica: su correcto plegamiento y la secuencia aminoacídica de su
extremo [Link] el momento que una proteína emerge del ribosoma citosólico, chaperonas moleculares de
diversos tipos se unen a la cadena en síntesis, ayudándola a adquirir la conformación nativa. Esta unión transitoria evita
que las proteínas recién sintetizadas alcancen espontáneamente un estado de agregación [Link] del
extremo aminoterminal, existen secuencias aminoacídicas estabilizadoras, que asegurarían una vida media prolongada y
otras desestabilizadoras, las cuales favorecerían la marcación de las proteínas en dicho extremo. Tal marcación las
conduciría a su degradación. Esto es conocido como la regla del [Link] una proteína adquiere un plegamiento
anómalo, o se ha desnaturalizado, o bien su extremo aminoterminal es desestabilizante, entonces ésta pasa a un proceso
de ubiquitinización. La ubiquitinización consiste en la adición de varias moléculas de un polipéptido básico de 76
aminoácidos, muy conservado evolutivamente: la [Link] vía de la ubiquitina consta de varios pasos mediados por
enzimas, que implican gasto de energía (ATP).

Fig. 11.43a - Ubiquitinización de proteínas mal plegadas y degradación en el proteosoma

Otra vía compite con la ubiquitinización. Las proteínas desnaturalizadas son conducidas por chaperonas moleculares
hasta una chaperona oligomérica o chaperonina. Éstas pueden recuperar el plegamiento nativo de la proteína, en tanto se
unan a ella en una etapa previa o temprana de la ubiquitinización. En caso contrario, la proteína ubiquitinizada, será
captada por un complejo enzimático denominado proteasoma.

Fig. 11.43b - Acción de las chaperonas sobre las proteínas citosólicas

Los proteasomas están formados por más de una docena de proteasas, que se organizan en cuatro anillos apilados que
delimitan un cámara central. En ambos extremos de este canal, se localizan sendos complejos regulatorios, formados
por diferentes ATPasas, y varios sitios de reconocimiento de la ubiquitina.

La proteína ubiquitinizada es reconocida por la partícula regulatoria del proteasoma perdiendo su plegamiento por
acción de las ATPasas, con gasto de energía. La proteína desenrollada es translocada dentro de la cámara central, donde
las proteasas la degradan. Se producen oligopéptidos de aproximadamente 8 aminoácidos de longitud. La partícula
regulatoria libera la ubiquitina para ser nuevamente utilizada. Tanto la actividad de las chaperonas como la de los
proteasomas, aunque contrarias en su acción, garantizan la calidad de las proteínas presentes en el citosol.

RESUMEN DE LOS MECANISMOS DE REGULACIÓN GÉNICA EN EUCARIOTAS

Control transcripcional A- Factores de transcripciónB- Grado de condensación de

la cromatina

C- Grado de metilación

Control procesamiento del ARNm Empalme alternativo

Control transporte del ARNm Mecanismos que determinan si el ARNm maduro sale o no a
citosol

Control traduccional Mecanismos que determinan si el ARNm presente en el

citosol es o no traducido

Control de la degradación del Mecanismos que determinan la supervivencia del ARNm en

ARNm el citosol

Control de la actividad proteica Mecanismos que determinan la activación o desactivación

 de una proteína, como así también el tiempo de
supervivencia de la misma.

SEMANA 13
MARCO TEÓRICO:
Las células de todos los organismos y microorganismos portan información genética mucho más abundante
que la que utilizarán en un momento dado. Las células poseen mecanismos que les permiten la regulación
precisa de su información genética y expresan los genes solo cuando es necesario. La expresión génica en
eucariontes implica muchos pasos y casi todos pueden regularse. Diferentes genes se regulan en diferentes
puntos y no es poco frecuente que un gen (particularmente uno importante) sea regulado en múltiples pasos.

CONTROL DE LA EXPRESION GÉNICA EN CÉLULAS EUCARIOTAS

La regulacion de la expresion de los genes se establece de la necesidad de

controlar la actividad de las enzimas o de las proteinas en general, en
momentos precisos de la vida de la celula.

Los controles al nivel transcripcional operan mediante la determinacion de que

genes se transcriben y con que frecuencia; los controles al nivel de
procesamiento operan para determinar que parte de la transcripcion primaria
se convierte en parte del grupo de RNAm celulares,
y el control al nivel traduccional regula si un RNAm particular
se transcribe o no y, si es asi, que tan a menudo y por cuanto tiempo.

CONTROL AL NIVEL TRANSCRIPCIONAL

La transcripcion diferencial de genes es el mecanismo aislado mas importante por

el que las celulas eucariotas sintetizan proteinas selectas en cualquier momento
dado.
Genes diferentes se expresan mediante celulas en etapas distintas del desarrollo embrionario, celulas en tejidos diversos o celulas expuestas a diversos
tipos de estimulos.

Funcion de los factores de transcripcion en la regulacion de la expresion génica

El control transcripcional es realizado por proteinas llamadas FACTORES TRANSCRIPCIONALES.

Estas proteinas pueden dividirse en dos clases funcionales:

factores transcripcionales generales que se unen a los sitios promotores nucleares en relacion con la RNA polimerasa, y factores transcripcionales
especificos de secuencia que se unen a varios sitios reguladores de genes particulares.

Este ultimo grupo de factores transcripcionales puede actuar como activadores

transcripcionales que estimulan la transcripcion de genes adyacentes o como represores
transcripcionales que inhiben la transcripcion.

Las estructuras relacionadas mas frecuentes que se observan en las proteínas que se unen
al DNA eucariota comprenden los dedos de zinc, la helice-asa-helice y la cremallera (o
zipper) de leucina.

LA ESTRUCTURA DEDOS DE ZINC: La clase más grande de factores transcripcionales de

mamíferos contiene una estructura que se conoce como dedos de zinc.
En la mayor parte de los casos el ion zinc de cada dedo se coordina con dos cisteinas y
dos histidinas.
Los dos residuos de cisteina son parte de una hoja β plegada de dos cadenas en un lado
del dedo de zinc y los dos residuos de histidina forman parte de una hélice α corta en el
lado opuesto del dedo.
 Factores transcripcionales que se unen por medio de una estructura dedo de zinc.

(a) Modelo del complejo entre una proteina con 5 dedos de zinc y DNA.

Cada dedo de zinc es de color diferente; el DNA se muestra en azul.

Los cilindros y los listones destacan las helices α y las hojas β respectivamente.

El recuadro muestra la estructura de un solo dedo de zinc. (b) Modelo de TFIIIA unido
al DNA del gen 5S RNA.

ESTRUCTURA HELICE-ASA-HELICE (HLH)

Se caracteriza por dos segmentos de helice α separados por un asa intermedia.

A menudo el dominio HLH es precedido por un grupo de aminoacidos muy basicos cuyas cargas positivas de las cadenas laterales hacen contacto con el
DNA y determinan la especificidad de secuencia del factor transcripcional.

Las proteinas con este HLH basico (o bHLH) siempre se presentan como
dimeros.

Genes distintos suelen codificar las dos subunidades del dimero, lo que
determina que la proteina sea un heterodimero.

Un factor transcripcional con una estructura helice-asa-

helice (bHLH).
(a) MyoD, un factor transcripcional dimerico que participa en la
activacion de la diferenciacion
muscular, es una proteina bHLH que se une al DNA por una
asociacion de su region basica (en rojo).
La region helice-asa-helice de cada monomero de MyoD se
muestra en marron claro.
(b) Esquema del complejo dimerico MyoD en la misma
orientacion que en la parte a.

LA ESTRUCTURA CREMALLERA DE LEUCINA

Las leucinas estan presentes cada 7 aminoacidos a lo largo de la
secuencia de la helice α. Puesto que una helice
α se repite cada 3.5 residuos, todas las leucinas a lo largo de esta
secuencia de polipeptido se encuentran en la
misma direccion. Dos de las helices α de este tipo son capaces de
juntarse en una cremallera para formar una
estructura superenrollada.
Las proteinas con una estructura cremallera de leucina existen
como dimeros.
La cremallera de leucina puede unir DNA porque contiene un grupo
de aminoacidos basicos en un lado de la
helice α que contiene leucina.
Activacion de un gen por una hormona esteroide, como el glucocorticoide cortisol.
La hormona entra a la celula desde el liquido extracelular (1), se difunde a traves de la bicapa lipidica (2) y entra al citoplasma, donde se une con el
receptor de glucocorticoides (3), lo que ocasiona su translocacion hacia el nucleo, donde actua como factor transcripcional y se une al elemento de
respuesta a glucocorticoides del DNA (4). La union de dos moleculas de receptor adyacentes conduce a la formacion de un dimero, que activa la
transcripcion del DNA (5), y a la sintesis de proteinas especificas en el citoplasma (6).

Estrategia por la que activadores de la transcripcion unidos a sitios distantes pueden influir en la expresion genica.
Los activadores transcripcionales que se unen a los aumentadores, en
direccion 5', influyen en la expresion genica al
interactuar con coactivadores. Se muestran 4 tipos distintos de
coactivadores; dos de ellos, marcados como “complejo
modificador de histona” y “complejo de remodelacion de la cromatina”,
actuan mediante la alteracion de la estructura de la
cromatina. Los otros dos, marcados como “TAF” y “mediador”, actuan en
componentes de la maquinaria de transcripcion
basal que se ensambla en el promotor nuclear.

REPRESIÓN DE LA TRANSCRIPCIÓN
Metilacion del DNA
En el DNA de mamiferos y otros vertebrados, uno de cada 100 nucleotidos porta
un grupo metilo anadido, que siempre se une al carbono 5 de una citosina.
Los grupos metilo se agregan al DNA por medio de metiltransferasas de DNA
codificadas en humanos por genes DNMT.
Se cree que esta modificacion quimica sirve como una marca epigenetica o “senal”
que permite que ciertas regiones del DNA se identifiquen y utilicen de manera
diferente de otras regiones.
En mamiferos, los residuos de metilcitosina son parte del dinucleotido 5'-CpG-3'
dentro de una secuencia simetrica, como:
en la cual los puntos rojos indican la posicion de los grupos metilo.
La mayoria de los residuos metilcitosina en el DNA se localizan dentro de
secuencias repetidas no codificadoras, principalmente elementos transponibles.

Un modelo de represion transcripcional.

Las colas de histona de la cromatina activa se acetilan.
Cuando un represor transcripcional se une a su sitio de union de DNA, recluta un complejo correpresor (ej. SMRT/N-CoR o CoREST) y una
actividad relacionada con HDAC. La HDAC elimina los grupos acetilo de las colas de histona.

Una proteina distinta que contiene actividad de metiltransferasa de histona agrega grupos metilo al residuo K9 de la cola de histona H3. La
perdida de grupos acetilo y la adicion de grupos metilo en conjunto conducen a la inactivacion de la cromatina y desactivacion génica

CONTROL AL NIVEL DEL PROCESAMIENTO

El corte y empalme alternativo regula la expresion genica al nivel del procesamiento de RNA y provee un mecanismo por el que un solo gen puede
codificar dos o mas proteinas relacionadas.
Los genes de plantas y animales contienen numerosos intrones y exones.

Corte y empalme alternativo del gen de la fibronectina.

El gen de la fibronectina consiste en diferentes exones.
Dos de estos exones codifican para porciones del polipeptido llamadas
EIIIA y EIIIB, que se incluyen en las proteínas producidas por los
fibroblastos pero se excluyen en las proteinas que se sintetizan en el
higado.
La diferencia se debe al corte y empalme alternativo; estas porciones de
pre-mRNA que codifican para esos dos exones se eliminan de la
transcripcion en las células hepaticas. Los sitios donde los exones se
pierden se indican con una flecha en el mRNA hepatico.

CONTROL AL NIVEL TRADUCCIONAL: El control al

nivel traduccional comprende una amplia variedad de mecanismos
reguladores que afectan la traducción del mRNA transportado con anterioridad desde el nucleo hasta el citoplasma.

Los factores considerados bajo este rubro regulatorio general incluyen:

1) la localizacion del mRNA en ciertos sitios dentro de la celula;
2) si un mRNA se traduce o no y con que frecuencia, y
3) la vida media del mRNA, una propiedad que determina cuantas veces se traduce el mensaje.

Control de la traduccion del mRNA de ferritina.

Cuando las concentraciones de hierro son bajas, una proteína represora que une
hierro, llamada proteina reguladora de hierro (IRP), se une a una secuencia especifica
de la UTR 5' del mRNA de ferritina, denominada elemento de respuesta al hierro (IRE),
que se pliega en un asa.

Cuando el hierro esta disponible, se une a la IRP, cambiasu conformacion y ocasiona

que se disocie del IRE, lo que permite la traduccion del mRNA para formar ferritina.

Control de la
estabilidad
del mRNA
El tiempo que dura
un mRNA en una celula, la mayor parte de las veces, es para la sintesis de un
polipeptido. Si una celula controla la expresion de genes, es importante que regule la
supervivencia del mRNA, asi como en primer lugar tambien se regula la sintesis de
este mRNA.
A diferencia de un mRNA procariota, que comienza a degradarse en su extremo 5' antes que su extremo 3' este completo, la mayor parte de los mRNA
eucariotas tiene una vida media hasta cierto punto larga. No obstante, la vida media de los mRNA eucariotas es muy variable.

Cuando el mRNA abandona el nucleo, contiene una cola de ~ 200 residuos de adenosina (1).
En el citoplasma, la longitud de su cola de poli(A) tiende a reducirse en forma gradual conforme aquel se degrada por efecto de la ribonucleasa de
poli(A).
La cola se reduce ~ 30 residuos (2).

El mRNA suele degradarse con rapidez por otras 2 vias.

CONTROL POSTRADUCCIONAL: DETERMINACIÓN

DE LA ESTABILIDAD DE LA PROTEÍNA
Las celulas poseen mecanismos complejos para controlar la tasa a la
que las proteinas se sintetizan. No resulta inesperado que las celulas
posean mecanismos para controlar el periodo que las proteinas
sobreviven una vez que son por completo funcionales.
La degradacion de proteinas celulares se realiza en maquinas cilindricas
que degradan proteinas llamadas PROTEOSOMAS que se encuentran
tanto en el nucleo como en el citosol de las celulas.
Los proteosomas consisten en cuatro anillos de subunidades
polipeptidicas apilados uno sobre otro con una cubierta unida a cada
extremo de la pila. Los dos anillos centrales consisten en polipeptidos
(subunidades β) que funcionan como enzimas proteoliticas.

Estructura y funcion del proteosoma. (a) Micrografia electronica de un proteosoma de Drosophila.

(b) Modelo de proteosoma que consiste en 2 capuchones en el extremo de un nucleo formado por 4 anillos apilados. Cada anillo consta de
7 subunidades que se dividen en 2 clases: tipo α y tipo β. Los dos anillos internos se componen de subunidades β, que rodean una cámara
central. 3 de la 7 subunidades β de cada anillo tienen actividad proteolitica, las otras 4 son inactivas en celulas eucariotas.

Los 2 anillos externos se componen de subunidades α sin actividad enzimatica que forman una abertura estrecha a traves de la cual los
polipeptidos sustrato no plegados se introducen para llegar a la camara central, donde se degradan.
(c) Degradacion de las proteinas. Œ La proteina se une covalentemente a un grupo de moleculas de ubiquitina.  La proteína
poliubiquitinada se une al capuchon del proteosoma. La cadena de ubiquitina se elimina y el polipeptido no plegado penetra en la cámara
central del proteosoma (Ž), donde se degrada por efecto de la actividad catalitica de las subunidades β (y ).
MARCO TEÓRICO:
La centrifugación es un método por el cual se pueden separar sólidos de líquidos de diferente densidad
mediante una fuerza rotativa, de un equipo de laboratorio denominado centrífuga; la cual imprime a la mezcla
con una fuerza mayor que la
de la gravedad, provocando la sedimentación de los sólidos o de las partículas de mayor densidad.
Se conocen varios tipos de centrifugación como la diferencial, isopícnica y la ultracentrifugación.
La leche materna es un fluido cambiante ya que se va adaptando a los requerimientos de lactante a lo largo
del tiempo, en función de las necesidades energéticas y del desarrollo del recién nacido. Es así como su
composición va sufriendo variaciones a lo largo de la lactancia y también durante el día.

MATERIAL DIDÁCTICO:
● Material para apuntes
● Material de Bioseguridad (Mandil, Gorra, Guantes de látex)
● Ecran
● Equipo multimedia
● Computadora
● Sustancias: 20 mL de muestra de leche evaporada (marca X)
20 mL de muestra de leche materna
● 02 tubos de ensayo 16x150 mm
● 02 vasos de precipitado de 50 mL
● 02 pinzas de madera
● 02 pipetas de 10 mL
● 02 propipetas
● 02 tapones o corchos para los tubos de ensayo
● 02 Gradilla para tubos de ensayo
● Equipos: centrífuga
ACTIVIDADES: GRUPAL
- Desarrollo de la práctica
- Elaboración y presentación del informe
- Desarrollo del cuestionario:
1. ¿Qué se entiende por campo centrífugo?
2. ¿Cuáles son los tipos de centrifugación?
3. Explique la importancia del proceso de ultra centrifugación.
4. ¿Cuáles son las características de la leche materna?
5. Fundamente la importancia de la leche materna para el lactante.
DESARROLLO DE LA PRÁCTICA:
1. Con la ayuda de la pipeta trasvasamos 7mL de la muestra de leche “X” al tubo de ensayo y tapamos con el
tapón (corcho). Realizamos el mismo procedimiento con el otro tipo de muestra.
2. Rotulamos cada tubo de ensayo con el nombre del tipo de leche (usando lápiz de cera o plumón
indeleble).
3. Ubicamos los dos tubos de ensayo de forma opuesta en la centrífuga, y encendemos la misma por un
lapso de 20 minutos.
4. Luego de terminado el tiempo apagamos la centrífuga y retiramos
cuidadosamente los tubos de ensayo.
Cálculos e interpretación:
Luego de la centrifugación de la leche, observamos la separación de las sustancias con distinta densidad.
La cantidad de grasa varía de acuerdo a la leche centrifugada, así como también la cantidad y pureza del
suero.
El tiempo de centrifugación varía de acuerdo al tipo de muestra.
Colocar la misma cantidad de muestra en cada tubo de ensayo para facilitar el análisis cuantitativo.
Verificar que la centrífuga funcione correctamente.

MARCO TEÓRICO:
Existen diferentes tipos de pruebas de diagnóstico de COVID-19 en función de su objetivo. Podemos
distinguir entre las pruebas que nos informan sobre si existe infección en el momento de realizar la prueba
(infección activa) y aquellos que nos informan de la respuesta inmune frente al virus.
Las pruebas moleculares y de antígenos son tipos de pruebas de diagnóstico que pueden detectar si tiene
una infección activa del COVID-19.
Las pruebas de anticuerpos buscan anticuerpos en su sistema inmunológico producidos en respuesta al
SARS-CoV-2, el virus que causa el COVID-19. Las pruebas de anticuerpos no deben usarse para
diagnosticar una infección activa por el COVID-19.
MATERIAL DIDÁCTICO:
● Material para apuntes
● Material de Bioseguridad (Mandil, Gorra, Guantes de látex)
● Ecran
● Equipo multimedia
● Computadora
● Artículo: Interpretación de las pruebas diagnósticas del virus SARS-CoV-2.