UNIVERSIDAD DE TARAPACÁ
FACULTAD DE INGENIERIA
DEPARTAMENTO DE INGENIERIA Y TECNOLOGÍAS INGENIERIAS
FUNCIONAMIENTO Y DISEÑOS DE EQUIPOS DE
FERMENTACIÓN
Profesor:
Waldo Alfaro
Alumnos:
Víctor Barraza
Jonathan Delgado
Fecha de entrega:
5 de Julio 2022
Iquique - Chile
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Biorreactores y fermentadores
Definición
Un biorreactor es un recipiente o sistema que mantiene un ambiente biológicamente activo.
En algunos casos, un biorreactor es un recipiente en el que se lleva a cabo un proceso
químico que involucra organismos. Este proceso puede ser aeróbico o anaeróbico. Estos
biorreactores son comúnmente cilíndricos y fabricados de acero inoxidable. En general, un
biorreactor busca mantener ciertas condiciones ambientales propicias al organismo o
sustancia química que se cultiva. Estas condiciones pueden ser el pH, temperatura y
concentración de oxígeno entre otras.
Figura 1. Tanque agitado
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Tipos de biorreactores según su modo de operación
El modo de operación de un sistema de cultivo es el modo de operar del biorreactor o
fermentador. Éste influye en el diseño propio del reactor y, también, en el modelo cinético
de crecimiento del cultivo y en el proceso de producción. Existen tres modos de cultivo
aunados a tres modos básicos de producción: discontinuo, semicontinuo y continuo.
Discontinuo (batch)
Este modo de operación se caracteriza por realizarse en lotes o tandas. La fermentación se
desarrolla en un sistema cerrado y sin alimentación. Se coloca dentro del biorreactor la
carga total del proceso de cultivo o fermentación y se deja el tiempo necesario para que se
lleve a cabo el proceso productivo o la fermentación. No hay entrada ni salida de medio de
cultivo. A estos reactores se les carga una vez de forma total o por intervalos durante varios
días y se descarga todo el producto al final de la operación.
Ventajas:
• Bueno para pequeños volúmenes de producción.
• Procesamiento de una gran variedad de sustratos.
• Inversión inicial baja.
• Fácil de parar y limpiar.
• Admite cargas secas y con alta humedad.
• Trabajo en ciclos para una operación menos personalizada.
Desventajas:
• La carga y descarga requiere de una mayor operación de manera personalizada.
• Tiempo de parada entre cargas.
• Coste de operación alto.
• Requiere un control del proceso.
• Uniformidad de producto difícil de conseguir
Semicontinuo (batch alimentado)
Se caracteriza por realizarse en lotes alimentados, con alimentación de entrada. Se alimenta
para que el sistema de cultivo tenga un producto con el máximo crecimiento posible y se
incremente la productividad. Este tipo de operación es muy útil cuando se requiere una gran
densidad celular en la etapa de iniciación del proceso en la cual hay un alto consumo de
nutrientes. Consiste en remover, al final de la operación entre un 80 y 90 % del cultivo y
reemplazarlo por medio fresco. De esta forma, se puede satisfacer la necesidad de contar
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con inóculos de gran tamaño sin tener que realizar la esterilización del biorreactor entre dos
ciclos.
Continuo
En este modo de operación se alimenta una línea de entrada y se drena con una línea de
salida. Los flujos de entrada y salida son iguales y la producción es continua. Se utiliza en
cultivos donde la velocidad de crecimiento celular es constante, por lo que hay un suministro
constante de nutrientes y a la vez una remoción constante de producto.
Ventajas:
Ideal cuando se requiere una velocidad de crecimiento celular constante.
Bueno para producciones indefinidas de producto.
No requiere de tiempo entre ciclos.
Coste de operación relativamente bajo.
Uniformidad de producto más fácil de conseguir.
Desventajas:
Requiere inversión alta.
Las paradas provocadas por mantenimiento pueden ser costosas.
Cuesta mantener las condiciones asépticas en el proceso.
A continuación, se muestra un esquema de los tipos de biorreactores
Figura 2. Esquema tipos de biorreactores
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Consideraciones de diseño
Para que un microorganismo o célula sea capaz de realizar su función deseada con gran
eficiencia son necesarias unas condiciones óptimas. Las condiciones ambientales de un
biorreactor tales como flujo de gases (oxígeno, nitrógeno, dióxido de carbono…),
temperatura, pH, oxígeno disuelto y velocidad de agitación, deben ser cuidadosamente
monitoreadas y controladas. Estos factores físico químicos afectan al rendimiento de las
fermentaciones industriales.
Temperatura
La temperatura es un parámetro muy importante en la fermentación debido que afecta al
funcionamiento de las células. Los organismos se pueden clasificar en tres grupos de
acuerdo con su temperatura óptima de crecimiento.
• Serófilos. La temperatura óptima es inferior a los 20ºC.
• Mesófilos. La temperatura óptima se encuentra entre los 20ºC y los 50ºC.
• Termófilos. Temperatura óptima superior a los 50ºC.
Durante la fermentación la temperatura se va incrementando hasta llegar a la temperatura
de crecimiento óptimo y la velocidad de crecimiento se incrementa aproximadamente el
doble por cada 10ºC que aumenta la temperatura. Una vez superada la temperatura óptima,
la velocidad de crecimiento disminuye y se puede producir muerte celular.
Las temperaturas óptimas para el crecimiento microbiano y formación de producto son
diferentes.
El proceso se debe mantener a temperatura constante, para ello se suele utilizar un
intercambiador de calor. La fermentación biológica desprende mucho calor, así que en la
mayoría de casos se requerirá de agua de enfriamiento.
pH
El pH en un bioproceso tiene menos efecto sobre la actividad biológica de los
microorganismos que la temperatura. La mayor parte de los microorganismos crecen de
forma óptima entre pH 5,5 y 8,5. Aun así, el pH es uno de los parámetros que más se tiene
que controlar, ya que, durante el crecimiento en un fermentador, los metabolitos celulares
son liberados al medio, lo que puede originar un cambio de pH del medio de cultivo. Por lo
tanto, se debe controlar el pH del medio de cultivo y añadir un ácido o una base cuando se
necesite para mantener constante el pH. Esta adición del ácido o base se debe mezclar
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rápidamente de tal forma que el pH del medio de cultivo sea el mismo en todo el
fermentador.
Los microorganismos se pueden clasificar en tres grupos según su nivel de pH óptimo para
el crecimiento. Estos tres grupos son, acidófilos, neutrófilos y alcalófilos. El nivel de pH
óptimo para cada grupo lo podemos ver en la figura 3.
Figura 3. Preferencias por el pH de algunas bacterias
Oxígeno disuelto
En los procesos aeróbicos, la trasferencia óptima de oxígeno es una tarea difícil de lograr.
El oxígeno es el sustrato gaseoso más importante para el metabolismo microbiano y el
anhídrido carbónico es el producto metabólico más importante. El oxígeno es poco soluble
en agua y es relativamente escaso en el aire (20,8%). Una solución saturada de oxígeno
contiene unos 9 mg/L de este gas en agua debido a la influencia de los ingredientes del
cultivo, el contenido máximo de oxígeno realmente es más bajo de lo que debería ser en
agua pura. El suministro de oxígeno se logra burbujeando aire en el fermentador durante el
proceso. La trasferencia de oxígeno se facilita por la agitación.
La ley de Henry describe la solubilidad del oxígeno en soluciones de nutrientes en relación
a la presión parcial del oxígeno en la fase gaseosa.
Matemáticamente se formula:
𝐶𝑠 = 𝐻 ∙ 𝑃𝑜
Dónde:
• CS: concentración de O2 de la solución de nutrientes a saturación.
• Po: presión parcial del gas en la fase gaseosa.
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• H: constante de Henry que es específica para cada tipo de gas.
La solubilidad del oxígeno desciende a medida que aumenta la temperatura. Al aumentar la
concentración de oxígeno en fase gaseosa, se consigue aumentar la proporción de oxígeno
en la solución de nutrientes. La presión más alta de oxígeno se consigue durante la aireación
con oxígeno puro. En agua se disuelven 43 mg O2/L cuando se utiliza oxígeno puro, en
comparación con el valor obtenido al utilizar aire que era de 9 mg O2/L.
Una vez disuelto el O2, éste tiene que transferirse desde la burbuja de gas a cada célula
individual. Para ello se deben superar varias resistencias parcialmente independientes. La
primera es la resistencia dentro de la película de gas a la interfase. Luego la penetración de
la interfase entre la burbuja de gas y el líquido. La transferencia desde la interfase al líquido.
Después, movimientos dentro de la solución de nutrientes y por último la trasferencia a la
superficie de la célula.
La concentración crítica de oxígeno es el término utilizado para expresar el valor de la
velocidad específica de absorción de oxígeno que permite la respiración sin impedimentos.
Esta concentración crítica de oxígeno suele tener unos valores concretos para cada
microorganismo, oscilando de forma general entre el 5% y el 25% de los valores de
saturación de oxígeno en los cultivos.
Agitación
La agitación facilita la trasferencia de oxígeno, también facilita la mezcla de los nutrientes y
mantiene la fermentación homogénea. Es la operación que crea o que acelera el contacto
entre dos o varias fases. Una fermentación microbiana puede ser considerada como un
sistema de tres fases, que implica reacciones líquido-sólido, gas-sólido y gas líquido.
La fase líquida contiene sales disueltas, sustratos y metabolitos. Puede existir, en algunos
casos, una segunda fase líquida si existe un sustrato inmiscible en agua como por ejemplo
los alcanos.
La fase sólida consiste en células individuales, bolitas de micelio, sustratos insolubles o
productos del metabolismo que precipitan.
La fase gaseosa proporciona un reservorio para el suministro de oxígeno, para la
eliminación del CO2 o para el ajuste del pH con amonio gaseoso.
Una adecuada agitación de un cultivo microbiano es esencial para la fermentación ya que
produce los siguientes efectos:
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• Aumenta el área de trasferencia de oxígeno por la formación de pequeñas burbujas.
• Dispersión del aire en la solución de nutrientes.
• Homogeneización, para igualar la temperatura, pH y concentración de nutrientes, en
el fermentador.
• Suspensión de los microorganismos y de los nutrientes sólidos.
• Asegura la transferencia de gases
• Dispersión de los líquidos inmiscibles.
• Disminuye el grosor de la interfase gas/líquido al crear un flujo turbulento.
La agitación excesiva puede ser contraproducente, por este motivo existen límites para la
velocidad de agitación. Estos límites tienen en cuenta el consumo de energía del motor, el
daño ocasionado a los organismos debido a esfuerzos de corte excesivo, que puede romper
las células, y el incremento de temperatura que provoca un descenso en la viabilidad celular.
Se debe de llegar a un balance entre la necesidad de mezclado y la necesidad de evitar
daño celular.
Existen tres tipos de agitación que se utilizan en las fermentaciones:
i. Agitadores rotativos (tanque agitado), los cuales tienen un sistema interno
mecánico de agitación.
ii. ii. Columnas de burbujas, la agitación se realiza mediante la introducción de aire
a sobrepresión.
iii. iii. Sistema aero-elevado (airlift), que pueden tener un circuito interno o externo.
La mezcla y circulación de los fluidos son el resultado de las corrientes de aire
introducido, las cuales causan diferencias en la densidad dentro de las diferentes
partes del fermentador.
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Figura 4. Tipos de agitación en fermentadores
El más utilizado es el primero ya que es más flexible en las condiciones de operación, es
más fácil de conseguir comercialmente y provee una eficiente transferencia de gases a las
células.
Espuma
La espuma se produce a partir de las proteínas presentes en el medio, ligadas a la interfase
entre el aire y el cultivo. Se tiene que controlar para que no se pierdan las condiciones
asépticas.
Modelos de crecimiento
Para poder describir el fenómeno del crecimiento celular se utilizan ecuaciones
relativamente sencillas. La más usada es la ecuación de Monod que describe el crecimiento
celular en función de la disponibilidad de un sustrato limitante. Se expresa de la siguiente
manera:
Sustrato (S) + Células (X) → más células (X) + Producto (P)
𝑑𝑋 𝑆∙𝑋
𝑟𝑥 = = 𝜇𝑚
𝑑𝑡 𝐾𝑠 + 𝑆
Dónde:
rx: velocidad de crecimiento de las células
µm: velocidad específica máxima de crecimiento
Ks: constante de Monod
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También es común expresar la ecuación en función de la velocidad específica de
crecimiento:
𝜇𝑚 ∙ 𝑆
μ=
𝐾𝑠 + 𝑆
Dónde µm es el valor más grande que puede alcanzar la velocidad de crecimiento cuando
S es muy superior a KS y las concentraciones del resto de nutrientes no han cambiado de
forma considerable.
KS es el valor de la concentración del nutriente limitante a la que la velocidad específica de
crecimiento es la mitad de la máxima.
Para valores de S inferiores a KS, la velocidad de crecimiento depende de una forma lineal
de S, mientras que, para valores superiores, el valor de µ se hace independiente de S.
El uso de la ecuación de Monod plantea un gran inconveniente que es la correcta
determinación del valor de KS.
El modelo de Monod describe solo los periodos de crecimiento exponencial y fase
estacionaria.
Figura 5: Relación entre la velocidad específica de crecimiento y la concentración de sustrato limitante según la ecuación
de Monod
La ecuación de Monod no siempre permite obtener una buena representación de los datos
de crecimiento de un microorganismo. Otra ecuación que se utiliza es la ecuación logística.
En este modelo se considera que la velocidad de crecimiento de las células sólo depende
de la concentración de las células, pero incluye además un término de inhibición
proporcional al cuadrado de la concentración de la biomasa.
𝑑𝑋
= 𝑘𝑋 − 𝛽𝑋 2
𝑑𝑡
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Dónde: k: término análogo al de la ecuación de Malthus
β: constante del término de inhibición
Durante el crecimiento microbiano, se pueden diferenciar 4 fases:
Figura 6: Fases del crecimiento celular
Fase I: Fase de latencia. También conocida como fase lag o de adaptación, durante esta
fase no hay crecimiento microbiano, aunque hay metabolismo activo. Se producen las
enzimas necesarias para que la población bacteriana pueda crecer. Es una fase de
adaptación al medio.
Fase II: Fase exponencial. Durante esta fase hay una duplicación celular de manera
acelerada. Bajo condiciones apropiadas la velocidad de crecimiento es máxima. Al tiempo
en que una célula se duplica se le conoce como tiempo de duplicación o regeneración.
Fase III: Fase estacionaria. Durante esta fase la velocidad de división celular decrece hasta
tal punto que las nuevas células son producidas al mismo ritmo de al que mueren las células
viejas. Por lo tanto, el número de células es constante.
Fase IV: Fase de muerte celular. Durante esta frase ya no es posible la división celular, las
células mueren y la población decrece exponencialmente. Esto se debe por la acumulación
de tóxicos en el medio o la falta de sustrato.
Parámetros de rendimiento
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El rendimiento se define como la relación entre el producto obtenido y el sustrato consumido.
El rendimiento celular se define a través del concepto de nutriente limitante.
Un nutriente limitante es aquel sustrato que cuyo consumo controla la velocidad de
producción de biomasa. Es decir que la velocidad de crecimiento celular es función de tal
nutriente.
Podemos escribir la ecuación de forma:
Yx Yp
Sustrato (S) + Células (Xo) → más células (X) + Producto (P)
s s
Simplificando:
Yp Yx
𝑆 + 𝑋𝑜 → ∙P+ ∙X
s s
El rendimiento de biomasa, que se refiere a la biomasa producida entre el consumo del
sustrato, se define como:
Yx/s = dX/dS
También se puede expresar como:
Yx Biomasa producida
=
s 𝐶𝑜𝑛𝑠𝑢𝑚𝑜 𝑆𝑢𝑠𝑡𝑟𝑎𝑡𝑜
El sustrato normalmente es la fuente de carbono. El rendimiento está en función de la fuente
de carbono usada y las condiciones del proceso. Puede variar durante el proceso.
También está el rendimiento de la formación de producto, que se refiere al producto
producido entre el consumo de sustrato, se define como:
Yp/s = dP/dS
También se puede expresar como:
Yp Producto producida
=
s 𝐶𝑜𝑛𝑠𝑢𝑚𝑜 𝑆𝑢𝑠𝑡𝑟𝑎𝑡𝑜
Una vez definidos estos parámetros, podemos definir la velocidad de desaparición del
sustrato en función del rendimiento de biomasa y la velocidad de crecimiento de las células:
1
𝑟𝑠 = −( ) ∙ 𝑟𝑥
𝑌𝑥
𝑠
Dónde:
rS: velocidad de desaparición del sustrato
Yx/s: rendimiento de biomasa
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rX: velocidad de crecimiento de las células
También podemos definir la velocidad de desaparición del sustrato en función del
rendimiento del producto y la velocidad de desaparición del producto:
1
𝑟𝑠 = −( ) ∙ 𝑟𝑝
𝑌𝑝
𝑠
Dónde:
rS: velocidad de desaparición del sustrato
Yp/S: rendimiento de formación del producto
rP: velocidad de aparición del producto
La velocidad de aparición del producto se puede obtener de forma:
𝑌𝑝/𝑠
𝑟𝑝 = ∙𝑟
𝑌𝑥/𝑠 𝑥
En general, el rendimiento de biomasa y el rendimiento de producto se consideran
constantes.
A partir de los rendimientos, se puede definir la evolución temporal del sustrato, el producto
y las células a partir de las siguientes ecuaciones.
La cantidad de sustrato en un instante determinado se define como:
1
𝑆 = 𝑆0 − ( ) ∙ (𝐶 − 𝐶𝑜)
𝑌𝑥
𝑠
La cantidad de células en un instante determinado se puede definir como:
𝑋 = 𝑋0 + 𝑌𝑥/𝑠 ∙ (𝑆𝑜 − 𝑆)
La cantidad de producto en un instante determinado se define como:
𝑃 = 𝑃0 + 𝑌𝑝/𝑠 ∙ (𝑆𝑜 − 𝑆)
Ya que en el instante inicial no hay producto:
𝑃 = 𝑌𝑝/𝑠 ∙ (𝑆𝑜 − 𝑆)
Si se dibujan las curvas de la evolución temporal del sustrato, células y producto. Queda
como en la siguiente gráfica.
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Figura 7. Evolución temporal del sustrato, células y producto
Inicialmente, únicamente tenemos sustrato y muy poca cantidad de células. Según avanza
el tiempo, la cantidad de sustrato disminuye y el producto y las células aumentan de forma
exponencial. A partir de un tiempo determinado, la cantidad de producto y células ya no
crece de forma considerable y se estabiliza.
Observamos que la concentración de sustrato disminuye a lo largo del tiempo. Por el
contrario, la cantidad de células y de producto aumenta con el paso del tiempo.
Criterios para el diseño
• Tener caracterizado morfológica y bioquímicamente el cultivo a usar.
• Características hidrodinámicas del reactor: es necesario minimizar los fenómenos de
transporte en el reactor, para evitar gradientes de nutriente, temperatura.
• La productividad bacteriana debe estar ampliamente estudiada.
• Asegurar la estabilidad genética del microorganismo, impidiendo que se estimulen
mutaciones.
• Esterilización lo más barata posible, hasta el punto que, a pesar de su importancia, y
según el proceso, se llega a obviar.
• Control de las condiciones ambientales.
• Construcción y modo de operación.
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• Inclusión de sistemas de oxigenación adecuados a las exigencias del
microorganismo.
• Sistemas de muestreo para determinar las condiciones internas del biorreactor.
• Materiales no tóxicos.
Bibliografía
FARMESPAÑA INDUSTRIAL. (s.f.). Tecnologia de los bioprocesos-Diseño de biorreactores y
fermentadores. Obtenido de
[Link]
bioprocesos-diseno-de-fermentadores-y-biorreactores
Nicolas Eduardo Reyes Camp. (s.f.). DISEÑO ÓPTIMO DE PLANTAS DE FERMENTACIÓN
DISCONTINUA. Obtenido de
[Link]
?sequence=1&isAllowed=y
