PRACTICA: Respuesta Bacteriana a Diferentes Fuentes de Carbono:
Crecimiento Diaúxico
INTRODUCCIÓN
El tipo de crecimiento diaúxico da lugar a una curva de crecimiento con dos fases
exponenciales separadas por una fase estacionaria corta, tiene lugar cuando una
bacteria crece en un medio con dos fuentes de carbono, una de las cuales se usa
con preferencia frente a la otra en consecuencia de la represión catabólica la cual
previene el gasto de energía en sistemas enzimáticos que no se utilizan.. Esto
ocurre porque el microorganismo crece primero a expensas de la fuente de
carbono preferente, cuando la agota entra a la fase estacionaria hasta que
sintetiza enzimas para degradar la otra fuente de carbono, entonces reemprende
el crecimiento exponencial posiblemente con una pendiente menos inclinada.
Esta forma de usar selectivamente uno de las componentes de una mezcla de
azucares, adicionados al medio como fuente de carbono y energía dependen de
una unidad genética funcional formada por un grupo de genes que generalmente
son enzimas, capaces de ejercer una regulación de su propia expresión por medio
de los sustratos con los que interaccionan las proteínas codificadas por sus genes
(operón). Además está regulado por otros 3 factores de control:
Factor promotor: zona que controla el inicio de la transcripción del operón
Operador: zona de control que permite la activación/desactivación del promotor a
modo de "interruptor génico" por medio de su interacción con un compuesto
inductor
Gen regulador: alguno de los genes del operón pueden codificar factores de
transcripción que se unan al promotor, regulando así la propia expresión del
operón
En esta práctica de laboratorio estudiamos el comportamiento del operón lac el
cual es regulado por varios factores, incluyendo la disponibilidad de glucosa y
de lactosa. Es un Operón inducible; es decir: es el que en condiciones normales
no se expresa, se activa en respuesta a un agente inductor que funciona como
Activador, en el momento que el inductor se une al operador, se activa el promotor
y comienza la transcripción de los genes estructurales.
OBJETIVOS: Reconocer el crecimiento diaúxico como parte del porvenir
microbiológico comprendiendo así mismo conceptos relacionados que nos ayudan
a darle explicación a dicho fenómeno como lo son represión catabólica y operón
lactosa.
RESULTADOS
absorbancia cultivos 600 nm Oxidasa 500nm
Hora 1 2 1 2 Hora
6:30 0,015 0,019 0,084 0,077 6:30
8:40 0,025 0,030 0,082 0,090
9:20 0,024 0,031 0,072 0,088 10:09
9:35 0,062 0,064 0,016 0,031
9:56 0,067 0,080 0,062 0,067 11:00
10:04 0,095 0,085 0,073 0,086 11:25
10:20 0,085 0,097 0,051 0,054 11:54
10:31 0,105 0,116 0,003 0,016
10:45 0,115 0,121
10:59 0,137 0,152
11:39 0,212 0,247
11:59 0,263 0,301
12:35 0,301 0,414
Tabla #1: Representación tabular de absorbancias obtenidas experimentalmente a
600 y 500 nanómetros respectivamente de cultivos líquidos de E. Coli antes y
después de realizar la prueba Glucosa Oxidasa en las horas de la mañana
correspondientes.
Concentraciones de Glucosa
1 2 Hora
0,3192 0,2926 6:30
0,3116 0,342
0,2736 0,3344 10:09
0,0608 0,1778
0,2356 0,2546 11:00
0,2774 0,3268 11:25
0,1938 0,2052 11:54
0,0114 0,0608
Tabla #2: Tabulación correspondiente a las concentraciones de glucosa obtenidas
a partir de la ecuación: Cglucosa=Abs500nm (3.8). En la cual se utilizaron las
absorbancias arrojadas por el espectrofotómetro luego de realizar la prueba
Glucosa Oxidasa a los cultivos líquidos de E. Coli contenidas en los Erlenmeyer 1
y 2.
Grafica 1:Representacion que ilustra la absorbancia con respecto al tiempo de un
cultivo de [Link] en contraste con la concentracion de glucosa para el erlenmeyer
1
Grafica 2:Representacion que ilustra la absorbancia con respecto al tiempo de un
cultivo de [Link] en contraste con la concentracion de glucosa para el erlenmeyer
2
ANÁLISIS DE RESULTADOS
Según la literatura el comportamiento de una población de esta bacteria cuando
en su medio de cultivo existen dos fuentes de carbono: glucosa y lactosa se da un
crecimiento en dos fases llamado crecimiento diaúxico: durante una primera fase,
las bacterias aprovechan solamente la fuente más rica de carbono (la glucosa),
creciendo de modo exponencial durante unas cuantas generaciones, hasta que
agotan esta glucosa. A continuación se entra en una corta fase de tipo
estacionario, que conduce a una nueva fase de crecimiento exponencial (aunque
con un coeficiente menor que el de la fase exponencial anterior) debido a que en
ésta las bacterias han pasado a metabolizar la lactosa.
Mientras exista glucosa en el medio de cultivo, no se degrada la lactosa, debido al
fenómeno conocido como "represión catabólica": el catabolismo de la glucosa
"impide" de alguna manera que se expresen los genes del operón de la lactosa.
Pero una vez que la glucosa se agota, el operón lac se activa y se expresa: se
sintetizan las enzimas que permiten metabolizar la lactosa. La fase estacionaria
representa el tiempo que tardan las bacterias en "conectar" y expresar los genes
del catabolismo de la lactosa.
La bacteria usa en primer lugar sólo la fuente preferencial de carbono (en este
caso, la glucosa, que suele ser la fuente preferencial en muchos heterótrofos), sin
"tocar" la otra fuente. Una vez que agota la primera fuente, se dispone a usar la
segunda (ej.: lactosa), pero tarda un tiempo hasta que sintetiza los enzimas
catabólicas necesarias para degradar esa segunda fuente. Cuando las bacterias
han logrado niveles de esas enzimas adecuadas, se restablece el crecimiento
exponencial con una pendiente menor (lo que significa que esta fuente alternativa
permite una tasa menor que la preferencial).
Según la grafica 2 se puede observar un crecimiento de E. Coli casi estacionario
entre las 4 y 9 horas lo que significa que en ese tiempo la glucosa se estaba
agotando y por ende la célula comienza a replicar genes y enzimas necesarias
para la posterior degradación de lactosa apreciándose este proceso a partir de la
décima hora en la que se evidencia una pendiente positiva. Esto se puede
apreciar igualmente con la grafica de concentración de glucosa la cual nos indica
que pasadas ocho horas la glucosa escasea en el medio extracelular.
Según la grafica 1 se observa que entre las horas 1 y 10 existe un desorden con
altibajos en absorbancia los cuales posiblemente sean errores asociados con el
operador. Sin embargo en comparación con la grafica 2 las concentraciones de
glucosa coinciden con el tiempo de agotamiento de esta fuente de carbono y
además la fase exponencial en la cual se degrada la lactosa corresponde en
ambas graficas.
BIBLIOGRAFIA
[1] Niño J, García C. Fisiología microbiana, Manual de laboratorio, Universidad de
Antioquia.
[2] Hans G. Schlegel, Chistiane Zaborosch. Microbiología General. Barcelona:
Ediciones Omega S.A, 1992. Pág 214-215
[3]Lewin, Benjamín. Genes. Barcelona. Segunda edició[Link] Reverté. Pag
300-319.
[4]Manual de Prácticas de Genética. Disponible en:
[Link]
