Guía única para el desarrollo del componente práctico del curso de Bioquímica

Nombres y Apellidos

Universidad Nacional Abierta y a Distancia

Bioquímica

2023
 Introducción

Practica 1

Observar el video anexo con el fin de realizar el conocimiento previo para el

desarrollo de la actividad sobre el Reconocimiento de Materiales de Laboratorio y
Normas de Seguridad de Trabajo en el Laboratorio.

Conocer las diferentes normas de seguridad, extinción de incendios, reglamento de

laboratorio y los sitios de disposición final de residuos de laboratorio.

Material de laboratorio

1.1 El uso adecuado del laboratorio de química está sujeto al conocimiento de materiales,
equipos y reactivos que éste contenga. Por tal motivo, es imprescindible que usted lea y
ubique correctamente cada uno de estos materiales en el simulador de programa “Chemix-
Draw Lab”, accediendo mediante el enlace que se encuentra en la Figura 1 (si presenta
dificultades para cargar el simulador debido al Plug-in de flash player, consultar el siguiente
enlace: [Link]

Figura 1. Simulador de material de laboratorio de uso frecuente, disponible en línea:

[Link]
1.2 Tome un pantallazo de los materiales de laboratorio solicitados para completar la Tabla
1 y consulte el gráfico y uso de cada material de laboratorio identificado, se sugiere el
siguiente recurso: Material de laboratorio (disponible en línea:

[Link]

Clasificación Imagen Nombre Uso

Material de Vaso precipitado Se utiliza para disolver
vidrio sustancias, hacer
disoluciones, hacer
reacciones, calentar
productos, recoger líquidos
para ser pipeteados, etc.
No mide volúmenes
exactos. (Cabañas, 2020)
Pipeta de 5 ml Se utiliza sólo para medir
volúmenes exactos de
líquidos. Las hay que sólo
miden un volumen total y
pueden tener uno o dos
enrases. También las hay
graduadas que permiten
medir diferentes
volúmenes con la misma
pipeta. Mide volúmenes
exactos.
Matraz Se utilizan para efectuar
volumétrico diversas reacciones y se
pueden calentar.
Tubo de ensayo Se utiliza para hacer
reacciones a pequeña
escala.
 Probeta graduada Se utiliza sólo para medir
volúmenes aproximados de
líquidos. No mide
volúmenes exactos

Balón de
destilación

Cristalizador Se utiliza para obtener

cristales a partir de
disoluciones. Pueden
usarse para hacer un baño
de agua.
Material de Pinza para tubo de Se utiliza para sostener
soporte ensayo tubos de ensayo mientras
se calientan o se realizan
reacciones.
Trípode Se utiliza como soporte
para calentar recipientes,
como el vaso precipitado o
el matraz, sobre una fuente
de calor.
Espátula Se utiliza para manipular
sustancias sólidas o para
tomar muestras de
reactivos.
Soporte vertical Se utiliza para sostener
buretas, embudos, y otros
equipos de laboratorio en
posición vertical.
 Material de Mortero Se utiliza para triturar y
porcelana pulverizar sustancias
sólidas para su posterior
uso en experimentos.
Cápsulas de Se utilizan como
porcelana recipientes para calentar
sustancias a altas
temperaturas o para
realizar evaporaciones.
Equipos Centrífuga Se utiliza para separar
componentes de una
muestra, como células o
partículas, mediante la
fuerza centrífuga.
Espectrofotómetro Se utiliza para medir la
absorbancia o
transmitancia de una
sustancia en función de la
longitud de onda de la luz
incidente.
Baño de agua Se utiliza para mantener
una temperatura constante
en una muestra o en un
recipiente mediante la
inmersión en agua caliente
o fría.

1.3 Consulte los pictogramas y complete el siguiente cuadro.

Pictograma Definición
 Toxicidad aguda
Los productos que presentan este pictograma son mortales o muy
tóxicos en caso de ingestión, contacto con la piel o inhalación. Es
el caso de muchos biocidas o el metanol. (Papelmatic, 2023)
Explosivo
El producto presenta peligro de explosión, proyección u onda
expansiva derivada de la misma acción. También puede referirse
al peligro de explosión en el caso de un hipotético incendio.
Peligro para el medio ambiente
El producto es muy tóxico para los organismos acuáticos y
presenta efectos nocivos duraderos. Es el caso de muchos
biocidas.
Comburente
El producto puede provocar o agravar un incendio o explosión.
Es común encontrar este símbolo en productos clorados como,
por ejemplo, la lejía.
Señal de uso obligatorio de gafas protectoras. Generalmente
aparece sobre superficies verticales en áreas de laboratorio, indica
que es necesario el uso de gafas.
Corrosivo
El producto puede ser corrosivo para algunos metales. Además,
puede provocar quemaduras en la piel y lesiones oculares graves.
Es el caso de los productos ácidos, amoniacales, etc.

1.4 En cuanto accidentes en el laboratorio, enumere las medidas que se toman en caso
de presentarse fuego en el laboratorio y realice un cuadro donde explique las
categorías de identificación de extintores.

 Activar la alarma de incendios: Si el laboratorio está equipado con una alarma de

incendios, actívala de inmediato para alertar a todos en el edificio.
  Evacuar el laboratorio: Todos los ocupantes deben abandonar el laboratorio de
manera ordenada y sin entrar en pánico. Utiliza las rutas de evacuación designadas.
 Cerrar puertas y ventanas: Si es seguro hacerlo, cierra las puertas al abandonar el
laboratorio para ayudar a contener el fuego y evitar su propagación.
 No uses ascensores: En caso de incendio, nunca utilices los ascensores. Utiliza las
escaleras para evacuar el edificio.
 Llamar a los servicios de emergencia: Marca el número de emergencia local (por lo
general, 911) para notificar a los bomberos y otros servicios de emergencia sobre el
incendio.
 Usar el extintor adecuado: Si te sientes capacitado y es seguro hacerlo, puedes
intentar apagar un pequeño incendio con un extintor. Asegúrate de usar el extintor
adecuado para el tipo de fuego que enfrentas.

En cuanto a las categorías de identificación de extintores, los extintores se etiquetan con

letras y colores para indicar el tipo de fuego que pueden apagar de manera efectiva. Estas
categorías se basan en los tipos de combustibles involucrados en el incendio.

Clase de fuego Tipo de Etiqueta del Color del extintor

combustible extintor
Clase A Materiales Triángulo verde con Rojo
combustibles la letra A
sólidos como
madera, papel y tela
Clase B Líquidos Cuadro rojo con la Verde
inflamables como letra B
aceite, gasolina y
pintura
Clase C Equipos eléctricos Círculo azul con la Azul
energizados letra C
Clase D Metales Estrella amarilla con Amarillo
combustibles como
 magnesio, titanio y la letra D
sodio
Clase K Aceites de cocina y Cuadro negro con la Amarillo
grasas en cocinas letra K
comerciales

Normas de seguridad

1.5 Observe los siguientes videos referente a la información sobre las normas de seguridad
en el laboratorio, esté atento a la información proporcionada y conteste las siguientes
preguntas, accediendo al enlace que se encuentra en la Figura 2.

Figura 2. Seguridad en el laboratorio: MERCK: [Link]

a. Lea la Reglamentación Normas de Bioseguridad Laboratorios UNAD:

[Link] (Link consultado
el 15 de febrero de 2022) y de respuesta a las siguientes preguntas:

b. Enumere cuáles son las normas básicas de bioseguridad que se deben tener en
cuenta de acuerdo con los videos

1. Mantener el área de trabajo en todo momento en un estado de pulcritud,

asegurándose de que los materiales estén dispuestos de manera adecuada para
prevenir cualquier desorden o accidente potencial.
 2. Es esencial evitar correr en el laboratorio, ya que la prisa puede propiciar
situaciones peligrosas y aumentar el riesgo de caídas o derrames involuntarios.
3. Está prohibido el almacenamiento temporal o permanente de bolsas o paquetes en el
interior del laboratorio, con el fin de mantener el espacio libre de obstáculos y
permitir una rápida evacuación en caso de emergencia.
4. La manipulación de alimentos está estrictamente prohibida en el entorno del
laboratorio, garantizando así la separación total entre sustancias químicas y
productos destinados al consumo humano.

c. Describir cuáles son los equipos de protección colectiva para situaciones de

accidentes o emergencias que se observan el en video de prevención, indicando su
función

1. El uso de gafas protectoras es fundamental para salvaguardar los ojos de cualquier

salpicadura o proyección de sustancias químicas peligrosas que puedan causar daño
ocular.
2. El calzado adecuado proporciona una barrera adicional contra posibles derrames o
caídas de objetos en el laboratorio, contribuyendo a la protección de los pies.
3. Los guantes son esenciales para evitar el contacto directo de la piel con productos
químicos agresivos, minimizando el riesgo de irritaciones, quemaduras o exposición
a sustancias tóxicas.
4. Usar la vestimenta adecuada, como batas de laboratorio, ayuda a proteger la ropa y
la piel de posibles salpicaduras y derrames, manteniendo así un entorno seguro y
reduciendo el riesgo de lesiones.

d. Menciones posibles riesgos que representan las diferentes sustancias químicas para
la salud

1. Algunas sustancias pueden ser inflamables, lo que aumenta el riesgo de incendios o

explosiones en su manipulación.
2. La explosividad es un peligro que algunas sustancias químicas pueden presentar, lo
que implica la posibilidad de detonaciones súbitas.
3. Sustancias oxidantes pueden contribuir al inicio o propagación de incendios al
liberar oxígeno o promover reacciones químicas exotérmicas.
4. Los químicos irritantes pueden causar molestias o daño a los tejidos, como
enrojecimiento, picazón o irritación de la piel o las membranas mucosas.
5. Las sustancias tóxicas representan un peligro para la salud si se inhalan, ingieren o
entran en contacto con la piel, pudiendo causar efectos adversos en el cuerpo.
6. Las sustancias corrosivas tienen la capacidad de dañar los tejidos y los materiales
con los que entran en contacto, lo que puede dar lugar a quemaduras y daños graves.
7. Algunos productos químicos pueden tener efectos adversos en el medio ambiente,
causando contaminación del aire, el agua o el suelo.
8. Determinados químicos son conocidos por su capacidad para inducir cáncer o
causar malformaciones en fetos, lo que representa un riesgo crítico para la salud a
largo plazo.
 Practica 2

Conocimientos previos para el desarrollo de la actividad sobre Identificación de

aminoácidos y proteínas, revisar video anexo.

Conocimiento de las propiedades bioquímicas

Para desarrollar la práctica y comprender los términos deben acceder al enlace que se
encuentran en la Figura 3 (si presenta dificultades para cargar el simulador debido al Plug-
in de flash player, consultar el siguiente enlace:

[Link]

Figura 3. Aminoácidos y proteínas: identificación cualitativa. Universidad politécnica de

Valencia (UPV). Instituto de ciencias de la educación.

[Link]

1.6 Acceder al video graduando la opción de volumen.

1.7 Observar el video detalladamente donde les indican conceptos básicos que permiten
comprobar la realización de diferentes pruebas para demostrar la presencia de aminoácidos
y proteínas.

Identificación de aminoácidos y proteínas

1.8 Observe el siguiente recurso virtual Figura 4, esté atento a la información

proporcionada

y conteste las preguntas que se encuentran a continuación...

Figura 4. Identificación de aminoácidos y proteínas: laboratorio UPV.

[Link]

Complemento de la explicación de Identificación de aminoácidos y proteínas:

[Link]

a. Relacionar las pruebas bioquímicas descritas en el video y que fueron

desarrolladas, tanto para los aminoácidos como para las proteínas, realice un cuadro
donde escribe columnas de nombre de las pruebas, descripción breve del
procedimiento y explique la reacción química que ocurre con cada una de las
muestras y los reactivos

Nombre de la Descripción breve del Reacción química

prueba procedimiento
Test de Biuret Se marca cada tubo de ensayo En este test, se utiliza una
 con la muestra, se introduce 1 ml solución de sulfato cúprico
de disolución con cada alcalino (Cu²⁺) y se agrega a la
aminoácido o proteína en el tubo muestra. Si hay proteínas
de ensayo y se prepara un tubo presentes, estas reaccionan con el
de ensayo con agua destilada ion cúprico en condiciones
como blanco. En cada tubo de alcalinas para formar un
ensayo donde se ha añadido la complejo de color violeta o
muestra se adiciona 1 ml de púrpura.
reactivo de Biuret y se agita. Al
cabo de 15 minutos se observa el
resultado y se anota.
Test de ninhidrina Se marca cada tubo de ensayo La ninhidrina es un reactivo que
con la muestra, se introduce 1 ml se usa para detectar aminoácidos
de disolución con cada libres en una muestra. Cuando se
aminoácido o proteína en el tubo calienta una muestra que
de ensayo y se prepara un tubo contiene proteínas en presencia
de ensayo con agua destilada de ninhidrina, esta reacciona con
como blanco. En cada tubo de los grupos amino de los
ensayo donde se ha añadido la aminoácidos, formando
muestra se adiciona 7 gotas de la productos coloreados,
solución de ninhidrina y se agita. especialmente uno llamado
Se calientan los tubos en baño "púrpura de Ruhemann". Este
María durante 10 minutos y se cambio de color indica la
observan los resultados presencia de proteínas o
aminoácidos.
Millon Se marca cada tubo de ensayo El test de Millon utiliza una
con la muestra, se introduce 1 ml solución de reactivo de Millon,
de disolución con cada que contiene ácido nítrico y
aminoácido o proteína en el tubo ácido clorhídrico, junto con
de ensayo y se prepara un tubo nitrato de mercurio (II). Cuando
de ensayo con agua destilada se agrega esta solución a una
 como blanco. En cada tubo de muestra que contiene fenoles
ensayo donde se ha añadido la tirosina, un aminoácido presente
muestra se adiciona 5-6 gotas de en las proteínas, se produce una
la solución de Millon y se agita. reacción que forma un complejo
Se calientan los tubos en baño rojo intenso. Este cambio de
María a 30ºC hasta el cambio de color indica la presencia de
color. Se observa y anotan los fenoles en proteínas.
resultados.
Test Se marca cada tubo de ensayo En este test, se añade ácido
xantoproteíco con la muestra, se introduce 1 ml nítrico concentrado a una
(HNO2) de disolución con cada muestra que contiene proteínas.
concentrado aminoácido o proteína en el tubo El ácido nítrico descompone las
de ensayo y se prepara un tubo proteínas en aminoácidos y
de ensayo con agua destilada produce compuestos
como blanco. En cada tubo de nitrofenoles, que reaccionan con
ensayo donde se ha añadido la álcali para formar un color
muestra se adiciona 1 ml de amarillo o anaranjado. Este
ácido concentrado y se agita. Se cambio de color indica la
calientan los tubos en baño de presencia de proteínas.
agua hasta el cambio de color.
Se observa y anotan los
resultados.

b. Realice un cuadro donde identifique las pruebas que presentan un resultado

positivo, explique el cambio de coloración y justifique.

Nombre de la prueba con Cambio de coloración Justificación

resultado positivo
Test de Biuret La reacción es positiva en La reacción del ion cúprico
aquella muestra en la que con las proteínas en
aparezca un color morado. condiciones alcalinas forma
 un complejo de color
violeta o púrpura. La
reacción específica implica
la formación de enlaces
peptídicos, lo que resulta en
la coloración característica.

Test de ninhidrina La aparición de un color Cuando se calienta una

púrpura azulado indica la muestra que contiene
presencia de aminoácidos, proteínas en presencia de
si aparece color amarillo ninhidrina, esta reacciona
indica la presencia de con los grupos amino de los
prolina. aminoácidos, formando
productos coloreados,
especialmente uno llamado
"púrpura de Ruhemann".

Millon Aparición de color rojizo. Cuando se agrega la

solución de Millon a esta
solución a una muestra que
contiene fenoles tirosina se
produce una reacción que
forma un complejo rojo
intenso. Este cambio de
color indica la presencia de
fenoles en proteínas.
Test xantoproteíco (HNO2) Aparición de un color El ácido nítrico
concentrado amarillo. descompone las proteínas
en aminoácidos y produce
compuestos nitrofenoles,
que reaccionan con álcali
 para formar un color
amarillo o anaranjado. Este
cambio de color indica la
presencia de proteínas.

c. Defina los siguientes términos con redacción clara: aminoácidos, proteínas, análisis
cualitativo y análisis cuantitativo.

 Aminoácidos: Son los bloques fundamentales de las proteínas, compuestos

químicos que contienen grupos amino y carboxilo, además de una cadena lateral
única. Los aminoácidos se unen para formar proteínas mediante enlaces peptídicos.
 Proteínas: Son moléculas biológicas compuestas por cadenas de aminoácidos.
Cumplen diversas funciones esenciales en los organismos vivos y su estructura y
función están determinadas por la secuencia de aminoácidos.
 Análisis Cualitativo: Es un enfoque científico para identificar la presencia o
ausencia de sustancias en una muestra. Se basa en observaciones cualitativas para
responder preguntas sobre la composición o características de una muestra.
 Análisis Cuantitativo: Es un enfoque científico que determina la cantidad numérica
de una sustancia en una muestra. Se utiliza para responder preguntas sobre la
cantidad precisa de una sustancia en términos de unidades de medida específicas,
como moles o gramos.
 Practica 3

Conocimientos previos para el desarrollo de la actividad sobre Identificación y propiedades

de lípidos, revisar video anexo.

Identificación de lípidos

3.1 El conocimiento sobre lípidos es imprescindible para el entendimiento de la actividad,

por tal motivo es importante acceder al enlace de la Figura 5.

Figura 5. Identificación de Lípidos. García A, 2020. recuperado en

[Link]

Laboratorio experimental Método Sudán III

3.2 Observe el siguiente video explicativo sobre Laboratorio experimental de Identificación
de lípidos mediante el métodos de Sudan III. Esté atento a la información suministrada,
Figura 6.

Figura 6. Video Laboratorio experimental- Lípidos U. Nacional sede Manizales.

[Link]

3.3 Con base en el experimento y el video explicativo proporcionado, responda:

a. Indique lo que ocurre con la mezcla de aceite – Sudán III y agua – Sudán III.
Explique a qué se debe la diferencia entre ambos resultados

La muestra agua - Sudán III no muestra cambios significativos en la coloración, lo que

indica un resultado negativo. Esto se debe a que el Sudán III es soluble en sustancias
lipofílicas, pero no en agua, por lo que no se mezcla ni tiñe el agua.

La muestra aceite - Sudán III muestra una coloración roja en el aceite, lo que indica un
resultado positivo. La diferencia se debe a que el Sudán III se disuelve en los lípidos del
aceite, formando una solución coloreada, mientras que no puede disolverse en el agua
debido a su naturaleza lipofóbica.

b. ¿Qué ocurre con la emulsión de agua en aceite transcurridos unos minutos de

reposo?

Después de un tiempo de reposo la emulsión de agua en aceite generalmente tiende a

separarse nuevamente en dos fases distintas: una fase acuosa en la parte inferior y una fase
oleosa en la parte superior. Esto se debe a la tendencia natural de las sustancias lipofóbicas
a separarse del agua.

c. ¿Y con la de los otros compuestos empleados? ¿A qué se deben las diferencias

observadas entre ambas emulsiones?

La muestra leche - Sudán III muestra pequeñas amalgamas en la capa superficial de la

leche, lo que indica la presencia de lípidos en la leche. Estos lípidos tiñen el Sudán III y
forman pequeñas gotas lipídicas dispersas en la leche.

La muestra mantequilla - Sudán III permite observar amalgamas o burbujas en la parte

superior que encapsulan los lípidos, indicando una reacción positiva. En este caso, la
diferencia en la observación se debe a que la mantequilla contiene una mayor concentración
de lípidos que la leche.

d. ¿Qué ocurre con la emulsión cuando se le añade detergente?

Cuando se añade detergente a una emulsión de agua en aceite, el detergente actúa como un
emulsionante disminuyendo la tensión superficial entre el agua y el aceite, permitiendo que
las gotas de agua se dispersen más uniformemente en el aceite y evitando que se separen
rápidamente. Es decir, el detergente estabiliza la emulsión, impidiendo que las fases se
separen.

Método de saponificación

Se analizará el método de saponificación mediante registro fotográfico de un grupo de

estudiantes de la UNAD que desarrolló el siguiente protocolo.

3.4 Para el procedimiento adicionaron a un tubo de ensayo 2mL de aceite vegetal y 2mL de
una solución de hidróxido de sodio (NaOH) al 20%, agitaron vigorosamente y llevaron a
incubación en baño maría durante30 minutos a 37°C, una vez terminado el tiempo de
incubación el resultado obtenido fue el que se muestra a continuación en la Figura 7
Figura 7. Saponificación muestra de Aceite de oliva Fuente: Laboratorio Bioquímica CEAD
Acacías 16-04 2019

También puede observar el siguiente video:

[Link] que indica el paso a paso del

método de saponificación como complemento a las imágenes del registro fotográfico.

3.5 Observe y resuelva.

a. ¿Qué tipo de reacción química ocurre con los lípidos cuando se realiza el proceso de
saponificación?

En el proceso de saponificación, los lípidos experimentan una reacción química de

hidrólisis alcalina. Esto implica la ruptura de los enlaces éster presentes en los lípidos
(triglicéridos) mediante la acción de una base fuerte, como el hidróxido de sodio (NaOH) o
hidróxido de potasio (KOH), para formar glicerol (glicerina) y sales de ácidos grasos, que
son los jabones.

b. Identifique las tres fases hidróxido de sodio, aceite y lípido saponificado en la

imagen (se deben señalar en un dibujo o
imagen) resultado del proceso de saponificación.

Aceite
Lípido saponificado

Hidróxido de sodio

Fase de aceite: Representa los lípidos, que pueden ser aceites o grasas.

Fase de lípido saponificado: Aquí se encuentran los jabones, que son las sales de ácidos
grasos resultantes de la reacción entre el NaOH y los lípidos.

Fase de hidróxido de sodio (NaOH): Esta es la solución alcalina que se utiliza como
reactivo para la saponificación.

c. ¿Qué son los jabones? ¿Cómo se pueden obtener los jabones?

Los jabones son sales de ácidos grasos que se forman a través de la saponificación de
lípidos (triglicéridos) con una base fuerte, como el hidróxido de sodio (soda cáustica) o el
hidróxido de potasio. Los jabones son surfactantes y tienen la capacidad de disolver la
grasa y el aceite en agua, lo que los hace útiles en la limpieza y en la fabricación de
productos de higiene personal.

d. ¿Por qué en la saponificación la glicerina aparece en la fase acuosa?

La glicerina aparece en la fase acuosa durante la saponificación debido a que es un

subproducto de la reacción. Cuando los enlaces éster en los lípidos se rompen, liberan
glicerol junto con las sales de ácidos grasos, que son los jabones. La glicerina es soluble en
agua y, por lo tanto, se encuentra en la fase acuosa de la solución.

e. ¿Qué enzima logra en el aparato digestivo la hidrólisis de las grasas?

La enzima que logra la hidrólisis de las grasas en el aparato digestivo se llama lipasa. La
lipasa es producida principalmente por el páncreas y se libera en el intestino delgado, donde
descompone los lípidos en ácidos grasos y glicerol, que luego pueden ser absorbidos y
utilizados por el cuerpo para obtener energía y otras funciones.

Practica 4

Actividad enzimática y su utilización clínica

4.1 Ingresar al simulador de ensayo de actividad enzimática, mediante el enlace de la

Figura 8.

4.2 Antes de iniciar el desarrollo de la práctica da clic en el fundamento del ensayo. Figura
9, parte inferior derecha de la pantalla (recuadro rosado en la imagen).
 Figura 8. Simulador de ensayo de actividad enzimática disponible en línea
[Link]

Figura 9. Simulador de ensayo de actividad enzimática disponible en

[Link]

4.3 Construya una tabla en Excel o en un libro de notas como la tabla que se observa en la
parte derecha del simulador, si desea puede utilizar esta tabla e ir agregando filas durante la
simulación del experimento.
 Combinación Temperatura pH Absorbancia
1 30 3 0,003
2 30 11 0,003
3 40 5 0,005
4 40 6 0,018
5 50 7 0,164
6 70 8 1,221
7 70 9 2,286
8 80 11 0,045
9 80 3 0,061

4.4 Seleccionar 3 temperaturas en un rango de 30◦C a 80◦C y seleccionar 3 pH en el rango

de 3 a 11, en lo posible buscar que tanto las temperaturas como los pH tengan
representantes en toda la amplitud de los rangos. Para seleccionar el pH o la temperatura
debe desplazar los controles hacia arriba o hacia abajo.

4.5 Construir una tabla donde realice las combinaciones de cada temperatura con cada pH
como se indica en la tabla 1. Al final deberá tener 9 combinaciones entre las dos
condiciones a evaluar (reemplace las temperaturas 1 a 3 y pH 1 a 3 seleccionados por usted
en el punto 1), y registre la absorbancia obtenida al realizar la simulación.

4.6 Con cada una de las combinaciones realizar la simulación siguiendo los 4pasos que le
indica el simulador.

4.7 Registre en la tabla después de cada simulación el valor de la absorbancia obtenido en

la pantalla del espectrofotómetro en la casilla de la combinación correspondiente.

4.8 Una vez realizados todos los ensayos simulados grafique la absorbancia en función de
la temperatura o del pH.
 Absorbancia en función de la temperatura
2.6
2.4
2.2
2
1.8
1.6
1.4
1.2
1
0.8
0.6
0.4
0.2
0
30 30 40 40 50 70 70 80 80

Absorbancia en función del pH

2.6
2.4
2.2
2
1.8
1.6
1.4
1.2
1
0.8
0.6
0.4
0.2
0
3 11 5 6 7 8 9 11 3

4.9 A partir de estas gráficas determine la temperatura y el pH óptimo parala actividad de la

enzima 6-O-α-L-ramnosil-D-glucosidasa, justifique la respuesta.

Tabla 1. Temperatura y pH evaluados sobre la actividad enzimática

Análisis:
Podemos observar que la mayor absorbancia se encuentra en la combinación 7, que
corresponde a una temperatura de 70°C y un pH de 9. Por lo tanto, en este conjunto de
datos, la temperatura óptima para la actividad de la enzima X parece ser de 70°C, y el pH
óptimo parece ser de 9. Estas condiciones proporcionan la mayor actividad enzimática
según los datos disponibles.

Practica 5

Conocimientos previos para el desarrollo de la actividad sobre Cuantificación de proteínas,

revisar video anexo.

Cuantificación de proteínas

Se realizará un reconocimiento donde se explica los fundamentos de la cuantificación de

proteínas, accediendo al enlace de la Figura 10.

Figura 10. Cuantificación de proteínas Peñaranda L. 2020. Link:

[Link]
Comprobación de la cuantificación de Proteínas

5.1 Visualizar el siguiente video donde se explican las instrucciones para poder acceder al
simulador. Figura 11.

Figura 11. Explicación del funcionamiento de simulador. Bioquímica UNAD. 2020.

Práctica 5. Disponible en el link: [Link]

5.2 La cuantificación de proteínas se realizará empleando el simulador de

espectrofotometría UV-VIS de Biomodel, al que se podrá acceder en Figura 12.

Figura 12. Simulador de espectrofotómetro UV-VIS disponible en línea

[Link]

5.3 Leer atentamente las instrucciones y proceder a realizar las Actividades, siguiendo paso
a paso las instrucciones dadas por el simulador: Actividad 1.

Relación entre absorbancia y concentración: Se desarrolla hasta la gráfica del análisis

cuantitativo.
Procedemos a hallar las concentraciones:

Usamos la fórmula de: c1v1=c2v2

Para la cubeta 1, sabiendo que c1= 80 µM, v1= 3mL, v2= 3mL y se encuentra c2:

c2 = 80 µM

Para la cubeta 2, sabiendo que c1= 80 µM, v1= 2mL, v2= 3mL y se encuentra c2:

c2 = 53,33 µM

Para la cubeta 3, sabiendo que c1= 80 µM, v1= 1mL, v2= 3mL y se encuentra c2:

c2 = 26,67 µM
Análisis cualitativo de resultados:

La cubeta 3, que contiene la mayor cantidad de agua y la menor cantidad de pNF, mostró la
menor absorbancia. En contraste, la cubeta 2, con un tono amarillo más claro debido a su
mayor concentración de pNF y menor cantidad de agua, registró una absorbancia más alta
en segundo lugar. La tercera cubeta, que contenía únicamente pNF, obtuvo la absorbancia
más alta de todas. Estos resultados indican claramente que a medida que aumenta la
cantidad de pNF utilizada, la absorbancia también aumenta de manera proporcional.

Análisis cuantitativo de resultados:

Cubeta C (uM) A405

1 80 1,615
2 53,33 1,059
3 25,67 0,528
 1.8

1.6 1.615

1.4

Absorbancia a 405 nm
1.2
1.059
1

0.8

0.6
0.528
0.4

0.2

0
80 53.33 25.67
Concentración (uM)

Se aprecia una tendencia lineal, lo que confirma que existe una relación directamente
proporcional entre la concentración y la absorbancia.

Actividad 2 y 2A. Fundamento de un ensayo de cuantificación de proteínas: Se

desarrolla hasta la gráfica del análisis cuantitativo.

Actividad Hb1. Espectro de absorción de la hemoglobina: Se desarrolla completa. Espectro

de absorción de las diversas formas redox de la hemoglobina: Se desarrolla completa.

Nota: Recuerde tomar capturas de los datos y espectros en cada fase del proceso en cada
actividad.

Fundamento de un ensayo de cuantificación de proteínas

El que se conoce como método de Bradford es un ensayo habitual para medir la

concentración de proteínas en una muestra. Se basa en que la unión del colorante azul de
Coomassie (Coomassie Brilliant Blue G250) a las proteínas modifica el espectro visible de
aquél.

Materiales: Se dispone de
Reactivo de Bradford, que contiene azul de Coomassie, metanol o isopropanol, y ácido
fosfórico.

Proteínas disueltas en el reactivo

Diseño del experimento

Prepara una cubeta sólo con reactivo de Bradford y otras dos cubetas (o más) con
cantidades diferentes de la disolución de proteína. Añade a todas las cubetas la cantidad de
reactivo necesaria para un volumen total de 3 mL en cada una.

Para ayudarte a hacerlo, rellena previamente esta tabla (o mejor, una que hagas en tu
cuaderno de laboratorio) con los volúmenes que piensas poner en cada cubeta:

Calibración

Introduce la primera cubeta (que sólo contiene el reactivo de Bradford) en el

espectrofotómetro, ajusta la longitud de onda a 595 nm y pulsa el botón “A=0”. Esta
muestra se denomina el "tubo blanco" o "blanco de reactivos" y sirve para que el color
propio del reactivo no se considere en la determinación de proteínas.

Medida

A continuación, introduce el resto de cubetas, de una en una, en el espectrofotómetro y

anota sus medidas de absorbancia.
Análisis cualitativo de resultados

Observa la relación entre el color de las cubetas y el valor de absorbancia. Comparando

entre sí las medidas, ¿observas alguna dependencia entre la absorbancia y la mayor o menor
concentración de proteínas en la cubeta?

Respuesta: Sí, a mayor concentración de proteínas se observa una mayor absorbancia.

Análisis cuantitativo de resultados:

Calcula la concentración de proteínas en la mezcla final de cada cubeta, sabiendo que la

concentración en la botella es de 800 mg/L. Prepara una tabla con los datos y traza una
gráfica representando A frente a C. ¿Cómo puedes describir lo que observas?

Cubeta C (uM) A405

1 0 0
2 266,67 0,192
3 533,33 0,361

0.4
0.365
0.35

0.3
Absorbancia a 405 nm

0.25

0.2
0.179
0.15

0.1

0.05

0 0
0 266.67 533.33
Concentración (uM)

Procedemos a hallar las concentraciones:

Usamos la fórmula de: c1v1=c2v2

Para la cubeta 1, sabiendo que c1= 800 mg/L, v1= 0 mL, v2= 3mL y se encuentra c2:

c2 = 0 mg/L

Para la cubeta 2, sabiendo que c1= 800 mg/L, v1= 1mL, v2= 3mL y se encuentra c2:

c2 = 266,67 mg/L

Para la cubeta 3, sabiendo que c1= 800 mg/L, v1= 2 mL, v2= 3mL y se encuentra c2:

c2 = 533,33 mg/L

Respuesta: Se aprecia una tendencia lineal, lo que confirma que existe una relación
directamente proporcional entre la concentración y la absorbancia.

Se mezcla 1 mL de una muestra problema con reactivo de Bradford, para un volumen

total de 3 mL. Calcula la concentración de proteínas en la muestra de partida si el
ensayo ha proporcionado un valor A595 = 0,173.

Para la determinación de una muestra problema que se encuentra dentro de los parámetros
de la curva de calibración se puede usar la expresión derivada de la ecuación de recta:

0,003
x= y +
0,007

Donde “X” corresponde a un valor de concentración en mg/L y “Y” a la absorbancia

respuesta de la medida de una muestra problema.

Usando la ecuación de la recta antes encontrada y despejando “x” y tomando “y” como la
absorbencia respuesta: 0,049, tenemos que:

0,003
x=0,049+
0,007

c = 70,4 mg/ℓ
Actividad 2A

El que se conoce como método de Bradford es un ensayo habitual para medir la

concentración de proteínas en una muestra. Se basa en que la unión del colorante azul de
Coomassie (Coomassie Brilliant Blue G250) a las proteínas modifica el espectro visible de
aquél.

Materiales:

Se dispone de:

 Reactivo de Bradford (concentrado ×3), que contiene azul de Coomassie, metanol o

isopropanol, y ácido fosfórico
 Proteínas disueltas en agua

Diseño del experimento

Todas las cubetas deben contener 1 mℓ del reactivo de Bradford concentrado y un volumen
total de 3 mℓ. En la primera cubeta no se pondrá proteína, mientras que otras dos cubetas
llevarán cantidades diferentes de la disolución de proteína. Utiliza agua para completar el
volumen. Para ayudarte a hacerlo, rellena previamente esta tabla (o mejor, una que hagas en
tu cuaderno de laboratorio) con los volúmenes que piensas poner en cada cubeta:

Calibración

Introduce la primera cubeta (que sólo contiene reactivo de Bradford) en el

espectrofotómetro, ajusta la longitud de onda a 595 nm y pulsa el botón “A=0”. Esta
muestra se denomina el "tubo blanco" o "blanco de reactivos" y sirve para que el color
propio del reactivo no se considere en la determinación de proteínas.

Medida
A continuación, introduce el resto de cubetas, de una en una, en el espectrofotómetro y
anota sus medidas de absorbancia.

Análisis cualitativo de resultados

Observa la relación entre el color de las cubetas y el valor de absorbancia. Comparando

entre sí las medidas, ¿observas alguna dependencia entre la absorbancia y la mayor o menor
concentración de proteínas en la cubeta?

Respuesta: La dependencia se da por la ley de Beer donde relaciona la absorbancia con

intensidad de luz que se encuentre presente al pasar la luz por la muestra.

Análisis cuantitativo de resultados

Calcula la concentración de proteínas en la mezcla final de cada cubeta, sabiendo que la

concentración en la botella es de 800 mg/ℓ. Prepara una tabla con los datos y traza una
gráfica representando A frente a C. ¿Cómo puedes describir lo que observas?

Cubeta C (uM) A405

1 0 0
2 266,67 0,179
3 533,33 0,365
 0.4
0.365
0.35

0.3
Absorbancia a 405 nm

0.25

0.2
0.179
0.15

0.1

0.05

0 0
0 266.67 533.33
Concentración (uM)

Respuesta: En la gráfica se observa un comportamiento lineal, en la que evidenciamos que

la absorbancia es directamente proporcional a la concentración, lo cual se corresponde con
la literatura. (Herráez, 2020) El R se encuentra cercano a 1 por lo tanto el resultado es
fiable afirmando que hay una relación lineal de los tres valores obtenidos.

Actividad 3. Espectro de absorción de la hemoglobina

Diseño del experimento

Utilizando agua y la disolución de hemoglobina, prepara distintas diluciones y analiza su

espectro UV-VIS completo. Para ello, llena una cubeta con hemoglobina y en las otras dos
cubetas prepara sendas mezclas diferentes de hemoglobina con agua. Todas las cubetas
deben tener un volumen total de 3 mℓ.

Para ayudarte a hacerlo, rellena previamente esta tabla (o mejor, una que hagas en tu
cuaderno de laboratorio) con los volúmenes que piensas poner en cada cubeta:
Medida

A continuación, introduce al espectrofotómetro las cubetas, de una en una, y pulsa el botón

para registrar el espectro entre 200 y 800 nm. Pulsa en el icono de cámara de fotos y copia
la imagen resultante para poderlas comparar todas al terminar el experimento.

3 ml de hemoglobina

2 ml de hemoglobina
 1 ml de hemoglobina

Análisis cualitativo de resultados

Compara los 3 espectros. ¿Qué efecto se observa al diluir la hemoglobina de partida?

¿Cambia la posición (λ) de los picos de absorción máxima? Describe lo que observas.

Respuesta: Los efectos de disminución en la absorbancia de una muestra se deben a la

relación proporcional que existe entre la concentración de la sustancia en la muestra y la
absorbancia medida. Cuando se modifica el punto de máxima absorbancia de una sustancia,
se inicia una disminución en la absorbancia a medida que nos alejamos de dicho punto.

Lo que estaríamos observando sería el fenómeno o "ley de Beer-Lambert" que dicta que la
absorbancia de una sustancia es directamente proporcional a su concentración y a la
longitud del camino que la luz recorre a través de la muestra. (Lumitos Ag, 2020) Cuando
la longitud de onda utilizada para la medición se aleja del máximo de absorbancia de la
sustancia, la relación lineal entre absorbancia y concentración se debilita, lo que resulta en
una disminución en la precisión de las mediciones de concentración.

2ª medida: Observando el espectro, anota dos longitudes de onda (de la región visible,
no ultravioleta) en las que haya un pico (un máximo local de absorción). A
continuación, mide y anota la absorbancia de las 3 cubetas a cada una de esas dos
longitudes de onda. Representa tus resultados en una gráfica, considerando que la
concentración de partida de hemoglobina (en la botella) es de 200 mg/ℓ.

Anotamos las longitudes de onda 400 y 420 nm en la que observamos picos.

Análisis cuantitativo de resultados:

¿Cómo puedes describir las conclusiones de lo observado? ¿Cuál de las longitudes de onda
sería útil para determinar la concentración de muestras problema de hemoglobina?

Longitud onda Longitud onda

Volumen Hb Concentración
400 nm 420 nm
1 66,67 0,275 0,492
2 133,33 0,550 0,989
3 200 0,822 1,495

1.6

1.4

1.2

1
Absorbancia

0.8

0.6

0.4

0.2

0
66.67 133.33 200
Concentración mg/L

Respuesta: Según los datos obtenidos hay una relación directa entre la concentración de
hemoglobina (Hb) y la absorbancia medida a diferentes longitudes de onda (400 nm y 420
nm). A medida que aumenta la concentración de hemoglobina, la absorbancia también
aumenta tanto a 400 nm como a 420 nm. En este caso, parece que la longitud de onda de
420 nm es más adecuada para determinar la concentración de hemoglobina, ya que muestra
una mayor correlación entre la concentración y la absorbancia que la longitud de onda de
400 nm.
Referencias

Cabañas, V. (2020). Guia de prácticas.

[Link]

2__material_de_laboratorio.htm

Herráez. (2020). Cálculos con absorbancia y concentración.

[Link]

Lumitos Ag. (2020). Ley de Beer Lambert.

[Link]

Papelmatic. (2023, febrero 23). Pictogramas en productos químicos: ¿Qué significan?

Papelmatic. [Link]

significan/