UNIVERSIDAD LA SALLE CANCÚN

LICENCIATURA EN NUTRICIÓN Y GASTRONOMÍA

PRÁCTICA 2

INTEGRANTES

NAVARRETE CAROLINA

RUIZ DULCE

GALLEGOS XHUNAXI

PANIAGUA DANIELA

LEFEVRE ELISE
PRÁCTICA 2
ESTERILIZACIÓN DE MATERIAL, PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO Y ASEPSIA
OBJETIVO: Conocer la esterilización por vapor de agua y presión (autoclave), la preparación de
medios de cultivo y la importancia de las condiciones de asepsia en el laboratorio.

Introducción.

El autoclave desempeña un papel crucial en microbiología al garantizar la esterilización de equipos,

medios de cultivo y sustancias utilizadas en el laboratorio. En el contexto de la manipulación frecuente
de organismos microscópicos como bacterias, hongos y virus, la prevención de la contaminación
cruzada es de suma importancia. El autoclave, una técnica basada en el principio del calor húmedo,
ofrece un método fiable: las altas temperaturas, generalmente alrededor de 121°C, combinadas con
una mayor presión, permiten erradicar las formas de vida microbianas, incluidas las resistentes a las
esporas. Al garantizar un ambiente de laboratorio libre de contaminantes nocivos, el autoclave se
convierte en una herramienta esencial para garantizar la confiabilidad de los resultados
experimentales en microbiología.

La preparación meticulosa de los medios de cultivo constituye un paso fundamental que influye
directamente en la calidad de la investigación de laboratorio. Estos medios cuidadosamente
elaborados proporcionan a los microorganismos un entorno propicio para su crecimiento, lo que
permite a los científicos estudiar, aislar y caracterizar estas entidades microscópicas. Este paso no se
limita a proporcionar un sustrato nutritivo, sino que también pretende crear condiciones óptimas que
favorezcan las características específicas de cada especie.

Las condiciones asépticas del laboratorio van más allá del requisito de limpieza y tienen una
importancia crucial en microbiología. Estas condiciones tienen como objetivo prevenir la
contaminación no deseada de muestras, cultivos y superficies de trabajo, garantizando así la
integridad de los resultados experimentales. Las prácticas asépticas, desde la esterilización de equipos
hasta la adopción de procedimientos meticulosos, constituyen una barrera protectora esencial contra
las intrusiones microbianas, preservando la validez de la investigación.

Gracias a esta práctica tuvimos la oportunidad de experimentar y aprender a dominar estos tres
puntos fundamentales de la microbiología.

MATERIALES Y REACTIVOS

MATERIAL POR EQUIPO REACTIVOS

10 Cajas petri 1 espátula Agar nutritivo
esterilizadas
3 pipetas de 10 mL 1 pipeteador manual Agar dextrosa-papa
1 parrilla de 1 probeta de 100 mL Agar bacteriológico
calentamiento-agitación
1 autoclave 1 asa de siembra Agua destilada
 1 potenciómetro 1 agitador magnético Etanol
1 mechero bunsen 2 guantes de asbesto Cloro
1 balanza
1 encendedor
1 bolsa de algodón MATERIAL POR GRUPO
1 plumón negro indeleble Autoclave
1 rollo de cinta masking Incubadora
tape
1 rollo papel aluminio Baño maría (45-50ºC)

Procedimientos.

1. Se colocaron las cantidades del agar

2. Se hicieron los tapones de los matraces
3. Se tapó y se envolvió con papel Kraft los tubos de ensayo y se colocó cinta de laboratorio
4. Se disolvieron los agares en el calentador al punto de ebullición
5. Se sacó la mosca y se colocó el tapón y luego el capuchón del matraz y se le colocó cinta de
laboratorio
6. Se colocaron los matraces en la olla de presión
7. En el laboratorio de alimentos y bebidas se selló la olla de presión y se dejó calentar a fuego
medio y se esperó hasta que llegue a la parte verde de la válvula para después empezar a
contar 15 minutos
8. En el laboratorio dejamos enfriar la olla
9. Se encendió el mechero para esterilizar el área y se llenaron las cajas Petri con los diferentes
tipos de agares
10. Se esperó a que se gelatinice el agar
11. Se reclutaron muestras de saliva, teléfono, esponja y la nariz
12. Se guardaron las cajas Petri en la incubadora
13. Para el seguimiento del crecimiento de los cultivos se visitó el laboratorio 3 veces por una
semana y se tomaron fotos para observar el crecimiento
Resultados.

Primera semana ( Miércoles ) Primera semana (Viernes )

DISCUSIÓN

En esta sección se analizarán todos los resultados obtenidos y los problemas que tuvieron durante la
esterilización, preparación y manejo de los cultivos, de igual manera dar respuesta a las siguientes
preguntas:

1. ¿Debes tocar las cajas de agar con tus manos?

No, porque las manos pueden introducir contaminantes que pueden afectar a los resultados del
cultivo.

2. ¿Puedes encontrar organismos en el aire?

Si, pueden ser bacterias, virus, u otro tipo de partículas, pueden provenir del suelo, el agua, plantas y
animales.

3. ¿Cuándo trabajas con cultivos microbianos, puedes hablar?

Se recomienda no hablar mientras se trabaja con cultivos porque se puede contaminar la muestra,
pero igual se puede usar cubrebocas para evitar esto.

4. ¿Por qué las placas de agar deben mantenerse invertidas durante la incubación?

Para evitar la evaporación si la placa es almacenada durante períodos prolongados de tiempo, la que
puede afectar la eficiencia del crecimiento bacteriano, o permitir el crecimiento de organismos
indeseados, como el moho.

(¿Por Qué Las Placas De Agar Deben Mantenerse Boca Abajo?, 2018)

Conclusión.

En esta práctica pudimos aprender sobre cómo preparar un medio de cultivo y que precauciones
debemos de tener al momento de hacerlo. Fue interesante ver como cada 3 días que íbamos al
laboratorio nuestras muestras iban creciendo de una forma distinta a cada día que íbamos y siempre
había colores o texturas nuevas. Con esta práctica pudimos ver como cada microorganismo crece de
una manera distinta a los demás y su capacidad de crecer en medios específicos.
CUESTIONARIO

1. ¿Qué es un medio de cultivo?

Es un conjunto de componentes que crean las condiciones necesarias para el desarrollo de los
microorganismos. (Garcia-Valdes, s.f.)

2. ¿cuáles son los constituyentes habituales de los medios de cultivo? Explica cada uno.

• Agar: Se suele utilizar como un agente gelificante en los medios de cultivo para dar solidez.
• Extractos: Su preparación consiste en que ciertos órganos o tejidos animales o vegetales son
extraídos con agua y calor y posteriormente concentrados hasta la forma final de pasta o
polvo.
• Peptonas: Son mezclas complejas de compuestos orgánicos, nitrogenados y sales minerales,
que se obtienen por digestión enzimática o química de proteínas animales o vegetales (soja
caseína carne, etc.).
• Fluidos corporales: Con frecuencia es necesario añadir a los medios de cultivo de algunos
patógenos sustancias como sangre completa, sangre desfibrilada, plasma o suero sanguíneo,
sobre todo para conseguir el primer aislamiento a partir del hospedador.
• Sistemas amortiguadores: Para mantener el pH dentro del rango óptimo del crecimiento
bacteriano a veces, es necesario añadir algunos componentes al medio de cultivo.
• Indicadores de PH: Con el objeto de poder detectar variaciones en el pH debido a
fermentaciones u otros procesos, se hace necesario a veces añadir indicadores ácido-base
que nos lo indiquen.
• Agentes reductores: su objetivo es crear en los medios de cultivo condiciones que permitan
el desarrollo de los gérmenes microaerófilos ò anaerobios.
• Agentes selectivos: adición de determinadas sustancias a un medio de cultivo puede
convertirlo en selectivo. (Viresa, 2021)

3. ¿cuál es la diferencia entre un medio de cultivo sintético y un medio de cultivo complejo?

son medios compuestos por productos químicos conocidos y se utilizan para realizar estudios
metabólicos (Polilla Studio, n.d.) y los medios de cultivo complejos son medios que poseen
componentes químicos no definidos, como peptonas, extracto de carne y extracto de levadura, que
satisfacen los requerimientos nutricionales de diferentes microorganismos. Se utilizan para cultivar
microorganismos exigentes con requerimientos nutricionales complejos. (Preparación De Los
Medios De Cultivo Microbiológico, n.d.)

4. Definir los siguientes términos: desinfección, esterilización, sanitización, antisepsia,

quimioterapia, germicida, bactericida, bacteriostático, biocida, agar, cultivo puro,

cultivo axénico, colonia, medio de cultivo, incubación, contaminación.

• Desinfección: Procedimiento, que, utilizando técnicas físicas o químicas, permite eliminar,

matar, inactivar o inhibir a un gran número de microorganismos encontrados en el
ambiente; por lo que, en dependencia del agente antimicrobiano utilizado, lograremos una
desinfección propiamente o un efecto esterilizante. (Pérez, 2006)
 • Esterilización: Procedimiento que no admite la presencia de agentes biológicos. Esta
pretensión de negación absoluta está sujeta a la cinética del proceso, y depende del control
estricto del agente esterilizante, del tiempo de acción, de la biocarga presente y de
sustancias o eventos que puedan interferir en la acción. (Pérez, 2006)
• Sanitización: acción y efecto de reducir la presencia de microorganismos en el ambiente
hasta un nivel hasta el cual se considere saludable para el ser humano. (Laloebi, 2020)
• Antisepsia: Procedimiento que pretende, mediante el empleo de sustancias químicas, la
disminución de microorganismos (acción biocida) o impedir su proliferación (acción
biostática). (Pérez, 2006)
• Quimioterapia: La quimioterapia es el uso de fármacos para destruir las células cancerosas.
(cancer.net, 2022)
• Germicida: Cualquier sustancia o proceso que destruye gérmenes (bacterias, virus u otros
microbios que pueden causar infecciones o enfermedades). También se llama microbicida.
(NCI, s.f.)
• Bactericida: Agente que actúa destruyendo las bacterias. (Bactericida. Diccionario Médico.
Clínica Universidad De Navarra., n.d.)
• Bacteriostático: Agente que inhibe el desarrollo de las bacterias y se basa en los mecanismos
de defensa del huésped para la erradicación final de la infección. (Bacteriostático.
Diccionario Médico. Clínica Universidad De Navarra., n.d.)
• Biocida: Agente que mata a un organismo. (Biocida. Diccionario Médico. Clínica Universidad
De Navarra., n.d.)
• Agar: Polisacárido natural complejo, compuesto de galactosa y ácido poligalacturónico, que
se obtiene de las algas rojas. Por sus propiedades, es el agente más empleado para
solidificar medios de cultivo (Agar. Diccionario Médico. Clínica Universidad De Navarra., n.d.)
• cultivo puro: Medio sólido o líquido en el que se ha propagado una población de un
determinado tipo de microorganismo (Cultivo. Diccionario Médico. Clínica Universidad De
Navarra., n.d.)
• cultivo axénico: Cultivo de una sola especie no contaminado ni asociado con algún otro
organismo viviente. (Cultivo Axénico | NAL Agricultural Thesaurus, n.d.)
• Colonia: grupo de seres vivos organizados bajo bases cooperativas. (colaboradores de
Wikipedia, 2023)
• medio de cultivo: es una preparación líquida o sólida utilizada para el crecimiento, transporte o
mantenimiento de microorganismo. (UTEG, 2019)
• Incubación: - Es el intervalo de tiempo que transcurre entre la exposición a un agente
infeccioso y la aparición del primer signo o síntoma de la enfermedad de que se trate, o en el
caso de un vector, de la primera vez en que es posible la transmisión. (OPS, s.f.)
• Contaminación: es la introducción de un agente contaminante, que puede ser líquido, sólido
o gaseoso, en un medio natural. Por sus características químicas, estos agentes o elementos
producen inestabilidad y dañan el funcionamiento del ecosistema. (Equipo editorial, Etecé,
2021)

5. Explicar en que difiere la esterilización de medios de cultivo de la pasteurización de

productos lácteos.

6. Elabora un cuadro comparativo de las diferencias (definición, tipo de microorganismos, ejemplos

de medios) entre los medios de cultivo de enriquecimiento, selectivos y diferenciales.
7. Elabora un diagrama mostrando la clasificación de los métodos físicos, químicos y biológicos que
se utilizan para controlar el crecimiento microbiano.

Referencias

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Bacteriostático. Diccionario médico. Clínica Universidad de Navarra. (n.d.). https://www.cun.es.

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