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Biodiversidad y potencial hidrocarbonoclástico de hongos aislados de crudo y sus

derivados : Un meta-análisis Biodiversity and hydrocarbonoclastic potencial of
fungi isolated from...

Article · January 2012

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Beatriz Pernia Jhonny Demey

Universidad de Guayaquil (UG) Escuela Superior Politécnica del Litoral (ESPOL)
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Leopoldo Naranjo
Universidad Regional Amazónica IKIAM
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Revista Latinoamericana de BiotecnologíaVolumen 3 No.
Ambiental 1, 2012
y Algal

Revista Latinoamericana de
Biotecnología Ambiental y Algal

www3.inecol.edu.mx/relbaa

ISSN: 2007-2570
(Versión Electrónica)
 Revista Latinoamericana de Biotecnología Ambiental y Algal

Editor en Jefe

Eugenia. J. Olguín

Editores Asociados

Gabriel Acién Fernández

Roberto de Philippis
Ever Morales Avendaño
Hugo Moreira Soares
Sergio Revah
Gloria Sánchez Galván

REVISTA LATINOAMERICANA DE BIOTECNOLOGÍA AMBIENTAL Y ALGAL

Año 3, No.1, enero - julio 2012, es una publicación semestral editada por el Instituto de Ecología, A,C.
Carretera antigua a Coatepec No. 351, El Haya, Xalapa, Veracruz, C.P. 91070, México. Tel (228) 8 42 18
49. Editor responsable: Dra. Eugenia Judith Olguín Palacios. ISSN: 2007-2570. Responsable de la última
actualización de este número: Ing. Ricardo Erik González Portela. Fecha de última modificación: 27 de
julio de 2012. Las opiniones expresadas por los autores no necesariamente reflejan la postura del editor
de la publicación. Queda estrictamente prohibida la reproducción total o parcial de los contenidos e
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INECOL

MEXICO
 Revista Latinoamericana de Biotecnología Ambiental y Algal

Editor en Jefe
Eugenia J. Olguín
Instituto de Ecología, A.C., México
Editores Asociados
Gabriel Acién Fernández Roberto De Philippis Ever Morales Avendaño
Universidad de Almería, Università degli Studi di Firenze, Universidad del Zuila,
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Catarina,Brasil México Metropolitana-Cuajimalpa, México
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Estado de Nuevo León, México Metropolitana-Cuajimalpa, Centro de Investigación y de
México Estudios Avanzados del
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Cataluña, España Metropolitana-Cuajimalpa, Diseño del Estado de Jalisco,
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México Avanzados, Venezuela de México

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Producción Editorial
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© Derechos Reservados
REVISTA LATINOAMERICANA DE BIOTECNOLOGÍA AMBIENTAL Y ALGAL // INSTITUTO DE ECOLOGÍA, A.C.
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Revista Latinoamericana de Biotecnología Ambiental y Algal

Objetivos y Temática

La Revista Latinoamericana de Biotecnología Ambiental y Algal (RELBAA), es la

primera revista en la región, dedicada a la publicación de trabajos inéditos de
carácter científico y/o de desarrollo tecnológico, revisiones críticas y notas científicas
relacionados con la biotecnología ambiental y algal, y también con bioprocesos más
limpios para el desarrollo sustentable. Asimismo, ofrece un foro para que la
comunidad científica y tecnológica latinoamericana, comunique sus investigaciones en
el ámbito internacional. Los manuscritos enviados se someterán a un proceso riguroso
de revisión por pares.

Se considera a la Biotecnología Ambiental como un campo multidisciplinario que

integra las ciencias y la ingeniería con el objeto de aprovechar el potencial bioquímico
de los microorganismos, plantas, animales y su material genético, para desarrollar,
usar y regular sistemas biológicos para la remediación de ambientes contaminados
(suelo, aire, agua), así como para generar procesos ambientalmente pertinentes para
el uso sustentable de los recursos naturales y la conservación del medio ambiente.

Por otra parte, se considera a la Biotecnología Algal como un campo en donde se

integran las ciencias y la ingeniería para el aprovechamiento de las microalgas y de las
macroalgas con la finalidad de generar nuevos productos de interés alimentario,
farmacéutico o energético y/o para lograr el reciclaje de nutrientes de aguas
residuales y/o la captura de carbono y su transformación en biomasa algal.

Finalmente, es importante señalar que en esta revista también se incluye la

temática de los Bioprocesos más Limpios, en consideración a que contribuyen al
desarrollo industrial sustentable. Se adopta la definición de Producción más Limpia de
Naciones Unidas: “es la aplicación continua de una estrategia ambiental integrada y
preventiva a procesos, productos y servicios para incrementar la eco-eficiencia y
reducir riesgos a los seres humanos y el medio ambiente”.

La revista es una publicación semestral a cargo de un grupo de investigadores del

área de Biotecnología Ambiental del Instituto de Ecología, A.C. Ocasionalmente
aparecerán números especiales. Se aceptan trabajos en español, inglés y portugués.

Considerando que la tendencia actual es la publicación en formato electrónico

logrando ahorro de papel, esta revista se publicará exclusivamente en este formato y
estará accesible al público en general sin costo, por lo menos el primer año. Sin
embargo, es esencial que los usuarios citen los artículos dando crédito a los autores y
a la revista, citando la referencia completa como aparece en todas las páginas de
cada uno de ellos.
Revista Latinoamericana de Biotecnología Ambiental y Algal

CONTENIDO
Vol. 3 No. 1
2012

Biodiversidad y potencial hidrocarbonoclastico de hongos aislados de crudo y sus

derivados: Un meta-análisis.
Beatriz Pernía, Jhonny Rafael Demey, Ysvic Inojosa y Leopoldo Naranjo-Briceño
(Venezuela) ..................................................................................................................................... 1

Evaluación global de la producción de biocombustibles con microalgas: Establecimiento

de capacidades, limitaciones y factores determinantes de la viabilidad del proceso.
F.G. Acién, J.M. Fernández-Sevilla, J.J. Magán, A. González-Céspedes,
y E.Molina (España) ...................................................................................................................... 41

Development of a methodology for net energy analysis in biorefineries, regarding

microalgae cultivation to improve energy yields in industrial wastes.
Matheus Rufino Oliveira, José Osvaldo Beserra Carioca,
y Sávio Macambira (Brasil) .......................................................................................................... 59

Remoción de nutrientes por tres cultivos de microalgas libres e inmovilizados.

B.M Hernández-Reyes, M.C. Rodríguez-Palacio, C. Lozano-Ramírez,
y P. Castilla-Hernández (México) ................................................................................................. 80
 Pernía B., Demey J.R., Inojosa Y., Naranjo-Briceño L. 2012. Rev Latinoam Biotecnol Amb Algal 3(1):1-40

Biodiversidad y potencial hidrocarbonoclastico de hongos

aislados de crudo y sus derivados: Un meta-análisis
Beatriz Pernía*, Jhonny Rafael Demey, Ysvic Inojosa, y Leopoldo Naranjo-Briceño

Dirección de Área de Energía y Ambiente, Fundación Instituto de Estudios Avanzados (IDEA),

Sartenejas, Caracas 1080, Venezuela, http://www.idea.gob.ve/

*Autor de correspondencia: [email protected]

Resumen
La explotación, producción, refinación y transporte de petróleo y sus derivados conlleva
ocasionalmente accidentes técnicos y operacionales que causan severo deterioro al ambiente.
Existen hongos capaces de biotransformar o biodegradar hidrocarburos que pueden ser utilizados
como estrategia en la micorremediación de aguas y suelos impactados por la actividad petrolera.
Con el objetivo de determinar la diversidad de hongos aislados de diferentes sustratos
contaminados con hidrocarburos y sus derivados, así como determinar su capacidad degradativa,
se realizaron meta-análisis utilizando la información disponible en las bases de datos científicas
Web of Science y SciFinder Scholar. Los resultados de los meta-análisis mostraron que, del total
de hongos reportados como aislados de crudo, sus derivados, y sustratos impactados con
hidrocarburos, 83% pertenecen al Phylum Ascomycota, 10% al Phylum Zygomycota, 6% al
Phylum Glomeromycota y 1% al Phylum Basidiomycota. Los sustratos con mayor diversidad
fúngica fueron los suelos impactados con crudo y asfalto natural, obteniéndose la menor
diversidad en suelos contaminados con diesel y gasolina. Los géneros de mayor frecuencia fueron
Penicillium (18%), Aspergillus (17%) y Fusarium (6%). En función del porcentaje de
degradación de hidrocarburos totales de petróleo (TPH), el grupo que presentó mayor
degradación fue el formado por los géneros Phanerochaete, Coriolus, Trametes, Pleurotus,
Bjerkandera, Rhizopus, Emerciella y Aspergillus (TPH: 52±3.53) y, con respecto a las fracciones
de saturados y aromáticos del crudo, los grupos formados por los géneros Phanerochaete,
Coriolopsis, Trametes, Pleurotus, Emerciella, Fusarium y Beauveria (74.43±3.40%) y Trametes,
Pleurotus, Fusarium y Coriolopsis (97.75±2.25%), respectivamente. Así mismo, se encontraron
evidencias de degradación de las fracciones de resinas y asfaltenos (10-28% y 10-40%,
respectivamente) por los géneros Aspergillus, Candida, Emericella, Eupenicillium, Fusarium,
Graphium, Neosartorya, Paecilomyces y Pichia. Este trabajo representa el primer meta-análisis
sobre la diversidad fúngica aislada de ambientes contaminados con crudo y sus derivados, así
como de su capacidad hidrocarbonoclástica, a través de la revisión detallada de trabajos
científicos publicados en los últimos 50 años y el análisis de sus resultados.

Palabras clave: degradación, hidrocarburos, hongos, micorremediación, petróleo

1
 Biodiversity and hydrocarbonoclastic potencial of fungi
isolated from crude and petroleum derivates: a meta-analysis
Abstract
Exploitation, production, refining and transportation of crude oil and its derivatives occasionally
involves technical and operational accidents causing damage to the environment. Some fungi
inhabiting oil-polluted environments are able to transform oil hydrocarbons so they have a high
potential to be use in mycoremediation strategies of oil-polluted soil and water by the oil
industries activities. In order to determine the fungal diversity isolated from crude oil, water and
oil-polluted soils, and hydrocarbon contaminated environments, as well to determine their
hydrocarbon degradative capabilities, meta-analysis using information reported in Web of
Science and SciFinder Scholar scientific databases were performed. The results showed that the
total of fungal diversity isolated is constituted by Phylum Ascomycota (83%), Zygomycota
(10%), Glomeromycota (6%), and Basidiomycota (1%). The substrates with major diversity were
oil-polluted soils and natural asphalt. Members of the genus Penicillium (18%), Aspergillus
(17%) and Fusarium (6%) were the most predominant. The genus with a major percentage of
total petroleum hydrocarbons (TPH) degradation were: Phanerochaete, Coriolus, Trametes,
Pleurotus, Bjerkandera, Rhizopus, Emerciella and Asperguillus (52±3.53), respect to degradation
of saturate and aromatic fractions of crude oil were obtained two groups formed by the genus:
Phanerochaete, Coriolopsis, Trametes, Pleurotus, Emerciella, Fusarium and Beauveria
(74.43±3.40%), and Trametes, Pleurotus, Fusarium and Coriolopsis (97.75±2.25%),
respectively. Likewise, evidence of degradation of resins and asphaltenes fractions of crude oil
(10-28% and 10-40%, respectively) were reported by the genus Aspergillus, Candida,
Emericella, Eupenicillium, Fusarium, Graphium, Neosartorya, Paecilomyces and Pichia. This
work represents the first meta-analysis of fungal diversity isolated from crude oil, its derivatives,
and hydrocarbon contaminated environments, including their hydrocarbonoclastic capabilities,
through a detailed review of scientific papers published in the last 50 years and analysis of
results.
Key works: degradation, hydrocarbons, mycorremediation, petroleum, SARA

1. Introducción
La explotación, producción, refinación y microorganismos más tolerantes, resultan
transporte de petróleo y sus derivados favorecidas aquellas especies capaces de
conlleva ocasionalmente accidentes técnicos adaptarse y crecer en presencia de estos
y operacionales que causan severo deterioro compuestos tóxicos y recalcitrantes (Benka-
al ambiente y que pueden llegar a generar Coker y Ekundayo, 1997). Así mismo, la
daños irreversibles a los ecosistemas, distribución de microorganismos capaces de
afectando a la flora, la fauna y la utilizar hidrocarburos depende de la presión
composición de las comunidades selectiva ejercida por los hidrocarburos en
microbianas autóctonas (Bartha y Atlas, un determinado ambiente (Atlas y Bartha,
1977; Amund et al. 1987; Odokuma y 1972; Calomiris et al. 1986). El aislamiento
Opokwasili, 1992; Obire, 1993). Debido al de microorganismos (bacterias, hongos y
enriquecimiento selectivo de ciertos levaduras) a partir de ecosistemas

2
contaminados o de hábitats extremos ha porcentaje de degradación de crudo y sus
evidenciado la existencia de ciertos hongos fracciones SARA (Saturados, Aromáticos,
capaces de biotransformar hidrocarburos en Resinas y Asfaltenos). Se realizaron análisis
compuestos menos tóxicos o inocuos para el descriptivos para cada una de las variables,
ambiente. Esto ha permitido el desarrollo de se determinó la biodiversidad por sustrato y
la micorremediación como una estrategia se aplicaron técnicas de clasificación
viable para el saneamiento de cuerpos de (análisis de conglomerados) para configurar
agua y suelos contaminados con grupos funcionales de hongos con capacidad
hidrocarburos (Chaillan et al. 2004, Moreno de degradación de crudo y sus derivados. En
et al. 2004). El presente trabajo pretende el caso de los meta-análisis realizados para
contribuir al conocimiento de la determinar la capacidad degradativa de
biodiversidad de hongos que han sido hongos, se utilizó la mayor tasa porcentual
aislados de crudo, sus derivados y de de degradación reportada para todos los
ambientes contaminados con hidrocarburos; casos. Todos los análisis se realizaron
así como conocer su capacidad para degradar usando el paquete estadístico InfoStat,
hidrocarburos y las fracciones que lo Versión 2010 (Di Rienzo et al. 2010).
componen.
3. Resultados y discusión
2. Materiales y métodos
3.1. Biodiversidad de hongos aislados de
Para realizar los meta-análisis que crudo, sus derivados y suelos
constituyen la presente revisión, la contaminados
información sobre géneros y especies de El primer reporte de crecimiento de hongos
hongos aislados de hidrocarburos, sustratos en hidrocarburos lo realizó Miyoshi en el
contaminados con crudo y sus derivados, así año 1895, donde observó crecimiento de
como de su capacidad de degradación de Botrytis cinerea sobre parafina (Zobell,
crudo y sus fracciones de saturados, 1946). Posteriormente, en 1906 Rahn
aromáticos, resinas, y asfaltenos (SARA), observó que Penicillium glaucum era capaz
fue extraída de las bases de datos Web of de descomponer la parafina y utilizarla como
Science (del año 1900 al 2012) y SciFinder única fuente de carbono y energía (Zobell,
Scholar (del año 1940 al 2012). En este caso, 1946). A partir de esta fecha, han sido
se define como sustrato a aquel tipo de numerosos los trabajos donde se reporta el
hidrocarburo o derivado del mismo que crecimiento de hongos y levaduras en
impregna o no una determinada porción diferentes medios con hidrocarburos.
suelo o de agua. En esta revisión se La mayor cantidad de reportes de hongos
estudiaron los siguientes tipos de sustrato: aislados de crudos han sido realizados en
crudo (C); suelo contaminado con crudo suelos contaminados. Radwan et al. (1995)
(SC); agua contaminada con crudo (AC); aislaron los géneros Aspergillus y
suelo contaminado con gasolina (SG); suelo Penicillium de muestras de suelos desérticos
contaminado con kerosene (SK); sedimento contaminados en Kuwait. Estos
de río contaminado con crudo (SR); diesel microorganismos también fueron aislados de
(D); gasolina (G) y; lago natural de asfalto suelos contaminados en Arabia Saudita
(LA). La búsqueda generó una matriz de (Snellman et al. 1988; Bokhary y Parvez,
dimensión n x p, donde n es el número total 1993; Hashem, 1995). Por otro lado,
de hongos aislados en hidrocarburos y p el Colombo et al. (1996) aislaron Aspergillus
número de variables referidas a género, terreus y Fusarium solani en un suelo
especie, Phylum, Orden, tipo de sustrato, naturalmente contaminado con

3
hidrocarburos en Argentina. En un estudio 58.3% de las muestras totales de agua. Los
similar en Indonesia se aislaron los géneros géneros más frecuentemente aislados fueron:
Aspergillus, Penicillium, Fusarium, Aspergillus, Penicillium, Mucor,
Amorphoteca, Neosartorya, Paecilomyces, Trichoderma, Cephalosporium y Fusarium.
Talaromyces y Graphium (Chosson et al. Naranjo et al. (2007) aislaron cepas de
1991) y, en el Golfo de México, a Alternaria hongos del lago natural de asfalto de
alternata, Aspergillus niger, Cordyceps Guanaco (Edo. Sucre, Venezuela) capaces
sinensis, Gibberella fujikoroi, Hypocrea de crecer sobre crudo extrapesado y varios
lixii, Pencillium decumbens, Pleospora hidrocarburos aromáticos policíclicos
herbarum, Sphaerodes retispora y (HAPs), tales como naftaleno,
Cochliobolus lunatus (Al-Nasrawi, 2012). dibenzotiofeno, fenantreno y pireno,
Nkwelang, et al. (2008), en Nigeria, pertenecientes a los géneros: Fusarium,
reportaron una sucesión de microorganismos Penicillium, Trichoderma, Aspergillus,
presente en un suelo contaminado con crudo Neosartorya, Pseudollescheria,
y crudo emulsionado, en un lapso de tiempo Cladosporium, Pestalotiopsis, Phoma y
de 3 meses, durante la época de sequía y Paecilomyces.
lluviosa. Estos autores encontraron que no Por otro lado, estudios realizados en
todos los hongos aislados al inicio del sistemas de distribución de hidrocarburos se
experimento fueron encontrados al final del ha reportado el aislamiento de diversas cepas
mismo. Sin embargo, los géneros de hongos. En Nigeria, Ifeanyichukwu
Penicillium y Aspergillus fueron aislados al (1996) aisló especies de los géneros
final de los cuatro tratamientos lo que indica Penicillium y Cunninghamella en tanques de
que estos dos géneros son capaces de almacenamiento de crudo. Bento y Gaylarde
sobrevivir en el tiempo en suelos (2001) aislaron de una refinería y de los
contaminados con crudos. Estos hallazgos sistemas de distribución de diesel las
apuntalan la explicación de que las especies especies: Hormoconis resinae, Aspergillus
más comunes que se reportan en la mayoría niger, Aspergillus fumigatus, Paecilomyces
de los trabajos son Aspergillus y Penicillium variotii, Penicillium sp., y las levaduras
(Nyns et al. 1968; Llanos y Kjoller, 1976; Candida silvicola y Rhodotorula glutinis.
Oudot et al. 1987; Snellman et al. 1988; Por otra parte, en muestras de gasolina se
Bokhary y Parvez, 1993; Oudot et al. 1993; han aislado los hongos filamentosos:
April et al. 2000). Por otra parte, algunos de Alternaria, Aspergillus, Chrysosporium,
los microorganismos aislados, aun no siendo Cladosporium, Fusarium, Penicillium y
hidrocarbonoclásticos, pudieran ser capaces Phialophora y las levaduras Candida y
de sobrevivir a dichas condiciones, lo que Rhodotorula (Hettige y Sheridan, 1984;
sugiere que no todas las especies de hongos Gaylarde et al. 1999).
presentes en el suelo contaminado son Se han realizado diversas investigaciones en
capaces de tolerar y utilizar hidrocarburos las cuales se reporta el aislamiento de
como fuente de carbono y energía. microorganismos a partir de suelos
Salmanov et al. (2008) realizaron un estudio impactados por derivados del petróleo.
ecológico a niveles cualitativos y Wemedo et al. (2002), en Nigeria, aislaron
cuantitativos de la micoflora presente en de suelo contaminado con kerosene los
agua y suelo impactados con crudo en la géneros de hongos: Penicillium, Aspergillus,
Península de Absheron en el Mar Caspio. En Fusarium, Rhizopus. Otros estudios
las muestras de agua se encontraron 7 realizados en Egipto encontraron en suelos
especies de hongos donde el género más contaminados con kerosén y/o benceno, los
común fue Penicillium detectado en un hongos: Amorphotheca resinae, Aspergillus

4
flavus, A. fumigatus, A. niger, A. terreus, determinar que del total de hongos y
Emericella nidulans, Fusarium solani, levaduras aisladas de hidrocarburos, el 83%
Penicillium funiculosum, Rhizopus stolonifer pertenecen al Phylum Ascomycota, 10% al
y Trichoderma harzianum (Hemida et al. Phylum Zygomycota, el 6% al Phylum
1993). También se han aislado hongos de un Glomeromycota y 1 % al Phylum
suelo contaminado con aceite lubricante: Basidiomycota (Figura 1). Debido a que el
Aspergillus flavus, A. niger, A. terreus, A. Phylum Ascomycota fue el que se encontró
ochraceus, y Trichoderma sp. (Sebiomo et reportado en mayor proporción, se
al. 2010); aceite de motor: Candida determinaron los órdenes más comunes
tropicalis (Farag y Soliman, 2011) y, en reportados para dicho Phylum,
bitumen: Aspergillus fumigatus, A. oryzae, encontrándose que el orden Eurotiales se
A. wentii, A. flavus, A, niger, Penicillium encuentra en mayor proporción (54%),
notatum, Rhizopus stolonifer, Rhodotorula seguido por el orden Hypocreales (18%),
sp. y Trichoderma sp. (Oboh et al. 2006). Microascales (6%) y Saccharomycetales
Los resultados de la revisión bibliográfica y (5%) (Figura 1).
los meta-análisis realizados permitieron

Figura 1. Frecuencias relativas de los distintos Phyla y Ordenes del Reino Fungi aislados de crudo, sus derivados y
de suelos contaminados reportados en trabajos de investigación publicados en revistas registradas en las
bases de datos Web of Science (1900-2010) y SciFinder Scholar (1940-2010).

5
 Pernía B., Demey J.R., Inojosa Y., Naranjo-Briceño L. 2012. Rev Latinoam Biotecnol Amb Algal 3(1):1-40

Así mismo, a partir del meta-análisis se pudo Ascomycota presenta más del doble de
determinar que los géneros de hongos que especies que el Phylum Basidiomycota y
aparecieron con mayor frecuencia en crudo y existen evidencias moleculares de que el
sus derivados (diesel y gasolina) fueron: Phylum Ascomycota presenta una mayor tasa
Penicillium (18%), Aspergillus (17%) y de evolución (Wang et al. 2010).
Fusarium (6%), seguidos por Rhizopus (4%), En nuestro estudio, dentro del Phylum
Trichoderma (4%) y Acremonium (3%), tal Ascomycota el orden más común fue
como muestra la Figura 2. Las especies más Eurotiales, debido a que a él pertenecen los
representativas del género Aspergillus fueron géneros con mayor frecuencia de aparición
las especies A. niger (21%), A. fumigatus Penicillium y Aspergillus; seguido por el
(18%), A. flavus (10%) y A. terreus (10%). orden Hipocreales donde se encuentran los
De igual forma, para el género Fusarium, la géneros Fusarium, Trichoderma y
especie más frecuente fue F. solani (23%) y, Acremonium (Figura 2). La incidencia en la
para Penicillium, la mayor frecuencia está aparición de estos géneros y sus especies más
representada por Penicillium sp. (especies sin frecuentes, podría deberse a que han sido
determinar, 23%), seguido de las especies, P. reportados como hongos cosmopolitas de
funiculosum, P. janthinellum, P. oxalicum, P. distribución mundial, tal es el caso de las
pinophilum, P. purpurogenum y P. especies Acremonium sp., Aspergillus
simplicissimun. Aunado a ello, Penicillium fumigatus, A. niger y A. terreus, Penicillium
resultó ser el género más cosmopolita ya que frequentans, P. oxalicum y P.
se aisló en todos los sustratos reportados simplicissimum, Fusarium solani, y
menos en suelo impactado con diesel, tal Trichoderma viride (Domsch et al. 1980), por
como indica la Figura 3. lo que es probable que estas especies hayan
En la Figura 1, se observa que el Phylum que desarrollado mecanismos de tolerancia a los
aparece más frecuente en hidrocarburos es el hidrocarburos. De estas especies, Penicillium
Phylum Ascomycota. La posible explicación ha demostrado una capacidad de adaptación a
de la predominancia de hongos del Phylum numerosos nichos y, como se observa en la
Ascomycota podría deberse a que la mayoría Figura 3, se han aislado de hidrocarburos
de ellos son habitantes comunes de suelo, lo (crudo y diesel) y de todos los sustratos
cual los expone a este tipo de contaminantes y impactados con hidrocarburos (suelo y agua).
a que algunos son capaces de sintetizar Por tal razón, Leitão (2009) propone el uso de
enzimas oxidativas extracelulares del sistema especies del género Penicillium para procesos
de degradación de lignina, tales como lacasa, de biorremediación de compuestos tóxicos,
lignina peroxidasa y manganeso peroxidasa, tales como fenoles, HAPs y metales pesados.
entre otras, asociadas también a la Por otro lado, con la finalidad de conocer la
degradación de hidrocarburos (Naranjo et al., biodiversidad de hongos presentes en los
2007). Además de ello, el Phylum distintos hidrocarburos y suelos
Ascomycota ha demostrado una plasticidad contaminados, se determinó el índice de
genética o habilidad para que un determinado biodiversidad de Shannon-Wiener (Figura 4),
genotipo pueda cambiar y producir diferentes encontrándose que la mayor diversidad se
fenotipos debido a su exposición a factores encontró en suelos impactados
bióticos y abióticos, lo que ha permitido con crudo (3.02) seguido por el lago natural
poder realizar asociaciones simbióticas y de asfalto de Guanoco (2.15). Los sustratos
colonizar una mayor cantidad de nichos. Se que presentaron una menor diversidad fueron
ha reportado que el 98% de los hongos suelos contaminados con gasolina y diesel
terrestres pertenecen a los Phyla Ascomycota (0.00).
y Basidiomycota, sin embargo, el Phylum

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 Pernía B., Demey J.R., Inojosa Y., Naranjo-Briceño L. 2012. Rev Latinoam Biotecnol Amb Algal 3(1):1-40

Figura 2. Distribuión de los géneros y especies de hongos aislados más representativos en sustratos contaminados
con crudo y sus derivados.

7
Figura 3. Patrón de distribución de los géneros de hongos aislados por sustrato. AC: agua contaminada con crudo;
C: crudo; D: diesel, G: gasolina; LA: lago de asfalto; SC: suelo contaminado con crudo; SD: suelo
contaminado con diesel; SG: suelo contaminado con gasolina; SK: suelo contaminado con kerosén; SR:
sedimento de rio.

8
 Pernía B., Demey J.R., Inojosa Y., Naranjo-Briceño L. 2012. Rev Latinoam Biotecnol Amb Algal 3(1):1-40

Como se observa en la Figura 4, tomando en hongos en suelo en comparación a los

cuenta los sustratos estudiados (Ver apartado aislados en agua podría deberse a que, según
de Materiales y Métodos), la mayor Hyde et al. (2007), existen aproximadamente
biodiversidad de hongos se ha registrado en 1,5 millones de especies de hongos, de las
suelos impactados con crudo. Además de la cuales solo alrededor de 3,000 especies están
existencia de una mayor cantidad de trabajos asociadas a hábitats acuáticos (Shearer et al.
científicos sobre hongos aislados de suelos 2007), por lo que el suelo presenta una
contaminados, esta preponderancia de mayor diversidad de hongos per se.

Figura 4. Distribución del Índice de biodiversidad de Shannon-Wiener para los hongos aislados según el sustrato.
SC: suelo contaminado con crudo; LA: lago de asfalto; SK: suelo contaminado con kerosén; D: diesel;
SR: sedimento de rio; C: crudo; AC: agua contaminada con crudo; SG: suelo contaminado con gasolina;
SD: suelo contaminado con diesel; G: gasolina. Los box-plot para cada sustrato fueron generados por el
remuestreo (n=500) del vector de frecuencia de cada género por sustrato.

3.2. Capacidad de degradación de crudo, géneros mostraron habilidad para degradar

sus fracciones y derivados por hongos hidrocarburos. Es por ello, que en la
3.2.1. Degradación de crudo siguiente sección, se presentan los géneros y
Aunque son numerosas las especies de especies de hongos descritas que poseen
hongos aisladas en suelos contaminados, no capacidad hidrocarbonoclástica.
todas tienen la capacidad de degradar los En cuanto a las evidencias de degradación de
hidrocarburos. Por ejemplo, April et al. crudo por hongos en condiciones de
(2000) aislaron 64 especies de hongos laboratorio, Chaineau et al. (1999), aislaron
filamentosos en un suelo impactado con cepas de suelos agrícolas en Francia y
crudo en Canadá, de los cuales sólo 6 evaluaron su capacidad de degradar crudo

9
(179 mg de crudo en 150 mL de medio de Por otro lado, en un experimento de
cultivo) en 30 días mediante cromatografía bioaugmentación y bioestimulación en
de gases (CG), encontrando que las especies condiciones de laboratorio, Mancera-López
de los géneros Aspergillus, Penicillium, et al. (2008), encontraron un porcentaje de
Trichoderma, Acremonium, Beauveria, degradación de TPH en suelo contaminado
Fusarium, Cladosporium y Gongronella con 60,600 ppm de crudo de 47, 40 y 45%
poseían dicha habilidad. En especial, utilizando los hongos Rhizopus sp.,
encontraron una alta capacidad degradativa Aspergillus sydowii y Penicillium
en la especie Beauveria alba, la cual fue funiculosum, respectivamente. Por otro lado,
capaz de degradar 49% del crudo, seguida de Adenipekun y Fasidi (2005) encontraron en
Penicillium simplicissimum con 45%. suelo contaminado con crudo en Nigeria, un
Por otro lado, Meysami y Baheri (2003) porcentaje de reducción de TPH de 20% en 3
estudiaron en condiciones de laboratorio la meses y 40% en 6 meses de exposición al
degradación de crudo determinada por la hongo Lentinus subnudus.
reducción de TPH por método gravimétrico Con la finalidad de establecer grupos de
en un suelo artificialmente contaminado con hongos con la capacidad de reducir niveles
10,000 ppm de crudo, observando que varias de TPH, se realizó un análisis de
cepas de los hongos Bjerkandera adusta, conglomerados (Figura 5), donde fueron
Phanerochaete chrysosporium, Pleurotus identificados tres grupos de géneros según su
ostreatus, Pleurotus pilmanarius y Trametes capacidad de degradar crudo. El grupo de
versicolor eran capaces de reducir hasta un mayor capacidad fue conformado por los
50% del TPH en 35 días. géneros: Phanerochaete, Coriolus,
De igual forma, Kristanti et al. (2011) Trametes, Pleurotus, Bjerkandera, Rhizopus,
estudiaron en condiciones de laboratorio la Emerciella y Aspergillus con 52.00±3.53%.
capacidad degradativa del hongo Polyporus El grupo de capacidad intermedia integrado
sp. S133 en medio líquido con 1,000 ppm de por: Penicillium, Paecilomyces, Glomus,
crudo y en suelo con 3,000 ppm de crudo, Drechslera, Verticillium, Cladosporium,
encontraron una tasa de degradación de 93 y Lentinus, Candida, Beauveria; Trichoderma,
43% en 60 días, respectivamente. Syncephalastrum, Eupenicillum, Graphium y
Obuekwe et al. (2005) aislaron en el desierto Acremonium con un 27.52±2.38%.
de Kuwait las especies halotolerantes Finalmente, el grupo de hongos con menor
Fusarium lateritium, Drechslera sp. y capacidad degradativa fue conformado por:
Papulospora sp., observando que estas eran Papulaspora, Gongronella,
capaces de degradar crudo (0,8 g de crudo en Scolecobasidium, Saccharomycopsis,
100 mL de medio) en un 18, 26 y 9%, Fusarium, Tolypocladium, Cunninghamella
respectivamente. con un porcentaje de degradación de
13.22±3.53% (Figura 5).

10
 Pernía B., Demey J.R., Inojosa Y., Naranjo-Briceño L. 2012. Rev Latinoam Biotecnol Amb Algal 3(1):1-40

Figura 5. Representación del patrón de distribución de grupos homogéneos de géneros de hongos según su
capacidad para degradar crudo, generada a través del análisis por conglomerados utilizando como
algoritmo de encadenamiento el UPGMA y la distancia euclideana entre las frecuencias observadas por
género. En el lado inferior derecho se presenta la distribución del porcentaje de TPH por grupo, donde se
muestra que existen diferencias significativas entre grupos de degradación (p≤0.05). Cada grupo de
hongos está representado por un color (azul, rojo y verde).

A nivel de especies, en la Tabla 1, se señalan versicolor (50%) y Trichoderma sp. (50%).

aquellas que presentaron un mayor A pesar de la capacidad de ciertos hongos de
porcentaje de degradación de crudo donde se degradar crudo, existen marcadas diferencias
destacan: Aspergillus versicolor (99%), en la degradación de sus diferentes
Aspergillus niger (80%), Coriolus versicolor fracciones SARA, tal como se detalla a
(78%), Phanerochaete chrysosporium continuación.
(69%), Pleurotus ostreatus (53%), Trametes

Tabla 1. Hongos aislados de crudo, sus derivados, suelos y aguas contaminadas con hidrocarburos. reportados en
trabajos de investigación publicados en revistas registradas en las bases de datos Web of Science (1940-
2010) y SciFinder Scholar (1940-2010).

Lugar de
Especie Phylum Orden Origen Referencia
aislamiento
Absidia sp. Instalaciones Valenzuela et
Zygomycota Mucorales SC
Tiegh ENAP, Chile al. 2006
Acaulospora laevis
Tabasco, Franco-Ramírez
Gerd. & Trappe Glomeromycota Diversisporales SC
México et al. 2007
(1974)
Acaulospora
Tabasco, Franco-Ramírez
scrobiculata Trappe Glomeromycota Diversisporales SC
México et al. 2007
(1977)

11
Acremonium sp. Instalaciones Valenzuela et
Ascomycota Hypocreales SC
Link ENAP, Chile al. 2006
Isla Borneo, Oudot et al.
SR
Indonesia 1993
April et al.
SC Canadá
2000
Acremonium butyri
April et al.
(J.F.H. Beyma) W. Ascomycota Hypocreales SC Canadá
2000
Gams (1971)
Acremonium
April et al.
kiliense Ascomycota Hypocreales SC Canadá
2000
Grütz (1925)
Acremonium Drayton
April et al.
strictum Ascomycota Hypocreales SC Valley,
2000
W. Gams (1971) Canadá
Alternaria alternata Golfo de Al-Nasrawi,
Ascomycota Pleosporales SC
(Fr.) Keissl. (1912) mëxico 2012
Ambispora
gerdemannii
(S.L. Rose, B.A.
Tabasco, Franco-Ramírez
Daniels & Trappe) Glomeromycota Archaeosporales SC
México et al. 2007
C. Walker, Vestberg
& A. Schüssler
(2007)
Chosson et al.
Amorphotheca sp. SC Utah, USA
1991
Amorphotheca
resinae Parbery
(1969) = Isla Borneo, Chaillan et al.
Ascomycota SC
Cladosporium Indonesia 2004
resinae

Hemida et al.
SK Egipto
1993
Benka-Coker y
Delta Niger,
Aspergillus sp. Ascomycota Eurotiales SC Ekundayo,
Nigeria
1997
April et al.
SC Canadá
2000
Desierto de Radwan et al.
SC
Kuwait 1995
Tabasco, Rivera-Cruz et
SC
México al. 2002
Rios
Omuihuechi y Okerentugba y
AC
New Calabar, Ezeronye, 2003
Nigeria
Wemedo et al.
SK Nigeria
2002
Lago de
Aspergillus
Asfalto de Naranjo et al.
aureolus Fennell & Ascomycota Eurotiales LA
Guanoco, 2008
Raper 1955
Venezuela
Aspergillus clavatus Isla Borneo, Chaillan et al.
Ascomycota Eurotiales SC
Desm. (1834) Indonesia 2004

12
Aspergillus flavipes
(Bainier & R. Isla Borneo, Oudot et al.
Ascomycota Eurotiales SC
Sartory) Thom & Indonesia 1993
Church (1926)
Aspergillus flavus Bokhary y
Ascomycota Eurotiales SC Arabia Saudita
Link (1809) Parvez, 1993
Delta del Gesinde et al.
SC
Níger, Nigeria 2008
Emene, Uzoamaka et al.
SC
Nigeria 2009
Hemida et al.
SK Egipto
1993
Aspergillus
Isla Borneo, Oudot et al.
fumigatus Fresen. Ascomycota Eurotiales SC
Indonesia 1993
(1863)
Willesden April et al.
SC
Green, Canadá 2000
Isla Borneo, Chaillan et al.
SC
Indonesia 2004
Delta del Gesinde et al.
SC
Níger, Nigeria 2008
Bento y
D Brasil
Gaylarde, 2001
Hemida et al.
SK Egipto
1993
Lago de
Asfalto de Naranjo et al.
LA
Guanoco, 2007
Venezuela
Aspergillus niger Bokhary y
Ascomycota Eurotiales SC Arabia Saudita
Tiegh. (1867) Parvez, 1993
April et al.
SC Canadá
2000
Isla Borneo, Chaillan et al.
SC
Indonesia 2004
Instalaciones Valenzuela et
SC
ENAP, Chile al. 2006
Gesinde et al.
SC Delta, Nigeria
2008
Emene, Uzoamaka et al.
SC
Nigeria 2009
Golfo de Al-Nasrawi,
SC
mëxico 2012
Bento y
D Brasil
Gaylarde, 2001
Hemida et al.
SK Egipto
1993
Aspergillus cf.
Kindersley, April et al.
niveus Blochwitz Ascomycota Eurotiales SC
Canadá 2000
(1929)
Aspergillus sydowii
(Bainier & Sartory) Isla Borneo, Oudot et al.
Ascomycota Eurotiales SC
Thom & Church Indonesia 1993
(1926)
SC Isla Borneo, Chaillan et al.

13
 Indonesia 2004
Veracruz, Mancera-López
SC
México et al. 2008
Aspergillus cf.
Kindersley, April et al.
tamarii Ascomycota Eurotiales SC
Canadá 2000
Kita (1913)
Isla Borneo, Chaillan et al.
Ascomycota Eurotiales SC
Aspergillus terreus Indonesia 2004
Thom (1918) Mar de Ajo, Colombo et al.
SG
Argentina 1996
Hemida et al.
SK Egipto
1993
Lago de
Asfalto de Naranjo et al.
LA
Guanoco, 2007
Venezuela
Aspergillus
Emene, Uzoamaka et al.
versicolor (Vuill.) Ascomycota Eurotiales SC
Nigeria 2009
Tirab. (1908)
Uzoamaka et al.
SC Enugu, Nigeria
2009
Aureobasidium
pullulans Boundary April et al.
Ascomycota Dothideales SC
(de Bary) G. Arnaud Lake, Canadá 2000
(1918)
Instalaciones Valenzuela et
Beauveria sp. Ascomycota Hypocreales SC
ENAP, Chile al. 2006
Beauveria bassiana Drayton
April et al.
(Bals.-Criv.) Vuill. Ascomycota Hypocreales SC Valley,
2000
(1912) Canadá
Lago de
Byssochlamys nivea Asfalto de Naranjo et al.
Ascomycota Eurotiales LA
Westling (1909) Guanoco, 2007
Venezuela
Benka-Coker y
Delta Niger,
Candida sp. Ascomycota Saccharomycetales SC Ekundayo,
Nigeria
1997
Candida lipolytica
(F.C. Harrison) Cerniglia y
Ascomycota Saccharomycetales D
Diddens & Lodder Crow, 1981
(1942)
Naranjo et al.
C Venezuela
2008
Candida silvicola
Bento y
Shifrine & Phaff Ascomycota Saccharomycetales D Brasil
Gaylarde, 2001
(1956)
Candida viswanathii
Naranjo et al.
Sandu & H.S. Ascomycota Saccharomycetales C Venezuela
2008
Randhawa (1962)
Chaetomium
Bokhary y
bostrychodes Ascomycota Sordariales SC Arabia Saudita
Parvez, 1993
Zopf (1877)
Chaetomium
April et al.
globosum Kunze Ascomycota Sordariales SC Canadá
2000
(1817)

14
 Boundary April et al.
Chalara sp. Ascomycota SC
Lake, Canadá 2000
Instalaciones Valenzuela et
Cladosporium sp. Ascomycota Capnodiales SC
ENAP, Chile al. 2006
Cladosporium
cladosporioides April et al.
Ascomycota Capnodiales SC Canadá
(Fresen.) G.A. de 2000
Vries (1952)
Lago de
Asfalto de Naranjo et al.
LA
Guanoco, 2008
Venezuela
Cladosporium
resinae Colwell et al.
Ascomycota Capnodiales G USA
(Lindau) G.A. de 1977
Vries (1955)
Lago de
Cladosporium
Asfalto de Naranjo et al.
sphaerospermum Ascomycota Capnodiales LA
Guanoco, 2007
Penz. (1882)
Venezuela
Cochliobolus
lunatus R.R. Nelson Golfo de Al-Nasrawi,
Ascomycota Pleosporales SC
& F.A. Haasis Mëxico 2012
(1964)
Cordyceps sinensis Golfo de Al-Nasrawi,
Ascomycota Hypocreales SC
(Berk.) Sacc. (1878) Mëxico 2012
Ughelli, Ifeanychukwu,
Cunninghamella sp. Zygomycota Mucorales C
Nigeria 1996
C Delta, Nigeria Atagana, 1996
Instalaciones Valenzuela et
SC
ENAP, Chile al. 2006
Cunninghamella
echinulata Isla Borneo, Chaillan et al.
Zygomycota Mucorales SC
(Thaxt.) Thaxt. Indonesia 2004
(1903)
Emericella nidulans
Isla Borneo, Oudot et al.
(Eidam) Vuill. Ascomycota Eurotiales SR
Indonesia 1993
(1927)
Hemida et al.
SK Egipto
1993
Eupenicillium
javanicum
Isla Borneo, Oudot et al.
(J.F.H. Beyma) Ascomycota Eurotiales SC
Indonesia 1993
Stolk & D.B. Scott
(1967)
Lago de
Eupenicillium
Asfalto de Naranjo et al.
limosum S. Ueda Ascomycota Eurotiales LA
Guanoco, 2008
(1995)
Venezuela
Isla Borneo, Oudot et al.
SR
Indonesia 1993
Eupenicillium
ochrosalmoneum Isla Borneo, Chaillan et al.
Ascomycota Eurotiales SC
D.B. Scott & Stolk Indonesia 2004
(1967)

15
Exophiala
jeanselmei Drayton
April et al.
(Langeron) Ascomycota Chaetothyriales SC Valley,
2000
McGinnis & A.A. Canadá
Padhye (1977)
Fennellia nivea Lago de
(B.J. Wiley & E.G. Asfalto de Naranjo et al.
Ascomycota Eurotiales LA
Simmons) Samson Guanoco, 2008
(1979) Venezuela
Chosson et al.
Fusarium sp. Ascomycota Hypocreales SC Utah, USA
1991
April et al.
SC Canadá
2000
Instalaciones Valenzuela et
SC
ENAP, Chile al. 2006
Wemedo et al.
SK Nigeria
2002
Fusarium Drayton
April et al.
avenaceum Ascomycota Hypocreales SC Valley,
2000
(Fr.) Sacc. (1886) Canadá
Fusarium
Isla Borneo, Chaillan et al.
decemcellulare Ascomycota Hypocreales SC
Indonesia 2004
Brick (1908)
Fusarium
Isla Borneo, Chaillan et al.
oxysporum Ascomycota Hypocreales SC
Indonesia 2004
Schltdl. (1824)
Fusarium
proliferatum Lago de
(Matsush.) Asfalto de Naranjo et al.
Ascomycota Hypocreales LA
Nirenberg ex Guanoco, 2007
Gerlach & Nirenberg Venezuela
(1976)
Fusarium solani La Plata, Colombo et al.
Ascomycota Hypocreales SC
(Mart.) Sacc. (1881) Argentina 1996
Hemida et al.
SK Egipto
1993
Lago de
Asfalto de Naranjo et al.
LA
Guanoco, 2007
Venezuela
Fusarium
subglutinans
(Wollenw. & April et al.
Ascomycota Hypocreales SC Canadá
Reinking) P.E. 2000
Nelson, Toussoun &
Marasas (1983)
Lago de
Fusarium
Asfalto de Naranjo et al.
venenatum LA
Guanoco, 2007
Nirenberg (1995)
Venezuela
Geomyces
pannorum April et al.
Ascomycota Incertae sedis SC Canadá
(Link) Sigler & J.W. 2000
Carmich. (1976)
Gibberella fujikuroi Ascomycota Hypocreales SC Golfo de Al-Nasrawi,

16
(Sawada) Wollenw. mëxico 2012
(1931)
Gliocladium
catenulatum April et al.
Ascomycota Hypocreales SC Canadá
J.C. Gilman & E.V. 2000
Abbott (1927)
Gliocladium virens
J.H. Mill., Giddens Isla Borneo, Oudot et al.
Ascomycota Hypocreales SR
& A.A. Foster Indonesia 1993
(1958)
April et al.
Gliomastix sp. Ascomycota Hypocreales SC Canadá
2000
Glomus
ambisporum Tabasco, Franco-Ramírez
Glomeromycota Glomerales SC
G.S. Sm. & N.C. México et al. 2007
Schenck (1985)
Glomus caledonium
(T.H. Nicolson &
Glomeromycota Glomerales SC Shaanxi, China Li et al. 2009
Gerd.) Trappe &
Gerd. (1974)
Glomus citrícola
Tabasco, Franco-Ramírez
D.Z. Tang & M. Glomeromycota Glomerales SC
México et al. 2007
Zang (1984)
Glomus desertícola
Mar de Ajo,
Trappe, Bloss & J.A. Glomeromycota Glomerales SG Cabello, 1999
Argentina
Menge (1984)
Glomus geosporum
(T.H. Nicolson & Berisso,
Glomeromycota Glomerales SGa Cabello, 1999
Gerd.) C. Walker Argentina
(1982)
Glomus intraradices
Ensenada,
N.C. Schenck & Glomeromycota Glomerales SC Cabello, 1999
Argentina
G.S. Sm. (1982)
Glomus sinuosum
(Gerd. & B.K.
Tabasco, Franco-Ramírez
Bakshi) R.T. Glomeromycota Glomerales SC
México et al. 2007
Almeida & N.C.
Schenck (1990)

Chosson et al.
Graphium sp. Ascomycota Microascales SC Utah, USA
1991
British April et al.
SC
Columbia 1998
Graphium
putredinis Isla Borneo, Oudot et al.
Ascomycota Microascales SC
(Corda) S. Hughes Indonesia 1993
(1958)
Isla Borneo, Chaillan et al.
SC
Indonesia 2004
Hormoconis resinae
(Lindau) Arx &
G.A. de Vries Bento y
Ascomycota Incertae sedis D Brasil
(1973), (= Gaylarde, 2001
Amorphotheca
resinae),

17
 Hettige y
D Nueva Zelanda
Sheridan, 1984
Hypocrea lixii Pat. Golfo de Al-Nasrawi,
Ascomycota Hypocreales SC
(1891) Mëxico 2012
Instalaciones Valenzuela et
Mortierella sp. Zygomycota Mortierellales SC
ENAP, Chile al. 2006
Instalaciones Valenzuela et
Mucor sp. SC
ENAP, Chile al. 2006
Emene, Uzoamaka et al.
Zygomycota Mucorales SC
Nigeria 2009
Mucor circinelloide Guanajuato, Silva-Jiménez
SC
Tiegh. (1875) México et al. 2009
Wemedo et al.
SK Nigeria
2002
Chosson et al.
Neosartorya sp. Ascomycota Eurotiales SC Utah, USA
1991
Neosartorya fischeri
April et al.
(Wehmer) Malloch Ascomycota Eurotiales SC Canadá
2000
& Cain (1973)
Isla Borneo, Chaillan et al.
SC
Indonesia 2004
Lago de
Neosartorya
Asfalto de Naranjo et al.
pseudofischeri S.W. Ascomycota Eurotiales LA
Guanoco, 2007
Peterson (1992)
Venezuela
Lago de
Neosartorya spinosa
Asfalto de Naranjo et al.
(Raper & Fennell) Ascomycota Eurotiales LA
Guanoco, 2007
Kozak. (1989) NS-1
Venezuela
Neurospora
sitophila Emene, Uzoamaka et al.
Ascomycota Sordariales SC
Shear & B.O. Dodge Nigeria 2009
(1927)
Oidiodendron
Boundary April et al.
griseum Ascomycota Incertae sedis SC
Lake, Canadá 2000
Robak (1934)
Chosson et al.
Paecilomyces sp. SC Utah, USA
1991
Tabasco, Rivera-Cruz et
SC
México al. 2002
Boundary April et al.
SC
Lake, Canadá 2000
Lago de
Asfalto de Naranjo et al.
LA
Guanoco, 2007
Venezuela
Paecilomyces
Drayton
marquandii April et al.
Ascomycota Eurotiales SC Valley,
(Massee) S. Hughes 2000
Canadá
(1951)
Paecilomyces Drayton
April et al.
variotii Ascomycota Eurotiales SC Valley,
2000
Bainier (1907) Canadá
Isla Borneo, Chaillan et al.
SC
Indonesia 2004

18
 Bento y
D Brasil
Gaylarde, 2001
Hettige y
D Nueva Zelanda
Sheridan, 1984
Ughelli, Ifeanychukwu,
Penicillium sp. Ascomycota Eurotiales C
Nigeria 1996
C Delta, Nigeria Atagana, 1996
April et al.
SC Canadá
2000
Desierto de Radwan et al.
SC
Kuwait 1995
Tabasco, Rivera-Cruz et
SC
México al. 2002
Rios
Omuihuechi y Okerentugba y
AC
New Calabar, Ezeronye, 2003
Nigeria
Bento y
D Brasil
Gaylarde, 2001
Wemedo et al.
SK Nigeria
2002
Instalaciones Valenzuela et
SC
ENAP, Chile al. 2006
Lago de
Asfalto de Naranjo et al.
LA
Guanoco, 2007
Venezuela
Lago de
Penicillium
Asfalto de Naranjo et al.
aculeatum Raper & Ascomycota Eurotiales LA
Guanoco, 2008
Fennell (1948)
Venezuela
Penicillium
Kindersley, April et al.
aurantiogriseum Ascomycota Eurotiales SC
Canadá 2000
Dierckx (1901)
Penicillium Refineria La
Colombo et al.
chrysogenum Ascomycota Eurotiales C Plata,
1996
Thom (1910) Argentina
Penicillium
Isla Borneo, Oudot et al.
citrinum Ascomycota Eurotiales SC
Indonesia 1993
Sopp (1910)
Penicillium
Hettige y
corylophilum Ascomycota Eurotiales D Nueva Zelanda
Sheridan, 1984
Dierckx (1901)
Penicillium cf. Drayton
April et al.
decumbens Ascomycota Eurotiales SC Valley,
2000
Thom (1910) Canadá
Golfo de Al-Nasrawi,
SC
Mëxico 2012
Penicillium
Veracruz, Mancera-López
funiculosum Ascomycota Eurotiales SC
México et al. 2008
Thom (1910)
Hemida et al.
SK Egipto
1993
Penicillium cf. Drayton April et al.
Ascomycota Eurotiales SC
glabrum Valley, 2000

19
(Wehmer) Westling Canadá
(1911)
Lago de
Penicillium
Asfalto de Naranjo et al.
indonesiae Pitt Ascomycota Eurotiales LA
Guanoco, 2008
(1980)
Venezuela
Penicillium cf.
Drayton
isariiforme April et al.
Ascomycota Eurotiales SC Valley,
Stolk & J.A. Mey. 2000
Canadá
(1957)
Penicillium
janthinellum Drayton
April et al.
Biourge (1923), (= Ascomycota Eurotiales SC Valley,
2000
Penicillium Canadá
simplicissimum)
Isla Borneo, Chaillan et al.
SC
Indonesia 2004
Lago de
Penicillium
Asfalto de Naranjo et al.
marneffei Segretain Ascomycota Eurotiales LA
Guanoco, 2008
(1960)
Venezuela
Penicillium cf.
miczynskii
Boundary April et al.
K.M. Zalessky Ascomycota Eurotiales SC
Lake, Canadá 2000
(1927)

Penicillium cf.
Kindersley, April et al.
minioluteum Ascomycota Eurotiales SC
Canadá 2000
Dierckx (1901)
Penicillium
montanense Isla Borneo, Chaillan et al.
Ascomycota Eurotiales SC
M. Chr. & Backus Indonesia 2004
(1963)
Penicillium notatum
Westling (1911),
Delta del Gesinde et al.
(=Penicillium Ascomycota Eurotiales SC
Níger, Nigeria 2008
chrysogenum var.
chrysogenum)
Penicillium
oxalicum Isla Borneo, Chaillan et al.
Ascomycota Eurotiales SC
Currie & Thom Indonesia 2004
(1915)
Lago de
Asfalto de Naranjo et al.
LA
Guanoco, 2008
Venezuela
Penicillium
Kindersley, April et al.
pinophilum Ascomycota Eurotiales SC
Canadá 2000
Thom (1910)
Isla Borneo, Chaillan et al.
SC
Indonesia 2004
Penicillium
Isla Borneo, Oudot et al.
purpurogenum Ascomycota Eurotiales SR
Indonesia 1993
Fleroff (1906)
SC Boundary April et al.

20
 Lake, Canadá 2000
Penicillium
restrictum Isla Borneo, Chaillan et al.
Ascomycota Eurotiales SC
J.C. Gilman & E.V. Indonesia 2004
Abbott (1927)
Penicillium
simplicissimum Isla Borneo, Chaillan et al.
Ascomycota Eurotiales SC
(Oudem.) Thom Indonesia 2004
(1930)
Lago de
Asfalto de Naranjo et al.
LA
Guanoco, 2008
Venezuela
Penicillium Drayton
April et al.
spinulosum Ascomycota Eurotiales SC Valley,
2000
Thom (1910) Canadá
Drayton
Penicillium thomii April et al.
Ascomycota Eurotiales SC Valley,
Maire (1917) 2000
Canadá
Penicillium cf.
Kindersley, April et al.
variabile Ascomycota Eurotiales SC
Canadá 2000
Sopp (1912)
Penicillium
Isla Borneo, Chaillan et al.
verruculosum Ascomycota Eurotiales SC
Indonesia 2004
Peyronel (1913)
Penicillium cf.
Drayton
waksmanii April et al.
Ascomycota Eurotiales SC Valley,
K.M. Zalessky 2000
Canadá
(1927)
Lago de
Pestalotiopsis
Asfalto de Naranjo et al.
palmarum (Cooke) Ascomycota Xylariales LA
Guanoco, 2007
Steyaert (1949)
Venezuela
Petriella sordida
(Zukal) G.L. Barron British April et al.
Ascomycota Microascales SC
& J.C. Gilman Columbia 1998
(1961)
Phialophora sp. Boundary April et al.
Ascomycota Chaetothyriales SC
Lake, Canadá 2000
Phialophora
americana Norman Wells, April et al.
Ascomycota Chaetothyriales SC
(Nannf.) S. Hughes Canadá 2000
(1958)
Phialophora
Norman Wells, April et al.
verrucosa Ascomycota Chaetothyriales SC
Canadá 2000
Medlar (1915)
Boundary April et al.
Phoma sp. Ascomycota Pleosporales SC
Lake, Canadá 2000
Instalaciones Valenzuela et
SC
ENAP, Chile al. 2006
Lago de
Phoma glomerata
Asfalto de Naranjo et al.
(Corda) Wollenw. & Ascomycota Pleosporales LA
Guanoco, 2007
Hochapfel (1936)
Venezuela
Pithomyces sp. Ascomycota Pleosporales SC Instalaciones Valenzuela et

21
 ENAP, Chile al. 2006
Golfo de Al-Nasrawi,
Pleospora herbarum Ascomycota Pleosporales SC
Mëxico 2012
Pseudallescheria British April et al.
Ascomycota Microascales SC
boydii Columbia 1998
Pseudallescheria
Lago de
angusta (Malloch &
Asfalto de Naranjo et al.
Cain) McGinnis, Ascomycota Microascales LA
Guanoco, 2007
A.A. Padhye &
Venezuela
Ajello (1982)
(Shear) McGinnis,
April et al.
A.A. Padhye & SC Canadá
2000
Ajello (1982)
Lago de
Pycnoporus
Asfalto de Naranjo et al.
sanguineus (L.) Basidiomycota Polyporales LA
Guanoco, 2007
Murrill (1904)
Venezuela
Rhinocladiella
Kindersley, April et al.
atrovirens Ascomycota Chaetothyriales SC
Canadá 2000
Nannf. (1934)
Desierto de Radwan et al.
Zygomycota Mucorales SC
Kuwait 1995
Benka-Coker y
SC Delta, Nigeria Ekundayo,
1997
Bokhary y
SC Arabia Saudita
Rhizopus sp. Parvez, 1993
Veracruz, Mancera-López
SC
México et al. 2008
Rios
Omuihuechi y Okerentugba y
AC
New Calabar, Ezeronye, 2003
Nigeria
Wemedo et al.
SK Nigeria
2002
Rhizopus arrhizus Emene, Uzoamaka et al.
Zygomycota Mucorales SC
A. Fisch. (1892) Nigeria 2009
Rhizopus nigricans
Delta del Gesinde et al.
Ehrenb. (1821), (= Zygomycota Mucorales SC
Níger, Nigeria 2008
Rhizopus stolonifer)
Rhizopus stolonifer
Kindersley, April et al.
(Ehrenb.) Vuill. Zygomycota Mucorales SC
Canadá 2000
(1902)
Hemida et al.
SK Egipto
1993

British April et al.

Scedosporium sp. Ascomycota Microascales SC
Columbia 2000
Scolecobasidium
Edmonton, Davies y
obovatum Ascomycota Incertae sedis SC
Canadá Westlake, 1978
Matsush. (1971)
Scutellospora
heterógama Tabasco, Franco-Ramírez
Glomeromycota Diversisporales SC
(T.H. Nicolson & México et al. 2007
Gerd.) C. Walker &

22
F.E. Sanders (1986)
Sphaerodes
retispora (Udagawa
Golfo de Al-Nasrawi,
& Cain) P.F. Cannon Melanosporales Hypocreales SC
Mëxico 2012
& D. Hawksw.
(1982)
Sporothrix
Drayton
schenckii April et al.
Ascomycota Ophiostomatales SC Valley,
Hektoen & C.F. 2000
Canadá
Perkins (1900)
Syncephalastrum Emene, Uzoamaka et al.
Zygomycota Mucorales SC
sp. Nigeria 2009
Chosson et al.
Talaromyces sp. Ascomycota Eurotiales SC Utah, USA
1991
Talaromyces
bacillisporus Isla Borneo, Oudot et al.
Ascomycota Eurotiales SC
(Swift) C.R. Benj. Indonesia 1993
(1955)
Talaromyces flavus
(Klöcker) Stolk &
Isla Borneo, Chaillan et al.
Samson (1972), (= Ascomycota Eurotiales SC
Indonesia 2004
Penicillium
dangeardii)
Talaromyces helicus
(Raper & Fennell)
Isla Borneo, Oudot et al.
C.R. Benj. (1972), Ascomycota Eurotiales SC
Indonesia 1993
(= Penicillium
spirillum)
April et al.
Trichoderma sp. Ascomycota Hypocreales SC Canadá
2000
Tabasco, Rivera-Cruz et
SC
México al. 2002
Instalaciones Valenzuela et
SC
ENAP, Chile al. 2006
Emene, Uzoamaka et al.
SC
Nigeria 2009
Hadibarata y
SC Ehime, Japón Tachibana,
2009
Trichoderma
La Plata, Colombo et al.
harzianum Ascomycota Hypocreales SC
Argentina 1996
Rifai (1969)
Hemida et al.
SK Egipto
1993
Bokhary y
SC Arabia Saudita
Parvez, 1993
Trichoderma Lago de
inhamatum Asfalto de Naranjo et al.
Ascomycota Hypocreales LA
Veerkamp & W. Guanoco, 2007
Gams (1983) Venezuela
Lago de
Trichoderma viride Asfalto de Naranjo et al.
Ascomycota Hypocreales LA
Pers. (1794) TV-1 Guanoco, 2007
Venezuela
Ulocladium sp. Ascomycota Pleosporales SC Instalaciones Valenzuela et

23
 ENAP, Chile al. 2006
Ulocladium
consortiale Boundary April et al.
Ascomycota Pleosporales SC
sensu Brook, (= Lake, Canadá 2000
Alternaria alternata)
Wallemia sebi Instalaciones Valenzuela et
Basidiomycota Wallemiales SC
(Fr.) Arx (1970) ENAP, Chile al. 2006
Levaduras
Candida lipolytica
(F.C. Harrison) Cerniglia y
Ascomycota Saccharomycetales D
Diddens & Lodder Crow, 1981
(1942)
Candida silvicola
Bento y
Shifrine & Phaff Ascomycota Saccharomycetales D Brasil
Gaylarde, 2001
(1956)

Candida
palmioleophila Isla Borneo, Chaillan et al.
Ascomycota Saccharomycetales SC
Nakase & Itoh Indonesia 2004
(1988)
Candida viswanathii
Isla Borneo, Chaillan et al.
T.S. Viswan. & H.S. Ascomycota Saccharomycetales SC
Indonesia 2004
Randhawa (1959)
Benka-Coker y
Delta Niger,
Geotrichum sp. Ascomycota Saccharomycetales SC Ekundayo,
Nigeria
1997

Pichia
Isla Borneo, Chaillan et al.
guilliermondii Ascomycota Saccharomycetales SC
Indonesia 2004
Wick. (1966)
Rhodotorula
glutinis Bento y
Basidiomycota Sporidiobolales D Brasil
(Fresen.) F.C. Gaylarde, 2001
Harrison (1928)
Rhodotorula
mucilaginosa (A. Naranjo et al.
Basidiomycota Sporidiobolales C Venezuela
Jörg.) F.C. Harrison 2008
(1928)
Williopsis saturnus
var. subsufficiens Naranjo et al.
Ascomycota Saccharomycetales C Venezuela
(Wick.) Kurtzman 2008
(1991)
Yarrowia lipolytica
(Wick., Kurtzman & Isla Borneo, Chaillan et al.
Ascomycota Saccharomycetales SC
Herman) Van der Indonesia 2004
Walt & Arx (1981)

AC: agua contaminada con crudo; C: crudo; D= diesel; G: gasolina; SC: suelo contaminado con crudo; SG: suelo
contaminado con gasoil; SGa: suelo contaminado con gasolina; SK: suelo contaminado con kerosene; SR:
sedimento de río; LA: Lago de asfalto

24
3.2.2. Degradación de las fracciones SARA oxidación por los microorganismos mientras
del crudo que las resinas y asfaltenos son las
El crudo es una mezcla heterogénea de fracciones más recalcitrantes. De esta
compuestos orgánicos, principalmente de manera, se ha reportado que la eficiencia en
hidrocarburos insolubles en agua, y trazas de el proceso de remediación depende de la
compuestos metálicos como sodio, níquel, naturaleza de los compuestos y de su peso
hierro, vanadio o plomo (Karisen y Larter, molecular en el siguiente orden de mayor
1991), que se puede separar en 4 grandes eficiencia a menor eficiencia: Saturados >
fracciones denominadas SARA (Saturados, Aromáticos > Resinas > Asfaltenos (Oudot
Aromáticos, Resinas y Asfaltenos). et al. 1993; Al-Gounaim et al. 1995; Li et al.
La fracción de saturados está constituida por 2002; Chaillan et al. 2004). En este sentido,
hidrocarburos que no contienen dobles Oudot et al. (1993) aislaron cepas de hongos
enlaces y se clasifican según su estructura degradadores de hidrocarburos de ambientes
química en alcanos, isoprenoides y tropicales en Indonesia, donde identificaron
cicloalcanos. Los alcanos son cadenas de miembros de los géneros Aspergillus,
carbono que pueden estar ramificadas o no y Penicillium, Gliocadium, Emericella,
que presentan la fórmula CnH2n+2. Se Graphium, Acremonium, Eupenicillium y
denominan isoprenoides alcanos de cadenas Talaromyces.
ramificadas mientras que los cicloalcanos El potencial hidrocarbonoclástico de estas
son alcanos cíclicos que pueden tener uno a cepas se determinó monitoreando la
más anillos de átomos de carbono e velocidad de degradación de todas las
hidrógeno y presentan la fórmula CnH2n fracciones SARA del petróleo. Las cepas
(April et al. 1998). más activas sobre todo el petróleo y
La fracción de aromáticos corresponde a una especialmente sobre la asimilación de
clase especial de hidrocarburos insaturados; saturados y aromáticos fueron: Emericella
cuya estructura está basada en el anillo de nidulans, Graphium putredinis,
benceno, el cual puede tener uno o más Eupenicillium javanicum y Aspergillus
átomos de hidrógeno sustituidos por flavipes con > 40% y >30%,
radicales alquilos, originando alquil respectivamente. Posteriormente, Al-
bencenos o puede haber dos o más anillos Gounaim et al. (1995) aislaron de un suelo
aromáticos fusionados dando como resultado contaminado con crudo en Kuwait una cepa
los denominados HAPs (Wade, 1993). de Aspergillus terreus capaz de utilizar en 21
La fracción de resinas son moléculas días 30% de crudo, 32% de los saturados y
complejas solubles en n-heptano, las cuales 14% de la fracción de aromáticos.
contienen compuestos heterocíclicos, ácidos Colombo et al. (1996), analizaron la
y sulfóxidos (Harayama et al. 1999). Por su capacidad degradativa de 7 especies de
parte, la fracción de asfaltenos son hongos (Aspergillus terreus, Fusarium
compuestos de alto peso molecular no solani, Trichoderma harzianum, Penicillium
solubles en n-heptano, que contienen en su chrysogenum, Coriolopsis rigida, Trametes
estructura compuestos aromáticos y villosa y Pleurotus ostreatus para degradar
alifáticos, heteroátomos (S, O, y N) y alifáticos e hidrocarburos aromáticos en un
metales pesados tales como Ni y V (Fish et período de 90 días. Los resultados lograron
al. 1984; Waldo et al. 1991; Strauz et al. determinar que el proceso de degradación se
1992). daba en el siguiente orden: n-alcanos de bajo
Zobell (1946), señaló que los hidrocarburos peso molecular > fenantreno > 3-2-
alifáticos, oleofinicos, aromáticos y metilfenantreno > n-alcanos con cadenas de
naftalénicos son los más susceptibles a sufrir longitud intermedia > n-alcanos de cadena

25
larga > isoprenoides. Este hecho coincidió En la Tabla 2, se presentan porcentajes de
con los resultados obtenidos por Hostettler y degradación reportados para las distintas
Kvenvolden (1994), en el derrame de fracciones SARA del crudo mediado por
petróleo de Exxon Valdez, donde el proceso hongos. Cabe destacar que, tal y como ha
de biodegradación se dio en el siguiente sido reportado, la mayor tasa de degradación
orden: n-alcanos de bajo peso molecular > n- la presentan las fracciones de saturados y
alcanos de alto peso molecular > aromáticos, y la mayor capacidad
isoprenoides y, en el caso de los aromáticos: degradativa la presentan las especies
fenantreno > 3-2 metilfenantreno > 9-1 Aspergillus terreus, Beauveria alba,
metilfenantreno. Coriolopsis rigida, Fusarium solani y
Por otro lado, Chaillan et al. (2004), Pleurotus ostreatus.
analizaron un cultivo de microorganismos
aeróbicos degradadores de hidrocarburos 3.2.3. Degradación de la fracción de
aislados de suelos contaminados con saturados
petróleo en Indonesia y encontraron 21 La fracción de saturados en el crudo está
hongos y 4 levaduras pertenecientes a los compuesta principalmente por alcanos de
géneros Aspergillus, Penicillium, Fusarium, cadena lineal de C1 a C40, alcanos
Amorphoteca, Paecilomyces, Talaromyces y ramificados C6-C8 y ciclohexanos (Stafford
Graphium para los hongos y a los géneros et al. 1982). En los hongos se ha
Candida, Yarrowia y Pichia para las demostrado que la degradación de la
levaduras. Estos autores encontraron una fracción de saturados ocurre principalmente
tasa de degradación del crudo total de entre 5 en los alcanos lineales (n-alcanos). El uso de
y 22%, obteniéndose la máxima degradación los n-alcanos por hongos y levaduras como
con los hidrocarburos saturados (100%), una única fuente de carbono y energía fue
degradación intermedia con los recopilado en una revisión realizada por
hidrocarburos aromáticos (0-17%) y baja Klug y Markovetz (1971), donde se destaca
con la fracción más polar de resinas y el hecho de que los alcanos simples lineales
asfaltenos (10 y 15 %, respectivamente). Así son más fáciles de degradar, seguido por los
mismo, Valenzuela et al. (2006), utilizando alcanos más grandes y los ramificados. Los
espectroscopia infrarroja, determinaron compuestos livianos, como alquilnaftalenos
fracciones del petróleo que fueron y fluorenos, presentan una mayor tasa de
degradadas por hongos de los géneros degradación que los compuestos de mayor
Absidia, Mortierella y Penicillium, las peso molecular, como los alquilcrisenos, por
cuales correspondían a las frecuencias 2850- lo que se ha llegado a la conclusión de que la
1800 cm-1 (aldehídos, alquinos y anhídridos) biodegradabilidad disminuye en la medida
y 1510-1000 cm-1(alcanos saturados e que se incrementa el número de sustituciones
insaturados, aromáticos y alquilos). de metilos (Chaillan et al. 2004).
En cuanto a la capacidad degradativa de los Estudios realizados con el hongo
consorcios microbianos, Li et al. (2002), Cladosporium resinae, el cual fue aislado de
inocularon con un consorcio de hongos un sistema de gasolina de avión (Jet fuel),
(Cunninghamella sp., Fusarium sp. Mucor demostraron que este hongo es capaz de
sp. y Phanerochaete chrysosporium) un utilizar como única fuente de carbono y
suelo contaminado con crudo, encontrándose energía alcanos lineales de C6 a C19, alcanos
una degradación en el siguiente orden: ramificados (C2 metil undecano) y alcanos
hidrocarburos saturados (43-68%) > cíclicos (ciclohexano y ciclohexeno)
aromáticos (32-44%) > resinas y asfaltenos (Parbery, 1971; Cofone et al. 1973). De
(10-37%). igual forma, los hongos Scedosporium y

26
Graphium fueron capaces de crecer en n- viswanathii, Candida palmioleophila y
alcanos en el rango de gasolina (C5-C9) y gas Pichia guilliermondii. Por otro lado, los
natural (C1-C4) y los hongos Fusarium isoprenoides pristano y fitano (19 y 20
oxysporum, Graphium rubrum, Graphium átomos de carbono, respectivamente) fueron
fruticolum, Penicillium lilacinus y Petriella ligeramente atacados por algunas cepas y
sp. de crecer en alcanos más grandes de C10- completamente metabolizados por otras y,
C16 (Lowery et al. 1968; Llanos y Kjoller, finalmente, los alcanos policíclicos se
1976). degradaron en poco menos de un 18%.
Por otro lado, en un experimento donde se Recientemente, Hamzah et al. (2012)
expuso Aspergillus versicolor a un crudo aislaron la cepa Trichoderma virens UKMP-
liviano (gravedad mayor a 31,1ºAPI), se 1M de un suelo impactado en Malasia y
encontró una biodegradación del 70% de los encontraron que esta era capaz de degradar
n-alcanos presentes en la muestra (Sánchez en 9 días n-alcanos tales como C12-C20 en un
et al. 2006). Igualmente, Beauveria alba fue 13%, C21-C38 en 67% y los alcanos
capaz de degradar 100% de los alcanos isoprenoides fitano y pristano en 74% y
lineales y 90% de los alcanos ramificados 100%, respectivamente. Estos autores
(Chaineau et al. 1999). La degradación de sugieren que los n-alcanos de cadenas cortas
alcanos se ha demostrado para Aspergillus son más tóxicos y por ende menos
niger, Aspergillus ochraceus y Penicillium biodegradables, en cambio, los alcanos de
chrysogenum capaces de degradar n-alcanos cadenas de tamaños intermedios C10-C20 son
(C13-C18) (Elshafie et al. 2007), Trichoderma los más biodegradables y los de cadenas
sp. eicosanos (C19) (Hadibaratata y largas C20-C40 son los menos biodegradables
Tachibana, 2009), mientras, que el hongo al ser compuestos más hidrofóbicos.
Pseudallescheria boydii fue capaz de En la Tabla 2, se observa la existencia de
degradar alifáticos lineales generando una hongos con una alta tasa degradativa de
completa remoción de C12 a C21 y la hidrocarburos saturados tales como:
remoción parcial de los C22 a C27, además de Aspergillus terreus (84%), Coriolopsis
degradar alcanos de cadenas ramificadas rigida (83%), Pleurotus ostreatus (82%),
(Zajic et al. 1969; April et al. 1998). Trichoderma harzianum (82%), Trametes
Chaillan et al. (2004), estudiaron la villosa (80%) y Phanerochaete
capacidad de degradación de 21 especies de chrysosporium (79%). En este punto, aparte
hongos aislados de suelo contaminado con de las cantidades de hidrocarburo utilizado,
crudo en Indonesia, encontrando una alta es importante destacar la influencia del
tasa de degradación en la fracción de los tiempo en los resultados, ya que la mayor
saturados, especialmente de los n-alcanos tasa de degradación se reporta en 90 días de
(100%) e isoalcanos para los hongos exposición. Un ejemplo de ello, son los
filamentosos pertenecientes a los géneros resultados reportados para A. terreus, F.
Amorphoteca, Aspergillus, Cunninghamella, solani y T. harzianum, donde los porcentajes
Eupenicillium, Fusarium, Neosartorya, de reducción de saturados a los 90 días son
Paecilomyces, Penicillium, Talaromyces, y aproximadamente el doble que los
las levaduras Yarrowia lipolytica, Candida encontrados para 30 días.

27
Tabla 2. Recopilación de los porcentajes de degradación de saturados, aromáticos, resinas y asfaltenos por especies
de hongos y consorcios, reportados en trabajos de investigación publicados en revistas registradas en las
bases de datos Web of Science (1940-2010) y SciFinder Scholar (1940-2010). NR: no reportado. Consorcio
Li: Cunninghamella sp., Fusarium sp. Mucor sp. y Phanerochaete chrysosporium.

Tiempo % Degradación
Especie Referencia
(días) Saturados Aromáticos Resinas Asfaltenos
Acremonium 30 42% 10% - - Chaǐneau et al.,
strictum 1999
Aspergillus 21 32% 45% 13% 13% Oudot et al.,
flavipes 1993
Aspergillus 21 22% 18% 15% 10% Oudot et al.,
fumigatus 1993
30 47% 11% - - Chaǐneau et al.,
1999
Aspergillus niger 30 13% 15% - - Chaǐneau et al.,
1999
Aspergillus 21 31.8% 13.8% NR NR Algounaim et al.,
terreus 1995
90 84% 100% NR NR Colombo et al.,
1996
Beauveria alba 30 65% 45% - - Chaǐneau et al.,
1999
Cladosporium 30 26% 27% - - Chaǐneau et al.,
herbarum 1999
Coriolopsis rigida 90 83% 91% NR NR Colombo et al.,
1996
E. javanicum 21 46% 31% 6 27% Oudot et al.,
1993
E. nidulans 21 60% 36% 16% 40% Oudot et al.,
1993
Fusarium solani 90 72% 100% NR NR Colombo et al.,
1996
30 40% 10% - - Chaǐneau et al.,
1999
G. putredinis 21 36% 37% 2% 30% Oudot et al.,
1993
Gongronella 30 5% 1% - - Chaǐneau et al.,
butleri 1999
Penicillim 30 55% 23% - - Chaǐneau et al.,
brevicompactum 1999
Penicillium 30 50% 10% - - Chaǐneau et al.,
pinophilum 1999
Penicillium 30 6% 8% - - Chaǐneau et al.,
restrictum 1999
Penicillium 30 46% 38% - - Chaǐneau et al.,
simplicissimum 1999
Phanerochaete 90 79% 36% NR NR Colombo et al.,
chrysogenum 1996
Pleurotus 90 82% 100% NR NR Colombo et al.,
ostreatus 1996
Trichoderma 90 82% 100% NR NR Colombo et al.,
harzianum 1996
30 39% 12% - - Chaǐneau et al.,
1999

28
Trichoderma 30 34% 21% - - Chaǐneau et al.,
koningii 1999
Trichoderma 30 54% 28% - - Chaǐneau et al.,
polysporum 1999
Trichoderma 30 33% 24% - - Chaǐneau et al.,
pseudokoningii 1999
Trametes villosa 90 80% 100% NR NR Colombo et al.,
1996
Consorcio Li en 56 66% 44% 38% Li et al., 2002
crudo Liviano
Consorcio Li en 56 68% 43% 22% Li et al., 2002
crudo
condensado
Consorcio Li en 56 43% 33% 10% Li et al., 2002
crudo pesado
Consorcio Li en 56 59% 33% 17% Li et al., 2002
crudo
extrapesado

En base a este hecho, se realizó un análisis de han descrito dos vías posibles degradación
conglomerados con todos los datos recopilados primaria: a) una oxidación diterminal con la
para determinar la distribución de géneros de formación de ácidos dicarboxílicos y; b) la
hongos según su capacidad para degradar oxidación subterminal generando alcoholes
saturados (Figura 6). El análisis de secundarios. Finalmente, los ácidos grasos son
conglomerados permitió la formación de dos incorporados a la vía catabólica por β-
grupos homogéneos, un grupo de alta y otro de oxidación, produciendo CO2 y H2O.
baja degradación, el primero formado por los
géneros Trametes, Phanerochaete, Pleurotus, 3.2.4. Degradación de la fracción de
Coriolopsis, Fusarium, Emerciella, y aromáticos
Beauveria, con un porcentaje de degradación En cuanto a la degradación de aromáticos, los
de 74.43±3.4 %, y el segundo, formado por los más estudiados han sido los HAPs, los cuales
géneros Cladosporium, Penicillum, Graphium, son compuestos de origen natural o
Aspergillus, Trichoderma, Penicillium, antropogénico que se encuentran en el suelo, el
Eupenicillum, y Acremonium con un aire y el agua. De estos compuestos, 16 han
porcentaje de degradación de 40.09±3.56 %. sido considerados por la Environmental
En cuanto al mecanismo por el cual los hongos Protection Agency (EPA) como tóxicos y
son capaces de degradar los hidrocarburos cancerígenos (Menzie et al. 1992; Nadon et al.
saturados, se ha descrito que es mediada por 1995). Es por ello, que en la actualidad se han
hidroxilación de los grupos metilos terminales sumado esfuerzos en encontrar
de los alcanos, siendo principalmente microorganismos que sean capaces de tolerar y
catalizada a nivel de los microsomas por el degradar estos compuestos con fines de
complejo enzimático Citocromo P-450 saneamiento ambiental. Según Cerniglia
monooxigenasa NADPH reductasa y las (1992), la tasa de degradación microbiana de
enzimas alcohol deshidrogenasa y aldehído HAPs es inversamente proporcional al número
deshidrogenasa (Prenafeta-Buldu et al. 2002). de anillos aromáticos en la molécula, por lo
Se ha sugerido que ocurre una oxidación de que los HAPs de bajo peso molecular son
los alcanos a alcoholes primarios y la degradados más rápidamente que los de mayor
generación de ácidos grasos vía aldehídos peso molecular.
(Walker y Cooney, 1973). Posteriormente, se

29
 Pernía B., Demey J.R., Inojosa Y., Naranjo-Briceño L. 2012. Rev Latinoam Biotecnol Amb Algal 3(1):1-40

Figura 6. Representación del patrón de distribución de grupos homogéneos de géneros de hongos según su
capacidad para degradar saturados, generada a través del análisis por conglomerados utilizando como
algoritmo de encadenamiento el UPGMA y la distancia euclideana entre las frecuencias observadas por
género. En el lado inferior derecho se presenta la distribución del porcentaje de degradación de saturados
por grupo, donde se muestra que existen diferencias significativas entre grupos de degradación (p≤0.05).
Cada grupo de hongos está representado por un color (azul y rojo).

En el caso de los hongos, se ha reportado mostraron que A. discolor fue capaz de

ampliamente la degradación de acenafteno, degradar HAPs, removiendo 62% de
antraceno, benzo[a]antraceno, DBT, fenantreno, 73% de antraceno, 54% de
fenantreno, fluoranteno, naftaleno, pireno y fluoranteno, 60% de pireno y 75%
benzopireno. De estos HAPs, el más benzo[a]pireno.
comúnmente degradado es el naftaleno Los resultados obtenidos en el presente
donde se ha reportado la mayor cantidad de trabajo, en la Tabla 2, muestran que existen
especies con potencial para biodegradarlo. diversos hongos que son capaces de degradar
De hecho, Uzoamaka et al. (2009), describen la fracción de aromáticos en un 100%, entre
la alta capacidad de Aspergillus niger y los que resaltan las especies: Aspergillus
Aspergillus versicolor de degradar en 7 días terreus, Fusarium solani, Pleurotus
un 99% de los siguientes HAPs: ostreatus, Trametes villosa y Trichoderma
acenaftaleno, Benzo[a]antraceno, harzianum. Es de interés que el hongo
Benzo[k]fluoranteno, Benzo[g,h,i]perileno, Coriolopsis rigida degrada un 91% de la
Benzo[a]pireno, criseno, Di- fracción de aromáticos, mientras que otros
benzo[a,h]antraceno, fenantreno, fluoranteno hongos degradan alrededor de un 50%, tales
y pireno. Acevedo et al. (2011) estudiaron la como Aspergillus flavipes y Beauveria alba.
degradación de HAPs de tres y cuatro anillos El análisis de conglomerados permitió la
por Anthracophyllum discolor, un hongo de diferenciación de tres grupos homogéneos de
la podredumbre blanca aislado de la selva hongos según su capacidad de degradar la
del sur de Chile. Los resultados obtenidos fracción de aromáticos (Figura 7). El primer

30
grupo de máxima degradación formado por un porcentaje de degradación de
los géneros Trametes, Pleurotus, Fusarium y 39.45±1.94% y un tercer grupo de mínima
Coriolopsis con un porcentaje de degradación formado por Eupenicillum,
degradación de 97.75±2.25%, el segundo Cladosporium, Penicillium, Aspergillus y
grupo de degradación intermedia formado Acremonium con un porcentaje de
por los géneros Graphium, Phanerochaete, degradación de 22.11±2.96% (Figura 7).
Emericella, Trichoderma y Beauveria con

Figura 7. Representación del patrón de distribución de grupos homogéneos de géneros de hongos según su
capacidad para degradar aromáticos, generada a través del análisis por conglomerados utilizando como
algoritmo de encadenamiento el UPGMA y la distancia euclideana entre las frecuencias observadas por
género. En el lado inferior se presenta la distribución del porcentaje de degradación de aromáticos por
grupo, donde se muestra que existen diferencias significativas entre grupos de degradación (p≤0.05). Cada
grupo de hongos está representado por un color (azul, rojo y amarillo).

Cabe destacar que en las Figuras 5, 6 y 7 los importancia de estas enzimas oxidativas en
grupos con mayor tasa de degradación de la capacidad degradativa de los hongos
TPH, saturados y aromáticos, están (Naranjo et al., 2007).
conformados por géneros del Phylum En cuanto a los mecanismos de degradación
Basidiomycota -no aislados de de aromáticos, se ha evidenciado que existen
hidrocarburos- (Phanerochaete, Coriolus, enzimas fúngicas capaces de modificar a los
Trametes, Pleurotus, Bjerkandera) y, de aromáticos por procesos de: i) oxidación,
todos los hongos aislados de crudo y sus tales como citocromo P-450 y las enzimas
derivados, solo presentaron una alta ligninolíticas lacasa, lignina peroxidasa,
capacidad degradativa los géneros manganeso peroxidasa; ii) halogenación
Beauveria, Emerciella=Aspergillus y como la cloroperoxidasa o por; iii)
Fusarium. El elemento común de estos conjugación como la Glutatión-S-transferasa
hongos es la producción de enzimas (Hammel et al. 1986; Datta et al. 1994;
ligninolíticas, lo que corrobora la Vázquez-Duhalt et al. 1994; Venkateswarlu

31
et al. 1996; Torres et al. 2003; Wang et al. metabolitos generados en el proceso de
2003; Doddapaneni y Yadav, 2004; degradación: ácido hidroxifenilacético,
Baborová et al. 2006; Paskova et al. 2006; carbazol 9-nitroso, ácido tianafteno 2
Ayala et al. 2008). carboxilico y hidroxipirenodiona (Uribe et
al. 2011).
3.2.5. Degradación de resinas y asfaltenos A nivel de modificaciones moleculares, en el
A fin de determinar la capacidad de los caso de Trichoderma (AB2), Bublitz et al.
hongos para degradar resinas y asfaltenos, se (1994), demostraron que este hongo era
recopiló la información disponible que había capaz de modificar asfaltenos haciéndolos
al respecto, encontrándose, en líneas más solubles por la incorporación de
generales, que las resinas y los asfaltenos oxígeno dentro de su estructura. Por otro
son las fracciones más polares y lado, Hofrichter et al. (1997) encontraron la
recalcitrantes del crudo, menos solubles, formación de bifenilo-2-ol (2
menos biodisponibles y por ende más hidroxibifenilo) al exponer asfaltenos al
difíciles de ser degradadas por los hongo Coprinus sclerotigenis. Estos autores
microorganismos (Oudot et al. 1984). Sin también estudiaron la capacidad degradativa
embargo, Oudot et al. (1993) encontraron de asfaltenos por el hongo Panus triguinus
que los hongos Emericella nidulans, mediante CG, encontrando una reducción en
Graphium putredinis, Eupenicillium el porcentaje de asfaltenos de pesos
javanicum y Aspergillus flavipes son capaces moleculares comprendidos entre 400 y 300
de degradar dichas fracciones en un rango de kDa concomitante aparición de nuevos
15-28 %, en el caso de las resinas, y entre compuestos de 100 kDa a los 28-42 días de
15-40% en el caso de los asfaltenos. haber iniciado el experimento (Hofrichter et
De igual forma, Chaillan et al. (2004), al. 1997).
encontraron que los hongos Paecilomyces En cuanto al mecanismo utilizado por los
variotii y Fusarium decemcellulare y las hongos para degradar estas fracciones
levaduras Candida palmioleophila y Pichia recalcitrantes, existen evidencias de que
guillermomdii eran capaces de degradar algunas enzimas fúngicas son capaces de
resinas y asfaltenos en un rango de 10-15 %. modificar los asfaltenos. Tal es el caso de la
Además, Li et al. (2002), en un experimento enzima cloroperoxidasa del hongo
de biodegradación en biopilas, encontraron Caldariomyces fumago la cual es capaz de
un porcentaje de degradación de asfaltenos y transformar las petroporfirinas permitiendo
resinas de 9.98% y 37.35%, remover los metales pesados Ni y V de los
respectivamente, luego de 53 días de asfaltenos (Fedorak et al. 1993). Estos
tratamiento utilizando los hongos autores encontraron una reducción del 93%
Cunninghamella sp., Fusarium sp. y de Ni en niquel octaetilporfina, 53% de V en
Phanerochaete chrysosporium. Más vanadil octaetilporfina y 20% del Ni y V de
recientemente, Uribe et al. (2011), en la fracción de asfaltenos luego de la
condiciones de laboratorio, describieron la exposición a la cloroperoxidasa (Fedorak et
capacidad de una cepa de Neosartorya al. 1993). Igualmente, Mogollón et al.
fischeri aislada del lago natural de asfalto de (1998), encontraron una reducción de 53% y
Guanoco (Edo. Sucre, Venezuela), de crecer 27% del Ni y V totales de una fracción rica
en medio líquido utilizando asfaltenos como en porfirinas y asfaltenos expuesta a esta
única fuente de carbono y energía y de enzima.
mineralizar los mismos en un 13,2%.
Además de ello, detectaron mediante la
técnica de cromatografía de gases, los

32
3.3 Evidencias de degradación de derivados facilitando, al reducir el contenido de
del crudo (gasolina, diesel y kerosén) por aromáticos, el crecimiento de la bacteria, la
hongos cual, a su vez, acelera el proceso de
Existen diversas evidencias de que los degradación de los saturados, promoviendo
hongos son capaces de degradar gasolina, finalmente la degradación de aromáticos por
diesel y kerosén. Adekunle y Oluyode el hongo.
(2005), aislaron hongos de semillas de
melón y soya y probaron su capacidad para 4. Conclusiones
degradar crudo y sus derivados, encontrando
que la especie Botryodiplodia theobromae  El meta-análisis realizado con la
tenía la mayor capacidad de degradar crudo, información reportada en los trabajos de
Aspergillus flavus de degradar diesel y investigación publicados en las bases de
Macrophomina phaseolina de degradar datos Web of Science y SciFinder Scholar
kerosén. Igualmente, Salmanov et al. (2008), muestra que del total de hongos aislados
demostraron que los hongos Aspergillus, de crudo, sus derivados y sustratos
Penicillium, Mucor y Fusarium eran capaces impactados corresponden a los Phyla:
de utilizar activamente crudo, diesel y Ascomycota (83%), Zygomycota (10%),
kerosén como fuente de carbono y energía. Glomeromycota (6%) y Basidiomycota
Por otro lado, Saratale et al. (2007), (1%), siendo este último el de mayor
reportaron que el hongo Aspergillus capacidad degradativa.
ochraseus demostró ser capaz de reducir el  Los géneros de mayor frecuencia de
TPH del kerosén en un 84%. Además de aislamiento en hidrocarburos fueron
ello, demostraron por espectroscopia FT-IR Penicillium (18%), Aspergillus (17%) y
que éste era capaz de generar cambios en tan Fusarium (6%), siendo Penicillium el
solo 4 días de exposición, observándose la hongo más cosmopolita ya que fue
aparición de bandas a 2749 cm-1, 2729 cm-1 aislado de todos los sustratos impactados
y la aparición de 7 bandas entre 794–1402 con hidrocarburos.
cm–1, que indican la formación de aldehídos
alifáticos y aromáticos que son productos de  En función del porcentaje de degradación
degradación del kerosén. de TPH, el grupo reportado que presentó
En cuanto a la degradación de diesel, Li et mayor degradación fue el formado por los
al. (2008), estudiaron la degradación de este géneros Phanerochaete, Coriolus,
hidrocarburo mediado por la bacteria Trametes, Pleurotus, Bjerkandera,
Mycobacterium hyalinum, el hongo Rhizopus, Emerciella y Aspergillus.
Cladosporium y por un consorcio utilizando  Con respecto a las fracciones de
los dos microorganismos anteriores. Para saturados, los géneros con mayor
ello, expusieron durante 5 días los capacidad degradativa fueron:
microorganismos al diesel y, mediante CG, Phanerochaete, Coriolopsis, Trametes,
determinaron que hubo una degradación de Pleurotus, Emerciella, Fusarium y
21% para el caso de M. hyalinum, de 34% Beauveria.
para Cladosporium. Sin embargo,
observaron una degradación de un 99% al  Con respecto a las fracciones de
utilizar el consorcio microbiano aromáticos, los géneros con mayor
(Mycobacterium-Cladosporium). Estos capacidad degradativa fueron: Trametes,
autores sugieren que el hongo Cladosporium Pleurotus, Fusarium y Coriolopsis.
es capaz de degradar tanto los hidrocarburos
alifáticos como los aromáticos en el diesel,

33
 En la literatura, solo existen evidencias de fungus. African Journal of Biotechnology
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 Acién F.G., Fernández J.M., Magán J.J., González A, Molina E. 2012. Rev Latinoam Biotecnol Amb Algal 3(1):41-58

Evaluación global de la producción de biocombustibles con

microalgas: Establecimiento de capacidades, limitaciones y
factores determinantes de la viabilidad del proceso
F.G. Acién*1, J.M. Fernández-Sevilla1, J.J. Magán2, A. González-Céspedes2, E.Molina1
1
Departmento de Ingeniería Química, Universidad de Almería, 04120 Almería, España
2
Estación Experimental Las Palmerillas, Fundación Cajamar, 04710 Almería, España
*
Autor para correspondencia: [email protected]
Resumen
En este trabajo se presenta un análisis global de la producción de microalgas para la producción
de biocombustibles. El punto de partida es el balance de energía al proceso que permite
cuantificar la capacidad de producción máxima alcanzable en 200 Ton/ha·año aunque los valores
reales obtenidos a pequeña escala difícilmente superan las 100 Ton/ha·año. Para lograr estas altas
productividades es necesario utilizar sistemas de cultivo y microalgas de elevado rendimiento, es
decir que permitan alcanzar altas productividades con bajos consumos energéticos o utilizando
muy eficazmente la radiación solar disponible. Las tecnologías de cultivo a emplear deben ser
optimizadas pero no necesariamente tienen que se reactores abiertos de gran volumen por unidad
de superficie, siendo posible utilizar reactores de poco volumen por unidad de área. El mayor
cuello de botella para la producción de biocombustibles a partir de microalgas es el elevado coste
de producción de la biomasa. El análisis económico llevado a cabo permite identificar los
factores que mas contribuyen a dicho costo. De este estudio se concluye que los reactores de
elevada productividad y baja relación V/S son los más recomendables, aunque hoy día siguen
siendo demasiado costosos frente a los tradicionales reactores abiertos tipo raceway.

Palabras clave: Microalgas, biocombustibles, coste producción, productividad,

fotobiorreactores.

1. Introducción precio del petróleo y sus combustibles

derivados. Por este motivo, hasta hace pocos
La idea de producir biocombustibles a partir años la producción de microalgas ha
de microalgas procede de los años 60 quedado restringida a la obtención de
(Oswald and Golueke 1960). De esta época productos de alto valor o biomasa de alta
son los primeros intentos relevantes de llevar calidad de uso en alimentación humana y
a cabo este proceso a gran escala, cuando animal, especialmente en acuicultura (Pulz
Japón y EEUU pusieron en marcha and Gross 2004). Sin embargo, el alza en los
proyectos de investigación nacionales con precios del petróleo y el problema de
este objetivo (Benemann 1997; Hughes and calentamiento global derivado del uso del
Benemann 1997). A pesar de estos petróleo como combustible han vuelto a
importantes esfuerzos no se alcanzó un focalizar la atención en las microalgas como
desarrollo comercial viable debido a los fuente de biocombustibles (Chisti 2007;
elevados costos de producción de la biomasa Chisti 2008). Las microalgas han sido
de microalgas y de los biocombustibles propuestas como sistema de captura de CO2
obtenidos cuando se comparaban con el y su transformación en productos de uso

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 Acién F.G., Fernández J.M., Magán J.J., González A, Molina E. 2012. Rev Latinoam Biotecnol Amb Algal 3(1):41-58

industrial como biocombustibles, incrementa (Chisti 2007). Para una

aminoácidos, carotenoides, o incluso su producción de 200 toneladas/año y
empleo en el tratamiento de aguas resiuales utilizando gases de combustión como fuente
(Benemann 1997 ; Muñoz, et al. 2005 ; de dióxido de carbón y agua residual como
Olguín 2003, 2012 ; Pulz and Gross 2004 ; fuente de nutrientes, el costo de producción
Rodolfi, et al. 2009 ; Romero García, et al. se reduce a 1800 $/tonelada (Acién, et al.
2012) ya que aproximadamente el 40% del 2012). De estos datos se concluye que el
peso de la biomasa es carbono, por lo que la precio de producción de biomasa de
producción de 100 toneladas de biomasa microalgas se debe reducir aún al menos en
requiere un consumo mínimo de 183 un orden de magnitud para lo cual es
toneladas de dióxido de carbono. Sin necesario mejorar las tecnologías
embargo, hay que tener en cuenta que la actualmente utilizadas, incluyendo las cepas
biomasa producida no puede ser almacenada utilizadas y los tipos de fotobiorreactores, así
por largos periodos ya que se corrompe como los procedimientos de cosechado y
fácilmente, por lo que el uso de microalgas procesado de la biomasa para su
no puede ser considerada una estrategia de transformación en biocombustibles. Los
almacenamiento de dióxido de carbono. avances recientes en estas áreas permiten ser
Las microalgas tienen determinadas ventajas optimistas en cuanto a la viabilidad
frente a los cultivos energéticos comercial de este tipo de procesos en los
convencionales como fuente de próximos 10 a 15 años (Wijffels and
biocombustibles entre las que destaca el Barbosa 2010).
hecho que las microalgas compiten con En este trabajo se presenta un análisis
dichos cultivos por agua y suelos fértiles, no global de la producción de microalgas para
afectando así a la producción de cultivos la producción de biocombustibles con
destinados a consumo humano. En este microalgas, en el que se analiza la capacidad
sentido, las microalgas han sido propuestas máxima de producción que cabe esperar en
como la única alternativa sostenible para la función de la disponibilidad de energía solar
producción de biocombustibles (Chisti y capacidad de las microalgas de transformar
2007). Sin embargo, para ser competitiva en dicha energía en biomasa y ácidos grasos.
el mercado energético la producción de Además se analizan los fenómenos que tiene
microalgas debe aproximarse a la de los lugar en los sistemas de producción de
cultivos energéticos tanto en capacidad microalgas, identificando aquellos que
como en coste. Así, la producción de aceite limitan actualmente dicha producción.
de palma es mayor de 40 millones de Finalmente se hace un análisis de costos del
toneladas al año a un precio de 0.5 €/kg. En proceso, identificando aquellos que en
este sentido, el coste de producción de mayor medida gravan dicha producción
biodiesel a partir de microalgas es aun como susceptibles de ser reducidos con
superior y lo que es mas importante no vistas a una producción industrial.
existen instalaciones a gran escala que
permitan conocer con precisión dicho coste; 2. Capacidad máxima de
la mayoría de los datos disponibles proceden producción de biomasa
de extrapolaciones obtenidas de datos de
laboratorio o escala piloto. Así, actualmente La capacidad máxima de producción de
el costo de producción de microalgas para biomasa con microalgas está determinada,
una producción de 100 toneladas/año se entre otros factores, por la disponibilidad de
estima en 3000 $/tonelada, pero este precio radiación solar. La radiación solar disponible
se reduce notable cuando la escala se a nivel del suelo en una superficie horizontal

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es función de la localización geográfica elevados corresponden a zonas templadas y

considerada. La Figura 1 muestra el mapa de cálidas del planeta con valores de radiación
distribución de radiación solar en la disponible, Haño, entre 2000 y 3000
superficie terrestre. Los valores más kWh/m2·año.

Figura 1.- Mapa de distribución de radiación solar a nivel del suelo.

Como valor medio se puede considerar una zonas con valores de radiación solar media
radiación solar media diaria, Hdía, de 250 diaria superiores a 300 W/m2·dia, que
W/m2·dia, que equivale a un valor medio de equivalen a un valor medio de radiación
radiación disponible, Haño, de 2160 disponible, Haño, de 2600 kWh/m2·año.
kWh/m2·año (Ec. 1). Sin embargo, existen
 Wh  W   día   h  Ec. 1
Haño  2   Hdía  2 ·365  ·24  
 m año  m   año   día 
Sin embargo, toda la radiación solar que de forma neta solo un 8% de la radiación
disponible no puede ser totalmente asimilada solar disponible puede ser eficientemente
ya que solo la mitad es radiación asimilada. Si además se tiene en cuenta que
fotosintéticamente activa. De ella solo una se trata de organismos fotosintéticos con
parte llega a los cloroplastos debido a periodos de respiración durante la noche y
fenómenos de reflexión y absorción no consumo de energía para mantenimiento, al
útiles, por lo que solo un 25% de la energía final se concluye que la cantidad máxima de
recibida es netamente asimilable (Figura 2). energía que puede ser fijada como biomasa
De esta energía, la fotosíntesis es capaz de neta es de un 5% (Ec. 2) (Schenk, et al.
asimilar químicamente un 70% 2008).
convirtiéndola en energía química, por lo
W  W  Ec. 2
Eday  2   Hday  2 ·Ef1·Ef2·Ef3·Ef4·Ef5
m  m 

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Figura 2. Pérdidas de rendimiento en la utilización de energía solar por microorganismos fotosintéticos.

Estos valores de radiación disponible y Tm/ha•año. Teniendo en cuenta que cada

eficiencia de la fotosíntesis determinan la tonelada de biomasa implica la fijación real
capacidad máxima de almacenamiento de de 2 toneladas de CO2, esta productividad
energía, y por ende, de producción de de biomasa se traduce en demandas o tasas
biomasa que se pueden alcanzar. Así, 250 de fijación de CO2 de 1.1 Tm/ha•día o 390
W/m2 de radiación solar disponible Tm/ha•año. Así pues, la primera limitación
equivalen a una disponibilidad de energía de en la capacidad de producción de microalgas
21.6 MJ/m2·dia, que con una eficiencia es la disponibilidad de radiación solar. La
fotosintética del 5% se traducen en una selección de una ubicación con altas tasas de
fijación neta de energía química de 1.1 radiación solar disponible resulta
MJ/m2/día. (Tabla 1). determinante en la capacidad de producción.
A esto se debe añadir el efecto de la
Tabla 1.- Estimación de la productividad de biomasa temperatura. Cada microorganismo posee
en función de la radiación solar disponible una temperatura óptima y la ubicación
considerada.
seleccionada debe poseer una temperatura
Parámetros Valor Unidades media anual lo más parecida posible a la
Radiación solar media 250 W/m2 temperatura óptima del microorganismo, y
2160 kWh/m2·año con las mínimas variaciones tanto diarias
Eficiencia fotosintética 5.00 % como estacionales.
Radiación solar diaria 21.60 MJ/m2·día
Fijación de energía 1.08 MJ/m2·día 3. Tecnología de producción de
Calor de combustión biomasa
20.00 MJ/kg
de la biomasa
Productividad de Una vez definidos los valores máximos
54.00 g/m2·día
biomasa
alcanzables es necesario tener en cuenta que
194.4 Tm/ha·año
el lograrlos o no, así como a que coste,
Fijación de CO2 1.08 TmCO2/ha·día
depende de la tecnología que se utilice. En
388.8 TmCO2/ha·año
este sentido actualmente existen varias líneas
de investigación relacionadas con el diseño y
Considerando un calor de combustión de la
operación de reactores pero en todas ellas
biomasa de 20 MJ/kg (20 kJ/g) esto supone
hay que tener en cuenta las mismas variables
una productividad máxima de 54 g/m2•día, o
como son el consumo de energía, la
extrapolando a una hectárea, un valor de 200

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productividad y la concentración de al 20% de dicha fijación neta de energía se

biomasa. La primera variable a la hora de observa que en función del tipo de reactor, y
seleccionar el reactor más adecuado es el en concreto de su relación volumen por
consumo de energía. Hasta ahora los unidad de superficie, es posible operar con
estudios realizados han reflejado el elevado varios diseños de reactores. La Figura 3
consumo de energía en los sistemas de muestra como en función del diseño de
cultivo desarrollados planteándose casi en reactor considerado, es decir la relación
exclusiva el uso de reactores raceway como volumen por unidad de superficie, al
opción energéticamente positiva aumentar el consumo de energía por unidad
(Huesemann and Benemann 2009 ; Rodolfi, de volumen (W/m3) el consumo de energía
et al. 2009 ). En este sentido, es evidente que por unidad de superficie (W/m2) se
dicho consumo no puede ser superior a la incrementa de forma lineal, aumentando de
cantidad máxima de energía que es posible forma más pronunciada en aquellos diseños
fijar y que se ha cuantificado en 1.1 de mayor volumen de cultivo por unidad de
MJ/m2·dia. Por tanto, si se establece un superficie (Ec. 3).
autoconsumo de energía como máximo igual

Figura 3. Variación del consumo de energía por unidad de superficie en el reactor en función de su consumo por
unidad de volumen y relación V/S del mismo.

Estos resultados muestran como reactores de energía alcanzable, mientras que en

gran volumen por unidad de superficie, tipo reactores de pequeño volumen por unidad de
raceway, deben operar con consumos de superficie este consumo de energía puede
potencia inferiores a 15 W/m3 para aumentar hasta más de 100 W/m3,
mantenerse por debajo del autoconsumo manteniéndose a pesar de ello por debajo del
permitido del 20% de la fijación máxima de autoconsumo permitido.
Ec. 3
 W  P  W V m 
3
P 
V  m3  S  m2 
·
S  m2 

La relación volumen por unidad de máxima alcanzables en el cultivo. Así, si se

superficie del reactor, determina además la tiene en cuenta que la productividad máxima
productividad y concentración de biomasa por unidad de superficie está fijada por la

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 Acién F.G., Fernández J.M., Magán J.J., González A, Molina E. 2012. Rev Latinoam Biotecnol Amb Algal 3(1):41-58

radiación solar disponible y la eficiencia de unidad de superficie (200 L/m2) la

la fotosíntesis considerada, en un valor de 54 productividad volumétrica debe ser igual o
g/m2·día, la relación volumen por unidad de superior a 0.27 g/L·día mientras que en los
superficie determina la productividad reactores de menor relación volumen por
volumétrica que es necesario obtener para unidad de superficie (25 L/m2) la
alcanzar dicha productividad máxima por productividad volumétrica debe ser igual o
unidad de superficie. La Figura 4 refleja superior a 1.7 g/L·día (Ec. 4).
como en los reactores de mayor volumen por
 g  Ec. 4
Pbarea  2 
 g   m ·day 
Pbvol  3 
 m ·day  V m 
3

S  m 2 


Entre estos dos valores extremos se observa mientras que en reactores cerrados se han
una variación hiperbólica de la referenciado productividades de hasta 47
productividad volumétrica de biomasa con la g/m2·día (Chisti 2007 ), aunque se han
disminución de la relación volumen por referenciado productividades de hasta 100
unidad de superficie del reactor. En los g/m2·día, por encima de las teóricamente
reactores raceway la productividad máxima alcanzables (Pulz 2007 ).
considerada como alcanzable media anual se
estima en 20 g/m2·día (Borowitzka 1999 ),

Figura 4. Variación de la productividad de biomasa por unidad de volumen alcanzable en el reactor, para obtener la
productividad máxima por unidad de superficie, en función de la relación V/S del reactor.

La productividad de biomasa máxima se crecimiento, con velocidades específicas

obtiene operando en continuo de forma máximas no inferiores a 0.8 día-1. Teniendo
estable durante todo el año, a la velocidad de en cuenta que la velocidad de dilución
dilución óptima. Aunque la velocidad de óptima recomendada para la producción en
dilución óptima puede variar en función del continuo de cualquier microorganismo está
microorganismo, condiciones de cultivo y entre el 50-70% de dicha velocidad de
época del año, resulta evidente que para dilución, y considerando el valor más
maximizar la producción de biomasa se conservativo del 50%, se obtiene que dicha
deben seleccionar cepas de rápido velocidad de dilución óptima debe ser de

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aproximadamente 0.4 día-1. A partir de este instalación como de su consumo energético.

valor se puede estimar tanto la concentración La Figura 5 muestra como al disminuir la
de biomasa en estado estacionario (Ec. 5) relación volumen por unidad de superficie la
como otros parámetros relevantes como son concentración de biomasa de estado
el volumen total de cultivo (Ec. 6) y el estacionario aumenta, desde 0.7 g/L hasta
volumen de cosechado diario (Ec. 7), ambos 4.2 g/L para 200 L/m2 y 25 L/m2
determinantes tanto del coste de la respectivamente.

Figura 5. Variación de la concentración de biomasa, volumen de cultivo y volumen de cosechado, para alcanzar la
productividad máxima establecida por unidad de superficie, en función de la relación V/S del reactor.

Por el contrario, el volumen de cultivo y de necesario procesar hasta 1500 L de

cosechado a procesar por cada kilo de cosechado para producir un kilo de biomasa
biomasa producida aumentan con la relación al día. Este mayor volumen de cultivo incide
volumen por unidad de superficie. Para el de forma directa en los costes del reactor así
menor valor analizado, de 25 L/m2, el como de su operación, mientras que el
volumen de cultivo requerido para producir volumen de cosechado repercute en el
1 kg/día es de590 L siendo necesario tamaño y coste de operación de los equipos
procesar un total de 240 L de cosechado. tanto de preparación de medio de cultivo
Para el mayor valor analizado, de 200 L/m2, como de cosechado y concentración de la
el volumen de cultivo requerido para biomasa. Por tanto, ambos inciden en el
producir 1 kg/día es de 3700 L siendo coste de producción de la biomasa.
 g  Ec. 5
Pbvol  3 
 g   m ·day 
Cbvol  3  
m   1 
D 
 day 

 g  Ec. 6
Mday  
Vculture m3    day 
 g 
Pbvol  3 
 m ·day 

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 m3   1  Ec. 7
  Vculture m ·D 
3
Vharvest  
 day   day 

4. Características del de luz favorece también el crecimiento. Ya

microorganismo que el parámetro n es una constante de
forma la única variable que se puede
Para poder aprovechar al máximo la modificar en el microorganismo es la
radiación solar disponible es preciso utilizar constante de irradiancia Ik. Para determinar
microorganismos capaces de crecer la influencia de esta variable se ha simulado
adecuadamente en las condiciones de cultivo la productividad la productividad de biomasa
predominantes, y que muestren elevadas del microorganismo para distintos valores de
productividades así como composiciones Ik, manteniendo constantes el resto de
bioquímicas adecuadas. El crecimiento y parámetros. Los resultados muestran como
productividad de cualquier microorganismo la reducción de Ik permite alcanzar mayores
se puede ajustar a un modelo hiperbólico productividades de biomasa y hacerlo a
(Molina Grima, et al. 1996). En dicho mayores velocidades de dilución (Fig. 6).
modelo la velocidad de crecimiento, µmax, es Esto se debe a que microorganismos con
función de la velocidad específica máxima menor valor de Ik son mas eficientes en el
de crecimiento, µmax, la disponibilidad de uso de la radiación solar disponible,
luz, Iav, la constante de irradiancia, Ik, y el alcanzando mayores concentraciones de
parámetro de forma, n (Ec. 8). Es evidente biomasa para la misma velocidad de dilución
que cuanto mayor sea la µmax del e irradiancia promedio disponible,
microorganismo mayor será su velocidad de aumentando de esta forma la productividad
crecimiento así como que la disponibilidad de biomasa.
max ·Iavn Ec. 8

Ikn  Iav
n

Pb  ·Cb Ec. 9

Figura 6. Influencia de la constante de irradiancia en la productividad de biomasa de

microorganismos fotosintéticos.

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 Acién F.G., Fernández J.M., Magán J.J., González A, Molina E. 2012. Rev Latinoam Biotecnol Amb Algal 3(1):41-58

En cuanto a la generación de producto, por crecimiento aunque se induce solo en

ejemplo ácidos grasos, ésta viene ausencia o limitación del crecimiento (Ec. 11)
determinada por la producción de biomasa y ( el ío, et al. 2008).
el contenido en ácidos grasos de la misma. Para determinar la influencia de cada término
Dicha productividad se puede determinar se ha simulado la productividad de ácidos
también como el producto de la velocidad grasos que se podrían obtener en función del
especifica de acumulación de ácidos grasos, valor de Yp/x y Beta. Los resultados
qp, por la concentración de biomasa (Ec. 10). muestran como al aumentar el valor de Yp/x
La velocidad específica de acumulación de se produce un aumento en la productividad de
ácidos grasos se expresa como la suma de dos ácidos grasos, la cual en todos los casos
términos, uno correspondiente al metabo- aumenta con la velocidad de dilución hasta el
lismo primario y que es proporcional a la valor óptima de la misma, por encima del
velocidad de crecimiento, y el segundo cual dicha productividad disminuye (Figura
correspondiente al metabolismo secundario y 7).
que es independiente de la velocidad de
Pag  Pb ·Xag  qp ·Cb Ec. 10

qp  Yp / x ·   Ec. 11

Figura 7. Influencia del coeficiente de rendimiento en producto ligado al crecimiento, Yp/x,

en la productividad de ácidos grasos de microorganismos fotosintéticos.

Figura 8. Influencia del coeficiente de rendimiento en producto no ligado al crecimiento, Beta,

en la productividad de ácidos grasos de microorganismos fotosintéticos.

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 Acién F.G., Fernández J.M., Magán J.J., González A, Molina E. 2012. Rev Latinoam Biotecnol Amb Algal 3(1):41-58

En cuanto al valor de Beta, aunque éste será existente entre Beta y 1/D, por lo que sólo en
función de muchos factores, se puede el caso de microorganismos que muestren un
representar como debe variar para afectar muy marcado efecto de acumulación de
significativamente a la producción de ácidos ácidos grasos en limitación o ausencia de
grasos. En todos los casos se ha considerado crecimiento éste fenómeno puede contribuir
una variación inversamente proporcional a la significativamente a incrementar la
velocidad de crecimiento. Los resultados productividad de ácidos grasos.
obtenidos muestran como cuando no existe
metabolismo secundario la productividad de 5. Coste de producción de biomasa
ácidos grasos es máxima a la velocidad de
dilución que optimiza la productividad de Para evaluar el coste de producción de la
biomasa (Figura 8). Cuando existe biomasa, utilizando las diferentes
metabolismo secundario la productividad de tecnologías de cultivo consideradas, se ha
ácidos grasos se incrementa con respecto a la partido del caso de una planta de producción
situación en ausencia del mismo, sólo a de microalgas en fotobiorreactores tubulares,
bajas velocidades de dilución, inferiores a ubicada en Almería y perteneciente a la
0,2 1/día. En estos casos el aumento Fundación CAJAMAR (Figura 9).
observado es proporcional a la relación

Figura 9. Imagen del sistema de cultivo utilizado para la estimación económica de costes.
Planta semi-industrial de producción de microalgas en fotobiorreactores tubulares ubicada en la
Estación Experimental Las Palmerillas de la Fundación Cajamar.

En esta planta se produce biomasa de centrífugas para la impulsión del cultivo, y

Scenedesmus almeriensis, una microalga al diseño modular de la instalación.
dulceacuícola de elevado crecimiento y Para estimar el coste de producción en dicha
tolerancia a factores ambientales (pH y instalación se ha utilizado la metodología de
temperatura). Los parámetros de la los factores de Lang partiendo del coste de
instalación existente se muestran en la Tabla los equipos principales para establecer el
2 donde se observa una elevada capital inmovilizado, así como el coste de
productividad pero también alto consumo los reactivos, servicios y mano de obra
energético debido al uso de bombas necesarios para la operación de la planta.

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 Acién F.G., Fernández J.M., Magán J.J., González A, Molina E. 2012. Rev Latinoam Biotecnol Amb Algal 3(1):41-58

Tabla 2.- Condiciones de operación en la instalación de producción de microalgas considerada.

Parámetro Valor Unidades

Relación V/S 0.08 m3/m2
Dilución 0.40 1/día
Productividad de biomasa 0.66 g/l·día
Concentración de biomasa 1.65 g/l
Tiempo de operación 280 Días/años
10 h/día
Capacidad de producción 5.50 Tn/año
Razón de aireación 0.10 v/v/min
Consumo de energía 500 W/m3
Volumen de cultivo 30 m3
Superficie de cultivo 397 m2

Figura 10. Diagrama de bloques del proceso de producción de biomasa considerado.

El diagrama de bloques del proceso terrenos, ingeniería, contratistas e

instalado se muestra en la Figura 10. Los imprevistos. Haciendo uso de los factores
equipos principales considerados suponen un referenciados para procesos basados en
total de 327 k€ (Tabla 3), pero a ello hay que microalgas (Molina Grima, et al. 2003 ) se
sumar todos los costes de instalación de los obtiene un total de capital inmovilizado de
mismos, así como tuberías, electricidad, 962 k€ (Tabla 4).

Tabla 3.- Listado de equipos principales y su coste para la instalación de producción considerada.
Equipo Capacidad Coste, €/Unidad Unidades Coste total, €
3
Preparación de medio 4.0 m /h 6.000 1 6.000
Esterilización de medio 2.0 m3/h 15.000 1 15.000
Soplante de aire 200.0 m3/h 2.500 1 2.500
Fotobiorreactores 3.0 m3 15.000 10 150.000
Sedimentador 2.5 m3/h 4.500 0 -
Tanque cosechado 1.0 m3 127 1 127.31
Decantador 4.0 m3/h 45.000 1 45.000
Bomba cosechado 2.0 m3/h 1.000 1 1.000
Suministro de CO2 4.0 kg/h 459 1 458.93
Liofilización 70.0 kg/día 107.124 1 107.124
Total 327.210

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 Acién F.G., Fernández J.M., Magán J.J., González A, Molina E. 2012. Rev Latinoam Biotecnol Amb Algal 3(1):41-58

Tabla 4.- Estimación del coste de producción de biomasa en la instalación de producción considerada.

Concepto Coste, €
Equipos principales 327.210
Costes instalación 65.442
Instrumentación y control 49.081
Tuberías 65.442
Electricidad 32.721
Edificios 73.622
Acondicionamiento terreno 39.265
Servicios 65.442
Terreno 19.632
Ingeniería y supervisión 98.163
Gastos construcción 36.892
Contratista 18.446
Imprevistos 71.309
Total 962.671

A partir de este valor, y considerando un de producción se obtiene el coste unitario

periodo de amortización de 10 años se por kilogramo de biomasa, siendo este de
estima de forma lineal una amortización de aproximadamente 47€/kg (Tabla 5). Estos
109 k€ al año, a los que hay que sumar los valores estimados corresponden con los
costes de consumibles, servicios y mano de valores reales determinados durante la
obra. Estos costes suman un total de 147 k€, operación de dicha planta, lo que verifica la
por lo que en total los costes de producción bondad de la metodología de estimación de
ascienden a 256 k€ al año (Tabla 5). costes utilizada.
Dividiendo estos costes entre la capacidad

Tabla 5.- Estimación del coste de producción de biomasa en la instalación de producción considerada.

Amortización Unidades Coste, €/unidad Coste, €

Tiempo de vida 10
Amortización 92,340
Impuestos propiedad 923
Seguros 554
Impuesto compras 15,402
Total 109,220
Costes de producción Unidades Coste, €/unidad Coste, €
Medio de cultivo 3,333 0.40 1,333
Dióxido de carbono 13,750 0.40 5,500
Agua 333 0.10 33
Energía eléctrica 100,667 0.08 8,053
Mano de obra 3 30,000 90,000
Supervisión 18,000 3.600
Impuestos de trabajo 23,400 5,850
Mantenimiento 13,088 523
Suministros 2,159 8

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Acién F.G., Fernández J.M., Magán J.J., González A, Molina E. 2012. Rev Latinoam Biotecnol Amb Algal 3(1):41-58

Gastos generales 51,767 28,472

Impuestos 85 13
Imprevistos 26,994 1,349
Marketing 48,133 2,407
Total materias primas 6,833
Total servicios 8,086
Total mano de obra 132,224
Coste unitario, €/kg 46.61

Figura 11. Distribución de costes estimada considerando 3 hombres-mes de personal.

Figura 12.- Distribución de costes estimada considerando 1 hombre-mes de personal.

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 Acién F.G., Fernández J.M., Magán J.J., González A, Molina E. 2012. Rev Latinoam Biotecnol Amb Algal 3(1):41-58

Sin embargo, lo más interesante de este La reducción de la mano de obra no puede

cálculo no es el valor final obtenido en sí, hacerse si no es a través de una
sino la propia metodología de determinación automatización y simplificación de la
usada, que permite identificar cuáles son los instalación. En condiciones de producción la
factores que más contribuyen al coste y por mano de obra suficiente para operar dicha
tanto los que primero deben ser reducidos, planta es de 1 persona, por lo que el coste de
así como que se trata de una metodología producción se reduce a 31.3 €/kg pasando a
aplicable a cualquier otro escenario por lo ser la partida mayoritaria la correspondiente
que puede ser utilizada para estimar el coste a la amortización del capital inmovilizado
de producción en diferentes sistemas de (Figura 12).
cultivo o condiciones. En cuanto a la Para reducir la partida de capital
identificación de los factores de coste más inmovilizado se analiza el coste de los
importantes la Figura 11 muestra como la diferentes equipos observándose como los
mano de obra y la amortización del capital fotobiorreactores, el liofilizador y la
inmovilizado son las partidas de gasto más centrifugación son los que mayoritariamente
importantes, y por tanto las primeras que afectan a este coste (Figura 13).
deben ser reducidas.

Figura 13. Contribución de los diferentes equipos al coste de capital inmovilizado.

La etapa de liofilización se puede eliminar el diagrama de bloques representativo del

considerando como producto final obtener sistema se muestra en la Figura 14. Para
un lodo con un 20% en peso de biomasa, que reducir el coste de los fotobiorreactores y
es el valor máximo alcanzable con resto de equipos se puede considerar el
centrifugas continuas comerciales. La etapa aumento de escala que repercute en una
de centrifugación se debe minimizar reducción general. Para determinar el coste
incorporando una etapa previa de floculación de los equipos principales al aumentar de
decantación que permita pasar de la escala se ha considerado un factor exponente
concentración de cultivo a un valor de de 0.85, considerándose un aumento máximo
alrededor del 1% en peso de biomasa, que es de escala igual a 10 veces el considerado
el valor de referencia para los inicialmente, aumentándose a partir de aquí
sedimentadores comerciales. De esta forma, el número de unidades necesarias (Ec. 12).

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 Acién F.G., Fernández J.M., Magán J.J., González A, Molina E. 2012. Rev Latinoam Biotecnol Amb Algal 3(1):41-58

Considerando una producción de 200 Tn/año productividad volumétrica o (ii) la cantidad

y aplicando estas modificaciones se obtiene de cultivo por unidad de volumen. Así, la
un coste de producción de 10.1 €/kg, el 75% Figura 16 muestra como el aumento de la
del cual corresponde a la amortización productividad volumétrica disminuye
necesaria por el elevado coste de los notablemente el coste unitario de producción
fotobiorreactores que representan el 80% del así como la superficie necesaria. El aumento
coste de los equipos principales (Figura 15). de la productividad en un 50%, de 0.6 a 0.9
Evidentemente la mejor forma de reducir el g/L•día reduce la superficie necesaria en un
coste de producción es por tanto minimizar 33% y el coste de producción en un 30%.
el coste de reactor, pero para hacerlo es
preciso conocer en primer lugar que variable
afecta más al coste total de producción: (i) la
 Capacity l arg e 
0.85
Ec. 12
Costl arg e  Costsmall  
 Capacity small 

Figura 14. Diagrama de bloques del proceso propuesto de obtención de biomasa húmeda.

Figura 15. Distribución de costes estimada para un aumento de escala a 200 Tn/año.

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 Acién F.G., Fernández J.M., Magán J.J., González A, Molina E. 2012. Rev Latinoam Biotecnol Amb Algal 3(1):41-58

Por el contrario, el aumento de la razón V/S Así, un aumento del 70% en la relación V/S
influye muy poco en el coste unitario de si reduce la superficie de cultivo necesaria
producción a pesar de que también reduce la en un 42% pero el coste de producción en
superficie de cultivo necesaria y que para sólo el 4%. Por tanto el rediseño de reactor
este cálculo se ha mantenido contante el debe hacerse principalmente incrementando
coste total de los fotobiorreactores para que su productividad volumétrica más que el
el cálculo no se viera afectado por el mayor volumen de cultivo por unidad de superficie,
volumen de cultivo necesario (Figura 17). y por supuesto reduciendo su coste.

Figura 16.- Influencia de la productividad de biomasa en el coste de producción de la misma y superficie requerida.

Figura 17.- Influencia de la relación V/S en el coste de producción de la biomasa y superficie requerida.

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 Acién F.G., Fernández J.M., Magán J.J., González A, Molina E. 2012. Rev Latinoam Biotecnol Amb Algal 3(1):41-58

6. Conclusiones production plant and strategies to reduce

it. Biotechnol Adv, In press.
Del balance de energía a la producción de Benemann JR. 1997. CO2 mitigation with
microalgas y radiación solar disponible se microalgae systems. Energy Convers
puede concluir que la productividad máxima Manage 38:S475-S479.
alcanzable por este tipo de cultivos es de 194
Borowitzka MA. 1999. Commercial production
Ton/ha·año en climas templados aunque los
of microalgae: ponds, tanks, tubes and
valores más altos referenciados han sido de fermenters. Journal of Biotechnology
130 Ton/ha·año y sólo han sido demostrados 70:313-321.
a pequeña escala. Por tanto existe margen de
mejora en la tecnología de producción para Chisti Y. 2008. Biodiesel from microalgae beats
bioethanol. Trends in Biotechnology
poder aproximarse a los valores máximos
26:126-131.
alcanzables. Sin embargo, el mayor
problema para conseguir una producción Chisti Y. 2007. Biodiesel from microalgae.
rentable de biocombustibles a partir de Biotechnology Advances 25:294-306.
microalgas es el elevado coste de producción el ío E, ci n , arcía-Malea MC, Rivas
de la biomasa. El análisis económico J, Molina-Grima E, Guerrero MG. 2008.
realizado permite determinar los costes de Efficiency assessment of the one-step
producción pero sobre todo los factores que production of astaxanthin by the
mas afectan al mismo y por tanto los que microalga Haematococcus pluvialis.
deben ser optimizados en primer lugar. De Biotechnol Bioeng 100:397-402.
este análisis se concluye que los costos son Huesemann M, Benemann JR. 2009. Biofuels
función de la productividad volumétrica y from microalgae: review of products,
por tanto ésta debe ser maximizada en process and potential, with special focus
cualquier mejora del proceso. Para ello, el on Dunaliella sp. In: Ben-Amotz A, et al.,
uso de reactores con relación V/S puede ser editors. The alga Dunaliella: Biodiversity,
una alternativa válida al empleo de reactores Physiology, Genomics and Biotechnology.
New Hampshire:Science Publishers.
raceway de elevada relación V/S que son
actualmente los más empleados para el Hughes E, Benemann JR. 1997. Biological fossil
objetivo de producir biocombustibles a partir CO2 mitigation. Energy Conversion and
de microalgas. Management 38:S467-S473.
olina rima E, elarbi E-, ci n ernández
7. Agradecimientos FG, Robles Medina A, Chisti Y. 2003.
Recovery of microalgal biomass and
Este trabajo ha sido realizado con el apoyo metabolites: Process options and
del proyecto EnerBioAlgae (SOE2/P2/E374) economics. Biotechnology Advances
SUDOE INTERREG IVB, asi como la 20:491-515.
financiación del PlanE financiado por el olina rima E, ernández evilla , ánchez
CDTI en colaboración con ACCIONA S.A., rez , arcía Camacho . 1996.
y Junta de Andalucía (Plan Andaluz de study on simultaneous photolimitation and
Investigación, BIO 173). Especial photoinhibition in dense microalgal
agradecimiento a la Fundación Cajamar. cultures taking into account incident and
averaged irradiances. Journal of
Biotechnology 45:59-69.
8. Referencias
Muñoz R, Jacinto M, Guieysse B, Mattiasson B.
Acién FG, Fernández JM, Magán JJ, Molina E. 2005. Combined carbon and nitrogen
2012. Production cost of a real microalgae removal from acetonitrile using algal-

57
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bacterial bioreactors. Appl Microbiol Rodolfi L, Zittelli GC, Bassi N, Padovani G,

Biotechnol 67:699-707. Biondi N, Bonini G, Tredici MR. 2009.
Microalgae for oil: Strain selection,
Olguín EJ. 2003. Phycoremediation: Key issues
induction of lipid synthesis and outdoor
for cost-effective nutrient removal
mass cultivation in a low-cost
processes. Biotechnol Adv 22:81-91.
photobioreactor. Biotechnol Bioeng
Olguín E.J. 2012. Dual purpose microalgae– 102:100-112.
bacteria-based systems that treat
Romero García JM, Acién Fernández FG,
wastewater and produce biodiesel and
Fernández Sevilla JM. 2012. Development
chemical products within a Biorefinery.
of a process for the production of l-amino-
Biotechnol Adv. In press.
acids concentrates from microalgae by
Oswald WJ, Golueke CG. 1960. Biological enzymatic hydrolysis. Bioresour Technol
transformation of solar energy. Adv Appl 112:164-170.
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Algae Growth Engineering Scale Unit. biofuels: high-efficiency microalgae for
Pulz O, Gross W. 2004. Valuable products from biodiesel production. Bioenergy Res 1:20-
biotechnology of microalgae. Applied 43.
Microbiology and Biotechnology 65:635- Wijffels RH, Barbosa MJ. 2010. An outlook on
648. microalgal biofuels. Science 329:796-799.

58
 Oliveira M.R., Beserra J.O., Macambria, S. 2012. Rev Latinoam Biotecnol Amb Algal 3(1):59-79

Development of a methodology for net energy analysis in

biorefineries, regarding microalgae cultivation
to improve energy yields in industrial wastes
Matheus Rufino Oliveira1, José Osvaldo Beserra Carioca*2, Sávio Macambira3
1
Petróleo Brasileiro S.A.
2
Universidade Federal do Ceará e Centro de Energias Alternativas e Meio Ambiente
Universidade Federal do Ceará (UFC) Av. do Contorno, S/N Bloco 310 Campus do Pici
CEP: 60440-593 Fortaleza, Ceará, Brazil
3
Instituto Federal de Educação do Ceará

*Corresponding author: [email protected]

Abstract
In general, biomass processing plants are considering the use of biorefinery concept to evaluate
the net energy balance, as well as, the life cycle analysis of agroindustrial plants to meet
sustainability requirements. Among the several types of biomass processing plants, biofuels
production plants are becoming of great importance due to the increasing demand of biofuels to
attend the desirable energetic sustainable global scenario. From the other side, energy recovering
from wastes is an essential theme to achieve both, energy and environmental requirements. Inside
this context, this paper considered the evaluation of energy recovering from vinasse of ethanol
plants in Brazil to produce biogas or biodiesel through microalgae cultivation, once this kind of
industrial plant produces a large amount of wastes. For such purpose, it was developed initially, a
methodology to evaluate the net energy ratio in ethanol or biodiesel agroindustrial plants. Having
this methodology in mind, it was considered the complementary energetic contribution of the
biogas or biodiesel obtained from microalgae cultivation in vinasse and its processing. Based on
this approach it was possible to evaluate the best options in terms of resources utilization,
considering the analysis of the net energy ratio of ethanol agroindustrial plants. In conclusion,
this type of analysis contributes to a better use of biomass resources, as well as, to the best design
of the agroindustrial plant. Certainly, the energy recovered from the cultivation systems
contributes to diminish the pressure on land use and consequently the competitiveness between
food and energy.
Keywords: Biofuels, biodiesel, ethanol, microalgae, net energy analysis.

Resumen
En general, las plantas de procesamiento de la biomasa está considerando el uso del concepto de
biorrefinería para evaluar el balance energético neto, así como, el análisis del ciclo de vida de las
plantas agroindustriales para satisfacer los requisitos de sostenibilidad. Entre los varios tipos de
plantas de procesamiento de biomasa, plantas de producción de biocombustibles se están
convirtiendo en una gran importancia debido a la creciente demanda de biocombustibles para
asistir al deseable escenario energético mundial sostenible. Desde el otro lado, la energía se
recupera de residuos es un tema esencial para lograr tanto la energía como los requisitos

59
 Oliveira M.R., Beserra J.O., Macambria, S. 2012. Rev Latinoam Biotecnol Amb Algal 3(1):59-79

medioambientales. Dentro de este contexto, este trabajo considera la evaluación de la energía se

recupera de la vinaza de plantas de etanol en Brasil para la producción de biogás o biodiesel a
través del cultivo de microalgas, una vez que este tipo de planta industrial produce una gran
cantidad de desechos. Para tal efecto, se desarrolló inicialmente, una metodología para evaluar la
relación de energía neta de las plantas de etanol o biodiesel agroindustriales. Después de esta
metodología en la mente, se consideró la contribución complementaria energética del biogás y el
biodiesel obtenido a partir de cultivo de microalgas en la vinaza y su tratamiento. Sobre la base
de este enfoque fue posible evaluar las mejores opciones en términos de utilización de los
recursos, teniendo en cuenta el análisis de la relación de energía neta de las plantas de etanol
agroindustriales. En conclusión, este tipo de análisis contribuye a un mejor aprovechamiento de
los recursos de biomasa, así como, para el mejor diseño de la planta agroindustrial. Ciertamente,
la energía recuperada de los sistemas de cultivo contribuye a disminuir la presión sobre el uso del
suelo y por lo tanto la competitividad entre los alimentos y la energía.

Palabras clave: biocombustibles, biodiesel, etanol, microalgas, análisis de energía neta.

1. Introduction chemistry (Cardoso, 2008) are now under

Biorefinery concept has emerged in the consideration and development for the
seventies inside the wood American production of added value bioproducts,
technological community (Sarkanen, 1976); inside the Green Chemistry approach.
(Hayes, 1977). Since that time, two big By its turn, biomass conversion through
problems were raised related to the biomass thermal processes is still on pilot scale,
conversion into chemicals: the economic probably, achieving the stage of
competition of synthetically produced technological demonstration scale around
chemicals from oil, versus the necessity to 2015. Inside this context, Brazilian sugar
depolymerize cellulose-lignin complex to cane straw and bagasse are designed to
provide society with the same products convert cellulose and hemi-cellulose
derived from oil. As the oil prices have components into ethanol via enzymatic
increased continuously since the first oil and/or acid routes (Leal, 2008).
shock in 1973, great efforts have been made Alternatively, the sugar cane residues are
to produce and efficiently convert biomass being gasified to produce synthetic gas,
into chemicals and biofuels, which can be which can be converted by catalytic process
based on two different technological routes: into hydrocarbons via Fischer-Tropisch
bioconversion and thermal-conversion (Leal, synthesis (Falabella, 2008).
2008). Throughout this long developing period,
In Brazil, bioconversion process is being microalgae cultivation and processing is
used economically to convert sugar cane into achieving an advanced stage of utilization,
ethanol. Alternatively, vegetable oils have and certainly can be used in Brazil or other
been extracted from oleaginous species, to tropical countries in a much more interesting
the production of biodiesel, food, feed, and way, due to its favorable net energy
chemicals. For its time, the organic matter conversion factor (Carioca et al, 2007). This
present in solid residues and/or in domestic fact can place microalgae in a new frontier,
or industrial effluents has been anaerobically as a new biomaterial for energetic and
fermented to obtain biogas (Leal, 2008). chemical purposes.
Emerging areas like alcohol-chemistry Several countries and multilateral
(Pereira, 2008); (Conde, 2008) and oil institutions like UNIDO are proposing the
development of a green economy to attend

60
 Oliveira M.R., Beserra J.O., Macambria, S. 2012. Rev Latinoam Biotecnol Amb Algal 3(1):59-79

future sustainable scenarios, in which, promote the social inclusion, ensuring

biofuels play an important role to diminish competitive pricing, quality and supply of
environmental global impacts. The products, as well as, the use of different
construction of a sustainable society will sources of oleaginous plants, according to
require primordially two main urgent the regional availability (Miki, 2009). It was
political actions: from one side, to reduce established that, from January 2008, it would
dependence on fossil fuels and from the be required the addition of a minimum
other to eliminate the big amount of percentage of 2% biodiesel to all diesel oil
pollution generated by the industrial society, consumed in Brazil, a value that should
where wastes tend to become a valuable gradually increase to achieve 5% around
source of materials, for biofuels and/or January, 2013 (Brieu, 2009). The use of
biochemical’s production, using a traditional oilseeds such as soybeans, cotton,
fundamental strategy, to recycle water. In coconut, canola and castor for biodiesel
this context, sustainable waste management production, demand the use of large tracts of
is facing a fundamental role and challenge, land, due to low productivity and
related to the climatic change phenomena competitiveness of vegetable oil with food
and the management of finite resources. So, and export sector (Carioca et al, 2009).
one of the main directions will be the change Therefore, it is important to investigate other
of waste treatment processes, which raw materials that can really meet the
consume a lot of energy, into a waste demand for biodiesel in the country, and the
biorefining platform to give support to the possibility of their production in different
development of a green economy. regions of the country, without affecting the
In Brazil, the transportation sector accounts food market. Unfortunately Brazil still
for approximately one third of the total imports a large quantity of diesel oil to
energy consumption, in which the heavy attend its intern demand (Governo
transportation fleets, absorb the major Brasileiro, 2009).
parcel. The country has achieved self- The oil reserves located in the pre-salt layers
sufficiency in oil around 2005, but it is still will be sufficient to supply not only the
necessary to import diesel to meet oil domestic market, but to export oil
domestic demand. Besides this, Brazilian oil derivatives. Unfortunately, this will take
production is considered heavy, requiring time, probably decades, to most of the oil
investments in the oil refining system to fields become productive on a large scale.
maximize diesel refining production. So So, biofuels are one of the most viable
considering these facts, as well as, the alternatives for oil replacement because the
environmental restrictions, biodiesel was country has a large tradition in Ethanol
considered as a desirable option to reduce production from sugar cane, and now the
diesel imports. production from biodiesel from oleaginous
In 1976, the country implemented a National plants. In fact, Brazil has a quite successful
Alcohol Program to replace gasoline as the experience in the use of ethanol from sugar
initial stage of biofuels production (Governo cane as a substitute for gasoline.
Brasileiro, 2006). In 2005, the country set up
the Biodiesel National Production 1.1. Energy balance fundamentals
Programme (PNPB) as an effort to replace There are studies in the literature based on
diesel oil according to the Law N. 11,097 of the computational analysis of production
January 13th, 2005. Among the main systems in order to evaluate mass and energy
guidelines considered in this regulatory balances to generate data for economic
mark, the Biodiesel program intends to studies and environmental impact, as well as,

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 Oliveira M.R., Beserra J.O., Macambria, S. 2012. Rev Latinoam Biotecnol Amb Algal 3(1):59-79

to the development of biorefineries to Concerning to the environmental point of

biofuels production (Carioca et al, 2008). view, the use of biodiesel significantly
According to this methodology, it is possible reduces emissions of pollutants as compared
to evaluate the energy consumption during to diesel. Normally it can reduce 98% of
the production of biofuel, including the sulfur, 30% of aromatics and 50% of
indirect consumption of energy used in particulate material, and at least 78% of
manufacturing and transportation of all Greenhouse Gas (Castellanelli, 2008). At
inputs. It is also necessary to compute the regional basis, there is a wide variety of
energy extracted from biomass from the plants suitable for biodiesel production in the
plant material in order to calculate the ratio country. The most significant area to the
between the energy produced and energy production of vegetable oil is the central-
consumed during the whole process. southern region. In this region there are large
Through this relationship, it is possible to tracts of land suitable for agriculture where
have an assessment of energy efficiency of mechanization is widely used (Carioca et al,
processes. In the Brazilian case, these studies 2009). According to (Gazzoni et al, 2006)
are important to know a priori the possibility soy is currently responsible for 88.9% of
of regional production based on various raw vegetable oil production in Brazil, which
materials. Literature data show that does not comply with the objectives of
microalgae can be one of the alternative raw PNPB.
materials for production of biodiesel and
biogas because its photosynthetic efficiency 2. Oleaginous plant in Brazil
is greater than the traditional oilseeds. In
addition, microalgae can grow in any type of 2.1 Oil seeds
water resources, including waste like the Vegetable oils can be produced from crops
vinasse of the ethanol plants. So, the main such as soybeans, rapeseed, sunflower, palm,
objective of this paper is to develop a physic nut (Jatropha curcas L.), cotton,
methodology to calculate the mass and among others. Depending on the yield of the
energy balance involved in the production of photosynthetic process, each oleaginous
biodiesel and biogas from microalgae, in species has a certain content of oil in its
order to establish process data base adequate seeds. In general, the maximum theoretical
to meet regional needs in Brazil. This kind yield of the photosynthetic process is about
of theoretical analysis indicates the real 6.5% (Sasson, 1993) but the observed yield
possibilities to use natural resources, is no more than 2.5% for some species, like
including wastes to produce biofuels. This sugar cane and corn, depending on the place
kind of study could be done a priori to the where the plant is cultivated. According to
industrial plant installation. The results of Melvin Calvin photosynthetic yields are
these studies could save time and financial classified according to their production
resources. Scenarios could be established in cycles (Curtis, 1977). So, in C4 plants, like
order to foresee the best conditions for sugar cane and corn, the photosynthetic
specific regional circumstances. In the mechanism is very much favourable to
Brazilian case, the main regions greatly higher biomass production, while in C3
differ one from the others. Technical plants, like oleaginous, the photosynthetic
parameters as well as social inclusions, land yield is less favourable (Carioca et al, 2009).
availability, employments, biofuels In Table 1, it is shown the main
transports costs and process economy could characteristics of some sources of vegetable
be considered in each regional scenario, oils.
depending of its main characteristics.

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 Oliveira M.R., Beserra J.O., Macambria, S. 2012. Rev Latinoam Biotecnol Amb Algal 3(1):59-79

Table 1. Oil productivity from some vegetable oleaginous species

Oil Cycle for Harvesting Oil

Species Content Maximum Period Productivity
(%) Efficiency (Months) (T/Ha)
African oil palm
20 (almond) 8 years 12 3.0–6.0
(Elacis guineensis)
Physic Nut
36-45 (seeds) Perennial specie 12 4.0-6.0
(Jatropha curcas L.)
Coconut 1.3-1.9
55-60 (fruit) 7 years 12
(Cocus nucifera)
Babassu palm
66 (almond) 7 years 12 0.1-0.3
(Orbinya martiana)
Sunflower (Helianthus
38-48 (grain) Annual 3 0.5-1.9
annus)
Rapeseed
40-48 (grain) Annual 3 0.5-0.9
(Brassica campestris)
Castor beans
43-45 (grain) Annual 3 0.5-0.9
(Ricinus comunis)
Peanuts
40-43 (grain) Annual 3 0.6-0.8
(Orachis hypogeae)
Soya
17 (grain) Annual 2 0.2-0.4
(Glyne max)
Cotton
15 (grain) Annual 3 0.1-0.2
(Gossypium hirsut)

2.2 Microalgae absorption when compared to traditional

Microalgae are currently used commercially plants and they do not compete with arable
for the production of high nutritional value land. In addition, microalgae have a higher
products for human and animal use; oil yield compared to oil seeds traditionally
wastewater treatment; the production of used to produce biodiesel. Another
added value products like carotenes, as well advantage of microalgae cultivation is that; it
as, aquiculture. However, the industrial can be done all year-round in tropical areas,
production of microalgae is still relatively continuously (Carvalho, 2010). The
small, once the total world production is microalgae can grow in open ponds,
only a few thousand tons of algae biomass raceways or photobioreactors. The
per year (Becker, 1994). Meanwhile, the cultivation method adopted affects the
technologies of microalgae cultivation have energy consumed and the estimated yield of
been under intensive research development the process and directly influences the
over the last decades, both in the context of energy balance. The culture medium must
mitigation of greenhouse gases and the provide the inorganic elements that
production of biofuels (Amotz, 2007). The constitute the cell nutrients. Essential
production of biodiesel from microalgae is elements include nitrogen, phosphorus, iron
an alternative process to the current biofuels and silicon in some cases. The minimum
production from higher plants. The required nutrients can be estimated using the
microalgae cultivation can use CO2 as a approximate molecular form of the biomass
carbon source for lipids biosynthesis which of microalgae, which is CO0,48 H1,83 N 0,11
can be converted later into biodiesel. The P0,01 (Chisti, 2007).
microalgae may be an ideal solution, for two Unlike oil crops, microalgae grow very
main aspects: they have a higher rate of CO2 rapidly and can be extremely rich in oil. The

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microalgae can usually double their biomass 2.4 Transesterification process for biodiesel
in 24hs. Oil content in microalgae can production
exceed 80% of dry biomass. Microalgae oil The transesterification reaction between
levels of 20-50% are quite common, so they triglycerides molecules found in vegetable or
appear to be a very competitive source of animal oils with an alcohol (methanol or
vegetable oil for biodiesel production with ethanol) to produce methyl esters (biodiesel)
potential to replace fossil diesel. As it can be may be catalyzed by acids, alkali or
seen in Table 2, microalgae have an oil yield enzymes. In this study it will be considered
per hectare superior to other sources, the use of alkali catalysis reactions because
according to Chisti (Chisti, 2007). they present the best yields. The
transesterification reaction as described is
Table 2. Comparison of some sources of biodiesel characterized by the equilibrium between the
production plants reactants and products (Carioca, 2011), and
its stoichiometry requires 1 mol of a
Oil Yield
Crop triglyceride and 3 mol of the alcohol.
(L/ha)
Corn 172 However, in practice it has been utilized a
Soybean 446 larger proportion of the alcohol aiming at to
Canola 1190 displace the equilibrium reaction to form
Coconut 2689 products. In Brazil, it has been utilized
Oil palm 5950
ethanol as alcohol due to its availability and
Microalgae 136.900
Microalgae 58.700 less toxic character. Among the alkalis it is
possible to include NaOH, KOH, carbonates
In Brazil, nowadays several groups, and corresponding sodium and potassium
including our group from Fortaleza, (Carioca alkoxides such as sodium methoxide, sodium
et al, 2009) are involved in the research of ethoxide, sodium propoxide and sodium
microalgae development aiming at to turn butoxide. Sulfuric acid, sulfonic acids and
microalgae into a profitable source of hydrochloric acid are usually used as acid
vegetal lipids. catalysts. Alkali-catalyzed transesterification
is much faster than acid-catalyzed
2.3 Processes to produce alternative fuels to transesterification, with yields about 99%
diesel and it is often used commercially
Actually, there are several technological (www.transesterification.net ).
processes to produce alternative fuels to After the transesterification reaction the
biodiesel, among them the transesterification products consist of a mixture of esters,
process, the thermocatalytic cracking of glycerol, alcohol, catalyst, mono, di and
vegetable oils, water-diesel emulsions, triglycerides. According to the specifications
ethanol diesel blends, co-solvency using of “Agência Nacional do Petróleo, Gas
vegetable oils, GTL (Gas To Liquids) Natural e Biocombustiveis–ANP”
mentioned in the publication (Carioca et al, (www.anp.gov.br), biodiesel purity should
2011). In particular, it will be considered in be higher than 96.5%. In Figure 1, it is
this net energy analysis the shown the process flowchart to produce
transesterification processes of vegetable oils biodiesel from vegetable oils or recycled
and microalgae, as well as the anaerobic greases according to the source.
fermentation of microalgae to produce
biogas.

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Figure 1. Process flowchart transesterification of vegetable oils.

A stream of biodiesel produced in the Glycerin is currently one of the ingredients

transesterification plant is neutralized at a used in the pharmaceutical composition of
convenient pH, and the soap formed is capsules, suppositories, anaesthetics, syrups
converted in free fatty acids, reducing the and emollient for creams and ointments,
tendency of forming emulsions. A centrifuge antibiotics and antiseptics. In the food
is then used to separate the biodiesel industry it is used in the preparation of
aqueous phase, which is then taken to the sauces and frozen desserts and as humectants
glycerin recovery section aiming at to for food (Barbosa, 2009). The production of
achieve the required market specifications. glycerin is already far than what the
The glycerin-rich aqueous stream which is traditional market can absorb (Henn, 2009).
discharged from the reactors of Then, alternative studies are required to
transesterification and from the washing achieve the maximum yield of glycerin
process is treated with hydrochloric acid in a produced.
reactor of continuous washing. The aim of
this operation is to convert the soaps 2.5. Biogas from the anaerobic
contaminants in the mixture in the free fatty fermentation
acids, allowing their subsequent removal by Anaerobic fermentation is the decomposition
centrifugation. The glycerin-rich aqueous of organic matter such as dung, wastes, crop
stream is then neutralized with sodium residues or microalgae, using anaerobic
hydroxide in a continuous neutralization mixed bacteria population, which could be
reactor. The alcohol is then recovered from mesophilic or thermophilic. Normally, they
this stream by distillation and it is recycled work at ambient temperature with the pH
to the operation of transesterification. varying between 6.8 and 7.2. Traditional
Finally, the stream resulting from the biodigesters have a large retention time, but
operation of glycerin neutralization is it can be less, once a pre-treatment step is
subjected to distillation process to reduce its employed, as well as the establishment of
water content by a percentage equal to or adequate parameters like the rate of organic
greater than 80% (w/w) which has a load and the C/N and C/P ratios. During this
considerable commercial value. decomposition, methane, carbon dioxide and

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ammonia are produced, and normally this into hydrocarbon fuels (Golueke, 1959).
reaction takes place around 37ºC, but it This process can solve the waste problem
could be performed at thermophilic through the microalgae biodiesel production,
conditions (550C). The carbon dioxide as well as the economic-energy equilibrium
produced can be reused for the own (Chisti, 2008). As soon as methane, carbon
cultivation of microalgae, as shown in dioxide, and other minority gases are
Figure 2. This figure summarizes the process produced, they are removed from the
inputs required to biogas production, as well digester through a disposal unit where the
as, the energy consumption during the carbon dioxide and ammonia are again
process. The methane can be either burned in available for photosynthesis, the supernatant
a turbine to produce electricity or used and the retained solids recycled as nutrients
through a catalytic process to be converted to the culture of bacteria (Golueke, 1959).

Figure 2. Process flowchart of biogas production.

responsible for most of the biodiesel

3. Energy balance analysis produced in Brazil. In this work it was
observed from the literature that exist some
methodology differences in the NER values obtained by
The methodology developed in this paper is different authors, as well as some
based on several publications related to the opportunities to improve energy efficiency.
energy balance for biodiesel, biogas and In principle, the evaluation of the biofuels
ethanol processes found in the literature, energy balance in industrial production
which utilized the concept of Net Energy requires that the energy extracted from raw
Ratio - NER, defined as the ratio between materials must be greater than the energy
the total energy produced from the biomass obtained from the production system.
and the total energy consumed in the process According to Figure 3, the methodology
according to (Pradhan, 2008), described in used to evaluate the energy balance should
equation (1). As it was stressed, soybean was consider the integration of two sub-systems:
chosen as oilseed because it is the culture the cultivation and biofuels production.

NER = Eprod. / Econs. (Eq. 1)

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Figure 3. Structure of the system used to evaluate energy balance.

To evaluate the energy balance of the coefficient is defined as the amount of

integrated system, it is necessary to analyze energy per mass unit, or volume or even
the energy input throughout the process, other adequate measure unit. In general, they
considering both for the cultivation and have the units expressed in J/kg, or J/m3.
industrial phases. To calculate the power Once known the energy coefficient (u) of
consumption of each variable, it is necessary each item (variable) and the amount of items
to have the mass balance to know the used (q), it is possible to know the amount of
quantities used in the process as well as, energy, expressed for each item (variable)
their energy coefficients. Each energy according to the equation (2):

E1 = u1 x q1 (Eq.2)

E1 = energy consumed by the item (variable) 1

u1 = energy coefficient of the item (variable) 1
q1 = amount of item (variable) 1

To calculate the total energy consumed in

the system, simply add the energy consumed
by all variables of the process.

Econs. = ∑ (E1+E2+E3+...+EN) (Eq. 3)

During the cultivation, the major energy the total energy consumed in the productive
consuming items are from the nutrients, process, including the indirect energy, which
fertilizers, electricity or fuel (diesel) and is the energy used in the production,
machinery. For each of these items, it is transport system of each product or
necessary to evaluate the energy coefficient equipment. To calculate the total energy
and the amount of the item used. During the produced from the system, it is necessary to
cultivation phase it is necessary to know the know the volume of biofuel produced, in m3,
needs of CO2 and solar energy, but as they and multiply by its coefficient energy in
are considered free, it makes no sense to J/m3. Therefore it is necessary to calculate
consider it in the energy balance. During the the energy produced in Joules available in
biodiesel production, the main energy items the biofuel. Some authors also consider
consumed are: electric energy, chemicals byproducts like glycerin and the cake in the
and machinery. According to this calculation of extracted energy.
methodology, it is necessary to consider also

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Eprod. = U x V (Eq. 4)
Eprod. = produced energy from the system
U = biofuel energy coefficient
V = biofuel produced volume

Taking these data into consideration, it is 3.1 Biodiesel energy balance from soybean
possible to calculate the value for the Several authors performed the energy
parameter NER, according to equation (1). balance for the production of biodiesel from
This coefficient is an important coefficient to soybean as it will be detailed in sequence.
know the energetic yield and the As a first example, in Table 3 are listed the
environmental impact, as well as the process main energy consumptions coefficients per
feasibility. According to (Braga et al, 2008), hectare used in the agricultural production of
studies on energy balance show that specific soybean in Brazil, according to (Soares et al,
emissions of CO2 (gCO2/MJ) are inversely 2008). It may vary from place to place.
proportional to the value obtained from the The values of Net Energy Ratio – NER for
balance (energy output / input) for biofuels. the biodiesel production process presented in
Moreover, the energy balance has a close Table 4, were calculated using the data
relationship with the economic balance shown in Table 3, and evaluated according
(Braga et al, 2008). to data presented by Soares from Embrapa
It is possible to observe different approaches (Soares et al, 2008). These authors found a
for energy balance calculating in the value of 1.12 for the NER to biodiesel
literature (Chisti, 2008); (Gazzoni et al, production process. Once considering the
2009). Some authors consider only the energy of the soymeal (cake) the NER
energy from fossil fuels, while others increased to 1.87.
consider the total energy consumed in the In another study made by (Pimentel, 2005),
process. Concerning the produced energy, the energy coefficients for the soybean
some authors consider important to involve production were evaluated, according to the
the energy of byproducts like glycerin. data indicated in Table 5. Based on these
These considerations may result in different data, it was constructed the Table 6.
data for the final energy balance and Pimentel found a NER of about 0.79,
therefore for one specific methodology. For demonstrating that the biodiesel production
example, according to (Gazzoni et al, 2009), process from soybeans is unfeasible
for every unit of energy entering the system energetically. It means that for each unit of
for production of canola, the energy energy used in the process, it is produced
produced is 2.9 units, and considering only only 0.79 units of energy in the form of
the production of oil, this ratio falls to 1:1.4. biodiesel.
Following, it will be presented first the The largest discrepancy presented in the
energy balance for the biodiesel production Pimentel and Patzek's results (Pimentel,
from soya, since this seed is very important 2005) comes from the fact that, such study
to biodiesel production in Brazil. This value assigned only 19.3% of the total energy
could be used as a reference for comparison input to the soymeal. In reality, 82% of the
with that one obtained from the microalgae soybean mass goes into the soymeal. For its
energy balance. The results presented in the time, it pointed out an arithmetic error in this
literature show some differences according report and an error in the proper accounting
to the value of the energy coefficients of lime application, which contributed to a
utilized. discrepancy in the results (Pradhan, 2008).

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Table 3. Data on energy consumption coefficients for soybean production.

Item Unit Quantity Energy (GJ)

Limestone kg/ha 1000 1.18
Herbicide L/ha 3.8 1.80
Fertilizer (0-20-20) Kg/ha 400 0.62
Seed Kg/ha 50 1.02
Fungicide L/ha 1.8 0.57
Insecticide L/ha 1.65 0.6
Bait Kg/ha 1 0.36
Manual operation h/ha 8 1.34
Equipments Kg/ha 14.8 1.12
Fuel L/ha 58 2.76
Transport Ton 1.3 0.20
Total 11.57

Table 4. NER for biodiesel production from soybean according to Soares.

Item Unit Quantity Energy (GJ)

Agricultural production Kg/ha 1300 33.74
Energy in agricultural production 12.08
Industrial process 5.39
Total energy invested 17.47
Produced oil Kg/ha 520 19.60
Soybean cake Kg/ha 780 13.07
Biofuel NER = 1.12
Energy balance
Total NER = 1.87

Table 5. Biodiesel energy balance from soybean per hectare.

Energy Energy
Item Unit Quality Unit
Coefficient (Mcal)
Labor h 7.1 40.0 Mcal/h 284
Machinery Kg 20 18.0 Mcal/Kg 360
Fuel L 77.8 9.5 Mcal/L 737
Nitrogen Kg 3.7 15.9 Mcal/Kg 59
Phosphorus Kg 37.8 4.1 Mcal/Kg 156
Potassium Kg 14.8 3.2 Mcal/Kg 48
Limestone Kg 4,800 0.3 Mcal/Kg 1,349
Seed Kg 69.3 8.0 Mcal/Kg 554
Herbicide Kg 1.3 100.0 Mcal/Kg 130
Electricity Kw.h 10 29
Transport Km 174 0.3 Mcal/Km 44
Total (input) 3,700
Soybean(output) Kg 2,668 3.6 Mcal/Kg 9,605

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Table 6. NER for biodiesel production from soybean according to Pimentel.

Energy Energy
Item Unit Quality Unit
Coefficient (Mcal)
Soybean Kg 5,556 7,809
production
Electricity Kw.h 270 697
Steam 1,350
Water 160
Heat 592
Losses 300
Stainless steel Kg 11 14.4 Mcal/Kg 158
Steel Kg 21 11.7 Mcal/Kg 246
Cement Kg 56 1.9 Mcal/Kg 106
Total (input) 11,418
Biodiesel(output) Kg 1,000 9.0 Mcal/Kg 9,000
NER 0.79

Table 7. NER for biodiesel production from soybean according to Gazzoni.

Energy Energy
Item Unit Quant Unit
Coefficient (Mcal)
Cultivation
Labor h 6.3 40 Mcal/h 252
Machinery Kg 20 18 Mcal/Kg 360
Fuel L 66 10 Mcal/L 660
Phosphorus Kg 20 4.2 Mcal/Kg 83
Potassium Kg 20 3.2 Mcal/Kg 63
Limestone Kg 2,000 0.3 Mcal/Kg 562
Boron Kg 1 4 Mcal/Kg 4
Seed Kg 50 8 Mcal/Kg 400
Herbicide L 0.47 100 Mcal/L 47
Insecticide L 2.03 100 Mcal/L 203
Transport Km 174 0.3 Mcal/Km 44
Biodiesel Production
Production of
720 Kg of 1,149
biodiesel
Total (input) 4,127
Biodiesel (output) Kg 720 9.0 Mcal/Kg 6,480
NER 1.57

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Studies performed by Gazzoni (Gazzoni et production process, which is summarized in

al, 2006) adopted the value of Pimentel and the Table 7. It was found a value of 1.57 for
Patzek (Pimentel, 2005) to evaluate the the NER.
energy needed to manufacture machinery In Table 8, it is summarized the energy
and implements, fertilizers and pesticides, as balance carried out by Ahmed (Ahmed et al,
well as, the energy value of diesel oil and 1994), which adopted the industry's average
energy contained in the seeds. For the diesel energy consumption of soybeans in the
oil consumption, it was used data from United States. These authors obtained a
spreadsheets (Roessing et al, 1981). For value of 2.51 for NER for the overall
limestone consumption, it was adopted 2 t / biodiesel process.
ha. The evaluation of the amount of seeds According to Hill (Hill et al, 1994), the
for soybeans was based on the formula Q = process of biodiesel production from
(1000xPxD) x 1.1 (GxE) -1; where, P = 10.4 soybean has a NER of 1.93, as indicated in
g (means the weight of a hundred seeds); D Table 9. The author used data from the
= 14 (number of plants per meter); G = 80% Department of Agriculture of the United
(% field emergence); and E = 0.4 m (space States to estimate the energy consumed
used). So, based in these values Gazzoni during the soybean cultivation.
evaluated the NER for the biodiesel

Table 8. Biodiesel energy balance from soybean according to Ahmed.

Energy
Item Quantity Unit Unit Energy (Btu)
Coefficient
Cultivation
Diesel 0.11 gal 138,000 Btu/gal 14,552
Pesticide 0.02 lb 179,000 Btu/lb 3,739
Potassium 0.35 lb 4,280 Btu/lb 1,482
Phosphorus 0.19 lb 5,560 Btu/lb 1,079
Nitrogen 0.06 lb 31,100 Btu/lb 1,893
Others 6,691
Solvent Extraction
Electricity Electricity 6,858
Steam Steam 23,620
Solvent (n-hexane) 0.015 gal 106,522 1,575
Refine
Electricity 450
Steam 642
Estherification
Electricity 2,666
Steam 18,225
Methanol 0.11 gal 66,542 Btu/gal 7,320
Catalyst (NaOH) 0.08 gal 11,275 Btu/gal 902
Transport 228
Total 91,922
Biodiesel 1 gal 132,902 Btu/gal 132,902
Glycerin 17,010
Soy (food) 81,229
Total (output) 231,141
NER 2.51

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Table 9. Biodiesel energy balance from soybean residues from these plants were utilized
according to Hill. aiming at to generate additional energy
Cultivation
which improves the NER of agroindustrial
Item Energy (MJ) biorefineries.
Fossil fuel 0.19
Fertilizers and pesticides 0.09 4.1 Results of NER for biodiesel and biogas
Electricity 0.21 production plants using microalgae
Seed 0.03 Large scale microalgae cultivation plant is a
Machinery 0.04
growing subject all over the world, and so,
Biodiesel Production
Transport 0.025 there is an increasing consensus about the
Construction 0.01 importance of having precise data
Labor 0.02 concerning mass and energy balance for
Electricity 0.25 different processes. Many studies on pilot
Total (input) 0.865 plants are still in development. It has been
Biodiesel 1 observed some difficulties in obtaining the
Soy (food) 0.56
value of the energy coefficients used in the
Glycerin 0.11
Total (output) 1.67 microalgae cultivation system, as well as, the
NER 1.93 environmental impacts considered in certain
types of processes. In this section it was
evaluated the NER for biodiesel and biogas
4. Integrated biofuels plants using production plants using microalgae
microalgae cultivation from wastes cultivation, to provide basic information
concerning biofuels production related to the
Several types of plants design could be energetic yields of agroindustrial plants. In
performed aiming at biofuels production the first case (Hill et al, 1994), it was
integrated with microalgae cultivation. This considered a biorefinery related to a
study considered two processes: one for biodiesel production plant based in algal oil,
biodiesel and another for ethanol. It is according to the design presented in Figure
important to observe that, the effluents or 4.

Figure 4. Biodiesel biorefinery integrated with microalgae cultivation.

72
 Oliveira M.R., Beserra J.O., Macambria, S. 2012. Rev Latinoam Biotecnol Amb Algal 3(1):59-79

For this process, there were considered the Table 10. Energy rate coefficient for biodiesel and
following energy coefficients shown in Table biogas production plant integrated with
microalgae cultivation according to Chisti.
10. Aiming at the evaluation of the NER for
this plant, Chisti (Chisti, 2008) suggested Energy
Energy Coefficients
initially the evaluation of an energy rate (MJ Kg-1 Oil)
coefficient, which means the relation among Inputs 31.24
the sum of the total renewable energy Energy in nutrients 14.12
components produced (output) per unit of Electric energy for
8.77
cultivation
fossil energy used as energy (input), which
Energy for harvesting
was calculated according to the data 0.30
(chemicals)
presented in Table 10. The energy rate Energy for oil recovery 3.17
coefficient obtained was 2.8, which Energy for biogas
0.88
demonstrates that this plant is energetically production
feasible. According to Chisti (Chisti, 2008), Energy for construction
(entire facility including 4.00
depending on the microalgae productivity and maintenance)
their oil content, the NER could exceed 7, Energy embodied in
once microalgae separation uses especial equipment (including 62.8 x 10 -6
flocculants agents before the vacuum maintenance)
filtration to obtain the final microalgae paste Outputs 87.90
(Becker, 1994). This value could still be Energy in the algal oil 37.90
Energy in biogas from
improved if the final effluent from the residues
50.00
anaerobic fermentation could be recycled, as Energy Rate Coefficient
nutrients. Chisti analysis was based on the use 2.8
(algal oil + biogas)
of raceway ponds to microalgae cultivation
having 20.5% (w/w) oil yield, and assuming
the biomass productivity of about 15 ton per Table 11. Energy rate for the algal oil and biogas
ha per year. However, it was considered for production plant.
the microalgae cultivation calculus, the
biomass productivity of 25g per m2 day, and Energy
Energy Coefficients
(MJ Kg-1 Oil)
the final concentration in the broth was
Inputs 31.24
assumed as been 0.5 kg per m3. These data are Energy in nutrients 14.12
considered normal for tropic conditions Eletric energy for
8.77
according to Chisti. To obtain the NER for a cultivation
biodiesel and biogas production plant it is Energy for harvesting
0.30
necessary to convert the algal oil into (chemicals)
Energy for oil recovery 3.17
biodiesel and the biogas into electricity. For
Energy for biogas
that, it will be considered one NER 0.88
production
coefficient for the biodiesel unit as being Energy for construction
2.51, according to Ahmed, for an analogous (entire facility including 4.00
biodiesel unit (biodiesel and glycerin); and a maintenance)
NER coefficient of 1.56 for the conversion of Energy embodied in
equipment (including 62.8 x 10-6
biogas into electricity, as suggested by Chisti. maintenance)
Taking these new outputs coefficients into Outputs 173.150
consideration the value for the NER was Energy in the Biodiesel 95.281
calculated as been 5.563, as it is shown in Electric energy from biogas 78.150
Table 11. Net Energy Rate 5.563

73
 Oliveira M.R., Beserra J.O., Macambria, S. 2012. Rev Latinoam Biotecnol Amb Algal 3(1):59-79

4.2 Other NER data for a methane plant, seventies, world agricultural land use is
algal oil and biodiesel from microalgae suffering a challenging pressure to produce
In this section it will be regarded initially the biofuels to replace fossil fuels, besides
work developed by Wagener (Wagener, increasing food production to support the
1978), in which it is presented a classical development of a green economy. The use of
study related with the NER evaluation for a wastes to produce chemicals and/or biofuels
methane producing plant. They used one has gained a considerable attention in the
conversion coefficient in which, 1kg of dry last decades, due to its sustainable
algae mass can produce 427 L of CH4, with conditions. In this context, sustainable waste
an energy content of 3656 kcal, not taking management is a fundamental role to face
into account the new bacteria formed after the challenges related to climatic change
the biodigester discharge. Considering that phenomena and the management of finite
the formation of new bacteria is repressed, it resources. So, one of the main directions is
could produce 476 L of CH4 with an energy to change from waste treatment processes,
value of 4078 kcal. According to these data, which consume a lot of energy, into a waste
it was achieved a NER of 2.66. If the energy biorefining platform to support the
required to pump the tanks' culture is development of a green economy (Carioca et
generated by waves, then it reaches a value al,2012). Ethanol plants produce a large
of 12.9. Once the plant is heated with biogas quantity of wastes, which contain valuable
and not with the heat lost from the gas nutrients that could be used to cultivate
engine, the new NER evaluation is about 8.5 microalgae, improving energy balances and
according to (Wagener, 1978). diminishing environmental impacts. It is
Ehimen (2010) found in his analysis a value estimated that in the next fifth years more
of 0.31 for the NER for a biodiesel and than 40% of the world population will live in
biogas production plant integrated with countries facing water stress or water
microalgae cultivation, according to data scarcity according to the data presented by
indicated in Table 12, which characterizes the United Nations Population Division,
the process energetically as non-feasible. In published in 2002, prepared by (Hinrichsen,
Ehimen’s analysis, it was considered the use 1998). If well managed, wastewater could
of a centrifugation process to separate help to recycle water and nutrients, like
microalgae, which spends a considerable Nitrogen, Phosphorous, and other important
amount of energy. Practically 85% of the minerals besides diminishing the cost of
total energy inputs shown in Table 13 are fertilizers with no environmental impacts.
due to the electrical energy consumption. In general, the expected algal yield, depend
on several factors. Taking into consideration
4.3 Results related to NER for an ethanol the solar radiation in the tropics, the
biorefinery integrated with algal cultivation expected value is around 25g/m2/day as it
in vinasse was utilized in the evaluation presented in
It is well known that agribusiness produce a this paper. However, data presented by Ben-
large quantity of wastes, mainly those Amotz et al (2007) indicate that the value of
generated in the food sector, where there is 20g/m2/day was achieved for normal
plenty of sugar available in wastes and Dunaliella cultivation in the Middle East
effluents, adequate to produce biofuels or conditions.
biochemical. Among these, effluents from
ethanol are worldwide produced generating
huge environmental impacts. After the

74
 Oliveira M.R., Beserra J.O., Macambria, S. 2012. Rev Latinoam Biotecnol Amb Algal 3(1):59-79

Table 12. Biodiesel NER from microalgae according to Ehimen.

Energy Consumption Per Hectare

Energy
Item Quantity Unit Unit Energy (MJ)
Coefficient
Ammonia (NH3) 5.76 t 37.8 GJ/t 217.73
Triple super-Phosphate 1.44 t 4.1 GJ/t 5.90
Electricity 6.05
Biodiesel Production
Extraction 15.36
Transesterification and
8.64
purification
Total energy (input) 1,693.7
Biodiesel (output) 531.4
Energetic yield 0.31

Table 13. Results from biodiesel NER from microalgae, considering the use of free renewable energy.

Energy Energy (MJ)

Item Quantity Unit Unit
Coefficient
Ammonia (NH3) 5.76 t 37.8 GJ/t 217.73
Triple super-phosphate 1.44 t 4.1 GJ/t 5.90
Machinery and 6.05
infrastructure
Electricity 0.00
Biodiesel Production
Extraction 15.36
Transesterification and 8.64
purification
Total (input) 253.7
Biodiesel (output) 531.4
Energetic yield 2.09

Data on Chlorella vulgaris cultivation insulation rates (around 250 W/m2)

presented by Bonini (Bonini, 2012), pointed (Carioca et al, 2010).
out the need to hydrolyze these components Inside the biorefinery concept, the plant
in order to improve the microalgae yields. presented in Figure 5 considered the
This information stresses the importance of microalgae cultivation in vinasse, integrated
the kinetic evaluation data prior to the to an ethanol producing plant, in order to
cultivation under open system, in raceway improve the energetic yields of current
pounds or photobioreactors in order to obtain ethanol industrial plants, in Brazil.
high specific rates. Bonini (2012) has Vinasse is a type of effluent from alcohol
mentioned the optimum value for the distilleries which has a desirable mineral
glucose concentration of 5.6 g/L. Glucose composition as shown in the Table 14 (Elia
concentrations higher than this value clearly Neto, 1995); (Leal, 2008). In spite of that,
inhibit the growing. Finally, in our studies, vinasse also contains a little amount of
the water evaporation looses seems to be glycerin, ethanol, lactic and acetic acids.
another important factor to be considered in This is a rich effluent, which has been used
the microalgae cultivation in vinasse under to grow microalgae, utilizing CO2 from the
tropical conditions, due to the high value of anaerobic fermentation unit, using residues

75
 Oliveira M.R., Beserra J.O., Macambria, S. 2012. Rev Latinoam Biotecnol Amb Algal 3(1):59-79

from the oil extraction unit, as proposed by Chorella and Nannochloropsis (Carioca et
Chisti (2008). It is important to know that in al, 2009). It has been observed excellent
Brazilian ethanol plants there is a ratio of 12 results from growing Scenedesmus sp e
liters of vinasse per liter of ethanol Chlorella sp in the vinasse, utilizing CO2
produced. Some species of microalgae could from the ethanol fermentation process
be utilized for this purpose, such as; Bonini (Bonini, 2012).

Figure 5. Ethanol biorefinery integrated to microalgae cultivation in vinasse.

Vinasse has a high content of nitrogen and Using this approach, water and the residual
phosphorous, which are basic nutrients for nutrients are recycled. So, as it can be seen
microalgae cultivation (Amotz, 2007). After from the data presented in Table 15, it is
the cultivation, microalgae are separated possible to increase the NER for about 11.1.
from the broth using sedimentation and a It means to increase the actual distilleries
vacuum filter as proposed by (Chisti, 2008). energetic yield for about 33.7% through the
The final effluent is directed to the sugar use of microalgae cultivation system in the
cane plantation, for irrigation purposes. vinasse from an ethanol plant.

Table 14. Typical composition of sugar cane vinasse in Brazil.

Components / units Types of substrates used

(Vinasse) Molasses Mixed Juice
N (kg/m3) 0.75 – 0.79 0.33 – 0.48 0.26 – 0.35
P2O5 (kg/m3) 0.10 – 0.35 0.09 – 0.61 0.09 – 0.50
K2O (kg/m3) 3.50 – 7.60 2.10 – 3.40 1.01 – 2.00
CaO (kg/m3) 1.80 – 2.40 0.57 – 1.46 0.13 -0.76
MgO (kg/m3) 0.84 – 1.40 0.33 – 0.58 0.21 – 0.41
SO4 (kg/m3) 1.50 1.60 2.03
Organic Matter (kg/m3) 37 – 57 19 – 45 15 – 35
Mn (mg/dm3) 6 – 11 5–6 5 – 10
Fe (mg/dm3) 52 – 120 47- 130 45- 110
Cu (mg/dm3) 3–9 2 – 57 1 – 18
Zn (mg/dm3) 3–4 3 – 50 2- 3
pH 4.0 – 4.5 3.5 - 4.5 3.5 - 4.0

76
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Table 15. Summary of NER in biofuels production increase the energetic yield of biodiesel
plants. plants through the use of microalgae
Algal Oil + cultivation based on its residues, as well as,
Ethanol the net energy ratio (NER) for the ethanol
Energy Biogas
(kcal/Ton)
(MJ kg-1 oil) plants using its vinasse to grow microalgae.
Agricultural Phase 31.24 48.208
Processing 11.800
Sub -Total 31.24 60.008
6. References
Energy from Products 87.9 499.400 Ahmed I et al. 1994. How much energy does it
Net Balance 56.6 439.392 take to make a gallon of soydiesel? The
Energetic Yield 2.8 8.3 Institute for Local Self-Reliance. Report
from ILSR, 2425. 18th Street NW-
5. Conclusions Washington D.C., 20.009-2096, USA.

This study demonstrates the importance of Amotz A.B; Jinjiikhashvily G. 2007. Production
the applicability of net energy ratio analysis of marine unicellular algae on power plant
wastes: from the black coal to green bio-
methodology to biofuels production aiming
fuel. In: CARIOCA J.O.B (editor). Anais,
at to supply the entrepreneurs with realistic 1st Brazilian Workshop on Green
data and design for different processes. The Chemistry: Awareness, Responsibility and
methodology developed in this study Action. Editora UFC. Fortaleza, Brasil.
employed energy coefficients available in pp. 325-345.
the literature in order to evaluate net energy
Barbosa C.R. 2009. Avaliação do glicerol
balance for agroindustrial plants, proveniente da fabricação do biodiesel
representing a valuable tool for como substrato para produção de
entrepreneurship decision related with the endotoxinas por Bacillus thuringiensis var.
best design for industrial plants. This kind of israelensis. Dissertação – Pós-Graduação
data are moving researchers and companies em Biotecnologia Industrial, Universidade
from all over the world to study and evaluate de São Paulo, Lorena, Brasil. 133 p.
the best way of producing efficiently Becker, E.W. 1994. Microalgae – Biotechnology
agricultural resources to guarantee the and Microbiology. Cambridge Studies in
production of biofuels in a sustainable and Biotechnology 10. Cambridge. 293p.
economic way. In general, biomass
Bonini, M.A. 2012. Cultivo heterotrófico de
processing plants consider the use of Aphanothece microscopica Nägeli e
biorefinery concepts to evaluate the net Chlorella vulgaris em diferentes fontes de
energy balance, as well as, the life cycle carbono e em vinhaça. Dissertação,
analysis of agroindustrial plants to meet Universidade de São Carlos, Pós-
sustainability requirements, as shown in this Graduação em Agricultura e Ambiente.
paper. The basic idea is to find the highest 96p.
net energy ratio (NER) for biofuels Braga F.L.P. et al. 2008. Balanço econômico da
production processes according to a specific produção de mamona e balanço energético
plant conception. So, the recovery of energy da obtenção de biodiesel no Estado do
from agroindustrial plant wastes could be Ceará. In: Congresso da Sociedade
obtained through the use of microalgae Brasileira de Economia, Administração e
cultivation to produce biodiesel, algal oil Sociologia Rural, XLVI, Rio Branco,
and/or biogas. This kind of approach results Brasil.
in a considerable increasing of the net Brieu T.P. 2009. Programa Nacional de
energy balance of the agroindustrial plants. Produção e Uso de Biodiesel: um Balanço
So, it can be concluded that it is possible to da Primeira Fase até 2008. Dissertação –

77
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234

79
 Hernández B.M., Rodríguez M.C., Lozano C., Castilla P. 2012. Rev Latinoam Biotecnol Amb Algal 3(1):80-94

Remoción de nutrientes por tres cultivos de microalgas libres e

inmovilizados
Hernández-Reyes, B.M.,1 Rodríguez-Palacio, M.C.,2* Lozano-Ramírez, C.2 y
Castilla-Hernández, P.1
1
Laboratorio de Biotecnología Ambiental, Departamento El Hombre y su Ambiente, Universidad
Autónoma Metropolitana-Xochimilco C.P. 04960, México, D.F.
2
Laboratorio de Ficología Aplicada, Departamento de Hidrobiología, Universidad Autónoma
Metropolitana-Iztapalapa C.P. 09340, México, D.F.

*Autor de correspondencia: [email protected]

Resumen
Las microalgas son el primer eslabón de la cadena trófica, aunque generalmente microscópicas
algunas alcanzan tamaños que las pueden hacer visibles a simple vista, la mayoría de las veces de
forma agregada, otras incluso, generan una turbiedad evidente en los cuerpos de agua. Las
microalgas se han utilizado para la eliminación de nutrientes de aguas residuales de tipo
municipal o industrial. Son una opción viable ya que los sistemas de tratamiento de aguas
residuales que emplean microalgas requieren poca energía ya que utilizan la luz solar, producen
biomasa que puede ser usada para diferentes fines, retiran CO2 de la atmósfera y pueden producir
substancias con alto valor agregado como pigmentos, fármacos y biocombustibles entre otros. En
este estudio se evaluó la capacidad para remover amonio (NH4+) y ortofosfato (PO4-3) por cultivos
libres e inmovilizados de microalgas, utilizando para ello un cultivo Mixto obtenido a partir de
agua residual municipal proveniente del reactor UASB de la UAM-I; y dos cultivos clonales de
Chlorella vulgaris y Spirulina subsalsa que pertenecen a la colección de cultivos UAM-I. Las
microalgas se inocularon en agua residual artificial a dos concentraciones de nutrientes, una baja
10 mgNH4+/L y 5 mgPO4-3/L y una alta 25 mgNH4+/L y 10 mgPO4-3/L, se monitoreo su
crecimiento y se determinó la capacidad de remoción de los nutrientes, en los cultivos libres e
inmovilizados en dos soportes lufa y polietileno, siendo la lufa el más eficiente en producción de
biomasa algal y en fijación de las microalgas. En consumo de nutrientes, en cultivos libres a baja
concentración, C. vulgaris presentó la mayor capacidad de remoción con un 50% para NH4+ y un
74% para PO4-3; mientras que en alta concentración la mejor remoción la alcanzó el cultivo Mixto
con 68% para NH4+ y 76% de PO4-3. En los cultivos inmovilizados sobre lufa C. vulgaris y el
cultivo Mixto presentaron el mayor consumo de nutrientes, siendo para NH4+ del 70 al 99.9% y
de PO4-3 del 72.1 al 89.9%, respectivamente. Algunas de las especies de microalgas utilizadas en
este estudio, demostraron ser eficientes en el consumo de nutrientes y en su capacidad de
adherencia y crecimiento en los soportes utilizados. El empleo de soportes facilita la cosecha de
la biomasa algal y hace posible su uso en sistemas de tratamiento continuos, lo cual hace más
económico y eficiente el proceso al utilizarlas a gran escala para biorremediación de aguas
residuales.

Palabras clave: Remoción de nutrientes, microalgas, cultivo mixto, aguas residuales

municipales.

80
 Hernández B.M., Rodríguez M.C., Lozano C., Castilla P. 2012. Rev Latinoam Biotecnol Amb Algal 3(1):80-94

Abstract
Microalgae are primary producers. They normally are microscopic beings, however they can
form aggregates big enough to make possible to see them with naked eye. Microalgae systems
spend a low energy budget so the light of the sun is used and this is free, the biomass produced
can be used for different purposes as food, pigments, medicines, even picking up CO2 from
atmosphere. Recently, microalgae have attracted our interest because they are a possible solution
for the treatment of waste waters. It was evaluated microalgae cultures for ammonium (NH4+)
and orthophosphate (PO4-3) removal using a free and immobilized mixed microalgae cultures
obtained from an anaerobic UASB reactor located in UAM-I waste water plant. Chlorella
vulgaris y Spirulina subsalsa clonal cultures from UAM-I microalgae collection were used too.
All cultures were maintained under light and temperature controlled conditions. Microalgae were
inoculated in artificial waste water using two different nutrient concentrations, a low
concentration, 10 mg NH4+/L and 5 mg PO4-3/L; and a high concentration, 25 mg NH4+/L and 10
mg PO4-3/L, respectively. Microalgae growth and nutrient removal capacity were measured.
Bioassays were carried out using two different substrata, luffa and polyethylene. Luffa was the
more efficient substratum in relation to biomass production and microalgae adhesion.
C. vulgaris in free microalgae cultures at low concentration was the most efficient in relation to
nutrients removal, with 50 % removal efficiency for NH4+ and 74% for PO4-3, as long as the best
removal results were showed by the mixed culture with 68% for NH4+ and 76% for PO4-3. The
highest efficiency related to nutrient removal was found in immobilized C. vulgaris growth on
luffa, 70-99.9% for NH4+ and 72.1-89.9% for PO4-3.
Some microalgae used during this experiment showed a good efficiency for nutrient removal.
Luffa and polyethylene present good characteristics related to microalgae adhesion and biomass
harvest, these conditions are promising for use them in waste water treatment systems.

Key words: Microalgae cultures, nutrient removal, waste waters.

1. Introducción Algunos nutrientes como el amonio y el

ortofosfato pueden ser incorporados a los
El deterioro de la calidad del agua, supone sistemas acuáticos por arrastre de suelos
un grave problema medioambiental y fertilizados con abonos nitrogenados y
socioeconómico, que se acentúa en zonas de fosfatados, pero también por descargas de
escasos recursos. El uso del agua potable aguas residuales industriales sin tratamiento,
para abastecimiento urbano e industrial, debe o por aguas tratadas insuficientemente que
ir acompañado de una correcta depuración además de nutrientes contienen metales
que permita su reutilización para riego pesados y substancias orgánicas refractarias
agrícola, de áreas verdes, aguas recreativas, (de la Noüe et al., 1992; Vargas et al., 2004).
reutilización industrial, piscicultura, o bien Las concentraciones de amonio en aguas
como elemento que no perturbe el equilibrio residuales municipales se encuentran de 12 a
biológico de la zona de vertido y que evite la 64 mgNH4+/L, mientras que las
contaminación de acuíferos subterráneos y -3
concentraciones de PO4 pueden estar entre
masas superficiales de aguas continentales o 3 y 17 mg/L (Cervantes-Zepeda et al., 2011;
marinas (Aranda-Cirerol et al., 2006; Asano Chacón et al., 2006; Punmia y Kumar 1998;
et al., 2007; EPA, 1997; Morató y Peñuela, Wang et al., 2010), siendo el fósforo total
2009).

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entre 4 y 15 mg/L (Punmia y Kumar 1998; (Baumgarten et al., 1999; Bermúdez et al.,
Wang et al., 2010). 2003).
Las microalgas, organismos autótrofos que No obstante a la gran cantidad de estudios
ocupan el primer eslabón en la cadena realizados, uno de los problemas es que la
trófica, han recibido mucha atención en los mayoría utiliza algas en suspensión,
últimos años, especialmente en las regiones conocidos también como cultivos libres,
tropicales y subtropicales, en donde se donde los procesos de cosecha requieren de
emplean como un biosistema alternativo métodos complicados (Ruiz-Marin et al.,
para la remoción de nutrientes de este tipo de 2010) o costosos. Como una medida
aguas. Estos microorganismos incorporan alternativa para revertir estos inconvenientes
nitrógeno en forma de amonio que es Chevelier y de la Noüe (1985), propusieron
utilizado para formar aminoácidos; aunque el uso de carragenina como soporte para
tienen la capacidad de incorporarlo en forma Scenedesmus, aplicada en la remoción de
de nitrato (Contreras, 1994; de la Noüe et nutrientes de efluentes secundarios. En este
al., 1992; Jeanfils et al., 1993). mismo soporte, la cianobacteria Spirulina
La utilización de microalgas para remoción maxima ha sido utilizada en el tratamiento
de nutrientes ha sido estudiada por más de terciario de desechos de cerdo (Cañizares et
50 años (Abalde et al., 1995; Andrade et al., al., 1994).
2009; Becker, 1994; EPA, 1999; Por otra parte, la inmovilización en alginato
Hanumatha-Rao et al., 2011; Hoffmann, también ha sido explorada por Jeanfils et al.
1998; Larsdotter, 2006; Lavole y de la Noüe, (1993), reportando velocidades de
1985; Mendez-Suaza et al., 2011; Olguin, incorporación de nitrato para cultivos de
2003; Sandbank y Hepher 1978; Shi et al., Chlorella vulgaris libre e inmovilizada, no
2007), comprobando que la biomasa algal encontrando diferencias significativas entre
obtenida tiene un alto contenido de ambos cuando se alimentaron a
proteínas, lípidos, carbohidratos, y otros concentraciones 2 M (0.37 y 0.36 d-1) y 4
productos de valor agregado. Por lo tanto, M (0.39 y 0.36 d-1). Travieso et al. (1996),
los esfuerzos para cultivar este tipo de con Chlorella vulgaris y Chlorella kessleri
microorganismos en aguas residuales han lograron resultados exitosos con agua
buscado conseguir un doble beneficio, la residual cruda. Al respecto, Tam y Wong
producción de biomasa para diferentes usos (2000), con Chlorella vulgaris en alginato de
y un efluente limpio con una tecnología calcio, en biorreactores, reportan buena
relativamente simple (Pulz y Gross, 2004; remoción para amonio y ortofosfato. Con
Rawat et al., 2011). otro método de inmovilización (doble capa),
Los géneros Chlorella y Scenedesmus, así Shi et al. (2007) mencionan que Chlorella
como algunas especies del grupo de las vulgaris removió el 94 y 89% de estos
cianobacterias, se han reportado para el nutrientes, respectivamente. Asimismo,
tratamiento de diferentes tipos de aguas diversos materiales para la inmovilización
residuales, destacando las provenientes de han sido reportados, entre estos lufa,
plantas de tratamiento convencionales de quitosano, resinas, silica, etc. (de-Bashan y
origen industrial y urbano (Andrade et al., Bashan, 2010).
2009; Escorihuela, 2007; Lavole y de la
Noüe, 1985). Por otra parte, se ha evaluado
el uso de excretas de cerdo, de aves y de
otros compuestos orgánicos como el acetato
sobre el crecimiento de microalgas

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En el presente trabajo se determinó la de NH4+ y PO4-, respectivamente. Los

capacidad de remoción de ortofosfato y inóculos fueron Chlorella vulgaris 1.23 x
amonio por cultivos de microalgas libres e 1010 células/L, de Spirulina subsalsa 8
inmovilizados en dos soportes, lufa y filamentos de entre 23-30 µm y el cultivo
polietileno, ya que la inmovilización resulta Mixto de 12.3 x 109 células/L, integrado por
una alternativa promisoria en este campo, con 40.5% de Chlorella sp., 35.8% de
vías a mejorar las eficiencias de eliminación Scenedesmus sp. y 23.6% Chlamydomonas
de nutrientes a través de la aplicación en sp. Los cultivos se incubaron a una
sistemas de tratamiento continuo y para temperatura de 20±1°C, una irradianza de
facilitar los sistemas de cosecha. La biomasa 90.5 mol m-2s-1 y un ciclo luz-oscuridad de
algal generada, por su origen, puede utilizarse 12:12 horas. Para evaluar la remoción de los
para la producción de bioenergéticos como nutrientes y el crecimiento se tomó una
biodiesel, biohidrógeno o metano (Chisti, muestra de 30 mL cada tercer día, tiempos
2007; Wijffels et al., 2010). similares a los reportados por otros autores
(Shi et al., 2007; Ruiz-Marin et al., 2010).
2. Materiales y Métodos
2.3. Inmovilización de cultivos en polietileno
2.1. Establecimiento de un cultivo Mixto y lufa
Se colectaron muestras de agua provenientes En matraces de 0.5 y 1L se adicionó agua
del efluente de un reactor anaerobio tipo residual artificial (con baja y alta
UASB ubicado en la UAM-I. Las muestras se concentración) y se les agregaron los
colocaron en 3 bidones de 4 litros de volumen soportes: 30 g polietileno de baja densidad
y se incubaron por 23 días a condiciones con un tamaño de partícula entre 0.7 y 0.9
ambiente de luz y temperatura. Cada tercer mm y lufa cortada en cuadros
día, y por un lapso de 20 días, se tomó un aproximadamente de 2.25 cm, 11.2 g. Ambos
mililitro de muestra y fue fijada con acetato soportes fueron previamente esterilizados por
de lugol para la identificación de las luz ultravioleta. Posteriormente los matraces
microalgas que se establecieron en este se inocularon con: C. vulgaris, S. subsalsa y
periodo de tiempo (Rodríguez-Palacio et al., el cultivo Mixto; se incubaron durante 20 días
2011; Valencia-Soto, 2012). en las mismas condiciones que los cultivos
libres. La remoción de nutrientes y la biomasa
2.2. Cultivos libres inmovilizada durante este periodo se
Se utilizaron las cepas de microalgas estimaron a partir de muestras colectadas al
Chlorella vulgaris y Spirulina subsalsa que inicio y al final del experimento.
fueron aisladas del lago de origen volcánico
Chalchoapan en la zona de los Tuxtlas en 2.4. Cultivos inmovilizados
Veracruz, Ver., y en el estero del Río La biomasa inmovilizada de los cultivos de
Barberena en Tampico, Tamaulipas, y un C. vulgaris y Mixto alcanzada en ambos
cultivo Mixto desarrollado a partir del soportes en el experimento anterior, fue
efluente del reactor UASB que trata las aguas realimentada únicamente con amonio y
residuales de la UAM-I. ortofosfato a alta concentración; se colectaron
Los cultivos se resembraron en agua residual muestras cada tercer día para evaluar su
artificial (medio de cultivo F/2 modificado) capacidad de remoción y para cuantificar la
en dos concentraciones de amonio y producción de nueva biomasa. El cultivo de
ortofosfato, la primera denominada “baja” S. subsalsa no fue evaluado en esta etapa
que consistió de 15 y 5 mg/L de NH4+ y PO4- debido a la escasa biomasa inmovilizada en
3
, respectivamente, y “alta” de 25 y 10 mg/L los soportes.

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2.5. Medio de cultivo 3. Resultados

Se preparó el medio denominado agua
residual artificial tomando como base el 3.1 Cultivo Mixto
medio de cultivo F/2 (Guillard y Ryther, En el cultivo Mixto se desarrollaron
1962, Guillard, 1975), del cual se retiró la microalgas de los grupos Clorofitas,
fuente de nitrógeno y fósforo, Euglenofitas y Bacilariofitas. Dentro de las
substituyéndose por las concentraciones de Clorofitas se encontraron microalgas del
amonio y ortofosfato necesarias para obtener género Chlorella, Chlamydomonas,
las concentraciones experimentales (baja y Scenedesmus y Pediastrum; del grupo de las
alta). Bacilariofitas fueron observadas Fragilaria
sp1. y Fragilaria sp2., mientras que en el
2.6. Técnicas analíticas grupo de las Euglenofitas, predominó
La determinación de la concentración de Euglena sp.
amonio y ortofosfato se realizó por
colorimetría utilizando el método de azul de 3.2 Cultivos libres
indofenol para el primero y por el método 3.2.1. Baja concentración
del ácido ascórbico para el segundo, La remoción de amonio para los cultivos de
siguiendo los procedimientos reportados en C. vulgaris, S. subsalsa y Mixto fue de 50,
Contreras (1994) y APHA (1995). 16 y 23% (Figura 1a); para el ortofosfato la
Inicialmente se realizaron curvas de remoción fue de 74, 96 y 23%,
calibrado para la estimación de la respectivamente (Figura 1b), mostrando
concentración de ambos nutrimentos. diferencias significativas (p = 0.0124). En
La determinación de la tasa de crecimiento cuanto a la densidad celular los tres cultivos
en los cultivos libres se llevó a cabo por la presentaron un crecimiento distinto (p =
cuantificación de microalgas encontradas en 0.0266) siendo el cultivo de la especie C.
un microlitro de cada muestra y se hizo por vulgaris el más exitoso.
triplicado; en los cultivos inmovilizados la
3.2.2Alta concentración
biomasa algal se determinó por el método de
La remoción de amonio (Figura 2a) a
peso seco (Arredondo-Vega y Voltolina,
concentración alta para los cultivos Mixto,
2007), antecedido por el desprendimiento de
C. vulgaris y S. subsalsa fue de 68, 37, 26%;
las microalgas por intervalos cortos de
para ortofosfato fue del 76, 45 y 24%
sonicación de las muestras (1 minuto),
(Figura 2b), existiendo diferencia entre estas
procedimiento que se repitió hasta que los
(p = 0.001). Respecto al crecimiento, C.
soportes quedaron libres de biomasa algal.
vulgaris exhibió el nivel más alto (Figura
Para la interpretación de los resultados se
2c), pero estadísticamente los tres cultivos
utilizó el análisis de varianza de un factor
mostraron ser iguales.
(ANOVA) y la t de Student, ambos con un
nivel de significancia de 0.05.

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Figura 1. (a) Perfil de remoción de amonio; (b) ortofosfato y (c) crecimiento celular, a baja concentración, con
cultivos de Chlorella vulgaris, Spirulina subsalsa y Mixto.

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Figura 2. (a) Perfil de remoción de amonio, (b) ortofosfato y (c) densidad celular, a alta concentración, con los
cultivos de Chlorella vulgaris, Spirulina subsalsa y Mixto.

3.3 Inmovilización de cultivos en polietileno

y lufa Asimismo, comparando cada cultivo en
La biomasa inmovilizada en cada uno de los ambos soportes, los resultados exhibieron
soportes y para cada uno de los tres cultivos que no hubo diferencias entre estos. En las
ensayados se muestra en la Tabla 1. En esta Figuras 3 y 4 se muestran imágenes de los
se observa que el cultivo Mixto en soportes antes y después de la
polietileno alcanzó la concentración más alta inmovilización. Adicionalmente, la mejor
de biomasa, pero no fue significativamente remoción de nutrientes fue obtenida por el
diferente a la de los otros dos cultivos. En cultivo Mixto; mientras que C. vulgaris y S.
lufa, la mayor biomasa la obtuvo el cultivo subsalsa presentaron las más bajas
Mixto, a continuación C. vulgaris y por eficiencias de remoción de NH4+.
último S. subsalsa, siendo significativamente
diferentes (p = 0.013).

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Tabla 1. Biomasa inicial y final de los cultivos de Chlorella, Spirulina y Mixto, y porcentaje de remoción de
nutrientes, durante la inmovilización en los soportes.

Soporte Polietileno Lufa

Cultivo Inicial Final Rem. (%) Inicial Final Rem. (%)

C. vulgaris
a,b a
Biomasa 1.3 x 109 b
0.0037 - a
1.3 x 109 b
0.0061 -
NH4+ (mg/L) 40.5 27.2 32.8 40.5 11.1 72.6
PO4-3 (mg/L) 4.9 0 100 3.6 1.1 69.4
S. subsalsa
a,b a
Biomasa 1.3x1010 b
0.0004 - a
1.3x1010 b
0.0033 -
NH4+ (mg/L) 81.4 63.3 22.2 84.3 77.8 7.71
PO4-3 (mg/L) 5.9 1.2 79.6 6.4 3.4 46.8
Mixto
a,b a
Biomasa 1.2x107 b
0.0058 - a
1.2x107 b
0.0173 -
NH4+(mg/L) 63.2 19.8 68.6 64.4 15.7 75.6
PO4-3 (mg/L) 6.8 1.2 82.4 6.5 1.2 81.5
a
células/L; bg biomasa algal/g soporte seco.

Figura 3. Muestra los soportes, (a) lufa y (b) polietileno en el tiempo cero. Los cultivos inmovilizados después de 20
días: en lufa, (c) Mixto y (d) Chlorella vulgaris; en polietileno, (e) Mixto y (f) Chlorella vulgaris.

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Figura 4. Fotografías de microscopio de luz, polietileno con cultivo Mixto (a) y con Chlorella vulgaris (b).

3.4 Cultivos inmovilizados El crecimiento de C. vulgaris fue similar en

Los cultivos en lufa (Figura 5 y Tabla 2) ambos soportes, mientras que el del cultivo
presentaron una mejor remoción de ambos Mixto fue mayor en lufa (p = 0.0215).
nutrientes, entre el 70 y 99.9%.

Figura 5. Consumo de (a) amonio y (b) ortofosfato por los cultivos de Chlorella vulgaris y Mixto inmovilizados en
polietileno y lufa. Ch: Chlorella vulgaris y Mx: Mixto.

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Tabla 2. Producción de biomasa y remoción de nutrientes por los cultivos de C. vulgaris y Mixto inmovilizados en
los soportes.

Soporte Polietileno Lufa

Cultivo Inicial Final Rem. (%) Inicial Final Rem. (%)

C. vulgaris
a
Biomasa 0.0037 0.0057 - 0.0061 0.1539 -

NH4+ (mg/L) 20.8 0.06 99.0 19.9 0.006 99.9

PO4-3 (mg/L) 16.5 8.4 49.2 17.2 4.8 72.1

Mixto
a
Biomasa 0.0058 0.0098 - 0.0173 0.1073 -

NH4+ (mg/L) 22.0 6.5 70.0 21 0.008 99.9

PO4-3 (mg/L) 17.5 5.1 70.8 16.9 1.7 89.9

a
g biomasa algal/g soporte seco.

4. Discusión remoción de amonio del 36.4% a partir de

una concentración de 16.9 mg/L, nivel
De los cultivos libres con agua residual menor al alcanzado por C. vulgaris (50%) en
artificial a baja concentración de nutrientes, este estudio y mayor a los cultivos de S.
el Mixto fue el que presentó los niveles subsalsa y Mixto (16 y 23%). Por su parte
menores de consumo, esto podría ser debido Ruiz-Marin et al. (2010) mencionan que C.
a que por su origen, el agua residual, las vulgaris removió 74.3 y 70.2% de NH4+ y
microalgas están adaptadas a PO4-3.
concentraciones más elevadas de nutrientes Las altas eficiencias de remoción alcanzadas
en comparación con las probadas en este por el cultivo Mixto a alta concentración de
experimento. Por otra parte, se considera que nutrientes, en comparación de los otros dos,
C. vulgaris mostró una mejor respuesta ya podría ser debido a la diversidad de
que removió ambos nutrientes microalgas establecidas a partir del agua
eficientemente. En el caso de S. subsalsa, la residual, además por este origen,
elevada remoción de PO4-3 (96%), no probablemente tienen la capacidad para
coincidente con la escasa remoción de NH4+ incorporar concentraciones más elevadas de
(16%), podría deberse a una precipitación nutrientes.
del ortofosfato con la subsecuente formación En el cultivo Mixto a baja concentración de
de minerales como la estruvita nutrientes, al final del ensayo se encontraron
(MgNH4PO4), tal como lo reportan de- Chlorella, Scenedesmus y Chlamydomonas
Bashan y Bashan (2010). en proporción de 83.7, 14.3 y 1.9% y en alta
Algunos estudios como el de Vargas et al. concentración en 16.8, 3.9 y 79.3%,
(2004), reportan que en una laguna respectivamente. Escorihuela et al. (2007),
facultativa se establecieron cultivos de mencionan que en la entrada y salida de una
cianofitas y clorofitas que alcanzaron una

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laguna de pulimiento predominó una que se realizaron las pruebas (matraces

población perteneciente a cianofitas, con cerrados y sin suministro de gases).
99.5 y 97.4%, respectivamente, siendo el Cañizares et al. (1994), reportan una buena
género más frecuente Synechocystis con un capacidad de inmovilización en carragenina
96.2%. La diferencia de las microalgas por Spirulina sp., que fue contrario a los
encontradas en ambos trabajos, podría resultados obtenidos en este estudio, donde
explicarse a que crecieron en efluentes el cultivo de S. subsalsa no tuvo una buena
distintos, ya que un tratamiento es aerobio adherencia al polietileno, ni a la lufa.
(laguna de pulimiento) y el otro anaerobio Mientras que los cultivos de C. vulgaris y
(reactor UASB). Mixto se inmovilizaron positivamente en
De los cultivos clonales que fueron ambos soportes.
probados, el de C. vulgaris en cultivo libre Respecto a los nutrientes durante el periodo
presentó buenos niveles de producción de de inmovilización, el cultivo Mixto tanto
biomasa, y comparando con Chacón et al. para polietileno como para lufa fue el que
(2006), que alcanzaron 6.2x1010 cel/L en 27 obtuvo una mejor capacidad de remoción.
días, en este estudio se obtuvo un mayor Comparando con lo reportado por Shi et al.
número de células en 20 días. Sin embargo, (2007), con cultivos inmovilizados de C.
se observó una caída repentina en la curva de vulgaris y Scenedesmus sp. alimentados
crecimiento a los 12 días del cultivo (Figura alrededor de 20 mg/L de NH4+ y 3.0 mg/L de
2), aunque aún se encontraban nutrientes, PO4-3, obtuvieron en 9 días eficiencias de
esto puede deberse a que los remoción del 94 y 89%, mientras que en este
microorganismos fotosintéticos utilizan la estudio en 20 días, el cultivo de C. vulgaris
energía luminosa y CO2 (Bermúdez et al., alcanzó un remoción del 99.0 y 49.2% en
2003), pero cuando los cultivos se someten a polietileno y del 99.9 y 72.1% en lufa,
una alta carga de nutrientes y no se les respectivamente, esto podría ser debido al
suministra una fuente externa de CO2 o de tipo de inmovilización que utilizaron (doble
carbonato, se limita la fotosíntesis y ya no capa). Además, para el cultivo de C.
pueden asimilar dichos nutrientes. Un vulgaris (polietileno) y S. subsalsa
suministro de CO2 ya sea como gas puro o (polietileno y lufa) el consumo de NH4+ no
adicionado por una corriente de aire, equivalente al PO4-3 removido, puede
aumenta significativamente la productividad suponer perdida por precipitación.
de los cultivos masivos de microalgas y En relación a la concentración de biomasa,
actúa como fuente de carbono para la Akhtar et al. (2003) en un estudio sobre
fotosíntesis (Abalde et al., 1995). remoción de metales pesados por Chlorella
También es de considerar que los gradientes sorokiniana inmovilizada en lufa, alcanzan
gaseosos imponen restricciones a las tasas de una biomasa de 0.263 g biomasa/g soporte
crecimiento de los cultivos, ya que una alta seco en 24 días, con una remoción de níquel
densidad de células fotosintéticamente del 97%, en este estudio se alcanzaron
activas provocan concentraciones valores entre 0.0057 y 0.1539 g biomasa/g
extremadamente altas de oxígeno disuelto, soporte seco, lo que indicaría que el tipo de
que llevan a una sobre saturación de compuesto a remover tienen un efecto sobre
oxígeno, inclusive por encima de 400%; ante el crecimiento de la biomasa. Con
esto se produce inhibición de la fotosíntesis Synechococcus sp. inmovilizada alcanzaron
y los cultivos tienden a caer (Abalde et al., una biomasa de 0.0094 g biomasa/g soporte
1995). En este estudio ambos factores seco cuando fue empleada para la
podrían haber afectado el consumo total de depuración de cadmio (Saeed y Iqbal, 2006),
nutrientes, debido a las condiciones en las que fue igual a la encontrada en el cultivo

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Mixto con polietileno y 16 veces menor a la 75.6% para el NH4+ y de 69.4 al 100% de
máxima obtenida para Chlorella vulgaris en PO4-3, aunque para el ortofosfato pudo haber
lufa. Los dos autores coindicen en que la perdida por precipitación.
utilización de microalgas inmovilizadas en Los cultivos de C. vulgaris y Mixto
este soporte, es un método viable para la inmovilizados alcanzaron los mayores
remoción de metales pesados de aguas porcentajes de remoción de los nutrientes, 70
residuales, y al igual que en el presente al 99.9% (NH4+) y 72.1 al 89.9% (PO4-3),
estudio la lufa resultó mejor para la mientras que el incremento de biomasa algal
inmovilización y remoción de nutrientes. fue similar en ambos cultivos.
Saeed y Iqbal (2006), mencionan que esto El utilizar especies de microalgas, que
puede ser debido a que las microalgas tienen provienen del agua residual tratada, como
más superficie para la inmovilización por lo alternativa para biorremediación de las
largo de los hilos de la fibra de este soporte. mismas es una opción viable debido a que de
En este estudio se proponen ambos soportes manera natural, están adaptadas a altas
como alternativas de inmovilización de la concentraciones de nutrientes y a otras
biomasa algal, debido a que en la mayoría de substancias presente en las mismas. Por otro
los experimentos, no se encontraron lado, las especies de microalgas que se
diferencias estadísticamente significativas en desarrollaron a partir de este tipo de aguas,
la fijación de la biomasa. Sin embargo en el Chlorella, Chlamydomonas, Scenedesmus y
polietileno las eficiencias de remoción Pediastrum resultaron ser interesantes para
fueron menores que con la lufa, por lo que, un segundo uso biotecnológico.
probablemente sólo se requiere tener los
cultivos en agitación para que exista un 6. Reconocimientos
mayor contacto entre los nutrientes y las
microalgas adheridas al polietileno. Al Programa de Mejoramiento del
Profesorado (PROMEP), por el finan-
5. Conclusiones ciamiento para la realización de este estudio,
a través del proyecto “Calidad del agua del
En los cultivos libres a baja concentración, la Río Zahuapan y Biotratamientos”. Folio
mayor capacidad de remoción la tuvo C. UAM-PTC-117.
vulgaris por disminuir ambos nutrientes
(NH4+ y PO4-3) en un 50 y 74%. A alta 7. Referencias
concentración, la mejor remoción se alcanzó
con el cultivo Mixto (68% de NH4+ y 76% Abalde, J., Cid, A., Fidalgo, J.P., Torres, E.,
de PO4-3). Herrero, C. 1995. Microalgas: Cultivo y
A baja concentración la mayor biomasa algal Aplicación. Ed. Universidad Coruña,
Coruña. 210p.
fue alcanzada por C. vulgaris, mientras que
en la segunda condición los tres cultivos Akhtar, N., Iqbal, J., Iqbal, M. 2003. Microalgal-
exhibieron un crecimiento similar. luffa sponge immobilized disc: a new
La inmovilización de cultivos fue baja para efficient biosorbent for the removal of Ni
S. subsalsa en lufa y en polietileno (≤0.0004 (II) from aqueous solution. Lett Appl
Microbiol 37:149–153.
g biomasa algal/g soporte seco), pero los
cultivos de C. vulgaris y Mixto fueron Andrade, R.C., Vera, B.A.L., Cardenas, L.C.H.,
inmovilizados favorablemente en ambos Morales-Avendaño, E.D. 2009.
soportes, obteniendo una biomasa algal de Producción de biomasa de la microalga
hasta 0.0061 y 0.0173 g/g de soporte seco; la Scenedesmus sp. utilizando aguas
remoción de nutrientes fluctuó entre 32.8 y

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residuales de pescadería. Rev Tec Ing reactor UASB escala piloto. Revista
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examination of water and wastewater. 19th Chacón, C., Andrade, C., Cárdenas, C., Araujo,
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