PRUEBA NO TREPONÉMICA VDRL

MATERIALES

 Láminas de vidrio con anillos de parafina u otro similar de 14 mm de diámetro

 Micropipeta de 200 µL.
 Tubos Khan.
 Soporte de madera para las láminas.
 Vaso precipitado de 50 mL.
 Jeringa de vidrio de 1 ó 2 mL.
 Aguja calibre 18G calibrada con 60 +/- 2 gotas /mL (Suero).
 Aguja calibre 21G calibrada con 100 +/- 2 gotas/mL (LCR).
 Frasco de vidrio de 30 mL con tapa esmerilada y de fondo plano, para preparación de
antígeno.
 Pipetas de vidrio 1 y 5 mL.
 Propipetas.

REACTIVOS

 Suspensión antigénica
 Solución salina amortiguada
 Suero fisiológico al 0.9%. Suero fisiológico al 10%
 Sueros controles: Reactivo, Reactivo débil, No Reactivo.

EQUIPOS

 Rotador orbital adaptable a 180 +/- 2 rpm, que describa un círculo de ¾ de pulgada de
diámetro en un plano horizontal.
 Baño termorregulado a 56ºC.
 Centrífuga.
 Microscopio óptico, equipado con ocular 10x y un objetivo de 10x.
 Termómetro ambiental.
 Vitrina refrigerada (2-8ºC).
 Freezer para -20ºC.
TÉCNICA VDRL EN MUESTRAS DE SUERO

Preparación de muestras de suero

1. Se debe verificar que las muestras tengan un volumen adecuado y estén libres de
hemólisis, lipemia y contaminación, ya que estas pueden ser causas para rechazarlas.
2. Si la muestra es sangre total, se centrifuga a 2.500 rpm por 5 minutos para separar el
suero.
3. Rotular el tubo primario y secundario con el número asignado por el laboratorio.
4. Del tubo primario se traspasa el suero a otro tubo khan (secundario), ambos
previamente rotulados con el mismo número entregado por el laboratorio.
5. Inactivar los sueros tapados a 56ºC durante 30 minutos en el baño termorregulado.
6. Dejar enfriar a temperatura ambiente durante 10 minutos hasta su procesamiento y no
más allá de 4 horas. Si excede dicho tiempo deberá inactivar nuevamente por 10
minutos adicionales.
7. Completar el registro de lecturas de VDRL donde se consignan las muestras a
procesar en la corrida.
8. Si las muestras no se procesan dentro de las siguientes 4 horas, estas se deben
conservar refrigeradas a 2-8°C por un máximo de 48 horas.
9. Si las muestras no se procesan dentro de las 48 horas se deben congelar a -20°C,
pudiendo conservarse de esta forma hasta 2 años.

Preparación del antígeno para VDRL en suero

1. Temperar el laboratorio entre 23° y 29° C (óptimo 25°C).

2. Agregar con pipeta de vidrio a un frasco con tapa esmerilada y fondo plano, 0.4 mL
de solución salina amortiguada incluida en el kit.
3. Agregar 0.5 mL de solución de antígeno gota a gota, por 6 segundos a la solución
salina, haciendo rotar el frasco suave y continuamente. La punta de la pipeta debe
quedar a nivel del tercio superior del frasco para evitar que tome contacto con la
solución salina. Se obtiene la velocidad de rotación adecuada cuando el centro del
frasco describe un círculo de dos pulgadas (5 cms.) de diámetro 3 veces por segundo
(18 veces en 6 segundos). Continuar con la rotación del frasco durante 10 segundos.
4. Añadir 4.1 mL de solución salina amortiguada con pipeta de 5 mL dejándola escurrir
suavemente.
5. Tapar el frasco y agitar por inversión vigorosa aproximadamente 30 veces en 10
segundos.
6. La solución debe ser usada dentro de las siguientes 8 a 12 horas. Este volumen de 5
mL de suspensión de antígeno alcanza para 180 determinaciones aproximadamente.
7. Controlar la suspensión de antígeno cada vez que se prepare, con sueros patrones o
sueros control de reactividad conocida (Reactivo, Reactivo débil y No Reactivo). Se
recomienda la utilización de sueros controles comerciales, ya que están estabilizados,
por lo que no es necesario congelarlos. Los controles preparados en los Laboratorios,
deben ser sueros de pacientes, caracterizados por un profesional con experiencia. En
este caso, se debe alicuotar los sueros y congelarlos a -20 ºC. Los controles “in-
house” deben ser calentados a 56ºC antes de utilizarlos.
8. Las reacciones con los sueros controles deben reproducir la pauta de reactividad
establecida. Un suero No Reactivo debe presentar una dispersión completa de las
partículas de antígeno.
9. No debe usarse una suspensión de antígeno inadecuada, ni tampoco mezclas de
suspensiones de antígeno.
10. Los sueros controles deben incluirse en todas las preparaciones de la suspensión de
antígeno, para asegurar la concentración adecuada de ésta al momento de realizar las
determinaciones.
TÉCNICA CUALITATIVA DE VDRL EN SUERO

1. En el extremo superior izquierdo de cada lámina se anota el número de la primera

muestra e inferior izquierdo el número de la última.
2. Calibrar la aguja despuntada calibre 18G con una jeringa de vidrio de 2 mL aspirando
1 mL de suspensión la cual debe rendir 60 +/-2 gotas, es decir entre 58 y 62. Una gota
de aguja calibre 18G corresponde a 17 µL.
3. Ubicar las láminas de vidrio en el soporte de madera según el número de muestras a
procesar. Agitar los tubos en vortexy con micropipeta dispensar 50 µL década una de
las muestras preparadas en el punto anterior dentro de cada pocillo y extender el
contenido por toda la superficie.
4. Homogenizar la suspensión de antígeno con suaves movimientos circulares. Aspirar
un volumen suficiente y en forma vertical, agregar una gota a cada pocillo. Se puede
utilizar cualquier dispositivo que rinda el volumen exacto requerido de antígeno. En el
caso del uso de una pipeta automática, se recomienda el uso de una pipeta a repetición
para minimizar posibles inconvenientes en la cantidad de alícuota dispensada.
5. Agitar las láminas durante 4 minutos a 180 rpm en rotador orbital.

Lectura e interpretación de resultados técnica cualitativa de VDRL en suero

1. Inmediatamente después de la agitación leer las reacciones al microscopio con

aumento de 100 x (10x ocular y 10x objetivo).
2. Leer los controles No Reactivo (NR), Reactivo débil (Rd) y Reactivo (R).
3. Interpretación de Lecturas
4. El resultado Reactivo se caracteriza habitualmente por grumos grandes o pequeños,
pero el tamaño es uniforme.
5. Todo resultado Reactivo, Reactivo débil y No Reactivo rugoso debe ser analizado
cuantitativamente. Esporádicamente se puede presentar un fenómeno de prozona, el
 cual se debe a un exceso de componente reactivo en el suero (anticuerpos reagínicos
en muy alto nivel). Este fenómeno no es de fácil reconocimiento, pero se puede
sospechar por la presencia de floculación irregular y de grumos débilmente unidos.
Una reacción zonal se informa como Reactiva

TÉCNICA CUANTITATIVA DE VDRL EN SUERO

1. Separar las muestras R a cuantificar.

2. Dispensar las muestras
3. Depositar con micropipeta 50 µL de muestra de suero en el pocillo número 1
(dilución 1:1) y 50 µL de suero fisiológico 0.9 % en los pocillos 5 y 9
4. En el pocillo número 5 agregue 50 µL de muestra de suero (dilución 1:2), mezclar por
aspiración ocho veces con la pipeta automática, evitando la formación de burbujas y
transferir 50 µL de esta mezcla al pocillo número 9 (dilución 1:4) mezclar ocho veces
igual forma como se explicó anteriormente, descartar los últimos 50 µL.
5. Proceder de la misma manera con el resto de las muestras paciente.
6. Homogenizar suavemente la suspensión del antígeno y añadir 1 gota a cada pocillo,
con aguja calibre 18G.
7. Agitar la lámina por 4 minutos en rotador a 180 rpm.
8. Leer las reacciones al microscopio
9. Si la reactividad continúa, seguir diluyendo la muestra de la siguiente manera: hacer
una dilución 1:8 en tubo, colocando 700 µL de suero fisiológico y 100 µL de muestra
y mezclar en vórtex.
10. Transferir 50 µl de suero fisiológico al pocillo 5 y 6. Agregar 50 µL de la dilución 1:8
al pocillo 4. Tomar otros 50 µL de esta dilución y mezclar 8 veces con los 50 µL de
suero fisiológico del pocillo 5, de ahí tomar 50 µL y mezclar con los 50 µL de suero
fisiológico del pocillo 6, mezclar 8 veces y eliminar los últimos 50 µL.
11. Agregar una gota de antígeno (17 µL) a cada pocillo.
12. Agitar la lámina en el rotador orbital, a 180 rpm por 4 minutos.
13. Leer al microscopio según el punto 3.4 y seguir el ejemplo de interpretación de
resultados.
14. Si la reactividad continúa (1:32 R o Rd), preparar diluciones adicionales.
15. Preparar dilución 1:64 en tubo, tomando 700 µL de suero fisiológico y 100 µL de la
dilución 1:8 y se procede según lo descrito anteriormente hasta la obtención de un
resultado NR.

Ejemplo de interpretación de resultados de VDRL cuantificado.

PRUEBA NO TREPONÉMICA RPR

MATERIAL

 Aguja calibre 20G sin bisel, que rinde un volumen de 60 ± 2 gotas por mL de
antígeno.
 Micropipeta automática.

REACTIVOS E INSUMOS

 Tarjetas recubiertas de plástico, cada una con 10 círculos de 18 mm de diámetro.

 Pipetas plásticas desechables, que rinden un volumen de 50 µL por gota.
 Antígeno RPR, en ampollas de 1 o 3 mL.
 Frasco plástico para distribuir el antígeno.
 Aguja calibre 20G sin bisel, que rinde un volumen de 60 ± 2 gotas por mL de
antígeno.
 Sueros Controles NR, R, Rd o Mínimo

EQUIPOS

 Rotador orbital adaptable a 180 +/- 2 rpm, que describa un círculo de ¾ de pulgada de
diámetro en un plano horizontal.
 Refrigerador (2-8ºC).
 Freezer para -20ºC.
 Cubierta humedecedora

Preparación de muestras de suero

1. Verificar que las muestras tengan un volumen adecuado, estén libres de hemólisis,
lipemia y/o contaminación, condiciones que constituyen causal de rechazo.
2. Si la muestra es sangre total, se centrifuga a 2.500 rpm por 5 minutos para separar el
suero.
3. Si el análisis se realiza de inmediato, los sueros se pueden retener en el tubo de
recolección original. Vaciar a tubos limpios y secos si se va a postergar el análisis.
4. Completar el registro de lecturas de RPR donde se consignan las muestras a procesar
en la corrida.
5. Si las muestras no se procesan dentro de las siguientes 4 horas, estas se deben
conservar refrigeradas a 2-8°C por un máximo de 48 horas.
 6. Si las muestras no se procesan dentro de las 48 horas se deben congelar a -20°C.

PRUEBA CUALITATIVA DE RPR EN SUERO (EN TARJETA)

1. Depositar 50 µL de muestra sin calentar o calentada, en un anillo de 18 mm de la

tarjeta, usando una pipeta automática.
2. Guardar las tarjetas a temperatura ambiente, no tocar con los dedos el área dentro de
los anillos para no engrasarlos. Cada anillo debe usarse una sola vez.
3. Extienda el suero completamente dentro del anillo con la punta plástica, evitando que
el suero se salga de este.
4. Agitar suavemente el frasco plástico que contiene el antígeno para Re suspender las
partículas.
5. Sosteniendo el frasco plástico con la aguja en posición vertical dejar caer varias gotas
para eliminar el aire de la aguja y agregar una gota de la suspensión de antígeno RPR
a cada anillo que contenga suero. No mezclar. El antígeno y la muestra se mezclarán
durante la rotación.
6. Colocar la tarjeta en un rotador orbital y agitar 8 minutos a 100 (+/- 2) rpm.
7. De manera opcional se recomienda usar una cámara húmeda para cubrir las tarjetas
durante el período de rotación, para evitar la evaporación. Puede colocarse una
bandeja recubierta con papel absorbente humedecido con agua destilada.
8. Leer las reacciones a ojo desnudo, inmediatamente después de terminada la rotación,
sobre un fondo negro y con luz blanca potente. No emplear luz fluorescente porque
las reacciones mínimas pueden omitirse. Para distinguir mejor los resultados No
Reactivos de los Reactivos mínimos, girar e inclinar ligeramente la tarjeta

Ejemplo de tarjeta plástica RPR con 10 anillos

Lectura e interpretación de resultados técnica cualitativa de RPR

Informar los resultados de la siguiente manera:

En el examen RPR los resultados se informan como Reactivo o No Reactivo. La reacción

Reactiva mínima (o débil) se informa Reactiva

PRUEBA CUANTITATIVA DE RPR EN SUERO (EN TARJETA)

1. Para cada muestra a ser analizada, deposite 50 uL de solución salina al 0.9% en los
anillos Nº 2 al Nº5 de la tarjeta. No se debe extender la solución salina.
2. Coloque 50 µL de muestra en el anillo Nº 1.
3. Deposite 50 µL de muestra en el anillo Nº 2 mezclando el contenido 5 a 6 veces,
evitando la formación de burbujas. Extienda la mezcla en todo el diámetro del anillo.
4. Transferir 50 µL del anillo 2, al 3, al 4, al 5 mezclando después decada transferencia.
Deseche 50 µL después de mezclar el contenido en el anillo Nº 5.
5. Sosteniendo el frasco plástico con la aguja en posición vertical dejar caer varias gotas
para eliminar el aire de la aguja, posteriormente agregar una gota de la suspensión de
antígeno RPR a cada anillo que contenga suero. No mezclar.
6. Colocar la tarjeta en el rotador orbital y agitar 8 minutos a 100 (+/- 2) r.p.m.
7. Opcionalmente es recomendable usar una cámara húmeda para cubrir las tarjetas
durante el período de rotación.
8. Leer las reacciones, a ojo desnudo, inmediatamente después de terminada la rotación,
sobre un fondo negro y con luz potente. No emplear luz fluorescente porque las
reacciones mínimas pueden omitirse. Para distinguir mejor los resultados No
Reactivos de los Reactivos mínimos, girar e inclinar ligeramente la tarjeta.
9. Si la solución más diluida analizada (1:16) resulta reactiva, se prepara una dilución
1:16 de la muestra de prueba, agregando 100 µL de suero a 1.5 mL de solución salina
al 0.9%. Mezclar bien. Deposite 50 µL de dilución 1:16 en el anillo Nº 1 y complete
el procedimiento en la forma descrita anteriormente hasta obtener un resultado No
Reactivo
PRUEBAS TREPONÉMICAS MHA-Tp

MATERIALES

 Tubos de vidrio khan.

 Placas de microtitulación con fondo en U.
 Soporte con espejo de aumento para lectura del fondo de los pocillos.

REACTIVOS

 Kit de MHA-Tp.
 Reactivo antígeno: Suspensión de eritrocitos de pollo sensibilizados.
 Reactivo Control: Suspensión de eritrocitos de pollo no sensibilizados.
 Solución diluyente: Tampón fosfato salino que contiene componentes solubles de
Treponema Reiter y agentes estabilizadores.
 Control positivo: Suero de conejo inmune.
 Control negativo: Suero de conejo no inmune.

EQUIPOS

 Centrífuga.
 Micropipetas automáticas.
 Refrigerador (2-8ºC).
 Freezer para -20ºC

Preparación de las muestras y almacenaje

1. Verificar que las muestras tengan un volumen adecuado, estén libres de hemólisis,
lipemia y/o contaminación, condiciones que constituyen causal de rechazo.
2. Si la muestra es sangre total se centrifuga a 2.500 rpm por 5 minutos para separar el
suero, rotular el tubo primario y secundario con el examen solicitado, número
asignado y la fecha, utilizando una etiqueta autoadhesiva impresa.
3. Si las muestras no se procesan dentro de las 4 horas, se conservan refrigerados entre
2-8°C por un máximo de 72 horas.
4. Si las muestras no se procesan dentro de las 72 horas, se conservan congeladas a -
20°C.
Procedimiento técnico

1. Permitir que los reactivos alcancen la temperatura ambiente.

2. Para cada test se necesitan 4 pocillos de la microplaca, 2 de los cuales se utilizarán
para la preparación de la dilución de la muestra.
3. Verificar que los eritrocitos del reactivo antígeno y el reactivo control estén Re
suspendidos adecuadamente (debe realizarse suavemente).
4. Distribuir 25 µL disolución diluyente en el pocillo 1, 100 µL en el pocillo 2 y 25 µL
en cada uno de los pocillos 3 y 4.
5. Añadir 25 µL de la muestra en el pocillo 1. Mezclar el contenido del pocillo 1 y
transferir 25 µL al pocillo 2. Mezclar y transferir 25 µL del pocillo 2 al pocillo 3,
mezclar y desechar 25 µL del pocillo 3. Transferir otros 25 µL del pocillo 2 al pocillo
4, mezclar y desechar 25 µL del pocillo 4.
6. Añadir 75 µL de reactivo control al pocillo 3 y 75 µL de reactivo antígeno al pocillo.
7. Mezclar el contenido de los pocillos dando ligeros golpes en los lados de la placa.
8. Cubrir la placa e incubar durante 45- 60 minutos a temperatura ambiente y en lugar
libre de vibraciones. Mantener lejos de cualquier fuente de calor.
9. Leer los resultados en el soporte con espejo de aumento.

[Link]
%20DIAGN%C3%93STICO%20SER%C3%93LOGICO%20DE%20S%C3%[Link]