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 Las plantas producen una

gran variedad de metabolitos
secundarios, que son de gran
aplicación en la vida humana.
humana.

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El cultivo in vitro ha permitido producir estos

metabolitos secundarios, evitando la explotación de
recursos naturales.

 Sin embargo, en contados casos los niveles de

producción alcanzados son adecuados para la
producción a escala industrial.

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Estrategias para aumentar la producción de

metabolitos secundarios
 Optimización de las condiciones y medio de
cultivo (luz, sistema de cultivo, reguladores de
crecimiento, etc.)
 Elicitación.
 Regulación metabólica (agregado de precursores,
inhibidores, etc.)
 Ingeniería genética sobre las rutas metabólicas
(expresión o bloqueo de genes, expresión de factores
de transcripción, etc).
 Estrategias ingenieriles.

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Estrategias para aumentar la producción de

metabolitos secundarios
 Optimización de las condiciones y medio de
cultivo (luz, sistema de cultivo, reguladores de
crecimiento, etc.)
 Elicitación.
 Regulación metabólica (agregado de precursores,
inhibidores, etc.)
 Ingeniería genética sobre las rutas metabólicas
(expresión o bloqueo de genes, expresión de factores
de transcripción, etc).
 Estrategias ingenieriles.

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Elicitor

 Esta denominación agrupa a las sustancias

químicas de distinto origen (biótico o abiótico),
que desencadenan una respuesta en las plantas, lo
que se traduce en la acumulación de metabolitos
secundarios.

 La técnica de elicitación surgió de la observación

de que componentes moleculares de un patógeno
eran capaces de desarrollar una respuesta de
defensa similar a la provocada por el patógeno
entero.

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CLASIFICACIÓN DE LOS ELICITORES

BIÓTICOS ABIÓTICOS
 Composición definida  Físicos
 Chitosan  Estrés térmico
 Alginato  Estrés osmótico
 Pectina  Irradiación UV
 Quitina  Heridas
 Elicitinas  Fuerzas de corte
(estrés hidrodinámico)
 Composición compleja  Químicos
 Homogenato fúngico  O-vanadato de sodio
 Extracto de levadura  Vanadil sulfato
 Esporas fúngicas  Metales pesados

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Factores que afectan la elicitación

 Especificidad del elicitor
 El mismo elicitor puede actuar sobre diversas especies.
La cinética y los niveles de acumulación de los
metabolitos secundarios producidos dependerá del elicitor
usado en cada caso particular.

 Concentración del elicitor y tiempo de

tratamiento..
tratamiento
 Estos dos factores deben determinarse empíricamente.

 Condiciones de cultivo
 En general, deben adicionarse en la fase exponencial de
crecimiento. También influyen la presencia de reguladores
de crecimiento y la luz.

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Mecanismo molecular de acción de los elicitores

Señales

Receptores

Transducción de señales

Síntesis o activación de factores de transcripción

Modificación de la expresión de genes

Síntesis de metabolitos secundarios

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Receptores (1)
 Los receptores son proteínas encargadas de
detectar una estímulo o señal. Como consecuencia
de esta interacción, estas proteínas se activan y
desencadenan una cascada de señalización
intracelular.
Hay evidencia que demuestra la existencia de
sitios de unión a elicitores, ubicando estos posibles
receptores en la membrana plasmática de las
especies vegetales estudiadas.
 Los más caracterizados son del tipo RLKs
(transmembrane receptor-like protein kinases), y se
supone que están implicadas en el reconocimiento de
estímulos variados.

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Receptores (2)

 Otro grupo de receptores corresponde a las

proteínas R, que reconocen elicitores específicos
codificados por genes de avirulencia (avr).
En este caso, la interacción ligando-receptor es
muy específica.
 Dentro del genoma, existen varios genes que
codifican para distintas proteínas R, las cuales le
confieren a la planta resistencia a ciertos
componentes de avirulencia presentes en patógenos
(patógenos incompatibles).

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Ejemplos de elicitores con sus correspondientes

receptores (o sitios de unión) en plantas.

Tomado de J. Zhao et al. / Biotechnology Advances 23 (2005) 283-333

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Vías de señalización intracelular

 Proteínas que unen GTP (G-proteins)

 Señalización mediada por Ca2+ intracelular
 Inositol 3- fosfato (IP3) y nucleótidos cíclicos
 Acidificación del citoplasma
 Estrés oxidativo y especies reactivas del oxígeno (ROS)
 Oxilipinas
 Mensajeros lipídicos (DAG, liso PC)

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G-Proteins
 Abarca una gran grupo de proteínas, desde
pequeñas hasta heterodiméricas.

 Están involucradas en varios procesos de la célula

vegetal (crecimiento, señalización de hormonas,
etc.)

 Su función es acoplar el reconocimiento del

elicitor por el receptor con distintos sistemas
efectores dentro de la célula (canales iónicos,
fosfolipasas, etc.)

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Canales iónicos y concentración de Ca2+ intracelular

 Frente a un elicitor, los cambios que se producen
son:
 pH intracelular
 intercambio K+/ H+  pH extracelular
 salida de Cl-
 entrada de Ca2+ pasa de 50-100 nM a 1-5 mM

 El aumento de Ca2+ intracelular activa otros

procesos, ya sea de forma directa o mediante
sensores, como la calmodulina:
activa PK dependiente de Ca2+ (CPDK)
Ca2+ JA
activa fosfolipasas que sintetizan IP3
PK dependiente PA
PP dependiente DAG
Ca2+ /calmodulina activa
Factores de transcripción

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Estrés oxidativo y ROS

 Especies más abundantes: O2- y H2O2 (generados
por la NADPH oxidasa).
 En general, la producción de estos radicales es
bifásica, debido a la existencia de dos NADPH
oxidasas diferentes: una dependiente de Ca2+ y otra
independiente.
 Efectos de los ROS:
 refuerzo de pared celular.
 muerte celular por hipersensibilidad.
 activación de genes de defensa y síntesis de metabolitos
secundarios.
 biosíntesis de JA y compuestos relacionados.

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Oxilipinas
 Se generan por catabolismo oxidativo de ácidos
grasos poliinsaturados por acción de lipasas,
lipooxigenasas, cit P450, etc.
 Las más estudiadas son JA, metJA y ciclolipinas.

Nucleótidos cícliclos

 AMPc: generado por AC, está involucrado en la

regulación de canales iónicos de la membrana
plasmática.
GMPc, ribósido ADPc: agente movilizador de
Ca2+.

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Generación de mensajeros lipídicos

Tomado de J. Zhao et al. / Biotechnology Advances 23 (2005) 283-333

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Mensajeros lipídicos y fosfolipasas

PC PIP2
 PLA2  PLC
ácidos lisoPC
grasos IP3 DAG
Activa Na+/H+
Precursores ATPasa vacuolar Movilización de
de oxilipinas Ca2+ de vacuola
y retículo.

PC / PS
 PLD
colina o Ácido fosfatídico (PA)
serina
Genera ROS y
cascada de PK.

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Tomado de J. Zhao et al. / Biotechnology Advances 23 (2005) 283-333

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Otras vías y compuestos involucrados

 Ácido salicílico (en algunos casos, inhibe la
biosíntesis de JA)
 Óxido nítrico
 Etileno (cross-talk con la vía de JA: inducción o
activación de genes antagónicos)
 Ácido abscícico (ABA)
 MAPKs (promueven la fosforilación de factores
de transcripción, favoreciendo la expresión de
genes relacionados con el metabolismo
secundario).

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Factores de transcripción (TF)

 Todos estos sistemas de transducción se señales

convergen en la activación de factores de
transcripción.
 Estos TF pueden:
 ser estimulados por el elicitor en forma directa o por
señales intracelulares.
 regulados por otros TF o estar bajo control de feedback
positivo.
 ser constitutivos (forma inactiva), y activarse por
otros TF o por fosforilación/desfosforilación.

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Unión del elicitor a los receptores localizados en la membrana plasmática

Activación de G-proteins

Estimulación de adenilato ciclasa (AC) y PLC

Aumento de niveles de segundos mensajeros (AMPc, DAG, IP3)

acoplado a la activación de sus kinasas (PKA, PKC)

Cambios en la concentración plasmática de Ca2+ : entrada a través de

membrana plasmática o liberación desde reservorios intracelulares.

Activación de cascadas de PK que produce cambios en el estado de

fosforilación de MAPKs

Activación de la transcripción de enzimas involucradas en la síntesis

de metabolitos secundarios.

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Esquema secuencial
de los mecanismos
que ocurren en las
células vegetales en
respuesta a un
elicitor..
elicitor

Tomado de J. Zhao et al. / Biotechnology Advances 23 (2005) 283-333

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Esquema de todas las vías involucradas

Tomado de J. Zhao et al. / Biotechnology Advances 23 (2005) 283-333

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Vasconsuelo et al. (2003, 2004, 2005 y 2006)

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Elicitación con quitosano en suspensiones

celulares de Rubia tinctorum

 En este caso
particular, se vio
que sólo algunas
vías participaban
en la traducción
de señales.

Vasconsuelo et al. (2003, 2004, 2005 y 2006)

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Vasconsuelo et al. (2003, 2004, 2005 y 2006)

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Diagrama de los eventos de señalización intracelular involucrados en la estimulación de la síntesis de AQs

por estrés hidrodinámico en suspensiones celulares de R. tinctorum. Las flechas de líneas sólidas indican
fuertes evidencias de participación de las vías de señalización. Las flechas de líneas punteadas indican
posibles eventos intermedios aún no dilucidados.

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Efecto de distintos elicitores sobre la

producción de metabolitos secundarios
AUMENTO EN LA
ESPECIES ELICITOR PRODUCCIÓN (VS.
PRODUCTO
VEGETALES CONTROL)

Papaver somniferum Botrytis spp Sanguinarin 26

Datura stramonium Cu/Cd Lubimin/Hidroxilubimin 260/600

Lippia dulcis Chitosan Hernandulcin 6

Ruta graveolens Rhodothula Acridons 100

Solanum eleagnifolium Alternaria spp. Solasodine 1.7

Catharanthus roseus Aspergillus niger / osmotic stress Ajmalicine/vindoline 5

D. stramonium Phytopthora megaspermum Tropane alkaloids 5

Bidens sulfureus Phytopthora spp. Polyacethyle 20-30

C. roseus vanadium Catarantine/ajmalicine 2-5

Thalicitrum rugosum Yeast extract Berberine 4-5

G. biloba T. longibra chiatum Kaempherol 10

Queratin 9

G. biloba Cu Queratin 12

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 La elicitación constituye una alternativa simple y

de gran utilidad para la obtención de mejores
rendimientos en la producción de metabolitos
secundarios.

 Además, esta estrategia puede probarse de manera

rápida y con la infraestructura y protocolos de
trabajo disponibles en laboratorios de mediana
complejidad.

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 Dentro de las limitaciones de este método pueden

mencionarse la necesidad de conocimiento detallado
de los pasos enzimáticos involucrados, y una mayor
dificultad en la purificación (debo aislar el producto
de interés de un mayor número de contaminantes).

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