LABORATORIO N° 4.
“PROTEINAS”
Generalidades
Las proteínas son polímeros de elevado peso molecular formados por una cantidad
Variable de alfa – aminoácidos. También se consideran como compuestos
constituidos por CHON. Estos aminoácidos dependiendo de las necesidades que
tiene el organismo de ellos se clasifican en esenciales y no esenciales.
Las proteínas pueden estar constituidas por dos o más cadenas polipeptídicas
unidas entre sí por medio de puentes de azufre o por fuerzas electrostáticas.
Presentan cuatro tipos se estructuras denominas: estructura primaria, secundaria,
terciaria y cuaternaria.
La estructura tridimensional que presentan las proteínas es de gran importancia y
altamente específica ya que de ella depende la actividad biológica. La pérdida de la
especificidad trae como consecuencia la inmediata perdida de la actividad biológica
y la alteración de las propiedades físicas de la molécula. Este cambio se conoce con
el nombre de desnaturalización.
Desnaturalización
Si en una disolución de proteínas se producen cambios de pH, alteraciones en la
concentración, agitación molecular o variaciones bruscas de temperatura, la
solubilidad de las proteínas puede verse reducida hasta el punto de producirse su
precipitación. Esto se debe a que los enlaces que mantienen la conformación
globular se rompen y la proteína adopta la conformación filamentosa
Ejemplos de desnaturalización son la leche cortada como consecuencia de la
desnaturalización de la caseína, la precipitación de la clara de huevo al
desnaturalizarse la ovoalbúmina por efecto del calor o la fijación de un peinado del
cabello por efecto de calor sobre las queratinas del pelo
Las reacciones químicas de las proteínas dependen tanto de su peso molecular
como de los grupos activos presentes en las cadenas laterales de los aminoácidos
que la forman.
Las proteínas tienen muchas y muy variables funciones en la naturaleza: tienen
importancia biológica que son constituyentes básicos de las membranas biológicas,
además son fuentes terciarias de energía metabólica, incrementan la velocidad de
reacciones químicas dentro de la célula, estimulan la velocidad del crecimiento y la
división celular, participan en la protección al organismo contra sustancias, células y
virus extraños y en diversos procesos sanguíneos como la coagulación, la
disolución de coágulos y el transporte de sustancias.
Reacciones de Aminoácidos y Proteínas
Existen varias reacciones coloreadas que son útiles para identificar proteínas debido
a la dificultad para aislar una proteína pura cuando se hacen pruebas de coloración,
debe tomarse en cuenta que estas pruebas son especificas para aquellos que
contienen las moléculas de proteínas.
Algunas de las reacciones cromogénicas más comúnmente empleadas se
deben a la presencia de:
Cadenas laterales de los aminoácidos aromáticos
A la naturaleza y configuración especial del enlace peptídico
A la presencia de grupos de amino terminales
Reacciones de reconocimiento
Reacción de Biuret
El reactivo de Biuret está formado por una disolución de sulfato de cobre en medio
alcalino, este reconoce el enlace peptídico de las proteínas mediante la formación
de un complejo de coordinación entre los iones Cu2+ y los pares de electrones no
compartidos del nitrógeno que forma parte de los enlaces peptídicos, lo que produce
una coloración rojo-violeta.
Reacción de los aminoácidos Azufrados
Se pone de manifiesto por la formación de un precipitado negruzco de sulfuro de
plomo. Se basa esta reacción en la separación mediante un álcali, del azufre de los
aminoácidos, el cual al reaccionar con una solución de acetato de plomo, forma el
sulfuro de plomo.
Reacción de Millon
Reconoce residuos fenólicos, o sea aquellas proteínas que contengan tirosina. Las
proteínas se precipitan por acción de los ácidos inorgánicos fuertes del reactivo,
dando un precipitado blanco que se vuelve gradualmente rojo al calentar.
Reacción xantoproteica
Reconoce grupos aromáticos, o sea aquellas proteínas que contengan tirosina o
fenilalanina, con las cuales el ácido nítrico forma compuestos nitrados amarillos
PARTE EXPERIMENTAL
Objetivos
Al finalizar el laboratorio, el estudiante será capaz de:
comprobar la presencia de proteínas como componente estructural de
algunas sustancias.
Comprobar el efecto de algunos factores sobre el funcionamiento de las
proteínas.
Materiales y Equipo
10 a 15 tubos de ensayo
Beakers de 250 ml.
1 gradilla
1 gotero de 5 ml.
Reactivos:
Reactivo de millón
Acido nítrico concentrado
Solución de Hopkins-cole
Solución de H2SO4 ( Acido Sulfúrico)
Solución de NaOH ( Hidróxido de Sodio) 0.2 N
Solución de HCL ( Acido Clorhídrico) 0.2 N
Solución de CuSO4 ( Sulfato de Cobre) al 5%
Solución de Na2CO3 ( Carbonato de Sodio)
Solución de AgNO3 ( Nitrato de Plata)
Agua destilada
Albumina de huevo (lo traerá el alumno).
Procedimiento No 1: Soluciones de proteínas y pH
La solubilidad de una proteína cambia con el pH del medio. Algunas proteínas son
solubles en agua con un pH de 7, pero se precipitan si el pH aumenta o disminuye.
Coloque separadamente 4 ml. de solución de albumina en cuatros tubos de
ensayo.
Al primero agregue 3ml. de agua, al segundo 3 ml. de hidróxido de sodio, al
tercero 3 ml. de carbonato de sodio y al cuarto 3 ml. de acido clorhídrico.
Anote los resultados:
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Procedimiento No 2: Reacciones coloreadas de las proteínas.
Existen diversas pruebas para determinar si una sustancia o una solución contiene
proteínas o productos derivados (por ejemplo: proteasas, peptonas, poli péptidos y
en algunas pruebas, aminoácidos. Estas pruebas dependen del hecho de que
ciertos grupos funcionales presentes en estas sustancias, reaccionan con un
reactivo para producir cambios en el olor y en algunas veces en la solubilidad.
A continuación se describen algunas de estas pruebas:
1. Reacción de Millón
Reactivo. El reactivo de millón se prepara disolviendo mercurio en acido nítrico.
Contiene sales de nitrato y nitrito de los iones de mercurio (I) y mercurio (II).
Procedimiento:
a. A 2 ml. de albumina de huevo colocar 5 gotas de reactivo de millón.
b. Flamear en el mechero cuidadosamente para evitar que el exceso de
calor no permita ver una reacción correcta.
¿Cuándo la reacción es positiva? Explique________________________________
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2. Reacción Xantoproteicas
Reactivo: acido nítrico concentrado HNO3
Procedimiento:
a. A 3 ml. de albumina de huevo agregue 1 ml. de acido nítrico (HNO3)
concentrado
b. Caliente en el mechero suavemente
c. Enfríe y añada una gota de solución de NaOH al 40% p/v
¿Qué coloración se obtuvo inicialmente la solución al enfriar?
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¿Qué cambios sufrió la solución al agregar NaOH al 40%?
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¿Cuándo podemos decir que la reacción es positiva?
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3. Reacción de Hopkins-cole
Reactivo. El reactivo de Hopkins-cole es una solución de magnesio en acido oxálico.
Contiene acido gioxilico.
Grupos determinados por el reactivo. El reactivo se usa especialmente para
determinar el sistema triptófano. El mecanismo de la reacción no se conoce con
exactitud.
Procedimiento:
a. A 2 ml. de albumina de huevo agregue 2 ml. de reactivo de Hopkins-cole,
mezcle bien
b. Agregue 3 ml. de H2SO4 (Acido Sulfúrico) concentrado inclinando el tubo de
ensayo para que el ácido se deslice por las paredes del tubo.
4. Reactivo de Biuret
Reactivo. Es una solución de sulfato de cobre al 0.1% de color azul pálido, que se
usa después de la reacción de hidróxido de sodio..
Procedimiento:
a. A 3ml de albumina agregue 1ml de NaOH (Hidróxido de Sodio) al 40%
mezcle bien.
b. Agregue 1 gota de CuSO4 (Sulfato de Sodio) 00.1M, agitar bien si no hay
respuesta de coloración agregue otras gotas del mismo.
Observe y anote todas las soluciones que dan positiva la reacción. Explique por
qué: ______________________________________________________________
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5. Precipitación de metales pesados.
Procedimiento
a. A 1ml de albúmina agregue 5 gotas de solución metálica CuSO4 (Sulfato de
Cobre) 5% AgNO3 (Nitrato de Plata) 1%
b. Luego agregue 5 gotas de acetato de sodio al 5% deduzca porque razón es
necesario agregar acetato de sodio.
Explique por qué es necesario que el pH de la solución sea mayor de 7 para la
reacción se produzca:
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Complete el cuadro con cada procedimiento.
NOMBRE DE LA CANTIDAD RESULTADO CONCLUSIÓN
REACCIÓN
REACTIVOS DE ALBÚMINA
Dibuje y coloree
lo observado
Reacción de Millón
Reacción de
Xantoproteicas
Reacción de
Hopkins-cole
Reactivo de Biuret
Precipitación de
metales pesados.
