UNIVERSIDAD VERACRUZANA
TÉCNICAS CITOLOGICAS 42831
QUINTERO TAMARIZ MARIA DE LOURDES
“TINCIÓN DE H&E”
OLMOS MEXICANO AYEISHA
Práctica 2. Tinción de H&E
Introducción.
La mayoría de las células y matrices extracelulares de los tejidos y órganos humanos son
incoloras. Las características morfológicas de los tejidos de interés pueden ser examinadas
con el microscopio óptico, cuando son teñidas de forma diferenciada mediante una serie de
colorantes. Los colorantes son sustancias dotadas de color que son capaces de unirse de
manera más o menos específica a las estructuras de los tejidos aportándoles color, debido a
que los tejidos poseen la propiedad de incorporar y fijar sustancias coloreadas.
Generalmente se combina más de un colorante, siendo la tinción hematoxilina-eosina la más
comúnmente utilizada en histología y esencial para reconocer diversos tipos de tejidos y
cambios morfológicos que forman la base de los diagnósticos médicos.
La metodología para el estudio de la tinción de hematoxilina y eosina se ha llevado a cabo
mediante la búsqueda de fuentes secundarias tales como libros, artículos, revistas y páginas
de internet, así como la investigación primaria de fotografías de diferentes tejidos y órganos
humanos.
Fundamento.
Método de laboratorio común en el que se usan dos tintes llamados hematoxilina y eosina
para observar mejor las diferentes partes de la célula al microscopio. La hematoxilina tiñe de
violeta azulado intenso los ribosomas, la cromatina (material genético) dentro del núcleo y
otras estructuras. La eosina tiñe de rosa anaranjado o rojizo el citoplasma, la pared celular, el
colágeno, el tejido conjuntivo y otras estructuras que rodean y sostienen la célula. La tinción
con hematoxilina y eosina ayuda a identificar diferentes tipos de células y tejidos, y a obtener
información importante sobre las características, la forma y la estructura celular de una
muestra de tejido. Se usa para el diagnóstico de enfermedades como el cáncer. También se
llama tinción H y E.
La hematoxilina tiñe de violeta azulado intenso los ribosomas, la cromatina (material genético)
dentro del núcleo y otras estructuras. La eosina tiñe de rosa anaranjado o rojizo el citoplasma,
la pared celular, el colágeno, el tejido conjuntivo y otras estructuras que rodean y sostienen la
célula.
La tinción con hematoxilina y eosina ayuda a identificar diferentes tipos de células y tejidos, y a obtener
información importante sobre las características, la forma y la estructura celular de una muestra de
tejido.
Aprendizaje esperado.
La finalidad general es comprender la tinción de hematoxilina y eosina, técnica común
empleada en histología que juega un papel crítico en el diagnóstico e investigación de los
tejidos y órganos humanos.
Los principales objetivos del trabajo son los siguientes:
a) Distinguir los distintos tipos de enlace entre el tejido y colorante.
b) Indicar los componentes fundamentales de la tinción de hematoxilina y eosina y
explicar su función en la tinción.
Material, equipo y reactivos.
Reactivo:
Hematoxilina
Eosina amarillenta
Carbonato de litio
Agua destilada
Alcohol 100%
Alcohol 96%
Solución ácida 3%
Xilol Cantidad
Equipo:
Microscopio Cantidad
Material:
Pinzas
Portaobjetos
Cubreobjetos
Guantes estériles
Cubetas
Técnica.
1. Eliminación del exceso de parafina: Se puede utilizar xilol o Hemo –D, sumergir por
3-5 minutos.
Tras la preparación de una sección de parafina, todos los elementos se infiltran y
rodean con cera de parafina, que es hidrófoba e impermeable a los reactivos acuosos.
La mayoría de los componentes celulares y tisulares no tienen color natural y no son
visibles. El primer paso para realizar una tinción H&E es disolver toda la cera con xileno
(un disolvente hidrocarbonado).
2. Rehidratación de la muestra: Sumergiendo la muestra en distintas concentraciones
de alcoholes (etanol) en orden descendente (100°, 90°, 70°). En todos los casos por 7
minutos. Esto es para eliminar el xileno, para luego enjuagar con agua. La muestra
ahora está hidratada para que los reactivos acuosos penetren fácilmente en las células
y los elementos tisulares.
3. Coloración nuclear con hematoxilina: la muestra se sumerge por 6-10 minutos en
una bandeja que contiene hematoxilina. El tiempo de exposición depende del tamaño y
grosor de la muestra.
La muestra ahora se tiñe con una tinción nuclear (color morado) como la hematoxilina
de Harris, que consiste en un colorante (hematoxilina oxidada o hemateína) y un
mordiente o agente aglutinante (una sal de aluminio) en solución
4. Completar la tinción nuclear “azulado”: Después de aclarar en agua del grifo, la
sección se vuelve azul mediante el tratamiento con una solución débilmente alcalina.
Este paso tiñe la hematoxilina de un color azul oscuro. Ahora se puede enjuagar y
comprobar la sección para ver si los núcleos están correctamente teñidos y muestran el
contraste adecuado y para evaluar el nivel de tinción de fondo.
5. Eliminar el exceso de tinción de fondo (diferenciación): En la mayoría de las
ocasiones, cuando se emplea hematoxilina de Harris, se requiere un paso de
diferenciación (distinción) para eliminar la tinción de fondo no específica y mejorar el
contraste. Se utiliza un alcohol ácido débil. Después de este tratamiento, se requiere de
nuevo el proceso de azulado y enjuagar a fondo. Los métodos de tinción que incluyen
un paso de distinción o diferenciación se denominan tinciones “regresivas”.
6. Coloración con eosina: Se sumerge la muestra por 5 minutos en la bandeja de
eosina. La sección se tiñe ahora con una solución acuosa o alcohólica de eosina
(dependiendo de la preferencia personal). Esto tiñe muchos elementos no nucleares en
diferentes tonos de rosa.
7. Deshidratación de la muestra: Se vuelve a pasar por las bandejas de alcoholes
(etanol), pero esta vez en orden ascendente. (70°, 90°, 100°).
8. Clarificación de la muestra: Se expone al xilol por 5-10 minutos y se seca para sellar
de forma definitiva.
Observaciones con fotos o dibujos.
Imagen I. Tejido epitelial y conectivo con H&E
Conclusiones.
La Tinción de Hematoxilina-Eosina emerge como una herramienta esencial en la investigación
biológica y médica. Proporciona una visión detallada de la morfología celular y tisular,
permitiendo la identificación de patologías y contribuyendo al avance del conocimiento en
áreas como la anatomía patológica y la histología. La comprensión de esta técnica sienta las
bases para investigaciones más avanzadas y contribuye al diagnóstico preciso de
enfermedades basado en el análisis microscópico de las muestras.
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