UNIVERSIDAD DEL VALLE DE PUEBLA

LICENCIATURA: QUIMICO FARMACOBIÓLOGO

1M

ALUMNA: HELEN ABRILL DACOSTA RUIZ QF17059

MATERIA: MICROBIOLOGÍA

PRACTICA:

• ESTERILIZACIÓN EN AUTOCLAVE.

• PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO.

OBJETIVO:
Acondiciona material y equipo para desarrollar la habilidad en el manejo y
acondicionamiento de la autoclave para realizar los análisis microbiológicos.
INTRODUCCIÓN:
Es un equipo diseñado con el fin de eliminar, de forma confiable, los microrganismos
presentes en los objetos y materiales a utilizar en actividades de diagnóstico,
tratamiento o investigación. A nivel de laboratorio permite esterilizar material,
cultivos y soluciones que no formen emulsiones con el agua y que no se
desnaturalicen a temperaturas mayores a 100 °C. Los materiales y elementos se
esterilizan con los siguientes fines:

1. Preparar el equipo para ser utilizado en cultivos bacteriológicos: tubos de en-

sayo, pipetas, cajas de Petri, etc., con la finalidad de evitar que se encuentren
contaminados.

2. Preparar elementos utilizados en la toma de muestras (todos deben estar

esterilizados)

3. Esterilizar material contaminado.

La autoclave es un instrumento que crea una atmósfera de sobrepresión útil para

destruir organismos formadores de esporas con un tiempo de exposición mayor a
15 minutos.
Hay autoclaves de diversos tamaños y es conveniente mencionar las siguientes
ventajas y desventajas:
Ventajas:
• Rápido calentamiento y penetración.
Destrucción de bacterias y esporas en corto tiempo.
No deja residuos tóxicos.
Hay un bajo deterioro del material expuesto.
Económico.
Desventajas:
No permite esterilizar soluciones que formen emulsiones con el agua.
Es corrosivo sobre ciertos instrumentos metálicos.

Instrucciones antes de operar el equipo:

1. Asegúrate de que todas las conexiones de tubería se encuentren bien apretadas
para evitar el derrame de líquidos.
2. No agregues ácido al agua ya que podría producirse una reacción violenta.
3. Utiliza anteojos, guantes, bata y botas.
Asegúrate de que exista una ventilación adecuada y sigue las instrucciones en la
etiqueta del contenedor.
5 para evitar un shock eléctrico siempre debes desconectar la línea de poder que
alimenta al componente eléctrico.
6. Asegúrate de que el equipo esté conectado al servicio eléctrico de acuerdo con
los códigos eléctricos locales y nacionales.

Es conveniente mencionar algunas problemáticas que se pueden presentar durante

el funcionamiento de la autoclave, así como sus causas probables y soluciones
SEÑALES CAUSA PROBABLE PRUEBA Y SOLUCIÓN
Goteo • Destilador sucio • Inspecciona el
• Impurezas evaporador y
volátiles en el limpia como se
alimentador del requiera Reduce el
agua fluido de agua para
el voltaje del
condensador.
Contaminación • Destilador sucio • Elimina el exceso y
pirogénica (por • Derrama en el lava como se
temperatura elevada) u condensador requiera. Prueba el
orgánica de destilado. • Contaminación de condensador o
agua destilada reemplaza si se
requiere.
• Prueba en el
condensador fugas
y reemplaza si es
necesario.
Inspecciona las
 partes
sospechosas y
limpia el fluido si
requiere
limpiado biológico
Goteo en capacidad de • Exceso en la • Inspecciona y
destilado escala de limpia como se
calentado requiera.
• Voltaje bajo • Revisa si el voltaje
• Fuga de válvula es menor al
• Calentadores indicado en el
dañados diagrama de
alambrado

• Notifica al técnico
• Asegúrate de la
válvula de
drenado.
Salida de vapor de • Baja proporción • Reajusta la válvula
condensador de fluido de agua de escape.
fría • Revisa la presión
• Exceso en la de agua fría.
escala de • Inspecciona el
condensador calentador por
• Alto voltaje escala.
• Inspecciona el
voltaje.
• Cierra el
destilador.
Inmediatamente
notifica al técnico.
Salida de agua de • Derrame de • Prueba el
condensador. condensador condensador por
• Línea tapada de fugas.
destilado • Inspecciona las
• Alta concentración líneas de destilado
de sólidos en el • Asegúrate de que
evaporador el concentrador
esté ajustado
apropiadamente y
que el drenado sea
aún más frecuente.
 MATERIAL Y EQUIPO
• Papel estraza
• Cinta testigo
• Algodón
• Tubos de ensayo
• Cajas Petri
• Pipetas volumétricas
• Autoclave con termómetro

PROCEDIMIENTO

INICIO

Forrar material con papel Girar la perilla de control

estraza y cinta testigo. de medio apagado

Abrir tapa del autoclave Abrir válvula de seguridad

Esperar a que el
Girar los seis seguros
manómetro marque ceros
de presión
Sacar la canastilla
Abrir tapa y sacar
Verter agua hasta la material
segunda marca de llenado No debe bajar de la
Revisar el nivel del agua
Encender autoclave en Primera marca de mínimo
calor mínimo Desconectar la clavija

Colocar el material a Abrir la llave de desagüe

esterilizar
Lavar el interior del
Cerrar la tapa con los 6 dispositivo
seguros
El papel estraza y la cinta
Revisar que la válvula de Retirar con cuidado el
seguridad este cerrada material de la autoclave Testigo deben estar

Marcar la temperatura de Húmedos y presentar

FINAL
120°C en termómetro Franjas de color negro.

Tomar 15 min para

desconectar

Terminar tiempo de
esterilizado
OBSERVACIONES

Al momento de meter el material a esterilizar, se tuvieron que considerar dos

constantes, tiempo y temperatura, se debía tener mucha precisión y cuidado de
ambas, ya que, a cualquier descuido, la autoclave podría tener fallas en cuanto a
la expulsión de la presión que se emite dentro.
 FORRADO DEL MATERIAL:
(para pipetas) (para cajas Petri)

INICIO INICIO

Cortar papel estraza Cortar papel estraza

2x30cm 22x23 cm

Acomodar la pipeta en Colocar la caja en el

forma diagonal papel

Envolver firmemente Doblar el papel a la

mitad

Doblar el papel Envolver la caja

sobrante

Dejar en los extremos

Si excede papel, cortar papel

Formar pequeños
Asegurar que este de
triángulos
forma correcta

Pegarlo por la parte

Pegar un trozo de cinta contraria
en cada extremo
Colocar cinta en forma
de cruz
FINAL

FINAL

CONCLUSIONES
En esta practica se logro aprender el uso correcto de la autoclave para la
esterilización, es de suma importancia esta técnica pues cuenta con la destrucción
de todas las bacterias, incluidas sus esporas, sin alterar significativamente sus
características.
PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO

Objetivo:

Alcanzar la habilidad de preparar adecuadamente y en condiciones de esterilidad

el medio de cultivo agar.

Introducción:

Los medios de cultivo son una mezcla de nutrientes que, en concentraciones

adecuadas y en condiciones físicas óptimas, permiten el crecimiento de los

microorganismos. Estos medios son esenciales en el Laboratorio de Microbiología

por lo que un control en su fabricación, preparación, conservación y uso, asegura

la exactitud, confiabilidad y reproducibilidad de los resultados obtenidos.

En los laboratorios de microbiología se utilizan diferentes tipos de medios de

cultivo que pueden ser preparados en forma líquida o en forma sólida. Usualmente

para preparar un medio sólido, se parte de un medio líquido al que se le añade un

agente solidificante como el agar, la gelatina o la sílicagel.

Los medios de cultivo se pueden clasificar de acuerdo a la naturaleza de sus

constituyentes en:

• Medios naturales o complejos: constituidos por sustancias complejas de origen

animal o vegetal, las que son usualmente complementadas por la adición de

minerales y otras sustancias. En ellos no se conocen todos los componentes, ni

las cantidades exactas presentes de cada uno de ellos.

• Medios definidos o sintéticos: son los medios que tienen una composición

química definida cuali y cuantitativamente. Generalmente se usan en trabajos de

investigación. De acuerdo al uso del medio de cultivo, éstos se clasifican en:

• Medios de enriquecimiento: son medios líquidos que favorecen el crecimiento de

un tipo de microorganismo en particular. Permiten aumentar el número de

microorganismos de ese tipo. Usualmente contienen una o más sustancias

inhibidoras del crecimiento de los microorganismos con excepción de los que se

quieren cultivar.

• Medios selectivos: son parecidos a los de enriquecimiento, se diferencian por ser

medios sólidos y están diseñados para el aislamiento de microorganismos

específicos.

• Medios diferenciales: son medios que contienen indicadores de productos

derivados de la actividad microbiana de los microorganismos. No contienen ningún

tipo de sustancia con actividad antimicrobiana. Permiten revelar características

fisiológicas de los microorganismos.

Los medios de cultivo se pueden preparar en el laboratorio a partir de cada uno de

sus constituyentes básicos, o por simple rehidratación de productos asequibles

comercialmente (medios de cultivo deshidratados). Generalmente se prefiere el

uso de los medios de cultivo deshidratados porque, además de simplificar el

trabajo, con ellos se tiene mayor probabilidad de obtener resultados reproducibles.

Para su preparación se deben tener en cuenta los siguientes aspectos:

• Prepararlos sólo a partir de productos que provengan de fabricantes o

proveedores que suministren productos de calidad.

• Utilizar agua destilada o desmineralizada con una calidad microbiológica y

fisicoquímica adecuada.

• Utilizar materiales de vidrio bien lavados y enjuagados con agua destilada o

desmineralizada.

• Controlar el tiempo y la temperatura recomendada durante su esterilización.

Nunca se deben exceder las condiciones señaladas por el fabricante.

ALMACENAMIENTO DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

Los medios de cultivo deshidratados se deben almacenar en envases sellados

bajo las condiciones que señale el fabricante. Generalmente se almacenan en un

lugar fresco (entre 15 y 25°), con poca humedad y protegidos de la luz solar

directa. Nunca se deben almacenar cerca de autoclaves, hornos, ni otra fuente de

calor o vapor.

Los medios de cultivo deshidratados son higroscópicos. Cuando los envases de

estos medios de cultivo deshidratados son abiertos para su uso inicial, se debe

tener la precaución de cerrarlos tan pronto como sea posible y mantenerlos bien

cerrados para prevenir la entrada de humedad. La absorción de agua produce

cambios de pH, formación de grumos, decoloraciones del polvo, etc., lo cual indica

que deben ser descartados porque pueden haber sufrido cambios químicos o

estar contaminados.
Una vez que el medio de cultivo ha sido preparado y esterilizado, puede

almacenarse a temperatura ambiente por un periodo máximo de 2 semanas

protegido de la luz, o por periodos mayores a 12 -15ºC. Sin embargo,

almacenados bajo refrigeración entre 2 y 8°C se prolonga la vida útil de los

mismos, (nunca por debajo de 0ºC porque se destruye la estructura del gel). Los

medios de cultivo se deben mantener en recipientes bien cerrados para evitar su

deshidratación y cuando se usa tapón de algodón, se debe colocar por encima

una envoltura de papel.

Otro punto importante a tomar en cuenta, es que cada lote de medio de cultivo

preparado debe pasar por un riguroso proceso de control de calidad, en donde se

determinan sus propiedades fisicoquímicas (apariencia, pH, etc.) y microbiológicas

(esterilidad y promoción de crecimiento) verificando que cumplan con los

requisitos de calidad establecidos y por ende demostrar que son aptos para su

uso.

FUNDAMENTO

La preparación adecuada de un medio de cultivo nos permite disponer de los

nutrientes y condiciones necesarias para favorecer el crecimiento de los

microorganismos en el laboratorio.
PROCEDIMIENTO
INICIO

Suspender 50g en 1L de
agua

Calentar con agitación

suave

Diluir bien el polvo

Hervir por 1 minuto

Esterilizar en autoclave

Enfriar a temperatura
ambiente

Vaciar en cajas Petri.

Se recomienda probar el
desarrollo microbiológico
con cepas control

FINAL
OBSERVACIONES