2023

PROYECTO FINAL
¿QUE DICE TU MICROBIOTA?

Curso: 6to Química

Alumnos: Araya Leonel, Murciano Julieta, Ponce Santiago, Savall Valentín, Searez Jeremías
INTRODUCCIÓN

Desde diversas perspectivas, los seres pluricelulares dependemos en gran medida de las actividades
metabólicas de la microbiota tanto como de la obtención de oxígeno del entorno. El metabolismo y la
transformación de alimentos y sustancias extrañas, la síntesis de vitaminas, el equilibrio orgánico, el desarrollo
del cuerpo, la salud mental, la regulación del sistema inmunológico y la protección contra patógenos, todos
estos aspectos están intrínsecamente relacionados con nuestra microbiota (Gilbert y Neufeld, 2014). Esta
microbiota es un sistema complejo de funciones tan cruciales como las de órganos internos, como el hígado
(Possemiers et al., 2011).

Los primeros pasos hacia la diversidad ecológica microbiana tienen lugar en el momento del nacimiento,
cuando estos microorganismos compiten por colonizar las superficies corporales expuestas al entorno. Este
proceso de desarrollo y diversificación de la microbiota se ve influido por numerosos factores socio-
ambientales, que incluyen el modo de nacimiento, la alimentación, la exposición a patógenos y antibióticos,
así como las interacciones sociales del huésped con otros individuos dentro y fuera de su comunidad (Stewart
et al., 2018; Shepperd et al., 2018; Bokulich et al., 2016).

Aunque el tracto intestinal alberga la comunidad microbiana más extensa, densa y diversa en el cuerpo humano,
la piel y la boca también son áreas de presencia de especies microbianas distintas en cada persona y sociedad.
Al analizar las poblaciones microbianas en diferentes grupos de edad, se pueden establecer conexiones entre
la microbiota y la alimentación, el género, los hábitos de higiene y el patrón de sueño de un individuo.

Los cambios recientes en el estilo de vida de las poblaciones humanas contemporáneas, como el aumento de
las cesáreas en los partos, la disminución de la lactancia materna, la higiene excesiva, la purificación del agua,
entre otros, son factores que influyen en la microbiota (Zhernakova et al., 2016). La sociedad sanjuanina no
escapa de estas transformaciones. Por lo tanto, comprender los microorganismos que conforman nuestra
microbiota y cómo se ven afectados por nuestro estilo de vida nos permite tomar conciencia de la influencia y
relevancia que los microorganismos tienen en nuestra salud y bienestar general.

El fin de este proyecto es lograr la comprensión de la microbiota por medio de su análisis. Para ello se
seleccionó un grupo etario abarcado por personas de entre 17-18 años, se observó la composición de la
microbiota cutánea (manos) por medio de la elaboración de medios de cultivo, y se relacionaron los resultados
obtenidos con los hábitos de cada sujeto, como ejercicio físico y alimentación.
HIPÓTESIS
Algunos de los microorganismos que pueden formar parte de la microbiota cutánea de las manos de
adolescentes entre 17 y 18 años son los siguientes:

− Staphylococcus epidermidis: bacteria común en la piel, previene la colonización de patógenos más dañinos.
− Corynebacterium: diversas especies de esta bacteria pueden estar presentes en la piel, contribuyendo a la
descomposición de los lípidos y la producción de ácidos grasos.
− Propionibacterium spp: más conocida por su papel en el acné, es un componente normal de la piel que
ayuda en la regulación de aceites y grasas cutáneas.
− Lactobacillus
− Streptococcus: diversas especies de Streptococcus pueden encontrarse en la piel, participando en la defensa
inmunológica y la descomposición de carbohidratos.
− Malassezia: tipo de hongo que se encuentra en la piel y está involucrado en procesos como la
descomposición de lípidos y la respuesta inmunológica.
− Levaduras: además de Malassezia, es posible encontrar otras levaduras en la piel que desempeñan
funciones diversas, cómo Candida, Rhodotorula y Cryptococcus. De estas últimas algunos tipos son
patogenos, aunque en circunstancias normales suelen formar parte de la microbiota.

Es importante tener en cuenta que la composición exacta de la microbiota cutánea puede variar de una persona
a otra y depende de factores como la ubicación geográfica, la higiene personal, la exposición ambiental y la
genética. La investigación científica continúa revelando más detalles sobre estos microorganismos y su
influencia en la salud de la piel.

OBJETIVOS

− Identificar microorganismos que se encuentran en la microbiota cutánea, siendo estos Staphylococcus

epidermidis, Corynebacterium, Propionibacterium spp, Lactobacillus, Streptococcus, Malassezia,
Candida, Rhodotorula y Cryptococcus.
− Averiguar la abundancia relativa de los microorganismos en la microbiota cutánea y observar su
diversidad.
− Relacionar los hábitos de los sujetos muestreados con el estado de su micriobiota.
− Evaluar la higiene personal y ambiental para determinar si la presencia de microorganismos en las manos
está relacionada con la frecuencia y la calidad de la higiene de las manos, así como con factores
ambientales que puedan influir en la colonización microbiana.
PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO

Materiales
− Varilla de vidrio − Tapón
− Probeta − Espátula
− Pipeta estéril − Indicador de pH
− Vaso de precipitado de 250ml − Balanza de precisión
− Cinta papel − Autoclave
− Lápiz − Heladera
− Mechero de Bunsen

Reactivos
− Agar Sabouraud, Agar Rogosa, Agar Mac Conkey, Agar Sangre, Agar Nutritivo

− Agua destilada

− Ácido tartárico.

− Ácido acético glacial

Esquema de preparación de un medio de cultivo

Limpiar y desinfectar Colocar la cantidad de agua Pesar la cantidad de agar para

el área de trabajo destilada preparar en una probeta preparar la solución

Ajustar el pH de la Solubilizar el agar calentándolo Disolver el agar en agua destilada

solución con el mechero con ayuda de la varilla

Con la pipeta y el agar caliente, Tapar y llevar a

trasvasar a los tubos de ensayo esterilizar

Medios preparados

Cada grupo de laboratorio se encargó de preparar un medio distinto entre Agar Sangre, Agar Mac Conkey, Agar
Nutritivo, Agar Rogosa y Agar Sabouraud. Este último fue preparado por nosotros.

En una primera instancia, los medios utilizados fueron Agar Sangre, Agar Nutritivo y Agar Sabouraud. Sin
embargo, debido a un problema durante las prácticas (especificado en dificultades), tuvieron que prepararse de
nuevo. En este caso decidimos solo preparar tres medios de Agar Nutritivo y tres de Agar Sangre.

− Agar sangre (AS): permite el crecimiento de la gran mayoría de las bacterias Gram-positivas y Gram-
negativas, así como de hongos (mohos y levaduras), a partir de una base rica y complementada, ofreciendo
óptimas condiciones de desarrollo para microorganismos no fastidiosos. La conservación de los eritrocitos
 íntegros favorece la formación de halos de hemólisis nítidos, facilitando la diferenciación de algunas
especies hemolíticas.
− Agar Nutritivo (AN): medio de cultivo nutritivo no selectivo, en el que la pluripeptona y el extracto de carne
constituyen la fuente de carbono, nitrógeno y aportan nutrientes para el desarrollo bacteriano. El agregado
de cloruro de sodio mantiene el balance osmótico y el agar es el agente solidificante. Usado para propósitos
generales, para el aislamiento y recuento de microorganismos con escasos requerimientos nutricionales.

SIEMBRA DE MUESTRAS

Método utilizado

Se utilizo el sembrado por formación de estrías simples con un hisopo.

Materiales

− Cajas de Petri
− Mechero de Bunsen
− Tubos de ensayo con los medios de cultivo preparados
− Hisopos
− Baño María
− Estufa de cultivo

Esquema de procedimiento

Colocar los tubos de Luego de derretirse los medios, Destapar y aseptizar la boca de los
ensayo a baño María colocar 2 de cada uno en la gradilla tubos con la llama del mechero

Repetir con todos los tubos y cajas, Realizar lo anterior con la caja de
Tomar las muestras
y dejar solidificar a °T ambiente Petri, colocar el medio allí y tapar

Sembrar pasando el hisopo sobre la superficie del medio sólido en un Tapar las cajas de Petri, rotular con
movimiento superficial y con forma de zigzag de una punta a otra1* lápiz y llevarlas la estufa de cultivo

Toma de muestras

En un inicio se tomó muestras a personas de un rango de edad de 50-80 años,

pero debido a los inconvenientes durante las prácticas (en dificultades), se
tuvo que cambiar a personas de 17-18 años.

Las muestras se tomaron de las manos de cuatro individuos en el momento

en que se estaba realizando la práctica. Para ello se pasó un hisopo
humedecido con agua destilada por las líneas de la palma y de los dedos, que
es donde suele haber mayor concentración de microorganismos. 1
* Forma de sembrado
RESULTADOS

Microorganismos N° de
Muestra Características del espécimen Observaciones
visibles colonias

Convive con 1 gato y 1 perro;

Se utilizó agar
se alimenta principalmente de
nutritivo, los puntos
carne y harinas; consume Staphylococcus
de color amarillo son
1.5L de agua diarios; lava sus aureus
Staphylococcus
manos con agua y jabón, se Lactobacillus 30 UFC
aureus, las estrías son
baña día por medio; duerme Cryptococcus
de lactobacillus, los
6hs; no hace actividad física; Otros bacilos.
otros bacilos se deben
no requiere de medicación
a contaminación.
Varón - 17 años regular.

Convive con 1 gato, 4 perros

Se utilizó agar
y 2 loros; se alimenta
nutritivo, los
principalmente de carne y Staphylococcus
Staphylococcus
harinas; consume 1-2L de aureus
aureus se presentan
agua por día; lava sus manos Otros hongos
como puntitos 50 UFC
con agua y jabón además se Malassezia
amarillos, también se
baña a diario; duerme de 5-7 Streptococcus
ven levaduras como la
hs; no hace actividad física; Lactobacillus
Malassezia que es
Varón – 18 años no requiere de medicación
amarilla pero amorfa.
regular

Convive con 1 perro y 3

gatos; se alimenta
Si bien se pueden
principalmente de carne,
contar unidades
frutas y lácteos; consume
formadoras de
2.5L de agua por día; lava sus
- colonias (UFC), no 35 UFC
manos con agua y jabón y se
pueden identificarse
baña 6 veces por semana;
las especies que
duerme 5hs; no hace
crecieron
Mujer – 17 años actividad física; no requiere
de medicación regular.
Convive con 1 gato; se
alimenta principalmente de
harinas y verduras; consume Si bien se pueden
2L de agua diarios; lava sus contar unidades
manos con agua y jabón, y se formadoras de
- 32 UFC
baña día por medio; duerme colonias (UFC), no
6hs; hace actividad física dos pueden identificarse
veces a la semana; no las especies presentes
Mujer – 17 años requiere de medicación
regular.

Además, se prepararon dos medios de control, observándose en el correspondiente al Agar Sangre la presencia
de 28 UFC, siendo estas bacterias no identificables (ninguna está bien diferenciada). El control del Agar
Nutritivo no pudo observarse porque el medio se volcó al intentar abrir la caja de Petri (la tapa se había trabado).
DIFICULTADES

Durante la ejecución de las distintas prácticas realizadas a lo largo de este proyecto, se presentaron una serie de
problemas.

Inicialmente se realizó un mal muestreo porque la muestra se tomó dos días antes del sembrado, lo que es
demasiado tiempo de antelación. Esto permitió que la muestra se contaminara y que como resultado no se
obtuviera ningún microorganismo. Para solucionar el problema, se volvieron a realizar los medios empleando
muestras tomadas allí mismo. Sin embargo, esto último, nos obligó a cambiar de grupo etario (se pasó de adultos
mayores de 50-80 años a adolescentes de 17-18 años).

Debido a que el problema anterior sucedió en todos los grupos, se volvió a realizar la práctica pero se presentó
otro inconveniente, puesto que no todos los medios de cultivo solidificaban completamente. Esto generó
accidentes y llevó a creer que los medios estaban vencidos, pero la experiencia volvió a repetirse y fue exitosa.

Particularmente nosotros habíamos elegido el medio Sabouraud como medio principal, y debido a que en este
no creció nada tuvimos que tomar la decisión de no repetirlo.

Todas estas situaciones problemáticas originaron también un atraso en el cronograma, por lo que cuando
repetimos la experiencia por primera vez, tuvimos que preparar los medios y sembrar en la misma clase, de
modo que por falta de tiempo no se llevaron los medios al autoclave para esterilizarlos.

APRENDIZAJE

Dentro de todo lo aprendido, pueden destacarse principalmente los conocimientos adquiridos sobre la
microbiota adolescente, puesto que nosotros somos adolescentes y tener esta información es muy útil. Además,
destacan aquellos sobre medios de cultivo, utilización del material para realizar medios, toma de muestras,
técnicas de siembra, y observación de microorganismos.

CONCLUSIONES

La presencia de bacterias, hongos y levaduras, observadas durante el conteo de colonias de las muestras de las
manos de los adolescentes de 17-18 años, se debe a las siguientes situaciones:

− Microbiota cutánea natural: la piel de los seres humanos alberga una microbiota natural que incluye una
variedad de microorganismos que pueden ser beneficiosos al competir con patógenos dañinos y contribuir
a la salud de la piel. Se origina por medicamentos, deporte, alimentación, factores como la edad, etc.
− Contacto con el entorno: las manos están constantemente en contacto con el entorno, por lo que pueden
recoger microorganismos del medio ambiente. Los toques a superficies, objetos y otras personas son formas
comunes de exposición a microorganismos.
− Interacción social: interactuar con otras personas, como darles la mano o tocarlas, puede transmitir
microorganismos beneficiosos y no patógenos.
− Higiene personal: su efectividad, como lavarse las manos, puede influir en la cantidad y tipos de
microorganismos presentes en las manos. Las personas que practican una buena higiene pueden tener una
microbiota cutánea más equilibrada.
Los microorganismos presentes en las manos muestreadas son parte de la microbiota normal de la piel y no
suelen representar una amenaza para la salud, ya que son generalmente beneficiosos. Entre ellos se encuentran
Staphylococcus aureus, Lactobacillus, Cryptococcus, Malassezia y Streptococcus

Si bien los individuos analizados poseen hábitos similares, el crecimiento de los microorganismos si varió en
cada caso, lo que tiene que ver con las diferencias de los medios utilizados para cada muestra. En los cuatro
medios se contaron 30 o más colonias de microorganismos, lo que implica que estuvieron dentro del rango
necesario para que un medio de cultivo sea válido (de 30 a 300 colonias de microorganismos)

Finalmente, se puede concluir que sí se cumplieron los objetivos planteados al principio de la práctica porque a
pesar de todo sí se pudo identificar a los microorganismos, ya sean bacterias hongos o levaduras, que habíamos
planteado (todo esto gracias a los medios utilizados).