CROMATOGRAFIA
Forma más especializada de detectar una mezcla de gas y cuantificar el porcentaje y las partes
por millón de cada uno de los componentes de la misma.
El proceso de un cromatograma consiste en hacer pasar la mezcla de gas por una columna de
separación en donde los gases son separados de acuerdo a su tamaño.
Las mezclas a analizar pueden estar inicialmente en estado gaseoso, líquido o sólido, pero en el
momento del análisis la mezcla debe estar vaporizada.
En la cromatografía ocurren dos fenómenos muy importantes y que son prácticamente los
factores del proceso de separación: la adsorción y la absorción.
ADSORCION:
Es la retención de una especie química en los sitios activos de la superficie de un sólido,
quedando delimitado el fenómeno a la superficie que separa las fases o superficie interfacial.
Esta retención superficial puede ser física o química. o depende de la naturaleza de la sustancia
adsorbida, de la temperatura, de la naturaleza y estado de subdivisión del adsorbente, y de la
concentración.
ABSORCION:
Es la retención de una especie química por parte de una masa y depende de la tendencia que
tiene ésta a formar mezcla o reaccionar químicamente con la misma.
CLASIFICACION:
Fase Móvil (puede ser gaseosa, líquida ó fluido supercrítico)
Fase Estacionaria
Mecanismo de Retención (tipos de equilibrios implicados en la transferencia de los
solutos entre las fases).
Forma de Contacto entre las fases (columna ó superficie plana)
Dimensionalidad
Escala (física o gradiente)
APLICACIONES DE LA CG
La cromatografía de gases tiene dos importantes campos de aplicación.
su capacidad para resolver (separar) mezclas orgánicas complejas, compuestos órgano-
metálicos y sistemas bioquímicos, y
Como método para determinar cuantitativa y cualitativamente los componentes de la
muestra.
Para el análisis cualitativo se suele emplear el tiempo de retención, que es único para
cada compuesto dadas unas determinadas condiciones(mismo gas portador, rampa de
temperatura y flujo), o el volumen de retención.
En aplicaciones cuantitativas, integrando las áreas de cada compuesto o midiendo su
altura, con los calibrados adecuados, se obtiene la concentración o cantidad presente de
cada analito.
FUNCIONAMIENTO
La cromatografía gaseosa es una técnica muy antigua empleada para separar
físicamente sustancias presentes en mezclas complejas de compuestos fácilmente
volatilizables.
La muestra se volatiliza en el inyector y luego se introduce en la columna capilar dentro
del horno. La columna contiene recubrimientos en la pared que cumple la función de la
fase estacionaria.
La muestra volatilizada es arrastrada por un gas llamado “carrier” (fase gaseosa) que
generalmente es He o N2.
La separación se logra debido a la interacción diferenciada de los componentes de la
muestra con las fases presentes: la fase estacionaria y la fase gaseosa.
Los compuestos que presentan mayor interacción con la fase estacionaria, recorrerán
más lentamente la columna saliendo de ella a mayor tiempo de elución. Por el contrario,
los componentes con menor afinidad por la columna, como también el gas carrier,
saldrán primero de la columna y tendrán, por lo tanto, los menores tiempos de retención
(intervalo de tiempo en que el analito se encuentra en la columna).
Al inyectar, en el cromatógrafo, una mezcla de varios componentes se obtiene una
respuesta bajo la forma de una señal que varía en el tiempo, mostrando "picos" en
tiempos característicos para cada componente. La altura (o área) de cada uno de estos
picos es proporcional a la abundancia del componente involucrado.
El registro de la señal del detector en función del tiempo se denomina cromatograma de
la muestra.
TIPOS DE DETECTORES CROMATOGRAFICOS
Los detectores empleados en cromatografía gaseosa son de varios tipos, pero los dos
principales son los siguientes:
1. Detector de Conductividad Térmica (TCD).
2. Detector de Ionización de Llama (FID).
El TCD:
Es un detector universal pues mide la diferente conductividad térmica entre el carrier y
los diferentes compuestos arrastrados por el "carrier" hasta el detector. Empleando
como gas "carrier" Hidrógeno o Helio, que son gases de muy alta conductividad, es
posible detectar fácilmente todos los compuestos típicos que se presentan en las
mezclas naturales de hidrocarburos pues su conductividad térmica es mucho menor.
Este detector tiene una amplia aplicación y su uso se basa en la diferencia de
conductividad térmica del gas portador cuando circula también analito. Este tipo de
detector se denomina también catarómetro. El sensor de un catarómetro consiste en un
elemento calentado eléctricamente (resistencia).
Esta resistencia para una potencia eléctrica constante, tiene una temperatura que
depende del gas circundante.
EL FID:
Es un detector de muy alta sensibilidad sólo apto para hidrocarburos pues permite
detectar los iones de carbono que se forman durante la combustión a alta temperatura.
Sumado a la muy alta sensibilidad, este detector presenta la característica de poseer un
Factor de Respuesta(en masa) casi idéntico para todos los hidrocarburos: La misma
masa de distintos componentes produce la misma intensidad de señal en el detector.
Es uno de los detectores más usados y versátiles. Básicamente es un quemador de
hidrógeno/oxígeno, donde se mezcla el efluente de la columna (gas portador y analito
con hidrógeno). Inmediatamente, este gas mezclado se enciende mediante una chispa
eléctrica, produciéndose una llama de alta temperatura.
La mayoría de los compuestos orgánicos al someterse a altas temperaturas pirolizan y se
producen iones y electrones, que son conductores eléctricos.
Este hecho se aprovecha estableciendo una diferencia de potencial de unos centenares
de voltios entre la parte inferior del quemador y un electrodo colector situado por
encima de la llama. La corriente generada es baja (del orden de los 10-12 A), por lo
tanto debe ser amplificada mediante un amplificador de alta impedancia.
Ventajas:
Alta sensibilidad, del orden de 10-13g/s.
Amplio intervalo lineal de respuesta, 107unidades.
Bajo ruido de fondo (elevada relación señal/ruido).
Bajo mantenimiento, fácil de fabricar.
Desventajas:
Destruye la muestra (la piroliza)
LAS CARACTERÍSTICAS DE UN DETECTOR IDEAL SON:
Sensibilidad: Es necesario que pueda determinar con precisión cuándo sale analito y
cuando sale sólo el gas portador. Tienen sensibilidades entre 10-8 y 10-15 g/s de analito.
Respuesta lineal al analito con un rango de varios órdenes de magnitud.
Tiempo de respuesta corto, independiente del caudal de salida.
Intervalo de temperatura de trabajo amplio, por ejemplo desde temperatura ambiente
hasta unos 350 ± 400 ºC, temperaturas típicas trabajo.
Estabilidad y reproducibilidad, es decir, a cantidades iguales de analito debe dar salidas
de señal iguales.
Alta fiabilidad y manejo sencillo, o a prueba de operadores inexpertos.
Respuesta semejante para todos los analitos, o
Respuesta selectiva y altamente predecible para un reducido número de analitos.
EQUIPO CROMATÓGRAFO DE GASES CONSTA DE LAS SIGUIENTES PARTES:
Un sistema para alimentar un gas de transporte (gas "carrier") que recorre en forma
permanente el circuito del cromatógrafo;
Un sistema de Inyección. El Inyector es el lugar por donde se introduce una pequeña
cantidad demuestra (del orden de 1 cm3 de gas o 1 microlitro de líquido) en medio de la
corriente de gas "carrier";
Un sistema de Separación, formado por una o varias columnas que llevan a cabo la
tarea de fraccionamiento de los diferentes componentes;
Un sistema de Detección para generar una señal cuando un componente de la mezcla
completa el recorrido del sistema de separación;
Un sistema de Integración para cuantificar la señal generada por cada componente en el
Detector.
COLUMNAS:
El sistema de columnas cromatográficas constituye el corazón de todo cromatógrafo.
Es la parte más importante, pues en ella se efectúa la separación de los componentes de
la muestra.
Cada columna se diseña para aprovechar alguna propiedad de los diferentes
componentes que resulten adecuados para generar distintas velocidades de avance para
cada uno de ellos durante el recorrido de la columna.
TIPOS DE COLUMNAS EN CROMATOGRAFIA DE GASES:
Las empaquetadas o de relleno y las tubulares abiertas o capilares.
Estas últimas son más comunes en la actualidad debido a su mayor rapidez y eficiencia.
La longitud de estas columnas es variable, de 2 a 50 metros, y están construidas en
acero inoxidable, vidrio, sílice fundida o teflón.
Debido a su longitud y a la necesidad de ser introducidas en un horno, las columnas
suelen enrollarse en una forma helicoidal con diámetros de10 a 30 cm, dependiendo del
tamaño del horno.
Las columnas de relleno consisten en unos tubos de vidrio, metal (inerte a ser posible
como el acero inoxidable, cobre o aluminio) o teflón, de longitud de 2 a 3 metros y un
diámetro interno de unos pocos milímetros, típicamente de 2 a 4.
El interior se rellena con un material sólido, finamente dividido para tener una máxima
superficie de interacción y recubierto con una capa de espesores entre 50 nm y 1 m.
Para que puedan introducirse en el horno, se enrollan convenientemente.
El material de relleno ideal consiste en pequeñas partículas, esféricas y uniformes, con
una buena resistencia mecánica, para tener una máxima superficie donde interaccionar
la fase estacionaria y el analito. La superficie específica mínima ha de ser de 1 m²/g.
Como todos los componentes de columnas para GC, debe ser inerte a altas
temperaturas(~400ºC) y humectarse uniformemente con la fase líquida estacionaria
durante el proceso de fabricación.
El material preferido actualmente es la tierra de diatomeas natural, debido a su tamaño
de poro natural.
Estas especies, ya extinguidas, utilizaban un sistema de difusión molecular para tomar
nutrientes del medio y expulsar sus residuos.
El tamaño es crítico a la hora de darse el proceso de interacción del analito, y a menores
tamaños la eficacia de la columna es mejor. Pero existe el problema de la presión
necesaria para hacer circular un caudal estable de gas portador por la columna, ya que
dicha presión es inversamente proporcional al cuadrado del diámetro de dichas
partículas. Así, el tamaño mínimo para usar presiones máximas de 50 psi es de 250 a
149 m.
COLUMNAS CAPILARES SON DE DOS TIPOS BÁSICOS:
Las de pared recubierta (WCOT) y las de soporte recubierto(SCOT).
Las WCOT son simplemente tubos capilares donde la pared interna se ha recubierto con
una finísima capa de fase estacionaria. Las columnas SCOT tienen en su parte interna
una fina capa de material adsorbente como el empleado en las columnas de relleno
(tierra de diatomeas) donde se ha adherido la fase estacionaria
Las ventajas de las SCOT frente a las WCOT es la mayor capacidad de carga de esta
última, ya que en su fabricación se emplean mayores cantidades de fase estacionaria, al
ser la superficie de intercambio mayor. Por orden de eficacia, en primer lugar están las
WCOT, luego las S COT y por último las columnas de relleno.
FASE ESTACIONARIA
Las propiedades necesarias para una fase estacionaria líquida inmovilizada son:
1.Características de reparto (factor de capacidad k' y factor de selectividad ) adecuados al
analito.
2. Baja volatilidad, el punto de ebullición de la fase estacionaria debe ser al menos 100ºC mayor
que la máxima temperatura alcanzada en el horno.
3. Baja reactividad.
4. Estabilidad térmica, para evitar su descomposición durante la elución.
La temperatura es una variable importante, ya que de ella va a depender el grado de
separación de los diferentes analitos. Para ello, debe ajustarse con una precisión de
décimas de grado. Dicha temperatura depende del punto de ebullición del analito o
analitos, y por lo general se ajusta a un valor igual o ligeramente superior a él.
Para estos valores, el tiempo de elución va a oscilar entre 2 y 30-40 minutos. Si tenemos
varios componentes con diferentes puntos de ebullición, se ajusta la llamada rampa de
temperatura con lo cual ésta va aumentando ya sea de forma continua o por etapas.
Los parámetros más importantes que se obtienen de la columna son:
Tiempo de retención
Area del pico
El tiempo de retención (Tr) es el tiempo transcurrido desde la inyección de la muestra
hasta que se obtiene el máximo del pico y depende de:
1.- La sustancia analizada;
2.-Fase líquida, impregnada al soporte sólido;
3.- Temperatura en la columna (horno); y
4.-Flujo a través de la columna (gas portador).
PUERTA DE INYECCIÓN O INYECTOR:
Es el lugar por donde se introduce la muestra al cromatógrafo. Su función es vaporizar la
muestra por analizar.
El inyector se encuentra dentro de un bloque de metal calentado por resistencias eléctricas. La
muestra se introduce a través de una válvula muestreadora de gas.
La cantidad de muestra inyectada afecta principalmente al tiempo de retención (Tr) y a la
resolución. Si se inyecta la mínima cantidad de muestra se obtiene la máxima resolución.
El gas portador sirve para transportar los componentes de la muestra a través del inyector,
columna o detector y deben tener elevada pureza para no obtener ruido de fondo por
contaminación; peso molecular alto y ser inertes para que no reaccionen con la fase estacionaria.
CILINDRO DE GAS PORTADOR:
Sirve para transportar los componentes de la muestra a través de la columna. Para el detector
FID, se ha comprobado que el nitrógeno es mejor por dos razones, la sensibilidad que se obtiene
con él es casi el doble que con helio y la alta densidad del nitrógeno, reduce la expansión del
pico en la columna y aumenta la eficiencia.
El gas portador debe ser un gas inerte, para prevenir su reacción con el analito o la columna.
Generalmente se emplean gases como el helio, argón, nitrógeno, hidrogeno o dióxido de
carbono, y la elección de este gas en ocasiones depende del tipo de detector empleado.
Luego tenemos un sistema de manómetros y reguladores de flujo para garantizar un flujo
estable y un sistema de deshidratación del gas, como puede ser un tamiz molecular.
Generalmente la regulación de la presión se hace a dos niveles: un primer manómetro sesitúa a
la salida de la bala o generador del gas y el otro a la entrada del cromatógrafo, donde se regula
el flujo.
Las presiones de entrada varían entre 10 y 25 psi, lo que da lugar a caudales de 25 a 150
mL/min en columnas de relleno y de 1 a 25 mL/min en columnas capilares.
REGULADOR PARA CONTROL DE FLUJO:
Sirve para mantener constante el flujo ya que pequeñas variaciones del mismo ocasionan
grandes errores en la interpretación de cromatogramas.
REGISTRADOR:
La amplificación de la señal producida por el detector del cromatógrafo es enviada a un
registrador mecánico que traza la señal sobre un papel calibrado o un sistema computarizado.
CROMATÓGRAFO GASEOSO – ESPECTRO DE MASA
Cuando se emplea el equipo solamente como Cromatógrafo Gaseoso, se puede utilizar el
Detector por Ionización en Llama (FID) o el Detector de Conductividad Térmica (TCD) para
identificar la presencia de los componentes eluidos al salir de la columna. Las sustancias
detectadas se observan como picos en un gráfico donde se representa la señal del detector en
función del tiempo de elución (Cromatograma).
La identificación del compuesto se logra haciendo corridas con las mismas condiciones
experimentales de sus correspondientes patrones o empleando una base de datos con los tiempos
de retención de los compuestos posibles. La cuantificación se consigue calculando el área o el
alto de cada pico y realizando la curva de calibración con patrones externos. Esta identificación
es rara vez absoluta, generalmente es imprecisa o no es posible hacerla con todos los
compuestos.
En contraste con el GC, un espectrómetro de masa (MS) no es utilizado para tratar mezclas. Si
se introduce una sustancia pura en el MS, su espectro de masa permite identificarlo
unívocamente, empleando un método de ionización apropiado. Con este equipo se puede
realizar una identificación positiva de una sustancia o la confirmación de su estructura
molecular. En cambio, si se coloca una mezcla de sustancias, el espectro de masa será la suma
de todos los espectros de los compuestos presentes y será imposible identificarlos.
Por lo tanto, se tiene un instrumento (GC) muy eficiente para separar mezclas en sus
componentes, pero no es bueno para identificarlos, y otro instrumento (MS) que identifica muy
eficientemente las sustancias puras, pero no es una opción para separar las mezclas. Por ello,
existe la posibilidad de unir ambos métodos en un sistema llamado Cromatógrafo Gaseoso con
detector de Espectrometría de Masa (GC/MS) capaz de separar, identificar y cuantificar las
mezclas complejas, siempre que los componentes puedan ser volatilizados.
