Química_EETnº1-6°1°
Estudiante: 10/23
Cromatografía en papel: Separación de mezclas de indicadores de pH
Introducción
La cromatografía agrupa a un conjunto de diversos métodos de separación, que
permiten además identificar y cuantificar compuestos afines en mezclas complejas. La
característica que comparten estos métodos es que la muestra a separar se disuelve
en una fase móvil (que puede ser un gas, un líquido o un fluido supercrítico) que pasa
a través de una fase estacionaria inmiscible, fija en una columna o una superficie
sólida. Ambas fases se eligen de manera tal que los componentes de la muestra se
distribuyan de manera diferente entre las dos fases, por lo que los más afines a la fase
estacionaria se moverán más lentamente (Skoog et al, 2008). En la cromatografía en
papel, la fase móvil se mueve sobre las tiras de papel filtro. Esta técnica se puede
realizar de manera ascendente o descendente, unidimensional o bidimensional. En
caso de que los componentes de la mezcla no sean coloridos, se les puede hacer
visibles mediante el empleo de luz ultravioleta o mediante el uso de reveladores
químicos (Smith y Feinberg, 1979). El último punto alcanzado por la fase móvil en su
avance se denomina frente del disolvente y se puede usar como referencia para
expresar la distancia relativa recorrida por cada sustancia en un cromatograma. El
símbolo que se emplea para designar dicha distancia relativa es Rf y se obtiene al
dividir la distancia recorrida por el compuesto desde el origen entre la distancia que
migró el disolvente.
Objetivos
El estudiante separará los componentes de una mezcla, observará el corrimiento
cromatográfico de un compuesto puro y en mezcla, y reafirmará el concepto de
migración relativa de una sustancia.
Materiales y reactivos.
Papel para cromatografía (Filtro)
Frasco de boca ancha de 15 cm de alto y 7 cm de diámetro
Probeta 10 mL
Caja de Koplin 1
Pipetas graduadas (10-3-2-5 mL)
capilares 1 propipeta
Rojo congo
Rojo de fenol
Azul de bromofenol
n-butanol
Ácido acético glacial
Agua
Procedimiento
1. Prepare las muestras de indicadores en una concentración de 1.0 % p/v (se sugiere
preparar 10 ml para todo el grupo). Emplee como disolvente NaOH 0.010 M.
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2. Prepare 10.0 mL de la fase móvil (6.0 mL de n-butanol:1.5 mL de ácido acético
glacial: 2.5 mL de agua). Coloque en el fondo del frasco 4.0 mL de la fase móvil.
3. Aplique calor en el centro de un capilar hasta que esté al rojo vivo y estírelo.
Corte el capilar así como las puntas para obtener dos pipetas pequeñas con las que
aplicará las muestras.
4. Corte una tira de papel filtro, de 5.0 cm de ancho y 10.0 cm de alto. Marque, con un
lápiz, una línea a 0.5 cm del inicio del papel y distribuya los cuatro puntos donde se
aplicarán las muestras de forma equidistante (a 0.5 cm de separación
aproximadamente), de manera tal que se tendrán 4 orígenes.
5. Aplique en cada uno de los tres primeros orígenes, una gota pequeña de diferente
indicador. En el cuarto origen, coloque la mezcla de los tres indicadores.
6. Coloque la tira de papel, con los indicadores, en el frasco que contiene la fase móvil,
cerciórese de que la fase móvil no esté por encima del sitio donde se encuentran las
muestras.
Figura 1. Cromatografía en papel. Se muestra el procedimiento para realizar este tipo
de cromatografía.
7. Cierre el frasco y deje que corra la muestra hasta que la fase móvil este a un cm de
distancia de la parte final del papel.
8. Retire la tira de papel del frasco y señale con lápiz el frente del disolvente.
9. Mida la distancia entre el origen y el frente del disolvente.
10. Mida la distancia entre el origen y el centro de cada mancha coloreada.
Con base a la información obtenida del cromatograma:
1. Calcule los valores de Rf para cada uno de los componentes. Exprese los
resultados con dos cifras decimales.
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2. Compare los Rf de los tres indicadores obtenidos cuando corren
individualmente con los determinados cuando están en una mezcla.
3. ¿Cuál de los compuestos presentes fue más afín con la fase móvil?
4. ¿Cómo esperaría los valores de Rf de los componentes si la fase móvil tuviera una
mayor proporción de acido acético?
Cuestionario
1. ¿Qué es la cromatografía? ¿Para qué sirve?
2. ¿Qué tip0os de cromatografía hay?
3. ¿Qué es la fase movil?
4. ¿Cómo se calcula el RF?¿Que es?
5. ¿Qué es el RX?
6. Se desea separar una muestra que contiene varios aminoácidos. ¿Qué agente
revelador emplearía para conocer la posición de los componentes?
