Dade® Actin® Reactivo de cefaloplastina

activada
ACTIN

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Campos de aplicación
Suspensión de cefalina de cerebro de conejo con activador plasmático para la determinación
del tiempo de tromboplastina parcial activada (aPTT) y otros procesos de coagulación basados
en un reactio de tromboplastina parcial activada.

Significado diagnóstico
La determinación del tiempo de tromboplastina parcial activada (aPTT) es una prueba de
chequeo global1,2 la cual se utiliza básicamente para la evaluación del sistema endógeno de la
coagulación, pero que igualmente indica una deficiencia funcional grave de los factores II, V, X
o del fibrinógeno. La determinación del aPTT es además una prueba reconocida3-6 para
controlar la eficacia de la terapia con heparina no fraccionada, en donde la prolongación del
tiempo de coagulación es proporcional al nivel de heparina. En pacientes bajo una terapia con
anticoagulantes orales se espera igualmente una prolongación del aPTT, ya que en estos
pacientes los niveles circulantes de los factores II, VII, IX y X están disminuidos. La existencia
de sustancias inhibidoras no específicas, como sustancias similares al anticoagulante lúpico1,7,
pueden ocasionar una prolongación del aPTT; sin embargo, este efecto es variable y por lo
general se va a atribuir, ante todo, a la composición del reactivo de aPTT utilizado.
Resumiendo, se puede decir que la determinación del aPTT es una prueba de chequeo de gran
valor clínico, con grandes posibilidades de aplicación para el diagnóstico de alteraciones de la
coagulación y para el control de las terapias de pacientes con tendencia a las hemorragias o a
la trombosis.

Principio del método

La incubación del plasma con una cantidad óptima de fosfolípidos y un activador de superficie
conduce a la activación de los factores del sistema endógeno de la coagulación. Al añadir los
iones de calcio se desencadena el proceso de coagulación. A continuación, se mide el tiempo
transcurrido hasta la formación del coágulo.

Reactivos
Nota: ACTIN puede utilizarse en analizadores de coagulación automáticos.
Siemens Healthcare Diagnostics pone a su disposición Guías de Referencia (hojas de
aplicación) para varios analizadores de coagulación. Las Guías de Referencia (hojas de
aplicación) contienen información específica sobre el manejo de los analizadores y la
realización del ensayo que puede ser diferente de la proporcionada en estas Instrucciones de
uso. En ese caso, la información contenida en las Guías de Referencia (hojas de aplicación)
reemplaza a la proporcionada en estas Instrucciones de uso. Por favor, consulte también el
Manual de Instrucciones del fabricante del equipo.

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Contenido del envase comercial

ACTIN , REF B4218-1

10 x 2 mL, ACTIN , Dade® Actin® Reactivo de Cefaloplastina activada

ACTIN , REF B4218-2

10 x 10 mL, ACTIN , Dade® Actin® Reactivo de Cefaloplastina activada

Composición
Dade® Actin® Reactivo de cefaloplastina activada: Cefalina (extracto obtenido de cerebro
de conejo y deshidratado) en 1,0 x 10-4 M de ácido elágico, con tampón, estabilizadores y
agentes de conservación. No existen valores estándar disponibles para la actividad de la
cefalina de cerebro de conejo.
Advertencias y Medidas de Seguridad
Sólo para uso diagnóstico in-vitro.

Preparación del reactivo

El ACTIN se debe mezclar con cuidado invirtiéndolo (entre 5 y 8 veces) antes de utilizarlo.
Estabilidad y almacenaje
Después de utilizarlo, guarde el recipiente cerrado a 2 a 8 °C. Guárdelo sin abrirlo a 2 a 8 °C,
ACTIN se puede utilizar hasta la fecha de caducidad del etiquetado. Una vez abierto, el reactivo
permanece estable durante 7 días a 2 a 15 °C. No congelar. Si se deja colocado el reactivo en
posición vertical, se puede formar un depósito verde compuesto de ácido elágico y lípidos.
Antes del uso, mézclelo invirtiéndolo. Evite la contaminación con plasma.
Encontrará información sobre la estabilidad dentro del equipo para los distintos analizadores
de coagulación en las Guías de Referencia (Hojas de Aplicación).
Indicios de deterioro: Desviación de los valores normales del laboratorio para la
determinación del plasma normal o de los controles.
Materiales adicionales necesarios
Solución de cloruro de calcio (CaCl2) 0,025 mol/L
Plasma control N o Dade® Ci-Trol® nivel 1 como control para el intervalo normal
Plasma control P o Dade® Ci-Trol® nivel 2 o Dade® Ci-Trol® nivel 3 como control para el
intervalo patológico/terapéutico
Dade® Ci-Trol® Heparina control bajo
Dade® Ci-Trol® Heparina control alto
Para la extracción de sangre, usar citrato sódico (0,11 o 0,13 mol/L o bien al 3,2 o al 3,8 %) o
un sistema de extracción de sangre existente en el mercado
Agua destilada o desionizada sin agentes de conservación
Tubos de plástico
Pipetas para la medida exacta de 0,1 mL
Analizadores de coagulación (véase “Analizadores”)

Extracción y preparación de la muestra

Mezclar nueve partes de una muestra de sangre del paciente recién extraída con una parte de
citrato sódico (0,11 o 0,13 mol/L o bien al 3,2 o al 3,8 %). En el mercado pueden adquirirse
tubos con vacío que contienen el anticoagulante deseado y pueden usarse con precaución en
los estudios de coagulación. Para estudios especiales se recomienda la extracción con
jeringuilla.
Centrifugar las muestra de sangre lo antes posible una vez realizada la extracción durante un
mínimo de 15 minutos a 1 500 x g y a temperatura ambiente. Almacenar en un tubo cerrado a
temperatura ambiente.

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Si el análisis se efectúa inmediatamente, el plasma se puede dejar con el sedimento de

eritrocitos. De no ser así, se deberá separar el plasma. Separar el plasma con una pipeta de
plástico y pasarlo a un tubo de plástico. No conservar en hielo. El plasma no heparinizado debe
analizarse en un plazo de cuatro 4 horas a partir de la extracción.
El plasma que contiene heparina no fraccionada debe centrifugarse en un plazo de una hora a
partir de la extracción, conservarse a temperatura ambiente y analizarse en un plazo máximo
de 4 horas. El plasma pobre en plaquetas puede congelarse a ≤ −20 °C durante un máximo de
2 semanas en un congelador que no cree escarcha. El plasma congelado debe descongelarse
rápidamente a 37 °C, mezclarse con cuidado y analizarse de forma inmediata. Las muestras no
deben permanecer a 37 °C más de 5 minutos. Consulte los documentos H21‑A5 del CLSI8 para
obtener información detallada sobre la preparación y el almacenamiento de las muestras.

Procedimiento
Prueba manual:
Precalentar la solución de cloruro de calcio a 37 °C
Precalentar a 37 °C 0,1 mL de reactivo ACTIN durante un minuto. (Mezclar antes de usar.)
Pipetear en tubos de coagulación de la siguiente manera:
Muestra Muestra de control

ACTIN (precalentado) 0,1 mL 0,1 mL

Plasma 0,1 mL -
Plasma control - 0,1 mL
Mezclar bien. Incubar a 37 °C durante 3 minutos.

Solución de cloruro de calcio precalentada 0,1 mL 0,1 mL

A la vez que se agrega el CaCl2, accionar cronómetro, mezclar
bien. Comprobar la coagulación a partir de los 20 segundos.

Nota: No se recomienda un tiempo de incubación de más de 5 minutos, pues se puede

producir una pérdida de los factores V y VIII.
El tiempo óptimo de precalentamiento para la activación debe ser fijado por cada laboratorio
dependiendo del sistema de ensayo utilizado.
Monitorización de la terapia con heparina no fraccionada mediante la determinación del
aPTT
Para el control de la terapia con heparina por medio de la determinación del aPTT se deben
tener en cuenta los factores que pueden influir en el resultado de la prueba. A continuación,
están resumidas algunas advertencias generales importantes.
A. El tiempo de la extracción es importante, puesto que el tiempo in-vivo media de la
heparina no fraccionada es de aproximadamente 1,5 horas5. La heparina aplicada posee
una acción inhibidora inmediata de la coagulación, la cual disminuye también
rápidamente. Este efecto se observa claramente en cuanto se aplican inyecciones
intravenosas aisladas.
B. El anticoagulante utilizado para la extracción de la sangre puede alterar los resultados de
la prueba.
C. Por agregación o por daño de las plaquetas puede ser liberado el factor 4 de los gránulos
alfa plaquetarios, que neutraliza la heparina. Para evitar este tipo de procesos in‑vitro, las
muestras deben ser extraídas cuidadosamente. Dado que se conoce que la baja
temperatura desencadena la agregación de las plaquetas y la liberación del factor 4, las
muestras para el estudio con heparina deben ser centrifugadas a temperatura ambiente.
D. El control de la terapia con heparina no fraccionada mediante la determinación del aPTT
depende del tiempo de análisis. Los retrasos en el procesamiento de la muestra pueden

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ocasionar prolongaciones en la determinación del aPTT, razón por la cual las muestras
deben ser procesadas lo antes posible.
E. En plasmas que contienen heparina puede producirse un alargamiento del tiempo de aPTT
debido a un aumento del tiempo de activación por contacto. Es fundamental que el
tiempo óptimo de activación por calentamiento de la mezcla de plasma con ACTIN siga
unas normas estrictas9.
F. Ya que las diferentes metodologías (p. ej., manual, foto-óptica, etc.) poseen una
sensibilidad a la heparina diferente, se debe evitar el cambio del método utilizado.
G. Para encontrar los valores del aPTT específicos del paciente, se debe determinar en la
medida de lo posible el valor básico del paciente antes de empezar el tratamiento y
compararse con el intervalo normal propio del laboratorio.
H. Diversos estudios han demostrado que la calidad de la heparina no fraccionada obtenida
de diversos orígenes o fabricantes se desvía de las especificaciones estimadas
inicialmente. La reactividad in-vivo varía en función de la heparina aplicada, del
metabolismo del paciente y de otros medicamentos utilizados al mismo tiempo5,6.
I. Ya que el aPTT puede variar dependiendo de las técnicas de trabajo, métodos,
instrumentos, lotes de reactivo y de la heparina utilizados, cada laboratorio debe
determinar su propio intervalo terapéutico o verificarlo cada vez que se modifique alguno
de los parámetros mencionados anteriormente. Esto se puede llevar a cabo mediante la
determinación simultánea de aPTT y de la concentración de heparina en muestras de
pacientes sometidos a un tratamiento con heparina. Por medio de un análisis de regresión
de los datos se puede establecer una curva de dosis-respuesta y el intervalo de aPTT
correspondiente a una concentración de heparina de 0,3 a 0,7 U/mL (determinada por una
prueba de inhibición del factor Xa)4-6.
Control de calidad interno
Rango normal: Dade® Ci-Trol® nivel 1 o Plasma control N
Rango patológico: Dade® Ci-Trol® nivel 2 o Dade® Ci-Trol® nivel 3 o
Plasma control P
Monitorización de heparina: Dade® Ci-Trol® Heparina, control bajo y alto
Se deben medir dos controles (uno en el intervalo normal y otro en el intervalo patológico/
terapéutico) al comienzo de cada serie de pruebas, con cada cambio del frasco de reactivo y
por lo menos una vez durante una jornada de trabajo de 8 horas. El material de control debe
prepararse y procesarse del mismo modo que las muestras de pacientes. Cada laboratorio
debe establecer sus propios intervalos de confianza para los controles. Este intervalo se basa
normalmente en ± 2 a ± 2,5 desviaciones estándar (DE) del valor medio del control. Si los
valores de los controles se encuentran fuera del intervalo de confianza, se deben comprobar
los controles, los reactivos y el analizador. Antes de informar de los resultados de los
pacientes, se recomienda documentar todos los pasos seguidos con el fin de identificar y
eliminar el problema. Para cada nuevo lote de reactivos o de controles se deben definir nuevos
intervalos de control.

Resultados
Los resultados de las pruebas del tiempo de tromboplastina parcial activada deben darse como
aPTT en segundos y se deben comparar con el intervalo normal propio del laboratorio para la
determinación del aPTT. Se recomienda informar de los resultados del paciente junto con el
intervalo de normalidad del laboratorio. Los valores de los controles del sistema de pruebas no
se deben utilizar en lugar de un intervalo de normalidad. Además de esto, cuando solamente
se informan valores elevados del aPTT, son posibles interpretaciones erróneas, ya que un valor
bajo del aPTT también puede estar indicando anomalías en el sistema de coagulación del
paciente.

Limitaciones del Procedimiento

La determinación del aPTT comprende el proceso completo de la coagulación, desde la
activación por contacto hasta la formación de fibrina y es, por tanto, más susceptible a las

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variaciones que otras pruebas individuales específicas. Por esta razón, el control y el uso del
aPTT están sometidos a limitaciones especiales. El control de las condiciones de las muestras
de plasma es de gran importancia. Hay experimentos que demuestran que las muestras sin
congelar sufren una descomposición más rápida. Se deben evitar volúmenes de plasma muy
pequeños (antes de realizar la determinación) ya que se pueden presentar cambios fisiológicos
dependientes del valor del pH y dichos cambios pueden provocar la descomposición de los
componentes plasmáticos del sistema de coagulación de la sangre.
Hay que señalar que las pruebas de aPTT se pueden ver afectadas por varios fármacos de
administración común. Se tiene constancia de un descenso de la determinación del aPTT en el
tratamiento con estrógenos conjugados en varones y en la administración de anticonceptivos
por vía oral en mujeres10,11. Se ha observado un aumento del aPTT en la administración de
difenilhidantoína, heparina, warfarina, naloxona y agentes radiográficos12,13. Las dosis
terapéuticas de hirudina u otros inhibidores de trombina pueden prolongar los tiempos de
coagulación14.
Los medicamentos antibacterianos lipoglicopéptidos (como la oritavancina o la telavancina)
pueden interferir con los ensayos basados en el TTPA. Consulte las instrucciones de uso de los
respectivos medicamentos.
Además, la elección de un anticoagulante (es decir, citrato frente a oxalato) y el estado de la
muestra (p. ej., hemolizada, lipémica, administración parenteral, etc.) pueden afectar a los
resultados6,15,16.
El último caso se da especialmente en las mediciones del aPTT con equipos ópticos. Una
deficiencia en los factores de la coagulación, que ocasionaría una prolongación del tiempo de
coagulación, puede quedar enmascarada debido a la existencia de un nivel elevado de algunos
de los factores de la coagulación. Igualmente, debido a la existencia de intermediarios activos
que tienen la tendencia a acortar el tiempo de coagulación, se pueden enmascarar estados
que en otro caso podrían ocasionar una prolongación del aPTT. Una deficiencia de grado ligero
o moderado de diferentes factores puede sumarse y ocasionar una prolongación del aPTT. Si
se obtienen resultados anormales imprevistos, deberán realizarse otros estudios de
coagulación adicionales para determinar el origen de la anormalidad.
La acción de la heparina como anticoagulante está relacionada con su habilidad de actuar en
unión con cofactores del plasma sobre distintos aspectos del sistema de la coagulación, lo que
finalmente conduce a un retraso de la formación de fibrina (ver “Monitorización de la terapia
con heparina no fraccionada mediante la determinación del aPTT”).
Siemens ha validado el uso de los reactivos en varios analizadores para optimizar el
rendimiento del producto y cumplir con las especificaciones del mismo. Las modificaciones
definidas por el usuario no están garantizadas por Siemens dado que pueden afectar al
rendimiento del sistema y a los resultados del ensayo. Es responsabilidad del usuario validar
las modificaciones realizadas a estas instrucciones o el uso de los reactivos en analizadores
distintos a los incluidos en las hojas de aplicaciones de Siemens o en estas instrucciones de
uso.
Los resultados de esta prueba deberán interpretarse siempre de acuerdo con la historia clínica
del paciente, la sintomatologia clínica y otras observaciones.

Valores Esperados
Los intervalos de referencia varían de un laboratorio a otro, dependiendo de la población
atendida y de la técnica, el método, el equipo y el lote de reactivos utilizados. Por lo tanto,
cada laboratorio debe establecer sus propios intervalos de referencia o verificarlos cuando se
modifique una o varias de las variables mencionadas. En un estudio con sujetos
aparentemente sanos con un lote concreto de ACTIN se obtuvieron los datos siguientes:

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Mediana 90 % intervalo de referencia (segundos)

(segundos)
Percentil 5 Percentil 95

111 sujetos Sistema SYSMEX CA-1500 26,6 22,7 31,8

111 sujetos Sistema BCS® 26,1 22,8 31,0

Para otros colectivos, como por ej., pacientes pediátricos, se debe determinar, en cada caso, su
propio intervalo de referencia.
Nota: Según los documentos C28-A2 del CLSI (citado en H47-A)17,18 se puede aplicar una
estimación paramétrica (media ± 2 DE). La aceptación de esta estimación (Distribución normal
de Gauss) debe, sin embargo, comprobarse.

Características Específicas del ensayo

Los estudios de precisión realizados con los métodos enumerados dieron en el intervalo
normal una desviación estándar (DE), que corresponde a un coeficiente de variación (CV)
menor del 5 %. Se han realizado estudios adicionales que demuestran que la reproducibilidad
de determinaciones de aPTT por duplicado de una misma debe ser como máximo igual al 4 %
en el intervalo de normalidad si todo el proceso se ha realizado correctamente.

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Actin, BCS, Ci-Trol y Dade son marcas comerciales de Siemens Healthcare Diagnostics.
SYSMEX es una marca comercial de SYSMEX CORPORATION.
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USA.)

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