SINTESIS Y
MADURACIÓN DEL
RNA
Mauricio Ramírez Castrillón
Biología molecular aplicada a la medicina
LA TRANSCRIPCIÓN
➢ Formación de RNA tomando el DNA como molde.
➢ Enzima RNA POLIMERASA (Transcriptasa).
➢ RNA pol Lee una hebra de DNA y polimeriza una hebra de RNA
complementario.
➢ Síntesis de RNA: 5’ 3’
➢ Molde: Solo una de las 2 hebras de DNA
➢ RNA recién trascrito Pre – RNA
“Maduración”
Proceso parecido, pero diferente, con la
replicación
Algunas diferencias entre ellas son:
• La cadena formada está compuesta de ribonucleótidos (ARN).
• RNA polimerasa no necesita cebador o primer.
• El ARN no permanece unido al ADN molde después de ser sintetizado
(permite varias transcripciones).
• La transcripción es menos precisa que la replicación 1 error en cada
10.000 ribonucleótidos añadidos.
Proceso parecido, pero diferente, con la
replicación
• La transcripción es selectiva, solo ocurre en genes...
• Hay secuencia señal de inicio y finalización.
Promotor?
Enhancer?
Cap
Señal poli A
Exon
Intrón
UTR?
Vamos a dibujar un gen
Labster 2020 procariota!!
RNA:
¿Conocen otros tipos de
RNA ribosómico (rRNA)
ARN?
RNA de transferencia (tRNA)
RNA mensajero (mRNA)
Procariotas: mRNA Único RNA que no requiere
modificaciones postranscripcionales, son leídos
directamente en la síntesis de proteínas.
Eucariotas:
Pre – mRNA Intermediarios en el transporte de
información desde el DNA ribosoma síntesis de proteínas.
RNA POLIMERASA
➢ Enzima muy grande (~500 KD en E. coli), formado por 4
subunidades
➢ Forman un complejo llamado: Holoenzima
¿Cuantas RNA
polimerasas diferentes
hay?
Existen 3 clases de genes transcritos
por 3 ARN pol diferentes
ARN Pol Ubicación Producto
ARN pol I Nucleolo ARNr
ARN pol II Nucleoplasma ARNm
ARNr 5S,
ARN pol III Nucleoplasma
ARNnp,
ARNt
FUNCIONES DE LA RNA POLIMERASA
1. Localiza en el DNA los centros de iniciación
2000 promotores en E. coli
2. Desenrolla un tramo de DNA DNA de hebra sencilla.
3. Selecciona el NTP correcto y cataliza la formación del enlace fosfodiester.
4. Localiza las señales de terminación de la transcripción.
5. Interaccionan con las proteínas activadoras y represoras que modulan la
velocidad de la transcripción.
Necesita:
Molde : DNA
Precursores activados: ATP, GTP, UTP y CTP
Ion metálico divalente: Mg++ o Mn++
No requiere: Cebador
presenta: Actividad correctora
INICIO DE LA TRANSCRIPCIÓN:
✓ Inicia en los centros promotores del DNA molde.
✓ Promotores: 2 tramos de secuencias comunes al 5’ del punto de
iniciación:
❖ Sec. -10 (TATAAT) A -10 nucleótidos del primer
transcrito.
❖ Sec. -35 (TTGACA) A -35 nucleótidos del primer
transcrito.
5’ ----------------------TTGACA------------------------TATAAT----------------1er sitio de
~35 (6pb) ~10 (6pb) iniciación
✓ La hebra molde de DNA es complementaría del RNA transcrito.
La subunidad sigma capacita a la RNA Polimerasa para reconocer
los centros promotores:
❖ Contribuye mediante la disminución de la afinidad de la RNA
polimerasa por regiones inespecíficas del DNA
❖ Posibilita que la RNA polimerasa reconozca las secuencias promotoras
❖ Sigma Polipéptido esencial para iniciar la transcripción
❖ Sigma + RNA POL Inicio de la transcripción.
❖Los promotores de todos los genes tiene la misma secuencia (promotor)
Secuencia consenso.
❖Superenrollamientos (+) Girasa (facilita la transcripción)
La RNA POL desenrolla casi 2 vueltas del DNA molde antes de iniciar la
síntesis de RNA
RNA POL desenrolla 17 pb promotores.
Formación del primer enlace fosfodiéster
Secuencias Intensificadoras:
Estimulan la transcripción en centros de
iniciación alijada millones de bases.
La actividad de muchos promotores aumenta
debido a secuencias intensificadoras.
Factores de transcripción y otras proteínas que se unen a estas
secuencias reguladoras se pueden considerar como contraseñas, dando
acceso a la RNA POL a genes específicos.
LAS CADENAS DE RNA COMIENZAN
CON pppG O CON pppA Y SE
SINTETIZAN EN SENTIDO 5’ 3’
➢ RNA recién sintetizado lleva una señal:
inicio de su síntesis: pppG o pppA
➢ No es necesario un cebador
ELONGACIÓN DE LA CADENA DE RNA
➢ Inicia después de la formación del primer enlace fosfodiéster
➢ Perdida del factor sigma (σ).
Núcleo de la enzima se une más fuerte al molde de DNA
Se Forma:
✓ BURBUJA DE TRANSCRIPCIÓN : RNA pol, DNA y RNA nuevo.
✓ Hélice hibrida: RNA recién sintetizado y DNA molde (12pb)
✓ Velocidad de síntesis: 50 nucleótidos por segundo
IMPORTANTE:
RNA Pol: Edición pirofosforolítica o hidrolítica (Gre)
Fidelidad: transcripción < replicación
Tasa de error: 1 fallo / 104 bases
BURBUJA DE TRANSCRIPCIÓN DURANTE LA
ELONGACIÓN
17 pb
Rebobinado
Desenrollamiento
12 pb
Animación
TERMINACIÓN DE LA TRANSCRIPCIÓN
➢ Cesa la formación de enlaces fosfodiéster
➢ Se disocia el híbrido RNA-DNA
➢ Se rebobina la región fundida del DNA
➢ Se libera la RNA polimerasa del DNA
Señales de terminación (stop signals)
✓ Región palindrómica rica en GC seguida de AT
Palabra
✓ o frase que
El transcrito se leede
de RNA igual
estehacia
DNAdelante que hacia
palindrómico es
atrás. Ej. Arenera, radar, seres
autocomplementario
anita lava la tina
✓ Formación de una Horquilla seguida de 4 o más U
“horquilla-oligo U”
Una horquilla de RNA seguida de varios residuos de Uridina
provoca el fin de la transcripción.
El sigma vuelve al núcleo de la enzima para buscar
un nuevo promotor.
Terminación independiente de
Rho
La proteína RhO
terminación de la
transcripción
RhO (P): detecta señales de
terminación adicionales que no son
reconocidas por la RNA polimerasa
(P) Se une al RNA
Rompe la hélice DNA-RNA
TRANSCRIPCIÓN DE mRNA EN EUCARIOTAS:
Transcripción y traducción:
Separación temporal y espacial: Permite regular la expresión génica
contribuyendo a la riqueza de forma y funciones.
Eucariotas Regiones con diferente capacidad
transcripcional.
Zonas no funcionales que no son activas a la transcripción
TRANSCRIPCIÓN DE mRNA EN EUCARIOTAS:
DNA + histonas núcleosomas
movilizarse para hacer el DNA accesible a la RNA POL
Las histonas Represoras de actividad génica
Heterocromatina: Cuando los genes situados en ella no
se transcriben proteínas no usadas en
ese tejido.
Superenrollada (tej. diferenciado)
No funcional (condensada
excepto en embriones)
Eucromatina: Transcribe en tejido diferenciado.
Relajada
Activa (DNA separa a cada lado
del núcleosoma – RNA POL)
Elementos principales de la transcripción
FACTORES TRANSCRIPCIONALES
1. BASALES 2. INDUCIBLES
• Determinan el sitio de • Función reguladora.
iniciación por unión a
ARN Pol. • Unión a P. distales.
• TF I, II y III. • Controlan la
transcripción.
• Responsables de la
expresión de genes que
se expresan • Requieren estimulo.
constitutivamente.
¿Cuáles son las proteínas adicionales que requiere la RNA pol y para qué?
5´ Cap
• Sec. líder (sec. consenso): 5’pipiATTCPu Transcripción
m-7-G(5’)pppA adición enzimatica de 7-metil-guanosina
CAP (protege al mRNA) citoplasma
Poliadenilación
MADURACIÓN DEL mRNA EUCARITICO (Splicing):
El mRNA eucariotico sufre un proceso de acortamiento.
Maduración: mRNA inmaduro mRNA maduro:
Elementos principales de la transcripción
Gen clase II
Región
codificante
Splicing
Definición:
Remover segmentos (intrones) del transcrito primario
y unir los segmentos codificantes (exones)
Categorías
1. Cis – splicing (RNA –Splicing, Splicing)
Segmentos (exones) de la misma molecula de RNA son
unidos.
2. Trans – splicing
Un segmento (SL RNA) de una molecula de RNA es
fusionado con otra molécula de RNA.
Ejemplo: Trypanosomes, Leishmania
Eucariotas Corte y empalme de exones
SPLICEOSOMAS Partículas de ribonucleoproteína
Los puntos de empalme de los pre-mRNA están situados en los
extremos de los intrones.
La secuencia de un intron comienza con GU y termina con AG.
Espliceosoma Reconoce la sec. de los intrones
Long. de los intrones es de 50 – 1000 nucelótidos.
RNA nucleares pequeños (snRNAs) de los espliceosomas
catalizan el empalme de los precursores de mRNA.
snRNA RNAs pequeños nucleares.
scRNA RNAs pequeños citoplasmáticos.
snRNA + scRNA Partículas peq. de ribonucleoproteína
nuclear snRNPs
ESPLICEOSOMAS snRNPs + Pre - mRNA
ESPLICEOSOMA:
Corta primero el intron por el extremo izq. (GU), se EXON 1 EXON 2
dobla y y forma un enlace interno entre la G (GU) y INTRON
la A (AG) formando un lazo el cual es cortado y los
exones se unen = mRNA.
Empalme entre exones:
Corte del enlace fosfodiester entre exon 1 y el
intron
El OH de A Blanch point
Ataca el fosfato terminal del intron
enlace fosfodiester Lazo
El 3’-OH (Exon 1) ataca el enlace fosfodiester situado
entre el intron y el Exon 2
Exones 1 y 2 se unen
ESPLICEOSOMA:
snRNPs U1
GU
(Centro de empalme)
U2 Centro de ramificación
A
+ Complejo U4 – U5 – U6
Espliceosoma completo
snRNA U2 y U6:
centro catalítico
U2, U5 y U6:
Se van con el
intron cortado.
SPLICING
¿Qué ventajas puede tener un
ALTERNATIVO intermediario (mRNA) entre la
información (DNA) y la síntesis
de proteínas?
Corte y empalme
alternativo del gen de
la tropomiosina
Proteína reguladora de la
contracción muscular
REMOCIÓN DEL INTRON DE LA SECUENCIA
CODIFICADORA
Características del proceso:
RNA juega un papel clave en la dirección del alineamiento
de los centros catalíticos.
Las proteínas dependientes de ATP inducen la liberación
de las ribonucleoproteínas de los pre-mRNA y los
intrones.
“No todos los genes se traducen a proteínas”:
Los genes (DNA) que transcribe el rRNA y el tRNA
UNIDAD TRANSCRIPCIONAL
Unidad transcripcional rDNA:
Procariotas: rRNAs (16S, 5S y 23S) + tRNA
Eucariotas: rRNAs (18S, 5.8S y 28S) RNA POL I
rRNA 5S RNA POL III
La “Unidad de Transcripción de rDNA”:
El largo transcrito es ITS ITS
un precursor el cual
posee los tres rRNAs:
ETS ETS
Procesamiento:
Cortes endonucleótidicos
Metilación de 2’-hidroxil
La unidad de
transcripción completa
incluye:
2 espaciadores no
codificantes : ITS
2 espaciadores no
codificantes: ETS
La “Unidad de Transcripción de rDNA”:
La “Unidad de Transcripción de rDNA”:
El número de copias del rDNA es
conocido en muchos organismos.
Cada unidad de transcripción del
rDNA dentro del cluster es
separada por espaciadores
intergenicos: IGS
IGS:
2 kpb Levaduras
30 kpb Mamíferos.
La secuencia dentro de los IGSs es
marcadamente diferente de una
especie a otra.
