BIOLOGÍA CELULAR Y MOLECULAR CUARTO MEDIO 2023
GUÍA DE LABORATORIO. EXTRACCIÓN DE ADN EN FRUTAS
Materiales Reactivos
Un plátano o cualquier fruta blanda 10 mL de alcohol etílico
Un plato o vidrio de reloj 50 mL de agua destilada
Un tenedor 5 mL de jabón líquido o champú
Una cuchara pequeña
Un tubo de ensayo
Un vaso pp de 150 mL
Una pipeta de 25 mL
Un colador
Un palillo o agitador
INTRODUCCIÓN
El Ácido Desoxirribonucleico (ADN),
constituye el material hereditario de un
individuo. En él se encuentran las
instrucciones que deben seguir las células
para construir un organismo nuevo y
mantenerlo vivo. Todas las células que
forman un individuo contienen una copia
idéntica de ADN; sin embargo, cada una de
Figura 1. Plátano sin cáscara dispuesto sobre un plato.
ellas realiza una parte de las instrucciones
contenidas en el ADN, de ahí que haya 2. Macera el plátano con la ayuda de un
células con diferentes formas y funciones. tenedor (Fig. 2); puedes agregar una
Las células eucariotas contienen el ADN en el pequeña cantidad de agua destilada para
interior del núcleo celular. Por ello, para facilitar la maceración.
extraerlo debemos romper la membrana
celular y también la membrana nuclear. Las
células vegetales cuentan además con una
pared celular, la cual está constituida de
celulosa que le confiere rigidez a dicha
pared, que también se tiene que romper
para liberar el ADN.
La extracción de ADN se basa en la atracción
de sus cargas negativas hacia los iones
salinos, lo que permite su disolución y Figura 2. Maceración del plátano.
posterior extracción, que es lo que nos
proponemos realizar en esta práctica. 3. Vierte 50 mL de agua destilada en un vaso
pp de 150 mL, agrega dos cucharaditas de
PROCEDIMIENTO jabón líquido o champú, y media cucharadita
de sal común (cloruro de sodio). Mezcla bien,
1. Parte un plátano por la mitad y elimínale evitando formar espuma (Fig. 3).
la cáscara. Colócalo sobre un plato o un
vidrio de reloj (Fig. 1). Si lo deseas puedes
hacerlo con otra fruta de consistencia
blanda, por ejemplo fresas.
Figura 3. Mezcla de agua destilada, jabón líquido y sal.
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4. Agrega a la solución contenida en el vaso 7. Observa que una sustancia blanquecina
pp una cucharadita del plátano macerado. comienza a aparecer dentro del tubo: se
Mezcla bien durante 5 minutos, pero trata del ADN (Fig. 7).
evitando formar espuma (Fig. 4).
Figura 4. Adición del plátano macerado a la solución
contenida en el vaso pp. Figura 7. ADN formado luego de adicionar el alcohol
etílico.
5. Filtra la mezcla resultante utilizando un
colador, hasta obtener aproximadamente 5 8. Deja reposar la mezcla por unos 5
mL de filtrado. Si el proceso de filtrado es minutos, y observa que el ADN comienza a
lento, puedes ejercer un poco de presión ascender hasta la superficie del líquido.
sobre la mezcla con una cuchara pequeña
(Fig. 5). 9. Con la ayuda de una pinza delgada, de una
varilla agitadora o de un palillo puedes
extraer el ADN de la mezcla (Fig. 8)
Figura 5. Filtrado de la mezcla. Figura 8. Extracción del ADN con la ayuda de un palillo.
6. Coloca 5 mL de la solución filtrada en un Responde en tu Cuaderno:
tubo de ensayo; luego inclina ligeramente el a) ¿Cuál es la función del jabón líquido o
tubo y adiciona muy lentamente 10 mL de champú en la extracción del ADN?
alcohol etílico, deslizándolo por las paredes b) ¿Cuál es la función de la sal común en la
del tubo de ensayo (Fig. 6). extracción del ADN?
c) ¿Cuál es la función del alcohol etílico en la
parte final de la extracción del ADN?
d) ¿Qué habría pasado si se hubiese agregado el
alcohol bruscamente en la etapa final de la
extracción?
e) Además de ADN, ¿contiene otros
componentes el precipitado blanco obtenido?
f) Investiga cuáles son los componentes del
ADN.
g) Investiga cuál la estructura del ADN.
h) Investiga la importancia que tiene la
Figura 6. Adición de alcohol etílico al tubo
extracción de ADN a partir de sangre y tejidos
manteniéndolo ligeramente inclinado.
humanos.
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FUNDAMENTO TEÓRICO El ADN fue identificado en 1868 por Friedrich
Miescher, biólogo suizo, en los núcleos de las
El Ácido Desoxirribonucleico (ADN) permite a células de pus obtenidas de los vendajes
las células eucariotas de un organismo quirúrgicos desechados y en el esperma del
transmitir información con precisión de una salmón, aunque no fue reconocido su
generación a otra, ya que está presente en el descubrimiento sino hasta 1943, gracias al
núcleo de las células vegetales y animales. El experimento realizado por Oswald Avery con
ADN es una de las partes fundamentales de la bacteria neumococo, demostrando que el
los cromosomas, los cuales son estructuras ADN es el material del que están formados
constituidas por dos pequeños filamentos o los genes y los cromosomas.
brazos, que pueden ser iguales o diferentes, La primera imagen del ADN fue obtenida por
que están unidos por un punto común Rosalind Franklin mediante difracción de
llamado centrómero. Además de ADN, los rayos X, la cual sirvió de base para el
cromosomas están formados por proteínas. descubrimiento de la estructura de doble
El ADN está compuesto por cuatro hélice del ADN, en 1953, por James Watson y
nucleótidos; cada nucleótido está formado Francis Crick. La estructura del ADN es una
por tres partes: la desoxirribosa (un azúcar), pareja de largas cadenas de nucleótidos; una
un grupo fosfato y una de las cuatro bases larga hebra de ácido nucleico está enrollada
nitrogenadas, que son: citosina, adenina, alrededor de otra hebra formando un par
guanina y timina. entrelazado. Dicha hélice está formada, en
El ADN es una molécula muy grande que cada vuelta, por 10.4 pares de nucleótidos
tiende a agruparse, de allí su facilidad para enfrentados entre sí por sus bases
extraerse. Aunque se necesitan instrumentos nitrogenadas.
complejos para extraer y purificar el ADN, el
procedimiento que se plantea en esta POSIBLES OBSERVACIONES
práctica y que se realiza con frutas blandas,
permite conocer el proceso general por el Para este experimento se recomienda
que se extrae y purifica. Las frutas contienen elegir una fruta blanda para que pueda ser
células vegetales, las cuales están protegidas macerada fácilmente, tal como plátano o
por una pared celular. Esta pared se puede guineo, fresas, papaya, zarzamora, ciruelas,
destruir físicamente para exponer los entre otras. Permite que tus estudiantes
contenidos de la célula. Macerar la fruta trabajen en pequeños grupos, para que cada
permite que el contenido de las células sea uno pueda realizar la práctica con una fruta
expuesto a los agentes para su extracción y diferente. La cantidad y la calidad del ADN
separación. Dichos agentes ayudan a extraer extraído dependerá del buen trabajo que se
el ADN del núcleo y a separarlo visiblemente realice en el laboratorio; ello ayudará al
de los otros componentes. estudiantado a desarrollar sus propias
El principio de extracción de ADN se basa en habilidades.
que los iones en solución provenientes de la
sal son atraídos hacia las cargas negativas del 1.- Una variante de este experimento es
ADN, permitiendo su disolución y posterior extraer el ADN de células animales. Sin
extracción de la célula. Se empieza por lisar embargo, para esto necesitarás emplear
(romper) las células mediante la acción técnicas diferentes, debido a que será
mecánica de maceración o trituración, necesario realizar la maceración en una
vaciándose su contenido molecular en una licuadora, además de utilizar enzimas para
mezcla de agua y sal. En ese momento, la que se rompan las membranas celulares y
solución contiene al ADN y todo un surtido sea posible extraer el ADN. Si deseas hacerlo,
de restos moleculares: ARN, carbohidratos, puedes buscar el procedimiento en la
proteínas y otras sustancias en menor bibliografía.
proporción. La acción de un jabón o
detergente permite que las proteínas 2.- Esta práctica de laboratorio para extraer
asociadas al ADN, que son de gran longitud, el ADN de células vegetales puede inspirar a
se fraccionen en cadenas más pequeñas y se tus estudiantes a interesarse en la
separen de la mezcla. Sólo resta, por tanto, biotecnología y la genética, gracias a que
extraer el ADN de esa mezcla, para lo que se reforzará las clases teóricas que hayan
utiliza alcohol etílico, el cual permite que se tenido sobre las células, el ADN y la biología
precipite formando cristales blancos. molecular. Se puede extender este
experimento a subsecuentes sesiones en el
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laboratorio para observar en el microscopio,
volviéndose esta actividad aún más
intrigante.
INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
El ADN que se encuentra en los genes es un
componente de todas las células. Una vez
rotas las células, todo el material celular
queda libre, y en presencia de un jabón o
detergente se separan los componentes con
base a su solubilidad. El ADN se precipita con
alcohol y se separa del resto de los
componentes.
La extracción de ADN requiere una serie de
etapas básicas. En primer lugar, tienen que
romperse la pared celular y la membrana
plasmática, para poder acceder al núcleo de
la célula. A continuación, debe romperse
también la membrana nuclear para dejar
libre el ADN, lo que se logra gracias a la
maceración y a la acción del jabón líquido,
detergente o champú. La sal disuelta en agua
sirve como una mezcla isotónica, que
permite que sus iones en solución atraigan
las cargas negativas de la molécula del ADN.
Por último, el alcohol se utiliza para
precipitar el ADN, que es soluble en agua,
pero cuando se encuentra en alcohol se
desenrolla y precipita en la interface entre el
alcohol y el agua.
Si se agrega bruscamente el alcohol en la
etapa final de la extracción, se mezcla
rápidamente con la solución y el ADN no se
precipita, sino que se fragmenta
manteniéndose disperso en la solución
Básicamente, el precipitado blanco que se
aísla al final sólo debería contener ADN, ya
que el alcohol permite separar los demás
componentes. Sin embargo, no es
exactamente ADN puro, ya que
entremezclado con él pueden haber
fragmentos de ARN (Ácido Ribonucleico).
Para obtener ADN puro se necesita de una
técnica más precisa que incluya la adición de
enzimas que fragmenten las moléculas de
ARN, impidiendo que se unan al ADN.
Con la realización de este experimento
lograrás comprobar la presencia de ADN en
las células vegetales, utilizando técnicas
sencillas que permitan la obtención de
buenos resultados. Además, te permitirá
discutir con tus estudiantes sobre los
componentes de las células eucariotas, y
sobre la estructura, composición, estabilidad
y funciones que cumple el ADN
