FACULTAD DE QUIMICO FARMACEUTICO Y BIOQUIMICO
IDENTIFICACION BACTERIOLOGICA DE ESPUTO
IDENTIFICACIO
ESTUDIANTE: SARA REBECA SEGOVIA ALMAZAN
DOCENTE: CAROLA AYO BRIANCON
MATERIA: [Link] BACTERIOLOGÍA CLÍNICA
PRACTICA: IDENTIFICACION BACTERIOLOGICA DE ESPUTO
GRUPO: N 5
UNIVERSIDAD AUTONOMA “JUAN MISAEL
SARACHO”
TARIJA-BOLIVIA
IDENTIFICACION BACTERIOLOGICA DE ESPUTO
1) OBJETIVO:
• Realizar una correcta siembra, para obtener una buena proliferación.
• Realizar una correcta tinción de gram para lograr observar las bacterias.
2) MATERIALES:
• Microscopio • Portaobjeto • Asa de
platino
• Mechero • Piceta • Agua destilada
• Isopo • Medios de • Bandeja de
cultivo tinción
3) REACTIVOS:
• Cristal • Lugol • Alcohol
violeta acetona
• Safranina • Aceite de •
inmersión
DIA 1)
SIEMBBRA:
• Una vez que tengamos La muestra en el
laboratorio.
• Esterilizamos, un asa de platino hasta
que esté al rojo vivo Y dejamos enfriar.
• Una Vez enfriada el ansa de platino,
introducimos a la muestra y
levantamos una pequeña cantidad de
muestra (esputo).
• Y sembramos por estrellamiento en el
medio agar sangre, esterilizamos y
enfriamos el ansa realizamos el mismo
procedimiento para agar chocolate y
agar MacConkey.
• Una vez sembrado los medios de
cultivo y esterilizado el material.
• Introducimos el medio agar sangre y
agar Chocolate en una lata dónde
introducimos una vela y un algodón
empapado en agua.
• Prendemos la vela y tapamos la lata y la
llevamos a incubar a 35 °C durante 24
horas.
DIA 2
1)Colonias macroscópicas
• Al sacar los medios de cultivo de la
incubación, se pudo observar que en el
medio agar sangre y agar chocolate
hubo proliferación, ya que se notó el
crecimiento de bacterias de aspecto
blanquecino, en todo El medio.
Agar sangre. Agar chocolate. • Para poder identificar qué tipo de
bacteria es, realizamos a continuación la
tinción de gram.
2) TINCION DE GRAM:
• Con la ayuda del asa de platino
levantamos una colonia del medio EMB,
realizamos el extendido en el
portaobjeto con una gota de agua
destilada.
• Luego de realizar el extendido en el
portaobjeto, lo dejamos secar al
ambiente.
• Una vez seco el extendido se procede a
fijar la placa, pasando tres veces por
arriba de mechero de alcohol.
A)
• Agregamos el primer colorante al
extendido una vez seco y fijado.
• Cubrimos todo el extendido con cristal
violeta, dejamos por tres minutos.
• Lavamos con abundante agua.
B)
• Agregamos el Lugol cubriendo todo el
extendido y dejamos por tres minutos.
• Pasando el tiempo, lavamos con
abundante agua.
C)
• Se cubre todo el extendido con alcohol
acetona, y se deja por 15 segundos
decolorar.
• Pasando este tiempo lavamos con
abundante agua la placa.
D)
• Cubrimos la placa con safranina y
dejamos actuar por tres minutos.
• Lavamos con abundante agua.
• Dejamos secar la placa al ambiente
agregamos una gota de aceite de
inmersión y llevamos a observar al
microscopio objetivo 100X.
• Se observa la presencia de cocos y
bacilos gram (+).
3)PRUEBA DE LA
• Agregamos una gota de agua oxigenada
CATALASA aun portaobjetos y con el asa levantamos
una colonia del medio EMB, mezclamos
con el agua oxigenada.
• Dio positivo ya que hubo la formación
de burbujas.
4)SIEMBRA:
• Esterilizamos, el asa de platino,
esperamos que enfríe, cuidadosamente
levantamos una colonia del medio de
cultivo (EMB).
• Con el dedo meñique sacamos el tapón
del tubo que contiene el medio,
esterilizamos la boca del tubo a la llama
del mechero.
• Introducimos con el asa hasta la mitad
del medio de cultivo sacamos y
estriamos hasta el pico de flauta.
• Este procedimiento repetimos para todos
los demás tubos ya sea:
• LIA
• TSI
• CITRATO
• MANITOL
• Para el SIM se introduce el asa hasta la
mitad del tubo se retira sin realizar
estriamiento tapamos el tubo de ensayo.
• Una vez terminado la siembra se lleva a
incubar 35C por 24 horas.
5) AGAR SANGRE • Con la misma suspensión realizada
previamente, levantamos con una pipeta
Pasteur 2 a 3 gotas, introducimos en el
medio agar sangre y con un hisopo
extendemos por todo el medio.
• Con una pinza previamente esterilizada,
colocamos los dos antibióticos
(bacitracina, opto quina) en el medio de
cultivo agar sangre.
• Llevamos a incubar por microaerófilia,
por 24 horas a 35 C.
• En un tubo de ensayo añadimos agua
6)AMTIBIOGRAMA destilada 1 ml y añadimos dos a tres
colonias que levantamos del medio (agar
chocolate), teniendo cuidado de no
levantar con el asa parte del medio de
cultivo.
• llevamos él tuvo con la suspensión al
estar fax a leer la absorbancia de la
turbidez, a 630 nm tiene que estar en un
rango de 0.08-0,10.
• Con una pipeta Pasteur colocamos 2 a
3 gotas de la suspensión en el agar
muller-hinton y con isopo expandimos
todo el medio.
• Esterilizamos la pinza, sacamos un disco
con ayuda de la pinza y colocamos al
medio, sin tocar con la pinza el medio de
cultivo ya que contaminaríamos, la
distancia entre cada disco es de 2,5 cm.
Y así repetimos el mismo proceso con el
resto de los discos.
DIA 3:
A) INTERPRETACION PRUEBAS BIOQUIMICAS:
TSI:
• Glucosa = (-)
• Lactosa = (-)
• Sacarosa = (-)
• Formación de gas = (-)
SIM + reactivo de covacs
♦ Indol = (-)
♦ Motilidad = (+)
♦ Producción de sulfuro de
hidrogeno (+)
CITRATO:
➢ crecimiento bacteriano = (-)
MANITOL
❖ Cambio de color (-)
B) AMTIBIOGRAMA INTERPRETACION:
R I S
ANTIBITICOS
CEFIXIMA 18-20mm
5 MCG (RESISTENTE)
RIFANPICINA
5 ug 14-16mm (SENSIBLE)
CLORANFENICOL
30ug 13-17 mm (SENSIBLE)
AZITROMICINA
25 ug (Resistente) 14-18 mm
B) AGAR SANGRE
• Eb el agar sangre los antibióticos
puestos son Optoquina y Bacitracina los
cuales son resistente.
C) BACTERIA ASILADA:
BACTERIA AISLADA Stafilococus
5) RECOMENDACIONES:
• Se recomienda realizar una tinción de gram, para esta se recomienda que el extendido
sea más delgado ya que la que realizamos estuvo muy gruesa y no se pudo observar
de una correcta manera las bacterias en la placa.
• Así como también una correcta decoloración ya que hubo haber sido la falla en la
práctica realizada.
6) CONCUCIONES:
• Se concluyo de manera exitosa la practica con la identificación de bacterias, así como las
siembras y la proliferación en cada agar sembrado.
