Manual de Procedimientos en

Bacteriología Clínica

Paz Montes, América

Perozo Mena, Armindo
Piña Reyes, Eyilde
Volumen I Sandrea Toledo, Lissete
Hemocultivos y Cultivo de
Dispositivos Intravasculares
Práctica Profesional de Bacteriología
Escuela de Bioanálisis. Universidad del Zulia
Centro de Referencia Bacteriológica SAHUM
Práctica Profesional de Bacteriología. Escuela de Bioanálisis. Universidad del Zulia

Manual de
Procedimientos en
Bacteriología Clínica
Maracaibo, 2010
Volumen I: Hemocultivos y Cultivo de
Dispositivos Intravasculares

Paz Montes, América

Perozo Mena, Armindo
Piña Reyes, Eyilde
Sandrea Toledo, Lisette
 Tabla de Contenido
Tabla de Contenido ................................................................................................................. i
Lista de Cuadros.................................................................................................................... iii
Lista de Figuras ...................................................................................................................... v
Procesamiento y Toma de Muestra de Hemocultivos ............................................................ 1
Introducción .................................................................................................................... 1
Indicaciones de los Hemocultivos ................................................................................... 1
Consideraciones Generales ............................................................................................. 2
Tipo de Pacientes Atendidos por el Laboratorio ................................................... 2
Tipos de Bacteriemia ............................................................................................. 2
Métodos para la Obtención de Sangre para Cultivo .............................................. 3
Intervalo de Extracción de los Hemocultivos ........................................................ 3
Número de Hemocultivos ...................................................................................... 4
Volumen de Sangre ............................................................................................... 5
Recolección y Transporte de Hemocultivos .......................................................... 6
Procesamiento de los Hemocultivos ...................................................................... 9
Método Manual o Convencional. ........................................................................ 10
Método Manométrico. Sistema de Hemocultivo Signal® (Oxoid). .................... 11
Sistemas Automatizados. Sistema BacT/Alert .................................................... 12
Manejo de Hemocultivos Positivos ..................................................................... 13
Esquema para el Procesamiento de Hemocultivos Convencionales ................... 16
Esquema para el Procesamiento de Hemocultivos por el Método
Manométrico. Sistema de Hemocultivo Signal® (Oxoid). ................................. 17
Esquema para el Procesamiento de Hemocultivos Automatizados. Sistema
BacT/Alert® ........................................................................................................ 18
Interpretación de los resultados ........................................................................... 20
Detección de Patógenos que Fallan en Crecer en Medios Estándares y Situaciones
Especiales ...................................................................................................................... 22
Bacterias del Grupo HACEK .............................................................................. 23
Estreptococos Dependientes de Vitamina B6 (Granulicatella adjacens,
Abiotrophia adjacens y Abiotrophia defectivus) ................................................. 25
Francisella tularensis ........................................................................................... 25
Coxiella, Chlamydophila, Rickettsia y Tropheryma spp. .................................... 25
Bartonella............................................................................................................. 26
Brucella ................................................................................................................ 26
Campylobacter y Helicobacter ............................................................................ 27
Legionella ............................................................................................................ 27
Mycoplasma......................................................................................................... 28
Leptospira ............................................................................................................ 28
Mycobacterium .................................................................................................... 29
Capnocytophaga .................................................................................................. 29
Bacterias con Pared Celular Deficiente ............................................................... 29
Bacterias Dependientes de Antibióticos .............................................................. 30

i
 Control de Calidad en Hemocultivo ............................................................................. 30
Etapa Pre-Analítica.............................................................................................. 30
Etapa Analítica .................................................................................................... 31
Fase Post-Analítica .............................................................................................. 32
Bibliografía Consultada ................................................................................................ 34
Infecciones Asociadas a Catéteres y Dispositivos Intravasculares .......................................36
Introducción .................................................................................................................. 36
Clasificación de los Catéteres Vasculares Centrales .................................................... 36
Catéter Venoso Central Común (CVC) ............................................................... 37
Catéter Central Periféricamente Instalado (CCPI) .............................................. 38
Catéter de Hemodiálisis....................................................................................... 38
Catéter Tunelizado............................................................................................... 38
Factores de Riesgo para el Desarrollo de Infecciones Asociadas a Catéteres .............. 41
Número de luces .................................................................................................. 41
Características del catéter .................................................................................... 41
Lugar de inserción ............................................................................................... 41
Propiedades intrínsecas de los microorganismos ................................................ 41
Otros factores....................................................................................................... 41
Patogenia ....................................................................................................................... 42
Piel y progresión luminal..................................................................................... 42
Conexión y progresión endoluminal ................................................................... 42
Contaminación del líquido de infusión................................................................ 42
Siembra hematógena ........................................................................................... 42
Manifestaciones Clínicas .............................................................................................. 43
Etiología ........................................................................................................................ 43
Diagnóstico Microbiológico de las Infecciones Asociadas a Catéteres ........................ 44
Métodos que Requieren la Remoción del Catéter ............................................... 45
Métodos que No Requieren la Remoción del Catéter ......................................... 52
Criterios que debe Reunir el Método Ideal de Laboratorio para el
Diagnóstico de Infecciones Asociadas a Catéteres ............................................. 56
Control de Calidad en Catéteres .......................................................................... 56
Recomendaciones ................................................................................................ 56
Criterios de Rechazo de Muestras ....................................................................... 57
Cultivo de otros Dispositivos Intravasculares............................................................... 58
Cultivo de Catéteres para Nutrición Parenteral Total o Líneas de
Hiperalimentación ............................................................................................... 58
Cultivo de Puertos Subcutáneos Implantados ..................................................... 58
Bibliografía Consultada ................................................................................................ 59

ii
 Lista de Cuadros
Cuadro 1 Indicaciones para la toma de hemocultivos ............................................................ 2
Cuadro 2 Recomendaciones sobre el intervalo de tiempo y número de hemocultivos en
diferentes síndromes y condiciones clínicas .......................................................... 4
Cuadro 3 Subcultivo de Hemocultivos ................................................................................ 14
Cuadro 4 Subcultivo del Frasco Anaeróbico ....................................................................... 15
Cuadro 5 Patógenos que Fallan en Crecer en Medios Estándares de Hemocultivos ........... 23
Cuadro 6 Factores a Monitorear en el Control de Calidad de Hemocultivos ...................... 33
Cuadro 7 Clasificación de los Catéteres Vasculares Centrales ............................................ 36
Cuadro 8 Microorganismos Frecuentemente Relacionados a Infecciones por Dispositivos
Intravasculares ..................................................................................................... 44
Cuadro 9 Clasificación de los Métodos de Laboratorio para el Diagnóstico de Infecciones
Asociadas a Catéteres. ......................................................................................... 44
Cuadro 10 Informe de los Resultados. Método Semicuantitativo de Maki ......................... 47
Cuadro 11 Método Cuantitativo de Cleri ............................................................................. 49
Cuadro 12 Cultivo Cuantitativo Simplificado de Brun-Buisson.......................................... 50

iii
 Lista de Figuras
Figura 1 Toma de Muestra de Hemocultivo .......................................................................... 6
Figura 2 Medidas de Seguridad al Tomar Muestras de Hemocultivos .................................. 7
Figura 4 Botellas para Hemocultivos Disponibles para el Sistema BacT-Alert .................... 9
Figura 4 Catéter Swan Ganz ................................................................................................ 37
Figura 5 Catéter Intracath..................................................................................................... 37
Figura 6 Catéter Multilumen ................................................................................................ 37
Figura 7 Inserción de Catéter Swan-Ganz ........................................................................... 37
Figura 8 Catéter para Hemodiálisis ...................................................................................... 38
Figura 9 Catéter Broviac ...................................................................................................... 39
Figura 10 Catéter Hickman .................................................................................................. 39
Figura 11 Catéter Groshong ................................................................................................. 39
Figura 12 Catéter Quinton.................................................................................................... 39
Figura 13 Colocación de Catéter Percutáneo ....................................................................... 39
Figura 14 Catéter Infus-A-Port ............................................................................................ 40
Figura 15 Catéter Med-I-Port ............................................................................................... 40
Figura 16 Vías de Infección de un Catéter ........................................................................... 43
Figura 17 Siembra de Catéter por el Método de Maki ......................................................... 46

v
 Toma de Muestra y Procesamiento de Hemocultivos

Capítulo Procesamiento y Toma de Muestra

1 de Hemocultivos
Introducción
La detección de la bacteriemia constituye una de las prioridades del Laboratorio de
Bacteriología Clínica, dada su importancia diagnóstica y pronostica, debido a que la presencia de
bacterias en sangre puede representar una amenaza para cada órgano y dar lugar a consecuencias
tales como: shock, insuficiencia de múltiples órganos, coagulación intravascular diseminada (CID) y
muerte. El diagnóstico definitivo de la bacteriemia se establece cuando el microorganismo causal se
aísla en la sangre del enfermo y se determina su identificación y sensibilidad a los agentes
antimicrobianos, con el propósito de instaurar el tratamiento o las modificaciones necesarias a la
terapia empírica ya establecida. Por otra parte, los cultivos sanguíneos permiten, en la mayoría de las
ocasiones, la diferenciación de los casos de bacteriemia verdadera de aquellos en los que la
positividad es debida a un inadecuado procedimiento de extracción y procesamiento.

La mayoría de los microorganismos son capaces de invadir el torrente circulatorio. En la

actualidad los Gram positivos, especialmente estafilococos y enterococos, igualan o superan en
frecuencia a los Gram negativos, debido a múltiples causas, entre las que destacan la utilización de
antibióticos de amplio espectro, el uso generalizado de catéteres intravasculares y el empleo de
métodos de diagnóstico invasores. Por otra parte, el aumento de pacientes inmunodeprimidos con
tratamientos antineoplásicos o con infección por el VIH ha propiciado la aparición de bacteriemias
por agentes que en el pasado eran causa muy rara de infección.

Por todo esto, en los últimos años han ocurrido varios cambios, tales como el aumento del
número de pacientes inmunocomprometidos, la necesidad de aislar microorganismos no habituales y
la utilización de sistemas automatizados para los hemocultivos. Es por ello que el objetivo de este
manual es presentar una revisión actualizada sobre los aspectos más importantes relacionados con el
procesamiento, interpretación, informe de resultados, microorganismos y situaciones especiales, y el
control de calidad de hemocultivos.

Indicaciones de los Hemocultivos

De forma general, deben realizarse hemocultivos siempre que exista sospecha clínica de
sepsis, meningitis, osteomielitis, pielonefritis, infección intra-abdominal, artritis, infecciones graves
de la piel y tejidos blandos, neumonía, endocarditis y fiebre de origen desconocido (absceso oculto,
fiebre tifoidea, brucelosis, tularemia, etc.), siempre que sea posible antes de la administración de la
terapia antimicrobiana sistémica. Los signos de esta sospecha incluyen fiebre o hipotermia
(neonatos, ancianos), escalofríos, leucocitosis o granulocitopenia, deterioro uni o multi-orgánico de
etiología no aclarada, shock, compromiso hemodinámico de causa desconocida y combinaciones de
algunos de ellos. La extracción de hemocultivos está indicada, asimismo, en niños pequeños o
ancianos con disminución súbita de la vitalidad, ya que en estas poblaciones pueden no presentarse
los signos y síntomas típicos de la bacteriemia. El cultivo de la sangre debe complementarse con el
de otros fluidos como líquido cefalorraquídeo, orina, muestras del tracto respiratorio inferior o
líquido sinovial en pacientes con sospecha de meningitis, pielonefritis, neumonía o artritis séptica,
respectivamente.

Práctica Profesional de Bacteriología. Escuela de Bioanálisis. LUZ. 1

 Manual de Procedimientos en Bacteriología Clínica

Cuadro 1 Indicaciones para la toma de hemocultivos

 Pacientes con fiebre ≥ 38ºC o cuya temperatura sea inferior a 36ºC.
 Pacientes con leucocitosis o leucopenia.
 Pacientes con trombopenia o alteraciones de la coagulación de causa no conocida.
 Pacientes con infección focal de etiología no aclarada.
 Pacientes con deterioro uni o multi-orgánico, shock o inestabilidad hemodinámica.
 Neonatos ante la mínima sospecha de infección.

Consideraciones Generales
La recuperación de bacterias a partir de los Hemocultivos depende de varios factores:
 Tipo de pacientes atendidos por el laboratorio
 Tipo de bacteriemia
 Método de obtención de la muestra
 Intervalo de extracción de los hemocultivos
 Número de hemocultivos
 Volumen de sangre
 Los métodos o técnicas de cultivo
 Interpretación de los resultados

Tipo de Pacientes Atendidos por el Laboratorio

La incidencia de la bacteriemia depende del tipo de población estudiada (5-30 casos por
1000 pacientes hospitalizados) y puede presentarse a cualquier edad, sobre todo en pacientes con
graves enfermedades de base y en los sometidos a maniobras que alteran los mecanismos locales y
generales de defensa frente a la infección. Los focos más frecuentes de bacteriemia son el tracto
genitourinario, los abscesos, las heridas quirúrgicas, el tracto biliar y los catéteres intravasculares,
aunque hasta en un 25% de los casos el foco de origen es desconocido.

Tipos de Bacteriemia
Se define como bacteriemia la presencia de bacterias en la sangre, lo cual se demuestra por
el aislamiento de éstas en los hemocultivos. Se produce cuando los microorganismos invaden el
torrente sanguíneo y se multiplican a un ritmo que supera la capacidad del sistema reticuloendotelial
para eliminarlos. Esta invasión puede producirse desde un foco infeccioso extravascular, a través de
los capilares sanguíneos o de los vasos linfáticos, o desde un foco intravascular (endocarditis,
infección de catéteres intravenosos o arteriales).

Las bacteriemias pueden ser transitorias, intermitentes o continuas, según la forma en que
aparecen los microorganismos en la sangre. El conocimiento de las circunstancias en las cuales
ocurren los diferentes tipos de bacteriemia es útil para la planificación de los estudios diagnósticos y
la interpretación de los resultados de los hemocultivos. Sin embargo, en muchas ocasiones esta
distinción es difícil de establecer y poco práctica desde el punto de vista microbiológico. Algunas de
las situaciones clínicas relacionadas con el tipo de bacteriemia, son las siguientes:

2 Maracaibo, 2010
 Toma de Muestra y Procesamiento de Hemocultivos

Bacteriemia transitoria: debida a la manipulación de tejidos infectados, instrumentación

de mucosas contaminadas y operaciones que involucran sitios no estériles, en el curso de infecciones
sistémicas y localizadas tales como: meningitis (50-80%), neumonía (5-30%), artritis piógena (20-
70%), osteomielitis (30-50%), infecciones gonocócicas y meningocócicas (5-90%).

Bacteriemia intermitente: en pacientes con abscesos no drenados.

Bacteriemia continua: shock séptico, endocarditis bacteriana y otras infecciones

intravasculares, al principio de la evolución de infecciones tales como: meningitis, neumonía, artritis
piógena y osteomielitis, y en las primeras etapas de infecciones específicas, como fiebre tifoidea,
brucelosis y leptospirosis.

Métodos para la Obtención de Sangre para Cultivo

La venopunción es la técnica de elección. Generalmente se emplean para ello las venas del
antebrazo. La utilización de sangre arterial no ha demostrado ventajas sobre la venosa Debe elegirse
la vena de la que se extraerá la sangre, antes de desinfectar la piel. Sí el paciente tiene una guía IV
colocada, la sangre debe extraerse por debajo de ella, para evitar que la sangre obtenida por encima
esté diluida con el líquido de infusión.

La sangre obtenida a través de una derivación o un catéter vascular es menos apropiada,

porque estos dispositivos son difíciles de desinfectar por completo, por lo que se asocian a una alta
tasa de contaminación. Sí es necesario obtener sangre a través de una derivación o un catéter
vascular para su cultivo, debido a sospecha de bacteriemia relacionada al catéter, estos hemocultivos
deben ser apareados con otro cultivo de sangre obtenida por venopunción, para ayudar en la
interpretación de un posible resultado positivo.

Intervalo de Extracción de los Hemocultivos

Se considera una extracción para hemocultivo, a la sangre extraída de una única
venopunción, independientemente de los frascos en los que sea inoculada, los cuales habitualmente
son dos (uno aerobio y otro anaerobio).

La probabilidad de que el resultado de los hemocultivos positivos represente una

bacteriemia verdadera aumenta cuando la muestra se obtiene adecuadamente. Algunos estudios
sugieren que el momento óptimo para la extracción de hemocultivos es exactamente antes del inicio
de los escalofríos. Como en algunos casos este hecho es imposible de predecir con exactitud, se
recomienda que la sangre para cultivo sea extraída lo antes posible después del comienzo de la
fiebre y los escalofríos, teniendo en cuenta que las bacterias son eliminadas rápidamente de la sangre
por las células del sistema retículo-endotelial. Por esta misma razón no se recomiendan extracciones
separadas por períodos de tiempo específicos, sino por el contrario, diversos estudios han
demostrado que se obtienen resultados similares cuando se extraen los hemocultivos
simultáneamente, que cuando se extraen separados por períodos de tiempo arbitrarios durante 24
horas. En pacientes sépticos o en estado crítico, los hemocultivos deben obtenerse rápidamente antes
de iniciar la terapia antimicrobiana (menos de 1 h). Una opción aceptable es obtener, antes de
administrar el tratamiento antimicrobiano, 40 mL de sangre de una sola vez, tomando 20 mL de
cada uno de dos sitios de punción venosa diferentes (con dos agujas y dos jeringas diferentes).

Práctica Profesional de Bacteriología. Escuela de Bioanálisis. LUZ. 3

 Manual de Procedimientos en Bacteriología Clínica

Número de Hemocultivos
El protocolo de trabajo del laboratorio, debe recomendar el envío de más de un
hemocultivo por paciente, para aumentar la sensibilidad diagnóstica y facilitar la interpretación del
significado clínico de un resultado positivo. El número de extracciones considerado óptimo para la
documentación de un episodio de bacteriemia es de 2 a 3, utilizando siempre para la venopunción
lugares diferentes. De esta manera logran detectarse más del 95% de las bacteriemias.

Un mayor número de extracciones es desaconsejable desde el punto de vista costo/beneficio

e incrementa innecesariamente el trabajo del laboratorio. No obstante, en los pacientes con sospecha
de endocarditis debidas a prótesis, donde puede ser difícil interpretar el aislamiento repetido de
Staphylococcus coagulasa negativa (SCN), o en casos de endocarditis con hemocultivos
inicialmente negativos que pueden ser debidos a microorganismos de crecimiento fastidioso, puede
ser útil la disponibilidad de un número mayor de extracciones.

Sin embargo, aunque la bacteriemia asociada a la endocarditis se suele acompañar de una

baja cantidad de microorganismos en la sangre, diversos estudios demuestran que no es necesario un
número mayor de hemocultivos que el recomendado. Así:
 En pacientes con endocarditis que no han recibido antibióticos, un sólo hemocultivo
es positivo en el 90-95% de los casos y una segunda muestra establece el
diagnóstico en el 98% de los pacientes.
 En pacientes con endocarditis con tratamiento antibiótico previo, 3 extracciones de
sangre separadas, de 10-20 mL c/u, y 1 ó 2 hemocultivos más tomados al segundo
día, si es necesario, detectan la mayoría de los agentes etiológicos.
 En líneas generales, el número de hemocultivos puede incrementarse sí el paciente
está recibiendo terapia antimicrobiana para lograr una sensibilidad diagnóstica
óptima.
 En pacientes con bacteriemia sin endocarditis y sin tratamiento antibiótico previo,
ésta se detecta en el 80-92% por el primer hemocultivo, el 90-99% por los dos
primeros hemocultivos y el 99.6% en por lo menos uno de los primeros tres
hemocultivos.

Cuadro 2 Recomendaciones sobre el intervalo de tiempo y número de hemocultivos en

diferentes síndromes y condiciones clínicas
Condición o síndrome Recomendaciones
Sospecha de bacteriemia o fungemia aguda
Obtener 2 o 3 hemocultivos, uno después del otro,
primaria, meningitis, osteomielitis, artritis o
de diferentes sitios
neumonía
Inicialmente, obtener 2 o 3 hemocultivos, uno
Fiebre de origen desconocido (abscesos después del otro, de diferentes sitios. Si estos son
ocultos, fiebre tifoidea, brucelosis u otros negativos después de 24-48 h de incubación,
síndromes febriles no diagnosticados obtener 2 cultivos más, uno después del otro, de
diferentes sitios
Considerar métodos de cultivos de sangre
Sospecha de bacteriemia o fungemia con
alternativos para la recuperación de micobacterias,
hemocultivos persistentemente negativos
hongos y microorganismos fastidiosos

4 Maracaibo, 2010
 Toma de Muestra y Procesamiento de Hemocultivos

Volumen de Sangre
De todas las variables que influyen en el aislamiento de un microorganismo en un
hemocultivo, el volumen de sangre cultivada es la más importante debido al bajo número de
microorganismos presentes en la mayoría de las bacteriemias. En adultos, la mayor parte de los
recuentos realizados muestran cifras próximas a 10 UFC/mL de sangre o inferiores y muy rara vez
se superan 100 UFC/mL. En niños las cifras son muy variables. Se han descrito recuentos superiores
a 1.000 UFC/mL en bacteriemias por Haemophilus influenzae o Neisseria meningitidis y por el
contrario bacteriemias con un número muy escaso de microorganismos. Si se emplean métodos
comerciales o sistemas automatizados el laboratorio debe seguir en forma estricta las
recomendaciones específicas de cada fabricante en cuanto a los volúmenes de sangre a cultivar.

Pacientes adultos
El volumen recomendado por cada venopunción en adultos es de 10-20 mL, ya que con
volúmenes menores se ha demostrado una disminución del índice de positividad. Se considera que el
índice de positividad aumenta entre el 3-5% por cada mililitro adicional de sangre cultivada. Sin
embargo, la recomendación de elevar el volumen de sangre por extracción más allá de 20 mL no se
aplica en cierta medida por la anemia que se puede provocar al paciente y por otra parte, para
mantener la proporción de volumen sangre/medio de cultivo.

Pacientes pediátricos
En neonatos y niños, se ha señalado que la mayor cantidad de bacterias presentes en sangre
permite que con volúmenes considerablemente menores, incluso inferiores a 1 mL, se obtengan
resultados aceptables y comparables a los de los adultos. Sin embargo, algunos trabajos han
demostrado que la bacteriemia de bajo nivel es muy común en la población pediátrica y que el
volumen de sangre para detectarla debe ser proporcional al peso (al volumen de sangre total) y a la
edad. Por lo que se recomienda cultivar un volumen de sangre aproximadamente del 4,5% del
volumen total de sangre del paciente. En lactantes y niños pequeños tomar de 1- 5 mL de sangre. En
niños prematuros muy pequeños pueden ser cultivados incluso volúmenes de sangre inferiores a 1
mL.

Práctica Profesional de Bacteriología. Escuela de Bioanálisis. LUZ. 5

 Manual de Procedimientos en Bacteriología Clínica

Recolección y Transporte de Hemocultivos

Preparación del sitio para la recolección de sangre

El principal problema para la interpretación correcta de los hemocultivos es su
contaminación con la microbiota cutánea durante la extracción. Para evitarla debe realizarse la
asepsia meticulosa de la piel al momento de obtener la sangre. Se recomienda la limpieza inicial con
alcohol isopropílico al 70% seguido del uso de tintura de yodo al 1-2% o un yodóforo. El laboratorio
debe asegurarse que las personas encargadas de obtener la muestra, conozcan la importancia del
tiempo de contacto con la piel de la preparación antiséptica empleada antes de extraer la sangre. En
pacientes alérgicos a los compuestos yodados se deben realizar dos limpiezas con alcohol
isopropílico.

Pueden emplearse otros antisépticos como: peróxido de cloro y solución alcohólica de

clorhexidina gluconato al 0,5% ó al 2%. La clorhexidina tiene la ventaja de que no mancha e irrita
menos la piel, y no requiere el paso adicional de utilizar alcohol después de la venopunción. Pero al
igual que los iodóforos puede causar toxicidad en los neonatos.

Con una técnica aséptica correcta, el número de hemocultivos contaminados no debe

exceder del 3%. En general, se consideran microorganismos contaminantes Staphylococcus
coagulasa negativa, Bacillus spp., Propionibacterium acnes, Corynebacterium spp. y otros
microorganismos que forman parte de la microbiota de la piel, siempre que su presencia no se repita
en más de una muestra por paciente.

Figura 1 Toma de Muestra de Hemocultivo

Venopunción
Después de seleccionar el sitio para la venopunción, colocar el torniquete. Inmediatamente
limpiar primero de manera vigorosa de adelante hacia atrás con alcohol isopropílico al 70% por 30
segundos, seguido por limpieza con tintura de yodo del 1-2% o clorhexidina al 2% por 30 segundos;
si se emplean compuestos iodóforos deben aplicarse en círculos concéntricos y dejar actuar de 1,5 a
2 minutos antes de insertar la aguja es importante dejar secar el compuesto yodado para que ejerza
su acción oxidante. Una vez seca el área seleccionada introducir la aguja en la vena con el bisel
hacia arriba. Si la vena se palpa nuevamente, se debe repetir la desinfección de la piel y usar nuevos
guantes y aguja.

Una vez obtenida la cantidad de sangre deseada (un mínimo de 10 mL de sangre, 5 mL para
cada frasco, en los adultos; y la mayor cantidad posible en los niños, a ser posible una cantidad
mínima de 2 mL, 1 mL para cada frasco), retirar el torniquete, colocar un algodón estéril sobre el
sitio de inserción mientras se sostiene la aguja en su lugar. Se retira la aguja e inoculan los frascos.
Limpiar el sitio de la venopunción con alcohol al 70% para remover el remanente de yodo, para

6 Maracaibo, 2010
 Toma de Muestra y Procesamiento de Hemocultivos

evitar la irritación de la piel y se coloca un vendaje adhesivo en el sitio de la punción. Como ya se

indicó deben extraerse en el menor intervalo de tiempo posible después de la aparición de los
síntomas 2-3 hemocultivos a cada paciente usando diferentes lugares para la venopunción.

Inoculación de los frascos

Previamente a la extracción de la sangre deben limpiarse los tapones de los frascos de
hemocultivo con alcohol al 70% y yodo povidona, los cuales se dejarán secar para evitar su entrada
en el interior del frasco, al inocular la sangre. Se ha demostrado que la introducción de pequeñas
cantidades de antiséptico en el frasco puede inhibir el crecimiento bacteriano. Los frascos deben
inocularse inmediatamente atravesándolos con la aguja en posición vertical (antes del primer minuto
después de la obtención) para prevenir la coagulación de la sangre en la jeringa.

Inocular primero el frasco anaerobio, evitando la entrada de aire, pinchando para ello a
través del tapón de goma (no debe destaparse el tapón de goma que viene sellado) y luego inocular
el frasco aerobio. Debe tenerse la precaución de sujetar bien el émbolo de la jeringa para que la
presión del vacío que existe en el frasco no aspire rápidamente más cantidad de sangre de la
adecuada, ni tampoco el aire que pudiera quedar en el fondo de la jeringa. Puede emplearse el
sistema Vacutainer® para la extracción de sangre para los hemocultivos, teniendo la precaución de
colocar la sangre en los frascos de hemocultivos antes que en cualquier tubo para otros fines, ya que
se puede contaminar la aguja del sistema Vacutainer® y por consiguiente los hemocultivos extraídos
posteriormente.

Una vez inoculados los frascos se deben invertir suavemente varias veces para mezclar la
sangre y el medio de cultivo. Limpiar nuevamente el tapón con alcohol al 70% y yodo povidona y
dejar secar, para eliminar cualquier resto de sangre que pudiese quedar. Las jeringas y agujas deben
ser desechadas en un contenedor resistente a los pinchazos que pueda ser autoclavado. Limpiar la
superficie de los frascos con desinfectante. Rotular cada frasco con una etiqueta adhesiva en la que
se registre el Nº de historia, nombre del paciente, ubicación, hora y fecha de la toma de la muestra y
el número de extracción realizada (1a, 2ª ó 3ª), teniendo la precaución, sí se utilizan frascos
comerciales, de no tapar la etiqueta del código de barras del frasco. Colocar los frascos en un
contenedor que pueda ser sellado con seguridad para transportarlos al laboratorio en bolsas plásticas
individuales. Desechar los guantes en contenedores que pasen por el autoclave y lavarse las manos
inmediatamente con agua y jabón.

Figura 2 Medidas de Seguridad al Tomar Muestras de Hemocultivos

Práctica Profesional de Bacteriología. Escuela de Bioanálisis. LUZ. 7

 Manual de Procedimientos en Bacteriología Clínica

Envío de los frascos al laboratorio

Todos los frascos de hemocultivos deben ser etiquetados con la información apropiada para
su identificación y acompañados por una orden escrita con todos los datos (Debe llenarse una boleta
para cada hemocultivo):
 Nombre del paciente acompañado de otra identificación (fecha de nacimiento o la
edad, el número de historia).
 Hora y fecha de recolección.
 Nombre, código o identificación de la persona que tomó la muestra y el nombre del
médico que hizo la solicitud.
 Diagnóstico del paciente.
 Tratamiento antimicrobiano que está recibiendo.
 Tipo de análisis que se requiere (hemocultivo convencional o para microorganismos
de crecimiento lento).
 Debe registrarse para cada frasco el sitio específico de recolección (ejemplo: de cual
vena, línea arterial, catéter venoso, etc.).
 Debe indicarse sí el volumen de sangre obtenido no fue el adecuado.
 También se debe registrar el número de teléfono del control de enfermería en el que
se encuentre ingresado el paciente para poder informar los resultados preliminares
de los hemocultivos en caso de positividad. Si los hemocultivos se extraen en el
Servicio de Emergencias o son enviados de otras instituciones hospitalarias, debe
anotarse el número de teléfono donde puedan informarse los hemocultivos
positivos.

Transporte hasta el laboratorio

Los frascos de cada paciente con su debida identificación y sus respectivas boletas se
introducirán en una bolsa de plástico y se enviarán inmediatamente al laboratorio. Sólo deben
mantenerse a temperatura ambiente durante cortos períodos de tiempo para no afectar la posterior
recuperación de los microorganismos. Si no pueden ser enviados inmediatamente al laboratorio se
incubarán de 35 a 37ºC hasta el momento de llevarlos al laboratorio. Los hemocultivos que van a ser
procesados en sistemas automatizados pueden mantenerse a temperatura ambiente o a 35-37ºC. El
tiempo máximo que pueden permanecer a temperatura ambiente antes de ser introducirlos en el
sistema no ha sido definido con exactitud, pero nunca debe superar las 18 horas. Si han sido
incubados a 35-37ºC, deben ser introducidos en los aparatos automatizados antes de que transcurran
12 horas. En los casos en que la introducción de un hemocultivo en estos sistemas se demore más de
18 horas, sobre todo si ha estado incubado a 35-37ºC, debe realizarse un subcultivo ciego para evitar
un posible resultado falso negativo, debido a que los microorganismos pueden haber crecido hasta
llegar a la fase de meseta y no ser detectados por el sistema. Cuando ocurran demoras importantes
en el transporte al laboratorio de frascos de sistemas en los que se detecta la positividad
colorimétricamente (BacT/Alert), estos deben examinarse visualmente antes de incubarlos. Sí se
detectan cambios en el indicador deben procesarse de inmediato. Los frascos de hemocultivo nunca
deben ser refrigerados.

Inspección inicial
En cuanto se reciben los hemocultivos en el laboratorio, y antes de ser introducidos en los
aparatos automatizados, los hemocultivos deben ser examinados cuidadosamente para comprobar
que pueden ser manejados con seguridad, que estén íntegros, sin roturas o fisuras, que su

8 Maracaibo, 2010
 Toma de Muestra y Procesamiento de Hemocultivos

identificación es correcta, que el volumen de sangre es adecuado y para detectar macroscópicamente

signos de crecimiento. Si no existen signos de positividad, los frascos deben introducirse
rápidamente en los aparatos automatizados para evitar el retraso en el crecimiento de los
microorganismos.

Criterios de rechazo
En general, no se rechazará nunca un hemocultivo dada la importancia del diagnóstico de la
bacteriemia, salvo en el caso en que haya serias dudas en cuanto a la identificación de la muestra o
los frascos estén dañados y contaminados. En el caso de graves deficiencias en el envío de la
muestra se contactará con el servicio que la remite para solucionarlas y después se procesará. Sin
embargo, constará en la información de la boleta y el informe de los resultados: "Interpretar
resultados con precaución...", anotándose el tipo de deficiencia encontrado.

Manejo de los hemocultivos en el laboratorio

Existe un riesgo biológico significativo para el personal sanitario derivado de la extracción,
transporte, manejo y eliminación de los hemocultivos, sobre todo por la manipulación de las agujas.
El personal por lo tanto debe seguir de manera estricta las normas o precauciones generales de
bioseguridad, tales como: uso de guantes, mascarillas, batas y lentes de seguridad. La manipulación
de todo hemocultivo positivo debe hacerse, de ser posible, en cabinas biológicas de seguridad,
particularmente los frascos con gas visible en el caldo y frascos con crecimiento para hongos en fase
micelial. Para el subcultivo de frascos positivos deben usarse agujas especiales de punta engrosada
para disminuir la posibilidad de pinchazos. El descarte de frascos de hemocultivo debe hacerse en
contenedores de bioseguridad o en envases de desecho para material infeccioso y autoclavarse.

Procesamiento de los Hemocultivos

Medios de cultivo empleados

Ningún medio de cultivo empleado para hemocultivo detecta óptimamente todos los
patógenos potenciales. El medio más ampliamente usado es el caldo soya con digesto de caseína.
Otros medios incluyen caldo infusión cerebro corazón, caldo suplementado con peptona, caldo
Columbia y caldo Brucella. La mayoría de los medios en caldo comerciales permiten recuperar bien
los patógenos comúnmente aislados de sangre. También existe disponibilidad de caldos comerciales
para la detección de bacterias anaerobias, hongos y micobacterias.

Figura 3 Botellas para Hemocultivos Disponibles para el Sistema BacT-Alert

Práctica Profesional de Bacteriología. Escuela de Bioanálisis. LUZ. 9

 Manual de Procedimientos en Bacteriología Clínica

Aditivos
Los frascos deben contener polianetol sulfonato sódico (SPS, Liquoid), en una
concentración del 0,025 al 0,05% (El SPS es un anticoagulante, anticomplementario, antifagocitario
e interviene con la actividad de algunos antimicrobianos, principalmente aminoglucósidos). La
adición a los frascos de gelatina al 1,2% neutraliza los efectos inhibitorios del SPS sobre el
desarrollo de algunas cepas de Neisseria spp, Gardnerella vaginalis, Streptobacillus moniliformis y
todas las cepas de Peptostreptococcus anaerobius, pero puede disminuir la recuperación de otros
microorganismos. No se recomienda el empleo de heparina, EDTA, citrato y oxalato como
anticoagulantes, porque inhiben el crecimiento de muchos microorganismos.

Estabilizadores osmóticos
La adición de sucrosa, manitol o sorbosa permite crear un medio hiper-osmótico o
hipertónico, para estimular el desarrollo de bacterias con deficiencias de la pared celular
(microorganismos deteriorados por antibióticos o Mycoplasma pneumoniae). Los medios de cultivo
hipertónicos solo deben usarse para casos específicos, porque inhiben muchas especies bacterianas.
Estos frascos son difíciles de inspeccionar visualmente en busca de evidencias de desarrollo
bacteriano, debido a que los eritrocitos se lisan y no forman un sedimento en el fondo, lo que
confiere al caldo un aspecto barroso.

Resinas y carbón activado

Ambos aditivos tienen generalmente una función equivalente, inactivan de forma no
selectiva a la mayoría de los antibióticos por adsorción de estos a su superficie. Los medios con
resinas y carbón activado en comparación con los medios basales, mejoran la recuperación de
microorganismos, incluyendo Staphylococcus, enterobacterias y levaduras. También mejoran la
recuperación de microorganismos en pacientes que reciben terapia antimicrobiana teóricamente
efectiva, pero detectan más contaminantes (especialmente SCN).

Relación sangre y caldo

La dilución de la sangre en el caldo es necesaria para reducir o neutralizar las
concentraciones de sustancias inhibitorias presentes en la sangre (complemento, lisozimas y
leucocitos fagocíticos), así como reducir las concentraciones de antimicrobianos que pueda estar
recibiendo el paciente hasta alcanzar concentraciones sub-inhibitorias. La dilución final
recomendada es de 1:5 a 1:10. Diluciones menores a 1:5 pueden reducir la recuperación de los
microorganismos, mientras que mayores incrementan la coagulación de la sangre. Por lo cual, debe
evitarse el empleo de un volumen de sangre mayor al recomendado. Para los sistemas de
hemocultivos comerciales debe usarse la dilución especificada por los fabricantes.

Métodos y técnicas de cultivo

En los últimos años se han desarrollado diversos métodos de hemocultivos. Debido a fines
prácticos sólo describiremos aquí aquellos empleados de rutina en nuestro laboratorio.

Método Manual o Convencional.

Se basa en la observación macroscópica de los signos de crecimiento de una pareja de
frascos con medio de cultivo líquido en los que se ha inoculado la sangre del paciente, incluye un
frasco para la recuperación de bacterias aeróbicas y uno para bacterias anaerobias con igual volumen

10 Maracaibo, 2010
 Toma de Muestra y Procesamiento de Hemocultivos

de sangre. Sin embargo, de acuerdo a varios estudios, los frascos anaeróbicos no son necesarios y se
recomienda usarlos de forma selectiva sólo para pacientes con alto riesgo de bacteriemia por
anaeróbicos. Los frascos se incuban a 35º-37ºC hasta 7-10 días. En el caso de sospecha de
microorganismos, como hongos, Brucella y agentes causantes de endocarditis (Cardiobacterium
spp. y Eikenella spp.), que precisan más tiempo para su crecimiento, la incubación debe prolongarse
hasta 4 semanas.

Los frascos deben observarse diariamente para detectar signos visibles de crecimiento
bacteriano, tales como: turbidez, hemólisis, producción de gas o formación de colonias en el fondo o
en la superficie del frasco. No obstante, debe tenerse presente que hay causas ajenas al crecimiento
bacteriano que pueden enturbiar el medio o hemolizar los hematíes y, por el contrario, hay
microorganismos que pueden crecer sin producir ningún signo macroscópico de crecimiento, lo que
obliga, cuando se sospecha de bacteriemia debido a microorganismos de crecimiento fastidioso, a
complementar la observación de los frascos con la coloración de Gram, la cual permite la
visualización de los microorganismos cuando su concentración se aproxima a las 105 UFC/mL.
Puede emplearse también la coloración de Naranja de Acridina.

El examen microscópico de los hemocultivos sin signos de crecimiento, ha demostrado ser

de poco valor, excepto en el caso de microorganismos de crecimiento fastidioso.

Desventajas de las técnicas de cultivo de sistemas convencionales

 Son laboriosas y requieren mucho tiempo.
 Son costosas, requieren gasto excesivo de medios de cultivo y otros materiales.

Método Manométrico. Sistema de Hemocultivo Signal® (Oxoid).

Consta de un solo frasco por muestra, el cual contiene 100 mL de caldo de cultivo con
todos los nutrientes necesarios para propiciar el crecimiento aerobio, microaerófílo y/o anaerobio
óptimo. Se inocula con un máximo de 10 mL de sangre (para una proporción de 1/10 sangre/caldo)
y una media de 1 mL a 5 mL para niños y adultos.

Una vez inoculado el frasco y transportado al Laboratorio, se le acopla una pequeña cámara
con una aguja que llega hasta el fondo del medio líquido y se incuban a 35-37ºC. Las primeras 24
horas los frascos deben colocarse en un agitador-incubadora a 35 ° C (a 150 rpm.) para aumentar la
tasa de recuperación de microorganismos y luego se incuban sin agitación por un máximo de siete
días. Durante este período los frascos deben ser diariamente inspeccionados macroscópicamente.

Figura 5 Sistema Signal® de Oxoid

Práctica Profesional de Bacteriología. Escuela de Bioanálisis. LUZ. 11

 Manual de Procedimientos en Bacteriología Clínica

La producción de gas durante el crecimiento bacteriano provoca un aumento de la presión

dentro de la botella que desplaza el medio de cultivo líquido a través de la aguja, introduciéndose
dentro de la cámara. La presencia de medio de cultivo en la cámara, por tanto, indica crecimiento
bacteriano y es una indicación para realizar el subcultivo a medios sólidos y coloración de Gram.
Adicionalmente la positividad también puede evidenciarse por otros signos de crecimiento, tales
como: turbidez, lisis, formación de colonias o película.

El rendimiento del Sistema Señal de hemocultivos (Sistema de Hemocultivo Signal®.

Oxoid) es variable. Se considera inferior a los sistemas automatizados, en cuanto a la velocidad de
detección de cultivos positivos y en la recuperación de algunos microorganismos, tales como: N.
meningitidis, H influenzae, especies de levaduras, Nocardia, Corynebacterium jeikeium, y bacilos
Gram negativos no fermentadores (BGNNF). Este sistema es capaz de soportar el crecimiento de
algunos de estos organismos, pero no es lo suficientemente sensible para detectar el crecimiento
mediante una señal positiva. Pero su principal inconveniente son los falsos positivos, los cuales
pueden reducirse calentando los frascos previamente, a la toma de la muestra. También se ha
descrito que los falsos positivos pueden ocurrir como resultado de las fluctuaciones ambientales de
temperatura y presión, por ejemplo frascos en los que no se alcanza la temperatura de incubación
recomendada o frascos pre-incubados durante aproximadamente 1 hora antes de que el dispositivo
de detección de crecimiento se conecte al frasco. Otro problema potencial de seguridad es la aguja
hipodérmica que posee el manómetro de señal.

Sistemas Automatizados. Sistema BacT/Alert

Eliminan la manipulación de los frascos mediante su monitorización continua utilizando
técnicas no invasoras para la lectura. De estos sistemas, sólo describiremos aquí, el sistema
BacT/Alert (BioMerieux), el cual detecta el aumento y/o nivel total de CO 2 producido por el
crecimiento microbiano mediante un sensor colorimétrico interno pegado al fondo de los frascos y
separado del medio líquido por una membrana que solo es permeable al CO 2.

A medida que los microorganismos se multiplican, liberan CO 2 que difunde a través de la

membrana y se disuelve en el agua presente en la matriz del sensor, lo cual hace que se generan
iones hidrógenos libres, que causan un cambio de color en el sensor (de azul a verde claro y amarillo
a medida que disminuye el pH) y este cambio de color hace que la cantidad de luz reflejada se
incremente y sea cuantificada por el instrumento como un aumento del voltaje. Las señales se
analizan en un ordenador por medio de un algoritmo que utiliza tres criterios como evidencia de
crecimiento. La lectura se realiza cada 10 minutos.

La positividad una vez captada por el sensor del instrumento, activa una alarma y se
enciende una luz en la celda del frasco respectivo. El período de incubación máximo recomendado
para los frascos de sistemas de hemocultivo de monitoreo continuo es de 5-7 días.

12 Maracaibo, 2010
 Toma de Muestra y Procesamiento de Hemocultivos

Figura 6 Fundamento del Sistema BacT-Alert

Ventajas de los sistemas automatizados

 Detección precoz del crecimiento bacteriano (8 ± 2 horas)
 Mayor sensibilidad (mayor espectro de microorganismos detectados)
 Permiten procesar un número grande de muestras
 Menor contaminación
 Menor carga de trabajo (preparación de medios, observación de los frascos,
subcultivos)
 Mejor registro e informe de los resultados
 Reducen el tiempo de hospitalización de los pacientes con sepsis, disminuyendo
los costos en los cuidados del paciente
 Permite procesar otras muestras como líquidos orgánicos normalmente estériles.

Desventajas de los sistemas automatizados

 Alto costo de los insumos
 Los medios que se emplean no pueden ser modificados
 Requieren supervisión de 24 horas
 Requieren mantenimiento o soporte técnico

Manejo de Hemocultivos Positivos

Cuando, por el método convencional o por el método manométrico, se observan signos de
crecimiento en cualquier frasco, o bien, el sistema automatizado empleado, señala algún frasco
como positivo, inmediatamente debe mezclarse suavemente el frasco y aspirar asépticamente con
una jeringa o pipeta estéril una pequeña cantidad para realizar un extendido coloreado con Gram y el
subcultivo a medios sólidos.

Extendidos coloreados de hemocultivos positivos

Se prepara colocando una gota del contenido del frasco en un portaobjeto y se extiende
ligeramente con el asa. Dejar secar, fijar y colorear con Gram. Observar con el objetivo de 100X. Si
se observa la presencia de levaduras debe realizarse una coloración con tinta china, con el objeto de
descartar Cryptococcus neoformans. Los hemocultivos que presenten signos de positividad pero una
coloración de Gram negativa, deberían examinarse con la coloración Naranja de Acridina, para
visualizar bacterias como Mycoplasma, Campylobacter y Brucella que se tiñen pobremente con la
coloración de Gram, o para reducir la necesidad de subcultivar hemocultivos falsos-positivos.

Práctica Profesional de Bacteriología. Escuela de Bioanálisis. LUZ. 13

 Manual de Procedimientos en Bacteriología Clínica

Para el reporte de la coloración de Gram de hemocultivos positivos, deben usarse términos

lo más descriptivos posibles y sin ambigüedades, de modo que no de lugar a confusiones. Por
ejemplo: un reporte de “Cocos Gram Positivo”, puede indicar una variedad de microorganismos
(Staphylococcus, Streptococcus, Enterococcus), pero un reporte de “Cocos Gram Positivo en pares”,
es más específico. Esta información puede detallarse posteriormente para una mejor diferenciación,
definiendo sí los cocos presentes están en pares y cadenas cortas (sugestivos de neumococos,
enterococos o estreptococos grupo B) o en cadenas largas (sugestivo de otros estreptococos beta-
hemolíticos o Streptococcus del grupo viridans).

Asimismo, debe evitarse el uso del término: “Difteroides”, debido a que puede ser
malinterpretado por los médicos como un contaminante. Hay que tener en cuenta que varios
microorganismos potencialmente patógenos, como Rodococcus o especies de Mycobacterium,
pueden presentar características morfológicas similares a la de las bacterias corineformes. Por lo
tanto, deben ser descritos como “Bacilos Gram Positivo corineformes”.

Subcultivo de hemocultivos positivos

El material aspirado de frascos con signos de positividad, independientemente de los
resultados microscópicos, debe ser subcultivado en medios sólidos apropiados. Los medios básicos
empleados son agar sangre de carnero al 5% (SC) ó agar sangre humana (SH) como medio de todo
propósito, y agar Chocolate (GC) para el aislamiento de microorganismos fastidiosos.
Opcionalmente puede incluirse agar MacConkey (MC) ó esperar los resultados de la coloración de
Gram para su inclusión. Estos medios se inoculan sembrando unas gotas del hemocultivo bien
mezclado. Se incuban a 35-37ºC y se examinan diariamente por un mínimo de 48 h.

Cuadro 3 Subcultivo de Hemocultivos

SC ó SH GC MC
CO2 O2

35–37ºC de 24-48h

14 Maracaibo, 2010
 Toma de Muestra y Procesamiento de Hemocultivos

Sí ocurre crecimiento sólo en el frasco anaeróbico que sugiera la presencia de bacterias

anaerobias, debe incluirse además de las placas de SC ó SH, GC, y MC, una placa de Agar Sangre
Anaerobiosis (SHA), la cual debe ser incubada en anaerobiosis por 48-72 h.
Cuadro 4 Subcultivo del Frasco Anaeróbico

SHA
anaerobiosis
48-72h

En base a los resultados de la coloración de Gram, pueden adicionarse otros medios

específicos o selectivos, tales como: agar colistina-ácido nalidíxico (en infecciones mixtas y
estreptocócicas), agar Sabouraud (SB) para el aislamiento de levaduras y hongos, y medios
suplementados como el agar buferado con carbón activado y extracto de levadura (BCYE), el cual
se recomienda incluirse siempre que sea posible en los subcultivos de pacientes
inmunocomprometidos o cuando se sospeche de infecciones por organismos fastidiosos como
Bartonella.

Adicionalmente, debe tenerse en cuenta que ciertas levaduras, tales como especies de
Malassezia, pueden verse en los extendidos como levaduras pequeñas, pero no crecen en los medios
de rutina debido a su naturaleza lipofílica. En tal caso, debe añadirse una capa fina de aceite de oliva
estéril como factor de crecimiento sobre los medios de cultivo. Algunas especies de Malassezia
forman parte de la flora cutánea, otras como M. furfur y M. globosa son agentes causales de la
pitiriasis versicolor, dermatitis seborreica y ciertas foliculitis, pero también pueden causar sepsis
relacionada a catéteres en neonatos, prematuros y pacientes inmunodeprimidos alimentados
mediante nutrición parenteral enriquecida con lípidos. Debe tenerse en cuenta también, cuando se
sospeche de fungemia por estas especies, que los sistemas automatizados de hemocultivo no suelen
detectar su crecimiento, por lo cual debe recurrirse a sistemas alternativos de hemocultivo como el
método de lisis centrifugación para lograr su detección.

Por otra parte, debido a que algunas micobacterias de crecimiento rápido crecen bien en los
medios de cultivo de rutina y pueden parecer bacilos corineformes, o como bacilos puntiagudos
Gram positivos, o no tomar bien la coloración y verse como “bacilos fantasmas”, debe hacerse el
descarte de micobacterias mediante la coloración de Ziehl-Neelsen a partir de las colonias.

Práctica Profesional de Bacteriología. Escuela de Bioanálisis. LUZ. 15

 Manual de Procedimientos en Bacteriología Clínica

Esquema para el Procesamiento de Hemocultivos Convencionales

Frasco A:
Repicar a SH, GC y MC *
*Opcional, dependiendo de los resultados del
Gram

Incubar a 35-37ºC. Observar diariamente. En cualquier momento que se

detecte la aparición de signos de positividad, mezclar el frasco suavemente
y extraer asépticamente con jeringa o pipeta una pequeña cantidad para
realizar coloración de Gram y subcultivo a medios sólidos
Realizar examen coloreado con
Gram y reportar inmediatamente.

Frasco B:
Repicar a SH, GC, MC* y SHA (si existe la
sospecha de anaerobios).
*Opcional, dependiendo de los resultados del
Gram

Las placas de SH y GC se incuban a 35-37°C por 18-24 horas en microaerofilia, la placa de MC se incuban
en aerobiosis, mientras que SHA en anaerobiosis por 48-72 horas.
El subcultivo ciego del frasco A a las 24 horas de incubación y del frasco B a las 48 horas es opcional. La
recomendación es realizar éstos sólo cuando se sospeche de microorganismos de crecimiento fastidioso no
aislados mediante los procedimientos de rutina y en hemocultivos de pacientes con sospecha de endocarditis.
Sí los frascos permanecen negativos incubar hasta 7-10 días. No se realizan repiques finales, excepto que los
frascos estén turbios o tengan algún indicio de crecimiento, se investiguen microorganismos de crecimiento
fastidiosos o se trate de hemocultivos de pacientes con sospecha de endocarditis. Cada laboratorio debe
establecer el tiempo total de incubación de los frascos. Para sistemas convencionales se sugiere acortar el
período de incubación hasta un máximo de 7 días.

16 Maracaibo, 2010
 Toma de Muestra y Procesamiento de Hemocultivos

Esquema para el Procesamiento de Hemocultivos por el Método Manométrico.

Sistema de Hemocultivo Signal® (Oxoid).

Realizar examen coloreado

con Gram y reportar
inmediatamente.

Repicar a SH, GC, MC y SHA (sí existe la sospecha de anaerobios)

Los frascos negativos no se subcultivan de rutina antes de los 7 días,

excepto cuando se investiguen microorganismos de crecimiento
fastidioso o se trate de hemocultivos de pacientes con sospecha de
endocarditis, en los cuales estaría indicado la realización de
subcultivos ciegos. No obstante, es recomendable hacer subcultivo
final, antes de descartar los frascos como negativos.

Práctica Profesional de Bacteriología. Escuela de Bioanálisis. LUZ. 17

 Manual de Procedimientos en Bacteriología Clínica

Esquema para el Procesamiento de Hemocultivos Automatizados. Sistema BacT/Alert®

Frasco A:
Repicar a SH, GC y MC*
*opcional, dependiendo de los resultados del
Gram

Frasco A y Frasco Pediátrico

Introducir los frascos en el Sistema Automatizado

BacT/Alert. Inmediatamente que el sistema detecte signos de
crecimiento en alguno de los frascos, deben sacarse del
Sistema. Mezclar el frasco suavemente y extraer
asépticamente con jeringa una pequeña cantidad para realizar
coloración de Gram y subcultivo a medios sólidos Realizar examen coloreado con
Gram y reportar inmediatamente.

Frasco B Frasco B:
Repicar a SH, GC, MC* y SHA (si existe la
sospecha de anaerobios).
*Opcional, dependiendo de los resultados del
Gram

Las placas de SH y GC se incuban a 35-37°C por 18-24 horas en microaerofilia, la placa de MC se incuba en
aerobiosis, mientras que SHA en anaerobiosis por 48-72 horas.
Sí los frascos permanecen negativos incubar hasta 7 días. Cada laboratorio debe establecer el tiempo total de
incubación de los frascos. Para sistemas automatizados se sugiere un período de incubación entre 5-7 días.
Sólo está indicado la realización de extendidos coloreados con Gram o Naranja de Acridina y subcultivos
ciegos de frascos negativos después de completar el período de incubación cuando se sospeche de
microorganismos de crecimiento fastidioso no aislados mediante los procedimientos de rutina y en
hemocultivos de pacientes con sospecha de endocarditis.

18 Maracaibo, 2010
 Toma de Muestra y Procesamiento de Hemocultivos

Informe provisional de hemocultivos positivos

Los resultados de hemocultivos positivos deben ser reportados y entregados tan rápido
como sea posible. En el caso de los resultados de la coloración de Gram, debe informarse
inmediatamente al médico, la morfología, agrupación y afinidad tintorial del microorganismo.

Ejemplos:
Informe Provisional Positivo de Extendido Coloreado con Gram:
FRASCO (A ó B): Al examen microscópico con coloración de Gram, se observaron (describir
la morfología, afinidad tintorial y agrupación bacteriana).

Informe Provisional de Cultivo Positivo:

Se envía cuando el microorganismo aislado se le atribuye importancia clínica, pero solo se conoce
el género o grupo al que pertenece. Reportar:
Frasco (A, B ó A=B): Género:
Especie: en estudio
Antibiograma: en estudio

Informe definitivo de hemocultivos positivos

Se envía una vez que se conozca la identificación definitiva del microorganismo y la
susceptibilidad a los antimicrobianos. Ejemplo:

Informe Definitivo de Cultivo Positivo:

Frasco (A, B ó A=B): Género:
Especie:
Antibiograma:

Nota: Los microorganismos considerados como contaminantes se identifican sólo a nivel de género
y salvo algunas excepciones, no se les realizan pruebas de susceptibilidad.

Informe de los hemocultivos negativos

Los hemocultivos en los que no se aíslan microorganismos, transcurrido el período de
incubación establecido, tanto para el envío del informe provisional (72 h para hemocultivos
procesados por sistemas automatizados y 96 h por el método convencional) como del resultado
definitivo (7 días para hemocultivos procesados por sistemas automatizados y 10 días por el método
convencional), se informarán por escrito como negativos especificando los días de incubación, por
ejemplo:
Informe Provisional Negativo:
FRASCO (A, B ó A=B): No se ha observado crecimiento de bacterias (aeróbicas,
anaeróbicas o aeróbicas ni anaeróbicas) después de 72 ó 96 horas de incubación.

Informe Definitivo Negativo:

FRASCO (A, B ó A=B): No se observó crecimiento de bacterias (aeróbicas, anaeróbicas o
aeróbicas ni anaeróbicas) después de 7 ó 10 días de incubación.

Práctica Profesional de Bacteriología. Escuela de Bioanálisis. LUZ. 19

 Manual de Procedimientos en Bacteriología Clínica

Interpretación de los resultados

Hemocultivos falsos positivos (contaminantes)

Un hemocultivo puede ser positivo sin que ello represente un episodio verdadero de
bacteriemia. Es frecuente que la propia microbiota cutánea del enfermo o del personal que realice la
toma del hemocultivo pueda contaminar los frascos en el momento de la extracción. También en el
laboratorio, durante la manipulación de los hemocultivos, pueden inocularse de forma accidental
microorganismos en los frascos.

Se denomina bacteriemia verdadera a aquella producida por microorganismos realmente

presentes en la sangre de los pacientes y falsas bacteriemias a las causadas por una contaminación
accidental de los medios de cultivo. La distinción entre ambas es de gran importancia y
trascendencia para el paciente. Uno de los datos orientativos más importante para ello es el tipo de
microorganismo aislado.

Microorganismos patógenos como Staphylococcus aureus, Escherichia coli y otras

enterobacterias, Pseudomonas aeruginosa y Streptococcus pneumoniae son responsables de
bacteriemias verdaderas en más del 90% de los casos. Por el contrario, es dudoso el papel que
representan los microorganismos que forman parte de la microbiota del paciente como los SCN,
Streptococcus del grupo viridans, Corynebacterium spp., Propionibacterium acnes, Bacillus spp. y
algunas especies de Clostridium que, en conjunto, suponen menos del 5% de las bacteriemias
verdaderas. Sin embargo, algunos de estos microorganismos pueden ser responsables de auténticas
bacteriemias en algunas situaciones y por tanto, su identidad no es un dato suficiente para establecer
el criterio de significación clínica. Así por ejemplo, Staphylococcus coagulasa negativa, debido a su
presencia ubicua en la piel, su habilidad y capacidad para colonizar dispositivos protésicos, son los
agentes primarios de septicemia asociada a catéter y de hemocultivos falsos positivos.

Para dilucidar la importancia clínica de SCN y otros microorganismos que forman parte de
la microbiota de piel es preciso recurrir al número de hemocultivos en los que se repite el
aislamiento. La repetición de la misma bacteria en más de una extracción (suponiendo que estas no
se han realizado desde una misma vía contaminada) aumenta la probabilidad de que se trate de una
bacteriemia verdadera. Por el contrario, la presencia de un solo hemocultivo positivo de extracciones
seriadas en un corto período de tiempo sugiere una contaminación. Otro dato que ayuda a la
interpretación de hemocultivos en los que se aíslen microorganismos considerados como posibles
contaminantes, es el aislamiento del mismo microorganismo a partir de otro foco infeccioso,
dispositivos intravasculares, prótesis, etc. En la mayoría de las ocasiones, sin embargo, el
laboratorio no dispone de elementos suficientes para establecer con seguridad la importancia clínica
de estos aislamientos, en tal caso, el microbiólogo debe compartir la información que posee con el
médico tratante, para que puedan conjuntamente valorar los resultados obtenidos.

En todo caso, las políticas para el procesamiento y reporte de probables contaminantes de

hemocultivos deben estandarizarse en lo posible, para facilitar la interpretación de tales resultados
por el laboratorio y evitar la terapia innecesaria para los pacientes. A este respecto, cuando se
sospecha que los microorganismos aislados son simplemente contaminantes no es necesario reportar
rutinariamente pruebas de susceptibilidad a estos microorganismos, ya que los médicos pueden
verse forzados a iniciar tratamiento por razones prácticas y legales si el laboratorio las reporta.

20 Maracaibo, 2010
 Toma de Muestra y Procesamiento de Hemocultivos

Para monitorear la tasa de hemocultivos falsos positivos el laboratorio debe vigilar el

cumplimiento estricto del proceso de antisepsia de la piel, la venopunción y la inoculación de los
frascos de Hemocultivo. Más allá de las técnicas preventivas, se considera difícil reducir el índice de
contaminación por debajo del 2%. En muchos casos cuando se recibe un solo un hemocultivo de un
paciente, y se recupera un contaminante potencial de uno o ambos frascos; si no se tiene un segundo
hemocultivo para comparación, la interpretación de su importancia clínica es imposible. En estos
casos, la evaluación debe limitarse a la identificación con el propósito de poder excluir de manera
segura a aquellos microorganismos fenotípicamente similares pero médicamente importantes, por
ejemplo: diferenciar S. pneumoniae de Streptococcus grupo viridans mediante la prueba de
solubilidad en bilis; S. aureus de SCN mediante la coagulasa y Bacillus spp. de B. anthracis por la
motilidad y la hemólisis.

Todos los aislamientos de “posibles contaminantes” deben ser guardados, para realizar
estudios adicionales que permitan su identificación definitiva, sí tales microorganismos son
recuperados de hemocultivos subsiguientes del mismo paciente. Sí esto ocurre, debe realizarse la
identificación completa de ambos aislamientos junto con las pruebas de susceptibilidad.

Bacteriemia polimicrobiana (BP)

Es relativamente rara (4,7% de todos los episodios sépticos). Sin embargo, la incidencia de
BP verdadera es desconocida, debido a que la mayoría de los hemocultivos no son reincubados
después de un subcultivo inicial positivo. En niños, hemocultivos positivos para dos o más
microorganismos pueden estar en el rango de 10% y en pacientes inmunocomprometidos alrededor
del 30%. Las extracciones dentales representan un factor de riesgo conocido de BP. En el caso
particular de BP asociada con P. aeruginosa, ésta conlleva un alto riesgo de mortalidad, es más
frecuente en pacientes mayores, puede ser una indicación de enfermedades de base y representa el
traslado de microorganismos del intestino, piel y superficies mucosas. En cualquier caso,
hemocultivos positivos a múltiples microorganismos deben ser evaluados con sentido común.

En el caso de BP en las que se aíslen bacterias con alto potencial patógeno, tales como P.
aeruginosa, S. aureus o E. coli, se deben identificar y hacerles pruebas de susceptibilidad. Mientras
que, cuando bacterias potencialmente contaminantes como SCN, especies de Bacillus, bacilos Gram
positivos aeróbicos corineformes o Propionibacterium acnes acompañan la mezcla de las bacterias
recuperadas, esto arroja dudas sobre la positividad de un hemocultivo y la relevancia clínica de los
verdaderos patógenos es difícil de interpretar. En estos casos, todos los contaminantes potenciales se
identifican y debe hacerse el seguimiento de futuros aislamientos de los mismos microorganismos a
partir de hemocultivos subsiguientes.

Endocarditis
Cuando se sospecha una endocarditis infecciosa es aconsejable realizar tres hemocultivos
con un volumen de sangre por extracción no inferior a 10 mL. Su finalidad es detectar si la
bacteriemia es continua y descartar agentes etiológicos contaminantes como SCN o corinebacterias,
que al mismo tiempo suelen ser los microorganismos responsables de endocarditis protésica.
Aunque todos los microorganismos pueden causar endocarditis infecciosa, los más habituales
(estreptococos, estafilococos) suelen crecer en las primeras 48 horas. Pasado este tiempo, si el
paciente no ha recibido tratamiento antimicrobiano, debe sospecharse de la mal llamada endocarditis
con hemocultivo negativo, la cual puede ser causada por microorganismos del grupo HACEK (H.

Práctica Profesional de Bacteriología. Escuela de Bioanálisis. LUZ. 21

 Manual de Procedimientos en Bacteriología Clínica

aphrophilus, H. paraphrophilus, H. segnis, A. actinomycetemcomitans, Cardiobacterium spp., E.

corrodens y Kingella spp.), Brucella y especies de Abiotrophia.

Los frascos de pacientes con sospecha de endocarditis deben incubarse entre 2 y 4 semanas,
y subcultivarse a medios específicos al final del período de incubación. En pacientes con
hemocultivos negativos deben realizarse estudios serológicos frente a Coxiella burnetii, Legionella,
Brucella, Bartonella y Chlamydia, particularmente si han recibido tratamiento antimicrobiano
previo y repetir los hemocultivos si el paciente mantiene un buen estado hemodinámico, y es posible
interrumpir el tratamiento antimicrobiano, como mínimo 48h después de la suspensión del
tratamiento.

Bacteriemia asociada a catéter

El 100% de los pacientes ingresados en áreas de cuidados intensivos son portadores de
catéteres intravasculares (CIV) y la mayoría de ellos están pluricateterizados. También pacientes en
régimen ambulatorio sometidos a hemodiálisis o quimioterapia pueden ser portadores de CIV. Para
el diagnóstico de la bacteriemia asociada a catéter los datos clínicos son poco útiles, por lo que se
requiere la confirmación microbiológica para tener un diagnóstico de certeza. Para mayor
información ver el capítulo correspondiente al diagnóstico microbiológico de infecciones asociadas
a catéteres vasculares.

Recolección de sangre de catéteres intravasculares

 Se asocia con una alta tasa de contaminación.
 Debe acompañarse de un hemocultivo de sangre periférica para ayudar en la
interpretación de un posible resultado positivo
 Evitar extraer sangre de derivaciones durante la administración de antibióticos
Procedimiento
 Rotular y preparar los frascos
 Limpiar la conexión central del catéter por 15 segundos con torundas con alcohol y
dejar secar.
 Desconectar el tapón del catéter, insertar la jeringa y descartar la sangre colectada (3
mL para adultos y 0.2 mL para pacientes pediátricos).
 Usar una nueva jeringa para tomar la sangre que se empleará para el cultivo y
reconectar el tubo inmediatamente.
 Inocular los frascos con la cantidad recomendada y mezclarlos

Detección de Patógenos que Fallan en Crecer en Medios Estándares y

Situaciones Especiales
La colaboración entre el clínico y el microbiólogo es siempre necesaria, mucho más ante la
sospecha de una infección cuyo agente etiológico es infrecuente y además, de difícil aislamiento
debido a que la mayoría de estos microorganismos necesitan medios de cultivos especiales por sus
requerimientos nutritivos y su incubación debe ser prolongada debido a su lento crecimiento. En
alguno de estos procesos infecciosos el estudio serológico es indispensable para el diagnóstico; en
otros es imprescindible aplicar técnicas de biología molecular que proporcionan información con
más celeridad que el cultivo. Estos microorganismos, a veces responsables de las llamadas
endocarditis con hemocultivo negativo, incluyen Brucella, Haemophilus, Cardiobacterium,
Eikenella, Kingella, Bartonella y Abiotrophia, entre otros (Cuadro 5). A manera de información

22 Maracaibo, 2010
 Toma de Muestra y Procesamiento de Hemocultivos

general se considerarán aspectos de interés sobre cada uno de estos microorganismos en relación a
su importancia y su diagnóstico a partir de hemocultivos.

Bacterias del Grupo HACEK

Es un grupo de bacilos exigentes Gram negativos conformado por Haemophilus
aprhophilus, Actinobacillus actinomycetemcomitans (reclasificados recientemente en el género
Aggregatibacter), Cardiobacterium hominis, Eikenella corrodens y Kingella kingae. Su
recuperación generalmente se asocia a endocarditis infecciosa.

Cuadro 5 Patógenos que Fallan en Crecer en Medios Estándares de Hemocultivos

Bacterias HACEK
Streptococcus variantes nutricionales (Dependientes de vitamina B6: Granulicatella y Abiotrophia
Francisella tularensis
Coxiella, Chlamydia, Rickettsia y Tropheryma spp.
Bartonella
Brucella
Campylobacter y Helicobacter
Legionella
Mycoplasma
Leptospira
Mycobacterium
Capnocytophaga
Bacterias con pared celular deficiente
Bacterias dependientes de antibióticos

Haemophilus aphrophilus (actualmente Aggregatibacter aprophilus)

Son cocobacilos pequeños, Gram negativo, no motiles, su crecimiento depende de la
presencia de una atmósfera húmeda suplementada con 5-10% de CO2, fermenta algunos
carbohidratos y algunas cepas producen gas en los medios de fermentación. Forma parte de
la microflora saprófita oral humana, predominantemente en la placa dental. La mayor parte
de las infecciones se presentan después de un traumatismo o infección orofaríngea. En
personas con cardiopatías pueden provocar endocarditis y absceso cerebral. En ocasiones
puede ocasionar sinusitis, neumonía, peritonitis, meningitis, osteomielitis, pioartrosis,
abscesos dentarios y enfisema. El tratamiento recomendado para endocarditis es una
cefalosporinas de tercera generación por un período 4 semanas para válvulas nativas y 6
semanas a prótesis. Otra alternativa es el uso de fluoroquinolonas, particularmente
ciprofloxacina.

Actinobacillus actinomycetemcomitans (Aggregatibacter actinomycetemcomitans)

Es un cocobacilo Gram negativo, inmóvil, catalasa positiva, oxidasa e indol negativa,
fermenta la glucosa, pero no lactosa ni sucrosa. Crece bien en SH y GC en atmósfera rica en
CO2. No crece en MC. Es flora normal de la boca. Se ha aislado en cultivos puros a partir de
productos patológicos de pacientes con endocarditis, infecciones periodontales y con menor
frecuencia en abscesos cerebrales, neumonías, osteomielitis, abscesos de partes blandas en
asociación con Actinomyces spp. e infecciones de heridas. Infecciones periodontales o la

Práctica Profesional de Bacteriología. Escuela de Bioanálisis. LUZ. 23

 Manual de Procedimientos en Bacteriología Clínica

manipulación dentaria reciente en pacientes con afección valvular previa, predisponen a la

endocarditis por este microorganismo. Son resistentes a vancomicina, eritromicina y
clindamicina, y sensibles a aminoglucósidos, cefalosporinas y cloranfenicol; su
susceptibilidad variable a penicilina y ampicilina. Algunos pacientes con endocarditis no
responden al tratamiento con penicilina, mientras que con cefalosporinas, o con la asociación
penicilina más aminoglucósidos responden satisfactoriamente.

Cardiobacterium hominis
Es un bacilo Gram negativo oxidasa positiva, catalasa negativa e indol positivo débil (xilol).
Fermenta glucosa, maltosa, manitol y sucrosa después de varios días en medios
suplementados con suero o hemina e incubación en CO 2. Crece como colonias pequeñas y
opacas. A partir de cultivos de 48 horas en GC se aprecian como bacilos Gram negativos
pleomórficos, algunos con los extremos más dilatados (aspecto de lágrima). Los
hemocultivos pueden necesitar hasta 14 días de incubación antes de dar positivos. Forma
parte de la flora normal de la boca y se aíslan de nariz y garganta en el 68% de individuos
sanos. Se asocia exclusivamente a endocarditis localizada sobre válvulas previamente
lesionadas o protésicas y adopta un curso sub-agudo. Pueden ocurrir complicaciones, como
embolia séptica, aneurisma e insuficiencia cardíaca congestiva. Es susceptible a una amplia
variedad de antibióticos. El tratamiento de la endocarditis se realiza mediante la combinación
de penicilina con un aminoglucósido.

Eikenella corrodens
Es un bacilo Gram negativo oxidasa positiva, catalasa e indol negativo, nitratos, ornitina y
lisina positiva y arginina negativa. No crece en MC. Crece lentamente en SH o GC en CO2.
Su crecimiento depende del factor X. Las colonias poseen un olor típico a lejía y pueden
ocasionar pequeñas depresiones en la superficie del agar. En la mayoría de los casos, el
punto de partida de las infecciones por E. corrodens es la cavidad oral, directamente a través
de un traumatismo o indirectamente como consecuencia de diseminación hematógena a partir
de un foco infeccioso (seno paranasal, oído medio) o tras una manipulación dentaria. Se
asocia a periodontitis y otras infecciones más graves, como endocarditis (especialmente en
heroinómanos), osteomielitis, artritis, meningitis y abscesos cerebrales. Es sensible a
penicilina G, ampicilina, trimethoprim sulfametoxazole y a fluoroquinolonas; habitualmente
resistente a clindamicina, cefalexina, cefalotina, aminoglucósidos, eritromicina y
metronidazol.

Kingella kingae
Es un bacilo Gram negativo catalasa-negativo y oxidasa-positivo, no productor de indol,
inmóvil, fermenta glucosa y maltosa. Beta hemolítico. Coloniza la mucosa de la nasofaringe,
desde donde puede diseminarse por vía hematógena y ocasionar endocarditis (principalmente
en niños y jóvenes), artritis, meningitis y abscesos. Es sensible a la mayoría de los agentes
antibacterianos, incluyendo betalactámicos, aminoglucósidos, cloranfenicol, tetraciclina,
trimethoprim sulfametoxazole y ciprofloxacina. Se ha descrito resistencia a penicilina y
ampicilina. El tratamiento de elección para la endocarditis por K. kingae es la combinación
de ampicilina con un aminoglucósido.

24 Maracaibo, 2010
 Toma de Muestra y Procesamiento de Hemocultivos

Otros Microorganismos Poco Frecuentes

Estreptococos Dependientes de Vitamina B6 (Granulicatella adjacens, Abiotrophia

adjacens y Abiotrophia defectivus)
Se asocian con bacteriemia y endocarditis. Necesitan para multiplicarse 0,001% de clorhidrato
de piridoxal (thiol o vitamina B6, no como piridoxina ni piridoxamina). Aunque la sangre
humana contenida en los frascos de hemocultivo proporciona piridoxal suficiente para permitir
su multiplicación y exhibir signos de positividad en ellos, así como visualizarse en la coloración
de Gram, fallan en crecer en las placas de SC al 5%, aunque pueden crecer en GC. Todo lote de
GC debe ser probado con Streptococcus variantes nutricionales para asegurar que los
subcultivos de los hemocultivos revelen estos agentes, sí esto no es factible, deben hacerse
estrías de S. aureus o colocar un disco de piridoxal en los subcultivos en agar sangre de carnero
al 5% de cocos Gram positivo que fallan en crecer en los subcultivos iniciales, para poder
evidenciarlos como colonias satélites diminutas. Pueden desarrollarse también en las placas
empleadas para el crecimiento de anaerobios, las cuales suelen contener cisteína. Para no
confundirlas con Peptostreptococcus es útil hacer un subcultivo en dos placas enriquecidas de
anaerobios e incubar una en CO2 y otra en atmósfera anaerobia. En la coloración de Gram se
observan cocos Gram positivos con tendencia a agruparse en cadenas, aunque a menudo su
morfología es deforme mostrando un aspecto cocobacilar incluso Gram variable.

Francisella tularensis
Es el agente etiológico de la tularemia, una infección poco frecuente. Su aislamiento en un
hemocultivo es extremadamente raro, ya que sólo está en la sangre en la fase aguda de la
enfermedad. Los frascos deben incubarse 14 días, sub-cultivándolos en agar sangre
suplementada con glucosa y cisteína, cada 4 días y al final del período de incubación. También
se puede utilizar agar chocolate enriquecido con Isovitalex o agar BCYEα. Francisella
tularensis es un agente potencial de bioterrorismo, considerado como un organismo nivel 3 de
bioseguridad, por lo que debe ser mínimamente manipulado en los laboratorios clínicos de
rutina. Sí se aíslan cocobacilos Gram negativo extremadamente diminutos débilmente teñidos o
Gram variable, todas las placas deben ser selladas inmediatamente y todas las manipulaciones
deben realizarse en una cabina biológica de seguridad. Sí el aislamiento es catalasa negativa o
débilmente positiva, ureasa, oxidasa y nitratos negativo, debe ser remitido a un laboratorios de
referencia apropiado. Habitualmente, el diagnóstico de tularemia se realiza a través de pruebas
serológicas.

Coxiella, Chlamydophila, Rickettsia y Tropheryma spp.

No crecen en medios artificiales. Para su diagnóstico se emplean pruebas serológicas
(aglutinación) o métodos de amplificación molecular. Para el diagnóstico de endocarditis por
Chlamydophila psittacis la serología es virtualmente la única prueba disponible, sin embargo
pueden ocurrir reacciones cruzadas con anticuerpos contra Bartonella. Para pruebas de
amplificación molecular la sangre debe recogerse en tubos con EDTA o con citrato ácido. La
muestra debe ser enviada al laboratorio de referencia congelada a -70ºC y enviada en hielo seco.
No obstante, antes de la obtención de la muestra, debe consultarse al laboratorio de referencia
sobre el tipo de tubo, preservativo y temperatura que debe usarse en el manejo de la muestra.

Práctica Profesional de Bacteriología. Escuela de Bioanálisis. LUZ. 25

 Manual de Procedimientos en Bacteriología Clínica

Bartonella
Son bacilos Gram negativos muy pequeños, ligeramente curvados, de crecimiento
intraeritrocítico y de difícil aislamiento, crecen a 35-37ºC, excepto B. bacilliformes que crece
mejor entre 25-30ºC. Bartonella bacilliformis, B. henselae, B. elizabethae y B. quintana, causan
bacteriemia y endocarditis en pacientes inmunocompetentes e inmunodeprimidos. Bartonella
henselae y B. quintana también se han descrito como agentes responsables de enfermedad
granulomatosa, peliosis y enfermedad por arañazo de gato. Estas especies también se han
asociado a síndromes neurológicos en pacientes portadores del VIH. Existen zonas endémicas
en las que Bartonella constituye una amenaza para los viajeros.

Bartonella puede crecer en líneas de cultivo celular HeLa, células endoteliades y/o en cultivo
primario de monocitos humanos. El sistema de hemocultivo de lisis-centrifugación (Isolator®)
es el más recomendado para su recuperación. Para obtener un desarrollo óptimo, una vez
procesada la sangre, debe sembrarse a partir del sedimento medios enriquecidos como agar
sangre columbia, GC o BCYEα recién preparados e incubarlos a 35-37ºC en atmósfera húmeda
al 5-7% de CO2 por 14-21 días. Tierno y col. han detectado especies de Bartonella en frascos
con signos de positividad utilizando el sistema de cultivo sanguíneo BacT/Alert mediante la
inoculación de 7,5 mL del caldo positivo en tubos de lisis centrifugación. No obstante, debe
tenerse en cuenta que generalmente Bartonella no enturbia los medios líquidos y los sistemas
automatizados no detectan la producción de CO2 por lo que hay que realizar subcultivos ciegos
a partir del séptimo día. Algunos autores recomiendan combinar el subcultivo con la coloración
de Naranja de Acridina o la coloración de Jiménez. PCR a partir de muestras clínicas y estudios
serológicos son también útiles para su diagnóstico.

Brucella
Es el agente etiológico de la brucelosis, una enfermedad que ataca a varias especies de
mamíferos dentro de los cuales se encuentra el hombre. Algunos de los reservorios naturales
son los bovinos, caprinos, ovinos, cerdos y mamíferos marinos. Las vías de contagio suelen ser:
mucosas, heridas en la piel y la vía digestiva. La bacteria puede incluso entrar por las vías
respiratorias mediante aerosoles. Muchas infecciones provienen de la manipulación de animales
contaminados, por ingesta de leche o de sus productos no pasteurizados y de carnes poco
cocidas. En países desarrollados es una enfermedad típicamente ocupacional donde las personas
más expuestas son veterinarios, peones de campo y trabajadores de la industria de la carne. El
periodo de incubación dura de 1 a 6 semanas. El inicio de las manifestaciones clínicas se
caracteriza por fiebre, artralgias, mialgias y diaforesis. Las manifestaciones clínicas dependen
de la vía de transmisión del organismo.

Aunque la incidencia de la brucelosis ha disminuido en los últimos años, es todavía una

enfermedad que se debe tener presente. De hecho, la brucelosis integra el diagnóstico
diferencial de muchas infecciones, por lo cual el laboratorio debe estar preparado para procesar
hemocultivos en los que se sospeche su presencia. En pacientes con brucelosis, los
hemocultivos son positivos en el 70-90%. La septicemia se presenta durante las primeras 3
semanas de la enfermedad. Brucella es una bacteria intracelular exigente de desarrollo lento.

Para su aislamiento se ha utilizado clásicamente el medio de cultivo de Castañeda o cualquier

frasco de hemocultivo con medio bifásico. La ventaja de estos medios es que permiten

26 Maracaibo, 2010
 Toma de Muestra y Procesamiento de Hemocultivos

resembrar el medio líquido sobre la fase sólida sin necesidad de abrir o pinchar el frasco. Los
frascos deben ventilarse continuamente e incubarse en 10% de CO2 a 37ºC por un mínimo de 4
semanas. La lectura se realiza diariamente y la bacteria se detecta generalmente entre 4 y 7 días.
Deben hacerse subcultivos ciegos a los 4 días y después una vez por semana en agar sangre
Brucella e incubar las placas por un mínimo de 3 semanas.

Las colonias tienen un aspecto característico, son translucidas y agrupadas de forma de rosario,
también llamada de cielo estrellado. Las placas con crecimiento sospechoso de Brucella deben
sellarse y se sugiere realizar pruebas preliminares, incluyendo coloración de Gram (cocobacilos
Gram negativo pequeños, en la coloración inicial a partir de los frascos pueden verse como
cocobacilos Gram positivos o Gram variable), ureasa positiva rápida, oxidasa y nitratos
positiva. Los aislamientos deben referirse a laboratorios de referencia apropiados.

Actualmente, con los sistemas automatizados el microorganismo se detecta más rápidamente en

los frascos aerobios. Es recomendable, sin embargo, prolongar el período de incubación hasta
21 días, realizar un subcultivo en agar sangre y/o agar chocolate, independientemente de la
técnica utilizada, e incubar la placa 3 ó 4 días antes de descartar el hemocultivo como negativo.
Los aislamientos detectados con el sistema Isolator® (lisis-centrifugación) crecen después de 7
días de incubación. Pero este sistema falla en detectar un número sustancial de aislamientos
detectados por el sistema BACTEC. Los sistemas BACTEC y BacT/ALERT aumentan su
recuperación y reducen la necesidad de incubación prolongada (dentro de 4 días) sin hacer
subcultivos de los frascos negativos. Empleando un volumen suficiente de sangre, Brucella es
detectada con un protocolo de 5 días de incubación.

Brucella es uno de los agentes más comunes causantes de infecciones adquiridas en el

laboratorio y es también un agente potencial de bioterrorismo. Se exige un nivel 2 de seguridad
para procesar muestras sospechosas de contener Brucella y un nivel de seguridad 3 para
manipular los cultivos de este microorganismo.

Campylobacter y Helicobacter
Son bacilos curvos, pequeños y delgados que pueden requerir Naranja de Acridina para su
visualización a partir de frascos positivos. Diversas especies de Campylobacter, incluyendo C.
jejuni, C. lari y C. fetus, son aisladas ocasionalmente de sangre, crecen usualmente dentro de 5
días. Los subcultivos deben hacerse a placas de columbia sangre agar base, medio específico
Campy (sin antibióticos), e incubadas en atmósfera microaerofilica a 35-37ºC por 3 días.
Helicobacter cinaedi y otras especies (H. westmeadii) se han recuperado de sangre, usualmente
de pacientes inmunocomprometidos, después de 7 días de incubación, pero la coloración de
Gram falla en revelar estos organismos, requiriéndose la coloración de Naranja de Acridina.

Legionella
Legionella es un bacilo Gram negativo ampliamente distribuido en ambientes acuáticos
naturales y artificiales. La enfermedad se produce cuando individuos susceptibles inhalan la
bacteria contenida en aerosoles procedentes de una fuente ambiental contaminada. La
legionelosis puede tener dos presentaciones clínicas diferentes: la enfermedad del legionario y
la Fiebre de Pontiac. En la primera, la enfermedad suele manifestarse como una neumonía,
aunque el espectro clínico puede variar desde una enfermedad leve-moderada hasta la

Práctica Profesional de Bacteriología. Escuela de Bioanálisis. LUZ. 27

 Manual de Procedimientos en Bacteriología Clínica

enfermedad grave con fallo multiorgánico. La Fiebre de Pontiac, es una enfermedad

autolimitada que da lugar a un cuadro clínico similar al de la gripe. La neumonía causada por
Legionella es clínicamente indistinguible de otras neumonías y se caracteriza por un período de
incubación que oscila entre 2 y 10 días. El comienzo de la enfermedad suele ser abrupto, con
fiebre alta, malestar general, debilidad, mialgias, dolor de cabeza y tos inicialmente no
productiva, y frecuentemente requiere hospitalización. El tratamiento con antimicrobianos,
generalmente macrólidos o quinolonas, es eficaz. Legionella sobrevive bien en los caldos de
cultivo para sangre comerciales, pero no se multiplica en ellos. Para su detección se requiere
caldo BCYEα o lisis-centrifugación y la siembra en placas BCYEα incubadas en atmósfera
húmeda, el crecimiento generalmente empieza a ser visible a partir del 3er día de incubación,
los cultivos se deben mantener en estas condiciones 10-12 días antes de considerarlos negativos.

Mycoplasma
Mycoplasma hominis ha sido implicado como causa de sepsis post-parto, pero su significado
clínico es dudoso. Puede recuperarse durante los episodios de fiebre puerperal después de los
procedimientos ginecológicos o urológicos, o en pacientes inmunodeprimidos. Suelen ser
bacteriemias transitorias autolimitadas que evolucionan bien, incluso sin tratamiento específico.
Se han descrito también bacteriemias por M. hominis en pacientes quemados, leucémicos,
politraumatizados y trasplantados renales. Los aislamientos pueden recuperarse a partir de
sistemas de hemocultivo automatizados y no automatizados. No obstante, como el SPS los
inhibe y pudieran no ser detectados, es conveniente realizar un subcultivo en medios específicos
para micoplasmas al finalizar el período de incubación de los frascos (7 días).

En mujeres con infección pélvica o postparto y sospecha de bacteriemia con hemocultivos

negativos es aconsejable realizar un subcultivo en medios específicos después de 7 días de
incubación. En el agar sangre incubada 72 ó 96 horas en 5-10% de CO2 se puede advertir la
presencia de micro-colonias y no observar microorganismos en la coloración de Gram. Este
hecho debe hacer sospechar la posibilidad de la presencia de micoplasma. También se puede
realizar una coloración de Dienes de las microcolonias. M. hominis crece bien en el medio Plus
Anaerobio/F de Bactec 9240, aunque el sistema no lo detecta.

Con respecto a M. pneumoniae puede causar septicemia. Pero los sistemas de cultivo de sangre
estándar raramente soportan el crecimiento de organismos que carecen de pared celular sin la
adición de gelatina para neutralizar el efecto inhibitorio del SPS y arginina para reforzar su
crecimiento, pero puede ser visualizado en frascos positivos sí se emplea la coloración de
Naranja de Acridina. Para su subcultivo, se requieren medios especiales, tales como Shepard`s
A-7 o el medio bifásico SP4, e incubación hasta por 7 días a 35ºC en 5% de CO 2
preferiblemente en anaerobiosis. Ocasionalmente puede crecer en placas de Agar Columbia
CNA. Un pre-requisito para que el laboratorio pueda intentar el aislamiento de micoplasmas es
que el paciente no esté recibiendo tratamiento antimicrobiano.

Leptospira
Produce la leptospirosis, una infección aguda que se presenta con un amplio espectro de
manifestaciones clínicas. El microorganismo suele estar presente en la sangre en la fase aguda,
la primera semana de la enfermedad. El cultivo se realiza añadiendo de 1 a 3 gotas de sangre
fresca del paciente a 5 mL de medio de Stuart o a los medios semisólidos de Fletcher o

28 Maracaibo, 2010
 Toma de Muestra y Procesamiento de Hemocultivos

Ellinghausen o Caldo PLM-5, al lado de la cama del paciente. Pueden emplearse otros medios
que contengan albúmina de suero bovino y Tween 80. Previamente a la inoculación de la sangre
se añade suero fresco de conejo a una concentración del 14%. Los medios se incuban hasta por
13 semanas a 28-30ºC (no sobrevive a 35ºC) en aerobiosis y en oscuridad; y se examinan
semanalmente bajo la luz del microscopio para visualizar la presencia de espiroquetas
enrolladas, así como su motilidad. Las leptospiras se desarrollan a 1-3 cm. por debajo de la
superficie, generalmente dentro de 2 semanas.

El examen directo de la sangre en campo oscuro no es recomendable ya que es fácil confundir

Leptospira con restos de hematíes. La técnica descrita no es sencilla, por lo que se aconseja
determinar la presencia de anticuerpos específicos siempre que se sospeche este proceso
infeccioso. Alternativamente, se puede recolectar la sangre en tubos con heparina, oxalato o
citrato y mantenerla a temperatura ambiente para su envío a un laboratorio de referencia.

Mycobacterium
Hemocultivos para micobacterias, están indicados para detectar infecciones diseminadas por el
complejo M. avium-M. intracellulare en pacientes con SIDA. En el caso de M. tuberculosis, el
42% de los pacientes HIV positivos con tuberculosis tienen hemocultivos positivos para este
microorganismo. Para hemocultivos convencionales, pueden emplearse caldo Middlebrook 7H9
con 0,05% de SPS o el caldo infusión cerebro-corazón con 0,5% de polisorbato 80, con o sin
agar Middlebrook 7H11 en bisel. Otro método muy útil es el de lisis-centrifugación. Puede ser
eficaz realizar una combinación de dos métodos, en primer lugar procesar la sangre por la
técnica de lisis centrifugación y sembrar el sedimento después en un frasco de los sistemas
automáticos con el fin de acortar el período de incubación. Existe disponibilidad de numerosos
métodos de detección modernos que utilizan caldos especiales que permiten una mayor
sensibilidad en la detección de micobacterias en muestras de sangre y reducen en grado
significativo el tiempo requerido para que los hemocultivos se tornen positivos.

Capnocytophaga
Es un BGN fusiforme o pleomórfico, catalasa y oxidasa negativo. Forma parte de la flora
normal orofaríngea. También se ha hallado en la vagina y en el tracto gastrointestinal. Crece
muy lentamente, observándose colonias pequeñas en GC después de 48 horas de incubación en
atmósfera rica en CO2. Puede crecer en VCN debido a su resistencia a vancomicina, colistina y
trimethoprim. Puede ocasionar periodontitis, bacteriemia, artritis séptica, osteomielitis, abscesos
pulmonares y subfrénicos, linfadenitis cervical, sinusitis, conjuntivitis y queratitis. La mayoría
de las infecciones se producen en pacientes con trastornos hematológicos y neutropenia intensa.
Generalmente la puerta de entrada en el torrente sanguíneo es partir de ulceraciones de la
mucosa oral. Son sensibles a la penicilina, ampicilina, carbenicilina, cloranfenicol, eritromicina,
clindamicina, metronidazol y quinolonas, y uniformemente resistentes a vancomicina,
aminoglucósidos, trimethoprim sulfametoxazole y polimixina B.

Bacterias con Pared Celular Deficiente

Las llamadas formas L o bacterias deficitarias en pared raramente se aíslan de hemocultivos.
Para conseguirlo hay que estabilizar osmóticamente el medio con sacarosa o manitol al 10% en
el laboratorio, lo que provoca un importante riesgo de contaminación, o bien emplear medios
específicos comerciales. A veces, en pacientes tratados con antibióticos betalactámicos se

Práctica Profesional de Bacteriología. Escuela de Bioanálisis. LUZ. 29

 Manual de Procedimientos en Bacteriología Clínica

recuperan en el subcultivo formas bacilares Gram-negativas alargadas por alteración de la pared

celular.

Bacterias Dependientes de Antibióticos

El uso prolongado de antimicrobianos de amplio espectro es uno de los factores que ha
contribuido a la aparición de enterococos resistentes a la vancomicina (ERV). En los últimos
años se han descrito casos de pacientes sometidos a tratamiento con vancomicina en los que se
han aislado enterococos dependientes de vancomicina (EVD), mutantes de ERV que sólo crecen
en presencia de glicopéptidos y que pierden esta dependencia en los subcultivos sucesivos. Su
significado clínico aún no ha sido aclarado. Se puede sospechar la presencia de estos
microorganismos en pacientes con múltiples tratamientos antimicrobianos y de larga duración,
especialmente si en el entorno existen ERV y si se observan en la coloración de Gram formas
semejantes a las descritas para Abiotrophia.

Control de Calidad en Hemocultivo

Las actividades de Control de Calidad incluyen la atención a las etapas:
 Pre-analítica
 Analítica
 Post-analítica

Etapa Pre-Analítica
El laboratorio de Bacteriología debe proporcionar protocolos de recolección de
hemocultivos en los cuales se indiquen debidamente las normas específicas para el personal
sanitario en relación con la obtención de la muestra, tales como:
 La asepsia de la piel
 La venopunción y la toma de hemocultivos a partir de cualquier otro sitio posible,
incluyendo vías o líneas centrales
 La inoculación de los frascos de hemocultivo
 Recomendaciones sobre el número e intervalo de extracción de los hemocultivos, el
volumen de sangre para cultivar, el manejo de especímenes de bajo volumen, la
selección del tipo de frasco o medio de cultivo
 Los criterios de rechazo de muestras
 El etiquetado e identificación de los frascos y
 El transporte de los frascos al laboratorio.

Las actividades de control de calidad en esta etapa incluyen:

 Monitorear mensualmente la tasa de contaminación, para determinar sí todos los
que toman hemocultivos siguen apropiadamente el procedimiento (ver más
adelante).
 En cuanto al volumen de sangre añadido a los frascos:
 Debe monitorearse, por lo menos anualmente por un período de tiempo
suficiente, para obtener información de las áreas donde son tomados la
mayoría de los hemocultivos.
 Se debe determinar el porcentaje de hemocultivos con un volumen de sangre
menor o mayor a 2 mL con respecto al volumen recomendado por tipo de

30 Maracaibo, 2010
 Toma de Muestra y Procesamiento de Hemocultivos

frasco. Sí se detectan fallas se debe proporcionar la información apropiada a

los flebotomistas con problemas.
 Deben considerarse por separado los hemocultivos pediátricos y los
hemocultivos de adultos, debido a que llevan un volumen diferente de
sangre.
 Con respecto al proceso de transporte de los hemocultivos, el personal de
laboratorio debe controlar en particular:
 La temperatura a la cual fueron mantenidos los frascos una vez tomada la
muestra.
 El tiempo máximo de envío al laboratorio
 El rastreo de las operaciones
 Los procedimientos de seguridad contra peligros biológicos (sí fueron
cumplidos o no)

Etapa Analítica
Preparación de medios y reactivos
Frascos de hemocultivo
 Verificar que cada lote de medio soporte el crecimiento de bacterias que
probablemente estén presentes en la sangre. Los frascos para aerobios deben
probarse con:
 Pseudomonas aeruginosa (ATCC 27853)
 Streptococcus pneumoniae (ATCC 6305)
 Los frascos para anaerobios deben probarse con:
 Bacteroides fragilis (ATCC 25285)
 Streptococcus pneumoniae (ATCC 6305)

Método de prueba:
Preparar un cultivo en caldo de cada microorganismo equivalente a 0,5 del estándar de
McFarland, inocular cada botella con 0,01mL de la suspensión e incubar hasta 5 días y observar
crecimiento visible. Frascos de hemocultivos comerciales no requieren chequeo de control de
calidad de rutina. Verificar la fecha de expiración de los frascos.

Para los medios en placa

Verificar la fecha de expiración y los parámetros de control de calidad para cada uno de
ellos. Chequear el Agar Chocolate (GC) con cepas de H. influenzae y N. gonorrhoeae.

Previo a la instalación de nuevos sistemas de hemocultivo:

Determinar si soporta el crecimiento de una variedad de microorganismos, incluyendo
cocos y bacilos Gram negativos fastidiosos, usando frascos suplementadas con sangre humana de
donantes.

Período de incubación
 Realizar análisis estadísticos periódicos para determinar si el tiempo de incubación
de los frascos es suficiente o puede ser disminuido sin pérdida de información
clínicamente significativa.

Práctica Profesional de Bacteriología. Escuela de Bioanálisis. LUZ. 31

 Manual de Procedimientos en Bacteriología Clínica

 Tabular el número de cultivos positivos de 4 hasta 7 días, eliminando hemocultivos

con aislamientos considerados contaminantes de piel.
 Para los cultivos positivos verdaderos revisar si clínicamente se considero que los
pacientes tuvieron una verdadera bacteriemia.
 Revisar los resultados obtenidos con el servicio de control de enfermedades
infecciosas para establecer conjuntamente con ellos un período de incubación
razonable (costo-efectivo) de los frascos para la detección de bacteriemia.

Competencia del Bioanalista y Reporte de los Resultados

Para medir la habilidad del bioanalista en la interpretación apropiada de los resultados de
los extendidos de los frascos deben correlacionarse los resultados de las coloraciones (los cuales
deben ser reportados inmediatamente a los médicos) y los resultados de los cultivos. Este aspecto es
importante que sea monitoreado, debido a que la falta de correlación entre estos tiene consecuencias
en el cuidado de los pacientes. Los médicos pueden colocar antibióticos inapropiados si la
interpretación del extendido es incorrecta. Debe monitorearse también el tiempo que transcurre entre
los primeros indicios de positividad y la comunicación de estos resultados a los médicos. Tales
monitoreos deben realizarse individualmente por Bioanalista y pueden hacerse anualmente.

Fase Post-Analítica
Debe monitorearse:
 La estructuración y formato de los resultados
 El reporte de los resultados al médico y a los pacientes
Análisis de los datos
Periódicamente, y al menos una vez al año, deben evaluarse los resultados obtenidos del
procesamiento de los hemocultivos. El análisis de estos datos proporciona una valiosa información
sobre el control de calidad interno del laboratorio. Se evaluará la tasa de contaminación, la tasa de
positividad, la de falsos positivos y la cifra total, el tipo de microorganismos aislados y el número de
hemocultivos por paciente. Es importante evaluar el número de bacteriemias, así como su origen
(comunitario o intrahospitalario) y su localización por servicios, ya que esto proporciona datos
esenciales para el conocimiento, vigilancia y control de la infección.

Tasa de contaminación de hemocultivos:

 Considerar sólo como contaminantes de piel en muestras obtenidas por venopunción
la presencia de: SCN, bacilos Gram positivo corineformes, Micrococcus,
Propionibacterium o especies de Bacillus no B. anthracis. Incluir como
contaminante de la piel todo cultivo positivo a estos microorganismos aún si ambos
frascos fueron positivos o si solamente se tomo al paciente un solo hemocultivo.
 Si más de un hemocultivo del mismo paciente es positivo para alguno de estos
microorganismos, estos hemocultivos no pueden ser considerados como
contaminados con microbiota de piel. En el caso de SCN, chequear si el
antibiograma es consistente con el aislamiento de la misma cepa.
 Para calcular el promedio de contaminación debe dividirse el número de
hemocultivos que contienen contaminantes de la piel por el número total de
hemocultivos tomados por venopunción.
 Monitorear por separado los servicios o unidades hospitalarias con altas tasas de
contaminación, tales como los servicios de emergencia y oncología pediátrica. En el

32 Maracaibo, 2010
 Toma de Muestra y Procesamiento de Hemocultivos

caso de los hemocultivos de neonatos, estos representan un problema especial en el

monitoreo de “contaminación” por la práctica común de obtención de un solo
hemocultivo, debido a la dificultad de recolectar varios hemocultivos en este tipo de
paciente. Se ha sugerido que el valor de la proteína C-reactiva puede ser usado para
distinguir contaminación de infección en hemocultivos con SCN. No obstante, la
importancia clínica de estos aislamientos debe ser determinada por los médicos y el
Comité de Control de Enfermedades Infecciosas.
 También debe monitorearse por separado la tasa de contaminación de los
hemocultivos obtenidos a través de vías y los obtenidos percutáneamente.
 Si la tasa de contaminación está por encima de 2-3% debe instituirse el monitoreo
individual de los flebotomistas, con el consejo y readiestramiento necesario sobre la
importancia de una técnica aséptica de extracción de la sangre, la correcta
inoculación de los frascos, y el control y cambio, si es necesario de los antisépticos
empleados durante el procedimiento.

Proporción de hemocultivos positivos

Se calcula dividiendo el número de cultivos positivos por el total de hemocultivos
recibidos. El promedio debe estar en un rango de 6 a 15%. Si la positividad es menor del 5% o por
encima del 15% debe iniciarse una investigación para determinar sí los médicos ordenan
apropiadamente los hemocultivos. La tasa de positividad estimada en Estados Unidos es del 7,7% de
positividad por criterios de Laboratorio y del 8,2% por criterios clínicos. Dependiendo del tipo de
hospital (cuidados primarios vs. terciarios, docentes vs. comunitarios) la tasa de positividad puede
ser alta o baja.

Cuadro 6 Factores a Monitorear en el Control de Calidad de Hemocultivos

Control de Calidad
Factores a Monitorear Tiempo
Tasa de “contaminación” en base a parámetros específicos de
Mensualmente, reportar a las unidades o
laboratorio. Hacer auditorias separadas por servicio,
servicios que exceden la tasa de
flebotomistas (por Ej. enfermeras vs laboratoristas) y cultivos
contaminación establecida
periféricos vs. vía central
Volumen de sangre obtenido por servicio. Si se encuentran
problemas, puede ser necesario el monitoreo individual de los Anualmente. Por un tiempo limitado
flebotomistas
Al principio mensualmente, posteriormente
Un solo hemocultivo sí esto no es un problema puede hacerse
menos frecuentemente
Muchos hemocultivos Constantemente
Mensualmente, por servicio y por tipo de
Porcentaje de hemocultivos positivos
paciente
Correlación entre los resultados de la coloración del extendido
Anualmente, por Bioanalista
de los frascos y los resultados del cultivo
Por períodos de tiempo limitados.
Tiempo que transcurre entre la notificación de los resultados
Anualmente o más frecuentemente sí es
al médico (informe provisional) y la detección de los
necesario (de acuerdo a sugerencias de los
hemocultivos positivos
médicos)
Comparación de los resultados de las pruebas directas de
susceptibilidad con las pruebas definitivas a partir de Constantemente
aislamientos puros
Transcripción de los resultados Periódicamente

Práctica Profesional de Bacteriología. Escuela de Bioanálisis. LUZ. 33

 Manual de Procedimientos en Bacteriología Clínica

Número de hemocultivos por paciente

Dado que un solo hemocultivo nunca es apropiado, debe hacerse el monitoreo del
porcentaje de hemocultivos solitarios sí el laboratorio no tiene una política definida y automatizada
para el envío de un segundo hemocultivo. Sin embargo, algunos pacientes de áreas de cuidado
crítico (neonatología) pueden necesitar 2 frascos como mínimo debido a la dificultad de recolectar
hemocultivos múltiples. En Estados Unidos en menos del 10% de la mayoría de los hospitales, los
hemocultivos solitarios constituyen el 42,5% de todos los hemocultivos obtenidos, mientras que más
del 10% de los hospitales tenían solo 3,4% de hemocultivos solitarios (Cockerill, 2004).
Ocasionalmente debe monitorearse la ocurrencia de muchos hemocultivos ordenados por paciente
(>4).

Limitaciones de los hemocultivos

No existe un verdadero “Gold Standard” para el diagnóstico de las infecciones del torrente
sanguíneo. Todos los métodos y sistemas disponibles requieren horas a días de incubación antes de
que el crecimiento sea detectado. No hay un único sistema comercialmente disponible o un medio
de cultivo que haya mostrado ser el más adecuado para la detección de todos los patógenos
sanguíneos potenciales. Los sistemas automatizados no permiten detectar el crecimiento de algunas
bacterias como Francisella spp., Leptospira spp., Bartonella spp. y Mycoplasma spp., parásitos ni
virus.

Bibliografía Consultada
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 Toma de Muestra y Procesamiento de Hemocultivos

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Práctica Profesional de Bacteriología. Escuela de Bioanálisis. LUZ. 35

 Manual de Procedimientos en Bacteriología Clínica

Capítulo Infecciones Asociadas a Catéteres

2 y Dispositivos Intravasculares
Introducción
Los catéteres intravasculares son dispositivos que permiten acceder al compartimiento
intravascular a nivel central. Varían en su diseño y estructura según se utilicen en forma temporal
(días) o permanente (semanas, meses), así como también en el material con que son fabricados, en el
número de lúmenes, y el motivo por el cual se instalan. El uso de estos dispositivos es de gran
utilidad clínica, especialmente en pacientes en situación crítica o con patologías agudas o crónicas
graves, ya que permiten un acceso rápido y seguro al torrente sanguíneo, pudiendo ser utilizados
para tomar muestras de sangre, administrar productos sanguíneos, medicamentos, nutrición
parenteral total y otros fluidos; y en el caso de los catéteres arteriales pulmonares, permiten el
monitoreo hemodinámico de la función cardiaca.

Debido a que estos catéteres penetran el integumento, ellos colocan al paciente en riesgo de
desarrollar infección local, y en un número significativo de casos, la infección puede progresar a
bacteriemia, fungemia, flebitis supurativa o trombosis séptica. La infección relacionada a catéteres
venosos centrales (CVC) constituye la primera causa de bacteriemia nosocomial primaria y está
asociada a un incremento de la morbimortalidad, a una estancia hospitalaria prolongada y a un
incremento de los costos médicos asociados.

Dada la importancia de las infecciones asociadas a catéteres, el objetivo principal de este

capítulo, es presentar los métodos diagnósticos disponibles rutinariamente en los laboratorios
microbiológicos, de acuerdo a los lineamientos establecidos por los comités de consenso para el
diagnóstico de las infecciones relacionadas a catéteres.

Clasificación de los Catéteres Vasculares Centrales

Según la localización: pueden ser periféricos o centrales. Según el tiempo de permanencia:
pueden ser temporales, transitorios o de corta duración; o permanentes o de larga duración. Según el
material de fabricación: pueden ser de silicona, teflón, recubiertos o impregnados.

Cuadro 7 Clasificación de los Catéteres Vasculares Centrales

*Catéter venoso central perifericamente instalado.

36 Maracaibo, 2010
 Procesamiento y Toma de Muestra de Catéteres y Dispositivos Intravasculares

Catéter Venoso Central Común (CVC)

Es el dispositivo intravascular más ampliamente usado. Se inserta en forma percutánea, a
través de un acceso venoso central (vena subclavia, yugular o femoral). Son frecuentemente
utilizados en unidades de cuidados intensivos con varios objetivos: infusión de fármacos, monitoreo
hemodinámico, plasmaféresis, nutrición parenteral total, etc. La tasa de infección asociada al uso de
este tipo de dispositivos ha ido en aumento en las últimas décadas, debido probablemente a su
mayor uso y a la mayor complejidad de los pacientes en quienes se utilizan. Son ejemplos de
catéteres percutáneos de corto plazo: los catéteres Swan-Ganz, Intracath, Cordis, multilumen, etc.

Figura 4 Catéter Swan Ganz Figura 5 Catéter Intracath

El catéter Swan Ganz: se introduce por medios invasivos al corazón, atraviesa las cámaras
cardíacas hasta llegar al capilar pulmonar con la finalidad de medir las presiones, determinar el gasto
cardíaco y la resistencia vascular. El catéter Intracath se utiliza para terapia intravenosa central en
pacientes críticos.

Figura 6 Catéter Multilumen Figura 7 Catéter Cordis

Figura 7 Inserción de Catéter Swan-Ganz

Práctica Profesional de Bacteriología. Escuela de Bioanálisis. LUZ. 37

 Manual de Procedimientos en Bacteriología Clínica

Catéter Central Periféricamente Instalado (CCPI)

Es un dispositivo de silicona biocompatible y radiopaco, cuya inserción es periférica, pero
la ubicación de su extremo distal ("punta") es central (vena cava superior o subclavia). Posee un
introductor de teflón divisible o scalp vein. Se utiliza ampliamente en neonatología, ya que permite
un acceso central rápido y seguro por vía periférica, la administración de todo tipo de soluciones,
mayor comodidad y confort al paciente y registra una baja incidencia de complicaciones. Se han
desarrollado también CCPI para larga duración.

Catéter de Hemodiálisis
Para este tipo de catéter la infección del sitio de inserción y la infección del túnel tienen las
mismas definiciones que las de los otros catéteres (ver más adelante). En la infección del torrente
sanguíneo se debe tener en consideración que el cuadro febril, con escalofríos y eventual
compromiso hemodinámico, si bien puede presentarse en cualquier momento del período inter-
diálisis, muchas veces ocurre durante la diálisis. Todavía no existe consenso para este tipo de
catéter, sobre cuál es el lugar más adecuado para la toma de los hemocultivos. En hemodiálisis el
circuito extracorpóreo es una extensión del aparato circulatorio y por lo tanto, los hemocultivos
tomados desde el circuito han sido valorados como equivalentes a los tomados desde una vena
periférica. Los cultivos tomados directamente desde las ramas del catéter tienen una mayor
posibilidad de ser falsamente positivos dado que el 68% de los catéteres se colonizan sin
necesariamente producir bacteriemia.

Figura 8 Catéter para Hemodiálisis

Catéter Tunelizado
Es el dispositivo más utilizado cuando se necesita un acceso prolongado a la circulación
central, ya sea para la administración de quimioterapia o apoyo nutricional parenteral de larga
duración. Existen dos tipos, los percutáneos y los de puerto subcutáneo.

Catéter tunelizado del tipo percutáneo

Estos poseen un cuff o manguito de dacrón, que facilita el crecimiento de tejido fibroso
alrededor del catéter inhibiendo la migración de los microorganismos a lo largo de la superficie del
catéter y un trayecto subcutáneo que impide su desplazamiento, mientras que su extremo proximal
queda externalizado. Ejemplo: catéteres Broviac, Hickman, Raaf, Groshong, Quinton, etc.

38 Maracaibo, 2010
 Procesamiento y Toma de Muestra de Catéteres y Dispositivos Intravasculares

Figura 9 Catéter Broviac

Figura 10 Catéter Hickman Figura 11 Catéter Raaf Figura 11 Catéter Groshong

Figura 12 Catéter Quinton

Figura 13 Colocación de Catéter Percutáneo

Catéteres de puertos subcutáneos.

Poseen un reservorio ubicado en un bolsillo subcutáneo y quedan totalmente implantados.
Ejemplo: catéteres Infus-A-Port, Port-A-Cath, Med-i-Port, etc.

Práctica Profesional de Bacteriología. Escuela de Bioanálisis. LUZ. 39

 Manual de Procedimientos en Bacteriología Clínica

Figura 14 Catéter Infus-A-Port Figura 14 Catéter Port-A-Cath

En los catéteres Infus-A-Port, el tubo blanco se coloca en una de las venas principales, muy
cerca del corazón. El disco metálico queda bajo la piel, aproximadamente cuatro pulgadas encima
del pezón. Hay una membrana en el centro del disco que permite que una aguja pase. Los Port-A-
Cath Se implantan habitualmente en la vena subclavia

Figura 15 Catéter Med-I-Port

(Puerto de medicación para administración con
jeringa) provee la opción de administrar medicación
líquida a través del tubo sin quitarle el resucitador al
paciente, y así ahorrar valiosos segundos en la cadena
de supervivencia.

Figura 15 Implantación de Puerto Subcutáneo

Ambos tipos (los catéteres percutáneos y los puertos subcutáneos) poseen ventajas y
desventajas, de modo que la elección de uno u otro se realiza en base a cada paciente, atendiendo a
factores tales como: edad, condición social, frecuencia de controles, disponibilidad quirúrgica, etc.
Los puertos subcutáneos tienen una menor tasa de infecciones (pero cuando se infecta el reservorio,
las complicaciones son más graves), y ocurre una mayor tasa de complicaciones de tipo mecánico.

40 Maracaibo, 2010
 Procesamiento y Toma de Muestra de Catéteres y Dispositivos Intravasculares

Factores de Riesgo para el Desarrollo de Infecciones Asociadas a

Catéteres
Entre los factores de riesgo que influyen en la infección asociada a catéter (IAC) destacan,
el número de luces del catéter, las características propias del catéter, el lugar de inserción y las
propiedades intrínsecas de los microorganismos.

Número de luces
La utilización de catéteres multilumen con respecto a los de una sola luz conlleva un mayor
riesgo infeccioso, ya que la inserción de los mismos supone un incremento del trauma y una mayor
manipulación en el sitio de inserción.

Características del catéter

Según la composición del catéter existe un mayor o menor riesgo de infección. Estudios
realizados in vitro muestran que en catéteres de polivinilcloruro o polietileno los microorganismos
se adhieren con mayor facilidad que en los de Teflón, elastómeros de silicona o poliuretano.
Asimismo la superficie de algunos catéteres, debido a su composición, presentan irregularidades que
favorecen la adherencia de ciertos microorganismos con la subsiguiente infección. Por otra parte,
ciertos materiales de catéteres son más trombogénicos.

Lugar de inserción
Los catéteres colocados en la vena subclavia presentan complicaciones de tipo mecánico
(trombosis, estenosis, perforación.) y baja incidencia de complicaciones infecciosas. Por el contrario
los catéteres insertados en la vena yugular tienen menos complicaciones mecánicas y más riesgo
infeccioso. Con respecto a los catéteres femorales también son considerados de alto riesgo
infeccioso debido a que la densidad bacteriana es más elevada en este punto por la posible
colonización por bacterias entéricas.

Propiedades intrínsecas de los microorganismos

La capacidad de adherencia de un microorganismo es un factor importante para el
desarrollo de infecciones relacionadas al catéter. Por ejemplo, S. aureus puede adherirse a las
proteínas del hospedero (Ej.: fibronectina) normalmente presente en los catéteres, y los SCN, se
adhieren más que otros gérmenes al polímero de superficie. Asimismo, algunas cepas de SCN
producen un polisacárido extracelular, denominado "slime" que recubre e interrelaciona a las
bacterias que colonizan la superficie del catéter. Este polisacárido protege a los microorganismos de
la acción de los mecanismos de defensa del hospedero y de la acción de los agentes antimicrobianos.

Otros factores
Además de todos estos factores, el riesgo de desarrollo de una bacteriemia asociada con
catéteres se relaciona con el paciente y sus mecanismos de defensa intrínsecos (granulocitopenia,
quimioterapia inmunosupresora, pérdida de la integridad cutánea, edad mayor de 60 años y gravedad
de la enfermedad subyacente), así como con la cateterización repetida, la duración de la
cateterización, la exposición del catéter a bacteriemia, la presencia de un foco infeccioso en otro
sitio del organismo, el tipo de vendaje utilizado y la experiencia del personal encargado de insertar
el catéter.

Práctica Profesional de Bacteriología. Escuela de Bioanálisis. LUZ. 41

 Manual de Procedimientos en Bacteriología Clínica

Patogenia
La llegada de los microorganismos al torrente circulatorio se produce fundamentalmente
por dos vías: por la superficie externa del catéter, vía luminal, o por el interior del catéter, vía
intraluminal, a partir de una conexión o de un líquido de infusión contaminado. Aunque es menos
frecuente, también se puede colonizar la punta del catéter por siembra hematógena, a partir de un
foco séptico distante.

Piel y progresión luminal

En la vía luminal los microorganismos avanzan por la superficie externa del catéter, desde
el punto de inserción de éste en la piel hasta llegar a la punta. A las 48-72 horas de la implantación
del catéter se forma una película proteica alrededor de la punta de éste, en la cual los
microorganismos se multiplican rápidamente protegidos de las defensas del hospedero y cuando
alcanzan una concentración crítica pasan al torrente sanguíneo y causan bacteriemia. La
colonización de la piel y la progresión de los microorganismos por la superficie externa del catéter
es el origen más frecuente de la IAC (70-90% de los casos). Los microorganismos que acceden a la
punta del catéter proceden, en la mayoría de los casos, de la piel del paciente, pero también pueden
llegar a la punta, a través de las manos del personal sanitario o de objetos inanimados.

Conexión y progresión endoluminal

En un número importante de casos, la puerta de entrada de la infección es la contaminación
de la conexión entre el equipo de infusión y el catéter, al ser manipulado por el personal sanitario
durante los cambios rutinarios del sistema de infusión. Desde la conexión las bacterias migran por el
interior del catéter hasta la punta, eludiendo los mecanismos de defensa del hospedero y causando
IAC. Constituye la segunda causa en frecuencia de IAC (10-50% de los casos) y se asocia con
bacteriemia con mayor frecuencia que la debida a la colonización de la piel.

Contaminación del líquido de infusión

Por lo general, la contaminación intrínseca de los líquidos de infusión en el momento de su
manufacturación es muy rara, debido a las estrictas medidas de control durante la fabricación
industrial. Con mayor frecuencia la contaminación del líquido de infusión es extrínseca,
fundamentalmente por manipulación de sus componentes. En general, se estima que el uso de
fluidos contaminados está involucrado en menos del 3% de los casos en los que ocurre la
contaminación del catéter por vía endoluminal.

Siembra hematógena
La contaminación de las superficies externa e interna de la punta del catéter puede ser
causada por una siembra hematógena a partir de un foco séptico distante (ocurre aproximadamente
en el 3-10% de los casos). La vaina de fibrina que rodea a la punta del catéter protege a los
microorganismos y favorece su multiplicación, originándose una IAC metastásica que puede dar
lugar a una bacteriemia recurrente, a pesar de realizar un tratamiento antimicrobiano adecuado. La
vía hematógena tiene mucha mayor relevancia en los pacientes ingresados en Unidades de Cuidado
Intensivo (UCI), aunque sigue siendo poco frecuente.

42 Maracaibo, 2010
 Procesamiento y Toma de Muestra de Catéteres y Dispositivos Intravasculares

Figura 16 Vías de Infección de un Catéter

Manifestaciones Clínicas
La colonización progresiva e infección del catéter puede pasar desapercibida hasta que el
paciente presenta una bacteriemia. La fiebre con o sin escalofríos es el síntoma capital, debiéndose
sospechar sepsis asociada al catéter en todo paciente portador de uno o más catéteres, que presenta
una cuadro febril sin foco aparente que lo justifique. En ocasiones pueden presentarse signos locales
orientadores, tales como, eritema y otros signos inflamatorios en el lugar de la punción cutánea o en
el trayecto subcutáneo y/o la presencia de una flebitis. El episodio séptico suele desaparecer al
retirar el catéter infectado, a menos que exista una infección local del trayecto subcutáneo, una
flebitis séptica u otra localización metastásica. La bacteriemia de la sepsis asociada a catéter suele
ser continua aunque en algunos casos puede ser intermitente, presentándose durante el período de
utilización de catéteres de uso discontinuo, como los empleados para la diálisis.

Etiología
Las infecciones relacionadas a dispositivos intravasculares son causadas con mayor
frecuencia por la microbiota endógena de la piel. Algunos microorganismos como SCN y
Corynebacterium jeikeium, que se consideraban anteriormente contaminantes, son ahora
reconocidos como patógenos importantes en las infecciones relacionadas a estos dispositivos. El
diagnóstico exacto de estas infecciones puede ser difícil, debido a que las verdaderas infecciones
deben ser distinguidas de la contaminación del catéter durante su remoción del paciente. El
aislamiento de bacilos Gram negativos (BGN) es muy poco frecuente y suele estar relacionado con
la contaminación, extrínseca o intrínseca, de las infusiones, en cuyo caso se produce una
bacteriemia.

Práctica Profesional de Bacteriología. Escuela de Bioanálisis. LUZ. 43

 Manual de Procedimientos en Bacteriología Clínica

Cuadro 8 Microorganismos Frecuentemente Relacionados a Infecciones por

Dispositivos Intravasculares
Microorganismos frecuentemente relacionados a infecciones por dispositivos intravasculares
Staphylococcus aureus
Enterococcus
Candida spp.
Pseudomonas aeruginosa
Enterobacteriaceae
Staphylococcus coagulasa negativo (SCN)
Corynebacterium spp.
Malassezia furfur

Diagnóstico Microbiológico de las Infecciones Asociadas a Catéteres

El simple retiro de un catéter infectado puede ser suficiente para que desaparezca la fiebre,
y constituir este hecho una evidencia indirecta de infección, pero la confirmación de que una
bacteriemia está relacionada al catéter, se basa en la demostración de la presencia del germen
responsable tanto en la sangre como en el catéter. Tradicionalmente esto se realiza mediante el retiro
del catéter y su posterior procesamiento microbiológico, sin embargo, muchos estudios han
demostrado que en más del 70% de los catéteres retirados por sospecha de infección, el cultivo es
negativo, por lo que su retiro no estaba justificado. Además en pacientes críticos o niños pequeños,
con accesos vasculares difíciles, el retiro del catéter puede ser una decisión comprometida y por ello
se han desarrollaron diversos métodos conservadores de diagnóstico que permitan demostrar la
infección del catéter sin la obligatoriedad "a priori" de su retiro. Estos métodos se clasifican en:

Cuadro 9 Clasificación de los Métodos de Laboratorio para el Diagnóstico de

Infecciones Asociadas a Catéteres.

44 Maracaibo, 2010
 Procesamiento y Toma de Muestra de Catéteres y Dispositivos Intravasculares

Métodos que Requieren la Remoción del Catéter

Precisan que el retiro del catéter se realice bajo estrictas normas de asepsia, tanto en la
desinfección de la piel, como en la manipulación posterior del catéter, ya que sólo de este modo
podrán interpretarse correctamente los resultados microbiológicos. Pueden usarse varios segmentos
del catéter para el cultivo, pero los más útiles son la punta y la conexión; y entre éstos, el cultivo de
la punta (2-3 cm. del extremo distal) es el de mayor rendimiento.
Para todos los métodos que requieren la remoción del catéter:
 Deben tomarse dos hemocultivos, uno tomado a través del catéter y uno a partir de un
sitio periférico, al momento de que el catéter vaya a retirarse para ser enviado al
laboratorio para su cultivo.
 Limpiar la piel con alcohol al 70% previo a la remoción del catéter.
 Observando una técnica aséptica, sostener el extremo expuesto del catéter y retirar éste
del paciente cuidadosamente con un instrumento estéril, evitando el contacto con la piel
expuesta, sostener el extremo distal sobre un tubo o un envase estéril, cortar la punta del
catéter con una tijera estéril y colocar las últimas 2 a 3 cm. en el envase.
 Evitar la desecación del catéter cerrando bien el envase y enviar al laboratorio tan pronto
como sea posible.

Entre los métodos más usados que requieren el retiro del catéter están los siguientes:

Cultivo cualitativo de la punta del catéter

Consiste en incubar el segmento del catéter en un medio líquido (CST ó CT), es una técnica
sensible, pero no proporciona información sobre el número de microorganismos presentes.
Adicionalmente, la presencia de un único microorganismo viable puede dar lugar a un cultivo
positivo tras 18 horas de incubación a 35ºC. Por lo que su utilidad está restringida a orientar sobre la
flora presente en el catéter, pero no sirve para diferenciar entre colonización de una verdadera
infección; y por tanto no permite afirmar si el catéter es el responsable de la sepsis. Actualmente no
se recomienda su uso.

Cultivo semicuantitativo (Método de Maki)

Es un método sencillo, pero tiene el inconveniente de no valorar la superficie interna del
catéter, por lo que algunos microorganismos que progresan por vía endoluminal a partir de
contaminaciones de la conexión, pueden no detectarse. Sin embargo, por su rapidez y sencillez,
sigue siendo el método más utilizado. Algunos autores recomiendan que se consideren de valor
recuentos de 5 UFC en catéteres venosos centrales (CVC) si hay la presencia de síntomas clínicos de
infección. Sin embargo, la disminución del umbral de positividad de la prueba de 15 a 5 UFC
mejora la sensibilidad del método pero disminuye su especificidad.

Procedimiento
 Introducir las pinzas en alcohol al 95% y esterilizarlas por flameado. Dejar enfriar.
 Sí la punta del catéter es demasiado larga para ser rotado por la placa, cortarla por la
mitad con unas tijeras estériles y cultivar cada segmento por separado.
 Utilizar pinzas estériles para transferir la punta del catéter desde el envase de transporte
hasta una placa de Agar Sangre Humana (SH).

Práctica Profesional de Bacteriología. Escuela de Bioanálisis. LUZ. 45

 Manual de Procedimientos en Bacteriología Clínica

 Con ayuda de la pinza, presionar ligeramente la superficie externa del catéter sobre la
superficie del agar mediante movimientos rotativos hacia delante y hacia atrás, por lo
menos 3-4 veces, a todo lo ancho de la placa.

Figura 17 Siembra de Catéter por el Método de Maki

 Sumergir nuevamente las pinzas en alcohol y esterilizarlas por flameado.

 Incubar la placa por lo menos hasta 72 horas a 35ºC en atmósfera de CO2.
 No investigar rutinariamente bacterias anaerobias, hongos y micobacterias.
 Después del período de incubación, contar el Nº de unidades Formadoras de Colonias
(UFC) de cada tipo de colonias crecidas en SH.

Figura 17 Placa Sembrada por el Método de Maki

 Punto de corte: >15 UFC de bacterias.

 Reportar el Nº de colonias contadas, la identificación y las pruebas de susceptibilidad a
cada microorganismo presente en contajes >15 UFC. Sí el crecimiento es confluente
reportar, “Cultivo en crecimiento incontable”.
 Anexar al reporte el valor de referencia (>15 UFC).
 Guardar las cepas aisladas por lo menos durante una semana para comparar en caso de
que los hemocultivos resulten positivos y se requieran estudios adicionales.

46 Maracaibo, 2010
 Procesamiento y Toma de Muestra de Catéteres y Dispositivos Intravasculares

Cuadro 10 Informe de los Resultados. Método Semicuantitativo de Maki

Morfologías con contajes >15 UFC Morfologías con contajes <15 UFC
Reportar los patógenos significativos con género
Contar el Nº real de colonias (Ej. 18 UFC) y
y especie (Ej. C. albicans, Streptococcus del
reportar género y especie.
grupo A, S. aureus y BGN).
Para bacilos Gram positivos corineformes no es
Agrupar mezcla de microorganismos de la
necesario reportar hasta el nível de especie.
microbiota de piel (Ej. 25 UFC de microbiota de
Reportar: “Bacilos Gram positivos
piel)
corineformes”.
Si hay diferentes colonias de SCN. Reportar el Reportar los cultivos puros de microorganismos
Nº total de UFC de los mismos, especificando de la piel (Ej. Staphylococcus o Bacilos Gram
que es un cultivo mixto de SCN. positivo)
Los cultivos negativos se reportan: “No se
Sí el crecimiento es confluente reportar: Cultivo
observo crecimiento después de 72 horas de
en crecimiento incontable.
incubación”
Si se obtienen cultivos positivos y no se
recibieron cultivos sanguíneos añadir al reporte
la siguiente nota: “Deben enviarse cultivos
sanguíneos para establecer el diagnóstico de
bacteriemia asociada al catéter”

Interpretación
Sí este contaje (>15 UFC.) se acompaña de signos de infección local o sistémica, es
indicativo de infección relacionada al catéter.

Debido a que el tratamiento de una infección por catéter requiere el retiro de éste y la
aplicación de tratamiento antimicrobiano contra el agente aislado en los hemocultivos, no se deben
realizar rutinariamente pruebas de susceptibilidad para los aislamientos obtenidos de la punta del
catéter, a menos que el hemocultivo sea positivo y se desee comparar los resultados.
Excepcionalmente pueden realizarse pruebas de susceptibilidad a los microorganismos aislados de
catéteres, cuando el médico lo requiera específicamente o cuando se requieran resultados más
rápidos y no pueda esperarse hasta probar los aislamientos de hemocultivos.

Limitaciones
 Este método posee una sensibilidad del 85% para el diagnóstico de Bacteriemia
Asociada a Catéter (BAC), pero su especificidad es baja (76%). Por lo cual, los
hemocultivos de sangre periférica ayudan a la confirmación de BAC.
 Permite recuperar sólo microorganismos extraluminales.
 En el cultivo de catéteres impregnados con antisépticos, se ha demostrado que puede
ocurrir la inhibición de la capacidad de los microorganismos para crecer en SH, dando
como resultado cultivos negativos o con contajes no significativos. Lo cual sugiere que
deben desarrollarse métodos alternativos para el diagnóstico de las infecciones en este
tipo de catéteres.

Método cuantitativo (Método de Cleri)

Esta técnica combina el cultivo de la superficie extraluminal con el de la endoluminal,
mediante lavados sucesivos del lumen del catéter con caldo de cultivo para remover los

Práctica Profesional de Bacteriología. Escuela de Bioanálisis. LUZ. 47

 Manual de Procedimientos en Bacteriología Clínica

microorganismos adheridos. Posteriormente a partir de este lavado se hacen diluciones seriadas para
la siembra de las placas. Más de 1.000 UFC se consideran indicativo de infección por catéter.

Procedimiento
 Transferir asépticamente, el segmento de catéter del envase de transporte a un tubo
estéril (12x75 mm).
 Aspirar 1 mL. de CST con una jeringa estéril e insertar la aguja dentro del lumen del
catéter para dejar fluir el caldo dentro de éste. Repetir este procedimiento 3 veces.
 Tapar el tubo y agitar para desprender las bacterias adheridas.
 Hacer diluciones seriadas 102 y 104 a partir del CST.
 Inocular 0,1 mL del CST (SD), y de las diluciones 102 y 104 en placas de SH y MC.
Distribuir el inóculo para obtener colonias aisladas.
 Incubar la placa de SH por lo menos hasta 72 horas a 35ºC en atmósfera de CO2 y la
placa de MC en aerobiosis.
 No investigar rutinariamente bacterias anaerobias, hongos y micobacterias.
 Después del período de incubación, contar el Nº de cada tipo de colonias crecidas en SH.
El MC se utiliza para ayudar a diferenciar los tipos de colonias.
 Calcular el número de UFC/mL multiplicando el Nº de colonias por el factor de dilución
(10) y por la dilución en la cual se haga el contaje de las colonias.
 Punto de corte: 1.000 UFC/mL.
 Identificar (género y especie) y practicar pruebas de susceptibilidad a todos los
microorganismos presentes en contaje 1.000 UFC/mL. Reportar el contaje y el valor de
referencia o punto de corte.
 Recuentos inferiores a 1.000 UFC, son considerados como posible contaminación o una
fase temprana de colonización. Con este criterio de positividad, la sensibilidad del
método es de un 100% y la especificidad del 92,5%, en los casos de BAC.
 Guardar las cepas aisladas por lo menos durante una semana para comparar en caso de
que los hemocultivos resulten positivos y se requieran estudios adicionales.

Interpretación
Sí un contaje 1.000 UFC/mL se acompaña de signos de infección local o sistémica, es
indicativo de infección relacionada al catéter.

Limitaciones
 Posee una sensibilidad del 75-88% en el diagnóstico de bacteriemia asociada a CVC,
siendo necesario complementar el diagnóstico con hemocultivos de sangre periférica.
 El tratamiento de infecciones por catéter requiere el retiro de éste y la administración de
agentes antimicrobianos contra el o los microorganismos aislados en los hemocultivos
por lo tanto, no es necesario realizar pruebas de susceptibilidad de rutina a los
microorganismos aislados de la punta del catéter, a menos que el médico lo requiera
específicamente para comparar con las pruebas de susceptibilidad del hemocultivo o
cuando se requieran resultados más rápidos y no pueda esperarse hasta probar los
aislamientos de hemocultivos.

48 Maracaibo, 2010
 Procesamiento y Toma de Muestra de Catéteres y Dispositivos Intravasculares

Cuadro 11 Método Cuantitativo de Cleri

0.1 mL dil

0.1 mL dil 0.1 mL dil

1mL CST

9.9 mL SSF 9.9 mL SSF

Puro

10 2 10 4

Método cuantitativo simplificado de Brun-Buisson

Es una modificación del método de Cleri. Este método permite, teóricamente, evaluar de
manera conjunta la colonización intra y luminal al igual que el método de Cleri, mediante lavados
sucesivos de la luz del catéter con caldo de cultivo para remover los microorganismos adheridos.
Sólo existen entre ambos métodos pequeñas diferencias en cuanto a la técnica empleada. Este
procedimiento al igual que el Cleri, se aplica en aquellos catéteres intravasculares en los que se
solicite cultivo cuantitativo de punta de catéter.

Toma de la muestra
La muestra a procesar es el segmento distal del catéter intravascular (3-5 cm) en pacientes
con sospecha de infección sistémica. Este segmento debe enviarse al laboratorio en un frasco estéril,
preferentemente de boca ancha. Si el segmento del catéter recibido fuese de una longitud mayor,
debe cortarse con un bisturí o tijeras estériles en el momento de proceder a su cultivo y procesar los
3-5 cm correspondientes a la punta.

Procedimiento
 Introducir el segmento del catéter con pinzas estériles en un tubo con 1 mL de caldo
BHI (Caldo brain heart infusión) ó CST. Agitar el tubo en vortex durante 1 minuto.
Sembrar 0,1 mL del caldo en una placa de agar sangre para recuento (ocupando toda
la superficie de la placa).
 Incubar las placas a 35ºC en aerobiosis durante 18-48 horas.
 Examinar la placa de agar sangre tras 18-24 horas de incubación.

Práctica Profesional de Bacteriología. Escuela de Bioanálisis. LUZ. 49

 Manual de Procedimientos en Bacteriología Clínica

 Si existe crecimiento de colonias efectuar su recuento y referirlo a UFC/mL,

multiplicando por 10 el número de colonias (un recuento de 100 colonias en la placa
es significativo).
 Si no existe crecimiento bacteriano prolongar la incubación 24 h y realizar una
nueva lectura.
 En aquellos cultivos en que se obtenga un crecimiento de colonias igual o superior a
103 UFC/mL efectuar la identificación de género y especie. El estudio de
sensibilidad a los antimicrobianos se realizará según los criterios establecidos.
 Si en el cultivo no se observa crecimiento bacteriano o éste es inferior a 10 3
colonias/mL, informar como: negativo.
 Si en el cultivo hay crecimiento bacteriano: informar que se aislaron ≥ 103
colonias/mL y las especies bacterianas aisladas.

Interpretación
Cualquier microorganismo que se cultive en contaje ≥ 103 UFC/mL se considera como
potencialmente patógeno y debe ser identificado. Generalmente bastará un diagnóstico genérico para
organismos tales como Corynebacterium spp. y SCN.

Limitaciones
 Este procedimiento no detecta las infecciones asociadas a catéteres causadas por
microorganismos de crecimiento lento. Asimismo, no detecta las infecciones
asociadas a catéteres causadas por microorganismos que no crecen en las
condiciones establecidas (Malassezia furfur, Haemophilus spp.).
 Este procedimiento impide conocer la vía de colonización del catéter.
 El tratamiento antimicrobiano previo a la obtención de la muestra puede alterar los
resultados de los cultivos.

Cuadro 12 Cultivo Cuantitativo Simplificado de Brun-Buisson

1mL caldo BHI

ó CST
Sembrar 0.1 mL del caldo
Agitar en vortex en SH.
1 minuto Incubar a 35ºC de 18-48 h

Método cuantitativo de sonicación (Sheretz y col.)

Este método se basa en el desprendimiento de los microorganismos adheridos al catéter
mediante sonicación (Técnica que consiste en la aplicación de ultrasonidos produciendo una intensa
agitación que despega los microorganismos adheridos al catéter).

50 Maracaibo, 2010
 Procesamiento y Toma de Muestra de Catéteres y Dispositivos Intravasculares

Procedimiento
 Colocar la punta del catéter en 10 mL de CST.
 Sonicar por 1 minuto a 55.000 Hertz l y 125 W.
 Vorterizar por 15 segundos.
 Añadir 0,1 mL del caldo a 9,9 mL de SSF y vorterizar.
 Colocar 0,1 mL del caldo y 0,1 mL de la suspensión en SSF en placas separadas de
SC ó SH, y MC. Dispensar con un propagador (Excel Scientific). Incubar hasta 48-
72 horas.

Interpretación
 Para la interpretación, multiplicar el número de colonias obtenidas en la placa de
cultivo del caldo por 102 UFC.
 Si las colonias son muy numerosas para contarlas, multiplicar entonces el número
de colonias obtenidas en la placa de cultivo de la solución salina por 104 UFC.
 Un contaje >102 UFC se considera significativo de infección relacionada al catéter.
 Este método posee un 93% de sensibilidad y 94% de especificidad en el diagnóstico
de bacteriemia relacionada a CVC.
 Recupera microorganismos de la superficie interna y externa del catéter, y a
diferencia del cultivo semicuantitativo del extremo distal, permite cuantificar
recuentos altos de bacterias.
 Reportar género y especie de los organismos presentes en contaje significativo,
precedido por su contaje en UFC. Si los microorganismos son muy numerosos para
contarlos en la placa de la mayor dilución (SSF), reportar como: “>106 UFC”.
 Si no se observa crecimiento de microorganismos, reportar. “No se observó
crecimiento a una dilución de 1:100”.

Limitaciones
 Aunque este método es más específico que el método semicuantitativo, no está claro
si la diferencia entre ambos métodos es clínicamente significativo.
 Los hemocultivos permanecen como una herramienta importante para detectar
sepsis relacionada a catéteres.
 Algunos autores sugieren elevar el umbral de positividad de la técnica de sonicación
a ≥103 UFC/mL, ya que con recuentos inferiores no hay una buena correlación con
bacteriemia o fungemia asociada a catéteres.

Métodos de coloración: coloración de Gram o Naranja de Acridina

Los catéteres, tras ser teñidos, se observan directamente al microscopio. Se considera
positiva la presencia de al menos un microorganismo por cada 20 campos observados con objetivo
de inmersión. La sensibilidad y especificidad es superior del 80% y ha mostrado utilidad en el
diagnóstico de las IAC, especialmente en las causadas por levaduras. Sin embargo, a pesar de su
rapidez diagnóstica, estos métodos de coloración tienen los inconvenientes de exigir la retirada del
catéter y que sólo pueden llevarse a cabo sobre catéteres transparentes cuyas paredes no sean
excesivamente gruesas o la utilización de microscopios especiales. Además, su realización no
sustituye al cultivo y su aplicación rutinaria en todos los catéteres supone una gran carga de trabajo
para el laboratorio.

Práctica Profesional de Bacteriología. Escuela de Bioanálisis. LUZ. 51

 Manual de Procedimientos en Bacteriología Clínica

Métodos que No Requieren la Remoción del Catéter

Se basan en que, si la vía o catéter central es el foco de la bacteriemia, una alta
concentración del microorganismo implicado debería estar presente en las muestras de sangre
tomadas a través del catéter infectado. Estos métodos incluyen:

Cultivos y Tinciones Superficiales

Combinan la coloración de Gram y el cultivo de la piel que rodea al punto de inserción del
catéter con la coloración de Gram y el cultivo del interior de las conexiones del catéter. Poseen un
elevado valor predictivo negativo (VPN) (93%-99%), es decir, que si ambos cultivos son negativos
(piel y conexiones del catéter) se puede descartar en la mayoría de los casos la existencia de
infección asociada al catéter, evitando de esta forma el retiro innecesario de un gran número de vías
centrales. Sin embargo, un pequeño porcentaje de sepsis con cultivos superficiales negativos puede
ocurrir.

Esta técnica evalúa de manera conjunta la posible colonización intraluminal y extraluminal

del catéter y se aplica a las muestras de la conexión de catéter que se acompañen de hisopados en los
que se soliciten cultivos superficiales de piel. Para tomar muestra de la piel que rodea el punto de
inserción del catéter, se frota ésta con un hisopo en un diámetro de 1-2 cm. y se coloca en un envase
o tubo estéril sin medio de transporte, el cual debe ser enviado de inmediato al laboratorio. Sólo en
los casos que no se puede enviar o procesar inmediatamente deben enviarse en medio de transporte.

Para tomar muestra de la conexión del catéter se utilizan debido a su menor tamaño hisopos
de alginato. Se introduce un hisopo en cada conexión, se gira 2 o 3 veces por el interior de la misma
y se coloca en un envase o tubo estéril sin medio de transporte, el cual debe ser enviado de
inmediato al laboratorio. Sólo en los casos que no se puede enviar o procesar inmediatamente deben
enviarse en medio de transporte. En los catéteres multi-luminales se debe tomar una muestra por
cada conexión, identificando cada una de ellas a medida que se realiza la toma de la muestra. Para
facilitar esto, las muestras se pueden identificar con el color de cada conexión.

Procesamiento
 Siembra de las muestras de Piel (Método de Bjornson y col.): sembrar toda la superficie
de una placa de agar sangre con el hisopado. Rotular la placa como “Piel catéter” y
marcar la fecha.
 Siembra de la(s) muestra(s) de la(s) conexión(es) del catéter (Método de Cercenado y
col.): seguir el procedimiento anterior para cada conexión (previamente identificada).
Rotular cada placa como “Conexión de catéter” (haciendo la distinción correspondiente
a cada una de las conexiones) y marcar la fecha.
 Incubar todas las placas a 35ºC en aerobiosis durante 18-48 h.
 Examinar las placas tras 18-24 horas de incubación.
 Si hay crecimiento de colonias efectuar su recuento semicuantitativo.
 Si no existe crecimiento bacteriano prolongar la incubación 24 h más y realizar una
nueva lectura.
 Si hay crecimiento bacteriano, especificar el número exacto o aproximado (si éste es
muy elevado) de colonias y la identificación presuntiva del género de los
microorganismos aislados. Valorar sólo aquellos recuentos iguales o superiores a 15
colonias por placa.

52 Maracaibo, 2010
 Procesamiento y Toma de Muestra de Catéteres y Dispositivos Intravasculares

 Si no se observa crecimiento bacteriano o éste es inferior a 15 colonias por placa,

informar como: negativo. En este caso se descarta prácticamente que el catéter sea el
origen de la infección del paciente.

Interpretación
Cualquier microorganismo en contaje ≥15 colonias por placa, debe considerarse como
potencialmente patógeno y debe ser identificado presuntivamente. La negatividad de esta técnica
descarta la infección relacionada con el catéter, pero su positividad no implica necesariamente
infección relacionada al catéter. Por ello, generalmente es suficiente una identificación presuntiva de
los microorganismos aislados a partir de muestras de piel y de la conexión del catéter, y solamente
se identifica a nivel de especie y se realizaran pruebas de susceptibilidad cuando se solicitan
específicamente.

Limitaciones
Este procedimiento no detecta las infecciones asociadas a catéteres causadas por
microorganismos de crecimiento lento ni las causadas por microorganismos que no crecen en las
condiciones señaladas (M. furfur, Haemophilus spp.). El tratamiento antimicrobiano previo a la
obtención de la muestra puede alterar los resultados de los cultivos.

Hemocultivos Cuantitativos
Este método se basa en que el número de UFC/mL en sangre obtenida a través de un catéter
infectado es mayor que el número de UFC/mL en la sangre extraída de una vena periférica. Un
cociente 5 o más veces superior, entre el contaje de colonias del mismo microorganismo en cultivos
de sangre colectada a través del catéter venoso central y el de sangre periférica es indicativo de
bacteriemia asociada al catéter. Para ello pueden usarse métodos tales como: el vaciado de placas o
el método de lisis-centrifugación. Con este método se recuperan sólo microorganismos
intraluminales (sensibilidad 78-94% y especificidad 99-100%). Su mayor ventaja es que permite el
diagnóstico de certeza de infecciones asociadas a catéter el caso de hemocultivos positivos, y evita
la retirada innecesaria del catéter en aquellos casos con hemocultivos negativos. Se aplica en
aquellas muestras de sangre en las que se solicite hemocultivos cuantitativos por el método de lisis
centrifugación.

Toma de la muestra
Extraer 10 mL (exactos) de sangre a través de cada una de las conexiones del catéter y de
una vena periférica, siguiendo las medidas de desinfección de la piel que deben observarse en los
protocolos de extracción de hemocultivos convencionales (no hay acuerdo en el número de lúmenes
a estudiar. Algunos expertos recomiendan que las muestras sean obtenidas de cada lumen en
aquellos catéteres multi-lumen, en cambio otros recomiendan la obtención de una sola muestra a
través del lumen utilizado para la nutrición parenteral total). Introducir cada muestra de sangre en un
tubo de lisis centrifugación, desinfectando previamente los tapones con povidona yodada. Rotular
las muestras y las boletas de solicitud de los cultivos debidamente. En el caso de que existan varias
conexiones puede ser útil emplear los colores de las mismas para diferenciarlos.

Procesamiento
 Comprobar que cada tubo de lisis centrifugación llegue acompañado de su boleta
correspondiente y que los datos de la solicitud y del tubo coincidan.

Práctica Profesional de Bacteriología. Escuela de Bioanálisis. LUZ. 53

 Manual de Procedimientos en Bacteriología Clínica

 Asignar a cada extracción (cada tubo) un número correlativo del registro general.
 Desinfectar los tapones de los tubos con povidona yodada.
 Centrifugar la sangre a 3.000g durante 30 minutos.
 Perforar el tapón con el aparato específico para esta tarea.
 Descartar el sobrenadante con pipeta.
 Resuspender el sedimento en agitador vortex.
 Repartir el sedimento (aproximadamente 1 mL) en partes iguales en 3 placas de
agar sangre (SH), agar chocolate (GC) y agar Brucella, respectivamente.
 Sembrar para recuento (extendiendo por toda la superficie de la placa).
 Incubar las placas de SH en aerobiosis y la de GC en CO2 a 35ºC durante 48 horas.
 Las placas de agar Brucella deben incubarse en campanas con sobres de
anaerobiosis a 35ºC durante 48 h.
 Examinar las placas de cultivo entre las 18 y las 24 horas. Las placas de
anaerobiosis se examinan a las 48 horas.
 Si existe crecimiento de colonias efectuar su recuento, sumando el número de
colonias de las tres placas, e informarlo como UFC/mL (teniendo en cuenta que se
han procesado 10 mL de sangre).
 Si no existe crecimiento bacteriano prolongar la incubación otras 24 h (placas de
aerobiosis) y realizar una nueva lectura.
 En aquellos cultivos en que se obtiene crecimiento, efectuar la identificación de
género y especie, según los procedimientos de identificación del laboratorio. El
estudio de sensibilidad a los antimicrobianos se realizará según el protocolo
correspondiente.
 Si en los cultivos de la sangre extraída a través de las conexiones no se observa
crecimiento bacteriano, informar como negativo. En este caso se descarta
prácticamente que el catéter sea el origen de la bacteriemia del paciente.
 Si en alguno de los cultivos de sangre extraída a través de las conexiones de los
catéteres se observa un número de colonias/mL 5 o más veces superior al observado
en la sangre extraída por vena periférica, se puede establecer que esa luz del catéter
a la que pertenece la conexión es el origen de la bacteriemia.
 Expresar los resultados de los cultivos de la sangre extraída a través de las
conexiones y de la extraída por vía periférica como UFC/mL.

Interpretación
Se debe informar el crecimiento de cualquier microorganismo en cualquiera de los cultivos.

Limitaciones
Este procedimiento es relativamente laborioso y caro. El alto grado de manipulación de las
muestras incrementa el riesgo de contaminación de la muestra. Este procedimiento no detecta las
infecciones asociadas a catéteres causadas por microorganismos de crecimiento lento. El tratamiento
antimicrobiano previo a la obtención de la muestra puede alterar los resultados de los cultivos.

Tiempo Diferencial de Hemocultivos (Método de Blot)

Esta técnica utiliza la ventaja que poseen los sistemas automatizados de hemocultivos para
determinar el tiempo transcurrido desde el inicio de la incubación de los frascos hasta el momento
en que se detecta crecimiento significativo. Teóricamente, los hemocultivos que parten de un mayor

54 Maracaibo, 2010
 Procesamiento y Toma de Muestra de Catéteres y Dispositivos Intravasculares

inóculo bacteriano (los sembrados con sangre obtenida por la luz del catéter) deben tener tiempos de
crecimiento más rápido que los inoculados con sangre periférica. Las diferencias en tiempo de
crecimiento, por tanto, entre hemocultivos simultáneamente tomados por el catéter y a través de una
vía periférica pueden orientar si el origen de la bacteriemia está relacionado con el catéter. Blot y
col. establecieron 120 minutos (2 horas) como una diferencia significativa entre las muestras
pareadas. El método permite el uso de hemocultivos ordinarios cualitativos y no requiere maniobras
especiales en el laboratorio para su procesamiento. Posee una sensibilidad del 94% y una
especificidad del 91% en el diagnóstico de bacteriemia asociada al catéter y ha sido propuesto para
el uso rutinario en la práctica en hospitales que dispongan de sistemas automatizados para la
detección de bacteriemia. Recientemente, otros estudios sugieren establecer el punto de corte óptimo
en tres horas o más de diferencia entre los tiempos de cultivo. (Con este punto, la sensibilidad es de
un 81% y la especificidad es del 100).

Citocentrifugación
Este método, descrito por Kite y col., consiste en el examen directo con Naranja de
Acridina de la capa de células sanguíneas obtenidas por citocentrifugación de 50 µl de sangre
tomada a través del catéter y por venopunción. Es un método promisorio, pero necesita más estudios
para ser validado. Es laborioso y requiere equipamiento de alto costo (citocentrífuga y microscopio
de fluorescencia). Por ahora su uso no se recomienda.

Procedimiento
 Obtener 50 μl de sangre por venopunción y a través del catéter.
 Producir la lisis de los glóbulos rojos mediante la adición de EDTA.
 Las muestras se cargan en un tubo de poliestireno y se les agrega 1 a 2 mL de
formalina en solución salina durante 2 minutos.
 Centrifugar la mezcla a 353g durante 5 minutos.
 Homogeneizar el sedimento mediante vortex durante 5 segundos.
 Transferir el sedimento a la cúpula del Cytospin™ (Shandon, Runcorn, UK) para su
citocentrifugación a 153g durante 5 minutos. Esto permite la formación de una
monocapa celular sobre un portaobjetos.
 Utilizar Naranja de Acridina para teñir el ADN bacteriano.

Limitaciones
El método posee una sensibilidad de 96% y especificidad de 92% en el diagnóstico de
bacteriemia relacionada a CVC pero requiere de más estudios para su validación. Es laborioso y
requiere equipamiento de alto costo. Por ahora su uso no se recomienda.

Coloración y Cultivo de Cepillo Endoluminal Estéril Empujado a través del Catéter

Mediante el uso de un cepillo endoluminal se realiza la remoción mecánica de los
microorganismos unidos al biofilm endoluminal, los cuales son detectados luego por microscopía y
cultivo. El examen microscópico con coloración de Gram o Naranja de Acridina permite detectar
rápidamente los organismos presentes y hacer una caracterización preliminar de ellos. Sin embargo,
aunque estas técnicas de coloración parecen prometedoras, al igual que las coloraciones directas de
catéteres, no son factibles de realizar para todos los tipos de catéteres, precisan una lectura detenida,
son técnicamente laboriosas y son menos sensibles y específicas que otros métodos. Por otra parte,
es preciso disponer de cepillos con guías metálicas de distintos tamaños para adaptarse a cada tipo

Práctica Profesional de Bacteriología. Escuela de Bioanálisis. LUZ. 55

 Manual de Procedimientos en Bacteriología Clínica

de catéter y calcular bien la parte a introducir. En segundo lugar, en catéteres cuyas luces tienen una
salida lateral no es fácil alcanzar el extremo. Por último, el procedimiento es costoso y existe
también un riesgo de embolización y de bacteriemia secundaria al procedimiento. Por lo tanto, este
método no es muy recomendado.

Criterios que debe Reunir el Método Ideal de Laboratorio para el Diagnóstico de

Infecciones Asociadas a Catéteres
 Rápido, para permitir decisiones terapéuticas tales como la remoción del catéter y/o
la institución de terapia antimicrobiana.
 Técnicamente simple.
 Capaz de detectar microorganismos intra y luminales.
 Altamente sensible.
 Altamente específico (capaz de diferenciar entre colonización e infección).
 Capaz de confirmar o descartar el diagnóstico de IAC sin la necesidad de remover el
dispositivo intravascular.
 Capaz de aislar el agente infectante, y permitir su identificación, tipificación y
pruebas de susceptibilidad.
 Seguro para el paciente.
 Ninguno de los métodos usados hasta ahora reúne todos los requisitos señalados.
Los inconvenientes más frecuentes para lograr esto son:
 La falta de una definición precisa de IAC.
 Los estudios reportados envuelven pacientes mixtos (niños y adultos,
inmunocomprometidos e inmunocompetentes).
 Múltiples tipos de catéteres.
 Falta de uniformidad en las técnicas de cultivo empleadas.
 El uso de diferentes criterios de positividad.

Control de Calidad en Catéteres

Número de catéteres aceptados sin hemocultivos acompañantes. Tiempo y forma de
conservación de los catéteres. Porcentaje de catéteres en los que sólo se realizo la técnica de Maki y
los hemocultivos fueron positivos (no existiendo otro foco).

Recomendaciones
Para la selección adecuada de los métodos de diagnóstico de laboratorio de IAC, es
necesario tomar en cuenta las siguientes recomendaciones:
 Sólo deben referirse al laboratorio de microbiología para cultivo los catéteres
procedentes de pacientes con signos y síntomas de infección. Los cultivos
sistemáticos de vigilancia no están indicados.
 Sólo deben realizarse cultivos aerobios de dispositivos intravasculares.
 No deben realizarse cultivos cualitativos de catéteres.
 Si se desarrolla shock séptico a partir de un foco no determinado, en un paciente con
catéter intravascular, o cuando hay signos locales de infección, como celulitis, el
catéter debe ser removido y debe hacerse el cultivo semicuantitativo (método de
Maki) y cultivo cuantitativo (método de Bruin Buisson ó método de sonicación) de
la punta del catéter. Es importante, la realización de algún método cuantitativos, ya
que estos permiten la recuperación de microorganismos intraluminales y de la

56 Maracaibo, 2010
 Procesamiento y Toma de Muestra de Catéteres y Dispositivos Intravasculares

superficie externa, por lo que puede ser utilizados en catéteres de corta y larga
duración acompañado de por lo menos dos hemocultivos de sangre periférica (la
obtención de 2 hemocultivos periféricos a partir de diferentes sitios de punción
mejora la especificidad, ya que disminuye la probabilidad que el hemocultivo
positivo en caso de SCN sea interpretado como una contaminación al momento de
la obtención de la muestra). Si existen signos de infección local se debe enviar
también al laboratorio exudado de la lesión para realizar coloración de Gram y
cultivo.
 El método semicuantitativo de Maki se sigue considerando como un estándar válido
en el diagnóstico de rutina de las IAC, pero como sólo recupera microorganismos de
la superficie externa, debe utilizarse sólo en catéteres de corta duración.
 El método cuantitativo de Bruin Buisson se considera una alternativa adecuada para
su utilización rutinaria.
 Los procedimientos cuantitativos que se basan en el desprendimiento de bacterias
por medio de ultrasonidos (sonicación) deben compararse con otros métodos antes
de convertirse en un estándar equivalente de los anteriores.
 En los pacientes en los que se pretende conservar el catéter, se recomienda en
primera instancia efectuar hemocultivos cuantitativos pareados. Si por la
complejidad de estos métodos no es posible la realización de los hemocultivos
cuantitativos, entonces se recomienda el tiempo diferencial de la positividad de los
hemocultivos para aquellos laboratorios que dispongan de sistemas automatizados.
 Para catéteres de hemodiálisis no existen estudios que describan la sensibilidad y
especificidad de los distintos métodos para el diagnóstico de las infecciones
asociadas a este tipo de catéteres. En muchos estudios se han usado diferentes
definiciones, principalmente operacionales, basadas en la necesidad de retiro del
catéter o intensidad del tratamiento necesario, más que en base a la patogenia de la
infección o los hechos de laboratorio que establecen el diagnóstico. Por lo que la
infección del catéter de hemodiálisis ha sido vista hasta ahora sólo a la luz de los
conocimientos obtenidos de estudios en CVCs utilizados para otros fines y las
estrategias diagnósticas para éstos sencillamente se han extrapolado y adaptado a
los catéteres de hemodiálisis sin haber sido validadas.
 Para catéteres venosos centrales periféricamente instalados (CCPI) no hay
recomendaciones en la literatura sobre métodos de diagnóstico diferentes que para
CVC transitorios o permanentes. Tampoco hay datos para suponer que los
resultados de estos estudios sean extrapolables a los catéteres tipo CCPI.

Criterios de Rechazo de Muestras

 No aceptar puntas de catéteres urinarios de Foley.
 No aceptar puntas de catéteres que lleguen en solución salina o en medio de
transporte.
 Enviar puntas de catéteres para cultivo sólo si hay signos de infección (inflamación
en el sitio de inserción, fiebre, signos de sepsis, o bacteriemia documentada en la
cual no hay un foco aparente). El cultivo rutinario de puntas de catéteres cuando no
hay signos y síntomas de infección (Ej. aquellos enviados sin que los acompañe un
cultivo sanguíneo tomado a través del catéter y uno a partir de sangre periférica,
deberían ser rechazados).

Práctica Profesional de Bacteriología. Escuela de Bioanálisis. LUZ. 57

 Manual de Procedimientos en Bacteriología Clínica

 En el caso de derivaciones ventrículo-peritoneales, es preferible recolectar líquido

cefalorraquídeo o peritoneal, en lugar de cultivar la punta del catéter. Sin embargo,
sí la punta de estas derivaciones es enviada, debe cultivarse, pero debe solicitarse el
envío del líquido correspondiente.
 Hisopados de la piel del sitio de inserción del catéter no son muestras aceptables. Si
hay evidencia de infección del tejido local, debe enviarse un aspirado de la herida
recolectado apropiadamente.

Cultivo de otros Dispositivos Intravasculares

Cultivo de Catéteres para Nutrición Parenteral Total o Líneas de
Hiperalimentación
Para el cultivo de este tipo de catéteres, por el método semicuantitativo o cuantitativo, debe
tenerse en cuenta que es necesario investigar la presencia de M. furfur. Para ello:
 Añadir una gota pequeña de aceite de oliva en el área inicial de siembra, utilizando
una pipeta estéril, teniendo cuidado que el aceite no se propague más allá de una
pequeña área del agar.
 Incubar las placas a 35ºC en C02.
 Inspeccionar las placas por 4 días, en búsqueda de levaduras M. furfur, la cual crece
como colonias puntiformes en 3 días.

Nota: El diagnóstico de infección de catéter por M. furfur es difícil con la mayoría de los
sistemas de cultivo sanguíneo. Sin embargo, la carga del microorganismo en el catéter usualmente
es alta y una coloración de Gram de una gota de sangre del hub del catéter, generalmente es
suficiente para demostrar su presencia sin que se requiera la remoción del catéter.

Cultivo de Puertos Subcutáneos Implantados

Hasta ahora no existen métodos estandarizados para el subcultivo de puertos subcutáneos
implantados ni hay evidencias que sugieran que estos cultivos tengan algún valor diagnóstico. Si se
sospecha de sepsis atribuible a estos, pueden realizarse hemocultivos cuantitativos sin necesidad de
remover el dispositivo. Si el puerto es removido posteriormente, la punta de catéter distal puede
cultivarse también por el método cualitativo. En este caso se realiza la identificación y pruebas de
susceptibilidad a todos los organismos aislados y se reporta cada uno de ellos cualitativamente
(crecimiento escaso, moderado o abundante). Este tipo de reporte cualitativo sólo aplica al cultivo de
puertos subcutáneos. Cuando se sospecha de una infección subcutánea debe cultivarse un aspirado o
una muestra del sitio de la herida.

58 Maracaibo, 2010
 Procesamiento y Toma de Muestra de Catéteres y Dispositivos Intravasculares

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Práctica Profesional de Bacteriología. Escuela de Bioanálisis. LUZ. 59

 Universidad del Zulia

Práctica Profesional de Bacteriología. Escuela de Bioanálisis. Facultad de Medicina. Maracaibo 2010.