MICROBIOLOGA GENERAL
PRCTICA 6 CURVA DE CRECIMIENTO BACTERIANO INTRODUCCIN El crecimiento y la viabilidad de los microorganismos est determinada por
factores nutricionales y ambientales, y que en condiciones ptimas del laboratorio es posible predecir una curva caracterstica de cada especie microbiana.
Cuando una bacteria es inculada a un medio de cultivo lquido fresco, experimentar un perodo de adaptacin al medio y condiciones del cultivo para posteriormente dividirse en forma exponencial, dando lugar a una curva tipo sigmoidal que se suele conformar en las siguientes partes:
a) Fase de letardo, de adaptacin o fase lag, b) fase de crecimiento exponencial o fase log, c) fase estacionaria y d) fase de declive o muerte. La forma de cada porcin de la curva y el tiempo de duracin de cada fase depender de la especia del microorganismo, la preparacin del inculo, la composicin qumica del medio de cultivo y las condiciones ambientales de incubacin. Durante la fase de adaptacin no hay divisin celular, la clula esta sintetizando nuevos componenetes, durante la fase exponencial los microoganismos que se
dividen por fisin binaria lo hacen a intervalos regulares, finalmente el crecimiento de la poblacin disminuye y la curva se vuelve horizontal debido al agotamiento de nutrientes o la acumulacin de productos residuales txicos hasta que la poblacin disminuye. En general las bacterias crecen con mayor rpidez que los microorganismos eucariticos. El metabolismo energtico tambin influye sobre la velocidad de crecimiento, debido a la ganancia energtica que se obtiene de cada va catablica de obtencin de energa. As los microorganismos fermentadores crecern ms rpido que los respiradores.
OBJETIVO Que el estudiante conozca las fases de crecimiento en un cultivo de distintos microorganismos.
CONOCIMIENTOS PREVIOS Fases de crecimiento bacteriano Medios de cultivo Bases tericas del crecimiento bacteriano
MATERIAL Tubos eppendorff Placas de petri con agar nutritivo Pipetas automticas de 10, 200 y 1000 L Cajas de puntas azules Cajas de puntas amarillas Cajas de puntas blancas Placa de 96 pocillos estril con tapa.
REACTIVOS Y/O SOLUCIONES Solucin salina estril al 0.9%
EQUIPO
Incubadora a 37 C Lector de Placas Elisa
PROCEDIMIENTO
1.-De un cultivo previo hacer diluciones seriadas decimales para obtener tamaos de inoculo iniciales, que comprendan entre 107 y 103 ufc/mL. (Ver figura 1).
Figura 1. Esquema para la realizacin de las diluciones seriadas.
2. Una vez que se hagan las diluciones seriadas, tomar una alcuota de 100 L de cada dilucin y de acuerdo al tamao de inoculo del que se trate hacer recuento de unidades en placa. Para hacer el recuento utilizar tubos eppendorff que contengan 990 L de solucin salina estril al 0.9%. Este recuento ser denominado como hora cero.
3. Dejar incubar los tubos a 37 C y repetir el proceso de recuento de unidades viables en placa a 1 y 2 horas de incubacin. Estos sern denominados como hora una y hora dos.
4. Despus de hacer el recuento de unidades viables esperar a que las placas se sequen y ponerlas en incubacin a 37 C.
5. Pasadas 24 horas de incubacin realizar de nuevo un recuento de unidades viables en placa. Este recuento ser denominado con hora 24.
6. Dejar secar las placas de la hora 24 y poner a incubar a 37 C.
7. Contar el nmero de colonias que aparezcan en las placas realizadas a las hora cero, una y dos. Repetir este proceso al da siguiente para las placas de la hora 24.
8. Reportar el nmero de unidades viables que hay en cada tubo y en cada hora realizada.
NOTA: En cada recuento y para cada tubo tomar 100 L y colocarlos en un pocillo de la placa de 96 pocillos, una vez realizadas todos los recuentos leer a 550 nm. Entre cada toma de muestra colocar la placa de 96 pocillos en la nevera. REPORTE DE RESULTADOS
Tiempo de muestreo (h) 0 1 2 24
Turbidez
ufc/mL
BIBLIOGRAFA
1. Prescott et al. (1999): Microbiology. 4rd edition. (Editorial Mc. Graw Gill ) 2. Brock, T.D. et al (1997): Biologa de los Microorganismos (10 edicin). Edit. Prentice-Hall
