PCR convencional
PCR, o la reacción en cadena de la polimerasa, es una técnica de diagnostico utilizado en los
laboratorios mediante esta técnica somos capaces de detectar los acidos nucleicos de los
diferentes microorganismos presentes en una muestra clínica.
Mediante PCR somos capaces de detectar la molécula de ARN que es el material genético de
diferentes virus como el sars COV 2 esta técnica que utiliza muestra respiratoria tarda en hacerse
de 2 a 3 horas en dar los resultados con personal capacitado.
Tambien se han desarrollado test rapidos que consisten en la detección de anticuerpos y tambien
proteínas en sangre, el formato es muy rápido y tarda de 10 a 15 mnts.
Características básicas:
Alta especificidad: puede diferenciar entre dos microorganismos muy cercanos
evolutivamente.
Alta sensibilidad: puede detectar cantidades de 20 copias/ml -o incluso menos- de
material genético viral.
Precoz: se detecta el virus en las primeras fases respiratorias.
La reacción en cadena de la polimerasa (PCR) es una técnica de laboratorio que permite la
producción (amplificación) rápida de millones a miles de millones de un segmento específico de
ADN.
RT-PCR reacción en cadena de la polimerasa con trascripción reversa
Se trata de una variante de la PCR que en ves de partir de una muestra de ADN partimos de una
muestra de ARN para poder hacer esto hay que hacer una retro trascripción de ARN para obtener
ADNc (complementario)
La enzima más utlizada para obtener ADNc a partir de ARN es la retro transcriptasa viral MMLV-RT
una vez que se hiso esto la técnica contunia como una PCR normal
Su uso es para diagnóstico molecular e investigación científica como estudiar el genoma de virus
como los retrovirus como del VIH
QPCR PCR en tiempo real o cuantitativa
Permite analizar la cantidad de producto acumulado a lo largo de toda la reacción de esta manera
se puede analizar cuanto producto se acumuló a lo largo de todo el proceso, la ventaja de este
sistema es que asi se puede analizar tanto en la fase exponencial como en la fase final
El método de detección de ADN se utiliza un intercalante que produce una fluorescencia al ser
excitado estos marcados con fluoroforos
Esta técnica al igual que las otras tambn emplea un:
molde de adn
al menos un par de primer específicos
DNTPs
Baffer de reacción
ADN polimerasa termoestable
Sustancia marcada con fluoroforo
Un termociclador con sistema de detección que detectan al señal tras exitar el fluoroforo
Esta técnica se usa para el diagnostico de varias enfermedades infecciosas, cáncer y
anormalidades genéticas
RT- qPCR
Sus aplicaciones son mediciones cuantitativas de la trascripcion y exprecion génica determinando
como cambia la expresión de un gen completo tambien para la detección de micro organismos
genéticamente modificados
Diagnostico de enfermedades virales cmo los famosos test de PCR para el Covid son en realidad
RT-QPCR ya que se busca detectar el ARN viralen las muestras de hisopados
Tambien se han desarrollado test rapidos que consisten en la detección de anticuerpos y tambien
proteínas en sangre, el formato es muy rápido y tarda de 10 a 15 mnts.
Resumen
PCR convencional o de punto final
Se parte de una muestra de ADN
RT-PCR reacción en cadena de la polimerasa con trascripción reversa
Se parte de una muestra de ARN es como la normal pero con un paso previo de retro trascripción
para obtener ADN complemetario
QPCR PCR en tiempo real o cuantitativa
Como la PCR normal pero utiliza un termociclador y fluoroforos que nos permiten ver en tiempo
real la amplificación de cada muestra
RT- qPCR
PCR cuantitativa con transcripción reversa que como la QPCR pero partiendo de muestra de ARN
por lo que tambien hay un paso previo para obtener ADN
