LABORATORIO II

CONTROL DE MICROORGANISMOS

 Cuando ya se ha asentado la infección y se debe tratar en el huésped

 Se toman medidas para tratar de evitar que la infección se instale, el
microorganismo no se instale.

A lo largo de la historia se han ido desarrollando distintos métodos y medidas de control

de microorganismos que han podido salvar vidas y que se mantienen hasta el día de hoy.
En abril de 1847 el médico húngaro Ignaz Semmelweis instaló una cuenca llena de
solución de cal clorada en una sala obstétrica del Hospital General de Viena y Austria, y
comenzó a salvar las vidas de las mujeres con tres simples plabras “lávese las manos”.
En cuestión de un mes, las tasas de mortalidad redujeron de un 18,3% a 2%.

Joseph Lister  el médico que tuvo la brillante idea de desinfectarse las manos

De esta historia surgen distintos conceptos:

 Esterilización  es el conjunto de operaciones destinadas a matar o inhibir
microorganismos presentes incluyendo esporas. Es un proceso totalmente
absolutos, no puede dejar ningún tipo de vida en el objeto inanimado esterilizado.
 Desinfección  es el conjunto de operaciones destinadas a destruir o inhibir
desarrollo de los microorganismos, pero al no ser un estado absoluto pueden
quedar algunos microorganismos presentes en el objeto desinfectado como por
ejemplo endoesporas. Generalmente esto se lo realiza a través de procedimientos
químicos, aunque también hay procesos físicos que llevan a la desinfección.
 Antisepsia  conjunto de procesos destinados a destruir o inhibir
microorganismos pero a diferencia del concepto anterior, este se encuentra
relacionado a tejidos vivos.
 Antiséptico  sustancias que, aplicadas de forma tópica, sobre los tejidos vivos,
tienen la capacidad de destruir los microorganismos o de inhibir su reproducción.
 Descontaminación  Someter a tratamiento lo que está contaminado, a fin de
que pierda sus propiedades nocivas.
 Bactericida  sustancia que destruye las bacterias
 Desinfectante  Cualquier sustancia o proceso que se usa para destruir
gérmenes, como virus, bacterias y otros microbios que causan infecciones y
enfermedades.
 Bacteriostático  Agente que inhibe el desarrollo de las bacterias y se basa en los
mecanismos de defensa del huésped para la erradicación final de la infección.
Posibles fuentes de infección

 Individuos con enfermedad infecciosa manifiesta, en estadios inciales o en

período de incubación de una infección (Ej: varicela, sarampión, parotiditis)
 Portadores sanos asintomáticos / portadores convalecientes de patógenos
 Fuentes ambientales: microorganismos en el aire o formando biocapas en
tuberías de agua, en equipos o en instrumentos.

-Todos los pacientes deben ser considerados potenciales portadores de

enfermedades infectocontagiosas-

Mecanismos de transmisión

Medidas de control de la infección

- Procesamiento adecuado del material
- Limpieza y desinfección de las superficies y equipos
- Uso de medidas de barrera
- Eliminación adecuada de los residuos
- Inmunización del personal
- Empleo de técnicas asépticas

¿Cómo tiene que quedar el instrumental: estéril, desinfectado o limpio?

En 1968 Earl Spaulding elaboró una clasificación del instrumental en tres grupos, en
función del uso que se vaya a hacer de dicho instrumental.
CRÍTICO (estériles)  instrumental destinado a ser introducido directamente en el
torrente sanguíneo o en zonas habitualmente estériles del cuerpo.
 Instrumentos para exodoncia
 Implantes
 Agujas
 Bisturíes
 Cinceles para hueso
 Instrumental de exploración
 Fresas

SEMICRÍTICO (desinfectados)  instrumental que va a entrar en contacto con mucosas

intactas.
 Equipo de anestesia
 Jeringa de aire/agua
 Condensación de amalgama
 Espejo

NO CRÍTICO (limpios)  instrumental que va a entrar en contacto con piel intacta

 Paredes, piso, muebles
 Sábanas
 Sillón
 Termómetro

Grado de resistencia de menor a mayor de algunos microorganismos a

determinados antisépticos

PRIONES
ESPORAS BACTERIANAS
MICOBACTERIAS (tuberculicida)
PROTOZOOS
VIRUS PEQUEÑOS SIN ENVOLTURA
VIRUS GRANDES SIN ENVOLTURA
ESPORAS FUNGICAS
FORMAS FUNGICAS
FORMAS VEGETATVAS BACTERIANAS GRAM-
FORMAS VEGETATIVAS BACTERIANAS GRAM+
VIRUS GRANDES CON ENVOLTURA
 Control de microorganismos in vitro

Métodos físicos INCINERACIÓN

SECO ESTUFA

BOLILLERO A
CALOR
CUARZO

ESTERILIZACIÓN AUTOCLAVE
HÚMEDO
RADIACIÓN
GAMMA O X TINDALIZACIÓN
MÉTODOS
FÍSICOS
CALOR
HÚMEDO
EBULLICIÓN
DESINFECCIÓN

RADIACIONES UV
PASTEURIZACIÓN

CICLO DE ESTERILIZACIÓN POR CALOR

 Métodos físicos de esterilización

CALOR
Calor seco  estufa
Los microorganismos van a llegar a la muerte por deshidratación y coagulación de su
citoplasma. Para que la estufa esterilice se debe llevar a cabo el proceso durante:
 160°C – 2 horas
 170°C – 1 ½ hora
 180°C – 1 hora
A mayor temperatura menos tiempo empleado, esto siempre va a depender de lo
que se vaya a esterilizar, si el material es una lima de endodoncia o tiene filo, lo más
recomendable es una temperatura de 160°C durante un tiempo de mantenimiento
de 2 horas.

Ventajas
 Económica
 Fácil uso y manipulación
 No requiere mucho mantenimiento

Desventajas
 No se pueden esterilizar todos los instrumentos
Calor húmedo  autoclave por vapor
Se produce la muerte microbiana por hidratación y coagulación de las proteínas celulares.

Temperatura, presión y tiempo de esterilización

121°C 1 atmósfera 15 a 20 minutos
126°C 1 ½ atmósfera 12 minutos
134°C 2 atmósferas 10 minutos

Ventajas
 Cantidad de instrumental que se puede esterilizar

Desventajas
 Alto costo
 Requiere más mantenimiento
 AUTOCLAVE VS ESTUFA

RADIACIÓN GAMMA

 Radiaciones ionizantes (rayos x y gamma)

 Efecto letal y mutagénico
 Muy penetrantes
 Fundamento: los rayos gamma tienen gran poder de penetración y matan a los
microorganismos formando iones tóxicos que afectan la bioquímica de las células
 Se aplican para la esterilización de material termo sensible, de un solo uso
(descartables), como jeringas, guantes, agujas, etc.
Validación del proceso de esterilización con agentes físicos

Control físico  termómetros, manómetros, temporizadores

Control químico  se realiza mediante tiras termosensibles que miden cuando se ha

llegado a la temperatura correcta y cambian de color, pero no miden si la temperatura
se ha mantenido durante todo el lapso de tiempo. Solo indican el pasaje por sistema de
esterilización, NO LA ESTERILIDAD.

Controles biológicos  este si asegura que el material este correctamente esterilizado.

Se colocan unas esporas muy resistentes en el autoclave (acillus estearothermophyllus)
o la estufa (Bacillus subtilis) y luego del procedimiento se las cultima, si estas no colonizan
quiere decir que el procedimiento ha sido exitoso.

Métodos físicos de desinfección

Radiaciones UV
Es un proceso destinado a la destrucción de las formas vegetativas de los
microorganismos, pero NO a sus formas de resistencia (endosporas).
 Radicaciones NO IONIZANTES con escaso poder de penetración
 Son rayos UV
 Efecto letal y mutagénico
 Mecanismo de acción – inactiva los microorganismos en un rango de 20m- 280
nm, por desnaturalización del ácido nucleico, forma dímeros de timina en la
molécula de ADN o cambios en ARN o en proteínas.
 Su efectividad depende de:
- Potencia de los tubos
- Presencia de materia orgánica
- Longitud de onda
- Tipo de material orgánico
- Relación con las distancia aplicada
 Se aplica para la desinfección de quirófanos, áreas de envasado, cabinas de
siembra.

Filtración

Ultrasonido
En esta lavadora se coloca una sustancia antiséptica y se la enciende, la vibración del
ultrasonido hace que se de la desinfección. Este proceso lleva un par de minutos, siempre
dependiendo del instrumental que se esté desinfectando y el antiséptico que se haya
colocado. Permite que baje la carga de microorganismos para poder luego manipularlo
libremente y llevarlo a esterilizar.

Microondas odontológico

Métodos químicos de desinfección

Clasificación de los desinfectantes

 Según el mecanismo de acción

 Desnaturalización y coagulación de proteínas
 Oxidación de componentes
 Alteración de la permeabilidad de la membrana
 Combinación de radicales de proteínas y ácidos nucleicos

 Según el nivel del desinfectante o rango de actividad que alcanza

 ALTO NIVEL  mata esporas (esterilización)
- Óxido de etileno 4hs a 58°C con una humedad cercana al 40%
- Formaldehído al (% en alcohol al 70%
- Glutarldehído al 2% durante 10hs
- Peróxido de Hidrógeno

 NIVEL INTERMEDIO  mata M. tuberculosis (no esporicida

- Compuestos clorados: hipoclorito de Na 0,1 – 0,5% durante 30 minutos
- Compuestos iodados (iodóforos y alcohol iodado)
- Compuetos fenólicos
- Alcoholes
- Glutarldehído al 2% durante 30 minutos
- Clorhexidina

 BAJO NIVEL  mata formas vegetativas de bacterias

- Compuestos de amonio cuaternario
- Compuestos mercuriales

Factores que afectan la efectividad del desinfectante

 El tipo de agente infeccioso
 El tiempo de contacto
 La curva de muerte del agente infecciosos
 La temperatura
 La concentración
  El pH
 La formulación o tipo de preparado
 La presencia de materia orgánica

Desinfectantes más usados

 Alcoholes
- Actúan como bactericida sobre formas vegetativas de bacterias
- Nivel de desinfección mediano
- Su acción disminuye cuando se los diluye por debajo del 50%
- Concentración óptima → de 60% a 90%
- Inconvenientes → se evaporan rápido
- Mecanismo de acción → desnaturaliza proteínas

 Agentes oxidantes (Cloro, Yodo, Ac. Paracético, H2O2)

Cloro:
- Ventajas → preparados baratos de acción rápida
- Nivel de desinfección intermedio
- A medida que aumenta el pH del medio, su acción microbicida baja
- Acción → inactivación de reacciones enzimáticas, de ác. nucleicos y
desnaturalización de proteínas
Yodo:
- Nivel de desinfección intermedio
- Acción → altera la síntesis proteica y las membranas celulares

 Agentes surfactantes

 Derivados fenólicos
- Fenol → efectos irritantes sobre la piel y mal olor
- Derivados fenólicos: ○ + detergentes → actividad antimicrobiana mayor
que el fenol ○ + cloro → tratan superficies
- Nivel de desinfección intermedio
- Ventajas: ○ Permanecen activos en presencia de materia orgánica ○ Son
estables ○ Persisten durante períodos prolongados después de su
aplicación
- Acción → destruyen la pared y la membrana celular. También inactivan
sistemas enzimáticos

 Aldehídos
  Óxido de etileno: son cámaras que trabajan a 58°C con una humedad cercana al
40% durante 4 horas

 Glutaraldehido al 2%: a temperatura ambiente requiere de 10 horas de

exposición, mientras que a 70°C solo 5 minutos

Flujograma de recuperación del instrumental

Luego de la consulta odontológica se deben recuperar todos los materiales que sean
reutilizables, primero se los desinfecta con un desinfectante de nivel microbiológico
intermedio y luego se lo lava y enjuaga, posteriormente se seca y acondiciona
adecuadamente para esterilizar ya sea en estufa o autoclave. Una vez ya esterilizado el
material, este se almacena en un lugar especial o mismo en la propia estufa en caso de
que se utilice ese mismo día.
En el caso de otro tipo de instrumental como por ejemplo un medio de cultivo, el primer
paso de recuperación es el autoclave que va a ayudar a eliminar la mayor parte de
microrganismos para que luego sea seguro poder manipularlo, el proceso que le sigue es
idéntico al anteriormente nombrado.

ANTIMICROBIANOS  ANTIBIÓTICOS

Toda sustancia de origen natural, semisintética o sintética que actúa inhibiendo o

matando a los microorganismos a una dilución elevada (pequeñas concentraciones), que
ejercen su acción a nivel molecular en un proceso metabólico o sobre una estructura
específica del microorganismo.

Requisitos que deben cumplir los antimicrobianos:

 ACTIVIDAD O TOXICIDAD SELECTIVA  actuar sobre células PROCARIOTAS, NO EUCARTIOTAS
 ESPECIFICIDAD  actúa sobre patógenos y no sobre bacterias comensales
 ELEVADA POTENCIA  que a mínimas concentraciones inhiba o mate al patógeno (CIM O
CBM)
 EFECTO  bactericida o bacteriostático
  RESISTENCIA  no debe inducirla
 TOXICIDAD  ser mínima o nula a la máxima dosis autorizada
 ALCANZAR rápidamente el nivel terapéutico y mantenerse
 VÍAS de administración múltiples
 ELIMINACIÓN total sin efecto residual
 SER SOLUBLE en líquidos y tejidos corporales
 COSTO razonable

Clasificación de los antibióticos

Según el mecanismo de acción antibacteriana (sitio blanco)

 Inhibidores de la síntesis de la pared celular
- Fosfomicina  análoga de estructura del fosfoenol
- D-cicloserina  inhibe a las enzimas racemasa y sintetaza
- Bacitricina  inhibe al bactoprenol: pirofosfato que regenera el lípido
transportador
- Vancomicina  inhibe la trasglicosilación (unión de unidades disacáridas)
- B-lactamicos (penicilinas o cefalosporinas)  inhibe la traspeptidación y la
transcarboxilación, para que las cadenas no se sigan elongando y no
lleguen a formarse.

 Alteran la función de la membrana citoplasmática: los ATB de este grupo son

altamente tóxicos por la semejanza estructural con las células eucariotas. Son los
menos selectivamente tóxicos y se comportan como “detergentes catiónicos”
produciendo lisis osmótica.
- Polipeptídicos  Polimixina B o Colimixina
- Polienicos  Nistatina o Anfotericina B
- Derivados de inmidazoles  Miconazol, Ketoconazol o Clotrinazol

TODOS POSEEN EFECTOS BACTERICIDA

 Inhibidores de la síntesis de proteínas: son generalmente bacteriostáticos y

algunos también bactericidas. Actuan en diferentes etpas de la síntesis proteica,
sobre subunidades ribosomales 30s y 50s (70s)
- Aminoglucócidos (30s)  BACTERICIDA
- Tetraciclinas (30s) BACTERIOSTÁTICOS
- Macrolidos
- Lincosamidas
- Fenicoles (50s)  BACTERIOSTÁTICOS
- Ácido fusídico
- Espectinomicina
  Bloqueos de la síntesis de ácidos nucleicos
- Rifamicina  impide la transcripción
- Quinolonas  interfieren la replicación del ADN
- Sulfamidas y Trimetroprima  inhiben la síntesis de metabolitos escesiales
como ácido fólico. Son llamados ANTIMETABOLITOS

TODOS POSEEN EFECTOS BACTERICIDA

Según el espectro de acción

Según el efecto bactericida o bacteriostático

SITIO TARGET O BLANCO DE ACCIÓN  se denomina así a la estructura molecular de
la célula bacteriana sobre la cual un antibiótico ejerce su principal.

Resistencia bacteriana

Es la capacidad de una cepa (población bacteriana) de resistir a la acción a cierto

antibiótico. Es la disminución o pérdida de la sensibilidad de una bacteria a un o unos
antibióticos.
 Esta capacidad está mediada por la presencia de un mecanismo de resistencia
molecular como la hidrólisis enzimática o trastornos de permeabilidad
  Clínicamente se expresa por la persistencia de la sintomatología infecciosas y en
el laboratorio por no inhibir la multiplicación bacteriana
 El uso inapropiado de antibióticos es la razón más importante para la selección de
cepas resistentes

Clasificación

Según su naturaleza
 Resistencia primaria o natural  no existe en las bacterias sitio blanco de acción.
Los microorganismos no se hallas en el espectro del antibiótico. (Ej: si a una
bacteria que se ataca por la membrana se le aplica un antibiótico que se dirige a
la pared, este no tendrá ningún efecto)
 Resistencia secundaria o adquirida  es la que se origina por nuevos mecanismo
de resistencia en una población sensible por selección de cepas resistentes.

Según sus bases genéticas (adquiridas)

 Cromosómicas (vertical)
- Mutación/selección
- Constitutiva
- Inducible
 Extracromosómicas (horizontal)
- Por plásmidos  conjugación
- Bacteriófago  transducción
- ADN libre  transformación

Mecanismos bioquímicos de resistencia bacteriana a los antibióticos

 Impidiendo el ingreso por PORINAS

 Impidiendo el transporte por PERMEASAS
 Modificando el sitio Diana por:
- PLP: proteínas ligadoras a penicilina
- Producción de análogos estructurales
- 50s
- 30s
- Por competición
 Expulsión o bombeo
 Producción enzimas inactivantes (penicilinasa)
- Beta lactamasas para penicilinas y cefalosporinas
- Cloranfenicol transferasas para cloranfenicol
 ANTIBIOGRAMA: indicaciones
 Cuando no se puede predecir o se desconoce la sensibilidad a los antimicrobianos
de uso frecuente de un microorganismo aislado
 Como vigilancia epidemiológica, para detectar la emergencia de patógenos
resistentes e informar sobre la evolución de las resistencia conocida
 En infecciones microbianas graves que comprometen la vida del paciente. Ej:
endocarditis, absceso cerebral, meningitis, otras.
 Cuando el tratamiento clínico NO RESPONDE al tratamiento antimicrobiano
clásico para esa enfermedad

Métodos de susceptibilidad a los antimicrobianos

Método de difusión en agar – cualitativo, ofrece la concentración inhibitoria mínima

(CIM) necesaria para que el MO sea sensible

FUNDAMENTO: está basada en la correlación existente entre el diámetro de los halos de

inhibición y la respuesta in vivo. Esta correlación está estudiada para los antibióticos más
comunes y los principales agentes bacterianos.
- No es tan exacto
- Resultados cualitativos
- No da información sobre CBM
- Técnica sensilla y práctica
- Satisfactoria relación con clínica
- Menos costoso

Normas o requisitos técnicos

 Estandarización del medio de cultivo  Agar Mueller-Hinton
- Permite crecer a la mayoría de los patógenos
 - Trasparente
- pH entre 7.2 y 7.4
- Concentraciones fisiológicas de iones
- Espesor de 4mm

 Estandarización del inóculo

- Debe provenir de un cultivo puro
- Turbidez de 0,5 escala McFarland
- Siembra uniforme en medio sólido

 Estandarización de los discos

- Tamaño de 5 a 7 mm de diámetro y 0,02 mm de espesor
- Discos de alto poder (10 – 300 ug de los antibióticos)
- Control de calidad (FDA)
- Almacenar a 4°C
- Posición
- Colocar manualmente o con un dispensador

 Condiciones de incubación y lectura de los resultados  una vez incubado el

cultivo, se procede a leer y comparar los resultados con una tabla estándar, con
el fin de poder reconocer a que antibióticos son sensibles ciertos
microorganismos.

 Cepas bacterianas para

control de calidad de las pruebas
Limitaciones

 Microorganismo de desarrollo lento

 Microorganismos anaerobios
 Antibióticos de difusión lenta
 Los resultados se refieren a los niveles de antibióticos que se pueden conseguir
en suero
 Los resultados no se extrapolan necesariamente a todos los antibióticos de un
mismo grupo

Asignación de categorías clínicas

Sensible (S)  el valor de CMI del antimicrobiano se puede alcanzar en el lugar de la

infección con las dosis recomendadas
Resistente (R)  el valor de CMI del antimicrobiano no se puede alcanzar en el lugar de
la infección, aunque se usen las dosis más altas permitidas
Intermedio (I)  cuando las bacterias se inhiben a concentraciones que no se alcanzan
con dosis terapéuticas, pero que pueden alcanzarse con dosis más altas sin que sean
tóxicas o cuando el antibiótico se encuentra a altas concentraciones en el lugar de la
infección, generalmente en las vías de eliminación

En función del grado de respuesta del paciente al tratamiento OMS – WHO

 Sensible  respuesta favorable en más del 95% de los pacientes infectados
 Intermedias  respuesta favorable en el 90 – 95 % de los pacientes
 Resistente  respuesta favorable en menos del 90% de los pacientes

Método por dilución en tubos  cuantitativos, ofrece la concentración inhibitoria

mínima y también la concentración bactericida mínima (CBM)

CONCENTRACIÓN INHIBITORIA MÍNIMA

Mínima concentración de antibiótico capaz de inhibir el crecimiento “in vitro” de una
población bacteriana

CONCENTRACIÓN BACTERICIDA MÍNIMA

Mínima concentración de un antibiótico capaz de inducir la muerte “in vitro” de una
población del 99,9% de las bacterias

Valor predictivo del antibiograma

 La CMI no es una medida química o física, está sujeta a errores de interpretación
 Los factores del huésped son los más importantes para la curación de la
patología
 La sensibilidad de un determinado antibiótico frente a un mo no garantiza el
éxito
 La resistencia si predice el fracaso
Resultados en la clínica: va a depender del estado del paciente

 Estado del paciente

 Grado de sensibilidad de la bacteria infectante
 Concentración de antimicrobiano en el lugar de la infección
 Localización de la infección
 Historia natural de la infección (abscesos)

Asociación de antibióticos

SINERGIA  la actividad es mayor que la suma de cada uno de ellos (1+2=5)

ADISIÓN O SUMACIÓN  simple suma de efectos (4+1=5)

En ocasiones si no hay certeza de los antibióticos que se están asociando, se pueden dar
efectos negativos como:

ANTAGONISMO  la actividad microbiana es claramente menor que la del ATB de

mayor efecto y espectro (5+4=3)

INDIFERENCIA  el efecto es igual al más activo de los ATB usados en la asociación

(2+3=3)

¿Cuándo está indicado asociar antibióticos?

 Para prevenir o reducir al mínimo la aparición de resistencias

 Para conseguir un efecto sinérgico experimentalmente comprobado
 Para proporcionar un tratamiento óptimo en situaciones de riesgo vital en
infecciones polimicrobianas y mixtas, inmunodepresión, endocarditis, etc.