ESPECIALIZACIÓN EN CRIMINALÍSTICA Y ACTIVIDADES PERICIALES
Toxicología Forense
Trabajo de Evaluación Final
Biagi Bistoni Marta Inés, Luna Fernanda Soledad, Martínez Fernando, Murúa Pablo
El objetivo del trabajo es aplicar los conocimientos adquiridos en la materia y tratarlos
con criterio y rigor científico en un hecho delictivo.
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Trabajo final de evaluación materia Toxicología Forense:
Caso elegido para el trabajo final:
Caso IV (sobredosis): individuo de sexo masculino que es hallado muerto en una
habitación de un departamento. Han transcurrido 7 días desde la que se lo vio por última
vez. Al momento de proceder personal policial con la orden judicial para ingresar al
domicilio, se encuentra el cuerpo sin vida sobre una cama. Según testigos consumía
drogas. Se encuentran elementos relacionados con actividad sexual (inhaladores,
pornografía).
a) Personas a indagar
Las personas a indagar podrían ser varias, su pareja, amigos de la víctima, el portero del
edificio, los padres y familiares, vecinos del edificio, locales comerciales, lugares donde
concurría habitualmente (clubes, institutos, colegio o universidades, bares, etc.), médico
de cabecera.
b) Preguntas a realizar
¿Cuándo fue la última vez que lo vieron?
¿Con quién?
¿Cuándo fue la última vez que hablaron con él?
¿Qué es lo que hablaron?
¿Hay algo que le llamó la atención de la charla?
¿Notó algo raro en su comportamiento o en su aspecto últimamente?
¿Trabajaba, estudiaba, en qué ocupaba su tiempo?
¿Tenía conocimiento si consumía algún tipo de sustancia? ¿Cuáles?
¿Alguna vez mencionó dónde las conseguía, o quien se las vendía?
¿Con quién o quienes vivía?
¿Vivía en este departamento o sólo iba en algunas oportunidades?
¿Tomaba alcohol?
¿Dónde habitualmente compraba el alcohol?
¿Consumía alcohol habitualmente o sólo los fines de semana cuando salía?
¿Lo han visto consumir alcohol en exceso y mezclarlo con drogas?
¿Alguna vez fue tratado por un episodio de alcoholismo o sobredosis?
¿En qué hospital o centro asistencial?
¿Tenía problemas familiares?
¿Se escuchó algún ruido, música, como si se tratara de una fiesta el o los días previos a su
muerte?
¿Alguien se quejó alguna vez de escuchar ruidos molestos del departamento?
¿Concurría al médico habitualmente?
¿Estaba bajo algún tratamiento de rehabilitación por su adicción a las drogas?
¿Estaba depresivo por algún acontecimiento, la pérdida de algún ser querido, o la pelea
con alguna pareja?
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¿Padecía alguna enfermedad, física o mental?
¿Tomaba medicamentos? ¿Cuáles?
¿Alguna vez lo vieron mirando pornografía?
¿La miraba de internet o compraba este tipo de películas en algún lugar?
c) Materiales de interés en la investigación que se puedan secuestrar/recolectar
Una vez que se constata que la persona se encuentra fallecida por parte de
personal policial, se cierra el lugar para preservarlo a la espera de la llegada del
equipo de Policía Judicial. Cuando dicho personal se hace presente en el lugar se
comienza con la inspección. Se realizan las correspondientes tomas fotográficas
de todos los elementos presentes en el lugar y se dibujan en un plano. Se procede
al secuestro de las evidencias encontradas: cuatro envoltorios de papel
metalizado, vacíos, dos dispersos en la mesa de luz y dos en el piso de la
habitación, dos inhaladores (“poppers” alquil nitritos, como por ejemplo el nitrito
de amilo) que se encontraban sobre la mesa de luz, y dentro del cajón de la misma
se hallaban dos envoltorios de papel metalizados cerrados con sustancia
pulverulenta de color blanco, al realizarle la prueba de Scott la misma dio positiva
lo que indica la posible presencia de cocaína. Se secuestra un vaso y una botella
de whisky, ambos con líquido en su interior, que se encontraban sobre la mesa del
comedor. No se encuentran rastros de ninguna otra sustancia y no se encontraban
violentados los ingresos y ventanas del departamento. Se labra el acta donde
constan los elementos secuestrados.
d) Matrices biológicas que podrían ser útiles para el análisis de tóxicos
El examen del cadáver lo realiza personal de Medicina Legal en el lugar, pero al
encontrarse en estado de descomposición se traslada al Instituto de Medicina
Forense para su correcto estudio. Allí se extrae sangre, orina, humor vítreo y se
toman muestras de pelo de la cabeza, en cantidad suficiente. Además se realizan
hisopados nasales para la búsqueda de cocaína. Siendo una persona que lleva
varios días de fallecida la matriz ideal para las determinaciones de etanol y
cocaína y/o metabolitos, es el humor vítreo, debido a que esta matriz carece de
proteínas y bacterias, lo que lo hace más resistente a la descomposición. El pelo,
una matriz alternativa, es muy útil para averiguar el consumo cronológico de
drogas, en este caso, cocaína y etanol.
e) Tipos de tóxicos a investigar
Los tóxicos a investigar son:
Etanol (sangre, orina, HV)
En caso de obtener resultados negativos para etanol, se busca la presencia de sus
metabolitos: Ésteres etílicos de ác grasos (FAEE), Etil-glucurónido (EtG) y
Etilsulfato (EtS) (sangre, orina, HV, pelo), como análisis alternativos que indiquen
consumo de esta sustancia.
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Cocaína y sus metabolitos (Ecgonina metil éster (EME), Cinamoilcocaína,
Benzoilecgonina (BE) y Etilbenzoilecgonina o cocaetileno (EBE) (aparece cuando
hay un consumo simultáneo con etanol) (sangre, orina, HV, pelo)
Alquil nitritos en el líquido incoloro contenido en la ampolla de los inhaladores.
f) Aparatología necesaria para investigar los tóxicos en cuestión
Para la determinación de etanol se utiliza un Cromatógrafo de gases con detector
de Ionización a la llama, utilizando la técnica de head-space. (HS-GC/FID). En
tanto para el análisis de sus metabolitos (FAEE, EtG y EtS) se utiliza
Cromatografía líquida en tándem con espectrómetro de masas (LC-MS).
Para la determinación de cocaína se realizan reacciones de orientación en el caso
que se trate de la sustancia pulverulenta y se emplean tiras reactivas multidrogas
para realizar un screening de varios tipos de drogas en material biológico. Luego
se siembran ambos materiales en placa de TLC y se confirma la presencia de
drogas utilizando un cromatógrafo de gases en tándem con espectrómetro de
masas (GC-MS), para la búsqueda del principio activo, metabolitos y posibles
sustancias utilizadas como adulterantes, frente a testigos. Para la cuantificación de
cocaína en sangre se utiliza un GC-FID.
Para la identificación de alquil nitritos, se utiliza GC-MS, utilizando la técnica de
head space frente a testigo.
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g) Plan de trabajo para la identificación de tóxicos en matices biológicas y no
biológicas
Matrices a analizar
No biológicas Biológicas
Sust. pulveru Cont vaso Sangre H.V., Orina
Hisopado y botella Pelo
nasal
Envoltorios
vacíos Inhaladores
Etanol y Cocaína
Nitrito Etanol
Cocaína de amilo Análisis del material:
A las muestras de orina y H.V. se les
Análisis del material: en un vial 10 realizan las pruebas de orientación, la
Análisis del material:
Análisis del material: mL de capacidad se coloca extracción se efectúa con extracción
Sustancia pulverulenta: se pesa
Inhaladores: se coloca 1 mL de 1 mL del material (sangre, HV, orina, líquido-líquido (LLE) en el caso de la
el contenido de sustancia y
líquido amarillo en un vial de 10 líquido de botella y vaso) orina y H.V., y con hexano/acetato de
luego se realizan las pruebas de
mL, se sella y se incuba durante 1 mL de terc-butanol 1 g. % (estándar etilo(2/1: vol/vol) en el del cabello,
orientación y luego la
30 minutos a 60°C, se deja interno) previa digestión con NaOH a 80 ºC.
confirmación por GC-MS
enfriar a temperatura ambiente y 1 ml de solución saturada de K2 CO3, En sangre se realiza extracción en fase
Hisopado nasal, envoltorios
luego se inyectan 0.5 mLd el como agente liberante sólida. Luego se deja evaporar el
vacíos: se solubiliza el resto de
aire del espacio cabeza en GC- Se sella y posteriormente se incuba solvente para concentrar y se identifica
la sustancia, se realizan las
MS y se compara frente a durante 30 minutos a 50ºC y a en GC-MS.
pruebas de orientación y se
testigos. continuación se deja enfriar a La cocaína se cuantifica con GC-FID.
identifica y cuantifica en GC-
temperatura ambiente y luego se
MS.
inyectan 0.5 mL del aire confinado
en el recipiente mediante una jeringa
hipodérmica plástica de 1 ml de
capacidad en GC-MS.
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h) Protocolo de Recolección, identificación y conservación de muestras de
interés químico legal
Introducción
El lugar del hecho es “La zona o la inmediata vecindad del lugar donde se ha
cometido un delito y donde se pueden hallar las pruebas”. La investigación en el
lugar del hecho es una actividad especializada, que en nuestra provincia
inicialmente está a cargo de la Policía Judicial. Se debe tener en cuenta la
extensión de la zona. Si es interior o exterior o al aire libre. Se incluyen los
accesos, las zonas circundantes y la posible ruta de escape del sospechoso.
Las principales actividades que se cumplen son las siguientes:
a) PrimeronqueQtodoQseQdebeQprotegerQelQlugarQdelQhechoQQQQQQQQQ
b) EsteQlugarQdebeQaislarseQdeQcuriososQyQperiodistasQQQQQQQQQQQQ
c) Se ha de investigar si el lugar ha sido alterado de alguna manera, consignado
lasQcorrespondientesQconstancias
d) Los funcionarios de Policía Judicial visitan el lugar del hecho y lo inspeccionan
paraQrecaudarQpruebas
e) Es necesario preservarlo hasta que hayan sido logradas suficientes pruebas
comoQparaQsatisfacerQalQFiscal.
f) La Justicia depende de la policía judicial para la reconstrucción del lugar del
hecho.
Pasos mecánicos en la conducción de una investigación
1) Se debe tomar fotografías del lugar previo a la intervención de los peritos.
2) Realizar un croquis de la escena del crimen en donde deben constar el cadáver
y las evidencias a secuestrar.
3) Si se trata de una escena del crimen en un lugar interno, busque huellas
digitales, y en caso de la escena al aire libre, busque huellas de pies e impresiones
de neumáticos.
4) Examine la escena por si hay huellas digitales latentes. Con frecuencia se
encuentran huellas visibles hechas con sustancias extrañas como sangre en los
dedos, en las manos en la ropa.
5) Fotografié, identifique y reúna cualquier otro elemento o artículo de evidencia
física.
6) Si resulta practico, trasporte la evidencia al laboratorio.
Recepción y traslado de las evidencias
Conceptos
Evidencia: Es todo objeto, cosa, sustancia y demás elementos encontrados en la
escena del crimen o cualquier otro lugar, que han sido recolectados cumpliendo
los requisitos de conservación y seguridad que por su cualidad, calidad y cantidad
están relacionados con los hechos y los mismos se convierten en piezas de
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convicción clave para la demostración de la verdad que, al incorporarse
posteriormente al proceso, son denominados pruebas.
Las evidencias pueden ser obtenidas desde la escena del crimen por medio de
cualquier acto de investigación o a través de la víctima o victimario. La cadena de
custodia: es una sucesión de eslabones entrelazados que garantizan la identidad e
idoneidad de las evidencias desde la escena o lugar donde estaba y consiste en la
búsqueda, fijación, recolección, embalaje, transporte, análisis y custodia hasta el
local de resguardo, su presentación para la exhibición por las partes en el juicio o
bien en la continuidad de los procesos legales.
Tipos de Evidencias
a) Biológicas: Son aquellas que tienen origen orgánico (humano, animal o vegetal),
ejemplos: órganos, sangre, semen, orina, contenido gástrico, fluido vaginal, pelos,
hojas de marihuana y otros.
b) Las evidencias biológicas se conducen típicamente para medir los efectos de una
sustancia en un organismo.
c) Físicas o materiales: La evidencia física es un conjunto de materiales, objetos y
sustancias que guardan relación con el caso que se investiga, de diversa naturaleza
y origen, dejados por la ejecución de la actividad delictiva, cuyo potencial radica
en que sirvieron para cometer el hecho. En consecuencia, la evidencia física y los
elementos materiales probatorios son los objetos tangibles que están directamente
vinculados con la controversia del caso. Son los productos o instrumentos del
delito que pueden ser presentados en el juicio.
d) Por evidencia material o física se entienden los restos de materiales o sustancias,
rastros, objetos, armas, etc., relacionados con un delito y de cuya existencia,
análisis científico, características o condiciones particulares, o relacionadas con
otros, se infieren conclusiones que corroboran el hecho o ayudan a explicarlo.
Generalidades.
a) La recolección de evidencias e indicios podrá efectuarse durante la inspección
ocular en la escena del crimen, allanamiento y registro de morada u otros locales.
b) Las evidencias materiales relacionadas con los delitos investigados serán
trasladadas y permanecerán almacenadas en los locales destinados para este fin.
Protocolo de Análisis de Etanol en muestras de sangre, humor vítreo y orina
Alcohol etílico por GC-FID (Head space)
En un frasco de vidrio de 10 ml de capacidad:
1 ml de muestra a analizar
1 ml de isopropanol (mejor tert butanol), 1 g. %, como estándar interno
1 ml de solución saturada de K2 CO3, como agente liberante
A continuación se precinta el tapón de goma colocado como cierre del recipiente, y
sellado herméticamente con precinto de aluminio. Posteriormente se coloca durante
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30 minutos en un baño termostático a 50ºC y a continuación se deja enfriar a
temperatura ambiente.
Se toman entonces entre 0.4 a 0.5 ml del aire confinado en el recipiente mediante
una jeringa hipodérmica plástica de 1 ml de capacidad inyectadas en el
cromatógrafo
Calibración del integrador para determinar etanol usando isopropanol como Standard
Interno
Para llevar a cabo la calibración se utilizó el método de standard interno y el ajuste de la
curva para el cálculo de concentraciones se efectuó por cuadrados mínimo.
Esquema de trabajo
Se prepararon 10 réplicas de 5 concentraciones distintas de etanol: 1, 2, 3, 4 y 5 g % (50
muestras totales).
Cada patrón se preparó en un frasco hermético conteniendo:
1 ml de etanol patrón correspondiente.
1 ml de isopropanol 1 g. %o.
1 ml de solución saturada de K2 CO3
Condiciones de GC-FID
Columna: de acero inoxidable (2 m de longitud, 3 mm de diámetro interno) empacada
con 0.3 % Carbowax 1500-graphapack 60/80 (EMQ-ALL TECH), isotérmica 100 º C,
Detector: ionización de llama (FID) conectado a un integrador Shimadzu C-R4A.
Temperatura de columna: temperatura inicial 35 °C, 1 minuto y 10 °C/min de gradiente
hasta 100 °C de temperatura final.
Temperatura de inyección y detector: 150 °C.
Protocolo de Análisis de Cocaína en muestras biológicas
Identificación de cocaína y metabolitos
Ensayo inmunoensayo cromatográfico de flujo lateral
Se sumergen las tiras reactivas multidrogas (Cocaína, Marihuana (THC),
Benzodiacepinas, Éxtasis (MDMA), Anfetaminas, Barbitúricos) hasta la zona marcada en
la muestra de orina y H.V. Esto permite hacer un screening de las drogas y
posteriormente confirmar los resultados positivos.
Cromatografía en capa delgada (HPTLC)
Preparación de las soluciones de la muestra
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Tomar 20 a 50 mL de la muestra de orina, de acuerdo con la cantidad extraída por el
médico y se coloca en ampolla de decantación. Determinar el pH mediante papel
indicador y, en caso necesario alcalinizar con unas gotas de amoníaco (la cocaína se
encuentra en el extracto alcalino). Agregar la misma cantidad de cloroformo (20 a 50
mL) y dejar reposar en ampolla por un tiempo mayor a 12 horas.
Una vez transcurrido el tiempo, separar el extracto clorofórmico y dejar evaporar en
campana acondicionada con filtros especiales. Si se supone una concentración baja de
cocaína en la muestra se repite el procedimiento anterior con el resto de la orina que
quedó en la ampolla luego de separar el cloroformo.
Para la siembra se utilizan placas que se venden en el mercado de gel de sílice G, con un
marcador inerte que muestre fluorescencia bajo luz ultravioleta de longitud de onda de
254nm. El tamaño normal de la placa es de 10x10.
Se resuspende el extracto de la muestra en tres a cinco gotas de etanol y se prepara
solución patrón en etanol con una concentración de 1mg/mL aproximadamente.
Preparación del sistema de solvente, siembra de la placa
Preparar el sistema de solvente para revelado, siguiendo las indicaciones que figuran en
la tabla siguiente. Antes de realizar el análisis, dejar el sistema de solventes en la cuba
cromatográfica de TLC el tiempo suficiente para que llegue a la saturación de la fase de
vapor.
Sembrar en la placa de TLC las muestras y patrones distanciados unos de otros en 1cm
aproximadamente como mínimo y no deben situarse a menos de 1,5 cm de los bordes de
la placa. La siembra debe realizarse cuidadosamente para no dañar la superficie de la
placa. Luego se la coloca en la cuba cromatográfica saturada con el sistema preparado y
dejar la placa unos 15 a 20 minutos, dependiendo del largo de la placa, para que se
produzca la corrida o separación de los componentes de la muestra. En la siguiente tabla
se observan los sistemas de disolventes utilizados para el revelado apropiado en el
análisis de cocaína.
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Las placas deben estar secas antes de ser analizadas. Para que el color pueda revelarse
debidamente, es importante eliminar da la placa cualquier vestigio de amoníaco o de otras
bases.
Método de visualización/detección
A. Luz UV a 254 nm, se observan manchas oscuras frente a un fondo verde.
B. Reactivo ácido clorhídrico (solución al 10%): Se pulveriza la placa con el ácido
clorhídrico y se deja secar en placa calefaccionada. Luego observar nuevamente
con luz UV a 254 nm, se observa cierta fluorescencia producida por algunos
compuestos psicoactivos.
C. Reactivo de Iodoplatínico ácido
Disolver 0,25 g de cloruro platínico y 5 g de ioduro de potasio en agua destilada
hasta obtener 100 mL; añadir 2 mL de ácido clorhídrico concentrado a la solución
resultante. Cuando la placa se pulveriza con el reactivo, la cocaína aparece como
una mancha azul.
D. Reactivo de Dragendorff
Solución 1: Disolver 2 g de subnitrato de bismuto en 25 mL de ácido acético
concentrado (glacial) y agregar 100 mL de agua destilada.
Solución 2: Disolver 40 g de ioduro de potasio en 100 mL de agua destilada.
Mezclar 10 mL de la solución 1, 10 mL de la solución 2, 20 mL de ácido acético
glacial y 100 mL de agua destilada para obtener el reactivo de Dragendordff.
Cuando la placa se pulveriza con el reactivo, la cocaína aparece como una mancha
naranja.
Interpretación de los resultados
Tras la visualización de las manchas calcular los valores de relación de frente (Rf):
Rf= distancia de migración: desde el origen hasta el centro de la mancha
distancia de revelado: desde el origen hasta el frente de solvente
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Los valores de Rf no siempre pueden reproducirse debido a pequeñas variaciones en la
composición de la placa, los sistemas de solventes, la saturación de la cuba o la distancia
del revelado. Es esencial colocar patrones de referencia en la misma placa para el ensayo.
En la siguiente imagen se muestra el proceso general de análisis por cromatografía en
capa fina:
Cromatografía Gaseosa con Detector Espectrométrico de masas (GC-MS)
La GC-MS es una técnica que aporta datos espectrales altamente específicos de las
distintas sustancias presentes en una mezcla compleja sin necesidad de aislarlos
previamente.
Preparación de la muestra y extracción
De los extractos secos descriptos anteriormente se suspenden en 50 µL de diclorometano.
Preparación de las soluciones patrón
Preparar una solución patrón de cocaína con una concentración de 1 mg/mL con la
mezcla 1:1 de metanol cloroformo.
Preparación del estándar interno
Disolver 50 mg de 2,2,2-trifenilacetofenona (benzopinacolona) en 1000 mL de la mezcla
de solvente (metanol/cloroformo1:1). Añadir 20 µL a la muestra y al patrón si se necesita
el bloqueo del tiempo de retención del análisis. En el siguiente cuadro se detallan las
condiciones del GC-MS.
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Resultados
La identificación se consigue comparando el tiempo de retención y el espectro de masa
de la sustancia analizada con los de un patrón de referencia. Las bibliotecas de espectros
de masas sólo pueden usarse con fines de referencia.
Los tiempos de retención obtenidos para la cocaína y los adulterantes conocidos en las
condiciones de funcionamiento descriptas anteriormente son los siguientes:
Además de la droga madre en la orina se encuentran también los metabolitos.
Cuantificación de cocaína (COC) en muestras de sangre
Se realiza una extracción en fase sólida, utilizando columnas de sílica C8 y SO3H (200
mg).
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Reactivos necesarios:
N-desmethyl-N-[2H3]methylcocaine (d3-COC)
bis(trimethylsilyl)trifluoro- acetamide (BSTFA),
N-methyl-N-(tert-butyldimethyl- silyl)trifluoroacetamide (MTBSTFA)
conteniendo 1% tert- butyldimethylchlorosilane (TBDMCS)
Preparación de las soluciones de stock
Se preparan soluciones en acetonitrilo de COC y d3-COC a concentraciones apropiadas.
Preparación de las muestras para la determinación de COC
Se diluye 1 mL de sangre con 4 mL de buffer fosfato (pH 6.0) 0.1 mol/L. Se preparan
controles de concentraciones de 100, 50, y 20 ng/mL de muestra agregando COC (100
mL de 1.0, 0.5, ó 0.2 mg/L), y se colocan en tres tubos de vidrio de centrífuga. Se
utiliza d3-COC como estándar interno (100 mL de 0.5 mg/L d3-COC), el cual es
agregado a los tubos de control y a tubos vacíos de centrífuga los que luego serán
utilizados para el análisis de las muestras.
La muestra diluida con buffer fosfato, se coloca en los tubos de centrífuga que ya
contienen estándar interno y se homogeiniza en vortex.
Luego de la homogeinización, los tubos son colocados en un baño de hielo y luego
son centrifugados durante 60 minutos a 3834 g a 7–10 °C. Las columnas SPE son
colocadas en una cámara de extracción y son acondicionadas con 3 mL de methanol, 3 mL
de agua y 3 mL de buffer fosfato 0,1 mol/L (pH 6,0) en ese orden, bajo la acción de
presión reducida. El sobrenadante del homogenates se hace pasar por la columna y se
aplica presión reducida para su elución. Luego las columnas se lavan con 2 mL de agua
destilada, 3 mL de HCl 0,1 mol/L, y 3 mL de isopropanol, y se secan por 5 minutos bajo
presión reducida. La COC se eluye con 3 mL de una mezcla (9:1:0.2) de
diclorometano-metanol-NH3(14.8 mol/L).
Las soluciones se evaporan por un corriente de nitrógeno. Los extractos se
resuspenden en 50 µL de acetone deshidratada y luego se transfiere al vial para ser
analizado por GC-MS.
Parámetros de GC-MS
Las muestras son introducidas por inyección automática, en un volumen de 1 a 4 µL
Columna: capilar DB-5MS [5:95 phenyl-methylsiloxane; 15 m 3 0.25 mm (i.d.);]
Gas carrier: Helio, 10 psi de presión constante.
Detector: ionización electrónica a 70 eV con 200–250 °C de temperatura de la fuente.
Multiplicador de electrones seteado a 200–700 V por encima del autotune.
Condiciones de GC-MS parar COC.
Temperatura del inyector: 280 °C
Temperatura de la línea de transferencia: 270 °C
Horno: la temperatura comienza a 170 °C (se mantiene por 0.5 min) y luego incrementa a
270 °C a 30 °C/min (se mantiene por 2.7 min).
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El GC comienza en modo splitless, y se purga el puerto de inyección luego de 0.3 min.
Iones monitoreados: m/z 303, 272, y 182 para COC y m/z 306 y 185 para d3-COC. Los
iones m/z 303 y 306 son utilizados para cuantificación.
Luego de cada inyección, 3 mL de acetona se inyectan como blanco de solvente.
Protocolo de Análisis de Cocaína en material de secuestro
La cocaína es un estimulante del sistema nervioso central, obtenida de la hoja de coca
(Eritroxilon coca), se puede encontrar en forma de polvo, sólido, pasta, diluida o
camuflada en otras sustancias.
Se puede determinar:
Si la sustancia remitida a investigación en forma de polvo, sólido, pasta, diluida o
camuflada, es cocaína o si contiene cocaína y el grado de concentración.
Obtención de las evidencias o muestras:
a) Seleccione los paquetes u objetos por su tipo y aspecto físico, posteriormente rotule.
b) Pese los paquetes o muestras incautadas.
c) Si la sustancia incautada u ocupada está en forma de envoltorios, todos deben ser
contados.
d) Si encuentra diez o menos paquetes tome muestras de cada uno, diez o más, tome diez
y si se encuentran más de 100, tome el número obtenido de la raíz cuadrada de la
cantidad de envoltorios.
Análisis
Reacciones de Orientación
Ensayo colorimétrico de Scott
Reactivo 1: Disolver 1,0 g de tiocianato de cobalto en 50 mL de ácido acético al 10%
(v/v), y añadir 50 mL de glicerina.
Reactivo 2: Ácido clorhídrico concentrado
Reactivo 3: Cloroformo
Método
Etapa 1: Colocar una pequeña cantidad del material sospechoso en un tubo de ensayo.
Agregar 5 gotas del reactivo 1 y agitar. La cocaína y sustancias conexas producen un
precipitado y solución de color azul.
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Etapa 2: Agregar una gota del reactivo 2 y agitar la mezcla unos segundos. La solución
azul debería volverse rosa. Si el color azul no varía, añadir otra gota. Si el color azul
persiste, repetir el ensayo con una muestra más pequeña del material sospechoso.
Etapa 3: Agregar 5 gotas del reactivo 3 y agitar. Si hay cocaína presente en la muestra, la
capa inferior de cloroformo se volverá de un intenso color azul, mientras que la capa
superior quedará con una tonalidad rosa.
Resultado
Para considerar que un ensayo para la determinación de cocaína ha dado un resultado
positivo es necesario que se haya obtenido un resultado positivo en cada una de las
etapas.
Siempre que se obtenga un resultado positivo para este ensayo debe ser confirmado por
un método de referencia como por ejemplo GC-MS.
Ensayos Aniónicos
En los ensayos aniónicos con fines forenses se recurre habitualmente a la solubilidad en
combinación con determinadas reacciones, en las que los resultados se basan en la
presencia o ausencia de un precipitado y su solubilidad.
La cocaína en forma de clorhidrato es, con mucho, la más frecuente, mientras que en
productos de cocaína, con la excepción de la pasta de coca, raramente se encuentran
sulfatos.
Cloruros- Ensayo de nitrato de plata
Reactivo
Disolver 1,0 g de nitrato de plata en 20 mL de agua destilada (para obtener una solución
acuosa de nitrato de plata al 5%)
Método
Disolver una pequeña cantidad del material sólido en agua destilada. Determinar el pH
mediante papel indicador y, en caso necesario acidificar con unas gotas de ácido nítrico.
Agregar una o dos gotas del reactivo y observar si se produce precipitación. Si se obtiene
un precipitado blanco o amarillo, añadir amoníaco hasta que la disolución se vuelva
básica.
Resultado
Las soluciones de cloruros, cuando se tratan con una solución de nitrato de plata, dan un
precipitado blanco de aspecto gelatinoso insoluble en ácido nítrico. Una vez lavado con
agua, el precipitado es soluble en una solución de amoníaco, de la que se puede volver a
precipitar con el agregado de ácido nítrico.
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Sulfatos- Ensayo de cloruro de bario
Reactivo
Disolver 1,0 g de cloruro de bario en agua destilada (para obtener una solución acuosa de
cloruro de bario al 10%)
Método
Disolver una pequeña cantidad del material sospechoso en agua destilada, acidificar con
unas gotas de ácido nítrico y añadir una o dos gotas del reactivo.
Resultado
Las soluciones de sulfatos, cuando se tratan con sulfato de bario dan un precipitado
blanco insoluble en ácido clorhídrico.
Cromatografía en capa delgada (TLC)
La TLC es una técnica utilizada habitualmente para la separación e identificación de
drogas fabricadas ilícitamente.
Placas de TLC (fases estacionarias)
Se utilizan placas que se venden en el mercado de gel de sílice G, con un marcador inerte
que muestre fluorescencia bajo luz ultravioleta de longitud de onda de 254nm. El tamaño
normal de la placa es de 10x10.
Método
Sistema de solvente
Preparar el sistema de solvente para revelado, siguiendo las indicaciones que figuran en
la tabla siguiente. Antes de realizar el análisis, dejar el sistema de solventes en la cuba
cromatográfica de TLC el tiempo suficiente para que llegue a la saturación de la fase de
vapor.
Preparación de las soluciones de la muestra y patrón
Se preparan soluciones de muestra y patrón en etanol con una concentración de 1mg/mL
aproximadamente.
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Coloración de las manchas y revelado
Sembrar en la placa de TLC las muestras y patrones distanciados unos de otros en 1cm
aproximadamente como mínimo y no deben situarse a menos de 1,5 cm de los bordes de
la placa. La siembra debe realizarse cuidadosamente para no dañar la superficie de la
placa.
La placa sembrada se coloca en la cuba cromatográfica saturada con el sistema preparado
y dejar la placa unos 15 a 20 minutos, dependiendo del largo de la placa, para que se
produzca la corrida o separación de los componentes de la muestra.
Visualización/detección
Las placas deben estar secas antes de ser analizadas. Para que el color pueda revelarse
debidamente, es importante eliminar da la placa cualquier vestigio de amoníaco o de otras
bases.
Método de visualización
A. Luz UV a 254 nm, se observan manchas oscuras frente a un fondo verde.
B. Reactivo de Iodoplatínico ácido
Disolver 0,25 g de cloruro platínico y 5 g de ioduro de potasio en agua destilada
hasta obtener 100 mL; añadir 2 mL de ácido clorhídrico concentrado a la solución
resultante. Cuando la placa se pulveriza con el reactivo, la cocaína aparece como
una mancha azul.
C. Reactivo de Dragendorff
Solución 1: Disolver 2 g de subnitrato de bismuto en 25 mL de ácido acético
concentrado (glacial) y agregar 100 mL de agua destilada.
Solución 2: Disolver 40 g de ioduro de potasio en 100 mL de agua destilada.
Mezclar 10 mL de la solución 1, 10 mL de la solución 2, 20 mL de ácido acético
glacial y 100 mL de agua destilada para obtener el reactivo de Dragendordff.
17
Cuando la placa se pulveriza con el reactivo, la cocaína aparece como una mancha
naranja.
Interpretación
Tras la visualización de las manchas calcular los valores de relación de frente (Rf):
Rf= distancia de migración: desde el origen hasta el centro de la mancha
distancia de revelado: desde el origen hasta el frente de solvente
Los valores de Rf no siempre pueden reproducirse debido a pequeñas variaciones en la
composición de la placa, los sistemas de solventes, la saturación de la cuba o la distancia
del revelado. Es esencial colocar patrones de referencia en la misma placa para el ensayo.
Cromatografía Gaseosa con Detector Espectrométrico de masas (GC-MS)
La GC-MS es una técnica que aporta datos espectrales altamente específicos de las
distintas sustancias presentes en una mezcla compleja sin necesidad de aislarlos
previamente.
Preparación de la muestra y extracción
Las muestras sólidas se pulverizan y homogeinizan en un mortero. Se toma una cantidad
apropiada de material en una mezcla de solventes 1:1 de metanol/cloroformo, para
obtener una solución de la muestra de 1 mg/mL.
Preparación de las soluciones patrón
Preparar una solución patrón de cocaína con una concentración de 1 mg/mL con la
mezcla 1:1 de metanol cloroformo.
Preparación del estándar interno
Disolver 50 mg de 2,2,2-trifenilacetofenona (benzopinacolona) en 1000 mL de la mezcla
de solvente (metanol/cloroformo1:1). Añadir 20 µL a la muestra y al patrón si se necesita
el bloqueo del tiempo de retención del análisis.
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Resultados
La identificación se consigue comparando el tiempo de retención y el espectro de masa
de la sustancia analizada con los de un patrón de referencia. Las bibliotecas de espectros
de masas sólo pueden usarse con fines de referencia.
Los tiempos de retención obtenidos para la cocaína y los adulterantes conocidos en las
condiciones de funcionamiento descriptas anteriormente son los siguientes:
Cuantificación de cocaína por Cromatografía de gases (GC) con detección de
ionización de llama (GC-FID)
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El método que se expone a continuación para el análisis cuantitativo de cocaína mediante
GC-FID no necesita derivatización y se describe aquí para uso general.
Preparación de la solución que ha de actuar como patrón interno
Disolver n-tetracosano en cloroformo hasta obtener una concentración de 1,0 mg/ml. La
solución habrá de almacenarse a 4 ºC cuando no se esté utilizando, y puede mantenerse
durante un año a esa temperatura sin que se produzca una degradación apreciable. La
solución deberá calentarse a temperatura ambiente antes de utilizarla. Cada análisis
requiere el uso de 5 ml.
Preparación de la solución patrón
Pesar con precisión 20 mg de cocaína patrón (clorhidrato o base) y colocarlos en un
matraz Erlenmeyer de 50 ml. Añadir 5 ml de la solución patrón interno y 20 ml de
cloroformo que contenga 50 µl de dietilamina, todo ello medido con precisión. Dejar
reposar la solución durante cinco minutos y, a continuación, inyectar 1 ó 2 µl de la
solución en el cromatógrafo de gases.
Preparación de la solución muestra
Obtener una mezcla representativa del material incautado. Triturar y homogeneizar hasta
conseguir un polvo fino. Pesar con precisión una cantidad del material incautado que
contenga aproximadamente 20 mg de clorhidrato de cocaína y colocarla en un matraz
Erlenmeyer de 50 ml. Añadir 5 ml de la solución patrón interno y 20 ml de cloroformo
que contenga 50 µl de dietilamina, todo ello medido con precisión. Dejar reposar la
solución durante cinco minutos y a continuación inyectar 1 ó 2 µl de la solución en el
cromatógrafo de gases.
Cálculos
El porcentaje de cocaína (como base) presente en la muestra puede calcularse
mediante la fórmula general siguiente:
Donde:
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Resultados
El orden de recuperación por disolución y posterior extracción y el tiempo relativo de
retención con respecto a la cocaína son los siguientes:
e) Informe de los resultados obtenidos
De acuerdo a los datos obtenidos en el lugar del hecho y los resultados de los
análisis realizados podemos decir que es muy probable que este hecho se trate de
una sobredosis de cocaína, mezclado con consumo de alcohol y sustancias
inhalantes (poppers) ya que la concentración de cocaína en sangre supera la dosis
letal establecida para una persona normosómica, sumado a la detección del
metabolito cocaetileno, es cual es altamente tóxico. Las respuestas a las preguntas
realizadas en el ítem b) pueden sostener esta hipótesis que se formula el fiscal que
interviene en la causa. Otro dato de interés para la investigación son los datos que
surjan de la autopsia del cadáver.
En archivo adjunto se puede ver el informe de los resultados emitido por el
laboratorio y el trabajo científico elegido.
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f) Bibliografía:
1. Manual de peritajes, recolección y tratamiento de las evidencias. Managua,
Nicaragua 2013, Reformas y adiciones, 2da Edición.
2. Rapid testing methods of drugs of abuse. Manual for use of National Law
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análisis de estupefacientes. Naciones Unidas, Nueva York, 2012.
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9. Ferrari LA, Análisis cuantitativo de alcohol etílico en muestras de sangre por la
técnica del espacio cabeza y cromatografía gaseosa con detector de ionización de
llama (GC-FID). Disponible en http://www.unimoron.edu.ar/Portals/0/PDF/doc-
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