ENZIMAS

Química biológica – Flor Pérez Isa

INTRODUCCION
Enzimas: Son catalizadores biológicos. Son muy específicas. Las sustancia sobre las
cuales las enzimas van a actuar se denominan sustratos
Catalizador: Es un agente capaz de acelerar una reacción química sin formar parte de los
productos finales ni desgastarse en el proceso
La mayoría de las enzimas son de naturaleza proteica, pero NO todas, se descubrió que
existen algunas moléculas de ARN que tienen actividad catalítica y que se denominan
‘’ribozimas’’ que transforman el transcripto primario en ARNm
CATALISIS ENZIMATICA
CATALISIS ENZIMATICA
CATALISIS ENZIMATICA
SITIO ACTIVO
Sitio activo: Lugar del sustrato al cual se fija la enzima. Formado por aa
EJEMPLOS
A-CO-O-R + H₂O → A-COOH + HO-R
Estearasa: reconoce al grupo funcional y al
enlace ester. Independiente de quien sea la
cadena A o R.
CATALISIS ACIDO-BASE
• La catálisis ácido-básica es el proceso por el cual una reacción química es catalizada debido a la participación de un
ácido o una base. El ácido es a menudo el protón y la base es a menudo un ion hidroxilo. Las reacciones típicas
catalizadas por la transferencia de protón son esterificaciones y reacciones aldol.
• Vamos a necesitar grupos que sean dadores de protones y otros que sean aceptores de protones; por ejemplo hay
grupos con el grupo carboxilo (glutamato o el aspartato) que potencialmente puede convertirse en un grupo dador
de protones, grupos aminos protonados (como la lisina) y luego de que donan esos protones y que quedan por
ejemplo como grupo carboxilato, o como grupo amina pueden servir como aceptores de protones en una catálisis
básica.
• Ejemplo:
CATALISIS COVALENTE
• En la catálisis covalente se forma un enlace covalente transitorio entre la enzima y el sustrato.
• Si consideramos la siguiente reacción no catalizada:
COFACTOR/COENZIMA
Algunas enzimas no requieren para su actividad
catalítica más grupos químicos que sus residuos de
aminoácidos, pero otros requieren un componente
químico adicionales llamado cofactor. En general
los cofactores suelen ser moléculas que nuestro
organismo no puede sintetizar.
La enzima sin el cofactor recibe el nombre de
APOENZIMA y cuando el cofactor está unido a la
enzima se llama HOLOENZIMA
NOMENCLATURA
Terminación ‘’asa’’ al nombre del sustrato sobre el cual actuara.
1) OXIDOREDUCTASAS
Las oxidorreductasas catalizan reacciones de oxido-reducción. Están asociadas a
coenzimas
Ared + Box → Aox + Bred

A → Es el agente reductor, o dador de electrones. Durante la reacción se oxidara (perderá

electrones). Se llama agente reductor porque hace que B SE REDUZCA
B → Es el agente oxidante, o receptor de electrones. Durante la reacción se oxidara
(aceptara electrones). Se llama agente oxidante porque hace que A SE OXIDE.
2) TRANSFERASAS
Catalizan la transferencia de un grupo de átomos, como amina, carboxilo, carbonilo,
metilo asilo glicosilo fosforilo desde un sustrato considerado donante a otro compuesto
aceptor.

por ejemplo amino transferasas o transaminasas que catalizan la cesión del grupo amina
de un compuesto a otro.
3) HIDROLASA
Cataliza la ruptura de enlaces C-O, C-N, C-A, y O-P por adición de agua. En la hidrolisis, una
molécula orgánica y el agua reaccionan rompiendo un enlace covalente para formar dos
moléculas orgánicas con grupos funcionales que incluyen los átomos de la molécula de agua, y en
general se requiere añadir ácidos o bases fuertes para catalizar la hidrólisis o también enzimas

El nombre recomendado se forma con el del sustrato y el sufijo asa. Por ejemplo las que
hidrolizan proteínas se van a llamar proteasas.. Pero en general no se suelen utilizar nombres
sistemáticos, muchas de ellas conservan su nombre primitivo; por ejemplo tripsina, pepsina
papaína, etc.
Pertenecen a este grupo la acetilcolinesterasa y ribonucleasa que hidrolizan la unión ester entre
acetato y colina de acetilcolina y las uniones entre nucleótidos en ARN respectivamente.
4) LIASAS
Catalizan reacciones reversibles de adicion de un grupo a un doble enlace. También
catalizan la ruptura de enlace C-C, C-S y C-N por un proceso distinto al de hidrólisis.
Los nombres recomendados incluyen por ejemplo las de descarboxilasas, deshidratasa,
aldolasas cuando eliminan dióxido de carbono, agua o aldehído respectivamente.
5) ISOMERASAS
Interconvierte en isómeros de cualquier tipo, óptico, geométricos o de posición.
Ejemplo ejemplo es la fosfoglucosaisomenasa que cataliza la interconversión de
glucosa 6-fosfato en fructosa 6- fosfato.
6) LIGASAS
Catalizan la unión de dos moléculas acopladas con la hidrólisis de un enlace de alta
energía de nucleósido fosfato.
Un ejemplo es la glutamato amoníaco ligasa, actúa en la reacción entre el ácido
glutámico y amoniaco para formar glutamina. La energía necesaria para la síntesis es
provista por la hidrólisis de ATP
HIPOTESIS DEL ESTADO ESTACIONARIO
¿QUE INFLUYE EN LA VELOCIDAD?
• Vamos a tener 4 variables o factores que influyen en la velocidad de una
reacción enzimática.
1. Concentración de sustrato
2. pH
3. Temperatura
4. Concentración de enzima
5. Efectores (activadores o inhibidores)
1) CONCENTRACION DE SUSTRATO
 Conclusiones:
• La enzima se une al sustrato en una reacción reversible que es muy rápida y el
complejo formado se disocia en una reacción más lenta que la primera y libera la
enzima y al producto.
• A concentraciones muy bajas de sustrato, gran parte de las moléculas de enzima se
encuentran libres, cuando aumenta el sustrato, mayor número de moléculas de
enzimas van siendo ocupadas para formar el complejo ES, si sigue creciendo la
concentración de sustrato llega un momento en el cual prácticamente todas las
enzimas están ocupadas por el sustrato y la enzima se saturó con sustrato.
• Si el aumento de la concentración de sustrato continúa y excede largamente a la de
enzima se alcanza un estado estacionario en el cual la velocidad de la reacción no
varía.
• Todo aumento posterior de sustrato ya no puede producir incremento en la
velocidad de la reacción y esta se comporta como de orden cero
GRAFICA DE DOBLE RECIPROCA
IMPORTANCIA DE KM
• La constante de MM es un elemento de juicio importante para caracterizar una enzima,
por lo que siempre que se purifica una enzima se trata de conocer este valor.
• Se mide en unidades de concentración de sustrato.
• Se define para cada complejo E-S
• El km indica la afinidad de la enzima por el sustrato. Si una enzima tiene un km muy
bajo con un determinado sustrato, significa que se requiere esa pequeña concentración
de sustrato para lograr la saturación de la mitad de las moléculas de enzimas y, por lo
tanto, alcanzar la mitad de la velocidad máxima con esa cantidad de enzima.
• El km indica cual es el sustrato preferido de una enzima cuya especificidad es
relativamente amplia.
• Dando valores a los términos de la ecuación de MM se puede conocer la concentración
de sustrato que se debe elegir para hacer el ensayo de una enzima en condiciones de
reacción de orden cero, o sea sin que influya la concentración de sustrato.
• El estudio de km y de sus modificaciones frente a variaciones de medio de reacción
(pH, presencia de otros sustrato, del producto, de activadores o de inhibidores) es un
elemento de juicio importante para interpretar el mecanismo de una reacción
enzimática
2) pH
• Las enzimas tienen un pH óptimo para actuar, debido a que los cambios de
pH del medio afectan el estado de ionización de los grupos funcionales en la
molécula de la enzima y también en la molécula del sustrato. Para la
formación del complejo ES, es necesaria un adecuada distribución de las
cargas en ambas moléculas.
• El pH óptimo es aquel en el cual el estado de disociación de los grupos
esenciales es el más apropiado para interaccionar en el complejo ES.
• Por otra parte, pH extremos provocan desnaturalización de la molécula
enzimática, con la consiguiente inactivación.
El pH optimo de actividad de una enzima es
generalmente un reflejo del pH del ambiente celular
en el que se encuentra normalmente. La pepsina, que
se encuentra en el estómago, tiene un pH óptimo
alrededor de 1,5. El pH del jugo gástrico se encuentra
entre 1 y 2. La glucosa 6 fosfatasa de los hepatocitos,
con un pH óptimo alrededor de 8 es responsable la
liberación de glucosa en la sangre. El pH normal del
citosol de los hepatocitos está alrededor de 7,2.
 • Conclusiones:
• El pH puede producir en la enzima o en el sustrato alguna modificación
y como consecuencia habrá cambios en los aa catalíticos o los aa a los
que se une el sustrato en el sitio activo de la enzima
• Entonces las constantes cinéticas: la constante de catálisis (Kcat) o la
constante de MM (Km) van a sufrir variaciones
• Habrá un cambio en la forma iónica del sustrato y en consecuencia el
valor de km modificara y por supuesto habrá una alteración, un
cambio en la velocidad de la reacción
ACTIVIDAD EN FUNCION DE pH EN
DISTINTAS CONDICIONES
3) TEMPERATURA
Catalizador Energía de activación (Ea)

Ninguno 18

Platino 12

Catalasa 5,5
4) CONCENTRACION DE SUSTRATO
• La velocidad de la reacción es directamente
proporcional a la concentración de enzima.

• Si la gráfica no es lineal podemos pensar que en

el sistema tenemos además algún efector que
está afectando la velocidad de la reacción
5) EFECTORES: INHIBIDORES
INHIBICION COMPETITIVA
• Los inhibidores competitivos aumentan
el valor de km pero NO modifican la
Vmax. de la enzima.
• El inhibidor compite con el sustrato por
el sitio activo de la enzima para formar
un complejo EI
La inhibición de tipo competitiva puede ser
revertida aumentando la concentración de
sustrato. Si este predomina en la mezcla
tiende a desplazar al inhibidor de su unión
con la enzima
 Conclusiones
• El efecto cinético del inhibidor es el aumento aparente de la km que aparece
𝐼
multiplicada por el factor ἀ= 1 + .
𝐾𝑖
• La Vmax no aparece modificada (es constante); para concentraciones muy altas de
sustrato V= Vmax igual que en ausencia de inhibidor
• Cuanto más pequeño sea el valor de Ki mayor será la potencia del inhibidor
competitivo. O sea que necesitare menor concentración de inhibidor para conseguir el
efecto buscado.
INHIBICION ACOMPETITIVA
• En este caso el inhibidor se une en un sitio distinto al que se
uniría el sustrato. Además, no se unirá a la enzima, sino al
complejo ES formando complejo ternario ESI.
• El inhibidor solo puede fijarse reversiblemente al complejo ESI
y este es un complejo ternario no productivo
INHIBICION MIXTA
RESUMEN
Tipo de Inhibidor Vmax aparente Km aparente
Ninguno Vmax Km
Competitivo Mantiene Modifica (aumenta)
Acompetitivo Modifica (disminuye) Modifica (disminuye)
Mixta Modifica (disminuye) Modifica (aumenta)
INHIBIDOR IRREVERSIBLE
• Los inhibidores irreversibles reaccionan con un grupo químico de
la enzima modificándola covalentemente.
• El efecto de los inhibidores irreversibles depende del tiempo de
actuación del inhibidor.
• Los inhibidores reversibles por lo general son altamente tóxicos
INHIBIDORES SUICIDAS
• Se trata de moléculas que se unen al centro activo de manera
específica igual que el sustrato o los inhibidores competitivos.
• Una vez unidos al centro activo, la enzima transforma la molécula
en una especie química muy reactiva que modifica covalentemente
a la enzima, inactivándola.
• Tienen por lo tanto la especificidad del inhibidor competitivo y la
potencia de los inhibidores irreversibles.
INHIBIDORES SUICIDAS
 ALOPURINOL OXIPURINOL
Xantina oxidasa

Xantina oxidasa
REGULACION DE LA ACTIVIDAD ENZIMATICA
• Las transformaciones de un determinado compuesto en el organismo se produce
generalmente a través de una serie de etapas, cada una de ellas catalizada por una
enzima distinta. En cada paso se forma un nuevo producto utilizado como sustrato por
la enzima de la etapa siguiente.
• En casi todas estas secuencias de reacciones que se llaman vías metabólicas, existe uno
o más enzimas que actúan como reguladores del flujo de sustratos y productos,
ajustándolo a las necesidades de las células. Estas enzimas reguladoras no solo
cumplen su función catalizadora, sino que aumentan o disminuyen su actividad en
respuesta señales específicas.
• La enzima que cataliza la primera etapa en una vía metabólica suele ser la reguladora,
las restantes enzimas de la serie ajustan su actividad a la disponibilidad del sustrato
fijada a partir de la primera reacción.
• De acuerdo con el tipo de señal al cual responden las enzimas reguladoras pueden
distinguirse en:
❖ alostéricas: Funcionan a través de la unión reversible, no covalente de moduladores o
efectores alostéricos. Ej moléculas pequeñas como cofactores.
❖reguladas por modificación covalente: Sufren un proceso de modificación covalente
reversible, y esa modificación se da en respuesta señales específicas
ENZIMAS ALOSTERICAS
• En algunas vías metabólicas, la enzima que cataliza la primera etapa de la
serie es inhibida por el producto de la última. Cuando la cantidad de ese
producto final excede las necesidades, se frena el funcionamiento de la vía
reduciendo la actividad de la enzima reguladora y se habla de inhibición por
retroalimentación negativa.
Estas acciones tanto de inhibición como de
activación son reversibles, al descender la
concentración de la sustancia modificadoras se
normaliza la actividad de la enzima.
El agente modificador actúa uniéndose a la enzima
en un lugar distinto al del sitio catalítico. En las
enzimas alostéricas, además del sitio catalítico,
existen otros sitios reguladores a los cuales se
unen específicamente las moléculas que actúan
sobre su actividad catalítica. Estos agentes reciben
el nombre de moduladores o efectores alostéricos,
serán positivos si estimulan, y negativos si
deprimen la actividad de la enzima.
Cuando el modulador alostérico es distinto del
sustrato el efecto es denominado heterotrópico, si
el agente modificador es el mismo sustrato es
homotrópico.
En algunos casos varios moduladores actúan
sobre una misma enzima, aún con efectos
contrarios. Cada uno de los moduladores posee un
sitio de unión a la enzima con complementariedad
estructural para asegurar la especificidad
EJEMPLOS
 • Conclusiones:
• Las enzimas reguladoras o enzimas alostéricas participan en el primer
paso de una ruta metabólica o en algún punto clave de ramificación de
la vía metabólica.
• Son enzimas de naturaleza compleja en general tienen varios
subunidades
• Los inhibidores alostéricos se comportan en general como inhibidores
competitivos: elevan el valor de km aparente pero sin embargo no son
análogos estructurales del sustrato.
Todo esto nos lleva al concepto de alosterismo: es una acción sobre la
actividad enzimática que se desarrolla fuera del centro activo
MODIFICACION COVALENTE
• Hay también enzimas reguladas por adición o sustracción de grupos unidos
covalentemente. Ejemplo: Fosforilación (mas frecuente), adenililacion,
uridililacion, ADP-ribosilacion, metilación. Generalmente estos grupos se unen a la
enzima y luego son eliminados por acción de otra enzima. Son reversibles.
• Como ejemplo: glucógeno fosforilasa que es una enzima que inicia la vía de
degradación del glucógeno. Ésta enzima se encuentra en estado de baja actividad
llamado fosforilasa B, la cual es convertida en fosforilasa A activa, por adición de
fosfato al hidroxilo de residuos serina en la molécula de la enzima; la fosforilasa A,
a su vez es desactivada por eliminación de fosfato y revierte a fosforilasa b.
• La regulación covalente se realiza en varias enzimas por un proceso de unión o
eliminación de fosfatos similar al de la fosforilasa. Una misma enzima puede
responder a más de un tipo de regulación, la fosforilasa es también una encima
alostérica que responde a varios moduladores.
Los grupos fosfatos afectan a la estructura
proteica y a la actividad catalítica
Formas de modificación covalente 5: Rotura proteolítica

N C ZIMOGENO
Proteinasa
especifica

N C + N C

ENZIMA ACTIVADA