Instituto Politécnico Nacional
Escuela Nacional de Ciencias Biológicas
Departamento de Bioquímica
Laboratorio de Bioquímica General
Mercado Gonzalez Luis Enrique 3FV1
Silva Mendoza José Guadalupe
Practica 7: Obtención de glucógeno a partir de hígado de rata y su
caracterización química.
INTRODUCCIÓN
El glucógeno es el principal OBJETIVO
polisacárido de reserva de las células
animales. Al igual que la Aplicar una estrategia para
amilopectina, el polisacárido aislar, purificar y caracterizar
ramificado de la D-glucosa tiene al glucógeno.
enlaces. DISCUSIÓN
Los puntos de ramificación son alfa- En los resultados se observa como a
1,4 y alfa-1,6, pero su ramificación y partir de la muestra de glucógeno
compacidad son mucho mayores. El obtenido del hígado triturado, para la
glucógeno es particularmente prueba de fehling (identificación
abundante en el hígado, el glucógeno azucares reductores) dieron positivo
en el hígado puede alcanzar el 7% del los tubos con ácido clorhídrico, ya que
peso húmedo y también está presente este funciona para la hidrolización del
en el músculo esquelético. En las glucógeno, obteniendo como producto
células del hígado, el glucógeno se al azúcar reductor glucosa, de igual
almacena en partículas grandes, que manera sucediendo con la enzima
también contienen enzimas amilasa la cual se encarga de romper
estrechamente vinculadas enlaces 1-4, del glucógeno, por medio
responsables de su síntesis y de hidrolización, caso contrario del
degradación. tubo testigo el cual no tiene ningún
El glucógeno puede ser hidrolizado factor que le hidrolice y por
por la α-amilasa que se encuentra en consecuente no se obtiene un azúcar
la saliva y el jugo pancreático, reductor.
destruyendo así el enlace -1.4 En la prueba del lugol (identificación
Las ramas externas del glucógeno de polisacáridos) se observa como en
producen glucosa, una pequeña los tubos con HCl no hay un positivo
cantidad de maltosa, unidades de color morado/azul, dado que el
maltotriosa y residuos ramificados glucógeno está en su mayoría
llamados dextrina, porque no hidrolizado, mientras que en el tubo
hidroliza las ramas. testigo, si hay positivo, ya que en este
tubo no hubo hidrolisis y por ende la
molécula de glucógeno no se rompe,
(constituida por moléculas de
glucosa), en el tubo de la enzima
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caracterización química.
amilasa, a pesar de romper enlaces 1- Editores, 4a. Edición pp.448-
4, estos son específicos, lo que nos da 453, (2004).
m0leculas como la maltosa, y algunas
dextrinas, las cuales siguen teniendo
ramificaciones de glucosa dando un
positivo para la prueba de yodo/lugol.
Y para la última prueba, seliwanoff
(identificación aldosas y cetosas), se
observó que el único tubo que no dio
positivo fue el testigo, ya que no existe
hidrolisis, a comparación de los que
tienen el medio ácido y la enzima,
gracias a esto la glucosa da positivo ya
que esta es una aldohexosa, o aldosa.
CONCLUSIONES
Se comprobó y logró aislar el
glucógeno por medio de las pruebas
de caracterización (Seliwanoff, Lugol
y Fehling
REFERENCIAS
Nelson D.L., Cox M.M.,
“Lehninger Principios de
Bioquímica” Editorial OMEGA,
3ª. Edición, pp. 304-306,
(2001).
Boyer R., “Conceptos en
Bioquímica” Ed. International
Thomson Editores., 1a. Edición
en español. pp. 220- 223,
(1999).
Campbell M.K., Farrel S.O.,
“Bioquímica”, Thomson
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Practica 7: Obtención de glucógeno a partir de hígado de rata y su caracterización química.
RESULTADOS
Reactivo/procedimiento Función del reactivo o fundamento del procedimiento
Para evitar el sufrimiento innecesario de la rata y también para evitar que este en un periodo
Evitar estresar al organismo durante el sacrificio prolongado de estrés, ya que, bajo estrés, el organismo puede producir adrenalina y activa a las
enzimas que degradan al glucógeno y vamos a obtener un muy bajo rendimiento.
Va a permitir que las proteínas y ácidos nucleicos se precipiten mientras que el glucógeno queda
Agregar ácido tricloroacético al 10%
soluble.
Ayuda a romper las células del hígado donde se encuentra almacenado el glucógeno para poder
Agregar arena para macerar
purificar.
Agregar 2 volúmenes de etanol de 96° El etanol modifica la constante dieléctrica y provoca que el glucógeno flocule.
Acida Testigo. glucógeno Enzimática
HCl sin hidrolizar Amilasa
Hidrólisis Análisis y discusión (explica los resultados)
1N 2N 4N
Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3 Tubo 4 Tubo 5
La prueba da positiva para los tubos 1, 2, 3 ,5 ya que hubo presencia
de azucares reductores y en el tubo 4 no hubo hidrolisis.
Y conforme aumenta la concentración de HCl se obtiene mayor
Fehling + ++ +++ - + cantidad de azucares reductores, ya que el glucógeno se hidroliza
más.
Y en el tubo 5 la enzima amilasa puede hidrolizar al glucógeno y
liberar azucares reductores.
Lugol - - - + + Tubo 1, 2 y 3 da negativa, debido a que la hidrolisis con estos ácidos
rompe completamente la molécula de glucógeno y ya no tenemos a la
molécula como polisacárido.
Tubo 4 nos da positivo, nos indica que tenemos un polisacárido
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ramificado y tubo 5 da positivo ya que la enzima amilasa es una
enzima muy especifica que rompe enlace alfa 1.4 de la molécula de
glucógeno y deja una estructura ramificada
Tubo 1, 2, y 3 da positiva para presencia de unidades de aldosas, a
medida que aumenta la concentración del ácido aumenta la
tonalidad de la prueba de Seliwanoff y observamos ligera tonalidad
+ ++ + ++ + de color.
Seliwanoff -
aldosas aldosas aldosas Aldosas Tubo 4 da negativo, ya que no hay unidades de aldosas y en el tubo 5
la reacción enzimática, tenemos hidrolisis del glucógeno y
corresponde a un polisacárido ramificado, formado por azucares
reductores que corresponden a unidades de aldosas.
De acuerdo con los siguientes datos calcula el porcentaje de rendimiento Resultado % de rendimiento
A partir de un hígado con un peso de 9 gramos se obtuvieron 0.26 gramos de glucógeno 28.88
(9 gr peso de higado)(10 %) ( 0.26 gr de glucogeno ) (100 %)
X1= =0.09 peso , X 2 =28.88 % de rendimiento
100 % 0.9 gr de peso higado
