UNIVERSIDAD DE LOS LLANOS
Facultad de Ciencias básicas e ingenierías
Departamento de Biología y Química Área de
Química
EXTRACCION E IDENTIFICACION DE AMINOACIDOS POR COLORIMETRIA
SANDRA SHARITH BENAVIDES SEPULVEDA [email protected]
LUISA FERNANDA SUAREZ GONZALEZ -
[email protected] KAREN BRIYID HEREDIA VARGAS-
[email protected] CIENCIAS DE LAS SALUD
RESUMEN
La proteínas tienen una estructura de cadena lineal de aminoácidos que pueden formar
diferentes enlaces como los péptidos , teniendo como resultado aminoácidos con anillos
aromáticos en su estructura, en la práctica de extracción e identificación de aminoácidos-
proteinas tuvo como objetivo determinar la presencia de aminoácidos-proteínas, sus
propiedades en diferentes muestras biológicas, para ello se utilizó harina de trigo, proteina
en polvo y leche en polvo se usaron las pruebas de identificación prueba de biuret,
Ninhidrina, prueba xantoproteica, prueba de Ehlrich y por último la prueba de Hopkins, se
obtuvo que en estos metodos utilizados tanto como en la muestra orgánicas e inorgánicas
tuvo cambio de colorimetría evidenciando la presencia de diferentes aminoácidos-
proteinas,sus diferentes reacciones de calor con los reactivos ultizados en el laboratorio,
Palabras claves: proteinas, peptidos, aminoacidos, pruebas, reacciones.
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INTRODUCCION
El Reactivo de Biuret es aquel que detecta la presencia de proteínas, péptidos cortos y otros
compuestos con dos o más enlaces peptídicos en sustancias de composición desconocida.
Está hecho de hidróxido potásico (KOH) y sulfato cúprico (CuSO4), junto con tartrato de
sodio y potasio (KNaC4O6·4H2O). El reactivo, de color azul, cambia a violeta en presencia
de proteínas, y vira a rosa cuando se combina con polipéptidos de cadena corta. El Hidróxido
de Potasio no participa en la reacción, pero proporciona el medio alcalino necesario para que
tenga lugar. [1]
La prueba de Ninhidrina se utiliza para determinar si un analito contiene aminas o
aminoácidos. En esta prueba, se agrega ninhidrina (un compuesto químico con la fórmula
C9H6O4; nombre IUPAC: 2,2-dihidroxiindano-1,3-diona) a una solución de prueba del
analito. La formación de un color azul intenso dentro de la muestra de prueba es una
indicación de que el analito contiene amoníaco, aminoácidos primarios/secundarios o
ambos.[2]
La reacción xantoproteica es un método que se puede utilizar para determinar la cantidad
de proteina soluble en una solución, empleando ácido nítrico concentrado. La prueba da
resultado positivo en aquellas proteinas con aminoácidos portadores de grupos aromaticos,
especialmente en presencia de tirosina. Si una vez realizada la prueba se neutraliza con un
álcali vira a un color amarillo oscuro.[3]
La reacción de Ehrlich-Sachs es una reacción orgánica que consiste en la formación de N-
feniliminas por condensación catalizada por bases de compuestos que contienen grupos
activos de metileno (por lo general de carbonos bencílicos de cianuros de bencilo) con
compuestos aromáticos nitroso; también se pueden formar nitronas.[4]
La prueba Hopkins Cole, también conocida como reacción del ácido glioxílico, se
encuentra entre los métodos de prueba cualitativos para determinar las diferencias entre los
diferentes tipos de aminoácidos y proteínas. La prueba se utiliza para determinar la presencia
de triptófano, un aminoácido, en las proteínas. [5]
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PARTE EXPERIMENTAL
Para la práctica de aminoácidos-proteínas se utilizaron muestras de harina de trigo, leche en
polvo y proteína en polvo se realizó la mezcla de esta muestras (15gr) en agua (150ml) la
primera prueba de identificación fue la Biuret dónde se rótulo 5 tubos de ensayo (tubo 1
con harina de trigo (2ml) tubo 2 leche en polvo (2ml) tubo 3 proteína en polvo (2ml) y por
último un tubo de control con agua (2ml) a todos estos tubos de ensayos se le agregó 2ml de
solución de BIURET, se dejó reposar y se observó su reacción.
Prueba de Ninhidrina se rótulo 6 tubos (1. Tubo con alanina 0.5ml) (2. Tubo con tirosina
0.5ml) (3. Tubo con harina de trigo 0.5ml) (4. Tubo con leche en polvo 0.5ml) (5 Tubo
proteína 0.5ml) (6 Tubo de control con agua 0.5ml) a los 6 tubos se le agrega 0.5ml de
Ninhidrina y se deja a baño María durante 15 minutos.
Prueba xantoproteica: se rotula 6 tubos de ensayo (1. Tubo tirosina 1ml) (2. tubo
fenilalanina 1ml) (3. tubo harina de trigo 1ml) (4. tubo proteína 1 ML) (5 Tubo leche en polvo
1 ML) (6 Tubo de control agua 1ml) y se agrega a todos los tubos de ensayo 1ml de HNO3
se calienta en baño maría por 5 minutos, se observa y agrega 1ml de NaOH y se observó
nuevamente.
Prueba de Ehrlich: se rotula 6 tubos de ensayo (1. Tubo triptófano 2ml) (2. Tubo Arginina
2ml) (3. Tubo harina de trigo 2ml) (4. Proteína 2ml) (5. leche en polvo 2ml) (6 Tubo de
control agua 2.ml) a todos se le agregan 2ml de reactivo de Ehlrich y se observó.
Prueba de Hopkins: se rotula 6 tubos de ensayo (1. Tubo triptófano) (2. Tubo arginina) (3.
tubo harina de trigo) (4. Tubo de proteína) (5 tubo leche en polvo) (6 tubo control agua) se
agregan a todos los tubos 3ml de reactivó se mezcla y agrega 1ml H2SO4 y se observó las
reacciones.
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RESULTADOS Y ANALISIS
PRUEBA BIURET
Ilustración 1 Prueba biuret
En esta prueba dio como resultado positivo la proteina, harina de trigo y leche, ya que el
reactivo biuret identifica enlaces peptídicos esto quiere decir que tienen más de dos
aminoácidos, en el caso de la proteina tiene aminoácidos como glutamina, leucina, arginina,
isoleucina y valina, la harina de trigo presenta 18 aminoácidos en su composición y la leche
9 aminoácidos por ende se muestra el cambio de color purpura en los tubos de ensayo a
diferencia del tubo de control que no presento ningún cambio de color ya que no contiene
proteínas en su composición.
La ecuación de reacción general se expresa de la siguiente manera:
2Cu^2+4CONH2 + Na2CO3→Cu2(OH)2CO3(color violeta o púrpura) + 2Na^+ 4RNH2COOH
PRUEBA NINHIDRINA
Ilustración 2 Prueba ninhidrina
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La ninhidrina se utiliza para el reconocimiento de aminoácidos con grupo amino en este caso
la alanina y la tirosina presentaron un cambio de color azul oscuro demostrando que tienen
un grupo amino en su estructura como se evidencia en la ilustración 3 y 4
Ilustración 3 Alanina
Ilustración 4 Tirosina
En el caso de la leche, harina de trigo y la proteina, las dos primeras presentaron un cambio
de color azul oscuro esto quiere decir que en alguno de los aminoácidos que la componen
presentan grupo amino en su estructura y la proteina no presento cambio de color tan
significante demostrando así una prueba negativa es decir que ninguno de sus aminoácidos
presenta un grupo amino.
La reacción se puede representar mediante una ecuación química simplificada
de la siguiente manera:
R-NH2 + 2H2O + ninhidrina → R-CO-NH2 (compuesto coloreado) + NH3
PRUEBA DE HOPKINS
Ilustración 5 Prueba de Hopkins
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Esta prueba dio positiva en las muestras harina de trigo, proteina y triptófano, en la muestra
de harina de trigo presento un anillo de color purpura ya que uno de los aminoácidos presentes
en su composición es el triptófano, la proteina presento un color purpura muy claro
identificando así pequeñas partículas de triptófano en su composición y el triptófano es una
muestra positiva porque eso es lo que reconoce la prueba del ácido glioxílico.
Ilustración 6 Reaccion quimica Hopkins
PRUEBA DE EHRLICH
Ilustración 7 Prueba Ehrlich
La prueba de Ehrlich sirve para identificar presencia de tirosina, histadina y formación de
péptidos, en este caso como resultado positivo nos dio la proteina, harina de trigo y la leche
provocando un cambio de color de amarillo a un anaranjado esto gracias a que en los
componentes de cada una de las muestras en el caso de la harina de trigo presenta 181mg de
histadina y 286mg de tirosina, en el caso de la leche fue un poco mas claro el color ya que
solo presenta 0,66g de histadina, la proteina presenta la formación de péptidos, en cambio en
la arginina, el triptófano y el tubo de control la prueba salió negativa ya que no presenta ni
tirosina ni histadina en sus compuestos de aminoácidos.
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Ilustración 8 Reaccion quimica Ehrlich
PRUEBA XANTOPROTEICA
Ilustración 10 Prueba Xantoproteica sin NaOH Ilustración 9 Prueba Xantoproteica con NaOH
como resultado positivo tenemos el triptófano, la tirosina, la harina de trigo, la leche y la
proteina que son aminoácidos que tienen anillos aromáticos derivados del benceno y de ahí
las propiedades químicas de estas moléculas como se evidencia en la ilustración 12 y 13.
Ilustración 11 Reaccion quimica Xantoproteica
Ilustración 12 Triptofano Ilustración 13 tirosina
Estos dos aminoácidos poseen anillos aromáticos en su estructura y por ende hubo un
cambio de coloración al momento del HNO3 reaccionar con el NaOH.
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CONCLUSIONES
Al realizar las reacciones quimicas de los diferentes aminoacidos y muestras como la leche,
harina de trigo y la protenia del gym se pudo determinar los tipos de aminoacidos que
presentan cada una de las muestras, sus estructuras y su reacciones quimicas, ademas se pudo
determinar que las muestras se clasifican en peptidicos ya que poseen mas de un aminoacido
en su compuesto.
REFERENCIAS
[1] “Biuret”. quimica.es – el portal informativo químico, desde el laboratorio hasta los
procesos. Accedido el 29 de septiembre de 2023. [En línea].
Disponible: https://www.quimica.es/enciclopedia/Biuret.html
[2] “Prueba de ninhidrina Principio, procedimiento, resultado, usos”. Microbiology Note –
Online Biology Notes. Accedido el 27 de septiembre de 2023. [En línea].
Disponible: https://microbiologynote.com/es/ninhydrin-test/#google_vignette
[3] “Reacción_xantoproteica”. quimica.es – el portal informativo químico, desde el
laboratorio hasta los procesos. Accedido el 27 de septiembre de 2023. [En línea].
Disponible: https://www.quimica.es/enciclopedia/Reacción_xantoproteica.html
[4] “Wikiwand - Reacción de Ehrlich-Sachs”. Wikiwand. Accedido el 27 de septiembre de
2023. [En línea]. Disponible: https://www.wikiwand.com/es/Reacción_de_Ehrlich-Sachs
[5] “Prueba de Hopkins Cole (Adamkiewicz–Hopkins) Principio, procedimiento, resultado”.
Microbiology Note – Online Biology Notes. Accedido el 27 de septiembre de 2023. [En
línea]. Disponible: https://microbiologynote.com/es/hopkins-cole-test/#google_vignette
