COLÁGENO RECOMBINANTE COMO ANDAMIOS Y

SU APLICACIÓN EN LA INGENIERÍA DE TEJIDOS

RECOMBINANT COLLAGEN AS SCAFFOLDS AND ITS

APPLICATION IN TISSUE ENGINEERING

Diana Laura Pérez-Osornio1, Jorge Antonio Amador-Balderas2

Benemérita Universidad Autónoma de Puebla

Facultad de Ciencias Biológicas

Licenciatura en Biotecnología

2
Correo electrónico: [email protected]

3
Correo electrónico: [email protected]

Resumen
La ingeniería de tejidos es un campo interdisciplinario y multidisciplinario de la medicina
terapéutica quirúrgica enfocado en la fabricación de sustitutos para restaurar la función de tejidos
y órganos. Para satisfacer sus necesidades se han ocupado biomateriales para cumplir con funciones
específicas, como macromoléculas naturales para formar la matriz extracelular. Un ejemplo de este
tipo de biomateriales es el colágeno, la proteína globular más abundante en animales para formar
andamios. Una de las principales limitaciones del uso de colágeno natural es el riesgo de que
acarree consigo agentes que produzcan enfermedades. Para resolver esta problemática, se ha
recurrido a la tecnología recombinante, la cual ha demostrado que el colágeno recombinante es un
biomaterial biocompatible inmunogénico con baja toxicidad, por ello se ha utilizado en la
ingeniería de tejidos para la reparación de estos como huesos, tendones, piel, córnea, tejido
nervioso y otros. Sin duda, esta proteína es un material prometedor y con aplicaciones diversas
que, en conjunto con otras técnicas, podría revolucionar las tecnologías de la medicina
regenerativa.
Palabras clave: Colágeno, Andamios, Ingeniería de Tejidos, Proteínas Recombinantes

Abstract
Tissue engineering is an interdisciplinary and multidisciplinary field of surgical therapeutic
medicine focused on the manufacture of substitutes to restore the function of tissues and organs.
To meet these needs, biomaterials have been used to fulfill specific functions, such as natural
macromolecules to form the extracellular matrix. An example of this type of biomaterials is
collagen, the most abundant globular protein in animals to form scaffolds. One of the main
limitations of the use of natural collagen is the risk of it to carry agents that trigger certain diseases.
To solve this problem, recombinant technology has been used because it has shown that
recombinant collagen is an immunogenic biocompatible biomaterial with low toxicity, so it has
been used in tissue engineering to repair tissues such as bones, tendons, skin, cornea, nervous
tissue, and others. Undoubtedly, this protein is a promising material with several applications that,
together with other techniques, may revolutionize the technologies of regenerative medicine.
Keywords: Collagen, scaffolding, tissue engineering, recombinant proteins

Introducción Para satisfacer las necesidades de esta

tecnología se han ocupado y explotado
La ingeniería de tejidos se define como el
biomateriales que cumplen con funciones
campo interdisciplinario y multidisciplinario
específicas, como las macromoléculas
de la medicina terapéutica quirúrgica que se
naturales que forman la matriz extracelular.
enfoca en la fabricación de sustitutos para
Entre ellas, las proteínas fibrosas han recibido
restaurar la función de tejidos u órganos
mucha atención debido a la versatilidad en su
dañados, ocupando tres elementos básicos:
estructura y complejidad que permiten
células, moléculas señal y andamios
numerosas interacciones con las células que
(Farajollahi et al., 2012). El objetivo principal
las rodean, inmunogenicidad baja y toxicidad
de esta tecnología es reconstruir tejidos vivos
mínima o ausente (Werkmeister y Ramshaw,
para reemplazar daños o pérdidas de algún
2012).
tejido u órgano, con la esperanza de
mantener, restaurar o mejorar su función total Un ejemplo de estas proteínas es la

o parcial (Dong y Yonggang, 2016). familia del colágeno. El colágeno es el mayor

elemento estructural de todos los tejidos
Esta tecnología utiliza andamios
conectivos que no sólo provee soporte a la
como herramientas para proporcionar una
matriz extracelular, sino también tiene una
matriz temporal extracelular sintética para las
gran variedad de funciones definidas por
células regenerativas, lo cual ayuda a la unión
dominios proteicos adicionales (Gelse et al.,
extracelular, proliferación y diferenciación
2003). Es decir, el colágeno tiene una
del tejido nuevo. Por ello, la composición
actividad importante para mantener la
química y estructura es lo más importante
integridad biológica y estructural de la matriz
para los biomateriales utilizados (Ma, 2008).
extracelular y proporcionar soporte físico a proteínas fibrilares de la matriz extracelular,
los tejidos. específicamente los colágenos tipo I y II;
usados para la creación de andamios debido a
El colágeno es una opción atractiva
su compatibilidad (Paredes et al., 2017).
para la ingeniería de tejidos debido a que es
fácil de modificar y procesar, es abundante, En este artículo se revisarán y
biodegradable, biocompatible, dúctil y no es analizarán las características sobre la familia
antigénico (Gomes et al., 2012). En los del colágeno y sus aplicaciones dentro del
últimos años, se han producido diversas campo de la ingeniería de tejidos tanto en su
innovaciones en biomateriales basados en versión natural como en sus versiones
colágeno, desde matrices de colágeno recombinadas. Se presentará una breve
inyectables hasta andamios de regeneración introducción de la molécula de colágeno,
ósea. seguida de una explicación técnica que cubre
los métodos de producción de andamios de
Sin embargo, las proteínas naturales
colágeno. Finalmente, se discutirán los
dentro de la ingeniería de tejidos tienen
avances recientes desarrollados en el campo
ciertas limitaciones respecto a la
de los biomateriales en ingeniería de tejidos
disponibilidad de la fuente y su estabilidad o
basados en colágeno.
la transmisión de organismos infecciosos
(Farajollahi et al., 2012). Para superar estas Colágeno como biomaterial
limitaciones se han explorado las tecnologías
En la primera conferencia del “Consenso de
de ADN recombinante que permiten la
la Sociedad Europea de Biomateriales” (ESB,
síntesis de proteínas que son más baratas de
por sus siglas en inglés) realizada en 1976, se
producir y más fáciles de purificar, libres de
definió al biomaterial como un material no
patógenos y a las que se les pueden agregar
viable utilizado en un dispositivo médico,
funciones adicionales mediante la adición de
destinado a interactuar con los sistemas
otros dominios bioactivos, ofreciendo
biológicos; no obstante, la definición cambió
posibilidades prácticamente ilimitadas para la
de la siguiente manera “material destinado a
ingeniería de tejidos que incluso pueden
interactuar con sistemas biológicos para
abarcar la regeneración del tejido en sí
evaluar, tratar, aumentar o reemplazar
(Gomes et al., 2012).
cualquier tejido, órgano o función del
Un ejemplo de las tecnologías que se cuerpo.” (O’Brien, 2011).
han implementado es la recombinación de
 Ahora bien, los biomateriales a base A su vez, los polímeros naturales
de colágeno pueden provenir de dos técnicas: usados comúnmente para la ingeniería de
(1) matriz descelularizada de colágeno, la tejidos contienen colágeno,
cual conserva la estructura original del tejido glucosaminoglucano, quitosano, ácido
y la matriz extracelular (MEC), y (2) hialurónico, fibrina y elastina, aislados
purificación y polimerización del colágeno directamente de la MEC. Su adhesión y
para formar andamios. Estas técnicas pueden actividad celular posterior está mediada por
conducir a la producción de una MEC y son interacciones integrina-ligando entre las
procesos físicos, químicos y enzimáticos. Sin células y su MEC circundante. Los polímeros
embargo, por sí mismos ninguno puede naturales presentan una superficie más nativa
producir una MEC completamente libre de en comparación con los sintéticos, son
desechos celulares, pues para ello se necesita biocompatibles y degradables con productos
de la combinación de las técnicas (Gilbert et de degradación no tóxicos (Murphy et al.,
al., 2006). 2013).

Con el paso del tiempo, los Existe un enfoque en el uso de

biomateriales han pasado de interactuar con materiales biológicos como biomateriales de
el cuerpo a influir en procesos biológicos andamios. Los materiales biológicos como el
cotidianos para alcanzar el objetivo de la colágeno o los proteoglicanos se han usado en
regeneración tisular. Entre estos la producción de andamios en la ingeniería de
biomateriales encontramos tres grupos que se tejidos. A diferencia de los andamios con base
usan para la fabricación de andamios en la en polímeros sintéticos, los que se basan en
ingeniería de tejidos: cerámicas, polímeros polímeros naturales son biológicamente
sintéticos y polímeros naturales. activos y promueven una adhesión y un
crecimiento celular adecuados. Además, son
Las cerámicas son compuestos no
biodegradables y permiten que las células
metálicos con estructura cristalina
hospedadoras produzcan su propia matriz
generalmente con un alto nivel de rigidez que
extracelular y reemplacen el andamio
se usan comúnmente en la ingeniería de
degradado. Sin embargo, la fabricación de
tejidos óseos, pero son materiales frágiles que
andamios a partir de materiales biológicos
tienen un índice de degradación lento, así que
con estructuras homogéneas y reproducibles
pueden persistir durante meses (Murphy et
representan un desafío para la investigación
al., 2013).
actual (Cen et al., 2008).
 Aunque los andamios han demostrado natural (Paredes et al., 2017). Esta puede
ser prometedores, en alguna fase, cada uno no servir como fuente inestimable porque es
se encuentra de manera natural en el cuerpo y segura y reproducible para la fabricación de
tienen problemas asociados con la andamios.
biocompatibilidad o la biodegradabilidad. Un
Una de las proteínas recombinantes
enfoque más típico es el uso de andamios a
más usadas en la ingeniería de tejidos es el
base de colágeno que se ha estudiado a nivel
colágeno, debido a que es una de las proteínas
recombinante para resolver dichos desafíos.
más abundantes en la naturaleza y se
Para comprender esto, es necesario encuentra en mayor o menor proporción en
definir la proteína recombinante como todos los animales. El colágeno animal más
aquella que se produce o sintetiza a partir del abundante se asocia con fibrillas periódicas
ADN recombinante, es decir, tomando un gen reticuladas, que proporcionan las propiedades
determinado que tiene información para mecánicas de los tejidos y biomateriales (An
codificar una proteína. Se introduce una et al., 2014).
célula de un organismo distinto del inicial o

Figura 1. Figura representativa de la formación de una proteína recombinante. Figura modificada de Sethi, 2013.

La matriz extracelular brinda soporte intercelular y no sólo actúa como un andamio

físico a los tejidos que ocupan el espacio nativo para organizar las células dentro de los
tejidos conectivos, sino también como una cartílago articular. Además, las fibrillas de
sustancia dinámica, móvil y flexible que colágeno son esenciales en el tendón para
define el comportamiento celular y la función mantener sus propiedades mecánicas y
tisular. transmitir fuerza en el movimiento (Cen et
al., 2008).
Para la mayoría de los tejidos
conectivos blandos y duros (hueso, cartílago, Debido a la diversidad de usos del
tendón, córnea, vasos sanguíneos y piel), las colágeno, las investigaciones se han centrado
fibrillas de colágeno y sus redes funcionan en desarrollar biomateriales para imitar la
como MEC, ya que desempeñan un papel arquitectura fibrilar que pudiesen funcionar
dominante en la preservación de la integridad como andamiaje celular en sustitución de la
biológica y estructural de la misma y son MEC nativa basada en colágeno.
dinámicas, sometiéndose a remodelación
Desafíos de los biomateriales
constante para funciones fisiológicas
apropiadas (Cen et al., 2008). Hasta la fecha Uno de los desafíos principales en la creación
se han identificado 28 tipos de colágeno; los y producción de un biomaterial es la
tipos I, II, III y V son los principales que compatibilidad que pueda tener con el
componen la parte esencial del colágeno en organismo. En el caso de las proteínas
hueso, cartílago, tendón, piel y músculo. recombinantes, esto se ha experimentado con
estudios de toxicidad, inmunogenicidad y
Las fibrillas de colágeno son la
biodegradación. Por consiguiente, la
principal fuente de resistencia a la tracción de
biocompatibilidad del colágeno obtenido por
los tejidos óseos. Las propiedades mecánicas
métodos recombinantes está comprobada
del hueso se pueden ajustar variando la
ampliamente y se sabe que permite la
orientación de la fibrilla que puede resultar
proliferación celular y que no interfiere con el
del grado de reticulación del colágeno. Las
comportamiento celular. Sin embargo, hay
fibrillas de colágeno, junto con 10% de
ventajas y desventajas en los métodos
glucosaminoglucanos (GAG), contribuyen a
tradicionales y recombinantes de obtención
la viscoelasticidad y función compresiva del
que se resumen en la Tabla 1.
 Tabla 1. Comparación entre el colágeno obtenido por métodos tradicionales y recombinantes. Tabla modificada de
Paredes et al., 2017.

El término biocompatible se refiere a En los experimentos, se espera que

la capacidad de un armazón para soportar el haya formación de neotipos junto con
crecimiento celular y la regeneración tisular degradación progresiva del andamio,
in vivo, sin provocar una respuesta mientras que la ingeniería del colágeno
inflamatoria o inmunogénica que puede durante la formación del tejido es el objetivo
inducir su rechazo (Murphy et al., 2013). La intrínseco que se espera lograr. No obstante,
elección del material y estructura del material esto depende de la aceptación del implante
influyen en la biocompatibilidad y artificial por parte de los tejidos circundantes
degradabilidad. y de las respuestas celulares provocadas, así
como de las propiedades biomecánicas,
Se han llevado a cabo experimentos
estructurales y de degradación de los
con colágeno debido a que es uno de los
biomateriales (Cen et al., 2008).
principales constituyentes de la MEC natural
y estos han sido exitosos en piel, vejiga y vías Propiedades biofísicas, bioquímicas
respiratorias. Sin embargo, para superar las y biológicas del colágeno
limitaciones asociadas con los polímeros
naturales, los avances en diseño y fabricación Las proteínas fibrosas, como el colágeno, se

de andamios han conducido a un cambio de caracterizan por tener secuencias altamente

paradigma hacia el desarrollo de andamios repetitivas de aminoácidos que dan como

biomiméticos. resultado estructuras secundarias casi

homogéneas, permitiendo la formación de su
estructura de fibra que le proporciona sus comparten las 28 proteínas de esta familia,
funciones principales de soporte (Wang et al., llegando a abarcar de 10 a 96% de la
2006). estructura total (Ricard, 2011).

El colágeno es la proteína más Cada tipo de colágeno tiene una

abundante en los animales y en su mayoría se composición diferente en sus cadenas
compone de tres cadenas polipeptídicas que (denominadas α) y en su estructura
adquieren una conformación de hélice cuaternaria, de manera que algunos colágenos
levógira que se encuentra tan empaquetada se encuentran por homotrímeros (tres cadenas
que cada tercer residuo debe ser una glicina α iguales) o heterotrímeros (dos cadenas α
(Shoulders et al., 2009). Este dominio de iguales y una diferente o tres cadenas α
triple hélice es la característica común que diferentes) (Tabla 2).

Composición
Tipo Tejido(s) donde se encuentra
molecular
Colágenos que forman fibrillas
I [α1(I)]2 α2(I) Huesos, dermis, tendones, ligamentos, córnea
II [α1(II)]3 Cartílago, humor vítreo, núcleo pulposo
III [α1(III)]3 Piel, fibras reticulares de tejidos como pulmones e hígado
V α1(V) α2(V) α3(V) Pulmones, córnea, huesos, membranas fetales
XI α1(XI) α2(XI) α3(XI) Cartílago, humor vítreo
Colágenos de membranas basales
IV [α1(IV)]2 α2(IV), α1-α6 Membranas basales
Colágeno microfibrilar
VI α1(VI) α2(VI) α3(VI) Dermis, cartílago, placenta, pulmones, discos intervertebrales
Fibrillas de anclaje
VII [α1(VII)]3 Piel, mucosa oral, cuello uterino, uniones dermis-epidermis
Colágenos formadores de redes hexagonales
VIII [α1(VII)]2 α2(VII) Células endoteliales, membrana de Descemet
X [α3(X)]3 Cartílago hipertrófico
Colágenos FACIT
IX α1(IX) α2(IX) α3(IX) Cartílago, humor vítreo, córnea
XII [α1(XII)]3 Pericondrio, ligamentos, tendones
XIV [α1(XIV)]3 Dermis, tendones, placenta, pulmones, hígado
XIX [α1(XIX)]3 Rabdomiosarcoma
XX [α1(XX)]3 Epitelio corneal, piel embrionaria, cartílago esternal, tendones
 XXI [α1(XXI)]3 Pared de vasos sanguíneos
Colágenos transmembranales
Epidermis, folículo piloso, endomisio, intestino, condrocitos, pulmones,
XIII [α1(XIII)]3
hígado
XVII [α1(XVII)]3 Uniones dermis-epidermis
Multiplexinas
XV [α1(XV)]3 Fibroblastos, células del músculo liso, riñones, páncreas
XVI [α1(XVI)]3 Fibroblastos, queratinocitos, amnios
XVIII [α1(XVIII)]3 Pulmones, hígado
Tabla 2. Composición molecular y distribución en tejidos de diferentes tipos de colágeno. Tabla modificada de
Gelse et al., 2003.

La Tabla 2 muestra la amplia helicoidales (Gelse et al., 2003). Esta

distribución de la familia de los colágenos, así familia está integrada por el colágeno
como su clasificación de acuerdo con las IX, que se asocia a fibrillas de
estructuras supramoleculares que forman colágeno II; y los colágenos tipo XII
(esquematizadas en la Figura 2), algunas de y XIV, que se asocian a fibrillas de
las cuales se describen a continuación. colágeno I (Ricard-Blum, 2011). Las
funciones de estos tipos de colágenos
 Colágenos formadores de fibrillas.
aún no están del todo definidas (Gelse
Esta subfamilia está integrada por los
et al., 2003).
colágenos tipo I, II, III, V y XI. Las
 Colágeno microfibrilar. El único
fibrillas se forman en la matriz
tipo de colágeno presente en esta
extracelular y su función es proveer
subfamilia es el colágeno tipo VI,
rigidez, resistencia a la tracción y
compuesto por un heterotrímero con
rigidez torsional, especialmente el
dominios de triple hélice cortos y
colágeno tipo I (Gelse et al., 2003).
dominios globulares en las zonas N y
 Colágenos asociados a fibrillas. Los
C terminales (Gelse et al., 2003). Este
colágenos asociados a fibrillas con
tipo de colágeno forma filamentos que
triples hélices interrumpidas (FACIT,
se agregan para dar lugar a una red de
por sus siglas en inglés) se
microfibrillas ubicada en la matriz
caracterizan, como su nombre indica,
extracelular de todos los tejidos
por dominios de triple hélice
conectivos, excepto el óseo (Gelse et
interrumpidos por dominios cortos no
al., 2003).
  Colágenos formadores de redes importante de las membranas basales,
hexagonales. Estos son de cadena pues es el responsable de integrar sus
corta y están integrados por los componentes en un agregado
colágenos tipo VIII y X. Sus supramolecular estable (Gelse et al.,
funciones no han sido determinadas 2003).
por completo, aunque se cree que el
De los tipos de colágenos descritos
primero se encuentra en la membrana
anteriormente, el más abundante es el fibrilar,
de Descemet en la córnea y el segundo
el cual desempeña un papel estructural al
está relacionado con procesos de
contribuir con las propiedades mecánicas de
osificación endocondral (Gelse et al.,
tejidos como la resistencia a la tracción de la
2003).
piel y los ligamentos, mientras que otros tipos
 Colágeno de membranas basales.
de colágenos (menos abundantes) son
Esta subfamilia solo está integrada
esenciales para mantener la integridad de los
por el colágeno tipo IV que es el
tejidos (Ricard, 2011).
componente estructural más

Figura 2. Ejemplos de las estructuras supramoleculares formadas por distintos tipos de colágenos. Figura modificada
de Ricard, 2011.

Los colágenos obtienen estas de integrinas, receptores diméricos de

funciones al formar parte de la matriz discoidina DDR1 y DDR2, glicoproteínas
extracelular y ser ligando de una gran asociadas a inmunoglobulinas y plaquetas,
cantidad de proteínas como diferentes tipos Endo180 y otras (Ricard, 2011). Por
consiguiente, es una familia ampliamente control de calidad. La expresión
reconocida por las células del organismo y recombinante de proteínas en Escherichia
bastante conveniente para utilizarse como coli es un proceso con excelente escalabilidad
biomaterial. (An et al., 2014).

Extracción y purificación del Es probable que el costo global del

colágeno recurso para producir este material de

colágeno bacteriano altamente ajustable sea
Los colágenos producidos en animales suelen menor que el colágeno recombinante
ser económicos puesto que son muy obtenido de células mamíferas o incluso de
reproducibles, pero existen dificultades para sistemas transgénicos.
la preparación estándar de los colágenos, así
El colágeno se puede obtener por
que esto representa limitaciones importantes
procesos químicos como la hidrólisis química
para su producción. Asimismo, existen
y la hidrólisis enzimática (Zavareze et al.,
posibles efectos secundarios y riesgos
2009). La hidrólisis química es común en la
alérgicos de los productos provenientes de
industria, pero los procesos biológicos que
esta proteína.
usan la adición de enzimas son más
El colágeno soluble en agua simboliza prometedores para una mejor funcionalidad,
un pequeño porcentaje del total de la además de que generan menos residuos y
producción. La propiedad de solubilidad del pueden reducir el tiempo de procesamiento,
colágeno depende del tejido y la edad del pero son costosos. Para extraer el colágeno es
donante. Los disolventes utilizados para preciso eliminar enlaces cruzados
extraer colágeno son solución salina neutra o intramoleculares e intermoleculares
ácido acético diluido. En cambio, los álcalis covalentes, que implican residuos de lisina,
fuertes o enzimas son alternativas para el sacáridos y enlaces con ésteres. Antes de
colágeno insoluble, pues con este se pueden extraer colágeno se puede hacer un
separar enlaces cruzados (Dong et al., 2016). pretratamiento para excluir sustancias no
Las secuencias nativas de colágeno colágenas y lograr mayores rendimientos
son resistentes a la digestión por enzimas (Schmidt et al., 2016).
como tripsina y quimotripsina. La digestión
Origen y variabilidad del colágeno
enzimática en el proceso de purificación
asegura que el producto final esté libre de El colágeno puede provenir de casi todos los

contaminantes, lo cual es importante para el animales vivos debido a que es una de las
proteínas más abundantes, pero las fuentes problemática, se recurre a la tecnología
comunes para su aplicación en la ingeniería recombinante con la cual se puede alcanzar
de proteínas provienen de piel y tendones de una producción de colágeno en masa en
bovinos, piel de cerdo y ratones, entre otros. sistemas de expresión en células huésped
Diversos estudios coinciden que el colágeno como levaduras, bacterias, células de insectos
purificado se puede aislar del tejido nervioso o mamíferos y animales y plantas
periférico humano o de la placenta humana. transgénicas (Dong y Yonggang, 2016).En
Recientemente, el colágeno de pescado ha términos generales, el mecanismo de
generado gran atención, ya que puede obtención de una proteína recombinante se
extraerse y purificarse a partir de pieles y realiza siguiendo los siguientes pasos: (1) el
huesos de pescado desperdiciado (Dong et gen codificador para la proteína deseada se
al., 2016). aísla de una célula humana, (2) se inserta en
un vector (usualmente un plásmido
No obstante, las fuentes comunes de
bacteriano) para ser clonado y (3) este es
colágeno para aplicaciones en ingeniería de
transferido a una célula huésped que tenga
tejidos incluyen piel y tendones de bovinos,
una tasa alta de crecimiento (como se
piel de cerdo y cola de rata, entre otros.
mencionó antes, puede ser una levadura, una
Incluso hay empresas que se dedican a
célula animal, bacterias y otras). Una vez
industrializar colágeno recombinante que
dentro de la célula, esta sintetiza la proteína
suele ser menos inmunogénico que las
contenida en el gen que se le insertó y
fuentes animales y cuya característica
finalmente se extrae y purifica (Sethi, 2013).
principal es una composición idéntica para
diferentes lotes de producción y parecen ser Algunos ejemplos de las células
el futuro de los andamios de colágeno (Dong huésped utilizadas como sistemas de
et al., 2016). expresión de colágeno son E. coli y Bacillus
brevis como sistemas de expresión
Recombinación de colágeno y su
procariotas; P. pastoris; Saccharomyces
expresión
cerevisae; CHO (células de ovario de hámster
Una de las principales limitaciones del uso de chino); COS (células tipo fibroblasto
colágeno natural como biomaterial (como el derivadas de riñón de mono); HEK293
extraído de tejidos animales) es el riesgo de (células de riñón de embrión humano); y
acarrear consigo agentes que produzcan HT1080 (células de fibrosarcoma de tejido
enfermedades. Para resolver esta
conectivo humano) como sistemas de obstante, sobresale una tecnología que está
expresión eucariotas (Paredes, 2017). revolucionando la manera de extraer y
obtener proteínas recombinantes por medio
Es necesario agregar una proteína
de bacterias.
adicional al sistema recombinante: la enzima
prolil–4–hidroxilasa (P4H), la cual es un El colágeno obtenido por métodos
elemento esencial para el plegamiento de las recombinantes tiene ventajas como la
cadenas polipeptídicas del colágeno para disponibilidad y la calidad controlada del
formar las triples hélices y cuya actividad producto, la ausencia de contaminantes de
natural es deficiente o nula en muchas de las animales, la potencialidad de producir los tres
células huésped actualmente utilizadas (Dong tipos de colágeno y la posibilidad de
y Yonggang, 2016). seleccionar dominios específicos de
expresión. Los sistemas de expresión de
A pesar de ello, incluso con la adición
colágeno pueden ser células procariotas o
de estos genes puede haber complicaciones
eucariotas (Puerto et al., 2017).
para generar moléculas estables de colágeno,
ya que la actividad de P4H depende de Sistemas de expresión de colágeno
factores como las condiciones de expresión, recombinante en células procariotas
la concentración de los cofactores, el tiempo
de inducción y otros (An et al., 2014). Esto Aunque la bacteria más utilizada para

demuestra que aún hay desafíos que superar expresar colágeno es Escherichia coli, hay

cuando se abordan los temas del uso de algunas dificultades en el sistema de

proteínas recombinantes (en ingeniería de expresión, específicamente para colágenos

tejidos o cualquier otro campo de aplicación) provenientes de mamíferos debido a que

y de su disponibilidad para reducir costos. conllevan a la formación de cuerpos de

inclusión no deseados en las bacterias o la
Para desarrollar el tema de la
producción de su versión desnaturalizada (An
expresión del colágeno recombinante, a
et al., 2014).
continuación se describen algunas de las
características de los sistemas utilizados para El rendimiento promedio de E. coli es

este propósito. de 0.2 a 0.3 g/L de colágeno purificado en

cultivo de matraces con agitación tradicional
Colágeno bacteriano y hasta 9.5 g/L en un lote alimentado de alta

Los procesos de extracción a partir de densidad. El costo global de los recursos para

animales tienen ventajas y desventajas; no producir este material es ajustable y puede ser
menor que el colágeno recombinante (An et al., 2014). Las condiciones y la
obtenido de células eucariotas e incluso de manipulación pueden desencadenar el
sistemas transgénicos (An et al., 2014). autoensamblaje de Scl2 y los materiales
fabricados pueden cumplir el objetivo de
La Figura 3 ejemplifica el método
diseñar y desarrollar MEC artificiales. Esta
para fabricar materiales para el colágeno
ejemplificación y, en general, el colágeno
bacteriano recombinante Scl2. Esta figura
recombinante bacteriano tienen ventajas
también muestra que se produce colágeno
como su capacidad de ajuste y escalabilidad
bioactivo con manipulación de genes,
altas y complejidad y costo bajos.
producción y purificación de alto rendimiento

Figura 3. Diagrama esquemático del método de producción de colágeno bacteriano recombinante y estrategias de
fabricación de materiales. Figura modificada de An et al., 2014.

Uso de animales y plantas y LH3, las cuales son esenciales para la

transgénicas maduración del colágeno, la formación de la

triple hélice y el ensamblaje en fibrillas
El nombre que recibe un sistema de expresión estables (Shoseyov et al., 2014).
de colágeno en una planta de tabaco es
rhCOL1. Este sistema contiene enzimas P4H
 El colágeno extraído de rhCOL1 es hidroxiprolina. Aunque esta proteína es
sumamente parecido al colágeno humano y fundamental para la formación de la triple
está formado por estructuras tridimensionales hélice, los colágenos obtenidos por este
más aptas para su uso en la ingeniería de método pueden tener aplicaciones en
tejidos que aquellas formadas por colágeno ingeniería de tejidos como andamios
obtenido por métodos tradicionales, además selectivos, ya que tienen adherencia más débil
de que están libres de cualquier contaminante a ciertas células, como las plaquetas (Paredes
o agente transmisor de enfermedades. Las et al., 2017).
cantidades de proteínas obtenidas a través de
En el caso de los animales
este sistema son altas en comparación con los
transgénicos, las últimas tecnologías han
métodos tradicionales (Shoseyov et al.,
hecho posible la producción de diversas
2014).
proteínas recombinantes en leche, sangre,
Se realizó un análisis de funcionalidad clara de huevo, semen, orina y glándulas de
de andamios de rhCOL1 y se encontró que la seda, usando especies como cabras, cerdos,
biocompatibilidad resultante fue mayor que conejos, ratones y vacas para este propósito.
con un andamio de colágeno obtenido por Hasta la fecha, existen pocas publicaciones
métodos tradicionales, ya que hubo una acerca de la producción de colágeno en
mayor proliferación celular. El experimento animales transgénicos. Uno de estos escasos
se llevó a cabo simulando un sustituto de piel ejemplos es la producción de colágeno
y, al utilizar rhCOL1, se produjo una mayor humano en leche de ratón que tuvo como
diferenciación celular en la epidermis, lo cual resultado una proteína inestable (atribuible a
se puede interpretar como un proceso de una baja actividad de P4H) y, aun con la
cicatrización más rápido (Shoseyov et al., introducción de los genes que expresan P4H,
2014). se obtuvieron colágenos de menor tamaño y
estabilidad (Paredes et al., 2017).
Otro ejemplo es el sistema de
expresión de colágeno tipo I en cebada, Aplicaciones en la ingeniería de
utilizando tres promotores: ubiquitina de tejidos (Colágenos recombinantes
maíz, glutenina y α-amilasa. Sin embargo, los
para andamios en ingeniería de
rendimientos obtenidos fueron bajos (Paredes
tejidos)
et al., 2017). También se han ocupado
sistemas en plantas que carecen de P4H, Para que la técnica de la ingeniería de tejidos
produciendo colágeno en ausencia de sea exitosa, es necesario que el material que
compone al andamio tenga las siguientes Asimismo, las formas recombinadas
características: propiedades de de colágeno tipo I y III han sido utilizadas
biocompatibilidad, promoción de actividades para la fabricación de un sustituto de córnea
celulares como la adhesión, en seres humanos de manera que se pueda
biodegradabilidad a un ritmo correspondiente atender la problemática de la escasez de
al crecimiento del tejido, una estructura donantes de alta calidad de este tejido,
tridimensional porosa con espacios obteniéndose resultados favorables como
microscópicos interconectados que permitan toxicidad nula, biocompatibilidad, reacciones
el crecimiento del tejido, propiedades adversas inflamatorias o inmunitarias nulas,
mecánicas favorables y un proceso de proliferación y estratificación celular,
fabricación altamente reproducible y regeneración nerviosa, entre otros (Merrett et
adaptable para diferentes formas y tamaños al., 2008).
(Wan et al., 2007).
En el tratamiento de lesiones del
El colágeno cumple con todas estas sistema nervioso, es posible incorporar
características al formar parte, de manera técnicas de ingeniería de tejidos. Se ha
natural, de la matriz extracelular y su forma demostrado que un andamio de colágeno es
recombinante presenta mayores ventajas al un método efectivo para mejorar la
tener funciones adicionales mediante la regeneración axonal, además de que sirve
adición de otros dominios o moléculas como un sistema de guía para los nervios en
bioactivas, como la producción de péptidos regeneración, permitiendo una recuperación
antimicrobianos o la combinación de las funcional (Dong y Yonggang, 2016).
funciones estructurales de proteínas
En el campo de la regeneración
diferentes (Farajollahi et al., 2012).
periodontal, el rhBMP-2 (que contiene
El colágeno recombinante tiene colágeno) fue probado como implante y se
diversas aplicaciones, como la formación de reportaron resultados como la formación
andamios útiles en la reparación ósea (en fisiológica ósea normal, la oseointegración y
forma de esponja) o como base para la una funcionalidad de vida larga (Sethi, 2013).
ingeniería de epitelios en piel, cartílago y
Otro ejemplo es el andamio híbrido
ligamento periodontal en forma de
compuesto por colágeno tipo I y fosfato
membrana, película o gel (Paredes et al.,
tricálcico β, probado en células fibroblásticas
2017).
humanas, donde se observó que las células
mantuvieron un desarrollo favorable, la regeneración de la piel, donde se ha
conservaron su morfología, tuvieron baja observado una alta citocompatibilidad y un
citotoxicidad y conservaron un porcentaje de aumento de la proliferación celular (Dong y
células viables mayor a 95% (Oprita et al., Yonggang, 2016).
2006).
Conclusiones
Como el colágeno tipo I es uno de los
Se ha comprobado que los andamios de
componentes mayoritarios de los tejidos
colágeno recombinante son de gran
óseos, se han realizado diversos estudios
importancia para las nuevas técnicas
ocupando esta proteína como andamio para
regenerativas de tejidos por sus
estimular la reparación de los huesos. Los
características de biocompatibilidad y baja
resultados han sido favorables, ya que en
inmunogenicidad. Como resultado, el
numerosas ocasiones se ha demostrado que
colágeno suele ser la proteína más usada
este tipo de andamio favorece la regeneración
como biomaterial, no solo en la ingeniería de
del tejido óseo (Dong y Yonggang, 2016). Se
tejidos, sino también en otros campos del área
han obtenido resultados similares con
de la salud como la cicatrización de heridas
andamios compuestos de colágeno tipo II
corneales.
para lesiones de cartílago, favoreciendo una
regeneración más rápida (Dong y Yonggang, La mayoría de las investigaciones
2016). actuales apuntan a la optimización de
biomateriales a base de colágeno para
Otra área de aplicación es la
aplicaciones médicas al mejorar la resistencia
reparación de ligamentos y tendones, los
mecánica, la biodegradabilidad y las
cuales tienen una capacidad limitada de
características de administración.
autoregeneración, pero los andamios de
colágeno pueden proporcionar una estrategia Aunque ha habido grandes avances en
efectiva para acelerar este proceso (Dong y el desarrollo y el uso de estas técnicas
Yonggang, 2016). recombinantes, se requieren aún de muchos
estudios y experimentación para explotar las
Finalmente, hay ejemplos del uso de
capacidades de una de estas herramientas
andamios de colágeno tipo IV para la
biomédicas para sintetizar nuevos tipos de
formación de vasos sanguíneos artificiales,
colágenos y mejorar su rendimiento, debido a
llegando a desarrollar un endotelio funcional,
que un andamio de colágeno efectivo para un
y del uso de andamios de colágeno tipo I para
tejido específico puede tener resultados sirvieron de guía para la redacción de este
deficientes en otro tejido u órgano. artículo. Asimismo, agradecemos a la
Benemérita Universidad Autónoma de
Agradecimientos
Puebla por los recursos brindados para
Los autores agradecemos al Dr. Enrique obtener la información presentada en este
González Vergara por sus enseñanzas que trabajo.

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