Práctica de glucógeno
Estudio experimental de los factores que afectan el contenido de
glucógeno hepático.
Objetivos:
1. Estudiar los factores que influyen en la síntesis y degradación del
glucógeno hepático.
2. Estudiar el efecto de la dieta sobre el contenido de glucógeno hepático.
3. Estudiar el efecto del ayuno sobre el contenido de glucógeno hepático.
Procedimiento:
1. EXTRACCIÓN Y DETERMINACIÓN DEL GLUCÓGENO HEPÁTICO
El método empleado es el de Krisman, que asocia el procedimiento clásico
de la extracción del glucógeno por tratamiento del tejido con una base
fuerte (KOH) en caliente y su precipitación con etanol. Para cada animal
experimental proceder de la siguiente forma:
En un tubo de centrifuga medir 1.8 ml de KOH al 33% y colocarlo en un
baño maría hirviente, brevemente pro algunos segundos, antes de
introducir el trozo de hígado.
Tomar la muestra de hígado y pesar 200 mg de parénquima hepático.
Colocar inmediatamente el trozo de hígado que se ha pesado en la
solución de KOH que se encuentra en el baño hirviente y dejarlo allí por 20
minutos, mezclarlo de vez en cuando con una varilla de vidrio para permitir
la total desintegración del tejido y teniendo mucho cuidado de que no se
proyecte su contenido.
Retirar el tubo del baño y enfriar. Añadir 2.6 ml de etanol al 96% mezclarlo
y volver a calentar la solución hasta la ebullición teniendo siempre mucho
cuidado de que no se proyecte su contenido. Reintentar y enfriar
inmediatamente en baño de hielo pro 5 minutos, para permitir la
precipitación del glucógeno.
Centrifugar a 3500 rpm por 10 minutos. Decantar el sobrenadante
suavemente y dejar el tubo invertido sobre un papel de filtro, tratando de
eliminar el sobrenadante lo más posible.
Neutralizar el exceso de base añadiendo 0.4 ml de NH4Cl saturado,
mezclando cuidadosamente con varilla de vidrio. Colocar luego el tubo en
baño maría hirviente durante 5 minutos. Retirar el tubo y enfriarlo
completamente.
Añadir 0.4 ml de agua destilada y proceder luego a la reacción
colorimétrica según el siguiente cuadro:
REACTIVOS 1 2 B St. l St. 2 St. 3
Solución obtenida (mi) 0.8 0.8 - - - -
Agua destilada - - 0.8 - - -
Sol. St. De glucógeno 15 mg% - - 0.8 - -
Sol. St. de glucógeno 45 mg% - - - - 0.8 -
Sol. [Link] glucógeno 60 mg% - - - - - 0.8
Reactivo de yodo 5.2 5.2 5.2 5.2 5.2 5.2
NOTA: Hacer diluciones si fuera necesario (en los tubos que se observe
abundante precipitado) luego de neutralizar el exceso de base con NH4C1, y
emplear para la reacción de color 0.8 ml de solución diluida. Anotar el factor de
dilución.
Dejar en reposo los tubos por 5 minutos. Leer la absorbancia en el
fotocolorímetro con filtro verde.
1. Anotar el aspecto, consistencia y peso de cada hígado.
2. Observar la cantidad de precipitado después de centrifugar:
3. Calcular el factor de calibración considerando las siguientes
lecturas para los tubos BLANCO y ESTÁNDAR:
Ab. bruta Ab neta Concentración Fc
Abs bruta – abs del Glucógeno/mg/100 Conc del standard
blanco
BLANCO 0.11
ESTÁNDAR 1 0.29 0.12
ESTÁNDAR 2 0.66 0.36
ESTÁNDAR 3 0.85 0.48
FACTORES DE
CALIBRACIÓN
(Fe)'PROMEDIO
Fc=concentración del standard/abs neta del standard
Promedio de los tres factores de calibración______________________
Luego de extraer el glucógeno y cumplir con el protocolo de la práctica
RESULTADOS
Muestras Absorbancias Absorbancias Resultados
brutas netas
Blanco
Hígado de cuy
Hígado de pollo
Cálculos:
Conclusión:
HOJA DE TRABAJO N° 6
GLUCOGÉNESIS Y GLUCOGENOLISIS
Colorear la siguiente imagen de la glucogenogénesis y glucogenólisis. Explicar
la imagen en el cuadro e indicar cómo se regula la glucogenogénesis y
glucogenólisis. +
GLUCOGÉNESIS GLUCÓGENOLISIS
Colocar dos imágenes representativas del procedimiento de la práctica:
Nombre diferentes destinos de la glucosa 6 fosfato
