UNIVERSIDAD CATÓLICA DE SANTA MARÍA

FACULTAD DE CIENCIAS FARMACÉUTICAS BIOQUÍMICAS Y

BIOTECNOLÓGICAS

ESCUELA PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA

PRÁCTICAS DE INMUNOLOGIA

PRACTICA N° I

CÉLULAS SANGUÍNEAS, RECUENTO LEUCOCITARIO Y HEMOGRAMA

ALUMNO:

AREQUIPA – PERÚ

2022
 Práctica N°1

Células Sanguíneas, recuento leucocitario y hemograma

I. Objetivos

 Diferenciar técnicas de tinción celular.

 Identificar las diferentes células sanguíneas que circulan en sangre.
 Aprender a manipular la cámara de Neubauer.
 Hacer el recuento leucocitario de sangre humana.
 Elaborar un hemograma.

II. Marco teórico

La sangre es un tejido fluido, que cumple una serie de funciones vitales en

nuestro organismo, permite el transporte de nutrientes y de células importantes
para la defensa, así mismo tiene un rol importante en el intercambio gaseoso
(oxígeno y CO2). La sangre está constituida por una fracción liquida y un celular, la
fracción liquida compuesta por el plasma, (líquido amarillento conformado por
agua, sales y glucosa) y la fracción celular compuesta por grupos celulares, dentro
de las cuales tenemos a las plaquetas, los glóbulos rojos (hematíes o eritrocitos) y
glóbulos blancos (leucocitos o glóbulos blancos), estos últimos son los efectores
celulares de la respuesta inmunológica, cada una de estas cumplen funciones
diferentes.

Podemos encontrar células sanguíneas en otras matrices biológicas, los

análisis de estas nos ayudaran en el diagnóstico y diferenciación de algunas
patologías, como es el caso de la diferenciación de una diarrea de origen vírica y
una bacteriológica, en el primer caso encontraremos mayor cantidad de células
mononucleares y en el segundo de polimorfonucleares, y de esta forma poder
seleccionar el tipo de tratamiento.

En el laboratorio podemos encontrar diversas técnicas de tinción celular o

coloración de células, que nos permiten analizar la composición y estructura
microscópica de las mismas. El objetivo de la coloración es aumentar el contraste
entre las estructuras celulares (núcleos y citoplasma) y el medio que las rodea,
esto nos permite visualizarlas y caracterizarlas microscópicamente con mayor
facilidad.

Los glóbulos blancos también denominados leucocitos, son los encargados

de la defensa del organismo frente a infecciones. Los leucocitos (mononucleados o
polinucleados), a diferencia de los eritrocitos, no contienen pigmentos y son
verdaderas células con núcleo, mitocondria y organoides, cabe recalcar que solo
un pequeño porcentaje de leucocitos se encuentra circulando en el torrente
sanguíneo, la mayor cantidad se encuentra en la medula ósea, tejidos y órganos,
donde cumplen funciones especiales.

El recuento leucocitario es una prueba que nos permite determinar el

número de glóbulos blancos por milímetro cúbico de sangre. Se encuentran
3
normalmente entre 5000 y 9000 leucocitos por mm de sangre. Estas cifras varían
con la edad y con el momento que se toma la muestra.

Valores elevados: El aumento del número de leucocitos circulantes se llama

leucocitosis, se observa en el curso de algunas infecciones bacterianas piógenas.

Valores reducidos: La disminución del número total de leucocitos circulantes se

denomina leucopenia. Se observa en algunas infecciones como la tifoidea y el
paludismo.

RECUENTO DE LEUCOCITOS

La concentración de leucocitos es el número de ellos que se encuentran en

un litro de sangre, se expresa como el número de leucocitos por milímetro cúbico.
El recuento celular tiene como objetivo determinar el número, de cada una de las
células que están comprendidas en una unidad de volumen de medio en el que
están suspendidas.

La cámara de neubauer es la más usada para realizar el recuento celular

de forma manual. Consiste en una placa gruesa de cristal, cuya porción central
está dividida en 3 ejes perpendiculares al eje longitudinal de la cámara. Los dos
ejes laterales se hallan más elevados con respecto al eje central. La banda central
 esta subdividida en 2 semi bandas idénticas y separadas por un surco paralelo al
eje longitudinal de la cámara y en cada una hay grabada una cuadricula que
facilitará el recuento celular.

1 2 3
1
1

4 5 6
1 2 3

7 8 9
1 2 3

2
Área de la cámara = 9mm
Profundidad de la cámara 0.1 mm
2
Cuente las células en un área de 4 mm utilizando los cuadros numerados 1, 3, 7 y 9,
como se indica en la figura.

HEMOGRAMA

Hemograma, es el recuento diferencial o porcentual de los leucocitos, que indican el

3
número de cada tipo celular por mm y se realiza examinando un frotis de sangre
coloreado. Se cuentan 100 leucocitos y se anota el número que se ha encontrado de cada
tipo de ellos. La proporción de cada tipo de leucocitos se expresa como una fracción
decimal.
HEMOGRAMA DE SCHILLING

Metamieloci Neutrofilos Eosinofil Basofil Linfocit Monocit

tos os os os os

Abastonad Segmentad
os os

0% 2-3% 50-67% 1-4% 0-1% 20-30% 3-8%

Cuando las células anotadas a la izquierda del recuadro se encuentran por encima de los
porcentajes considerados normales, se dice que hay una desviación a la izquierda
(infección aguda). En ocasiones puede registrarse un aumento del porcentaje de las
células anotadas a la derecha, (linfocitos y monocitos) y se dice que el hemograma
muestra una desviación a la derecha. El aumento de un determinado tipo de células tiene
que repercutir en la disminución de las otras, para que la suma total sea 100%

III. Material

Soluciones y reactivos
 Alcohol 70%
 Alcohol absoluto
 Líquido para la dilución, solución de Turk.
 Tinción Wright
 Aceite de inmersión
 Tinción Wright de coloración
 Tinción de Giemsa de coloración
 Tinción de hematoxilina - eosina

Equipos y material

 Aguja
 Jeringa
  Algodón
 Portaobjetos
 Cubreobjetos
 Lancetas
 Tubos eppendorf.
 Pipeta de 1ml
 Micropipeta 1ml
 La cámara de Neubauer
 Pizetas
 Microscopio óptico

IV. Procedimiento

4.1.- Obtención de un frotis sanguíneo:

1. Obtención de la muestra (sangre capilar). Con la lanceta realizar un pequeño corte

en el borde cubital del dedo índice (cuarto dedo) previamente desinfectado con
alcohol de 70º o alcohol yodado.
2. Desechar la primera gota.
3. Depositar una gota de sangre un extremo del portaobjetos y colocarlo sobre la
mesa.
4. Proceder a tapar el dedo pinchado y desechar la lanceta en un contenedor de
residuos.
5. Realizar el frotis sanguíneo con otro portaobjetos, este debe hacerse extendiendo
la muestra de forma rápida y continúa arrastrando el portaobjetos con un ángulo
de inclinación de 45º.
6. Dejar secar a temperatura ambiente.
7. Aplicar los diferentes protocolos de tinción.
8. Dejar secar a temperatura ambiente.
9. Aplicar los diferentes protocolos de tinción.
 Paso 1

Paso 2

Paso 3

Cola

Zona ideal de observación Cuerpo Cabeza

4.2.- Tinción Wright:

1. Teñir el frotis cubriéndolo totalmente con las gotas de colorante Wright, dejar
actuar el colorante durante 1 - 2 minutos.
2. A continuación, añadir tantas gotas de agua destilada como las que se pusieron de
colorante, mover suavemente la muestra, hasta que aparezca una coloración
verde metálica en la superficie.
3. Mantener el frotis cubierto con esta mezcla durante 7-10 minutos.
4. Lavar bien el frotis con abundante agua destilada durante 30 segundos, dejarla
secar al aire.
5. Colocar un cubreobjetos y observar al microscopio.
 4.3.-Tinción Giemsa:

1. Cubrir totalmente el frotis con alcohol absoluto durante 3 minutos.

2. Posteriormente se escurre el alcohol y se deja secar al aire.
3. Cubrir el frotis con la tinción Giemsa y dejar actuar 10- 15 minutos.
4. Escurrir y lavar el frotis con abundante agua destilada, dejar secar al aire.
5. Colocar un cubreobjetos y observar al microscopio.

4.4 Tinción de hematoxilina - eosina

1. Fijar la preparación añadiendo alcohol absoluto y dejándolo evaporar a

temperatura ambiente.
2. Cubrir el frotis con unas gotas de hematoxilina, dejar actuar el colorante durante
aproximadamente 15 minutos. Evitar que el colorante se seque agregando más.
3. Lavar la preparación con agua destilada y añadir unas gotas de eosina dejándola
actuar durante 1 minuto.
4. Lavar nuevamente la muestra hasta que no queden restos de colorante.
5. Dejar secar la muestra a temperatura ambiente o a calor muy suave.
6. Colocar un cubreobjetos y observar al microscopio.

4.5 Procedimiento recuento de leucocitos

1. Con la micropipeta de 1000 µl traslade 950µl del líquido para dilución de leucocitos
(turk) a un tubo eppendorf.

2. Aspire 50 µl de sangre venosa (anticogulada) o capilar. Si la sangre es venosa

asegúrese que se mezcle completamente invirtiendo el frasco que contiene esta
sangre y el anticoagulante varias veces durante 1 min. Inmediatamente antes de
aspirarla con la micropipeta

4. Deposite la sangre en el frasco que contiene el líquido para la dilución. Enjuague la

pipeta aspirando y expulsando este líquido tres veces. La dilución de esta sangre
será de 1: 20

5. Monte la laminilla de vidrio en la cámara de Neubauer, presionándola

cuidadosamente para colocarla en su sitio

6. Mezcle bien la sangre diluida.

 7. Por medio de una pipeta llene la cámara de Neubauer.

8. Deje reposar la cámara para recuento sobre la mesa de trabajo durante 3 minutos a
fin de que las células de asienten.

9. Coloque la cámara en la platina del microscopio. Utilice el objetivo x 10, reduzca la

cantidad de luz que entre en el condensador, ajustando el diagrama iris, enfoque
la cuadricula de la cámara y los leucocitos.

4.6.- Procedimiento hemograma

1. Hacer un frotis sanguíneo.

2. Colorear con la tinción de Wright.
3. Llevar al microscopio.
4. Inicie el recuento en la última porción de la extensión.
5. Examine una porción rectangular de la extensión mediante un movimiento
ordenado, de un campo al siguiente.
6. Tome nota del tipo le leucocitos que se observe en cada campo. Cuente un total
de 100 leucocitos.
7. Vigile que la extensión no sea demasiado gruesa, si observa que la extensión es
cada vez más gruesa (los eritrocitos se encuentran muy agrupados), detenga el
movimiento hacia el extremo donde comienza la extensión y retroceda hacia la
última porción.

V. Resultados

Hacer un esquema de los pasos seguidos para desarrollar la práctica y sacar sus
conclusiones de los resultados obtenidos.

Haga sus propios cálculos del recuento leucocitario encontrado en la práctica,

calcule en número de células en un litro de sangre (coloque la formula) y compare
con los valores normales.

 Elabore un hemograma de los resultados obtenidos y escriba su diagnóstico.

VI. Cuestionario

1. ¿Qué tipos de células sanguíneas ha observado bajo el microscopio?

 Leucocitos
 Neutrófilos
 Basófilos
2. ¿Cómo se clasifican los leucocitos? Grafique cada uno de ellos.

3. ¿Cuáles son los valores normales de leucocitos en sangre? ¿Cuáles son

más abundantes? ¿Por qué?
 Leucocitos: La cantidad normal de glóbulos blancos en la sangre es 4,500 a
11,000 GB por microlitro (de 4.5 a 11.0 × 109/L).
 Los neutrófilos son los leucocitos más numerosos y a los que nos referimos
normalmente cuando hablamos de granulocitos. Constituyen cerca del 60-70% de
leucocitos
 son los primeros en acudir a una infección.

4. ¿Cuáles son las funciones de los eosinófilos y basofilos?

Eosinófilos:
 Los eosinófilos son especialmente importantes en la defensa contra infecciones
parasitarias. Sin embargo, si bien las infecciones helmínticas suelen acompañarse
 de eosinofilia y los eosinófilos son tóxicos para los helmintos in vitro, no hay ninguna
evidencia directa de que destruyan parásitos in vivo.
 Los eosinófilos pueden modular las reacciones de hipersensibilidad inmediata al
degradar o inactivar mediadores liberados por los mastocitos, como la histamina, los
leucotrienos (que pueden provocar vasoconstricción y broncoconstricción), los
lisofosfolípidos y la heparina.

Basófilos
Los basófilos son reclutados a los sitios de inflamación donde pueden ser
activados directamente por una variedad de patrones moleculares asociados a
patógenos (o PAMPs, por sus siglas en inglés), así como por entrecruzamiento de
IgE. Cuando son estimulados, liberan su contenido granular
conteniendo histamina y producen LTC4 (leucotrieno 4). Además, son también
capaces de producir citocinas, principalmente IL-4 e IL-13, así como MIP-1α. Por
lo tanto, estas células ayudan al sistema inmunitario a través de la liberación de
distintos componentes tales como citocinas, leucotrienos e histamina. En, los
basófilos son realmente importantes en respuestas inmunitarias frente a parásitos,
incluyendo garrapatas y filarias.

5. ¿Qué tinciones se pueden utilizar para analizar células sanguíneas? Describa

brevemente sus diferencias en composición y cómo actúan sobre las
células.
 Tinciones de Romanowsky: Las tinciones de Romanowsky se fundamentan en el
uso de colorantes constituidos por eosinas y derivados de tiazinas. El método de
Romanowsky aplica dos principios básicos de tinción:

a) la fijación de la sangre extendida sobre el portaobjetos.

b) el uso, junto a los colorantes clásicos (eosina y azul de metileno), de
metiltioninas (derivados por oxidación del azul de metileno), conocidos como
azures (A, B y C).

Estas sustancias metacromáticas son las que producen la coloración púrpura o

roja de la cromatina nuclear y de algunos gránulos citoplasmáticos que, por este
motivo, son denominados azurófilos.
 Azul de Metileno (AM): es el cloruro de tetrametiltionina, un colorante básico de
anilina derivado de la fenotiacina.

Hematología para la tinción y la diferenciación de los elementos sanguíneos. Cada

uno de estos colorantes básicos es capaz de formar una sal con la eosina - por
ejemplo, Eosinato de Azul de Metileno.

 Tinción De Wright

Para teñir los extendidos de sangre periférica y médula ósea se utiliza

principalmente la tinción de Wright. El azul de metileno policromo y la eosina son
las tinciones derivadas del método original de Romanowsky. Las reacciones en la
tinción dependen del pH. El azul de metileno (colorante básico) tiñe los
componentes celulares ácidos, mientras que la eosina (colorante ácido) tiñe
componentes básicos. También se forma un complejo tiazina eosinato (azul de
metileno oxidado y eosina) que se encarga de teñir los componentes neutros de la
célula.

 Tinción de azul cresil brillante

La capacidad o grado de regeneración de eritrocitos en médula ósea se puede

determinar con el recuento de reticulocitos en sangre periférica, por lo que tiene
importancia clínica en la orientación diagnostica y de pronóstico terapéutico.

Identificación de los reticulocitos: microscópicamente, los reticulocitos son de

un color azul y el complejo aparece como una fina malla (retículo o trenza
filamentosa) de color morado-azul intenso o al menos dos pequeños gránulos de
color azul que permiten que los reticulocitos sean identificados.

Para la identificación de blastos: Morfológicamente se observan como células

claras, grumosas y dependiendo de la cantidad de nucleolos presentes en la célula
(en el núcleo), estos se observan como estructuras circulares pequeñas, medianas
y grandes, de color azul intenso bien definido, que corresponden a los nucleolos
propios de la célula blástica.
6. ¿Qué es un Hemograma completo?

Un hemograma completo es un análisis de sangre que se usa para evaluar el

estado de salud general y detectar una amplia variedad de enfermedades, incluida
la anemia, las infecciones y la leucemia.

Un hemograma completo mide los niveles de varios componentes y características

de la sangre, tales como los siguientes:

 Los glóbulos rojos, que transportan el oxígeno

 Los glóbulos blancos, que combaten las infecciones

 La hemoglobina, la proteína de los glóbulos rojos que transporta el

oxígeno

 El hematocrito, la proporción de glóbulos rojos comparada con el

componente líquido, o «plasma», de la sangre

 Las plaquetas, que ayudan a coagular la sangre

Un aumento o una disminución anormal en los recuentos de células, evidenciados

por el hemograma completo, podría indicar que posees una enfermedad no
diagnosticada que debe evaluarse en mayor profundidad.

7. ¿De qué está compuesto y cuál es la función de la solución de turk?

El líquido de Türk es una solución hipotónica compuesta por un colorante y ácido
acético. Su función es ser una solución colorante usada para la manifestación
de leucocitos en el contaje de glóbulos blancos.

8. Comente sobre una patología causada por aumento de leucocitos.

La leucocitosis, un aumento en el número de glóbulos blancos (leucocitos) de

más de 11 000 células por microlitro de sangre (11 × 10 9 por litro), está causada a

menudo por una respuesta normal del organismo frente a algunos fármacos,

como los corticosteroides, o bien para ayudar a combatir una infección.

 9. Comente sobre una patología causada por disminución de leucocitos.
La leucopenia, una disminución en el número de glóbulos blancos (leucocitos) a

menos de 4000 células por microlitro de sangre (4 × 10 9 por litro), con frecuencia

hace que los afectados sean más susceptibles a las infecciones.

10. ¿Por qué se cuentan los leucocitos en los cuadrantes grandes y no en los
del medio?
Porque en el cuadrante central se miden solo los eritrocitos y glóbulos rojos
mientras que los cuadrantes laterales solo se cuentan los leucocitos

VII. Referencias

Abbas, A., Lichtman, A. y Pober. J. 2015. Inmunología Celular y Molecular. 8va

edición. Elsevier, España. ISBN: 9788481747102

Manual de técnicas de laboratorio en hematología, 4th Edition, Elsevier Masson

ISBN: 9788445825228