UNIVERSIDAD VERACRUZANA

Campus Coatzacoalcos – Minatitlán

Facultad de Ciencias Químicas

LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA GENERAL

REPORTE DE PRACTICA 4 PREPARACIÓN, VACIADO y
SIEMBRA DE MEDIOS DE CULTIVO

EQUIPO 3
Canseco Prieto Andrea
Chacón Rodríguez Emanuel
Domínguez Rodríguez José Alexander
González Bejar Manuel Alejandro
Guillen López Pablo Jair
Hernández Luna Ana Luisa
Pitalua Pérez Kevin Javier
Vadillo Brito Yael Said de Jesús

IBT-401 INGENIERÍA EN BIOTECNOLOGÍA

Nombre del docente

Dr. Oswaldo Guzmán López
 PRÁCTICA 4: PREPARACIÓN, VACIADO Y SIEMBRA DE MEDIOS DE
CULTIVO

Objetivos
1. Conocer los diferentes medios de cultivo.
2. Comprobar el crecimiento de los diferentes microorganismos.
3. Comprobar la importancia de lavarse las manos para evitar contraer enfermedades
producidas por microorganismos
4. Dominar la técnica de asepsia para evitar contaminación.
5. Utilizar los diferentes medios de cultivo para las especies adecuadas.

Fundamento
Un medio de cultivo es un conjunto de nutrientes, factores de crecimiento y otros
componentes que crean las condiciones necesarias para el desarrollo de los
microorganismos. La diversidad metabólica de estos es tan grande que la variedad de
medios de cultivo es enorme, no existiendo un medio de cultivo universal adecuado para
todos ellos, ni siquiera refiriéndonos a las bacterias con exclusividad.
Agar.
Se utiliza como agente gelificante para dar solidez a los medios de cultivo. En el agar
bacteriológico el componente dominante es un polisacárido que se obtiene de ciertas algas
marinas y que presenta la indudable ventaja de que, a excepción de algunos
microorganismos marinos, no es utilizado como nutriente. Un gel de agar al 1-2% se licua
alrededor de los 100ºC y se gelifica alrededor de los 40ºC, dependiendo de su grado de
pureza.
Tipos de medios de cultivo.
Medios generales. Son aquellos que permiten el crecimiento de una gran variedad de
microorganismos.
Medios de enriquecimiento. Son aquellos que favorecen el crecimiento de u determinado
tipo de microorganismo sin llegar a inhibir totalmente el crecimiento de los demás.
Medios selectivos. Son aquellos que permiten el crecimiento de un tipo de
microorganismos determinado, inhibiendo el desarrollo de los demás.
Medios diferenciales. Son aquellos en los que se pone de manifiesto propiedades que un
determinado tipo de microorganismos posee.
Preparación de medios de cultivo.
La preparación del medio de cultivo se reduce sencillamente a pesar la cantidad deseada
del mismo y disolverla en agua destilada siguiendo las instrucciones del fabricante. Las
sustancias termolábiles, se esterilizan por filtración y se añaden al resto de los componentes
después de que estos hayan sido previamente esterilizados en la autoclave y enfriados a
temperatura ambiente ó a 40-50ºC si se trata de medios con agar. Las placas de Petri se
preparan vertiendo el medio fundido y estéril dentro de ellas y en un ambiente aséptico, es
conveniente homogenizar el medio en el transcurso de la operación para evitar que el agar
sedimente en el fondo del recipiente y no se distribuya por igual en todas las placas.
También es posible conservar el medio destinado a preparar placas Petri solidificado y
estéril en tubos que se fundirán al baño María en el momento de la preparación de las
mismas.

Materiales y Reactivos
 6 tubos de ensayo con tapa
 Gradilla
 Cinta
 Algodón
 Bolsas
 Papel Kraft
 2 matraz Erlenmeyer de 250 ml
 Vaso de precipitado 500 ml
 Rejilla de asbesto
 Trípode
 Mechero Bunsen y Fisher
 Manguera
 Agar Nutritivo
 Agar Papa Dextrosa
 Pipetas graduadas 10 ml
 Vidrio de reloj
 Probeta de 100 ml
 Agitador de vidrio
 12 cajas Petri
 Asa de platino
 Balanza granataria o analítica

Procedimiento
Preparación de los medios de cultivo
1. Se leen cuidadosamente las instrucciones de preparación de los medios de cultivo
asignados y se realizan los cálculos correspondientes para la preparación del volumen
adecuado.
2. Se encienden los dos mecheros bunsen y se flamea la mesa y la espátula que se va a
utilizar, permitiendo que se enfríe antes de utilizarla para extraer el medio deshidratado.
3. Se abre el frasco de uno de los medios de cultivo deshidratados junto a la flama del
mechero para evitar que se contamine. Se saca una porción aproximada del medio y se
cierra inmediatamente el frasco de medio de cultivo.
4. Se pesa la cantidad exacta del medio deshidratado en la balanza granataria colocada
cerca del otro mechero, adicionándolo directamente en el matraz de 250 mL.
5. Se disuelve la porción pesada de acuerdo con la cantidad de agua destilada a utilizar
para diluir el medio.
6. Se introduce el agitador de vidrio en el matraz para que la suspensión se mezcle
homogéneamente. Calentar el medio para disolver completamente, se debe tener cuidado
de no sobrecalentar, únicamente se observa que todos los sólidos se disuelvan.
8. Se coloca el tapón de algodón y el capuchón de papel y se sujeta con la cinta testigo.
9. Se identifica el lote de medio de cultivo preparado indicando su nombre, fecha de
preparación.
10. Se repiten los pasos 3 al 9 con demás medios.

RECOMENDACIÓN: Para una mejor distribución del trabajo de preparación de los medios,
es recomendable hacer de una sola vez un medio para todos los equipos, en lugar de hacer
varios para pocos mililitros de agar.

Cálculos
Dadas las condiciones de preparación para cada agar se realizaron los cálculos
para determinar la preparación de 150 ml (de Agar Nutritivo y Agar PDA.

Agar Nutritivo
Para 1000 ml de medio se requieren 23 g de agar

→ Se pesaron . de Agar
→ ¿? Nutritivo

Agar Papa Dextrosa

Para 1000 ml de medio se requieren 30 g de agar

→
→ ¿? Se pesaron 4,5 de Agar PDA
 Desarrollo Experimental

Se observaron las Se observaron las Se pesaron los gramos a utilizar

especificaciones y condiciones de especificaciones y condiciones de de Agar Nutritivo, este se disolvió
preparación para el agar. Se preparación del agar PDA. Se en 150 ml de agua destilada, con
estableció y determino el estableció y determino el ayuda de un agitador se
volumen y gramos a pesar para la volumen y gramos a pesar para la homogenizo el agar cuidando de
preparación del medio. preparación del medio. no dejar grumos grandes.

En un vidrio de reloj se pesaron Para diluir completamente el agar Los tubos con rosca esterilizados
4.6 gramos de Agar PDA, el agar ambos matraces se calentaron a se llenaron con 9 ml de agar esto
seco se traspasó a un matraz la llama del mechero, se mantuvo con ayuda de pipetas graduadas
Erlenmeyer esterilizado y se una agitación constante del medio estériles. (3 tubos con Agar PDA y
diluyo con 150 ml de agua para evitar derramamientos, una 3 tubos con Agar Nutritivo)
destilada, se homogenizo bien con vez que se observara ebullición en
ayuda de un agitador de vidrio. el medio se retiraban los matraces
de la llama.
 Una vez llenados los tubos los Los matraces se embolsaron al Se acomodo el material en la
matraces Erlenmeyer con el agar igual que los tubos, estos se autoclave para esterilizar. Se
sobrante se taparon con tapones encontraban medio cerrados y en programó el tiempo y temperatura
de algodón y capuchones de papel un vaso de precipitado para llevar de esterilización.
para llevar a esterilizar al a esterilizar junto con los
autoclave. matraces.

Se realizo el vaciado en 6 cajas Los tubos se acostaron de manera

Esterilizado el medio se procedió que se formara una inclinación, se
el vaciado a las cajas Petri. La con Agar Nutritivo y en 6 cajas con
Agar PDA. Se espero a que se dejaron solidificar de esa forma
técnica consistía con una mano para posteriores aislamientos.
abrir parcialmente la caja y con la solidificaran para realizar las
otra inclinar el matraz con el agar respectivas siembras.
de manera que la caja se llenara a
la mitad de su capacidad.

Este procedimiento se realizó

cerca del mechero, cuidando que
la boca y el tapón del matraz se
pasaran por la llama cada que se
realizaba un vaciado para evitar
contaminación.
Solidificados los agares en las Las cajas de siembra con Agar Se esperaron de 24 a 72 horas
cajas Petri se procedió a la Nutritivo fueron a la estufa de para observar el crecimiento
siembra de diferentes muestras. incubación de bacterias a 29 °C, colonial de la siembras realizadas.
La técnica de estriado consistió mientras que las siembras con Agar
en esterilizar el asa de platino a la PDA fueron a la estufa de hongos a
llama del mechero, depositar una 26°C.
muestra en el agar y esparcir
mediante líneas zigzag por los
alrededores de la caja, terminando
en el medio de esta.

Después del tiempo de incubación Se observaron detenidamente las Las cajas Petri control son
se observó el crecimiento de características de cada colonia y aquellas en las que no se sembró
diferentes colonias de se realizaron los respectivos ningún tipo de muestra por lo que
microorganismos con morfologías registros morfológicos, nos permitieron comparar si
coloniales distintas. estábamos ante la presencia de
colonias de microorganismo o de
contaminación.
 Las muestras sembradas en las cajas con Agar PDA tuvieron una proliferación diferente a las del Agar Nutritivo,
se registraron las características de cada caja.

Inoculación y aislamiento de los microorganismos en caja .

De los diferentes crecimientos en las cajas Petri se tomaron 3 de estos por cada agar para aislar en tubos ensaye.
De los microorganismos crecientes se tomaron con un asa estéril muestras de la colonias, las diferentes muestras se
inocularon en la superficie inclinada del agar. Los 6 tubos sembrados se incubaron a diferentes temperaturas dado
que se trataban de bacterias y de hongos. Observamos el crecimiento colonial después de horas de incubación.

Las muestras utilizadas en la siembra se describen en las observaciones de la práctica*

Observaciones
Inicialmente esterilizamos el área de trabajo, desinfectando la superficie de la mesa y
prendiendo el mechero Fisher para mantener el área lo más estéril posible con el calor.
En esta práctica preparamos medio de cultivo definido, pues se prepararon y se midieron
de manera exacta la cantidad y composición exacta de los elementos para realizar los dos
medios de cultivo, posterior a eso una vez ya preparados se calentaron en los matraces
hasta llegar a su punto de ebullición y se dejaron reposar en lo que se preparaban las cajas
Petri; una vez listas se realizó el vertido en tubos de ensaye y en cajas petri con la técnica
impartida por el maestro, que es colocar el dedo índice en las dos piezas de la caja,
funcionando como una especie de bisagra y con el dedo pulgar levantar la pieza superior
de caja y con la otra mano quitar el tapón de algodón del matraz con agar, después acercar
la boquilla de este a la flama para posteriormente realizar el vertido en la caja, se repitió el
proceso de flamear la boquilla al momento de colocar el tapón en el matraz y se dejaron
reposar las cajas cerca de la flama.
Se repitió este proceso con todas las cajas.
Una vez solidificado el agar, se procedió a realizar la técnica de estriado con nuestras
muestras recolectadas, esta técnica fue previamente explicada por el maestro, se decidió
realizar 6 muestras en agar nutritivo y 6 en agar papa dextrosa, cada uno con su respectiva
caja de control, mientras los tubos con agar, de igual manera 6 con AN y 6 con PDA y su
respectivo control se dejaron inclinados sin que el agar llegara a la tapa, esto para después
aislar lo que creciera en las cajas Petri.
Finalmente se dejaron incubar las cajas, para bacterias se dejó el agar nutritivo a 29° y el
PDA para los hongos de 24 a 72 hrs. Posterior a esto, una vez se observó crecimiento de
bacterias y hongos, procedimos a aislar los microorganismos que nos parecieran más
interesantes.

Morfología colonial
Cultivos: Agar Nutritivo
Muestra de columna de luz
Tamaño No prolifero en un tamaño definido
Forma Irregular
Borde Ondulado
Transparencia Transparente
Brillo Brillosa
Color No pigmentada
Textura Lisa
Elevación Plana
Consistencia Suave
Muestra Moco
Tamaño Puntiforme
Forma Circular
Borde Entero
Transparencia Opaco
Brillo Sin brillo
Color No pigmentada
Textura Lisa
Elevación Aérea
Consistencia Mucoide

Muestra Laguna
Tamaño Mediana
Forma Circular
Borde Entero
Transparencia Opaco
Brillo Sin brillo
Color Pigmentada (Blanco)
Textura Lisa
Elevación Convexa
Consistencia Dura

Muestra Agua de tortugas

Tamaño Mediana
Forma Circular
Borde Ondulado
Transparencia Opaco
Brillo Brillante
Color Pigmentada (Amarilla)
Textura Rugosa
Elevación Umbilicada
Consistencia Mucoide

Muestra Baño
Formación de diversidad colonial
Reverso y Anverso Colores negro, amarillo, blanco, gris
Apariencia Algodonosa
Bordes Irregulares
Superficies Planas y Elevadas
Morfología colonial
Cultivos: Agar PDA
Muestra Hongo
Reverso Colores verde/blanco
Anverso Amarillento, halo blanquecino en la
periferia
Aspecto Aterciopelado
Superficies Planas con centro de apariencia de gotas

Muestra Coco descompuesto

Reverso Negro con puntos
Anverso Forma de crecimiento en dirección similar,
color blanquecino opaco
Aspecto Algodonosa en los bordes y aterciopelada
con esporulación colonial

Muestra Alga Tortuga

Reverso Color verde
Anverso Blanquecino opaco
Aspecto Aterciopelado
Superficies La colonia se extendió por los bordes de
la caja

Resultados
En ambos agares tuvimos crecimiento de microorganismos, en el PDA se desarrollaron
principalmente hongos, los cueles provenían de una muestra de madera de coco y otra de
la misma carne en estado de descomposición, además de que la muestra tomada de una
laguna produjo el crecimiento de algas, de igual manera el aislamiento y la resiembra de
estos cultivos en tubos de ensayo nos permite concluir que los hongos prefieren medios
como el PDA para crecer, y las bacterias el Agar Nutritivo.

Conclusiones
Se ha referido a los cultivos como un medio “controlado” para el crecimiento de ciertos
microrganismos a analizar, en un medio aislado de algún otro microrganismo que pueda
interferir con nuestro análisis de interés.
Este aislamiento nos ha permitido estudiar a nuestro microrganismo de interés, que
normalmente suelen ser hongos y bacterias y en otras ocasiones células de tejido. La
finalidad de estos cultivos es conocerlos a fondo, su morfología, fisiología, mecanismos
moleculares etc; para llevar a cabo las pruebas necesarias y de interés para los científicos.
Referencias Bibliográficas
(S/f). [Link]. Recuperado el 7 de junio de 2023, de
[Link]
_DAVID_AGUD.pdf

Patroclo, H. (2017, 3 de abril). Medios de cultivo. Página de inicio | Universidad de Granada.

[Link]