UNIVERSIDAD DE GUADALAJARA

FACULTAD DE CIENCIAS

]\1anual de técnicas histológicas para

tejido epitelial

TESIS PROFESIONAL
PARA OBTENER EL TITULO DE

Lic. en Biología
P R E S E N T A
Estber Rodríguez González
G U A D A l A J A R A, J A l ., 19 88
 DE DI CAT OR I AS

A mis Padres, Francisco

y Natalia Jo más grande
y preciado en mi vida,
les debo haber finaliza
do el ca mi no con su '
gran sacrificio aliento
y amor.

A mis hermanos Francisco,

Justo y Elfas, los cuales
contribuyeron a~entándome

a llegar a la meta.
'

·A mi hermana María de
los Angeles la cual
con su ayuda y cariño
incondicional he lo-
grado continuar el ca
mino.

A mi pequeño hijo Fran-

cisco Isafas al cual sa
crifiqu~ ~us sueños pa-
ra llegar al final.
Y a tf m&s que a na-
die Gracias Señor 1

por darme Fe y Espe-

ranza para seguir
adelante.

A mi Universidad a la cual
estaré eternamente agrade-
cida, ya que en sus aulas,
logré realizar uno de mis
más preciados sueños, el 1

ser profesionista.

A mis ~aestros a .los

que agradezcó el 1 o-
gro de mi . objetivo
ya que con su gran
labor y dedicación '
llegué a la cima.

Con respeto y agradecimiento

a mi Director y Asesor de
Tesis:
M.V.Z. Miguel Carbajal Seria
A quien debo 1a realización
de mi tesis.
--~--------------------

1 NOI CE
Pág.

LNTRODUCCION. 1

OBJETIVOS. 3

CAPITULO
GENERALIDADES 4
Ll La Célula

1.2 Tejidos.

CAPITULO II
APARATOS DE OBSERVACION 11
2.1 Microscopio de pol~rización

2.2 Microscopio de Fluorescencia

2.3·Microscopio _de contraste de fases
2.4 Microscopio de interferencia.

CAPITULO III

APARATOS DE CORTE (~ICROTOMOS} 17

3.1 Microtomos para corte por parafina
3.2 Microtomos para corte por congelación.

CAr>ITULO IV
MATERIAL D.E LABORATORIO 20
Cristalerfa.
 pág.
CAPITULO V
REACTIVOS 27
5.1 Reactivos fijado-res
5.2 Reactivos aclaradores
5.3 Reactivos opa cantes
5.4 Reactivos aisladores
5.5 Reactivos ablandantes
5.6 Reactivos inofensivos
5. 7 Reactivos colorantes
5.8 Reactivos conservadores.

CAPITULO V1
METODOS HISTOLOGICOS 33
FIJACION
6.1 Cualidades de los. fijadores
6.2 Características de los fijador~s

6.3 Acci-ón dei fijador sobre los tejidos

6.4 Desventajas de los métodos de fijación
6.5 Agentes fijadores
6.6 Mezclas fijadoras
6.7 Selección del fijador
6.8 Modo de empieo del fijador.
 p!g.
CAPITULO VII
CORTES 50

7.1 Cortes en tejido blando

7.2 Procedimiento de congelación
7.3 Cortes por congelación.

CAPITULO VII 1
INCLUSION 54
8.1 Inclusión en parafina.

CAPITULO IX
METODOS GENERALES DE TINCION 61

9.1 Coloraciones
9.2 Naturaleza de las coloraciones
9.3 Clasiffcaci6n de· los colorantes
9.4 M€todos de coloración
·g.s Coloraciones generales y específicas
9.6 Coloraciones directas e ind1rectas
9.7 Coloraciones progres1vas y regresivas
9.8 Coloraci~nes simples y combinadas
9.9 Coloraciones panópticas
9.io Coloraciones en bloque
9.11 Impregnaciones met&licas.

CAPITULO X
ANTECEDENTES HISTORICOS 77
TEJIDO EPITELIAL.
 pág.
CAPITULO XI
TECNICAS PARA TEJIDO iPITELIAL 102
11.1 METODOS COMBINADOS DOBLES.
METODO DE HEMATOXILINA-EOSINA (Hematoxilina
de Harris - Eosina alcoh6lica).

METODQ DE HEMATOXILINA DE HARRIS.

11.2 METODOS TRIPLES

Método tric6mico de Gallego
METODO DE DOBLE IMPREGNACION EN CALIENTE de
Río-Hortega para armazones fibrilantes y

células).

METODO DE IMPREGNACION PARA EPITELIO FIBRILLAS

de Río-Hortega.
METODO DE FUCSINA ACIDA-AZUL DE ANILINA para
gránulos bas6filos y acidófilos de la hipófisis.

11.3 METODOS ARGENTICOS

METODO DE IMPREGNACION SENCILLA EN FRIO DE.
RIO-HORTEGA.
METODO DE IMPREGNACION CON CARBONATO SIMPLE EN
CALIENTE.
M'ETODO DE FLOXINA - HH1ATOXILINA DE CROMO para
gránulos bas6filos y acid6filos ~e pancreas,
•.

de _Gomori.
METODO DE IMPREGNACION PARA FIBRAS NERVIOSAS Y
SISTEMA CROMAFIN VARIANTE BARROSO - MOGÚEL
 Pág.

(SUPRARRENALES)

METODO DE seHMORL (SUPRARRENALES: PARA CELULAS

eRpMAFINES)

METODO DE WI~SEL (SUPRARRENALE~: PARA·CELULAS

eROMA-F lt;iES)

MEIODO DE GOMORI (SUPRARRENALES: PARA GRANULOS

CROMAFINES).

e O Ne L US l O NE S 126

R E S U M E N 128

BIBLIOGRAFIA. l 129
---------------------------------------------------
1

I NT R ODUe e l ON

El contenido de este manual se desarrolló con la inte~

ci6n de proporcionarle una serie de t~cnicas histo16gicas 1

para tejido epitelial, que sirvieran como base, además de '

una fuente de informaci6n importante, ya que muchas veces 1

aún tratándose de tem~s generales, nos vemos eo la necesi--

dad de consultar literatura en otros idiomas.

Por esta razón se cree conveniente indicar de la mane-

ra m~s simple un conjunto de técnicas histológicas para co-
nocer m~s a fondo las estructuras anatómicas de los organi~

rnos. Por lo que en este trabajo sólo se mencionan los más '
conocidos y utilizidos para el tejido epitelial.

El prop6sito de éste trabajo no es de ninguna manera '

el de abarcar una información completa ac·erca de dichas té_f.
nicas histológicas, pero sí trabajar pára superar los éur-
sos de las generaciones futuras y enriquecerlas con inform~

ci6n cada vez más Otil.

Es evidente que los ádelantos en esta época se caract!

rizan por el repetido afán de mejorar más las aplicaciones
de las té¿nicas, mediante nuevas combi~aciones d~ acuerdo a
las necesidades de preservaciones de un tejido para un futu
ro estudio.
 2

Actualmente la t~cnica histo16gica cuenta con retribu-

ciones valiosfsimas. de las que aquf es imposible hacer una
reseña histórica.
 3

OB J E T 1 VOS

Tener la información necesaria y actualizada sobre '

las t~cnicas hi~to16gicas del tejido epitelial.

Contar con el apoyo técnico necesario para la clase

de hístologfa.

-Apoyar cualquier investigaci6n·que se realiza en es-

ta área.
 4

CAPITULO I

GENERALIDADES.

1.1.- LA CELULA.

La ·célula es la unidad biol6gica fundamental de los s~

res vivos. Las actividades de los organismos, cualesquiera

1
que ellos sean, son los resultados de los de todas y cada
una de las células que los constituyen. Es un elemento con
una cierta individualidad propia. Las células de distintas
plantas y animales presentan un tamaño variable. La célula
tiene"forma ~uy variable, cuando jóvenes son generalmente 1

de forma ovoide o esferoidal. Cualquiera que sea su forma y

tamaño la célula está constituida por tres partes ·esencia--
les: Membrana; protoplasma;
.
nQ¿leo. y un cierto nOmer~ de O!
ganelos sub-celulares; las formas m§s comunes son: Mitocon~

drias, retfculo endopldsmico liso, aparato de golgi, 11sosQ

mas, centreolos, éilios, flageles .•

Desde el punto de vista morfológico y anatómico la cé-

lula es el elemento fundamental de los seres vivos unicelu-
lares o pluricelulares, desde el punto de vista funcional '
las células pueden agruparse en dos categorfas fundamenta--
les. Las vegetativas y las de relaci6n. Al primer grupo co-
rresponden la nutrición, 1~ respiración, la secreción, la 1
 5

circu1aci6n y la reproducci6n; y el segundo grupo la irrit~

bilidad y el movimiento.

1.2.- TEJIDOS.

TEJIDO EPITELIAL.

E~ un tejido integrado por c~lulas contiguas con esca-

sa sustancia intercelular que suele cubrir superficies in--
. ternas y externas del organismo y además puede derivar de 1

cualquiera de las tres hojas embrionarias, y que cumple con

funciones de revestimiento o glandular (principalmente) o 1

revestimiento especializado, realizando trabajos sensoria--

les (como receptor de estímulos).

CLASIFICACION.FUNCIONAL DE LOS t~LTELIOS.

El tejido epitelial se clasifica de acuerdo a sus fun-

ciones más notorias:

a) Epitelios de revestimiento.

b) Epitelios glandulares.

Los epitelios de revestimiento son los encargados de -

cubrir las superficies internas y externas del organismo.
De acuerdo con 1a cantidad de capas de c~lulas que los inte
 . 6

gran se sub-clasifican en:

a) Epitelios simples; éstos a su vez se clasifican se-

gún la forma de las células en tres tipos diferentes:

- epitelios.planos
- epitelios cilfndricos
- epitelios cú~icos.

b) tpitelios estratificados: En la ~onstituci6n de és-

tos, intervienen varias capas o est~atos, se clasifican en:

pavimentoso estratificado
- cillndrico estratificado
- polimorfo o de transición.

e) Epitelio glandular: Sefialamos que hay dos clases

principales de te~ido epitelial, la glandular es la seg~rida

y se pueden ~lasificar de muchas maneras, hay·dos grupos

principales:

Glándulas exocrinas
- Glándulas endocrinas.

las gl4ndulas exocrinas se clasifican de varias mane--

ras:

- glándulas simples y compuestas

glándulas tubulares, acinosas y alveolares
 7

- g16ndulas mucosas serosas y mixtas

- gllndulas merocrinas, holocrinas y apocrinas.

la estructura de las gllndulas endocrinas es bastante

mis sencilla que las de 1as exocrinas, porque no poseen co~

duetos.

TEJIDO CONJUNTIVO ..

El origen del tejido conjuntivo se deriva de la terce-

ra capa germinativa.

El tejido conectivo difiere de los epitelios porque p~

see abundante substancia interDelular o-matriz. La.ma{riz 1

consiste en fibras y .sustancia fundamentalmente, en cual- 1

-~·
quier clase de tejido conectivo, deben to~arse ~~·cuenta

tres elementos: C~lulas, fibras y sustancia fun~amental;

las dos últimas forman la substancia 6 intercelular 6 matriz

intercelular. Los tejidos esquel~ticos difieren de los co-
nectivos propiamente dichos por la rigidez de la matriz.

Clasificaci6n del tejido conjunt-ivo:

La clasificaci6n principal del_tejido conjuntivo depe~

de de la· concentraci6n de fibras. El tejido conjuntivo que

muestra abundantes fibras dispuestas en forma compacta se 1
 8

llama tejido conectivo denso. El tejido conectivo laxo pre-

senta pocas fib~as y comparativamente m§s c~lulas •.

TEJIDO MUSCULAR.

En el tejido muscular se distinguen tres tipos de tej!

do muscular:

·- Estriado
- Liso o voluntario
Cardiaco.

El tejido muscular tiene la propiedad de contractili--

dad en sentido lineal de las fibras musculares. La contrac-
ci6n es responsable de la locomoci6n y movimiento de 6rga--
nos internos, también tiene gran importancia .en la produc--
ción de calor del cuerpo.

El tejido muscular liso se compone de células largas,-

delgadas, fusiformes que poseen un sol~. nOcleo alargado lo-
calizado en la porción central.

Tejido muscular estriado: Compone todos los músculos •

voluntarios, se encuentra formado por fibras largas.

Tejido muscular cardiaco: Presenta caracterfsticas de1

 9

mGsculo liso como dei mGsculo es~uelftico. ya que sus con-

tracciones son rftmicas o involuntarias.

Su desarrollo embrionariÓ se intercala entre el ecta--

dermo y el endodermo.

TEJIDO NERVIOSO.

la unidad estructural del tejido nervioso es la neuro-

na, la cual tiene la propiedad de irritabilidad o capacidad
para responder a estfmulos ffsicos y qufmic~s por initia- -
ci6n del impulso y conductividad~ transmisi6n de la onda de
exitaci6n. Ademc1s de las neur·onas el sistema nervioso incl u
ye células· de sostén .y-satélites, .vasos sangufneos y. en el
sistema nervioso·central. un revestimiento protector llama-
·do meninges.

Cada neurona est~ compuesta por un cuerpo celu1ar y

sus prolongaciones. El cuerpo de la neurona suele ser volu-
minoso, de tamaño variable. Las neuronas se clasifican en '
tres clases generales: Unipolares; multipolares y bipolares.

la mayor parte de las neuronas tienen varias dendritás

que se ramifican repetidamente, lo cual aumenta la superfi-
cie para recepci6n del impulso.
 lO

Las fibris nerviosas est!n formadas por citoplasma y •

cubiertas por membrana plasm!tica, varfan en tamaño. las fi
bras nerviosas del sistema nervioso periférico estln rodea-
-das de una vaina celular, el neurilema.
 11

CAPITULO II

TECNICA GENERAL PARA EL ESTUDIO DE LOS TEJIDOS.

·Los siguientes recursos prácticos forman la t~cnica

histo16gica para estudiar los ele~entos co~stitutivos de

los tejidos:

Aparatos, Material de Laboratorio que incluye cristal~

ría, accesorios y reactivos y los Métodos ó Técnicas Histo-

lógicas.

Entre los mOltiples aparatos que se utilizan actualmen

te para el estudio de la histología, aquéllos que se hacen
indispensables para la enseñanza y .la investig~ci6n so~ los
aparatos de observación y de Corte.

APARATOS DE OBSERVACION.

(Microscopios). Aunque inciertos, los orígenes del mi-

~roscopio se remontan a los egipcios; sin embargo no se 1~­

gr6 la construcción de ésto hasta el siglo XVII y el mérito

corresponde a Antonio Leeuwenhoek. Pero fue en el siglo XIX
cuando el Físico Ernest Abbe, en colaboración con un reloj~

ro de nombre Car1 Zeiss, construyeron los primeros microsco

pi os.
 12

Con Abbe se desarrollaron adem&s las teorfas para la 1

construcciOn de otros sistemas ópticos tales como contraste

de fases, interferencia, etc. las contribuciones posterio--
res se refieren al perfeccionamiento y especialización del
microscopio basándose en los principios de Abbe y-Zeiss.

El microscopio puede _ser simple, cuando consta de una

sola lente· biconvexa o plano convexa, dispuesta de tal sue.r_
te que suministra una imagen virtual derecha y más grande '
que ·el objeto, o puede ser compuesto cuando está constituf-
do por un sistema de lentes separadas que combinan las dos
condiciones en -que las lentes dan imágenes amplificadas; es
decir, una imagen real invertida y a·mplificada más una ima-
gen virtual derec-ha y más gr-ande, en relaci6n a la primera.

Todo microscopio ~ómpuesto comprende una parte meclni-

~a y una parte óptica. Ambas se complementan y deben sir lo
más perfectos posibles para obtener el mejor rendimiento.

La parte mecánica comprende el pie o estativo, el bra-

zo o columna, la plati~a y el tubo principal.

La parte óptica consta de espejo o prisma, que refleja

1~ luz de la lámpara; c~ndensador, objetivos y oculares. E~

ta descripciOn corresponde al micros~opio de observación; 1

este microscopio es especialmente Otil en la enseñanza, e

 13 .

ideal para la observación de preparaciones fijados y teni--

dos.

Para la determinación de los componentes tisulares, no

solo el microscopio de observación es útil, sino que tam--
bi~n tienen importante aplicaci6n otros microscopios de los
cuales se har~ una breve mención a continuación.

2.1. MICROSCOPIO DE POLARIZACION.

Para fines pr~cticos, un microscopio de campo claro

puede servir como microscopio de polarización, si se equipa
adecuadamente con dos filtros de material polaroide: Uno
~ue encaje en el anillo del condensador y que quede cercano
a la fuente Vuminosa, y otro que se ajuste al ocular del mi
croscopio y que quede cercano al objetivo~ Al interponer es
tos filtros en pl~nos de polarización perpendiculares entre
sí, se obtiene un campo de luz polarizada que varía en pre--
sencia de algunos materiales, que destacan por su brillan--
tez y coloraci~n particular¡ los materiales que producen es
te efecto se dice que son ópticamente activos.

El material biológico en observación puede ser vivo o

fijado y teñido, con el único requisito que sea ópticamente
activo.
2.2. MICROSCOPIO DE FlUORESCENCIA.

Es un microscopio común, puede aplicarse la fluorescen

.
cia mediante la ínclusi6n adecuada de una fuente de ilumin~

ci6n ·ultravioleta, un condensador con lentes de cuarzo y en

tre el objetivo y 'el ocular, los filtros necesarios para
eliminar la luz ultravioleta ~~e pueda pasar al sistema. la
fluorescencia que poseen los cuerpos puede ser natural o in
ducida por ~edio de fluorocromos.

Tanto animales como vegetale~. poseen substancias con

fluorescencia natural o bien para un estudio especffico, és
ta puede ser inducida.

2.3. MICROSCOPIO DE CONTRASTE DE FASES.

Es el sistema óptico de mayor utilidad en el·estudio '

del material vivo; para la histología representa la observ!
cí6n de la estructura real de las células eliminando las al
teraciones que en cierta ~edida conllevan el material fija-
do y te~ido. Además unifica la forma y la función celular,
que es tan jmportante en la interpretación histológica. De-
safortunadamente, en general, sólo brinda dotes aislados y
hasta ahora no ha permitido el estudio integral de los teji
dos.
 15

Este microscopio se basa en la introducci6n de una di-

ferencia de fase de 1/4 de longitud de onda, entre la luz '
directa y la difractada que pasan a trav~s del objetivo. El
to convierte las diferencias de refractividad en diferen- -
cías de intensidad de la luz apreciable por el ojo. En la '
pr~ctica esto se logra mediante dos dispositivos anulares '
que se colocan, uno en el condensador y otro en el ·objetivo
y que producen el desfasamiento de i de longitud de onda. '
Se debe utilizar luz monocromática, de preferencia verde.

2.4. MiCROSCOPIO DE INTERFERENCIA.

Este sistema trabaja produciendo una interferencia en-

tre dos campos, uno de la fuente de luz y otro de la fuente
de luz mJs el objeto, haciéndose posible variar la diferen-
cia de fases entre los dos camp~s y aumentar así· considera-
blemente el contraste.

Puede obtenerse interferencia policromática si se adi-

ciona una lámina de refracción policromática. Mediante la '
secuencia de colores, que indica diferentes fndices de re--
fracci6n pueden hacerse determinaciones cuantitativas, por
ejemplo de lfpido,, ~rotefnas, !cidos nucléicos, etc.

Estos métodos físicos aplicados ~ 1~ microscopía, son

armas utilísimas para el desarrollo científico y adaptados
 16

a la Biologfa brindan un amplio panorama para el ~studio de

sus diversas ramas.
 17

CAPITULO III

APARATOS DE CORTE (MICROTOHOS)

Para hacer el examen microscópico de los tejidos, es '

necesario que ~st~s ofrezcan transparencia, 1~ cual solo
puede .lo~rarse de tres maneras: Mediante peliculas muy del-
gadas de teJtdo como las que se obtienen en algunos culti--
v~s de tejidos disociando el tejido en sus elementos campo-
nentes; o reduciendo a cortes sumamente delgados. Muy ·nume-
rosos son en la actualidad los modelos de microtomos usados
~n los Labbratorios, pero considerando el mecanismo median-
te el cual impulsan el objeto seccionable, casi todos caen
en la categoria de microtomos de deslizamiento. Estos micro
tomos tienen variaciones en precisión, automatismo, tamafio,
etc. y pueden ser muy especfficos·de acuerdo al material de
inclusión.

3.1 MICROTOMOS PARA CORTES POR PARAFINA.

Estos microtomos constan en general de una sólida base

y soportes verticales; uno de éstos corre sobre ur. carril y
lleva la_ pieza conductora de la navaja, que puede fijarse '
mediante tornillos en las más variadas posiciones; otros s~

portes sostienen las piezas que contiene la portaplatina y

que tiene un mecanismo de ascenso y descenso, esta pieza es
tá unida a una manivela que permite regular estos movimien-
 18

tos, 1á pinza portaplatina puede deslizarse horizontalmente

y paralela a la navaja mediante un tornillo micrométrico. '
Como la platina asciende autom!ticamente al resbalar, para-
lela a la navaja, pueden hacerse cortes sucesivos del obje-
to seccionable regulando el grosor con el tornillo micromé-
trico que se fija en el número de micras deseado.

3.2 MICROTOMO PARA CORTES POR CONGELACION.

En los altimos afios, se ha ampliado mucho el uso de

los microtomos para hacer cortes por congelación porque pe~

miten obtener cortes finos en poco tiempo y porque se ha h!

cho común el, empleo del ácido carbónico liquido para la pr~

ducción inmediata de bajas temperaturas.

Los modelos por dem~s muy variados, son sencillos y

económicos, adem6s, aunque el microtomo no sea especial pa-
ra congelación, pueden hacérsele adaptacione~ para que fun-
cione como tal, sobre todo a microtomos que sirven para cor
tar mediante incl'usión en parafina y celoidina.

E~ términos generales, el aparato consta de una base '

que puede sujetarse f!cilmente al borde de una mesa; sobre
esta base se encuentran las otras piezas que son: Una plati
na don~e se coloca el bloque que se va a seccionar; relaci~

nada y por debajo de esta platina, encontramos una c~mara r

 ' 19

pulucrizadora unida al tanque que contiene el gas, el cual

es independiente del microtomo y mediante tubos y juego de
llav~s hace pasar el !cido carbónico instantaneamente hasta
el pulverizador; la otra pieza indispensable es la navaja,
que mediante ún soporte que le brinda giro en arco de cfrc~

lo ataca perpendicularmente a la pieza seccionable.

En general, si se· desea tener éxito en la microtomia,

es indispensable obtener un perfecto endurecimiento o incl~

si6n de la pieza que se va a seccionar y mantener constante

mente la navaj~ bien afilada ..
 20

CAPITULO IV

MATERIAL DE LABORATORIO

CRI S TAl E R I A.

El material de cristalerfa mas comDn y su empleo en la

técnica histológica puede ser· resumido en· la siguiente lis-
ta.

- Vasos de Pre~ipitados Graduados y no Graduados:

Se usan para colocar sustancias que no sean muy vol~t!.

l~s. concentrados ·y corrosivas, por ejemplo agua, alcoholes

diluidos, etc. Loi hay de muchas capacidades, los más em- -
pleados varían entre 40 ce y 500 ce.

Pueden usarse también como recipientes para residuos '

para calentar ligeramente alguna sustancia, etc.

Existen pequeños vasos de 10 ce especiales para reacti

vos argénticos, mejor conocidos como pocillos de Rfo-Horte-
ga.

- Matraces Graduados y No ·Graduados;

Se usan sobre todo para la preparaci6n de reactivos, '

 21

como colorantes, alcoholes, etc. y en general para hacer d!

luciones o mezclas; es frecuente que una vez preparado el 1

reactivo se desocupen los matraces y las sustancias se pa--

~en a frascos tapados donde se conservan.

Se usan también para calentar sustancias, incluso has-

ta ebullición, tapando o nó la boca del matraz, segGn el
desp~endimiento de vapores.

- Probetas y Pipetas Graduadas:

Se emplean -en la elaboración de reactivos y soluciones

para medir con precisión los volúmenes de líquidos que se 1

requieren.

-Cajas de Petri, Cajas y Vasos de Koplin:

Se emplean sobre todo en la elaboración de las técni--

cas de tinción, en éllas se depositan las diferentes susta~

ciasen el orden_establecido por la técnica y allí se colo-

can los cortes libres, en cuyo caso se usan cajas de Petri
o adheridos al portaobjetos, utilizándose entonces las ca-
jas o vasos de Koplin.

las cajas de Petri se utilizan en especial para tefiir

cortes"por congeiaci6n ó inclusi6n, pero uno por uno; las •
 22

cajas y vasos de Koplin para teñir cortes en serie inclu- -

sión o frotis.

Las cajas que contengan alcoholes y xilol deben estar

tapadas para que los cortes no se hidrat~~ deben taparse, '
asimismo las cajas que conténgan sustancias corrosivas y da
ñinas o que sufran· precipitaciones.

Las cajas de Petri son Otiles también para graduar y '

manejar cortes por congelaci6n hasta el momento de ser teñi
dos, manteniéndolos en agua destilada con unai gotas de for
mol.

Las cajas de Petri profundas y poco profundas; las pri

meras suelen usarse para .el xilol o la creosota, para faci-
litar el montaje de los cortes en el portaobjetos y en gen!
ral para baños ab~ndantes o po·r largo tiempo; las segundas
se utilizan en general para baños escasos o de poco tiempo.

-Frascos Goteros:

E~tos frascos son Otiles para guardar reactivos no co-

rrosivos que se emplean en pequeñas cantidades y se adicio-
nan por goteo.
------~-----------------------------------------------------------------------

23

-Frascos con Tap6n Esmerilado para.~eactivos:

Se utilizan sobre todo para guardar reactivos, en esp~

cial los muy corrosivos, pues frecuentemente los vapores

destruyen los tapones que no son de vidrio, estos frascos '
·pueden ser transparentes o de color !mbar; los primeros pa-
ra .reactivos que no sufren cambios por la acci6n de la luz,
y los segundos cuando se de el caso contrario.

- Cristalizadores:

Son ideales para efectuar baños sobre otros recipien--

tes que contengan sustancias a las que se desea elevar o ba
jar la temperatura, o simplemente, conservar a ciertas con-
diciones de ~emperatura o también suelen emplearse para se-
leccionar y enjuagar ~1 material obteniáo de las diseccio--
nes.

-Vidrios de Reloj:·

Se emplean para hacer pequeñas mezclas, enjuagues o

tinciones de pocos cortes o para cubrir recipientes, sobre
todo vasos de precipitación y pocillos de Rfo-Hortega. Los
hay de varios tamaños para adaptarse a la boca del recipie~

te.
 24

- Frascos de Boca Ancha con TapOn de Rosca:

Se emplean con frecuencia, sobre todo en la ensefianza,

para realizar la lijac16n de los 6rganos y para la p~epara­

ci6n de las piezas de platina que van a ser incluidas en p~

rafina; en estos frascos, los estudiantes hacen sus deshi--

drataciones, aclaraciones, .transparentaciones, etc. En Jos
laboratorios de investigación o de técnicas de rutina son '
menos empleados, puesto que los pasos previos a la inclu-
sión suelen hacerse en un procesador autom§tico de tejidos.

- Cubreobjetos y Porta~bjetos:

Los cubreobjetos y los portaobjetos son láminas delga-

das de cristal, libres de burbujas y asperezas, que sirven
para montar y cubrir los preparados destinadns a la observ!
ci6n microscópica. El tamafio y d~lgadez de estas 1•minillas
varfa para ada~tarse a las dimensiones de los preparados; '
en general los portaobjetos miden 75 mm. de largo por 25 mm
de ancho, con espesor poco variable, y los cubreobjetos más
usados de 22 por 22 mm. con un espesor de entre 7 y 30 cen-
técimas de mm. En el mercado el espesor_ se denomina con los
números 1, 2 o 3, correspondiendo el número 1 a los más del
gados, que son los que se recomiendan para trabajos de in--
vestigación y para la aplicacidn de fuertes aumentos.

Sobre el portaobjetos se montan los preparados, fres--

 25

cos o fijados y teñidos, cubri~ndose o n6 con un reactivo •

conservador. Sobre ellos se realizan tambi~n los m~todos de
tinci6n en los cortes, que mediante un adherente fueron mo~

tados previamente en ellos. ·igualmente si se trata de fro--

tis o extendidos.

Los cubreobjetos son delgadfsimos cristales que están

destinados a cubrir las preparaciones, ya montadas en el
portaobjetos, y embebidas o nó en el conservador; su fun- -
ción principal radica en hacerlas planas y manejables bajo
el microscopio y _protegerlas de cuerpos e.xtraños.

- Embudos:

Son elementos indispensables en la preparación de mu-

chos reactivos, entre ellos los colora-ntes. El empleo de· '
los embudos est~ fntimame~te ligado al uso.de papel filtro
o algodón de vidrio, ya que es mediante el ~nsamble de és--
tos dos objetos que se hace el filtrado de las sustancias,-
de las cuales se ~esea eliminar precipitados residuos, imp~

rezas, etc.

-Otro Material:

Aunque no se trata precisamente de material de crista-

lerfa, mencionaremos algunos accesorios indispensables para
 26

la elaboraci6n de las técnicas histo16gicas. Estos son: Ga~

chos de vidrio, agitadores, pinceles •. agujas de disecci6n,-

pinzas, etc., necesarios para manejar los cortes, y etique-
tas, charolas y cajas, para manejar las preparaciones.
 27

CAPITULO V

R E ACT l VOS

Se denominan reactivos a las sustancias que producen '

en los tejidos modificaciones ffsicas o qufmicas, en virtud
deJas ~uales puede adquirirse información acerca de 1a es-
tructura y relación de sus elementos anatómicos.

Existen tejidos como el conectivo, endotelial, nervio-

so, etc., iuyos elementos carecen de color o bien tienen es
caso contra~te én sus índices de refracción, lo que dificul
ta, bajo el microscopio, la determinación de ciertas estruc
turas por la homogeneidad que ofrecen al observador.

Este hecho, entre otros, ha propiciado que los reacti-

vos sean amplia~ente usados, debido a su poder revelador. '
Además, la mayor parte de los tejidos son gruesos y opacos,
y es necesario reducirlos a finos cortes; para ello se ha-
cen indispensables operaciones previas de fijación y poste-
riores de coloración y conservación.

Son múltiples los reactivos empleados y una manera - -

pr~ctica de clasificarlos es de acuerdo a las modificacio--
n~s que provocan en los tejidos. Asf tenemos reactivos fi~~

dores, aclaradores, opacantes, aisladores, ablandadores,

inofensivos, colorantes y conservadores.
 28

5.1 REACTIVOS FIJADORES:

Estos reactiv9s detienen o minimizan las alteraciones

post-morten por precipitación o coagulación de las proteí--
nas celulares; al mismo tiempo endurecen los tejidos, prep~

rándolos para su posterior manipulación. Los fijadores más

usados son el alcohol, ácido crómico, acético, pfcrico, ós-
mico, cloruro de platino, bicloruro de mercurio y formol·, '
este Qltimo diluido al 10% es el más empleado.

Pueden usarse solos o. mezclados en distintas proporci.Q_

nes, utilizando asl las ventajas de varios de ellos.

5.2 REACTIVOS ACLARADORES:

.Los reactivos aclaradores actúan borrando o m9derando

los índices de refracción de los elementos tisulares. Mien-
tras menos contraste más claros aparecerán los preparados y
más fácil será la apreciación de los elementos coloreados.

Entre los más usados tenemos esencias o aceite de cla-

vo, de cedro, o de orégano, xilol y creosota.

5.3 REACTIVOS OFACANTES;

Los reactivos opatantes actQan de modo contrario a los

 29

reactivos aclarantes, oscureciendo el contorno celular y r~

bando transparencia a la preparaci6n. Este efecto es útil 1

cuando se observan células sueltas, filamentos libres y su-

perficies que exhiben expansiones delicadas.

Entre estos agentes tenemos el aire, alcohol, éter,

agua corriente.

5.4 REACTIVOS AISLADORES:

Estos reactivos actúan liberando los elementos celula-

res de lo·s tejidos o, armenos, facilitando su disociaci6n
mecánica.

Los más usados son el ácido nftrito al 25%, potasa a,

40%, alcqhol al 30%, S~ido sulfDrico diluido, ácido pfcrico
a saturaci6n, etc.

5.5 REACTIVOS ABLANDANTES:

Estos ~eactivos se usan para reblandecer los tejidos 1

excesivamente duros, como hueso·y dientes, en virtud de que

di~uelven las sales de calcio.

Entre estos reactivos los más usados son los ácidos n!

trico, tricloraceticocr6rnico, clorhfdrico y pfcrico, todos
 30

en s~luciones más o menos dfluidas, con excepci6n del pfcr!

co, que se emplea a saturaci6n.

5.6 REACTIVOS INOFENSIVOS:

Los reactivos inofensivos, también llamados soluciones

o sueros fisiológicos, son aquellos líquidos que alteran p~

co o nada la forma y vitalidad de los elementos celulares,

y con este fin se utilizan durante el examen en vivo de hu-

mores y tejidos.

Entre estos líquidos los más usados son soluciones sa-

linas, como líquido de Ringer, de locke, de Bizozero, etc.,
o simplemente cloruro de sodio 0.9 g. disuelto en 100 ce. 1

de agua destilada. Son también ventajosas .las soluciones~~

turales, como ~1 humor acuoso, y sobre todo el plasma san--
guineo no coagulado.

5.7 REACTIVOS COLORANTES:

Los reactivos colorantes son sustancias que permiten 1

distinguir detalles estructuralmente invisibles, o poco ap~

rentes al microscopio, por su capacidad de fijarse en cier-

tas partes de los tejidos con matices de variada intensidad.
Estas sustancias son de dos tipos generales:

a) Colorantes naturales, extraídos de productos anima-

 31

les o vegetales, como el carmfn, ·la hematoxilina, '

la orceina y la safranina.

b) ~olorantes artificiales, conocidos como colorantes

de. anilina, colorantes de carbón o colorantes sint!
ticos.

Aqui podemos anotar también los reactivos impregnado--

res, que tienen la propiedad de teñir selectivamente, pero
a condición de sufrir en presencia del tejido una descompo-
sición. Las sustancias que actúan así con el ácido ósmico,
el nitrato de plata amoniacal, el cloruro de oro y el bicrQ
mato de potas_io puesto en presencia de sales de plata o de
mercurio.

5.8 REACTI~OS CONSERVADORES:

·Los reactivos conservadores son aquellos que protegen

a los tejidos de la putrefacción, conservan el color y eví-
tan cambios que ~udieran· ~ufrir las preparacio~es histológf
cas.

Estos reactivos algunas veces eliminan el agua del pr!

parado, evitando todo crecimiento vacteriano, otras veces •
sustituyen el agua por materias resinosas imputrecibles.

Entre estos conservadores tenemos a la glicerina, bál-

 32

samo de Canadá, resinas sintéticas, gelatina, licor de Apa·

thy y licor de Ferrant.
-------------------------------------------------------- ----

33

CAPITULO VI

METODOS HISTOLOGICOS

Se denomina m~todÓ o t~cnica histológica al conjunto '

de operaciones destinadas a demostrar la disposición estru~

tural de los tejidos. Cada método incluye una serie de ac~

tos técnicos para-determinar cad~ particul~ridad de una es-

tructura dada.

Como es sabido, estos métodos son muy numerosos, pero '

para los fines de este trabajo vamoi·a ·reducirlos a dos grM
pos generales:

a) Métodos para el examen- en vivo.- El examen de los

elementos vivos puede efectuarse, bien en líquidos
org~nicos, en tejidos disociables, y en membranas '
transparentes, manteniéndose ~n un reactivo inofen-
sivo, o bien, mediante el método ·de los cultivos ce
lulares.

b) Métodos para el examen de tejidos privados de vita-

lidad.~ La dificultad de ver directam~nte con el mi
croscopio la arquitectura natural de la mayorfa de
los tejidos, por su grosor y capacidad, y sobre to-
do por la rápida descomposición que experimentan, '
ha dado lugar a una serie de operaciones indispens!
 34

bles para evidenciar la estructura tisular y canse~

varla durante mucho tiempo en preparaciones fijas,

las que son muy útiles en todos los campos de la
~iologfa.

la serie de maniobras para el examen de tejidÓs priva-

dos de vitalidad incluye, en t~rminos generales, fijación,
corte, coloración y conservación.

En este trabajo solo se tratarán los métodos para el '

examen de los tejidos_privados de vitalidad, dado que el
examen de los tejidos vivos, sobre todo el método de los
cultivos celulares, se ha convertido en un campo muy espe--
cializada,· cuya exposición reclamarfa una mayor extensión.

F I J A C. I O N

Con el advenimiento del microscopio y su empleo en el

campo de la Biologfa se abrió un amplio panorama para e1 es
tudio de la investigación y trajo conjuntamente, una serie
de problemas d~ diffcil solución. Al principio los objetos
observadores eran extraordinariamente limitados, como gotas
de agua, hojas, animales pequeños, etc.; ésto dió lugar a •
la iniciación de cortes en los tejidos. Inicialmente estos
se efectucron con navajas y a mano, y los primeros estudios
corresponden a Robert Hooke en el corcho, material que se •
 35

sabe es producto de secreción celular, por naturaleza duro,

y no sufre el fen6meno de putrefacción.

Cuando s~ trataba de hacer estudios con cortes de tejf

dos, animales o vegetales, se aprecio que en poco tiempo s~

frfan fenómenos de destrucción. Esta dificultad abrió l~s '

puertas a lo que s¿ conoce actualmente con el nombre de fi-
jación tisular.

La fijación tiene como principales finalidades el evi-

tar_la putrefacción y la ~utolisis, ya que son la causa de
las.rápidas modificaciones que experimentan las células al
morir.

En la autolisis h~y que evitar la acción"de las enzi--

mas-celulares, ya que cuan~o ces~ la activid•d _viva de la.'
c~lula, en vez de ayudar al proceso de sfntesis protoplásm!
ca actOan de manera inversa. Hay que evitar también el cre-
cimiento de bacterias que destruyen los tejidos, dando lu--
gar al fenómeno de putrefacci6n.

Para evitar ésto es preciso someter a los tejidos a la

acci5n de sustancias que detengan o reduzcan al mfnimo, es-
tas elteraciones. Esto se consigue con reactivos que solidi
fiquen, por coagulaci6n o precipitación, las sustancias pr~

téicas celulares; al mismo tiempo, esta acción endurece los

 36

tejidos, dándoles una consistencia adecuada para su trata--

miento posterior.

Una fijación ideal sería aquélla-que conservara a la 1

célula en un estado idéntico al estado vivo, sin alteraci6n

de la integridad de sus caractere~ morfol6gicos, sin dar 1~

gar a que aparezcan, artificialmente, nuevos detalles es- -

tructurales. Esta fijación exacta no puede llevarse a cabo
con los procedimientos actuales; la acción pronta y enérgi-
ca de un reactivo fijador impide, hasta cierto punto, l.as 1

alteracione~ post-mort~n. pero también modifica más b menos

1~ estructura celular.

6.1 CUALIDADES DE LOS FIJADORES:

La primera cualidad de un buen fijador ~s la potencia

de penetración en los _tejidos, de ta1 manera que el líquido
pueda fijar tanto las capas superficiales como las zonas
profundas.

El fijador debe producir una coagulación total. de las

proteínas, pero no es necesaria que ésta sea instantánea.

La rapidez de acci6n de un fijador debe ser.con el ob-

jeto de matar lo m!s rápidamente posible a las células, la
coigulaci6n total, prir el contrario, debe producirse secun--
 37

dari~mente, a modo de no producir contracciones y encogi- -

mientos. Finalmente anotemos que un buen fijador no·debe

arrugar ni encoger los tejidos! no los debe ennegrecer, ni
dejar1os quebradizos o fr4giles,_y debe dejarlos aptos .para
ser teñidos selectivamente;

6.2 CARACTERiiTICAS DE LOS FIJADORES.

El fijador, da la dureza suficiente para permitir una

resistencia a todas las manipulaciones s~guientes de los te
jidos sin deformarse, el endurecimiento es una operaci6n
distinta a la fijación¡ la mayor ·parte de los f~jadores ac-
tuales endur~cen ~uficientemente a los tejidos, pero lo - -
opuesto no es verdad; no todo~ los lfquidos endurecedores '
son buenos fijadores.

La fijación debe producir, al mismo tiempo, la insol~­

bilidad de los elementos constitutivos de células y tejidos.

Es necesario evitar que las estructuras conservadas por el
fijador sean destruidas posteriormente por la ac~i6n de los
liquides de lavado o las soluciones colorantes; esta estabi
lidad varfa según los fijadores.

De las diversas reacciones entre el fijador y el teji-

do, resultan también verdaderas diferencias ópticas, con mo
dificaciones más o menos grandes en la'réfrigerencia de los
 38

distintos componentes celulares, resultando detalles invisi

bles en el estado vivo, determinado, según el reactivo, el
mayor o menor ~xito en la interpretación.

6.3 ACCION DEL FIJADOR SOBRE LOS TEJIDOS:

la manera de actuar de los fijadores, sobre los_compo-

nentes tisulares, es muy variable y frepende de cada fijador
en particular; algunos de ellos tienen acciones similares.

El efecto que los fijadores tienen sobre los tejidos '

vamos a analizarlo bas6ndonos en el formol ~1 10%, pues es
el fijador más ampliamente usado.

,
Lás reacciones del fijador con las proteínas ~isulares

son numerosas y complejas,_ya q~e p~eden combina~sé.con una

. variedad de grupos d{ferentes, formando en muchos casos
puentes de unión entre ellos, a esta acción de formar enla-
ces entre cadenas proteínicas adyacentes, debe el formol su
éxito como fíjador.

El formol afecta principalmente a los grupos amino,

imino, amida, reptido, guanidilo; hidroxilo, carboxilo, sul
fidrilo y anillos aromáticos.

Muchas de estas reacciones son reversibles, algunas su

 39

mamente lábiles y un cierto nOmero de reacciones irreversi-

bles.

Lo imp~rtante de estas ob~ervaci¿nes para la histolo--

gia, es que despu~s del tratamiento con'formol, seguido de
lavado, la mayorfa dé los grupos activos quedan en condicio
nes para· reaccionar con los reactivos empleados posterior:.-
mente.

6.4 DESVENTAJAS DE LOS METODOS DE FIJACION:

Los métodos de fijaci6n, desde el punto de vista histo

químico, tienen numerosas objeciones, siendo las principa--
les:

Pérdida de ~ustancias solubles, por ejemplo,- lfpidos

~n fijadores di sol ven-tes de grasas _y protefnas, polj_
sacáridos y materiales inorgánicos en fijadores acuo
sos.

- Desplazamiento de algunos constituyentes celulares '

por difusión, dando artefactos de arrastre, por ejem:
agregaci6n de pequeñas partfculas y artefactos de fj_
jaci6n, por ejem: ape1otamiento de ácidos nucl~i~os

en el núcleo.
 40

Desnaturalización de protefnas con alteración de sus

propiedades ffsicas.

- Alteración q·ufmica de los grupos reactivos de prote.f

nas, y

-Desnutrición de enzimas.

En la !flayoría de los casos es el formol el fijador al

que menos objeciones pueda oponérsele. Desde el punto de
vista histológico, la Qnica objetión importante es que da '
una deficiente imagen nuclear, especialmente en tejidos que
tienen una cantidad grande de células.

6.5 AGENTES FIJADORES:

Los reactivos fijadores más iomQnmente usados son los

ácidos ~inerales, sales metálicas, ácidos orgánicos .y reduc
tores orgánicos.

- Acidos Minerales:

Acido trómico.- Solo tiene acción fijadora en solucio-

nes muy diluidas, 0.1 a 1%, ya que en soluciones concentra-
das es un disociador muy poderoso. Fija bien los núcleos. •
Es rara vez usado.
 41

Acido Osmico.- Debe ser llamado tetr6xido de osmio (0 5

o4 ), ya que el acido 6smico (H 2 o5 04 ) no se usa en fija- -
ci6n. Se usa en soluci6n acuosa al 1%. Mata r!pidamente las
células y fija bien el citoplasma y el condrioma, pero no '
el núcleo. Impide una buena diferenciaci6n 6ptica. En esta-
do de vapor es un fijador excelente iolo para piezas muy
delgadas y pequeñas, como protozoarios y frotis.

- SaJes Metálicas:

Bicromato de Potasio.- Las sbluciones al 3 o 4% endure

cen perfectamente los centros nerviosos. Fija bien el ~ita­

plasma pero altera el núcleo.

Bicloruro de Mercurio.- Se usa disuelto a saturaci6~ •

en agua destilada o en una solución de cloruro de sodio. al
0.51 es un fijador de primer orden pero es necesario elimi~

narlo por completo de los tejidos, cuando la fijación termi

ne, para evitar la formación de cristales.

Cloruro de Platino.- Se utiliza al 1.300 en solución '

alcohólica o acuosa. Conserva bien el núcleo pero altera el
citoplasma.

- Acidos Orgánicos:

'Los ~cidos orgánicos tales como el pfcrico, acético, '

 42

triclorac~tico, entran en gran nOmero de mezcl~s fijadoras,

pero aisladamente se utilizan cada vez menos.

~ Reductores Org~nicos:

Alcohol Etflico.~ La concentraci6n mfnim~ para ~ija~ ~

ción es de 80%, en otras concentraciones la acción deshidr~

tan te impid·e 1a acción .fijadora. Es poco penetrante, en·dur~

ce mucho los tejidos, disuelve las grasas, fija mal el ng~~

cleo; por lo tanto es un pobre fijador que se usa sobre to~

do para la demostración de carbohidratos.

Alcohol Metflico.~ Se usa puro, es muy importante ~n 1

la técnica de frotis desecados.

Acetona.- Se usa p~ra, no se considira_uQ buen fijador

pues causa en los tejidos contracciones considerables. Su 1

principal ventaja consiste en que no disuelve el ácido úri-

co ni el glicógeno y conserva algunas grasas a condición de
que su acción no sea prolongada.

Formol.- Proviene del formaldehido que es un gas, c_uya

solución acuosa es la que recibe el nombre de formol; se
considera formol puro la solución comercial al 40%. Es uni-
versalmente usado porque fija b1en, endurece suficiente y '
conserva las grasas y lipoides; se usa en soluciones acuo--
 43

sas que varfan de 3 al 25%, al 10% es la solución m!s em- -

pleada pues da excelentes resultados. Con el tiempo .se poli
meriza empobreciéndose y haciéndose nocivo para la fijaci6n
por la formación de ácido fórm~co que siempre está presente
en cantidades más o menos considerables en el formol comer-
cial y a menudo conviene neutralizarlo.

6.6 MEZCLAS FIJADORAS:

Pode~os decir en general que ninguno de los agentes fi

jadores es capaz de reunir por sí solo todas las cualidades
que debe tener un buen fijador. En la actualidad es muy co-
mún utilizar mezclas fijadoras combinadas de tal manera que
completen la acción de un fijador con otro, balanceando las
'
acciones nocivas, de esta forma ~os diferentes elementos de
los tejidos y células pueden ser conservados lo mejor posi-
ble.

Las mezclas fijadoras llevan habitualmente el nombre 1

~e la persona que las descubri6 o las utiliz6 por primera 1

vez. A continuaci6n mencionaremos algunas de estas mezclas

separadas por grupos caracterizados por el elemento ~ás ac-
tivo.

-Mezclas Fijadoras a base de Cromo en forma de Acido Cr6mi-

co ó Bicromato:

/
 44

-Mezcla de Orth o Muller/formol. Buen fijador general,

útil para glic6geno y grasa.

-Mezcla de Zenker (1894). Buen fijador general.

-Meicla de Helly (1904) o Zenker/formol. Excelente pa-

ra tejid~ hematopoyético y discos i~tercalares.

-Mezcla de Reg•nd (bicromato-formol-acitico). Bueno P!

ra mitocondrias y gránulos citoplasmáticos.

Mezclas Fijadoras a base de Aci~o Osmico:

·-Mezcla de Flemming (cromo-aceto-6smico). Bueno para '

figuras mit6ticas.

-Mezcla de Chumpy (1909). Bueno para detalles cito1ó91

cos.

-Mezcla de Altman. Buen fijador general.

Mezclas Fijadoras a base de Sublimados Corrosivos:

-Sublimado alcohólico de Shaudim (1889). Bueno para --

protozoarios.

-Mezcla de Gilson (1897). Bueno para invertebrados.

 45

Mezclas Fijadoras a base de Acido Pfcrico:

-Picroformol de Bovin ·(1897). Recomendado para uso co-

man y cotidiano, excelente para conservar glu~6geno.

-Mezcla de Duboscq-Brasil. Buen fijador general.

Merclas Fijadoras a base de Formol:

-Formol bromuro de Cajal. Excelente para tejido conec-

. tivo y neuroglia.

Mezclas fijadoras a base de Alcohol:

-Fijador de Carnoy. Bu~no para ~cidos nucléic 0 s, glic~

· geno y gránulos d~ Nissl.

-Alcohol-Formol. Bueno para Tej~do Nervioso.

6.7 SELECCION DEL FIJADOR;

Es importante mencionar que cuando una persona se ini-

cia en el manejo de las técnicas, desorientada ante tantas
fórmulas, es conveniente que se decida por el empleo de un
fijador general aconsejado en todo tratado de técnicas his-
tológicas, por ~jemplo: Formol al 10% simple o salino, Bo--
vin, Zenker-Formol, Orth, etc.
 46

Se debe comprender que estas indicaciones son de caraf

ter general, en realidad es necesario para cada caso parti-
cular escoger un fijador lo más apropiado posible, tomando
en cuenta .al tejido, los detalles q~e se quieran resaltar y
la coloración que se va a utilizar.

6.8 MODO DE EMPLEO DEL FIJADOR:

Después de haber elegido el fijador se debe determinar

la manera de emplearlo para 6btener los mejo~es resultados;
se propone seguir las siguientes indicaciones:

Fl) Para extraer los tejidos que. se van a fijar se re-

comienda que el animal sea descerebrado o bien muerto en el
'
momento de hacer Ja disección, efectu•ndo todas las manio--
bras lo más rápidamente posible para evitar las alteracio--
nes post-mortem. También es esencial extraer los órganos
sin que sufran traumatismos, separándolos cuidadosamente
por sus adherencias conectivas.

F2) Una vez extraídos los órganos se obtienen las piezas

que van a ser fijadas, ~stas se denominan fragmentos de pl!
tina y para hacerlos se toma en cuenta la forma y consiste~

cia del órgano.

Los 6tganos parenquimato~os como las glándulas, hfgado

 47

bazo, riñ6n, etc., se cortan en fragmentos cuyo volumen

aproximado debe ser de 1 ce. es conveniente hacer estos cor
tes en forma de pirámide· del centro hacia afuera del 6rgano.

Para asegur~r la correita fijaci6n y corte de las pie-

z·as, puede hacerse un segundo movimiento en el fijador, pa-
ra haéerlo·se requiere elaborar cortes más_pequeños y defi-
nitivos al cabo de dos horas de fijaci6n, aprovechando el '
endurecimiento parcial que han sufrido los órganos; se ob--
tienen así piezas muy regul~res y convenientemente orienta-
das, lo cual es dif,cil lograr en los 6rganos frescos que
son muy blandos, en seguida, se colocan los cortes en el
nuevo fijador, favoreciéndose así la pronta penetración de
éste. Por precaución debe agitarse los fragmentos mientras
' que no se adhieran a las
se están fijando para pared~s del
frasco, sobre todo para órganos muy irrigados.

Los órganos tubulares se cortan en secciones transver-

sales entre 0.5 y 2.0 ce~tímetros de largo aproximadamente.
Puede seguirse el segundo movimiento descrito anteriormente.

Para trabajos más especfficos es necesario tomar en

cuenta que la mayorfa de los órganos tubulares se contraen,
y es necesario que se les fije en extensi6n para evitar que
las capas musculares se contraigan irregularm~nte deforman-
do la superficie interior. E~to se puede lograr ligando el
 48

tubo en uno de sus extremos e inyectando por el otro el fi-

jador suficiente para distender moderadamente la cavidad, 1

ligando luego este otro extremo.

Para membranas y órganos delgados en general, se colo-

can las piezas en papel filtro de poro cerrado o cualqui~r

otra superficie pla~a a la que se adhieren, se pueden' cu-~

brír con otro papel o algodón para evitar que flote·n; de es

ta manera conservan su estructura plana a través de la fij!
.e i ón.

Para órganos esponjosos como los pulmones se recomien-

da endurecer por una o dos horas en el fijador secciones·
más o menos voluminosas, aproximadamente -2 .ce. y porterior-
. ,
mente se cortan piezas rectangulares de menor volumen y se
sumergen en nuevo fijador. Un algodón· colocado sobre ~1

·fragmento evita que é~te flote. En general es aconsejable 1

que los fragmentos de platina no excedan de un centímetro '

cúbico, excepto para piezas muy delgadas cuyo tamaño puede
variar; con ésto se logra una adecuada fijación en la mayo-
ría de los fijadores.

F3) Es esencial que la composición de fijador permanezca lo

más constante posible, a pesar de las acciones osmóticas y
químicas ejercidas por las piezas que se están fijando, es
necesario por tanto emplear un vólumen de fijador muy gran-
 49

de en relaci6n al volumen de 1a pieza a fijar. La proporci6n

suele ser .de 50:1, pero puede disminuir de acuerdo al fija-
dor; para el formol al 10% es suficiente una proporción de
10:1.

Para facilitar la penetración del fijador es necesario

que el 6rgano se encuentre en suspensión en el lfquid~. es-
to se puede lograr suspendiendo las piezas en una bolsa de
gasa.

F4} la duración de la fijación depende de cada fijador y de

cada tejido y que especifica en cada técnica que aquí des--
cribimos, sólo hay q~e mencionar que de la duración adecua-
da en el fijador depende en cierta medida el éxito de los 1

resultados.

FS). El lavado después de la fijación es una operpci6n de

gran importancia, ya que es necesario eliminar lo más posi-
ble las sustancias fijadoras, para que no interfieran con 1

Jos reactivos empleados posteriormente. El disolv•nte em--

pleado para el lavado, asf como su ttempo de acción depende
del fijador y la técnica que se vaya a seguir. Una ·vez lav!
das las piezas debe continuarse el procesamiento inmediata-
mente;
 50

CAPITULO VII

C O R T E S.

El método de los cortes consiste en una serie de maniQ

bras destinadas a conseguir secciones delgadas de los 6rga-
nos y tejidos .. La mayoria de los tejidos pueden estudiarse
suficientemente gracias a este método en adición a los méto
dos de fijación y colocación, usando las variantes más úti-
les según el detalle est~uctural que se desee resaltar.

Casi todos los tejidos. son ~ás o menos blandos, pero 1

existen, aunque pocos, ciertos tejidos excesivamente duros,

en vista de €sto hay que distinguir dos casos en cuanto a 1

las·maniobras necesaria~ parala obtención de secciones fi--

nas:

7.1 CORTES EN TEJIDOS BLANDOS:

Como ya dijimos, los procedimientos de fijaci6n aumen-

tan la dureza de los tejidos blandos, pero no les proporciQ
nan la consistencia adecuada para ser seccionados finamente;
esto se consigue sin dificultad por medio de los procedi- -
mientes de congelación y de inclusión en parafina.
 ' SI

7.2 PROCEDIMIENTO DE CONGELACION:

Esta maniobra se efectaa mediante el microtomo de con-

gelaci6n descrito anteriormente, y la congelaci~n se logra
por la evaporaci6n de anhídrido carb6nico líquido dispuesto
en este aparato.

Antes de efectuar los cortes es .necesario en la mayo--

ría de los casos realizar la fijación de las piezas, ya que
sin ella, muchas de las materias qu~ integran los tejidos ~
se mantienen en estado semisólido, disgreg~ndose los cortes
al descongelarlos.

Se suele emplear como fijador el formol al lP%, y el '

tiempo de fijaci6n depende del "tamaño del fragmentd y varía
desde unos minutos cuando se usan vapores, hasta varios - -
días, cuando se usan lfqui~os.

Es conveniente en todos los casos el lavado acuoso - -

abundante pa~a·quitar el exceso de fijador.

7.3 CORTES POR CONGELACION:

Cl).- Se coloca una, pequeña porci6n del 6rgano, de - -

aproximadamente 0.5 ce. en la platina del micro-
tomo de congelaci6n, sobr~ un trozo de papel ftl·
 52

tro humedecido.

C2).- Se enfrfa suficientementecon anhfdrido carbónico

de manera que el tejido qtiede congelado hasta la
parte superior, esto se hace abriendo a interva-
los breves la llave de salida del gas.

C3).- logrando esto, la pieza ha adquirido suficiente

~ureza para poder cortar secciones finas con la
cuchilla del microtomo. Es indispensable vigilar
el punto -de congelación para cada órgano, ya que
si el bloque no está s~ficientemente congelado,-
o la congelación ha sido excesiva, los cortes se
destruyen. Con un ~oco de práctica se llega pro!
to al punto debido para cada órgano, obteniéndo-
se .entonces, rápi~amente, buen nQmero de cortes.

C4).- Las secciones se recogen con un pincel y se col~

can en un recipiente con agua destilada, donde '

se extienen y se conservan hasta ser observadas
o tefiidas. Si la tinci6n.no se efectQa el mi~mo

día que se hicieron los cortes, se ie agrega al

agua un 'poco de formol. el cual se quitará media!
te un lavado previo, antes de la tinción.

la congelación es ámpliamente usada en las técnicas

 53

histo16gicas por su rapidez y economfa. y se recomienda am-

pliamente para las t~cnicas argénticas.
 54

CAPITULO VIII
PROCEDIMIENTO DE lNCLUSION EN PARAFINA

Casi todos los tejidos pueden ser cortados mediante su

inclusión en ~u~tancias especiales, obteniéndose en general
cortes m&s finos que con la congelación. Este procedimisnto
es par¿iaJmente Qtil para t~jidos no excesivamente d4ros, y
no se debe usar en piezas que hayan sufrido la acción de e~

durecedores enérgicos, ni en tejidos que tengan estructura

muy laxa.

Las operaciones necesarias pafa este procedimie~to son:

1

1
Fij~ción, layado, deshidratación, jnclusión y corte.
!.

FIJACION.
Se lle~a a cabo m~diante cualquier fijidor, segOn se )
requiera.

LAVADO.
Despu~s de la fijación es casi.siempre necesario el 1!
vado en el disolvente adecuado, según el fijador; en muchos
casos sr. utiliza el lavado abundante en agua de la llave, '
con tiempo variable de acuerdo al fijador.

DESHIDRATACION.
los disolventes de las sustancias empleadas en la in--
 55

clusi6n como son el ~ter, cloroformo, xilol, etc., no se

mezclan con el agua, ·por lo que es preciso una perfecta de~

hidrataci6n de la pieza con alcoholes graduales, hasta absg

lutos, para que la sustancia de· inc~usf6n penetre bien en
los tejidos.

INCLU.SION.
Es la operaci6n mediante la cual se hace penetrar en 1

la pieza deshidratada una mftteria solidificable que tiene·a

lo m§s la consistencia del tejido y facilita la ~jecuci6n
1

de cortes finos. Se han utilizado muchas sust~ncias con es~

te fin~ pero en la actualidad se emplea ordinariamente la -

parafina, dejando para casos especiales la inclusión en - -
otros materiales como _gelatina y celoidina, o abandon~ndo-­

los definitivamente,.como sucede con las,inclusiones en al-

búmina, agar-agar, jab6n, goma, etc.

A continuación solo se describirá el método de fnclu--

si6n en parafina por ser !ste el de uso más general.

8.1 INCLUSION EN PARAFINA.

Pl).- Fijar en formol al 10% por 24 horas, como mfnimo

o bien en cualquier otro fijador.

P2).- Lavar en agua corriente de 15 a 30 minutos, como

 56

mfnimo.

P3).- Deshidratar con alcoholes de concentraci6n aseen

dente, de 30, 50, 70, 80, 96 grados, y absoluto, de 30 minu
tos a una hora en cada alcohol, con el fin de suprimir- el '
agua tisular, ya que la parafina n6 es soluble en agua.

P4).- Aclarar en xilol, de 30 minutos a una hora.

PS).- Transparentar en aceite de cedro, de 12 a 24 ho-

ras, o hasta que las piezas adquieran un color ~mbar.

P6).- Colocar en xilol durante 15 minutos antes de in-

cluir. los pasos 4~ S y 6 son con el- objeto de facilitar la
penetración de parafina en la trama del tejido, aprovechan-
do al mismo tiempo que estos reaéiivos tienen poder como
aclarantes.

P7).- Incluir en parafina. Para esto se sumerge la pi!

za en parafina fundida, cuyo punto de fusión se se}ecciona
de acuerdo al órgano, eñ general se recomienda entre 54° --
560 y 56~ - 58°; se hacen dos cambios, de 30 minutos a una
hora cada uno, de preferencia el primero en una parafina de
menor punto de fusión y el segundo e.n tina parafina con un '
punto de fusión ligeramente mayor, en cajitas met~licas, de
pl~stico o de papel, se coloca parafina fundida y limpia, '
 ' 57

de .punto de fusi6n igual al del segundo cambio; se deja fo.!:

mar una capa superficial s6lida de parafina, la cual se 1 i-
cúa pasando una aguja de disecci6n caliente, en este momen-
to se introduce el fragmento y se orienta de acuerdo a la 1

forma en que se va a cortar. Cuando ha ~olidificado una nue

va capa superficial, se rodea la pieza con una aguja de di-
sección caliente, con el ·objeto de sacar las burbujas que 1

se hayan formado al introducir el fragmento. Finalmente, se

deja soli.dificar completamente sin mover, en un recipiente
con agua fría, ya que es preferible que sea un enfriamiento
repentino para que la parafina solidifique en ~rtstales pe-
queñísimos; una solidificación lenta de cristales gruesos-~

que pueden estropear Jós el~mentos tisulares. Es importante

indícar sobre la cajita de inclusión la orientación del - -
fragmento, con el objeto de no perder el sentido del corte.

Es ~mportante hacer notar que los paso~ previos a la 1

inclusión son muy variables, ya que son mOlti~les los reac-

tivos que pueden ser usados, sobre todo ·los fijadores y di-
solventes de la parafina .. .Según esto, cada autor nos prese~

ta una secuencia que varía en reactivo y tiempos, de acuer-

do a sus e~periencias personales; en la rnuyorfa de los ca-
sos los resultados que se obtienen son buenos. Por la misma
razón el procedimiento que aquf se menciona se considera
adecuado, según nuestra experienciá.
 58

Cortes por Parafina:

Ya solidificada, la parafina, se delimita el bloque
con una navaja, dándole forma de pirámide truncada, sin le-
sionar el 6rgano y quita~do todo el .exceso de parafina. La
base de la pirámide se adhiere por calor a la platina del 1

microtomo, siendo el ápice truncado la superficie que se va

a cortar; el filo de la navaja deberá estar paralelo a di-
cha superficie.

Los cortes se harán.de un grosor entre 3 y 10 micras y

saldrán en serie. Los cortes se puede~ guardar en serie, "M
mer~ndo las tiras en orden .progresivo, sobre hojas de papel
preservados del viento y del polvo hasta el momento de ser
utilizados. Se aconseja cortar solamente aquéllos que pue--
dan ser montados inmediatamente para evitar que se estro- -
peen las series. Los cortes que se van a utilizar se colo--
can en un baño de flotación a 37°C con gelatina previamente
disuelta para que se extiendan y se adhieran ~1 p~rtaobje-­

tos con el cual se recogen de modo que queden centrados .. Se

dejan secar durante 24 horas a.. la temperatura ambiente, o 1

se secan en una parrilla o estufa a 37°C, durante 12 horas.

Oesparafinaci6n e hidratación de los cortes:

Para teñir los cortes es indispensable desparafinarlos

e hidratarl~s para lo cual se pasan a xilol y a cambios de
alcohol, en concentración descendente de la siguiente manera:
 59

a) Colocar en tres cambios sucesivos de xilol de 5 a •

10 minutos cada uno. El xilol que se emplea para
desparafinar puede volverse a emplear, siempre y
cuando se filtre ..

b) Colocar en alcoholes de 100°, 96°, 80°, 70° y 50° 1

por 5 minutos ~n cada uno. L~ mayorfa de los colo--

rantes actúan en medio acuoso, por lo que es necesa
rio hidrata~ los cortes cuando lstos se han hecho 1

por inclusión en parafina.

e) Colocar en- agua destilada. En este punto los cortes

est~n listos para ser teñidos.

Cortes en Tejidos Duros:

Cuando se quieren seccionar tejidos demasiado duros, 1

tales como hueso, diente o cartflago en vfas de· osific~ci6n

se puede recurrir a dos procedimientos, uno en su estado n~

tural mediante tallado y otro mediante el auxilio de reactl

vos ablandantes o descalcificantej~ .empleados antes de ~or­
tar por congelación, o por inclusión en parafina o celoidi-
na.

Procedimiento de Tallado:

Est~ procedimiento p~ede resumirse en lo~ siguientes 1

 60

pasos:

Tl).- Hacer con una sierra de diente fino, un corte

grueso, transversal o longitudinal de la pieza.

T2).- Sobre una lija de grano medio se desbasta el cor

te por ambas caras hasta alcanzar aproximadamente medio mi-
lfmetro de espesor.

T3).- El corte se lleva a una piedra de asentai o lija

de agua humedecida con alcohol o agua y se adelgaza y pule
hasta quedar lo más transparente posible.

T4).- La sección ~btenida se lava con alcohol o xilol

' .
para eliminar el polvillo que queda en los conductos. Si se
desea aclarar se deja xilol lim~io durante 24 ~oras.

Estas secciones pueaen ser teñidas con anilina.

T5).- Ya sean aclarados o no teñidas o n6 estas seccio

nes, adelgazadas y lavadas, se montan en b~lsamo de Canadá,
o resina.
 61

CAPITULO IX

METODOS GENERALES'DE TINCION.

9.1 COLORACIONES:

Hemos establecido que los diversos elementos de los te

jidos poseen en su mayorfa, un fndice de refracción casi
i~ual, de modo que su diferen~iación óptica es diffcil. Por
otra parte, es de todos conocido el hecho de que las imáge-
nes que dan. las preparaciones coloreadas son más fáciles de
interpretar que las imagenes dadas· por las preparaciones in
coloras. Estos dos argumentos nos revelan la importancia
que tienen en la técnica histológica las coloraciones para
el estudio morfológico de células y tejidos.

Es importante acl~rar que, tanto en ·la antigUedad como

en la actualidad, se han hecho admirables descubrimientos •
sin la ayuda de los colorantes. A este respecto, podemos de
cir que reconocemos la importancia de las observaciones en
estado fresco y .sin tinción; tampoco ~lvidamos que la faci-
lidad con que se llega a diferenciar muchas estructuras,
por medio de colorantes, presenta al observador el peligro
de interpretar erróneamente los ~ortes. No está por demás '
decir que las coloraciones no son lo más importante en la '
histologfa, y que el papel del histólogo no consiste en ser
un buen teñidor, sinó más bien, en saber observar y obtener
 ; fiZ

de sus observaciones una correcta interpretaci6n. Vamos a

ver ahora qué se entiende por coloraci6n.

La coloraci6n es la propiedad que poseen ciertos cuer-

pos de ejercer sobre la luz una absorción selectiva; dicho
de otra forma, un cuerp~ aparece coloreado porque transmi--
te, por transparencia o difusión, las radiaciones complemerr
tarias de aquéllas que absorbe.

Un colorante es un cuerpo colbreado que puede comuni--

car su col~ración a otros cuerpos.

Se sabe que existe-una relación entre la constitución

de las sustancias y la absorción selectiva dé radiaciones o

que produce el color; cualquier configuración de la molécu-

la que produce absorción· de la luz .se denom"ina badocr6mica,
y al grupo en general se denomina cromoforo. Todas las teo-
rfas que tratan de explicar la constitución de los- cromofo-
ros admiten en general, que existe una relación entre el e~

lor resultante y la falta de saturación de los ~tomos que o

constituyen la sustancia, lo que explica la gran·a~idez que

tiene a los coloraote~ por el hidrógeno.

Son grupos crcmoforos los que contienen en su molécula

dobles ligaduras conjugadas, sin embargo, esta caracterf.stj_
ca no hace coloreadas a las sustancias, por lo menos en la
 63

regi6n visible ~el espectro, pero la acumulaci6n de dobles

ligaduras en un sitio, sobre todo cuando están conjugadas 1

hacen aparecer el c~lor.

Las sustancias que encierran en su mo·Héula grupos cr~

moforos se denominan crom6genos. El cromógeno, a pesar de •

ser un cuerpo coloreado no· puede co~siderarse como _elemento
de"tinción si no posee afini~ad por los tejidos. Para que 1

un colorante se considere apto para la tinción debe conte--

ner además del grupo cromoforo, otro que le imparta propie-
dades de electrolito, es decir, que tenga posibilidades de
ionizarse; a estos grupos auxiliares se les denomina genéri
camente auxocromos-

los auxocromos son también agrupamientos no saturados

y que no son cromoforos, pero que pueden al ier introduci--
dos en la molécula de un cromógeno, modificar su espectro '
de absorción, es decir, su coloración. Los auxocromos por '
tanto exaltan la coloración y confieren generalmente el po-
der tintóreo. los auxocromos pueden ser ácidos, es decir, •
electronegativos caracterizados por la presencia del oxíge-
no, o ~ueden ser básicos o electroposi~ivos, caracterizados
por la presencia del nitrógeno.

Así la clasificación de los colorantes desde e1 punto

de vista qufmico estará dado por los grupos cromoforo¿, los
 64

1
cuales se dividen en dos grandes grupos: los 4cidos y los
b4sicos .

. 9.2 NATURALEZA DE LAS COLORACIONES:

Existen muchas teorías para explicar porqué los teji--

dos se tifien; cualquiera que sea la teorla que se adopte~
1

en la práctica existen dos tipos de colorantes, unos.que se

unen directamente a los tejidos y otros que necesitan ínter
mediarías, es decir que se .unen indirectament~.

Las coloraciones directas son aquéllas que se producen

por inmersión en el baño colorante y se denominan también 1

cóloraciones sustantiv~s. En las coloraciones indirectas es

necesario que el objeto a colorear sea tratado previamente
~on otra sustancia que lo prepara para recibir'el colorante
a ~sta sustancia intermedia se le llama mordente; también 1

se les llaman coloraciones adjetivas o por mordaza. La com-

binación que·el mordente forma con el colorante se denomina
laca.

Se ha discutido mucho sobre la interpretación del fenÉ

meno de las tinciones; sin llegarse a un acuerdo satisfact~
río y que se aplique a todos los casos. Se admite general--
mente que la penetración del colorante es por osmosis, y el
principal problema se presenta al tratar de explicar c6mo 1

se fija el colorante a los tejidos.

 65

la teorfa ffsica de A. Fisher y seguidores ve a las CQ

loraciones como una fijaci6n de los colorantes en los teji-

dos tiene lugar mediante una uni6n qul~ica entre el ¿olora!
te y los elementos constituyentes del tejido, formS~dose
una verdadera sal. Asf ciertas partes de la célula que lie-
nen caracter ácido, tendrán afinidad por tos colorantes b!-
sicos, en tanto que las partes de caracter básico presentan
afinidad por los colorantes ácidos.

Tanto la teorfa ffsica 'como la qufmica tienen hechos '

en pro y en contra, por lo que actualmente se tiende más a
consi~erar a las colvraciones como fenómenos muy complejos,
en los cuales las acciones ffsicas y qufmicas son cinerglt!
cas.

9.3 CLASIFICACION DE LOS COLORANTES:

Atendiendo a su origen los colorantes se clasifican en

dos grupos: los naturales y los artificiales.

El primer grupo tiene poca importancia en la actuali--

dad· porque la mayor parte de estos colorant,s son prepara--
dos sintéticamente. El segundo grupo corresponde-casi a 1~

totalidad de los colorantes usados en la técnica microscópf

ca.
 66

Colorantes naturales.

Son extrafdos d~ productos animales y vegetales, como·

el carmín (Coccus cacti), la fiematoxil~na (Hematoxilon cam-
pechianum), 1"a orceina (Rocella "tinctoria), el tornasol - -
(Chrozophora tinctoria), etc.

Colorantes artificales.

Son conocidos también como colorantes de anilina, de. 1

carb6n o sintéticos. De acuerdo a la .naturaleza de su cromQ

foro pueden ser: Colorantes nitrados, colorantes azoicos, 1

oxiqui~onas, quinona-oxinas, quinona-imidas, fenilmetanos,

quinoleinas, acridinas, tiazoles, oxicetonas, xantonas y
flavonas.

Ehrlich los ha dividido en dos grupos según sus afini-

dades para el núcleo y .el cito·plasma: Nucleares o básicos 1

cuando el compuesto colorante es una base y citoplásmicos o

ácidos cuando el compuesto colorante es un áci.do.

Es muy raro que se ~mpleen los ácidos o las bases li-

bres, debido a su poca solubilidad. Los colorantes artifi--
ciales que se emplean son casi siempre sales. los coloran--
tes básicos son sales en las cuales la base es coloreada y

el ácido es incoloro, )or ejemplo el azul de metileno, que

es una sa1 formada por la combinaCión de la tetrametiltioni
 67

na, coloreada, y el ~cido clorhfdrico, incoloro. los colo--

rantes ácidos son sales en las cuales el ácido es coloreado
y la base es incolora, por ejemplo la eosina que es una sal
en la cual es ácido eosfnico, es coloreado en tanto que la
potasa o sosa son incoloras •

. Ehrlich distingue también a los colorantes neutros, en

los cuales la base y el ácido son coloreados, corno el pica-·
tro de azul de metileno.

Michaels ha creado la categorfa de los colorantes indí

feren~es, par~ aquéllos que no_ son ni ácidos ni básicos, y
no poseen agrupamientos capaces de formar sales, son por
ejemplo él sudan 111 y el rojo escarlata.

9.4 METODOS DE COLORACION:

No todos los colorantes pueden servir indistintamente

a la técnica histológica, por lo tanto se han dividido los
~étodos de coloración en las siguientes categorfas de acuer
do a las rel~clones entre el colorante y los tejidos.

9.5 COLORACIONES GENERALES Y ESPECIFICAS:

las primeras s~ basan en el tefiido intenso de los nO--

cleos y débil del protoplasma o en la fuerte coloración de
 68

ambas partes con colores distintos; ~sto, aunado a l~s ton~

lidades que dan las sustancias intercelulares, permite te-

ner una idea clara de éonjunto, tanto para los tejidos como
para órganos. Los segundos se aplican para ~s~udiar partic!
laridades histológicas,, aprovechando la tinción selectiva y
casi exclusiva de algunos colorantes sobre ciertas estructu
ras.

9.6 COLORACIONES DIRECTAS E INDIRECTAS:

Anteriormente ya se trataron estos dos m~todos de colo

~ación, sol~ a~adirem¿s el papel y la naturaleza de los mor
dentes, en el caso de las coloraciones indirectas. Sabemos
.que los mordentes son cuerpos que sirven de intermediarios
. -'
entre el coloran~e y el tejido, cuando €stos no tienen afi-·
nidad química entre sí. El mordente actúa formando en el t~

ji do una .combinación ·coloreada muy estable, e irisoluble en

el agua, y que resiste a los agentes decolorantes, aumenta~

do además la selectividad del tejido por el colorante. los

mordentes pu~den hacerse actuar directamente sobre los tej!
··~os formando parte de los fijadores o mezclados al coloran~

te. Los principales mordentes usados en la microtécnica son

los alumbres de.potasio y fierro, algunos ~cidos oxidantes,
como el crómico, ósmico, etc., cloruros met~licos, sales de
yo.do y .oxidantes orgánicos, como el ácido pícrico.
 69

9.7 COLORACIONES PROGRESIVAS Y REGRESIVAS:

Cuando el tejido adquiere, lenta y progre~ivamente, el

grado de color necesirio, sin·exi9ir una operaci~n poste- -
rior de desteñido, tienE lugar lo que se conoce como color~

ci6n progresiva; se usa sobr-e todo con los colorantes que '
dan coloraciones muy s6lidas o diffciles de diferenciar,
por ejemplo, el azul de metileno, azul de algodón, carmpin
y hematoxilina. La coloraci6n regresiva es aquélla en la
que el objeto sobrecoloreado, por la excesiva concentrac~ón

del colorante, debe sufrir la acción de un _disolvente. apro-

piado; el disolvente cumple, en este caso, dos fines ~sen-­

ciales: Elimina el exceso de colorante y respeta el teñido,

haciéndolo más evidente en ciertas partes del preparado, es
decir, es un agente diferenciador.

Entre las sustanci~s diferenciadoras encontramos alea-

lis, como sosa y-potasa, alcoholes etflico y metflico, áci-
dos, como el sulfGrico, clorhfdrico, nftrico, ·acético, pf--
crico, etc., oxidantes, como el permanganato potásico, re--
ductores como el ácido férrnico y el. formol, sales metálicas
como el alumbre de hierro, cloruro férrico, yoduro de pota-
sio, etc., y metaloides como el yodo, bromo, etc.

los colorantes que más se prestan para la diferencia--

ci6n son los colorantes básicos, como la hematoxilina.
 70

9.8 COLORACIONES SIMPLES Y COMBINADAS:

Las coloraciones simples son aquéllas que se obt~enen

con un solo culorant~. §cidti o básico. Segfin su naturaleza

con monocromáticos o métacromáticos. En el primer caso, to-
dos·los elementos son teñidos en el tono del baño colorante
en el segundo ciertos elementos tisulares viran el color a
un tono diferente, a este efecto se le conoce con el nombre
de _metacromasia.

El término rnetacromasia se aplica cuando un colorante

primario, químicamente definido y puro, es capaz de colo- -
rear varios constituyentes tisulares con marcadas diferen--
cias, por ejemplo, el azul de toluidina tiñe muchos consti-
1
tuyentes celulares en ~zul, pero a la malriz del cartílago
que presentan esta propiedad son llamados metacromáticos, y
los elementos que hacen virar el color son llamados cromo--
tropos. Los tejidos que se tiñen de diferente manera con el
colorante se denominan cromotr6picos~ y los tejidos que se
tiñen siempre del mismo color son llamados ortocromáticos.
Hay que diferenciar el cambio de coloración que puede dar '
un colorante con impurezas, pudiendo teñir de diversos col~

res varios constituyentes del tejido, por ejemplo, el verde

de yodo; a ~ste efecto se le llama alocromasia.

Como ejemplo de colorantes metacrómicos tenemos violeta

 71

de metilo, azul de anilina, violeta de cresil, azul de ere-

sil, azul de toluidina, rojo neutro, safranina, verde jano,
etc.

las· coloraciones combinadas pueden ser practicadas ha-

ciendo actuar diversos colorantes, ya sea sucesiva o simul-
t~neamente. En las ioloraciones sucesivas cada colorante
simple puede actuar independientemente y fijarse sobre.un '
elemento dado, como en las coloraciones con hematoxilina-ea
sina. En las coloraciones, simultáneas cada elemento actaa
generalmente por su cuenta, pero se ha visto que en presen-
cia de ciertos líquidos dan automáticamente coloraciones
triples o cuádruples im~revistas, y el resultado puede ser
defectuoso e inconstante.

9.9 COLORACIONES PANOPTICAS:

No hay que confundir estas coloraciones con las combi-

nadas, en las que actaan colorantes ácidos y básicos, en
tanto que los agentes de coloración panóptica son coloran--
tes neutros. El principio de las coloraciones panópticas es
el de poner en evidencia el mayor nQmero posible de elemen-
tos con una gran variedad de tonos. Este m~todo tiene esp~­

cial importancia en el estudio de los protozoarios y la sa~

gre. T~dos los colorantes sanguíneos son colorantes neutros

y dan coloraciones panópticas. Los fenómenos de metacroma-~
 72

sia juegan un papel importante en las coloraciones panO~ti­

cas, y contribuyen a distinguirlas de las coloraciones com-

binadas.

9.10 COLORACIONES EN BLOQUE:

A<tualmente, casi siempre, los procedimientos de colo-

ración son aplicados a cortes y solo a éstos pueden aplica~

se ciertos métodos de coloración, como los regresivos, com-

binados y pa~ópiicos, no obstante, los tejidos pueden ser 1

coloreados en bloque; este método, muy usado en otros tiem-

pos, es aDn utilizado, aunque poc~. principalmente para el
estudio de animales enteros. las coloraciones en bloque son
sobre todo directas, simples y progresivas, y deben ser
aplicadas con colorantes muy penetrantes, pr!cti~amente so-
lo el carmfn y la hematoxilina lo son; las anilinas están 1

exclufdas, porque ~o penetran s~ficientemente,.sobrecolore­

ando la parte superfi<ial y no tiftiendo las partes profun--
das. Este procedimiento es muy económico y permite montar '
los cortes inmediatamente, pero no se ~btienen nunca colora
ciones tan delicadas como la tinción sobre los cortes.

9.11 IMPREGNACIONES METALICAS:

la impregnación a base ~e sales met~licas, principal--

mente de plata, ha sido indispensable para el estudio del '
 73

sistéma nervioso, y brinda preciosas im4genes de este teji-

do, debido a la distinta intensidad con que se deposita el
coloide met41ico. Algunas sales meta1icas poseen la propie-
dad de precipitar selectivamente, .sufriendo una descomposi-
ción en presencia del tejido; el precipitado impregnador sé
forma algunas veces por reduccióh, afectando el estado co-
loidal, como en la impregnaci6n· argéntica, ~urea, etc., y
otras se forman por doble descomposición en' presencia del 1

mordente, como sucede con e1 cromato de plata sobre piezas.

embebidas en bicromato de potasio.

El mecanismo de las impreg~aciones ·arg€nticas aan no 1

ha sido bien esclarecido, no obstante las numerosas investí

gaciones que se han venido realiza~du desde 1911.

Liese·gang en 1911, Owens y S~nsley en 1929, Nageotte y

·Guyon en 1930, Zon en 1936 y Silver en 1947 se~taron las ba
ses de este mecanismo, pero ninguna mostró evidencias inib-
jetables sobre el particular. Sin embargo, una combinación
de los principios de estos ~ientíficos postulares ha permi-
tido una explicación aceptable del mecariismo de las impreg-
naciones de plata:

1.- Cuando en una solucitin .amortiguada de plata se su-

mergen los cortes de tejido, dos tip~s de plata se·
depositan en ellos:- Una fracción de plata reducida
 74

por el tejido, probablemente como diminutas. partf-

.culas metflicas o "núcleos" y una fracci6n de pla-
ta reducible que es reducida por una sustancia que
actúa como desarrollador. Según Silver, diferentes
desarrolladores producen diferentes efectos en el
proceso de impregnaci6n con una influencia contro_-
lada a causa de un desarrollador particular.··

2.- la cantidad y distribución de los núcleos de plata

y la plata reducible dependen de propiedades del '
tejido, el PH de la solución, la concentración de
plata, el tiempo y la temperatura de incubación.

3.- los núcleos de plat~ juegan un papel dinámico como

centros catalfticos para la reducción de plJta.

4.- Hay una compleja interrelación entr~ estos centros

la plata reducible, el ·desarrollador y los tejidos;
todos juegan un papel fundamental en la impregna--
1
í
ción final de la sección (Samuel,_ 1053) .
.!
En la actualidad existen muéhos métodos en que se
emplean sales metálicas de impregnación, algunos '
de estos métodos serán detallados en la sección de
técnicas histológicas.
 7S

Conservaci6n de las preparaciones:

Las preparaciones fijadas y tefiidas pueden sufrir dec~

loraciones· u otras alteraciones si no son protegi~as adecu~

damente.

Para la conservaci6n de las preparaci~nes se utilizan

resinas sint~t~cas o el bálsamo de Canadá. Se aplican gene-
ralmente disueltos en xilol, a modo de jarabe espeso. Antes
de cubrir las preparaciones es preciso que los cortes est~n

perfectamente deshidratados y aclarados.

La deshidratación se hace, de preferencia, en varios

cambios de alcohol de 96° o absoluto, o acetona, y para la
aclaración se requiere de u'na esencia que puede ser de cla-
vo, .cedrp. bergamota, orégano, creosota, xilol' etc.-; des--
pués de aigunos minutos de permanencia en esta esencia se 1

escurren 1as _preparaciones y se recoge el excedente con pa-

pel filtro.

No es indiferente la 'elección de la esencia, depende 1

en gran parte del medio en el cual se hizo la inclusión pe-

ro sobre todo el m~todo de tinción, por ejempld, para las '
coloraciones con anilinas se utilizan.esencias que no di--
suelven estos colores, como bergamota y xilol. La creosota
o la esencia de clavo conviene usarlas con coloraciones s6-
 76

lidas. que no se destiñan con facilidad. por ejemplo colo--

rantes naturales o impregnaciones argénticas.

Las preparaciones asf tratadas est§n listas para_ser •

cubiertas con el agente conservador, para lo cual se.coloca
una gota·sobre un cubreobjetos limpio y· se acerca al porta-
objetos que contiene el corte, de manera que tomen_contacto
uno con otr-o, enseguida se adhieren y se deja que el conse~

vador se extienda por todo el cubreobjetos; hay que procu--

rar que el tamafio de la goti sea ·suficiente para llenar el
cubreobjetos, sin que falte ni se derrame; se deja secar a
la temperatura ambiente por varios días o en u~a estufa a '
37°C por 2~ horas.

Otros conservadores que pueden ser usados son lB glic!

rina, gelatina gl1cerinada, resina sintética, licores de Fe
rrant y de Apathy, etc., pero el uso ~e estas sustancias
tiende a ser abandonado, sin embargo, suelen ser utilizadas
cuando se requieren vehículo5 de menor índice de refracción
que el bálsamo de Canadá, por ejemplo la glicerina, que da
preparados temporales, que sufre alteraciones, o bien cuan-
do es necesario emplear sustancias en cuya composición no '
entren esencias y alcoholes, por ejemplo la glicerina, li--
cor Ferrant, licor de Apathy y gelatina ~licerinada.
 77

CAPITULO X

ANTECEDENTES HISTORICOS.

El estudio de la estructura de loi organismos es el ob

jeto fundamental de las ciencias morfológicas, y constituye
la parte más antigua y quizá la más extensa de la Biología.

.
El conocimiento empfrico de las técnicas histo16gi~a; ·
puede remonta~se a los egipcios, como el embalsamiento de '
cadáveres y el uso de los fijadores como el alcohol etílico
para la conservación de los tejidos; sin embargo, se puede
decir que es desde el ~iglo _XVI cuando se deja _la dependen-
cia escolástica antigua para ceder paso al método científi-
co moderno.

Al principio, el estudio -de las estructuras se hacía a

simple vista luego de la disección con cu~hillos comunes.
El ejemplo más antiguo del empleo de colorantes en la anato
mía macroscópica, importante para el desarrollo de los méto
dos microscópicos, es el relleno-de los vasos con sustan--
cías coloreadas, y al parecer fue BENGARIOS 6 CAPRI ( 1502-
1550) el primero que usó este procedimiento.

Sin embargo, pronto comenzaron a usarse lentes simples

corno auxiliares para d~stinguir detalles finos y texturas,~
 78

que fueron publicados entre 1661 y 1666. ROBERTO HOOKE

(1635 - 1703) hace los primeros cortes histológicos en el '
corcho, significativamente importJntes por el descubrimien-
to de la c~lula, usando tambi~n lentes de aumento simple~.

y público en 1665 un libro denominado "MICROGRAPHIA" t.Hulo

que destaca 1a· observacfón de estructuras diminutas.

De 1673 a )716 LHUWENHOEK perfeccionó las lentes com-

puestas que permitieron aumentus mucho mayores. Así, a pri~

cipios del siglo XVIII, la morfología fue dividida en una·'

parte microscópica y otra macroscópica. -El advenimiento del
microscopio abrió de esta manera el campo para el nacimien-
to de una multitud de disciplinas científicas, entre ellas
la hiitología. Para facilitar sus _ex~menes microscópicos, '
el mismo LEEUWENHOEK en 1714 empleó una solución alcohólica
de az~fr~n para tefiir cortes de músc~lo; la desecación ex--
pon~~nea fue la primera forma de fijación, usada también
por él en 1720.

El método de los cortes, primeramente empleado en Bot!_

nica, di6 con el tiempo lbs mejores resultados; uno de los
instrumentos más antiguos para este fin, el MICRDTOMO, fue
construido y descrito en 1770 por GEORGE ADAMS.

En la última parte del siglo XVIII FRANCOIS XAVIER SI-

CHAl (1771- 1802) utilizó el t~rmino "TEJioor para referir
 79

se a ,-as diversas texturas de las capas y estructuras del •

cuerpo, y sin la ayuda del microscopio hizo una clasifica--
ción de más de veinte variedades de tejidos; BltHAT no con-
cedía valor al empleo del microscopio, argument~ndo que da-
ba lugar a interpretaciones subjetivas. Con el paso del
tiempo y el perfeccionamiento del microscopio se llegaron a
det~rminar solo cuatro tipos básicos de tejidos; no obstan-
te, por tan significativa aportación se puede considerar a
BICHAT como el primer histólogo o fundador de la doctrina 1

de los tejidos. En 1819, el anatomista MEYER- DE BONN ide6 1

el término "HISTOLOGIA"· para designar a la ciencia que est.!:!_

dia los tejidos. Los microscopistas de entonces, utilizando
especímenes frescos, desmenuzados o macerados, y cortes de

tejidos realizados a mano, establecieron los rudimentos de

la histología.

De. 1800 a 1829 se hicieron investigaciones afsladas S_Q

bre la estructura morfológica, como opuesta a la estructura

química, de los tejidos, en una_tendencia de separar 1~ His
tología de la Histoquímica.

En 1sjs, CHRISTIAN GOTTFRIED EHRENBERG utiliza el car-

mfn y el fndigó en sus investigaciones sobre infusorios.

Aunque en los albores del ~iglo XIX ~a se disponfa de

microscopios adecuados, las técnicas para preparar los teji
 ; 80

dos distaban de ser ideales. Como los especfmenes gruesos '

no podfan observarse con provecho en los potentes microsco-
pios, se necesitaban m~todos exactos capaces de proporcio--
nar cortes delgados, sobre tod~ de tejidos ~nimales no con-
sistentes; ~stos s6lo fueron posibles despu~s de aplicar la
técnica de fijación mediante desecación, alcohol, sublimado
y ácido cr6mico~ introducid~ en 1832 por JACOBSON y en 1840
por ~ANNOVER. En este campo, fue el histólogo Suizo ~ALENTI
NE qu.ien, en 1839, empleó una doble cuchilla, cuyas hojas 1

podían separarse a discreción, para· hacer cortes sucesivos

y más exactos de tejidos animales. El primer microtomo de 1

ADAMS, construido por el mecánico OSCHATZ ~n 1843; para tra

bajos histológicos animales y vegetales.

En 1848, KRAUSE emplea el nitrato de plata para hacer

vfsibles los contornos de las c~lulas epitelJales.

En 1852, KOLLIKER instituyó a la histología como un

campo especial de estudio.

En 1B60, DANIEL V. RECKLINGHAUSEN introduce ra_impreg-

nación •rg~ntica como m~todo histológico de_ observación.

El verdadero éxito en la ~úsqueda de procedimientos

útiles de tinción sólo se obtuvo en la segunda mitad del
si~lo XIX, al ser introducidos por BENCKE, en 1862 los col~
 81

rantes de ~nilina para tefiir preparaciones microsc6picas. 1

El nacimiento de las anilinas ocasionO una revoluciOn en la

práctica de la histología, por lo que la t~cnica histol6~i­

ca progresó a grandes pasos; .sfmulUneamente se fueron desa

rrollan.do los procedimientos en el uso de los microtomos P!
ra la obtención de cortes, endureciendo adecuadamente los 1

especfmenes mediante conge1a~i6n, inclusión en parafina, C!

loidina, gelatina y otras sustancias semejantes~ para evi--
tar el desplazamiento de los componentes de los tejidos. A
mediados del siglo XIX R. HEIDENHAIN utilizó por primera
vez el método de inclusión, empleando solución de goma y de

jándola secar antes de hacer los cortes; en 1864 EDWIN KLE-

BS usó en forma conveniente la parafina como medio de inclu
sión, técnica perfeccionada por PAUL MAYER (1848 - 1923).

En 1867, EDUARD SCHWARTZ _introdujo a la técnica mi eros

cópica el doble tefiido, utilizand6 el carminato de amonio y
el ácido pícrico; más tarde CHRISTIAN GOTTFRIED EHRENBERG 1

usó el polvo de índigo y el carmfn para el estudio micro~c~

pico de organismos vivos: Las técnicas microscópicas se li-

mitaron por ·muchos afios, a pocos cóiorantes.

En 1869 fue int~oducida por EDWIN KLEBS la geTatina

glicerinada como medio de inclusi6n, más tarde KAISER, en -
1880, usó solamente la gelatina con endure~irniento poste- -
rior mediante un fijador.
 82

El pri~er microtomo para hacer corte~ ~e material con-

gelado fue construido por el fisi61ogo RUTHERFORD en el año
1871, usando mezclas frigorfficas ~ pulverizaci6n de ~ter.
Más adelanter siguiendo el ejemplo de JOHNE, en 1897 se ge-
. neralizO el emp.leo del ácido carbóico lfquido.

Los medios de inclusión adecuados s{guieron siendo ob-

jeto principal de búsqueda y en 1875 WALTER FlEMMING usó el
jabón.transparente y MATH!AS DUVAl recomendó el colodión; 1

ambos fueron desplazados por la celoidina, introducida por

PAUl SCHIEFFERDECKER eh 1882.

El método de la coloración regresiva de preparaciones

micro~cópica~, recomendado ~n 1875 por HERMANN, llegó a ad-
quirir fundamental importancia pero solo despuls de que
FlfMM!NG empleó en gran escala y con éxito dicho método, en
sus estudios sobre núcleo, en 1881. la combinación de hema-
toxilina-eosina fue utilizada por CARL DAVID WllHEM BUSCH,
en 1877, por RENALT en 1879 y por WllLIAM STIRLING en 1881;
desde entonces se ha convertido en la técnica histológica 1

más usada. la orceina, que es un colorante natural de ori--

gen vegetal ~:>btenido de Rocella tinctoria, fue utillzada
por primera vez por WEDl en 1878, y fue TAENZER, en 1891, 1

quien descubrió su especi•l afinidad por el tejido elástico

de 1879 a 1894, PAUl EHRliCH contribuye al desarrollo de la
técnica. de teñido por sus estudios acere~ del empleo de los
 83

colorantes de anilina en trabajos histológicos.

En 1885, CARL WEIGERT da a conocer ~u método perfecci!

nado de teñido con hematoxílin_a de la vaina medular. En - -
1886, PAUL EHRLICH descubrió la hematoxilina de la vaina me
dular. En 1886, PAUl EHRliCH descubrió la hematoxilina lici-
da, en 1885 se dió·a conocer la hematoxilina de DELAFIELO,
en 1892 fue publicado el modo de ~plicación de Ji hematoxi-.
lina férrica de MARTIN HEIDENHAIN. Entre 1876_y 1891 fue
postulada una teoría física para explicar el mecanismo de 1

las tinciones, de la cual FISHER fue el pionero y WIT~ un

seguidor ~e esta teoría, quien dió una explicación más am-
plia y la llamó "Teoría Quinónica".

· los adelantos en esta época se caracterizan por el re-

petido afán de mejorar más las aplicaciones de 1~ técnica 1

.de teñido mediant~ nuevas combinaciones. Surgen las colora-

ciones triples o tricrómicas cuando en 1889 VAN GIESON uti-
liza triple c~loraci6n con hematoxilina, fu¿sina ácida y--
ácido pícrico.

RANVIER, ALTMAN, CAlDWELL y MINOT tomaron parte en el

perfeccionamiento de la-s técnicas de c"orte, con el resulta-
do de que en 1892, con la introducción del microtomo rotat!
. .
rio de MINOT, se pudieron preparar cortes de hastá un ~icr!

metro de espesor. Paralelamente, con el perfeccionamiento '

de los microtomos fueron mejorándose las técnicas de inclu-
si6n y fijaci6n .. Entre 1889 y 1890, ALTMAN desarroll6 su m!
todo de fijación mediante liofilizaci6n, disecaci6n al va--
cfo previa congel_aci6n a -20°C; en 1892 TILLANT y en 1893.-
BLUM señalaron las propiedades del formol _como fijador; es-
tos procedimientos preservan los tejidos para su futuro es-
tudio~ y modificaban su consistencia de manera que los"cor-
te~ podían prepararse más fá~ilmente.

Entre 1888 y 1902 un grupo de cientffico~. EHRLICH, --

KNESCHT, MIESCHER, MAYER, UNNA, etc., elaboraron una teoría
química de las tinciones usando y combinando ampliamente
los colorantes para destacar. las diferentes estructuras de
los tejidos.

De 1889 a· 1929 se difundió am~liamente el empleo de

los ~olorante~ de anilina, se desarrollaron nuevos coloran-·
tes y tlcnicas de" tinción; posteriormente, los amplios avan
ces histoquímicos han sido aplicados a la histología, sur--
g~endo gran cantidad de mltodos histológicos, usadol exten-
sa~ente antes de ser axplicados.

De 1923 a 1929, WILHELM V. MOELLENDORFF lleva a cabo '

investi~aciones para esclarecer la teorfa del teñido histo-
lógico, y en 1924 ~stablece una diferencia entre el teñido
"por precipitación" y el teñido "por impregnación".
 85

Actualmente la t~cnica histol6gica cuenta con contri bu

cienes valiosísimas, de las que aquf es imposible hacer una
reseña hist6rica, afortunadamente la mayoría de los moder--
nos métodos histol6gicos llevan el nombre de s~ descubridor
y/o su modificador, además deJa fecha en que ésto ocurrió,
de mane.ra que contamos con un arsenal de información más· 6
menos precisa q~é permite tener noción clari de los avances
científicos q~e de esta área se suceden.
 86

TEJIDO EPITELIAL.

DE F I NI C I ON

Es un tejido integrado por células iontiguas con esca-

sa sustancia intercelular ~ue suele cub~ir superficies in--
ternas y externas del organismo y además puede derivar de '
cualquiera de las tres hojas embrionarias, y que cumple con
funciones de revestimiento o glandular (principalmente) o '
·de revestimiento especializado, realizando trabajos senso--
riales (como receptor de estímulos).

CLASIFICACION FUNCIONAL DE LOS EPITELIOS:

El tejido epitelial se clasifica de acuerdo a sus fun-

'
clones más notorias:

a) Epitelios de revestimiento.

b) Epitelios glandulares.

EPITELIOS DE REVESTIMIENTO:

Los epitelios de revestimiento son los encargados de '

cubrir las superficies internas y ex~~rnas del organismo. '
De acuerdo con la cantidad de capas de células que los inte
gran se subclasifican en:
 87

a) Epitelios simples.

b) Epitelios estratificados.

los epitelios simples són aqu~llos que en su constitu-

ción poseen un solo tipo de c~lulas dispuestas en una sola
hilera. Se clasifican se~ún la forma de sus c~lulas en tres
tipos d1ferentes; Planos, cilíndricos y cúbicos.

los epitelios planos se encuentran solo en lugares en

que se hallan muy protegidos de la abrasión y.erosi6n que '
podría descamarlos, ya que son delgados al extremo. Los epf
te14os planos pueden cubrir cavidades abiertas o cerradas,
como los endotelios vasculares. También, pueden estar sin 1

tapi4ar ninguna cavidad.

los epitelios cúbicos están formados por células cúbi-

cas. Frecuentemente son de·secci6n exagonal (transversal) y
cuadrada (longitudinal). Vistos en conjunto, dan la impre--
sión de un piso de mosaicos (Bloom-Fawcat). Como ejemplos 1

de ~pitelios cúbicos simples encontramos: Tiroides, plexos

coroideos y conductos excretores de algunas gl~ndulas.

los epitelios cilfndricos simples se pueden presentar

bajo diversos aspectos. No pueden ser con~iderados ·c~mo el!
mentas de simple recubrimiento, ya que algunos presentan
una capacidad secretora. El epitelio cilfndrico simple está
 88

constitufdo por c~lulas altas, de sección transversal pris-

m~tica, que se apoyan sobre una membrana basal contfnua. El
epitelio glandular (con c~lulas piramidales) no es más que
un ~pitelio cilfndrico alterado mec~nicamente para que pue-
da coronar una luz de tubo. El nOcleo de las c~lulas cflfn-
dricas tiene, por lo común forma ovalada.

A veces ias células epiteliales c~lfndricas sufren se~

sibles variaciones y presentan un aspecto peculiar. Un eje~

plo concreto son las células caliciformes, secretoras de m.!:!_

tina y que se ubican a nivel del tubo digestivo, epitelios

respiratorios, etc. Generalmente~ su citoplasma estS despl!
zado por la mucina almacenada en la célula. Cuando no hay '
m~s llfgar par~ contener la membrana plasm~tica de la célula
caliciforme libera la mucina. Son verdaderas gl~ndulas uni-
celulares.

Adem~s _ciertas células cilíndricas se especializan en

la recepción de estímulos, ya que est~n conectadas con las
terminaciones nerviosas.

EPITELIOS ESTRATIFICADOS:·

En la constitución de los epitelios estratificados, in

tervienen varias ~apas o estratos. Se clasifican en:
 89

-Pavimentoso estra~ificado.

-Cilfndrico estratificado.
-Polimorfo de transici6n transigente.

El pavimentoso estratificado est6 compuesto por varias

capas.

Fisiológicamente, está afectado a la protección. El nú

mero de estratos celulares que lo componen varfa según su 1

ubicación en el organismo, pero en lfneas gen~rales, el es-

quema estructural es id~ntico en todos los casos. Se compo-
ne, entonces, de varfas capas, de las cuales la supe~ior o
superficial es totalmente plana, semejando un "pavimento". 1

Algunos lo llaman escamoso.

Es el tipo clásico de la mucosa que cubre 1a cavi-~ad

1

bucal. La capa superficial se descama y es repuesta constan

temente por las c~lulas originadas en la mitosis de la~ ~a­

pas Gás profundas.

El epitelio va variando, en su forma, de la basal a la··

superficie. C~ntra el cori6n, se presenta cilíndrico o cúbi
co, y a medida que avanza hacia la superficie~ se torma más
aplastado.

Las células superficiales de la piel carecen de núcleo;

 90

tiene queraUna a nivel de la epidermis, ya que debe sopor-

tar mucha atrici6n y descamaci6n.

En cambio los epitel.ios de la boca, faringe, etc., que

no est4n tan expuestos a los desgastes continuos de la piel
no tierien queratina y sus nQcleos se ven bastante bien. Sin
embargo hay casos en que poseen queratohialina, en las célu
las superficiales del epitelio de determinadas zonas. Este·
epitelio es uno de los más generalizados, ya que recubre to
da la superficie del cuerpo, sus orificios y membran~s.

Se encuentra a nivel piel, ·mucosa bucal, faringea, la-

ringea, esof4gica, conducto auditivo externo, vagina, por--
ciones de uretra, etc.

El ciHndrico estrati.ficado. Es poco coman. Su estruc-

tura es a base de una serie de células ~Qbicas ·apoyadas en
el corion, sobre las cuales se asientan algunas filas de cé
lulas cilíndricas. Generalmente se los puede encontrar en '
puntos de transici6n entre epitelios pavimentases estratifi
cados y ciHndricos pseudo estr'at.ificados.

En el tipo pseudo estratificado, el epitelio se compo-

ne de una sola fila de células cilíndricas, pero el corte '
evidencia sus nOcleos a diferentes alturas. Esto hace que.
parezcan varias capas.
 91

El cilfndrico estratificado se encuentra a nivel de fa

ringe y laringe. El cilfndrico pseudo estratificado lo en--
contramos a nivel de aparato digestivo y genital masculino.

El epitelio polimorfo o de transición lo encontramos •

en la vejiga. las capas de epitelio se pueden presentar ba-
jo dos aspectos según el estado funcional del órgano.

Su estado de vacuidad, el epitelio está relajado y-ti!

ne· un cierto espesor. Cuando la vejiga se llena de orina, •
entra en estado de repleción y se estira de tal forma que
el epitelio queda tenso y su espesor s~ angosta.

En los epitelios polimorfos, la me~~rana basal no exis

- 1
te porque, en tal caso, al estirarse el epitelio se rompe--
ría, o bien! debido a la rigidez de la membrana, no podría
extenderse.

El epitelio de transición lo encontra~os en el aparato

urinario: Ureter, vejiga, pelvis renal, etc.

EPITELIO GLANDULAR:

Señalamos qUe hay dos clases principales de tejido epi

telial: 1) Membrana de ~ubierta y reve~timiento y 21 Glánd~·

las, a las que nos referimos ahora.

 92

CLASIFICACION OE LAS GLANOULAS:

Aunque las glándulas pueden clasificarse de muchas ma-

neras, hay dos grupos principales: 1) Glándulas exocrinas,
provi~tas de conductos, que llevan la secreción a la super-
ficie epitelial de la cual se originaron y por ello fuera '
de los tejidos corporales, y 2) Gl~ndulas endocrinas, que '
carecen de conductos y tienen que secretar hacia los teji--
dos corporales (generalmente capilares), por lo cual sella
man glándulas sin conducto.

GLANOULAS EXOCRINAS:

Las glándulas exocrinas consisten en dos componentes '

epiteliales principales: 1) Grupos de células especializa--
•
das llamadas unidades secretorias que.sintetizan la secre--
ción elaborada por la glándula y 2) Conductos tubulares que
vacían su secreci6n en alguna superficie.

Las glándulas exocrinas se clasifican de varias mane--

ras:

GLANDULAS SIMPLES Y COMPUESTAS:

Si una glándula solo tiene un·conducto no ramificado '

se le llama GLANOULA SIMPLE. Sin embargo si posee un siste-
 .93

ma de conductos ramificados que permite llevar la secreci6n

de gran nGmero de unidades secretorias se llama GLANDULA --
COMPUESTA.

GLANOULAS TUBULARES Y ACINOSAS Y ALVEOLARES:

Si los acumules de c~lulas que forman la unidad o. las· 1

unidades secretorias de ~na glándula tienen forma -de tubo 1

la glánd-la se lJamará tubular. Cua~do las unidades secreto

rias son más redondeadas se dice que la glándula es acinosa
(Lat. acinus, uva) o alveolar (Lat. alveolus, pequeño saco
·hueco). Si las glándulas poseen unidades que tienen algunas
caracterfsticas de ambos, se denominan GLANDULAS TVBULOAL--
.vEOLARES.

GLANDULAS MUCOSAS, SEROSAS Y MIXTAS:.

Hace mucho tiempo se advirtió que 1a secreción de alg~

nas ~lándulas era más viscosa y pegajosa y las glándulas

que elaboran esta clase de secreción se llaman GLANDULAS MU
COSAS.

Tambi~n se apreció que la secreción de otra clase de '

glándula era relativamente transparente y acuosa, que recor
~6 a alguien el suero, por lo cual las glánd-las se denomi-
naron SEROSAS, De los conductos de algunas glándulas salen
 94

secreciones mucosa y serosa, y dado que estas gl!ndu~as po-

seen las dos clases de unidades secretorias (mucosas y serQ
sas) se llaman GLANDULAS MIXTAS.

GLANDULAS MEROCRINAS, HOLOCRINAS Y APOCRINAS:

Otra clasificación de Jas gl!ndulas se funda en la for

ma en la cual inicialmente se supuso que producían la secre
ción.

GLANDULAS MEROCRINAS:

Tienen células secretorias ejem: Las células acinosas

del p!ncreas y las células calciformes. En este caso la se-
cr~ción es un producto ,de la célula y se expulsa a través 1

de su membrana en ~esfculas membrandsas de modo que ésta se

mantiene integra, de lo cual se deduce que no hay pérdida 1

de citoplasma en él fenómeno de secreción.

GLANDULAS.HOLOCRINAS:

Por fortuná, holocrina (gr. holos, _todo) significa que

para que una gl!ndula holocrina secrete, deben d~sprenderse

células completas, morir y convertirse en la secreción glan

gular.
 95

GLANDULAS APOCRINAS:

Cuando solo se disponfa de ME, se consideraba que en '

algunas gl!ndulas la llegada de la secreción a la luz de la
unidad secretoria exigfa cierta pérdida del citoplasma su--
perficial de la célula secretoria, de modo que se converti-
rla en. parte de la secreción. Sin embargo, con el ME se ha
demostrado que el concepto de que las células pierden algo
de citoplasma durante la secreción no era valedero, y es --
probable que la mayor parte de las glándulas antes llamadas
~pocrfnas ~n realidad serán mero<rinas.

GLANDULAS ENDOCRINAS.

La estructura de las glándulas endocrinas es bastante

más sencilla que la de las exocrinas, porque no poseen_con-
ductos.

ALMACENAMIENTO INTRACELULAR:

Todas las glándulas endocrinas almacenan secreción en ··

menor o mayor medida. Esto se logra en la mayor parte· de
los casos, por el almacenamiento intracelular. Hay granulos
sec~etorios en las <élulas de muchas gl!ndulas endocrinas,
en las cuales se almacenan pasajeramente antes de ser secr!
tados.
------------------------------------------------------------ ---------

96

ALMACENAMIENTO EXTRACELULAR:

Las células que de otra manera TOrmaran un acumulo se-

cretan un dep6sito ·extracelular de secreci6n en el centro '
del conglomerado, en consecuencfa, la secreci~n se almacena
extracelularmente,' en lo que se -le llama folfculo.

CAPSULAS, TRABECULAS Y RIEGO SANGUINEO:

Las glándulas éndocrinas están éubiertas por una cáps~

la de tejido conectivo, que suele emitir prolongaciones ha-

cia la sub~tancia de una glándula, en forma de travéculas 1

que dan sostén interno y transportan vasos sanguf~eos al in

terior.

FUNCIONES DE LAS GLANDULAS ENDOCRINAS:

Aunque la mayor parte de ellas elaboran hormonas, es 1

correcto llamar endocrinas a una glándula aunque no elabore

una hormona siempre que secrete un producto útil hacia el 1

cuerpo.

ORIGEN EMBIOLOGICO:

Embrio16gicamente, los epitelios pueden derivar de

cualquiera de las tres hojas embrionarias, pero un tipo de
 97

epitelio puede derivar de una sola hoja. Por ejemplo:

Ectod~rmico: piel, glándulas sebáceas y sudorfparas,

Mesod~rmico: la capa endotelial de los vasos sangu1neos

Endod~rmico: el epitelio del estOmago y sus glándulas.

ESTRUCTURA HISTOLOGICA DE LOS EPITELIOS:

Qentro del e·studio del tejido epítel ial se deben cosi-

derar dos partes fundamentales.constitutivas asociadas:

a) epitelio propiamente dicho,

b) Cori6n o tejido conjuntivo anexo.

COR I ON

Se le denomina dermis o l§mi~a propia.

En su constitución interviene TEJIDO CONJUNTIVO LAXO.-

Es imposible tener un epite1io ~in su cori6n o conjuntivo '
subyacente, .ya que es el que le permite la nutrición. Por 1

el cori6n transcúrren elementos vasculares que vuelcan la 1

sangre en su seno. Además, los elementos nutritivos atravi~

san la MEMBRANA BASAL y llegan a la porción epitelial del •

conjunto. En el cori6n se encuentran terminaciones nervio--
sas que dan la sensibilidad al epitelio, el tejido conjunt.!.
 98

vo participa ofreciendo sost~n a la porci6n epitelial. Por

lo tanto si el corion no existiera, el epitelio morirfa. El
epitelio y el corion no est6n en contacto directo sino a
trav~s de una m'embrana de naturaleza fibrilar-conjuntiva; '
es la mem~rana basal o membrana de BOWMAN. Es una formaci6n
que separa el epitelio del cori6n subyacente.

PAPILAS DEL CORION:

El lfmite epitelio-corional no es uniforme. El ·corion

p res e n·t a e 1e v a c. i o n e s ba s t a nte noto r i a s d en omi na da s pa p i 1a s .

Las papilas pueden sobresalir por intermedio del epi t~

lio en la superficie. Tendremos según el caso, papilas DELA
MORFAS
l
O ADELAMORFAS.

PAPILAS DELOMORFAS:

Son aqu~llas que salen a la supe~ficie, es decir, emp~

jan el epitelio.

PAPILA$ ADELOMORFAS:

El corion tiene tambi~n papilas que no salen a la su--

perficie. Son las adelomorfas.
 99

ESTRUCTURA HlSTOLOGlCA DEL CORION:

El corion est! constitu1do de tejido conjuntivo laxo,-

vale decir que. forma parte de El la mayorfa de los elemen--
tos d~l tejido cpnjuntivo. Sin embargo predomirian las fibras
de fOlágeno, sobre todo en tejidos antiguos.

C110LOGIA EPITELIAL;

En la citologfa epitelial, o el estudio de la célula '

epitelial aislada, considerarnos una célula tipo de la cual
veremos sus caracteristicas de una y o~ra variedad.

F O R MA

1
Adoptan formas muy variadas. las hay cDbicas, cilfndri
cas, piramidales, poliédricas, caliciformes~ etc •

.TAMA~O:

Generalmente su diámetro es superior a los tres micro-

nes.

CITOPLASMA:

Es incoloro. En algunos lugares resalta su transparen-

 lOO

cia (cristalino). Otras veces toma el_color del 6rgano

(piel), en estos casos encontramos presente pigmentos.

Efl algunas células, como las caliciformes, encontramos

rnaterial·mucígeno. En éllas hay ciclos de actividad secret~

ra. El ciclo comienza con la elaboración de mucina que em--

pieza~ aumentar en cantidad hasta que 1~ célula se hincha,
constituyendo lo que le llaman "globet-cell". Luego la muci
1
na se libera y se reinicia el ciclo. Poseen gran cantidad
de mitocondrias, sobre todo las que tienen capacidad secre~

tora.
~ 1

Los organoides se disponen de modo especial. La gran 1

mayorfa de lis mitocondrias se encuentran debajo del nOcleo

el apar~to de Golgi se ubica sobre el mismo, al igual que 1

el centriolo, que es diplosómico.

NUCLEO:

El tamaño del núcleo es proporcional a la célula. Lo 1

más importante es su ubicación, se encuentra entre el ter--

cio medio y el tercjo inferior. Es muy basófilo.

CONCEPTO DE POLARIDAD:

En toda célula epitelial encontramos dos polos. El polo

 101

que se orienta hacia la membrana basal se denomina: Polo b~

sal o nutricio. El otro polo que mira hacia "afuera" se de-

nomina apfcal o excretor. El núcleo est4 en el polo basal.

PATOLOGIA TUMURAL DE LOS EPITELIOS:

Dentro del tejido epitelial hay dos tipos de tumores '

malignos: el ADENOCARCINOMA y el CARCINOMA, tanto uno como
otro llevan a la muerte.

El Adenocarcinoma es el tumor maligno de los epitelios

glandulares (de mama).

El ~arcinoma es el tumor maligno de los epitelios de '

revestimiento (de labio y lengua).
 102

CAPITULO XI

TECNICAS GENERALES PARA TEJIDO EPITELIAL.

El mismo tejido puede observarse con dH-erentes técni-

cas que brindan un~ imagen de conjunto, pero lJ nitidez o '
evidencia d~ ciertas estructuras depende de la técnica.

11.1 METODOS COMBINADOS DOBLES.

Epite 1 i o de Re ves ti mi en t o y g i a ndu1 a r; Hi p óf i ·si s , Pi e 1

Humana (pl_?nta de-l pie), Páncreas; Suprarrenales.

METODO DE HEMATOXILINA-EOSINA.

(Hematoxilina de Harris - e0sina alcohólica).

1.- Fijar en formo 1 al 10%.

2.- Hacer -:c·rtes por congelación o por parafina.

3.- Lavar 1 os cortes en a~~ ua destila da.

4.- Teñir con hematoxilina de Harris, de 1 a 3 min.

5.- Virar con agua de 1 a llave.

6.- Lavar con agua destilada para detener el vi raje.

..
 103

7.- Deshidratar con alcoholes de 50° y 70°, por 3 min.-

en cada 1.

8.- Tefiir con eosin~ alcoh61ica, de 1 a 3 ruin.

9.- Deshidratar con alcoheles de 96° (dos cambios) y

absol~to, durante 5 min. en cada alcohol (sOlo si
los cortes son por parafina pasar al absoluto).

10.- Aclarar con creosota, si los cortes fueron por co~

gelaci6n, o en xilol, si fueron por parafina, du-

rante 5 minutos.

11.- Cubrir con b&lsamo de Canadá o Resina.

RESULTADOS:

Núcleo y Cartílago: Azul Morado.

Protoplasma y _sustancias intercelulares: De Naranja 6
Rojo.

PREPARACION DE LOS COLORANTES:

-Hematoxilina-de Harris:
- Eosina alcohOlica
- Eosina azulosa 1.0 9.
- Orange G. 1.0 9.
- Alcohol de 70° 100 ce.
 104

Se mezcla todo en frfo y se filtra. No debe prepararse

demasiado porque las soluciones de mucho tiempo se alteran.
Filtrar cada vez que se use.

IlOTA:
El método combinado de Hematoxili.na-eosina puede hacer
se también utilizando otros tipos ~e hematoxilina, como la
de Ehrlich, de Delafield, etc., variando el tiempo de teñi-
do o la .dilución del colorante para que el te~ido sea m~s
1

lento y controlable, mediante pruebas. Si la colorac16n de

la Hematoxilina es excesiva puede rebajarse con alcohol o 1

. agua acidulada (unas gotas de Scido clorhfdrico en 100 ce.

de agua destilada o alcohol_ de 96°) y enjuagar ABUNDANTEME!
TE EN AGUA uná vez obtenida la coloraci6n deseada.

La eosina puede ser aicoh6lica o acuosa (se prepara de

la misma manera, sustituyendo ~1 alcohol· por agua destilada)
Cuando se utiliza la eosina acuosa se elimina el paso 7 y . 1

en el paso 9 se deshidrata desde alcoholes 50°, 70°.

METODO DE HEMATOXILINA DE HARRIS.

1.- Fijar en formol al 10%.

2.- Hacer cortes delgados por congelaci6n o por parafi

na.

1.
 105

3.- Lavar los cortes en agua destilada.

4.- Teñir con hematoxilina de Harris, de 1 a 3 min.

(la coloraci6n debe verse homogénea).

5.- Lavar en agua destilada.

6.- Virar en agua de la llave o en agua· destilada con

granos.de carbonato de litio.

7.- Enjuagar en agua destilada.

8.- Deshidratar en dos cambios de alcohol de 96°.

9.- Aclarar con creosota si los cortes ~on por ~ongel~

ci6n, con xilol si son por parafina.

10.- Cubrir con b§lsamo de Canadá o Resina.

RESULTADOS:

Núcleos: Morado.
Otros elementos: Diferentes tonps de azul.

PREPARACION DEL COLORANTE:

~Hematoxilina de Hatris:
-Hematoxilina (Merck) 1.0 g.
-Oxido rojo de Mercurio 0.5 g.
 106

í
Sulfato de aluminio y Amonio
o Potasio (Alumbre) 20 g.

Alcohol Etflico absoluto 10 ce.

Agua destilada 200 ce.

Disolver la hematoxilina en el alcohol absoluto, cale~

tando a baño maría y tapando; ~n otro recipiente disolver '

el alumbre ~n lbO ce. de agua destilada; se mezclan las dos
soluciones y se añaden 1os 100 ce. del agu.a réstante. Se
hierve la mezcla lo más rápido posible, y se agrega cuidad~

samente el Oxido rojo de Mercurio (puede explotar) hasta

que toma un color rojo pOrpura, enseguida se ~nfrfa con hi~

lo o a baño marfa y se filtra 10 veces. Se le agregan d~ ·3

a 5 gotas de ácido acético por cada 10 ce. de solución.

NOTA:
Debe filtrarse cada vez que se vaya .a usar y debe gua.!:
darse en ·frasco ámbar.

11.2 METODOS TRIPLES:

HIPODISIS: PIEL HUMANA (PLANTA DEL PIE~ ~ANCREAS: SU--

PRARRENALES.

METODO TRICOMICO DE GALLEGO;

1.- Fijar en Formol al 10%.
 107

2.- Hacer cortes por con~elaci6n.

3.- Lavar en agua destilada.

4.- Tefiir ~on la soluci6n de fuesina, durante 5 min.

Conviene tefiir el mismo dfa que se hicieron los
cortes.

5.- Pasar los cortes al virofijador, durante 5 min.

Aquf se dejan todos los cortes y uno por uno se
montan en el portaobjetos y se van pasando por:

6.- Lavar en agua destilada.

7.- Hacer una coloración de fondo con picrocarmín de '

fndigo, durante un minuto.

s.·- Deshidratar en tres cambios de alcohol de 96°,de

1 a 3 min. en ¿ada uno.

9.- Aclarar en dos cambios ~e xilol, de 1 ~ j min. ca-

da uno.

10.- Cubrir con B~lsamo de Canad~ o Resina.

Para aclarar no debe usarse Carbol-xilol.

RESULTADOS:

Núcleos; Rojo Violáceo.

Haces Colágenos: Azul Verdoso.
Fibras Musculares: Verde Amarillento.
 108

Queratina y Eritrocitos: Amarillo.

PREPARACION DE LAS SOLUCIONES:

-Solución de Fucsina:
Formol al 1% 10 ce.
Fucsina Fenicada de Zuehl 5 gotas
Acido Acético 1 gota

-~ijador:

Formol al 1%. 10 ce.

A·cido AcHico 2 a 4 gotas

-Picrocarmín de Indigo:

Solución acuosa saturada 100 ce.

de· Ae i do píe r i e o

Carmín de índigo 0.25 g.

Agua destilada 15 ·ce.

EPITELIO FIBRILLAS. LIMITES CELULARES Y MEMeRANA BASAL.

METOOO OE DOBLE IMPREGNACION EN ~ALIENTE de Rfo~Hortega pa-
r~ armazones Fibrilates y c~lulas.

1.- Fijar en formol al 10%.

2.- Hacer cortes por congelación.

3.- Lavar en agua amoniacal. de 15 min. a 24 Hs.
 109

4.- Lavar en agua destilada.

5.- Hacer la impregnaci6n en Nitrato de Plata al .2~. •

calentando hasta que los cortes tomen un color ta-
baco rubio.

6.- Lavar rápidamente en agua destilada.

7,- Hacer una segunda impregnaci6n en carbonato de·pl!

ta amon1acal con tres gotas de piridina. Calentan-
do hasta que l~s cortes tomen un color tabaco oscu
ro.

8.- Lavar rápidamente en agua destilada.

9.- Reducir en formol al 10%, de 1 a 2 min.

10.-. Lavar en agua destilada.

11.- Virar en Cloruro de Oro, 15 min. en frío (gris), '

reforzando la coloráci6n en caliente de 10 a 40 --
min. (violeta intenso).

12.- Fijar en hipo~ulfiio de ·sodio al 5%, por 5 min.

13.- Lavar en agua destilada.

14.- Deshidratar· en alcohol de 96°.

15.- Aclarar en cerosota.

16.- Cubrir con Bálsamo de Canadá o Resina.

NOTA:

Pa~a Epiteliofibrillas· hacer las sigu~entes modifica--

 110

ciones, cortes gruesos por congelación y sin lavar pasar al

nitrato de plata al 2%, o si se reciben en agua destilada,-
poner dos terceras partes del formol al 1% y una tercera
parte de agu_a, pues los cortes deben teñer formol.

RESULTADOS:

Fibras Nerviosas·: Negro intenso.

,-
Núcleos: ~e gro granuloso.
Soma celular: Gris Violáceo muy tenue.
<
"~ Colágena: Gris violáceo.
Precolágena: Pardo.
Fibras reticulares: Negro.
Músculo e·s tri a do: Gris.

~METODO DE IMPREGNACION PARA EPITELIOFIBRILLAS de Río-Hortega

1.- Fijar en Fqrmol al 10%, por 10 días o más,

2.- Hacer cortes delgados por congelación.

3.- Sin lavar, impregnar con carbonato d~ plata más 15

gotas de piridina por cada 10 ce. de carbonato; si
se enturbia la solución pasar los cortes a una nu~

wa. Calentar a 40 - 45°C, hasta que iomen un color

tabaco.

4.- Lavar abundantemente en agua destilada, mfnimo

tres cambios.
 111

5.- Reducir e~ formol al 2%.

6.- lavar en agua destilada.

7.- Deshidratar en alcohol de 96°.

8.- Aclarar en creosota y cubrir con bálsamo de Canadá

o Resina.

RESULTADO"S:

[spiteliofibrillas: Negro.

NOTA:
Para mitocondrias impregnar intensamente en carbonato
de plata no reduciendo en formol y virando a fondo. con clo-
ruro de oro.

METODO DE FUCSINA ACIDA --AZUL DE ANILINA para gránulo.s ba-

sófilos y acidófiios de la Hipófisis.

1.- Fijar en formol al 10%.

2.- Hacer cortes por congelación.

3.- lavar en agua destilada.

4.- Pasar al mordente de 12 a 18 h.rs.

5.- Lavar en agua <le la llave, durante 10 min. o m~s.

6.- Teñir con hematoxilina de Harris durante 10 min.

7.- Diferenciar en alcohol ácido al. 1%.

 112

8.- Lavar en agua de la llave hasta que los cortes ten

gan un color azul p~lido.

9.- Teñir con fucsina ~cida al 1%, por 10 min.

10.- Lavar en agua de la llave durante 5 min.

11.- Enjuagar en agua destilada.

12.- Contrateñir con azul de anilina, de 5·a 15.min.

13.- Lavar en egua de la llave por 5 mi~.

14.- Diferenciar en alcohol de 96° por 5 min.

15.- Deshidratar con acetona, acetona-xilol (1:1) y xi-

lol, por s. min. en cada uno.

16.- Cubrir con bálsamo de Canadá o Resina.

RESULTADOS:

Gránulos acidófilos: Anaranjados.

Gránulos basófilos: ·Azul cobalto.
Eritrocitos: Naranja intenso.
Tejido conectivo: Azul brillante.

PREPARACJON DE SOLUCIONES:

-Mordente:

Bicromato de potasio 2.5 g.

Agua destilada 100 ce.
 113

Acido acético glacial S.O ce.

-Fucsina ácida:
Fucsina ácida l .. o g.

Agua destilada 100 ce.

-Azul de anilina-oranse G.
Azul de anilina soluble en agua o.s 9
Organge G. ~.0 g
Acido fosfomolíhdico 1.0 g
Agua destila da 100 ce.

11.3 METODOS ARGENTICOS (Límites celulares y membrana ba--

sa 1).
METODO DE IMPREGNÁCION SENCILLA EN FRJO DE RIO-HORTEGA

1.- Fijar en.formol al 10%.

2.- Hacer cortes delgados po~ congelación.

3.- Lavar abundantemente en. agua destilad~.

4.~· Sumergir los cortes en carbonato de plata, durante

20 min. En este punto los cortes p.ermanecen incolo
ros:

5.- Reducir en formol al 1%. Aqu1 los cortes permane--

cen, a~quieren un color tabaco obscuro.

6~- lavar en agua destilada.

 114 .

7.- Virar en frfo en cloruro de oro, durante lO min.

8.- Colocar los cortes en hiposulfato de sodio al 5%,-

durante 5 min.

9.- Lavar en agua destilada. Se puede dar una colora--

ci6n de fondo con picrocarmfn de fndigo, por un mi
nuto, seguido de lavado y continuar con el paso 10.

10.- Deshidratar en alcohol a ~6°.

11.- Aclarar en creosota.

12.- Cubrir con bálsamo de Canadá o Resina.

RESULTADOS:

El colorante destaca los nú"cleos y el carbonato las fi

bras nerviosas.

NOTA:
En este m!todo el carbonato de plata se preci~Íta con
mucha facilidad, por lo que es necesar~o seg0ir cuidadosa--
mente las reglas para los mHodos de plata dad-os en el apé~

dice.
 115

METODO ARGENTICO (LIMITES CELULARES Y MEMBRANA BASAL)

METODO DE IMPREGNACION CON CARBONATO SIMPLE EN CALIENTE:

1.- Fijar en formol al 10% fragmentos de no m(s de.O.S

ce. de 1 a 3 meses.

2.- Hacer cortes por congelación, de 10 a 12 micra~.

3.- Lavar con agua amoniacal., de 10 a 30 min., para

eliminar totalmente el formol.

4.- Lavar en agua destilada.

5,- Hacer la impregnación en carbonato de pl~ta amonia

cal con tres gotas de piridina, calentando a 60°C,
hasta qu~ los cortes tomen color café tabaco, agi~

tando constantemente.

6.- Lavar en agua destilada. En donde los cortes deben

tomar un color ámarillo doráceo.

7.- Reducir en formol al 1% durante 30 seg.

8.- Lavar en agua destilada. S~ se desea, virar en clo

ruro de oro al 1 por ·sao, durante 15 min. en frío,
y 15 min. en caliente~ los cortes deben_tomar un '
color gris. Pasar los cortes a hiposulfito de so--
dio al· 51, durante 5 min. moviendo lós cortes has-
ta que tomen un color pOrpura .

. 9.- Lavar en agua destilada.

10.- Deshidratar en alcohol de 96°,

 116

11.- Aclarar en creosota. Los cortes pueden dejars~

aquf de un dfa para otro.

12.- Cubrir con b4lsamo de Canad~ o Resina.

RESULTADOS:

Núcleos: Café (sin virar), o púrpura (vi--

rando en cloruro de oro).

Fondo: Tonalidades de café ó púrpura.

~1ETDDO DE FLOXINA-HEMATOXILINA DE CROMO para gránulos basó-

filos y acid~filos de páncreas, de Gomori.

1.- Fijar la Bouin, de 12 a 24 hrs.

2.- Hacer cortes delgados por parafina.

3.- Fijar nuevamente en Bouin, de 12 a 24 hrs.

4.- Lavar en agua destilada, hasta quitar el exceso de

ácido pícrico.

5.- Poner 1 os cortes en la solución durante 1 min.

6.- Decolorar en la Solución D.

7.- Lavar en agua destilada.

8.- Teftir con la solución E, por 10 a 15 min, contro--

lando microsc6picamente a intervalos, hasta que
las células beta se observen azules. ,
 117

9.- Diferenciar en la soluci6n F por 1 min.

10.- lavar con agua de la llave hasta que los cortes se

vean azules.

11.- ContrateHi~ con la solución G durante S min.

12.- Lavar en agua d~ la llave.

13.- fasar los cortes a la solución H por 1 Min.

14.- Lavar en agua de la llave_hasta que los cortel se

observen en color rojo.

15.- Diferenciar en alcohol de 96°. Si los cortes están

sobrete~idos con floxina ·por 5 seg.- en ~lcohol de
80°.

16.- Deshidratar ~on el alcohol absoluto.

17.- Aclarar con xilol.

18.- Cubrir con bálsamo de Canadá o Resina.

RESULTADOS:

Células alfa: Rojo.

Células beta: Azul.
Células delta: Rosa o ligeramente rojo.
Células acinosas: Rosas o decoloradas.

PREPARACION DE LAS SOLUCIONES:

-Soluci6n A:
Permanganato de potasio al 1%.
 118;

-Soluci6n B:-
Acido sulfúrico acuoso al 5%.

-Soluci6n C:
Agua destilada 49.5 ce.
Soluci6n A 47.5 ce.
Solución B 3.0 ce.

·-solución 0:
Metabisolfito de sodio acuoso al ·3%.

-Solución E:
Hematoxilina de alumbre de cromo de Gamori,
Alumbre de cromo acuoso al 3% 50 ce
l
Hematoxilina aciosa al 1% 50 ce
Dicromato de potasio al 5% 2.0 ce
Acido sulfúrico al 31 3.35 ce

-Solución F:
Alcohol al 70% 99 ce
Acido clorhfdrico concentrado l.cr·cc

-Soiución G:
Floxina acuosa al 0.5%

-Solución· H:
Acido fosfotungfstico acuoso al 5%.
HETODO DE IMPREGNACION PARA FIBRAS NERVIOSAS Y SISTEMA CRO-
MAFIN VARIANTE BARROSO-MOGUEl. (SUPRARRENALES).

l.- Fijar en formol al 10::, no menos de diez dfas.

2.- lavar abundantemente en agua de la llave.

3.- Hacer cortes por congelación de mediano grosor. Re

cepción de los cortes en agua destilada.

4.- Poner los cortes en mezcla explosiva el día del

corte (piridina, amoniaco y alcohol de 96° a par--
tes iguales).

5.- Lavar los cortes en agua destilada durante 10 min.

6.- Hacer la impregnación en nitrato de plata al 2%, '

en caliente.

7.- Lavar los cortes en agua destilada, de 15 a 30 seg.

'
8.- Hacer una segunda impregnación en carbonato de pl!

ta amoniacal más tres gotas de piridina, en cali~!

te.

9.- Sin reducir, lavar r~pi damente en agua .des ti 1 a da , -

de 30 a 60 seg.

10.- Poner los cortes en el oruro de oro en frfo, duran-

te 15 min.

!l.- Poner los cortes en cloruro de oro en caliente, du·

rante 15 min.

12.- Pasar ros cortes a hiposulfito de sodio, poniendo

 120

de 1 a 3 gotas de amoniaco~

13.- Lavar en agua destilada, de 1 a 3 min.

14.- Lavar en agua destil.ada, de 1 a 24 hrs.

15.- Deshidratar en alcohol de 96°, de 30·a 60 seg.

16.- Aclarar en creosota, de 15 min. a 24 hrs.

17.- Cubrir con b~lsamo de Canad~ o Resina.

NOTAS:
a) Usar solo 6 cortes por técnica.

b) Procurar que los cortes naden en el nitrato, para

evitar que se peguen al fondo del pocillo, hasta
que tomen un color tab~co rubio.

RESULTADOS:

Células cromafines: Púrpura.

Granulaciones: Ca~é oscuro o negro,

METO DO DE SCHMORL (SUPRARRENALES: P.ARA CHULAS CROMAFINES).

1.- Fijar el 6rgano lo m~s fresco posible en fijador '

de Orlhi, durante dos dfas, a pasar a una soluci6n
de bicromato de potasio al.2.5%, por dos días m~s.

haciendo un total de cuatro días para la cromaci6n.

 121

2.- lavar durante toda la noche los fragmentos antes '

de cortar.

3.- Hacer cortes por congelaci6n.

4.- lavar en agua desti1ada.

5.- Teñir con Giemsa diluido (10 gotas ~n 10 ce de

de agua destilada), de 24 a 36 hrs.

6.- lavar en agua destilada.

7.- Diferenciar en ácido acético al 0.25%, controlando

el color de los cortes que debe ser azul, pasando
los cortes uno a uno.

8.- Des~idratar rápidamente en alcohol de 96°. Tenien-

do en cuenta que el al coho1 los decolorea, se debe
hacer la deshidratación corte por corte.

9.- Pasar los cortes p~r a~etona, acetona-xilol (1:1)

y xilol, por 3 min. en cada uno.

10.- Cubrir con b~lsamo de Canad~ o Resina.

RESULTADOS:

Citoplasma de células:
Croma fines: Verde.
Núcleos: Azul oscuro.
Tejido conjuntivo: Rosa.
 122

METODO DE WIESEL (SUPRARRENALES; PARA CELULAS CROMAFINES}.

1.- Fijar de uno a cuatro dfas en el fijador Wiesel y

pasar a bicromato de potasio al 5%, de uno a dos '
dtas.

2.- lavar en agua destilada, de 2 a 24 hrs.

3.-· Hacer cortes por c~ngelaci6n.

4.- Lavar en agua destilada.

5.- Tenir en un~ solución acu¿sa de azul de toluidina

al 11: durante 20 min.

6.- Lavar en agua. destilada tres ~ cuatro veces.·

7.- Pasarlos a una solución acuosa de safranina al 1%

durante 20 min.

:8.- Óiferenciar en alcohol de 96° hasta que los cortes

se vean azules.

9.: Deshidrat~r y aclarar en acetona, acetona-xilol

(1:1) y xilpl, por 3 min. en cada uno.

10.- Cubrir con bálsamo de Canadá o Resina.

RESULTADOS:

Células crcimafines: Verde.

·Núcleos: Rojo.
Citoplasma: P.z ul •
 123

NOTA:

El bicromato de potasio tiende a precipitarse, si ~sto

sucede hay que cambiarlo manteni~ndoio en un frasco ámbar '

herméticamente tapado.

MtTODO DE GOMORI: (SUPRARRENALES; PARA GRANULOS CROMAFINES)

1.- Fijar en formol al 10%.

2.- Hacer cortes por congelación.

3.- Lavar en agua. destilada.

4.- Teñir con azoca rmf n G, de 60 a 90 mi n., a 58°C.

5.- Lavar en agua destilada.

6.- Pasar a alcohol de 96°.

7.- Diferenciar en alcohol, anilina por 15 min.

8.- Lavar rápidamente en agua destilada.

9.- Pasar a una solución de ácido fosfotangstico, por

20 min.

10.- Lavar en agua corriente durante 1 min.

11.- Teñir en azul de anilina - amarillo de quinoieina,

de·ls a 40 min.

12.- Lavar en agua destilada.

13.- Deshidratar en alcohol de 96° ~ absoluto, hacer

dos cambios, de 5 min. en cada uno.
 124

14.- Aclarar con xilol.

15.- Cubrir con balsamo de Canada o Resina.

RESULTADOS:

Gránulos cromafi nes, e él ul as al fa de 1 os islotes de 1 a

·pancrearticos, .algunas c~lu1as de la pituitaria anterior, '
· franulaciones neutrófila' y mielocitos. Rojo parpura ..

PREPARACION DE LAS SOLUCIONES:

-Azucarmín G:
Azucarmín G 0.05 g.

·Acido acético 1.0· ce.

Agua destilada 100 ce.

-Alcohol anilina:
Aceite de anilina 1.0 ce

·Alcohol de 96° 100 ce

-Acido fosfotumático:
Acido iosfotangstico 3.0 9
Agua destilada 100 ce.

-Azul de anilina-amarillo de guindleina:

Az u 1 de a ni 1 i na 0.5 g.
 125

Quiniloina amarilla u Orange G. 2.0 g.

Acido fosfotOngstico LO g.
Agua destilada. 100 ce.
 126

CONCL US I ONE S

Con frecuencia observarnos que los intentos a realizar

en cuaRto a las técnicas histológicas, obtenidas de un li--
bro o gufa, no se realizan plenamente y de forma ampliamen-
te convencional, aún cuando nos apeguemos estrictamente a '
las técnicas y métodos sugeridos por el autor; en base a é~
to nos dimos cuenta que el fracaso se de~e en gran parte a·
que no se tiene el conocimiento de las condiciones y proce-
dencia del material vivo, además de que los reactivos han '
resultado ser otro.opstáculo para el éxito de nuestro prop~

sito.

De ial forma que ~ualquief técnica a utilizar por pri-

mera vez y lograr resultados "positivos deberá la muestra
ser someiida estrictamente y sobre todo si es la prim~ra

vez a una serie de pruebas de ensayo y error, hasta lograr

nuestro objet,vo y de esta forma no decaer en el primer in-

tento.

En 1o que .respecta a resultados que se presentan al

pie de cada técnica o método histol6g1co puede concluirse '
que es una síntesis de lo que se propone encontrar, en gen!
ral en los tejidos, sin embargo, es importante hacer notar
que cada tejido en particular responde de manera muy singu-
lar y exclusiva ante determinados reactivos empleado en el
 127

momento de someterlo a nuestro estudio histol6gico, por lo

. que las técnicas a utilizarse deberán efectuarse de manera
más minuciosa.

En base a nuestra experiencia adquirida, ~onsideré que

~1 de gran importancia esta rama de la medicina - la Histo-
logfa Epitelial - ya que a trav~s de ~ita el estudiante 1~

grará obtener una visi6n.inf~rmativa y práctica de los te-

mas a estudiar así como sus aplicaciones.

Y finalmente quiero hacer notar que en la práctica de

técnicas histol6gi~as; es ~e gran importancia g~iarse siem-
pre de manera crftica, buscando obtener condiciones y resul
tados óptimos en.cada· uno de los pasos a seguir, además de
,
como se mencionaba al principio, someter Ruestro estudio a
la prueba de ensayo y error y de esta forma lograr obtener
el éxito. Además cabe mencionar que los métodos propuestos
en este manual son una herramienta científica ya que la ex-
periencia teórica nos hizo observar que las t.cnica~ histo-
16gicas nunca han sido estáticas, éstas siempr~ ofrecen po-
sibilidades nuevas o de c~ntinuar evolucionando, por lo que
se debe evitar llevar a cabo variaciones superfluas, ya q~e

puede darsé a través de éstos el error; ~ebemos recordar

que cada una de las técnicas mencionadas han sido ya compr~

badas por sus autores.

 128

R E S U ME N

El desarrollo de este manual se 11ev6 a cabo mediante

una investigact6n bibliográfica, en la cual la_ informaci6n
que obtuvimos, la efectuamos mediante una relación de dato~
verificando las posibles variables qu~ existen dentro de
las técnicas histol6gicas de acuerdo al método científico.
Además de seleccio~ar los materiales y métodos de dicho tra
bajo de una manéra más conveniente, tanto para las necesid~

des de un laboratorio y el enriquecimiento de los conoci- -

mientes de los estudiantes.

. .
También _se investigaron las técnicas histológicas más
~enerales para Tejido Epitelial, cla~ificándolas y ordenán-
dolas lo mfs posible con el fin de conocer cada una de las
estructuras de dicho tejido.
 BI Bl I OGRAF I A

l.- Ann Preece, H.T. (ASCP}. A Manual for Histologic Techn.i

cions Trhird Edition: Little Brown and Company Bosion.

2.: BradTey M. Patten. Embriologfa Humana. 4a. Edición. 11

Edit. Florida- 340- Buenos Aires.

3.- Disbrey/Rack.· 1970. Histological Laboratory Methods.

Edinburgh London .. E.S. Livigstone.

4.- Elvira Estrada Flores- Leonor Peralta Zamora- Patricia

Ri va s Ma n z a n o . Ma nua 1 de H.c n i e a s Hi s t o 1 6 g i e a s . 1a . Edi_
~"""~

ci6n. AGT Editor, S.A. s,-?',::,><t"J).o

5.- Gaviño Gonzalo/Juárez/Figueroá. 1982. Técnicas Biológi-.

cas Sel~ctas de Laboratorio y de Campo. 6a. Edición. Li
musa. México ..

6.- Gretchen L. Humasen. 1979. Animal Tissue Techniques 11

Fourth Edition. W.H~ Freedman and Company, San Francis-

co.

7.- Ham Arthur W. 1975; Tratado de Histologfa. 7a. Edici6n.

Interamer1cana. Méxic~.
 130

8.- Dr. Jan Langman. Embriología Médica. 2a. Edición. Des~

rrollo Humano Normal y Anormal. Edit. Interamericana.

9.-.Jeffrey J. W. Baker, Gerland E. Allen. 1965.-Biologfa

e Investigación Científica. Fondo Educativo Interamerl
cano.

10.- L. C. Junqueira/J. Carneiro. 1981: Histología Básica,

2a. Edición. Salvat S.A. México.

11.- Dr. Keith L. Moore. Embriología Clínica. 2a. Edición.

Editorial Interamericana.

12.- R; Martoja y M. Martoja-Pierzon. 1970. Técnicas de His

tologfa animal. la. E&itión. Joray-Masson, S.A. Barce-
~ona.

13;- Maximow and Bloom. Textbook of Histology. Sixth Edi- -

tion. W.B. Sauders Company Philadelphia and London.

14.- Orban'~-- Oral Histology and Embriology. Fifth Edition.

The C.V. Mosby Company. 1962.

15.- Revoll~ María Antonieta. 1966. Histología. 2a. Edición.

Editorial Intermédica.

1 .
 131

16.- s: Ram6n y Cajal/J.F, Tello y Mufioz. 1955. Elementos

de Histología normal y de Técnica Hicrogr6fica. Duodé-
cima Edici6n. Editora Nacional. México, D.F.
DR. CARLOS ASTENGO OSUNA
DIRECTOR DE LA FAC. DE CIENCIAS
UNIVERSIDAD DE GUADALAJARA
P R E S E N T E.

Estimado Dr. Astengo Osuna:

Por este medio comunico a usted que la S~ITA. ESTHER RODRIGUEZ GONZALEZ, pasan-
te de la Licenciatura en Biología, ha concluído satisfactoriamente el proyecto-
de tesis titulado:

"MANUAL DE TECNICAS HISTOLOGICAS PARA TEJIDO EPITELIAL"

Asi mismo le informo que he revisado el manuscrito de la tesis y considero-que

cumple con los requisitos establecidos por la Facultad y lo presentamos a su -
consideración.

Sin más por el momento, aprovecho la ocasión para enviarle un cordial saludo.

Guadalajara, Jal. 27 Abril de 1988

-~
A T~ E N T A ~f'-E N T B \
\\~\;
\\ \
\

M.V.Z.
 Exped!ente ........... .

l1XIYERSIDAD DE GUADALAJARA Número .. .~~?/ ~_6 .

Faeultad de Ciendae

Snita. E~the4 Rodniguez González

Pn e ~ e nt e . -

ManiMuto a ~te.d que con uta 6echa ha ~ido aptwbado e1 -

.te.ma de. Tu~ " Manua.t de. TécnicM H~to.tógicM pana Tejido Epae..tia.t"-
pana obt0ne4 .ta Lice.nciatuna en Bio.togXa con Onie.ntacián Re.c.~o~ N~tu_
wu.
Al mú.mo tiempo in6onmo a ~ted que. ha údo aceptado c.omo -
Vine.c.ton de dicha Tu~ el M.V.Z. Miguel Canbaja.t Sonia.

A T E NT A M E NT E
"PIENSA Y TRABAJA"

.e,:~
Guada.tajana, Ja.t., Juli.o 4 de. 1986

fAtll,TAD ~E CIEHCJAS

c.c.p. E.t M. V.Z. M-iguel CMbaja.t SoJUa., Vinec.ton de Tu~.-Pte.

c.c.p. E.t expediente de .ta alumna.

'mj~d
BOULEVARD A TLAQUEPAQUE 1' COUREG!D3RA, S. R., TELEFONOe 17·58·29 Y 17-09-71
. GVADALAJARA, JAL.