RUPTURA

CELULAR EQUIPO
Cortes Castellanos Johanna Marcela
Sanchez Valois Santos Eduardo
Sánchez Acosta Antonio de Jesus
Gonzalez Matias Jesus Nicolas
Rodríguez Hernández Neyzer Gael
Itzia Guadalupe Pérez Vázquez
Velázquez Peña Isaias Santiago
Aimee Núñez Marcelo
Villa Ramírez Mirssa Yesenia
RUPTURA CELULAR
RUPTURA CELULAR
La Ruptura Celular o lisis celular es un proceso que puede desencadenar la muerte
celular.
Consiste en la rotura de la membrana celular de células o bacterias y provoca la
salida de orgánulos o material celular. Esta rotura puede ocurrir por medios
químicos, físicos o incluso por infección de virus.

En los laboratorios biotecnológicos se practica la desintegración o lisis celular con

el fin de romper las membranas o paredes celulares y así liberar moléculas
biológicas como orgánulos o proteínas. El material celular lisado (o extraído) se
separa para llevar a cabo nuevas aplicaciones o investigaciones.

Los métodos de lisis celular que se usan son diversos. Desde la sonificación (por
medio de ondas que rompen la pared celular) o la homogeneización líquida (las
membranas se rompen al pasar por espacios muy reducidos) o incluso por medio
de detergentes.
 ANTECEDENTES
Durante la historia, la muerte celular fisiológica ha sido conocida por varios nombres.
Virchow,
en 1858, fue el primer investigador en describir los procesos de muerte celular y, basándose
sólo
en parámetros macroscópicos, los definió como degeneración, mortificación y necrosis. En
1879,
utilizando observaciones microscópicas se introducen los términos Karyorhesis y
Karyolysis,
que hacen referencia a la desintegración y desaparición del núcleo. Diez años más tarde,
Arnheim, propone los términos piknosis y marginación de la cromatina. Flemming,
estudiando
los folículos de los ovarios de los mamíferos, observó y describió la desaparición de células,
denominando a este proceso chromatolisis, término que fue reutilizado por Gräper, en 1914,
como antónimo de los procesos de mitosis. Pero no fue hasta 1972 cuando Kerr, Wyllie y
Currie
implantan el término «apoptosis», ampliamente utilizado en nuestros días, que evoca a la
caída
de las hojas desde los árboles en otoño o la de los pétalos de las flores.
En la última década,
hemos sido testigos de un crecimiento exponencial de los trabajos de investigación realizados
sobre los procesos que rodean a la muerte celular y parece que se ha llegado al consenso de
englobarlos en dos grandes grupos: necrosis y [Link] de las células
El término necrosis reúne los procesos violentos y catastróficos, donde la degeneración celular
es pasiva sin un requerimiento de energía en forma de ATP.
Aparece frecuentemente como
consecuencia de un daño traumático o por la exposición a toxinas. En ella tiene lugar la pérdida
aguda de la regulación y de la función celular que conlleva un proceso osmótico desmesurado y
finaliza con la lisis de la membrana celular, liberando el contenido intracelular. Este fenómeno
conduce a las células vecinas también hacia la muerte, atrayendo, al mismo tiempo, a las células
inflamatorias, lo que hace que en las áreas donde se observan células necróticas sea frecuente
encontrar nuevas células que desarrollan este tipo de muerte celular, además de originar una
reacción de inflamación y una cicatriz fibrosa que deforma el tejido y el órgano afectado.
 CLASIFICACION Y TIPOS
La muerte celular es una parte fundamental del ciclo vital
de la célula y la regulación apropiada de este proceso es
crucial para mantener la regulación homeostática de un
organismo multicelular. La muerte celular puede ser
accidental o estar programada, iniciada y ejecutada a
través de vías bioquímicas diferentes. Tanto el inicio como
la ejecución de la muerte celular son procesos complejos,
según criterios morfológicos, puede clasificarse como:
 Muerte celular autofágica
Necrosis (MCA, Autofagias
Apoptosis Aumento del volumen celular,
tumefacción Vacuolización masiva del citoplasma,
Redondeamiento de la célula,
de los orgánulos y estallido de la acumulación de vacuolas autofágicas
retracción
membrana de
de los seudópodos, reducción del
plasmática con pérdida doble membrana, sin condensación de
volumen
concomitante cromatina y captación escasa o ausente
nuclear y celular (picnosis),
del contenido intracelular. La por fagocitos in vivo. El término MCA
condensación y
necrosis solamente debería usarse cuando la
fragmentación de la cromatina
suele considerarse a menudo una muerte
(cariorrexis),
forma celular sea ejecutada por los meros
abultamientos de la membrana
accidental o incontrolable de muerte procesos
plasmática,
celular que ocurre después de una autofágicos sin la implicación de
formación de cuerpos apoptóticos
agresión apoptosis o de necrosis Elongación,
invaginación por parte de los
grave a la célula.
fagocitos
residentes in vivo.
Lisis mecánica o por métodos físicos (Ruptura) Óptica: Consiste en la aplicación de pulsos
láser para lisar las células, es útil al enfocarse en una sola célula debido a que se
puede modular la potencia del láser y direccionarlo a un lugar específico.
Homogeneización líquida: Las células se rompen al obligarlas a pasar por
espacios muy pequeños.
Sonificación : Ondas de alta frecuencia rompen las células.
Congelamiento: Ciclos de congelación continuos rompen la célula induciendo la
formación de cristales.
Lisis química (Ruptura)
Lisis alcalina: está basada en la generación de iones OH- con el fin de impulsar el
proceso de lisis celular.
Lisis celular por medio de detergentes: es una manera más suave de romper la
membrana celular por medio de detergentes o agentes caotrópicos que permiten
disolver la membrana celular.
RUPTURA CELULAR- LISIS
CELULAR MÉTODO(S).
Mecánicos. No mecánicos.
Homogenizador a Lisis celular
presión. Enzimático
Prensa francesa. Químico
Ultrasonido. Físicos
Molino de Bolas o Tratamiento Alcalino
Perlas. Termalización
Congelación. Permeabilización
Mortero.
Agitación con Abrasivos.
Microfluidizadores.
 METODOS QUIMICOS
Tratamiento con solventes orgánicos (Cloroformo, tolueno)
Los solventes orgánicos permeabiliza las membranas celulares disolviendo componentes hidrofóbicos de la pared, como los
fosfolípidos de la membrana interna en las bacterias Gram (-).

Tratamiento con álcalis (Hidróxido de sodio e hipoclorito)

Se produce la saponificación de los lípidos de las membranas. Es una técnica severa pero efectiva y de bajo costo, siempre y cuando
el producto de interés sea resistente a la degradación a pH elevados.

Agentes Caotrópicos (Urea, clorhidrato de guanidina)

Interfieren con los enlaces no covalentes ( puentes de hidrogeno, fuerzas de van der Wall) desorganizando la estructura del agua
haciéndola menos hidrofilia, debilitando las interacciones soluto-soluto.

Agentes Quelantes (EDTA)

Este agente quelar los iones Ca2+ y Mg2+ que unen a los LPS adyacentes haciendo que se liberen parte de los LPS conteniendo
proteínas y fosfolípidos de la membrana (Gram-).

Tratamiento con detergentes.

Debido a que son anfipáticos forman micelas con los lípidos de las membranas, desestabilizándolas. Se clasifican en : catiónicos
(Sales de tetra-aquilamonio, pH básico), aniónicos (SDS, pH ácido) y noiónicos (Triton-X)

Antibióticos
Son efectivos contra bacterias Gram (-). Diferentes antibióticos causan lisis por distintos mecanismos.
 METODOS FISICOS
Shock osmótico.
El estrés osmótico es generado cuando las células son situadas en medio hiper/hipotónico.

Congelamiento/Descongelamiento.
Los cristales de hielo que se forman y crecen durante el congelamiento, rompen mecánicamente la
integridad del interior de la membrana celular, haciéndola permeable. La congelación rápida
lesiona más específicamente las membranas celulares produciendo la lisis celular.

Descompresión.
Proceso por el cual las células se mezclan con un gas presurizado por un tiempo específico. El gas
entra en las células y luego al liberar la presión aplicada el mismo se expande causando la
disrupción.

Termólisis.
Las células son llevadas a mayores temperaturas con el fin de romper o debilitar la membrana
externa.
 METODOS ENZIMATICOS
Autolisis
Proceso por el cual las células inducen su propia
destrucción. Se produce la activación de señales que
activan la liberación de enzimas que degradan las
organelas y las membranas de las mismas células. El
mecanismo es lento, por lo que se transforman las cepas
con el fin de hacer los sistemas autolíticos mucho más
activos (Introducción de genes que codifican antibióticos y
enzimas que degradan más rápidamente los componentes
celulares) ó con inductores de la autolisis.
 PROCESO
Ultrasonificación
Frecuencias >20 KHz produciendo vibraciones que provocan el
fenómeno de cavitación.
1.- Se producen zonas de baja presión en el líquido
• El líquido se transforma en gas formándose pequeñas burbujas
• Las burbujas colapsan debido a los cambios de presión.
• Se producen fuertes esfuerzos de corte en el líquido que rompen las
células.
 Homogeneizador de Alta Presión
Este tipo de homogeneizador trabaja forzando las células en suspensión a través de un canal
estrecho o un orificio bajo presión. Se aplica una elevada presión a una suspensión de células
forzándolas a través de una válvula, sometiéndolas a un alto estrés de corte (shear), rompiendo
las membranas. La disrupción ocurre por la combinación de fuerzas de corte en la región de la
válvula, y al impacto con el anillo.

Ln Rm = k . N . Pa
Rm-R

Rm = Cantidad máxima de producto librado.

R = Cantidad de producto liberado luego de N pasos.
K = Cte. de ruptura celular (Depende del T y tipo de mØ)
N = No. de pasajes.
P = Presión a la que es sometida la suspensión celular.
a = Depende del estado metabólico del mØ y del mØ.
CHOQUE OSMÓTICO
Las células se colocan en un volumen de agua frecuentemente 2 veces
mayor que el volumen de células. Las células se expanden, por un
simple flujo osmóticos que se produce debido a que las células
contienen solutos, ocasionando que el agua entre al interior. Debido a
esta expansión puede conducir a su lisis o rompimiento.
El uso de este método depende de la resistencia de las células. Ley de
van`t Hof

Digestión enzimática
Consiste en el empleo de enzimas que atacan a la pared celular
hidrolizándola. Permeabilizando la membrana para liberar compuestos
intracelulares al medio o rompiendo completamente la célula.
A pH< 5 las células no se rompen aun cuando la pared haya sido
destruida por digestión.
USO Y
USO Y APLICACIONES
APLICACIONES
Las múltiples aplicaciones en los sectores de la biotecnología, bioingeniería,
microbiología, biología molecular, bioquímica, inmunología, bacteriología, virología,
la genética, la fisiología, la biología celular, la hematología y la botánica.

Sin embargo, donde tiene mayores es en cambo de la biología y biotecnología

Algunas de las aplicaciones más comunes en estos campos son:

•La preparación del extracto de la célula

•Disrupción de levaduras, bacterias, células vegetales, tejido celular blando o duro,
material nucleico
•La extracción de proteínas
•Preparación y aislamiento de enzimas
•La producción de antígenos la extracción de ADN y / o dirigido fragmentación
•Preparación de liposomas
GRACIAS!!