1.1.

Realidad problemática

El uso y dependencia de los combustibles fósiles desde la revolución

industrial hasta la actualidad, han significado un incremento de las emisiones
de gases de efecto invernadero (GEI) y un desequilibrio atmosférico. Los GEI
contribuyen con el calentamiento global y por consiguiente son la principal
causa del cambio climático. Es así que la aplicación de tecnologías
alternativas y sostenibles para reducir o potenciar los sumideros de los
principales GEI son estrategias que permitirán contribuir a la mitigación del
cambio climático.

El dióxido de carbono (CO2) es el gas de efecto invernadero con mayor

porcentaje de emisión a nivel mundial, registrándose emisiones de 32.381
millones de toneladas y 4.97 toneladas métricas per cápita en el año 2014.
Siendo la principal fuente de CO2 la combustión de combustibles fósiles para
la generación de energía.

El Perú en el Inventario Nacional de Gases de efecto invernadero en el año

2012 ha registrado 130871.39 gigagramos de CO2 producido por los sectores
energía, procesos Industriales y uso, cambio de uso de suelo y silvicultura.
Tras ratificar el Acuerdo de Paris se ha comprometido a reducir el 20% de
sus emisiones de gases de efecto invernadero gracias a iniciativas públicas
y privadas; y un 10% adicional condicionado a obtener financiamiento
internacional para el año 2030 (Minam, 2017), como medida de mitigación
del cambio climático.

Una alternativa que se propone para alcanzar las metas propuestas es la

aplicación de la biotecnología ambiental en los procesos industriales,
además del crecimiento de esta especialidad poco desarrollada en el país
(Concytec, 2015). Es así que Gonzáles, Acién, Fernández y Molina (2011),
nos dicen que entre los más importantes microorganismos fotosintéticos
para la biofijación de CO2 se encuentra las microalgas, los cuales son los
mayores fijadores naturales de CO2 del planeta. Es decir, las microalgas se
ubican en la parte superior de las opciones por su eficiencia

1
 excepcionalmente alta en conversión de energía, eliminación de CO2 y el
tamaño y utilidad de otros subproductos (Salih, 2011), es decir, las
microalgas son superiores en la biofijación de CO2 que las plantas.

Sin embargo para que este sistema funcione adecuadamente hay que elegir
primero un microorganismo con elevada velocidad de crecimiento y
robustez, segundo optimizar los sistemas y las condiciones de cultivo para
conseguir la mayor fijación de CO2 posible y finalmente definir las vías de
utilización de la biomasa generada (Gonzáles et al., 2011).

La especie ideal debe tener además alta tolerancia a la concentración de

CO2, concentraciones de contaminantes tóxicos, temperatura, limitación de
nutrientes y efecto del pH (Cheah et al., 2014), de tenerse como objetivo la
captura de gases de combustión que contienen CO2 en concentraciones que
van del 5 al 15% (v / v).

1.2. Trabajos previos

Jun, et al. (2016) en el artículo titulado “Mejora de la fijación de CO2 con

microalgas mediante rotura de burbujas en estanques de canalización con
deflectores de tobogán arriba-abajo” tuvieron como objetivo principal de
estudio optimizar la fijación de CO2 con microalgas. Como método utilizaron
gas de aireación que rompió las burbujas en unas más pequeñas para
optimizar la fijación de CO2 en estanques de canalización con deflectores de
tobogán ascendente. Además se usó un sistema de fotografía de alta
velocidad y sondas de pH precisas en línea para medir la generación de
burbujas y los tiempos de permanencia, que se vieron afectados por la
velocidad de la rueda de paletas, el diámetro del orificio del aireador, el
caudal de gas y la profundidad de la solución. Obteniendo que el menor
tiempo de generación y el mayor tiempo de permanencia de las burbujas de
aireación promovieron un rendimiento de biomasa del 29%.

2
Acuña (2016) en su tesis para obtener su master en ingeniería ambiental,
titulada “Pre diseño de un sistema para la eliminación biológica de CO2” tuvo
como objetivo hacer el diseño y la construcción de un fotobiorreactor tubular
para producir microalgas Chlorella usando gases de combustión de una
caldera de fuel-oil y eliminar biológicamente el CO2. Como parte de su
metodología se realizó un pretratamiento en un depurador para minimizar
los dióxidos de nitrógeno presentados en los gases de combustión e ingresar
un flujo de gas de 1,5 m3/s para el tratamiento, finalmente obtuvo una
concentración máxima de biomasa de 0.9 g/L.

Oscanoa, et al. (2015) en el artículo titulado “Impacto del CO2 sobre la

densidad celular en seis cepas de microalgas marinas” tuvieron como
objetivo general evaluar los tiempos de inyección de CO2 durante la
producción de biomasa que conlleve a una mayor densidad celular.
Finalmente los resultados permiten establecer tiempos adecuados de
inyección del CO2 , los cuales mejoraron la fase de crecimiento exponencial
aumentando la densidad poblacional en un 30% sobre lo establecido en esta
fase.

Bingtao, et al. (2015) en el artículo titulado “Fijación de dióxido de carbono

y producción de biomasa a partir de gases de combustión utilizando
microalgas energéticas” tuvieron como objetivo de estudio fijar el CO2 de los
gases de combustión y cosechar la biomasa de algas para la conversión de
energía. Primero se seleccionaron tres microalgas (Chlorella sp.,
Isochrysis sp. y Amphidinium carterae) cultivadas a las mismas condiciones
en un fotobiorreactor de 1L con una aireación de 15% de CO2. Finalmente
Chlorella sp. fue superior a las otras especies, con una tasa de crecimiento
-1
específico de 0.328 d , una tasa de producción de biomasa de 0.192 g/L.d
y una tasa de fijación de CO2 de 0.353 g/L.d.

García (2014) en su tesis para obtener el grado de doctor, titulada

“Producción de biomasa de microalgas rica en carbohidratos acoplada a la
eliminación fotosintética de CO2” tuvo como objetivo evaluar la viabilidad de
los sistemas de cianobacterias y/o microalgas para la producción de materia
orgánica rica en carbohidratos, incluyendo la eliminación del CO2 procedente
de las emisiones industriales. Para desarrollar su objetivo se caracterizó y
3
seleccionó a dos especies, Scenedesmus vacuolatus y Chlorella vulgaris,
las de mayor potencial para producir biomasa a base del consumo de CO2.
Se concluyó que ambas son adecuadas para la eliminación de co2 y
producción de biomasa, sin embargo Chlorella vulgaris presentó
características de flexibilidad en relación a las condiciones de cultivo a la
intemperie.

De Godos, et al. (2014) en su investigación titulada “Evaluación de la

transferencia de masa de dióxido de carbono en reactores de canalización
para cultivo de microalgas utilizando gases de combustión” tuvieron como
objetivo principal evaluar la transferencia de CO2 en reactores con y sin
deflectores. La transferencia de masa de CO2 del gas de combustión se
cuantificó en una pista de 100 m2 y el sumidero de carbonatación se hizo
funcionar con y sin un deflector a diferentes relaciones líquido-gas.
Obteniéndose una tasa de transferencia de carbono de 10 gC/min, una
productividad de 17 g/m 2.día con solo un 4% de pérdida directa de CO2.
Finalmente se concluyó que el uso de un deflector de sumidero requiere de
una potencia adicional sin mejorar significativamente la transferencia de
masa de carbono.

Sankar, Daniel y Krastanov (2014) en su investigación titulada “Fijación

de bióxido de carbono por cultivos discontinuos de Chlorella Minutissima en
un biorreactor de tanque agitado” tuvieron como objetivo realizar un estudio
comparativo del crecimiento de tres cepas de microalgas (Calothrix sp.,

4
Spirulina platensis y Chlorella minutissima) en relación a los parámetros
cinéticos, posibles subproductos, tolerancia al CO2 y seleccionar la mejor
cepa para estudios de pH óptimo, fotoperiodo, concentración de nitrato e
intensidad luminosa. El cultivo de microalgas se realizó con agitadores, con
diferentes tasas de aireación. Finalmente se obtuvo que de las tres cepas
estudiadas, C. minutissima era la mejor cepa para seguir trabajando con una
productividad máxima de biomasa a pH 6, fotoperíodo 14:10 (luz:oscuro), 5
g/L de nitrato e intensidad de luz de 6000 Lux. Además, el agitador presentó
mejores rendimientos de biomasa comparando con el cultivo sin agitador.

Anjos, et al. (2013) en el artículo titulado “Optimización de la bio-mitigación

de CO2 por Chlorella vulgaris” tuvo el objetivo principal de maximizar la tasa
de fijación de CO2 por la microalga verde Chlorella vulgaris cultivada
fotoautótroficamente en fotobiorreactores de columna de burbujas bajo
diferentes concentraciones de CO2 (entre 2% y 10%) y tasas de aireación
(desde 0.1 a 0.7 vvm). Los resultados mostraron que la tasa de fijación
máxima de CO2 fue de 2.22 g /L.d usando 6.5% de CO2 y 0.5 vvm después
de 7 días de cultivo demostrando que la optimización de las condiciones de
cultivo de microalgas se puede considerar una estrategia útil para maximizar
la bio-mitigación de CO2 por C. vulgaris.

Giraldo (2013) en su tesis presentada para obtener el título de Magister

“Evaluación de cepas de microalgas para captura de CO2” tuvo como objetivo
general evaluar la producción de biomasa y la productividad a partir de la
variación del medio de cultivo y su concentración de NaNO3 y K2HPO4, para
cuatro cepas de microalgas seleccionadas experimentalmente en estudios
con aire y aire enriquecido con CO2, obteniendo una diferencia no
significativa de la concentración celular de las cepas solo con aire y cepas
sometidas a CO2 (2%), sin embargo Chlorella sp. presentó una reducción de
0,24 (g/L) en su concentración celular.

canal cerrado cubriendo un estanque de canal abierto con una cubierta

transparente especialmente diseñada, que tocó directamente la superficie
de los medios de cultivo de microalgas. Está cubierta evitó que el CO2
suministrado escapara a la atmósfera y por lo tanto incrementó el tiempo de
retención de CO2. Finalmente se obtuvo el aumento de la eficiencia de la
5
fijación de CO2al 95% bajo burbujeo de gas discontinuo.

Deza (2012) en su tesis titulada “Diseño, construcción y funcionamiento de

un sistema fotobioreaccionante para el consumo de CO2 con Scenedesmus
quadricauda como agente biodepurante” para obtener su título profesional,
tuvo como objetivo diseñar, construir y acondicionar a escala de laboratorio
un sistema fotobiorreactor capaz de consumir CO2 a partir de un balón de
gas de CO2 como fuente originaria y así multiplicar la especie microalgal
Scenedesmus quadricauda a 0,027 moles CO2/L y en constante crecimiento
en comparación con la ausencia del mismo con apenas 0,014 moles CO2/L
en su pico máximo.

Seijas (2012) en su tesis para obtener el grado de doctor “Biosecuestro de

dióxido de carbono, procedente de gases de combustión, por Arthrospira
jenneri “espirulina” y su influencia en la producción de biomasa microalgal
en fotobiorreactor solar” teniendo como objetivo evaluar la biofijación de CO2
por “espirulina” a través de la determinación de la bioconversión en biomasa
microalgal y concentración de O2 en los gases de salida así como determinar
la influencia de CO2 en la producción de biomasa microalgal en un
fotobiorreactor solar concluyendo que Artrhospira jenneri “espirulina” tiene la
capacidad de emplear el dióxido de carbono secuestrado procedente de
gases de combustión para producir biomasa microalgal en un fotobioreactor
solar.

Martínez (2009) en su tesis presentada para obtener el grado de doctor

“Eliminación de CO2 con microalgas autóctonas” busca determinar la especie
microalgal con mayor capacidad de fijar CO2 y maximizar sus características
fotosintéticas en un fotobiorreactor a escala piloto, es por ello que a través
del aislamiento de especies autóctonas y sometiendo a altas inyecciones de
CO2 a cada una, identifica como la de mayor potencial a Synechocystis sp. ,
alcanzando fijaciones de CO2 a escala piloto de 0,84±0,3 g/l/d.

Fan (2008) en este estudio titulado “Evaluación de un fotobiorreactor tubular

helicoidal con membrana de burbujeo para biofijación de dióxido de carbono
por Chlorella vulgaris” se diseñó un fotobiorreactor tubular helicoidal con
membrana (MSTR) con un volumen de cultivo de 800 ml bajo diferentes

6
gases, con el objetivo de comparar el fotobiorreactor MSTR con otros dos
fotobiorreactores (BCTR y MCTR) para establecer si la limitación de la
eliminación de CO2 mejoró en MSTR relacionando el pH, oxígeno disuelto,
daño y crecimiento celular. Obteniendo como resultado una tasa de
crecimiento neto de aproximadamente 0.75-0.95 g/L en su fase estacionaria,
además de determinar que el fotobiorreactor MSTR obtuvo los ciclos más
cortos.

Sobczuk et. al. (2006) en la investigación titulada “Efectos de la agitación en

las microalgas Phaeodactylum tricornutum y Porphyridium” tuvieron como
objetivo determinar los efectos causados por la agitación sobre la microalgas
Phaeodactylum tricornutum y Porphyridium. Se investigó en cultivos
aireados continuos y se cuantificó el daño a las células a través de una
disminución en la concentración en estado estacionario de la biomasa en el
fotobiorreactor. Dando como resultado para una tasa de aireación dada, la
concentración de biomasa en estado estacionario aumentó con una
velocidad creciente de agitación mecánica hasta que se alcanzó un límite

7
 superior en la velocidad de agitación. Esta velocidad de agitación máxima
tolerable varió por cada especie de microalgas. Además un aumento
adicional de la velocidad de agitación causó una disminución en la
concentración de la biomasa en estado estacionario.

1.3. Teorías relacionadas al tema

1.3.1. Microalgas

Las microalgas son algas microscópicas, que se caracterizan por

encontrarse en sistemas marinos y de agua dulce, capaces de realizar
fotosíntesis y con gran importancia para el desarrollo de la vida en la tierra
al ser las productoras de la mitad del oxígeno atmosférico y al mismo tiempo
usar el CO2 para crecer fotoautótroficamente. La variedad de
las microalgas es muy grande y casi sin explotar (Johansen, 2012).

Asimismo, estos organismos requieren de nutrientes para ser cultivados y de

cierta manera adaptarse aún medio acuático artificial. Los requerimientos
nutritivos que necesitan son las sales inorgánicas y CO2, además de
principales elementos inorgánicos esenciales como el nitrógeno y el fósforo.
Las diatomeas requieren el silicio entre otros nutrientes y vitaminas (Bajpai,
Prokop y Zappi, 2014).

8
1.3.1.1. Phaeodactylum tricornutum

Unicelular y normalmente con un cromatóforo marrón parietal en la región

central. Tres formas típicas de células: Ovalada de 8 µ de largo x 3 µ de
ancho y una válvula de sílice por celda. Las células pueden ser lentamente
móviles, o inmóviles en grupos mucilaginosos. Fusiforme de hasta 25-35 µ
de largo, con dos brazo, ligeramente doblados y pared de sílice ausente, y
de forma trirradiada. Sólo el morfotipo oval presenta estructuras silíceas en
su pared celular. En cultivos en medio líquido y con cierta agitación como,
son los morfotipos trirradiado y fusiforme los dominantes (Bartual, Villazán y
Brun, 2011).

designación taxonómica oficial:

Filo: Chrysophyta

Clase: Bacillariophyceae

Orden: Bacillariales (Hendey, 1937)

Suborden: Phaeodactylineae.

9
 Familia: Phaeodactylaceae

La única familia del suborden.

Género: Phaeodactylum (Bohlin, 1897).

Especie: P. tricornutum. La única especie conocida.

Además se conoce que las diatomeas son más eficaces reteniendo CO2 que
las microalgas de agua dulce porque estas últimas forman un esqueleto
carbonatado, lo que provoca que parte de este CO2 sea devuelto al aire.

Como se observa en la tabla N°01 las especies marinas hasta el momento

han sido las más investigadas ya que presentan mayor potencial.

Tabla N°01: Descripción de especies marinas y su aplicación a gran escala.

Sustentabilidad
Composición Propósito a
Especies Descripción de ser
nutritiva gran escala
ampliado
Del tipo Difícil ya que
diatomeas. Se producen actualmente no Productos
Phaeodactylum Existen en altas se realizan nutricionales y
tricornutum diferentes cantidades de investigaciones producción de
formas y ácidos grasos para ampliar biocombustible
morfología. del tipo C16. este tipo.
Clorofita Altas
Muy adecuado y Acuicultura y
simple y cantidades de
Tetraselmis actualmente producción de
móvil con alto ácidos grasos
suecica utilizado para la biocombustible
contenido de pueden
acuicultura.
lípidos. encontrarse.
Diatomea Inadecuado ya
Chaetoceros pequeña y de Similar a las 2 que los cultivos
-
calcitrans rápido anteriores. tienen tendencia
crecimiento. a fallar.
Altas Inadecuado ya Utilizado en
Pequeñas
Isochrysis cantidades de que los cultivos acuicultura para
algas verdes
galbana carbohidratos tienen tendencia alimentación.
ovaladas.
presentes. a fallar.

10
 Sustentabilidad
Composición Propósito a
Especies Descripción de ser
nutritiva gran escala
ampliado
Algas Se pueden Utilizado como
flotantes lograr altas productos
unicelulares, Altas tasas de nutricionales,
Nannochloropsis
con cantidades de crecimiento por para la
oculata
cloroplasto Omega 3. lo que es producción de
amarillo- adecuado para acuicultura y
verde. ser ampliado. biocombustible

Fuente: Chew et al. (2018)

1.3.1.2. Fotosíntesis en microalgas

La fotosíntesis es un proceso único de conversión de energía solar. En el

cual los compuestos inorgánicos y la energía de la luz se convierten en
materia orgánica mediante organismos fotoautótrofos productores de
oxígeno (cianobacterias procariotas y algas eucarióticas).

La fotosíntesis oxigénica realizada por las microalgas se puede expresar

como una reacción rédox desarrollada por la energía de la luz (capturada por
moléculas de clorofila), en la que el CO2 se convierte en carbohidratos y
oxígeno. La conversión se divide en dos procesos, las reacciones generadas
durante la luz y las reacciones oscuras. En las reacciones de luz, que están
unidas a las membranas fotosintéticas, la energía de la luz se convierte en
energía química, proporcionando un NADPH2 reductor bioquímico y un
compuesto ATP de alta energía. En las reacciones oscuras, que se producen
en el estroma, el NADPH2 y ATP se utilizan en la reducción bioquímica
secuencial del CO2 a los carbohidratos (Richmond, 2004).

1.3.1.3. El carbono en las microalgas

El carbono en las microalgas es el elemento más abundante, contribuyendo

casi el 50% del peso de la biomasa microalgal, además se conoce que al
complementar carbono en el cultivo de microalgas aumentará
significativamente su productividad. Lo que significa que se necesita un total

11
 de 1,83 toneladas de CO2 para producir 1 tonelada de microalgas (Shuwen,
Shengjun y Rongbo, 2013).

Cuando el carbono está disuelto en agua, existen tres formas químicas

principales interconvertibles de carbono inorgánico disuelto CO2 (aq), HCO3–
y CO3–2 cuyas concentraciones varían en función del pH del medio acuoso.
Aunque el HCO–3 es fácilmente absorbido por las células de las microalgas,
se conoce que el CO2 es la fuente más preferida de carbono inorgánico. Sin
embargo, a pH> 10.3 domina la forma CO3–2, que por lo general es una forma
inutilizable y no disponible para la absorción de las microalgas (Bajpai, 2014).
Esto indica que la medición del pH antes y después de ingresar CO2 como
fuente de carbono inorgánico sería un indicador indirecto de que la microalga
está absorbiendo el CO2.

1.3.1.4. Crecimiento microalgal

El crecimiento microalgal o biomasa se puede expresar en función del

incremento de la masa del cultivo o el incremento del número de células
(Gamazo, 2013).

Este crecimiento puede ser calculado por diferentes métodos, como el

conteo celular a través del microscopio, el cual es uno de los más utilizados
en los laboratorios (Arredondo y Voltolina, 2007).

Entre los factores que influyen el crecimiento de las microalgas está el pH,
temperatura, agitación, aireación, CO2 e iluminación (Niño, 2017). Siendo el
consumo de CO2 fuente de carbono para el crecimiento celular (Chen et al.
,2010). Además de conocerse que 1 kg de biomasa de microalgas puede
secuestrar 1,83 kg de dióxido de carbono (Jiang et al., 2013).

1.3.1.5. Parámetros que influyen en el crecimiento de las microalgas

A. Luz

La fuente de energía más común para las microalgas es la luz solar.

Aunque los requerimientos de intensidad de luz de las microalgas
típicas son relativamente bajas en comparación con los de las plantas,
las microalgas por lo general aumentan (Kumar et al., 2010).

12
 B. Agitación del medio de cultivo

La agitación del medio de cultivo tiene una influencia directa sobre la

transferencia de masa, siendo la transferencia de masa importante
para la difusión e ingreso del CO2 a la célula (Rubio y Moreno, 2017).

C. pH

Por lo general las microalgas presentan un pH neutro, aunque existen

especies que son capaces de tolerar pH superiores o inferiores al
neutro. Se conoce la existencia de una relación compleja entre la
concentración de CO2 y el pH en los sistemas de fotobiorreactores de
microalgas, debido a los equilibrios químicos entre especies químicas
como el CO2 H2CO3, HCO– y CO–2. Las concentraciones de CO2 al
3 3

aumentar puede generar una mayor productividad de biomasa, pero

el pH disminuirá y quizás tener un efecto negativo sobre la fisiología
de las microalgas. Sin embargo, se ha demostrado que las microalgas
causan un aumento en el pH generando un beneficio al inactivar a los
agentes patógenos (Kumar et al., 2010).

D. Nutrientes

Las microalgas pueden vivir a altas concentraciones de dióxido de

carbono, gases de invernadero y dióxido de nitrógeno pudiendo ser
nutrientes suficientes para las microalgas (Van Beilen, 2010)
Además de que casi el 50 % de la biomasa de las microalgas se
compone de carbono (Becker, 1994), obtener este elemento es
importante para el crecimiento celular.

1.3.2. Sistemas de cultivo

1.3.2.1. Abiertos

Los sistemas de cultivos abiertos son vulnerables a los cambios de

temperatura e iluminación debido a las condiciones climáticas, lo que dificulta
mantener condiciones óptimas de crecimiento. Es así que normalmente se
obtienen densidades de células bajas (Bux, 2013).

13
1.3.2.2. Cerrados

Los fotobiorreactores empleados para cultivar microalgas incluyen reactores

tubulares horizontales, tubulares verticales, tubulares helicoidales, tipo
fermentador, reactores de membrana de fibra hueca, etc. Los
fotobiorreactores pueden ofrecer tasas de producción mayores, siempre que
se introduzcan mejoras con respecto a la luz, utilización del CO2,
transferencia y mezcla de gases y cosecha. Sin embargo, ningún
fotobiorreactor aún es capaz de controlar efectivamente todos los
parámetros del proceso que se requieren para un máximo crecimiento de las
microalgas y sus tasas metabólicas (Kumar, 2010).

Fotobiorreactor de tanque agitado

El tanque agitado deriva del diseño del tanque de fermentación, teniendo

como única diferencia la adición de iluminación externa.

Se ha registrado que el tanque agitado presenta un alto rendimiento, al

proporcionar una buena mezcla y transferencia en el cultivo, donde la adición
de aireación incluso podría mejorar la solubilidad del gas (Ting et al., 2017).

El desarrollo del reactor de tanque agitado (Figura N° 02) para incrementar

la concentración de biomasa podría conducir a un diseño a gran escala más
prometedor (Chew, 2018).

14
1.3.3. Las microalgas como alternativa de captura de 𝐂𝐎𝟐
1.3.3.1. Potencial de las microalgas para capturar 𝐂𝐎𝟐

Las microalgas son 10 veces más eficientes utilizando la luz que las plantas
terrestres; mayor eficiencia para dirigir la energía hacia el crecimiento, tasas
de crecimiento más rápidas, mayor índice de fijación de 𝐂𝐎𝟐, fácil cultivo y
cosecha de productos de valor agregado en comparación con otras plantas
(Xie et al., 2014). Sim embargo a pesar de ser viables por sus capacidades,
la viabilidad económica aún está en proceso de investigación. Es por eso
que las investigaciones de optimización de los procesos de cultivos son de
gran relevancia para el desarrollo de las microalgas a gran escala.

1.3.3.2. Fijación de carbono en las microalgas

La fijación de carbono se representa con el ciclo Calvin-Benson-Bassham,

mecanismo de fijación de CO2 cuantitativamente más importante en la
naturaleza. Se encuentra en la mayoría de los organismos aeróbicos
autótrofos, desde diversas bacterias fotosintéticas y quimiolitoautotróficas
hasta cloroplastos de algas eucariotas y plantas superiores. Se centra en los
carbohidratos, siendo el 1,5-bisfosfato de ribulosa el aceptor de CO2 (Aresta,
2010).

Las microalgas convierten la energía de la luz en energía química y

simultáneamente el CO2 se fija y se transfiere a compuestos que contienen
carbono, como carbohidratos, lípidos y proteínas. Por lo tanto, la capacidad
de fijación de CO2 se refleja en la concentración celular de las microalgas
(Zeng et al., 2010).

Una alta concentración de CO2 como suplemento podría estimular que las
microalgas crezcan más rápido en comparación con el aire atmosférico
(Lam, Lee y Mohamed 2012).

La biofijación del CO2 puede ser realizado por las plantas superiores, aunque
las microalgas poseen una mayor capacidad para fijar el CO2 . La capacidad
de biofijación o tolerancia de varias especies de microalgas a la

15
concentración de CO2 varia (Kumar, 2010). En la Tabla N° 02, se muestra
las tasas de fijación de CO2 de diferentes especies.

Tabla N° 02: Comparación de la tasa óptima de fijación de CO2 y el

rendimiento de biomasa de diferentes cepas de microalgas.
Tasa de
fijación de
Tolerancia a Rendimiento
𝐂𝐎𝟐 (g/L/d) o
la de biomasa Sistema de
Microalga
porcentaje de
concentración (g/L) cultivo
eliminación
de 𝐂𝐎(%)
(%)
Fotobiorreactor
Anabaena sp. 10 1.01 -
de burbujas

Botryococcus
10 0.5 3.11 Fermentador
braunii

Botryococcus
10 - 3.05 -
braunii

Fotobiorreactor
Chlorella 10 - 5.77
de burbujas

Reactor de
vidrio cilíndrico
Chlorella 15 0.46 1.88
con extremos
cónicos

Chlorella matraz
10 0.26 1.55
pyrenoidosa erlenmeyer

Tubo céntrico
Chlorella sp. 5 35% 3.46
poroso

Columna de
Chlorella sp. 5 24% 2.37
burbuja

Chlorella sp. 15 - 1.66 Biorreactor

Fotobiorreactor
Chlorella sp. - 1.38 5.41
de burbuja

16
 Tasa de
fijación de
Tolerancia a Rendimiento
𝐂𝐎𝟐 (g/L/d) o
la de biomasa Sistema de
Microalga
porcentaje de
concentración (g/L) cultivo
eliminación
de 𝐂𝐎(%)
(%)

Fotobiorreactor
Chlorella sp. 5 0.7 2.02
tubular vertical

Chlorella
10 0.25 1.94 Fermentador
vulgaris

Chlorella Membrana
0.093 3.55 0.9
vulgaris helicoidal

Chlorella Fotobiorreactor
1 6.24 -
vulgaris de membrana

Chlorella Fotobiorreactor
2 0.43 2.03
vulgaris tubular vertical

Dunaliella
10 0.27 2.15 Fermentador
tertiolecta

Reactor de
vidrio cilíndrico
Scenesdesmus 15 0.61 2.73
con extremos
cónicos
Fotobiorreactor
Scenesdesmus
20 61.8% 0.948 de elevación
obliquus
de
aire
Scenesdesmus matraz
10 0.29 1.84
obliquus erlenmeyer

Fuente: Lam (2012)

1.3.4. Dióxido de Carbono

Considerado el principal gas causante del cambio climático debido a sus

propiedades de invernadero y a la acumulación continua en la atmósfera
(0.0387% v/v). Se encuentra principalmente en un conjunto de gases
producidos por la actividad humana, como los procesos industriales donde
se genera gases de combustión por quema de combustibles fósiles sólidos

17
18
 y líquidos, los cuales incrementan la capacidad de la atmósfera para retener
el calor (Appenzeller, 2004). En la naturaleza, el ciclo del carbono tiene la
capacidad de reciclar unas 203 gigatoneladas (Gt) de dióxido de carbono
(CO2) por año. Sin embargo, el dióxido de carbono antropogénico llega a 7
Gt por año, una cantidad relativamente pequeña, no pudiendo ser reciclado
por el ciclo natural del carbono (Aresta, 2010). Como resultado del exceso
de CO2 y acumulación en la atmósfera se conduce a la expansión del efecto
invernadero.

1.3.4.1. Tecnologías actuales de captura de 𝐂𝐎𝟐 y sus limitaciones

A. Absorción química

El sistema consta en un líquido con alta capacidad de reacción

química con el CO2. Los productos utilizados comúnmente con las
aminas como ejemplo están los monoetanolamina, dietanolamina,
metildietanolamina. La facilidad para enlazarse con el CO2 se debe a
los tres radicales libres del grupo nitro que tiene la amina (Llamas,
2009). Sin embargo, la principal limitación en este proceso (Figura N°
02) es la energía intensiva requerida durante la regeneración de la
solución de monoetanolamina (aprox. 3.7 GJ por tonelada de CO2
emitiendo alrededor de 352 kg de CO2 para absorber 1 tonelada de
CO2 por la solución monoetanolamina. Otro problema presente en el
proceso de absorción-desorción de las aminas es que la solución
puede reaccionar fácilmente con SO2. Incluso, puede reaccionar con
el oxígeno en los gases de combustión, produciendo productos de
degradación corrosivos y causando la corrosión de los equipos (Lam,
2012).

19
B. Adsorbentes sólidos

Entre los adsorbentes de CO2 están el carbón activado, zeolita, CaO,

etc. Sin embargo la principal desventaja de usar adsorbente sólido
para capturar CO2 es realizar un pre tratamiento al gas de combustión
antes de canalizar al adsorbedor. Esto se debe a que el alto contenido
de humedad en el gas de combustión puede contaminar los
adsorbentes y, por lo tanto, se requiere la regeneración frecuente de
adsorbentes. Otros problemas que se presentan en este proceso es
la baja capacidad de adsorción de adsorbentes, requisito para crear
alta presión o alta temperatura dependiendo de la configuración del
adsorbedor y la vida útil de los adsorbentes (Lam, 2012).

C. Tecnología de membrana

La tecnología de membrana se presenta por la interacción física o

química que tienen los gases y las membranas utilizadas, haciendo
que el gas se transfiera más rápido a través de la membrana,
actuando como un filtro (Llamas, 2009).

A diferencia del proceso de absorción química el consumo de energía

para separar el CO2 de los gases de combustión es mucho menor. Sin
embargo, el rendimiento de las membranas siempre se ve afectado
por la temperatura de funcionamiento y, por lo tanto, el enfriamiento
de los gases de combustión calientes es esencial para mantener la
eficiencia óptima del proceso de separación. Además, del alto
contenido de humedad en los gases de combustión también influye
en la permeabilidad y plastificación de la membrana. Existen también
limitaciones por los altos costos de fabricación de la membrana, ya
que requiere un efecto de incrustación y un área de superficie alta
para acomodar la alta velocidad de flujo de los gases de combustión
industriales (Lam, 2012).

Actualmente estas tecnologías se aplican antes, durante y después la

combustión como se detalla en la Figura N° 04.

20
21
1.4. Formulación del problema
1.4.1. Problema General
 ¿Cuál es el efecto de la concentración de dióxido de carbono y la agitación
al medio de cultivo sobre la fijación de carbono por la microalga
Phaeodactylum tricornutum?

1.4.2. Problemas Específicos

 ¿Cuál es la concentración de dióxido de carbono que incrementa la densidad
celular de la microalga Phaeodactylum tricornutum?
 ¿La agitación del medio de cultivo incrementa la densidad celular de la
microalga Phaeodactylum tricornutum?

1.5. Justificación del estudio

La presente investigación se justifica a nivel tecnico porque pretende llenar

algunos vacíos sobre el uso y cultivo de microalgas, el cual está tomando
relevancia a nivel mundial debido a su capacidad de absorción de
contaminantes, producción de biomasa con fines comerciales y fijación del
CO2. Dependiendo estos objetivos directamente del sistema de cultivo, de la
o las especies cultivadas y los factores ambientales (Hernández & Labbé,
2014).

Asimismo, presenta también una utilidad de uso práctico, al permitir reducir

las emisiones y potenciar los sumideros de CO2 emitido por los gases de
combustión producido por actividades antropogénicas.

Por otro lado la investigación metodológicamente se justifica porque servirá

como referencia para la mejora en la aplicación y experimentación del uso y
cultivo de microalgas, teniendo como objetivo, incrementar la productividad
del cultivo de microalgas para fijar biológicamente el carbono, además de su
gran valor comercial para la industria a través de la obtención de biomasa
como materia prima para la generación de otros productos.

Finalmente presenta una importancia social, ya que al mejorar las

condiciones del sistema de cultivo de las microalgas se está contribuyendo

22
 con una alternativa más viable para la mitigación del cambio climático.

1.6. Hipótesis
1.6.1. Hipótesis General
 El efecto de la concentración de dióxido de carbono y la agitación al medio
de cultivo sobre la fijación de carbono por microalga Phaeodactylum
tricornutum es significativo.

1.6.2. Hipótesis Específicas

 La concentración de dióxido de carbono que incrementa la densidad celular
de la microalga Phaeodactylum tricornutum es 25%.
 La agitación del cultivo incrementa la densidad celular de la microalga
Phaeodactylum tricornutum.

1.7. Objetivo
1.7.1. Objetivo general
 Evaluar el efecto de la concentración de dióxido de carbono y la agitación al
medio de cultivo sobre la fijación de carbono por la microalga Phaeodactylum
tricornutum.

1.7.2. Objetivos Específicos

 Determinar la concentración de dióxido de carbono que incrementa la
densidad celular de la microalga Phaeodactylum tricornutum.
 Determinar si la agitación del cultivo incrementa la densidad celular de la
microalga Phaeodactylum tricornutum.

I. MÉTODO
2.1. Diseño de investigación

Según la clasificación dada por Hernández (2014), el diseño de investigación

es:

Experimental

La presente investigación es de tipo experimental ya que se desea

comprobar los efectos de una intervención específica, ya que el investigador
influye de manera activa en la investigación, pues lleva a cabo una

23
intervención (Behar, 2008), además de cumplir el requisito de toda
investigación experimental; la manipulación intencional de una o más
variables independientes (Hernández-Sampieri, 2014).

Diseño factorial

Los diseños factoriales manipulan dos o más variables independientes e

incluyen dos o más niveles o modalidades de presencia en cada una de las
variables independientes (Hernández-Sampieri, 2014). El diseño propuesto
en la investigación se observa en la Tabla N° 03.

24
25
26
 Esquema de experimento y variables:

V.independiente V. dependiente

Concentración de dióxido de carbono.

Fijación de carbono

Agitación

Simbolización:

Tabla N° 03: Diseño experimental propuesto.

Sistemas Repeticiones
Tratamientos Con agitación Sin agitación Con agitación Sin agitación
(A) (B) (A) (B)
T0 (control) T0-A1 T0-B1
T0-A T0-B
T0-A2 T0-B2
T1 (8% de CO2) T1-A1 T1-B1
T1-A T1-B
T1-A2 T1-B2
T2 (25% de CO2) T2-A1 T2-B1
T2-A T2-B
T2-A2 T2-B2
T3 (50% de CO2) T3-A1 T3-B1
T3-A T2-B
T3-A2 T3-B2

Fuente: Elaboración propia.

27
2.2. Variables, operacionalización

Se describe la variable y dimensiones que serán utilizadas para la

determinación de los objetivos.

2.2.1. Variable independiente

Cuantitativa
 Concentración de dióxido de carbono
 Agitación
2.2.2. Variable dependiente
Cuantitativa
 Fijación de carbono

En la Tabla N° 04, se describe la operacionalización de las variables y sus

dimensiones.

28
 Tabla N° 04: Matriz de operacionalización.
Variables Definición conceptual Definición operacional Dimensión Indicadores

El CO2 se fija en las células microalgales y se

transfiere a compuestos que contienen
carbono, como carbohidrato, lípidos y Se determinará la fijación de carbono
Fijación de
calculando la densidad celular de la Densidad Cel/ml
carbono proteínas. Por lo tanto, la capacidad de fijación
microalga Phaeodactylum tricornutum. celular
de CO2 se refleja en la concentración celular de
las microalgas (Zeng et al., 2010).

Dosis v/v
Gas de efecto invernadero, principalmente
Se determinará las tres concentraciones de CO2
producido por la actividad humana, como la pH
Concentración diferentes más un control (0%, 8%, 25%, 50%
quema de combustibles fósiles sólidos y
CO2 v/v) midiendo el volumen que ingresa al µS/cm
de dióxido de Parámetros de
líquidos, los cuales incrementan la capacidad de
carbono cultivo sobre el volumen total y la medición de
la atmósfera para retener el calor (Appenzeller, cultivo °C
los parámetro de cultivos.
2004).
Lux

Influencia directa sobre la transferencia de

Se determinará la agitación calculando las Tiempo de
masa, siendo la transferencia de masa Horas
revoluciones por minuto y el tiempo de agitación
importante para la difusión e ingreso del CO2 a la
Agitación aplicación de las paletas utilizadas para la
célula (Rubio y Moreno, 2017). Velocidad de
agitación. rpm
agitación

Fuente: Elaboración propia

26
2.3. Población y muestra
Población

La población de este estudio fue de 475 ml de cultivo de la microalga

Phaeodactylum tricornutum.

Unidad de análisis

La unidad de análisis fue la microalga Phaeodactylum tricornutum, obtenida

del laboratorio de la Escuela de Ingeniería en Acuicultura de la Universidad
Nacional Federico Villarreal.

Muestra

Para el proceso cuantitativo, la muestra es un subgrupo de la población de

interés sobre el cual se recolectarán datos (Hernández-Sampieri, 2014). Es
por eso que la muestra de esta investigación estuvo representada por un 1ml
de cultivo de la microalga Phaeodactylum tricornutum.

2.4. Técnicas e instrumentos de datos, validez y confiabilidad

2.4.1. Técnicas e instrumentos

Las técnicas e instrumentos utilizados se detallan en la tabla N°05.

Tabla N 05: Técnicas e instrumentos

Objetivo Específico Técnica Herramienta

Determinar la concentración
de dióxido de carbono que Observación
incrementa la densidad experimental y Hoja de registro
celular de la microalga medición directa
Phaeodactylum tricornutum.

27
 Objetivo Específico Técnica Herramienta
Determinar si la agitación del
cultivo incrementa la Observación
densidad celular de la experimental y Hoja de registro
microalga Phaeodactylum medición directa
tricornutum.

Fuente: Elaboración propia

2.4.2. Validez y confiabilidad

Validez

La validez se refiere al grado en que un instrumento mide realmente la

variable que pretende medir (Hernández-Sampieri, 2014).

Para determinar la validez de los instrumentos se sometió las fichas de

recolección de datos al juicio de tres expertos.

Confiabilidad

La confiabilidad de un instrumento de medición se define como el grado en

que su aplicación repetida al mismo individuo u objeto produce resultados
iguales (Hernández-Sampieri, 2014).

2.5. Métodos de análisis de datos

Los resultados de los tratamientos realizados serán analizados mediante el

diseño factorial completo de múltiples niveles (4*2), a un nivel de
significación del 95% (p=0,05). Para el análisis descriptivo se empleó el
software Excel y para el análisis inferencial Minitab 18.

28
II. RESULTADOS
3.1. Procedimiento
3.1.1. Pre-cultivo de la microalga Phaeodactylum tricornutum

La cepa de la microalga Phaeodactylum tricornutum (Figura N° 04) fue

obtenida de la colección de cepas del laboratorio de cultivos menores de la
Escuela de Ingeniería en Acuicultura de la Universidad Nacional Federico
Villarreal.

Figura N° 05: Reconocimiento de la cepa de la microalga Phaeodactylum

tricornutum.

Se realizó un cultivo por escalamiento iniciándose con matraces Erlenmeyer

de 250 ml (110 ml de cultivo) utilizando agua de mar envejecida (24 horas
en reposo como mínimo), filtrada y autoclavada a 121ºC por 25 minutos.
Posteriormente se enriqueció el agua de mar ya esterilizada dentro de una
campana de bioseguridad con medio Guillard (f/2) con la ayuda de pipetas
estériles de 1 ml cada nutriente (Nitratos, fosfatos, trazas metales, vitaminas
y silicatos). Se inoculó al 10% utilizándose la campana de bioseguridad con
la ayuda de un mechero para tener un ambiente aséptico. Los volúmenes de

29
 matraces utilizados en los cultivos fueron 250 ml, 500 ml (250 ml de cultivo)
y 1 L (400 ml de cultivo). Para pasar de un volumen inferior a uno superior
se realizó un conteo celular en la cámara Neubauer.

3.1.2. Instalación del Sistema con agitación

Se utilizaron botellas plásticas y transparentes de un litro (botellas de primer

uso) para la instalación tanto del sistema con y sin agitación (Figura N° 06).
A los fotobiorreactores con agitación se le instaló motores a pilas que
impulsaron el movimiento circular de una paleta (Figura N° 07) con una
velocidad de agitación de 60 rpm y durante un tiempo de aplicación de seis
horas al día (10:00 am – 16:00 pm).

Fuente: Elaboración propia

Figura N° 06: Sistema de cultivo con agitación.

30
 Fuente: Elaboración propia
Figura N° 07: Sistemas con y sin agitación.

3.1.3. Inoculación en los sistemas con y sin agitación

Se inoculó la cepa Phaeidactylum tricornutum con una concentración de

2.3x106 cel/ml y un volumen de 5% (25 ml) respecto al volumen del medio
que fue de 450 ml por reactor y siguiéndose los mismos procedimientos
utilizados en el pre-cultivo (Figuras N° 08 y 09). En la Tabla N°06 se detalla
las condiciones iniciales del cultivo.

Tabla N°06: Condiciones iniciales de cultivo.

Parámetros Condiciones Concentración

abióticos iniciales de cultivo celular inicial

pH 7
CE 46 µS/cm
Temperatura 24 ± 1°C 2x106 cel/ml
Intensidad
1500 Lux
luminosa
Fotoperiodo 12:12 (Luz:noche)
Fuente: Elaboración propia.

31
 Fuente: Elaboración propia.
Figura N° 08: Inoculación de la microalga Phaeodactylum tricornutum en los
sistemas con y sin agitación.

Fuente: Elaboración propia.

Figura N° 09: Interior de la cámara de bioseguridad.

3.1.4. Inyección de dióxido de carbono

Se inyectó dióxido de carbono desde un tanque de gas puro con un flujo de

1 L/min. Las tres concentraciones diferentes que se inyectaron fueron de 8,
25 y 50% de CO2 v/v más el tratamiento control donde no se inyectó CO2.

32
Después de inyectar el CO2 se cerraba por completo el sistema durante una
hora, aumentando el tiempo de retención del gas suministrado hasta
completarse la transferencia de masa de gas a líquido y obtener la mayor
eficiencia de disolución de CO2. Este procedimiento se realizó durante 7 días
(el día 1 inició después de un día de inoculación, la cual se denominó día 0)
(Figura N° 09). Las concentraciones de dióxido de carbono se detallan en la
Tabla N°07.

Tabla N°07: Concentraciones de CO2 aplicados al medio de cultivo.

Tratamientos Volumen (ml) Concentración (v/v)

T0 (control) 0 0.0387% aprox. (valor teórico)

T1 38 8%

T2 118.75 25%
T3 237.5 50%

Fuente: Elaboración propia.

Fuente: Elaboración propia.

Figura N° 10: Tanque de CO2 y flujometro.

33
3.1.5. Medición de pH

Se midió el pH para controlar el CO2 disuelto en el medio de cultivo. Se medió

en dos horarios (9:00 am y 14:00pm).

Se utilizó un test de pH (Figura N° 11) para su medición y evitar así cualquier

tipo de contaminación que afectara la densidad celular de la microalga.

Fuente: Elaboración propia.

Figura N° 11: Medición de pH.

El pH durante los días de estudio no tuvo una variación, ya que diariamente se

realizaba el mismo procedimiento.
El pH tomado en las mañanas muestra como las microalgas lograron regularizar el
pH que se redujo un día antes al adicionarse el CO2 al medio de cultivo, como se
muestra en la Tabla N° 08 el pH medido en la tarde después de adicionar CO2 a
cada muestra se redujo.

34
 Tabla N° 08: Resultados de pH el día 6 en la tarde y día 7 en la mañana.
pH

Concentración de 𝐂𝐎𝟐 Con agitación Sin agitación

(% v/v)
14:00 pm 9:00 am 14:00 pm 9:00 am

0 7 7 7 7
0 7 7 7 7
8 6 7 6 7
8 6 7 6 7
25 6 7 6 6
25 6 7 6 6
50 6 7 6 6
50 6 7 6 6

Fuente: Elaboración propia

3.1.6. Determinación de la densidad celular

Se realizó el conteo de todas las células observadas a través del microocopio

trinocular clínico (marca:Olympus) en los cuatro cuadros externos de la
cámara Neubauer marcados como A, B, C y D como se observa en la Figura
N° 12.

Fuente: Arredondo y Voltolina (2007)

Figura N° 12: Rejilla de cámara Neubauer.

35
Para obtener la densidad celular se aplica la fórmula:

C = N/4 • 10000 (1)

En donde:

C = cél/mL

N = sumatoria de células presentes en los cuatro cuadrantes de 1 mm2 (0.1

µL) (A,B;C;D).

Diariamente se tomó 2 muestras de cultivo (aproximadamente 1ml) por cada

fotobiorreactor, es decir que se realizaron 32 conteos en la cámara Neubauer
que se observa en la Figura N° 12.

Fuente: Elaboración propia.

Figura N° 13: Cámara Neubauer.

Los resultados obtenidos de la densidad celular el último día de cultivo se

muestran en la Tabla N° 09, donde el 25% de CO2 v/v y agitación en
simultáneo fue el de mayor crecimiento celular.

Tabla N° 09: Resultados de la densidad celular el último día de cultivo.

Con agitación Sin agitación

Concentración de 𝐂𝐎𝟐
(% v/v) Densidad celular (Cel/ml)

0 1417500 1610000
0 1412500 1550000
8 1312500 1177500
8 1395000 885000
25 1390000 382500

36
 Con agitación Sin agitación
Concentración de 𝐂𝐎𝟐
(% v/v) Densidad celular (Cel/ml)

25 1672500 282500
50 1232500 120000
50 965000 112500

Fuente: Elaboración propia.

Estos resultados muestran diferencias significativas de densidad celular

entre los sistemas con y sin agitación a partir de la adición de CO2 al 25%
v/v.

3.1.7. Estimación del peso de biomasa

Se midió la densidad del medio de cultivo líquido utilizando un hidrómetro.

Se calculó el peso de la biomasa por diferencia de densidades medida el día
1 de cultivo y el día 7 al cultivo que obtuvo la mayor densidad celular en
células por mililitros.

Fuente: Elaboración propia

Figura N° 14: Medición de la densidad final utilizando el hidrómetro.

37
 Para obtener el peso de la biomasa se aplica la fórmula:

M=V.(di-df) (2)

En donde:

M= peso de biomasa (gramos)

V= volumen (mililitros)

di= densidad inicial (gramos/mililitros)

df= densidad final (gramos/mililitros)

A continuación en la Tabla N° 10 se observa los resultados de la biomasa

final obtenidos a partir de la diferencia de la densidad final e inicial del medio
de cultivo de la muestra que resultó con densidad celular superior a los otros.

Tabla N° 10: Resultados del peso de biomasa.

Diferencia Densidad Peso de

Concentración de Concentración
Densidad del celular biomasa
𝐂𝐎𝟐 (% v/v) de 𝐂𝐎𝟐 (g)
medio (Cel/ml) (g)
de cultivo (g/ml)

25 121.13 0.01 1672500 4.75

Fuente: Elaboración propia.

3.1.8. Análisis del crecimiento celular por observación

El enriquecimiento de carbono obtenido del CO2 inyectado genera un

incremento celular que se evidencia visualmente por el color del cultivo. En
las Figuras N° 15, 16, 17, 18 y 19, se muestran registros fotográficos durante
los días que se realizó la investigación.

Además en la Figura N° 15, se observa como el color pardo característico

de la microalga Phaeodactylum tricornutum se redujo a medida que la
concentración de CO2 se aumentó en los sistemas sin agitación.

38
 Fuente: Elaboración propia
Figura N° 15: Comparación del contenido celular a diferentes
concentraciones de CO2 y sin agitación el último día de estudio. a) T0
(control), b) T1 (8% CO2), c) T2 (25% CO2) y d) T3 (50% CO2).

Fuente: Elaboración propia

Figura N° 16: Comparación del contenido celular del a) T0 (control) con
agitación y b) T0 (control) sin agitación el último día de estudio.

39
 Fuente: Elaboración propia
Figura N° 17: Comparación del contenido celular del a) T1 (8% CO2), con
agitación y b) T1 (8% CO2), sin agitación el último día de estudio.

Fuente: Elaboración propia

Figura N° 18: Comparación del contenido celular del a) T2 (25% CO2), con
agitación y b) T2 (25% CO2), sin agitación el último día de estudio.

40
 Fuente: Elaboración propia
Figura N° 19: Comparación del contenido celular del a) T3 (50% CO2), con
agitación y b) T3 (50% CO2), sin agitación el último día de estudio.

3.1.9. Condiciones del desarrollo de Phaeodactylum tricornutum

El cultivo de la microalga Phaeodactylum tricornutum se inició con un inoculo

de 2.3x106 cel/ml por 25 ml en un volumen de 450 ml.

Fuente: Elaboración propia

Figura N° 20: Observación en el microoscopio de la microalga
Phaeodactylum tricornutum el día 0 o de inoculación.

41
 Fuente: Elaboración propia
Figura N° 21: Observación en el microoscopio de la microalga
Phaeodactylum tricornutum el día 4 de la muestra control.

3.2. Análisis estadístico

3.2.1. Curva de crecimiento del T0 (control) en los sistemas con y sin
agitación.

Fuente: Elaboración propia

Gráfico N°01: Crecimiento celular de la microalga Phaeodactylum
tricornutum con el tratamiento control (CO2 atmosférico) en los sistemas
con y sin agitación.

42
 La muestra T0 (control) a una concentración de CO2 atmosférico (aprox.
0.0387% v/v) tuvo cambios en el crecimiento microalgal entre el día 3 y 6 de
cultivo. Estas variaciones fueron a favor de la muestra con un sistema de
agitación al cultivo.

3.2.2. Curva de crecimiento del T1 (8% de 𝐂𝐎𝟐 v/v) en los sistemas con y sin
agitación.

Fuente: Elaboración propia.

Gráfico N°02: Crecimiento celular de la microalga Phaeodactylum
tricornutum con el tratamiento uno (8% de CO2 v/v) en los sistemas con y
sin agitación.

En la muestra T1 (8% de CO2 v/v) se evidencia un cambio significativo el día

7 de cultivo donde la muestra sin agitación inició su descenso mientras que
el cultivo con agitación tuvo una tendencia a seguir aumentando.

43
3.2.3. Curva de crecimiento del T2 (25% de 𝐂𝐎𝟐 v/v) en los sistemas con y sin
agitación.

Fuente: Elaboración propia

Gráfico N° 03: Crecimiento celular de la microalga Phaeodactylum
tricornutum con el tratamiento uno (25% de CO2 v/v) en los sistemas con y
sin agitación.

Las muestra T2 (25% de CO2 v/v) a las mismas concentraciones y diferentes

condiciones de agitación se comparan y evidencian una diferencia
significativa a partir del día 4 de cultivo en adelante, incrementándose la
densidad celular (cel/ml).

44
3.2.4. Curva de crecimiento del T3 (50% de 𝐂𝐎𝟐 v/v) en los sistemas con y sin
agitación.

Fuente: Elaboración propia

Gráfico N° 04: Crecimiento celular de la microalga Phaeodactylum
tricornutum con el tratamiento uno (50% de CO2 v/v) en los sistemas con y
sin agitación.

La curva de crecimiento de la muestra T3 (25% de CO2 v/v) muestra un

incremento con el sistema con agitación a partir del día 4, mientras que el
cultivo sin agitación va descendiendo.

3.2.5. Efecto de las diferentes concentraciones de 𝐂𝐎𝟐 sobre el crecimiento

microalgal.
En el Gráfico N° 05 se observa como va en descenso el crecimiento de la
microalga a medida que aumenta la concentración de CO2 y sin una agitación
constante.
Sin embargo en el Gráfico N° 06 la agitación genera un efecto positivo sobre
el crecimiento de la microalga a concentraciones elevadas de CO2.

45
 Fuente: Elaboración propia
Gráfico N° 05: Comparación del crecimiento microalgal a diferentes
concentraciones de CO2 y en un sistema sin agitación.

A partir de la inyección de 8% de CO2 y sin una agitación constante (6 horas)

se inició un daño celular que generó la inhibición del crecimiento celular.

Fuente: Elaboración propia

Gráfico N° 06: Comparación del crecimiento microalgal a diferentes
concentraciones de CO2 y en un sistema con agitación.

46
 La inyección de CO2 en los sistemas con agitación constante tuvieron una
respuesta diferente a los cultivos sin agitación, ya que las altas
concentraciones de CO2 no provocaron una inhibición del crecimiento de la
microalga tan alta como la anterior. La inyección del 25% de CO2 se
incrementó comparado con la muestra control y la muestra sin agitación y a
las mismas condiciones de adición de CO2.

3.2.6. Diseño factorial de múltiples niveles

Se evaluó el efecto de las dos variables independientes sobre nuestra única

variable dependiente.

La hipótesis nula: el modelo no explica ninguna variación en la respuesta.

En la Tabla N° 08 podemos visualizar los valores de p para la concentración

de CO2, la agitación y su interacción. Para los tres términos el p valor por ser
menor a 0.05 indica que son significativamente diferentes, rechazando la
hipótesis nula.

Tabla N° 11: Análisis de varianza de los factores y su interacción.

Fuente: Minitab (2018)

Representación de los efectos de las medias ajustadas de la concentración

de CO2 y agitación sobre la media de crecimiento microalgal.

47
 Gráfica de efectos principales para Crecimiento microalgal
Medias ajustadas
Concentración CO2Agitación

1500000

Media de Crecimiento microalgal

1250000

1000000

750000

500000
0 8 25 50 A B

Fuente: Minitab (2018)

Gráfico N° 07: Gráfico de efectos principales.

Representación de los efectos estandarizados de la concentración de CO2 y

agitación y su interacción sobre el crecimiento microalgal. Donde la agitación
representa el mayor efecto.

Diagrama de Pareto de efectos estandarizados

(la respuesta es Crecimiento; α = 0.05)
2.306
Término
Factor Nombre
Concentración CO2
Agitación

AB

0123456789
Efecto estandarizado

Fuente: Minitab (2018)

Gráfico N° 08: Efectos estandarizados.

48
La representación de la interacción de los factores sobre la variable
respuesta. Identificando la concentración de CO2 al 25 % v/v y agitación
como la interacción más favorable.

Gráfica de interacción para Crecimiento microalgal

Medias ajustadas
Concentració * Agitación
1600000
1400000 Agitación A
1200000 B
1000000
800000
Media de Crecimiento microalgal

600000
400000
200000
0
0.08.025.050.0
Concentració

Fuente: Minitab (2018)

Gráfico N° 09: Gráfica de interacciones.

49
3. DISCUSIÓN

Entre los factores que influyen el crecimiento de las microalgas está el pH,
temperatura, agitación, aireación, 𝐶𝑂2 e iluminación (Niño, 2017). Está teoría se
comprueba en el presente estudio demostrándose un incremento del crecimiento
de células por mililitros entre el tercer y último día de cultivo. Además se puede
inferir que la microalga Phaeodactylum tricornutum a mayor concentración de CO2
requiere de mayor tiempo de agitación.

Li et al. (2017) encontraron que Phaeodactylum tricornutum después de crecer

bajo CO2 elevado (1000 μatm) presenta diferencias significativas en la fotosíntesis
y el crecimiento con la población mantenida a CO2 ambiente. Esto se puede
observar en los resultados obtenidos a concentraciones de CO2 (8%, 25% y 50%
v/v) y sin agitación constante que el crecimiento celular disminuye con respecto a
la muestra que consume solo CO2 atmosférico (0.0387% v/v aprox). Se puede
concluir que la microalga si es capaz de tolerar elevadas concentraciones de CO2
pero requiriendo de una mezcla adicional por agitación.

Ravelonandro et al. (2010) examinaron la influencia de la agitación del cultivo, la

salinidad media y la adición de CO2 (que oscila entre 0 y 2% v / v) sobre el
crecimiento y el contenido de proteína de Arthrospira (Spirulina) platensis.
Resultando un mejor crecimiento de la microalga en una columna de burbujas sin
mezcla adicional debido a que las células de Arthrospira (Spirulina) platensis son
frágiles. En cambio la microalga Phaeodactylum tricornutum según los resultados
de esta investigación obtuvo un mejor crecimiento con una mezcla adicional. Esto
demuestra que el crecimiento es diferente según la especie y condiciones
ambientales asignadas, pues las células de Phaeodactylum tricornutum pueden
ser lentamente móviles debido a que no tienen flagelos.

Sankar, Daniel y Krastanov (2014) en su investigación realizaron un estudio

comparativo del crecimiento de tres cepas de microalgas (Calothrix sp., Spirulina
platensis y Chlorella minutissima) en relación a los parámetros cinéticos, tolerancia
al CO2, etc. Además, se llevaron a cabo estudios con agitadores, con diferentes
tasas de aireación. Finalmente se obtuvo que el agitador presentó mejores

50
rendimientos de biomasa en ambas operaciones, es decir, con y sin CO2. De la
misma manera que la presente investigación.

Anjos, et al (2013) buscaron maximizar la tasa de fijación de CO2 por la microalga

verde Chlorella vulgaris cultivada fotoautótroficamente en fotobiorreactores de
columna de burbujas bajo diferentes concentraciones de CO2 (entre 2% y 10%) y
tasas de aireación (desde 0.1 a 0.7 vvm). Los resultados mostraron que la tasa de
fijación máxima se obtuvo usando 6.5% de CO2 y 0.5 vvm después de 7 días de
cultivo demostrando que la optimización de las condiciones de cultivo de microalgas
se puede considerar una estrategia útil para maximizar la bio-mitigación de CO2 por
C. vulgaris. De la misma manera el presente estudio obtuvo un incremento del
crecimiento celular de la microalga Phaeodactylum tricornutum usando 25% de CO2
y agitación en simultáneo, confirmando que la optimización de las condiciones de
cultivo se puede considerar una estrategia útil para maximizar el cultivo de
microalgas.

El aumento del crecimiento de algunas especies de microalgas cuando se

incrementa la turbulencia, es debida a la mejora del suministro de luz y CO2. Sin
embargo, a niveles mayores de turbulencia, el crecimiento se ve disminuido
drásticamente, aumentando simultáneamente la velocidad superficial del gas
causando un posible daño celular (Contreras et al., 2003). Esta teoría afirma los
resultados obtenidos, es decir, las diferentes concentraciones de CO2 y la adición
de turbulencia por agitación aumenta el crecimiento de la microalga marina
Phaeodactylum tricornutum, sin embargo, cuando se aplica las mismas
concentraciones de CO2 pero sin agitar en cultivo obtenemos una disminución de
las células y se presenta drástica a una concentración del 50% de CO2.

García et al. (2000) concluye que las bajas tasas de agitación mecánica por la
ruptura de burbujas en la superficie de cultivo fue la causa predominante de daño
celular en la microalga Porphyridium cruentum. Afirmando los resultados que se
presentaron en los cultivos sin agitación y elevadas concentraciones de CO2.

51
4. CONCLUSIONES
 Se pudo comprobar que el efecto de la concentración de dióxido de carbono y
la agitación del cultivo de la microalga Phaeodactylum tricornutum sobre la
fijación de carbono es significativo, ya que a mayor concentración de dióxido
de carbono y agitación en simultáneo hubo un aumento de la densidad celular
en 1.29 × 106 cel/ml.
 Una estimación del peso de biomasa máximo fue 4.75 g con una concentración
de CO2 de 25% v/v y agitación del cultivo. Concluyendo que para producir este
peso se requiere de 121.13 g de CO2.
 La densidad celular máxima obtenido por la microalga Phaeodactylum
tricornutum fue de 1.67 × 106 cel/ml sometida a una concentración de CO2 y
agitación del cultivo al mismo tiempo. Corroborándose que la concentración de
dióxido de carbono que incrementó el crecimiento de la microalga
Phaeodactylum tricornutum fue el 25% v/v.
 La densidad celular de la microalga Phaeodactylum tricornutum en los
tratamientos T1 (8% de CO2 v/v), T2 (25% de CO2 v/v) y T3 (50% de CO2 v/v)
fueron 1.395 × 106, 1.673 × 106 y 1.233 × 106 cel/ml respectivamente,
incrementándose con la agitación del cultivo comparados con los cultivos sin
agitación.
 Se comprobó que a mayor concentración de CO2 requiere de una mayor
agitación del cultivo para generar una mayor eficiencia de la transferencia de
masa de gas-líquido ya que se genera mayor cantidad de burbujas al ingresar
el gas.

52
5. RECOMENDACIONES
 Se sugiere continuar con investigaciones que optimicen la fijación de CO2
variando otros factores que afecten directamente el crecimiento de la microalga
como la temperatura, nutrientes, tiempo de inyección y otro tiempos de
agitación.
 Se podría analizar si las altas concentraciones de CO2 afectaron el alto
contenido de ácidos grasos que se conoce que tiene la especie estudiada.
 Es importante completar el estudio realizando el análisis elemental de carbono
a la biomasa obtenida para determinar la tasa de fijación de CO2.
 Es recomendable realizar cultivos con volúmenes a partir de 5 litros si se desea
analizar el porcentaje de carbono ya que en el Perú la única institución que
puede realizarlo pide como mínimo 5 gramos de biomasa en seco.
 Se recomienda realizar un estudio integral de los potenciales de la especie
como fijadora de CO2, para el tratamiento de aguas residuales y obtención de
un producto final.
 Se recomienda experimentar con la fijación de CO2 con gases de combustión
real y los efectos del resto de gases de combustión sobre su crecimiento.

53
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https://revistas.ucr.ac.cr/index.php/cienciaytecnologia/article/view/19667/19
748
ISSN: 0378-0524

61
50. Xie, Y.P [et. al]. Simultaneous enhancement of CO2 fixation and lutein
production with thermo tolerant Desmodesmus sp. F51 using repeated fed
batch cultivation strategy. Biochemical Engineering Journal [en línea]. Mayo
2014, Vol. 86, p. 33–40.
Dispnible en:
https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1369703X14000485
ISSN: 1369-703X
51. ZENG, Xianhai. Microalgae bioengineering: From CO2 fixation to biofuel
production. Renewable and Sustainable Energy Reviews [en línea]. Agosto
2011, Vol 15, p. 3252-3260, [fecha de consulta: 25 Abril 2018]
Dispnible en:
http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1364032111001511
ISSN: 1364-03

62
 ANEXOS

Anexo N°01: Fichas de toma de datos.

Densidad celular (cel/ml)

Tratamientos Réplicas Día 0 Día 1 Día 2 Día 3 Día 4 Día 5 Día 6 Día 7
T0-A1
T0-A2
T0
T0-B1
T0-B2
T1-A1
T1-A2
T1
T1-B1
T1-B2
T2-A1
T2-A2
T2
T2-B1
T2-B2
T3-A1
T3-A2
T3
T3-B1
T3-B2

Fuente: Elaboración propia

pH
Hora
Dia
9:00 a.m. 2:00 p.m.
1
2
3
4
5
6
7

Fuente: Elaboración propia

Anexo N°02: Diseño factorial de múltiples niveles, Minitab 18

Fuente: MInitab (2018)

Fuente: MInitab (2018)

Anexo N°03: Regresión factorial general.

Fuente: MInitab (2018)

Anexo N°04: Validación de instrumentos.
 Anexo N°05: Matriz de consistencia.

Definición
Tipo Problemas Objetivos Hipótesis Variables Definición conceptual Dimensión Indicadores
operacional

¿Cuál es el Evaluar el efecto El efecto de la

efecto de la de la concentración El CO2 se fija en las
concentración concentración de dióxido de células microalgales y se
de dióxido de de dióxido de carbono y la transfiere a compuestos
carbono y la carbono y la agitación al que contienen carbono,
Se determinará la
agitación al agitación al medio de cultivo como carbohidrato, lípidos
fijación de carbono
Fijación de y proteínas. Por lo tanto, la
General medio de cultivo medio de cultivo sobre la fijación calculando la Densidad Cel/ml
carbono capacidad de fijación de
sobre la fijación sobre la fijación de carbono por densidad celular de la celular
de carbono por de carbono por microalga CO2 se refleja en la
microalga
la microalga la microalga Phaeodactylum concentración celular de
Phaeodactylum
Phaeodactylum Phaeodactylum tricornutum es las microalgas (Zeng et al.,
tricornutum.
tricornutum? tricornutum. significativo. 2010).

Determinar la La
Gas de efecto
¿Cuál es la concentración concentración Se determinará las tres Dosis v/v
invernadero,
concentración de dióxido de de dióxido de concentraciones de
principalmente producido
de dióxido de carbono que carbono que CO2 diferentes más un
por la actividad humana,
carbono que incrementa el incrementa el control (0%, 8%, 25%,
Concentración como la quema de pH
incrementa el crecimiento de crecimiento de la 50% CO2 v/v) midiendo
de dióxido de combustibles fósiles
crecimiento de la microalga microalga el volumen que ingresa
Específicos carbono sólidos y líquidos, los
la microalga Phaeodactylum Phaeodactylum al cultivo sobre el µS/cm
cuales incrementan la
Phaeodactylum tricornutum. tricornutum es volumen total y la Parámetros
capacidad de la atmósfera
tricornutum? 25%. medición de los de cultivo °C
para retener el calor
(Appenzeller, 2004).
Problemas parámetro de cultivos.
Lux
 Definición
Tipo Problemas Objetivos Hipótesis Variables Definición conceptual Dimensión Indicadores
operacional

¿La agitación Determinar si la La agitación del

Influencia directa sobre la
del cultivo agitación del cultivo Se determinará la Tiempo de
transferencia de masa, Horas
incrementa el cultivo incrementa el agitación calculando agitación
siendo la transferencia
crecimiento incrementa el crecimiento las revoluciones por
de masa importante para
la difusión e ingreso del
celular de la crecimiento celular de la Agitación minuto y el tiempo de
CO2 a la célula (Rubio y Velocidad
microalga celular de la microalga aplicación de las
Moreno, 2017). de rpm
Phaeodactylum microalga Phaeodactylum paletas utilizadas para
tricornutum? Phaeodactylum tricornutum. la agitación. agitación

tricornutum.
Anexo N° 06: Informe de similitud.