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Ejercicio 3 Microscopio

Explique las principales características y usos de los diferentes tipos de

microscopios fotónicos.

a) Microscopio de campo claro.

Es también conocido como microscopio de luz, es un

instrumento de laboratorio que sirve para la
visualización de elementos microscópicos.

Su diseño se considera sencillo debido a que no tiene

polarizadores de luz, ni filtros que puedan modificar el
paso de los rayos luminosos como ocurre en otros tipos
de microscopios, la luz ilumina a la muestra de abajo
hacia arriba; atraviesa la muestra y luego es
concentrada en el objetivo elegido, formando una
imagen que se dirige hacia el ocular y que resalta en un campo claro.

El microscopio consta de:

● Sistema de lentes: Poseen un solo ocular, pero los binoculares contienen

dos y son de lentes divergentes. Su propósito es aumentar la imagen real
que proviene de la muestra

● Sistema de iluminación: Posee una lámpara, condensador, diafragma y

un transformador y se encarga de proporcionar la fuente de luz y su
regulación.

● Sistema mecánico: Posee un tubo, revolver, tornillo macrométrico y

micrométrico, platina, carro, pinzas sujetadoras, brazo y la base. Todos
estos elementos dan soporte y funcionalidad al sistema de lentes y de
iluminación.

Ventajas Desventajas

● Excelente calidad óptica a pesar ● No es útil para la observación

de ser un microscopio simple de células vivas
● Uso fácil y cómodo ● Requiere una muestra teñida

● Cuenta con varios niveles de ● Se necesita de buena

aumento iluminación del exterior

● Pueden asociarse a una cámara

digital

b) Microscopio de campo oscuro.

Es una modificación aplicada al sistema de campo claro, esta utiliza un

enfoque de luz en forma de cono que atraviesa la muestra la cual al estar
coloca sobre un fondo oscuro se hace visible al dispersar la luz.

En este sentido el microscopio de campo oscuro permite la utilización de

rayos de luz para percibir en la muestra analizada las partes transparentes
y las sólidas que son las que interesan estudiar.

Características:

La composición del microscopio de campo oscuro presenta modificaciones

importantes con respecto al de campo claro, pues los fundamentos de
ambas microscopías son opuestos.

Partes:

● Sistema Mecánico: Conformada por un

tubo, revolver, tornillo macrométrico y
micrométrico, platina, pinzas sujetadoras,
brazo y base.

● Sistema óptico:

● Los objetivos son de forma cilíndrica, posee

lente en la parte inferior que aumenta la
imagen que proviene de la muestra.
● Los oculares tienen forma cilíndrica y hueca.
Estos poseen en su interior lentes convergentes que amplían la imagen
virtual creada por el objetivo.
 ● Sistema de iluminación: Conformada por lampara, diafragma,
condensador, condensadores de refracción y reflexión (Este último
cuenta con paranoides y cardioides)

Tabla de comparación
Parámetros Campo claro Campo oscuro

Se necesita que su Se necesita que su espécimen sea

● Muestra
espécimen sea oscuro brillante.

Aquí la muestra debe fijarse No es necesario teñir la muestra.

y teñirse.
● Condición de
muestra
Debido a la tinción de la
Este microscopio mejora la
muestra, se mejora la
resolución sin ningún tipo de tinción
resolución.
● Resolución

Este microscopio es bastante caro.

Estos no son caros.

El disco opaco no está

● Gastos presente en él. El disco opaco existe en este
microscopio.

● Disco opaco
Usar este microscopio es
bastante fácil. Usar este microscopio no es fácil.
 El estudio de los minerales
no es posible con este
Estudiar minerales, cristales,
● Usabilidad microscopio
metales es posible con este
microscopio.

● Estudio en
minerales

c) Microscopio de contraste de fases. Es un tipo de

microscopio que permite observar muestras vivas
sin necesidad de usar técnicas de tinción.
Funciona aumentando el contraste de las fases de
las ondas que llegan al objetivo. Esto significa que,
en este microscopio, el contraste de cada onda
depende de su fase.

Para entender lo último debemos saber que las

ondas pueden caracterizarse a partir de tres
parámetros:

o Amplitud: magnitud que alcanza la onda en su

punto máximo. El valor de una onda está siempre
contenido en un rango de valores limitado por su
amplitud.
o Frecuencia: indica la cantidad de ciclos de una onda por unidad de tiempo
y se mide en hercios.

o Fase: medida de la posición de la onda respecto a un punto de referencia.

La fase de una onda se puede medir en grados.

El microscopio de contraste de fases se basa en la existencia de una diferencia de

fases entre las distintas ondas de luz que pasan a través de la muestra para
generar la imagen de la observación. Funciona de forma similar a un microscopio
compuesto convencional, pero incluye también algunos elementos adicionales que
le permiten detectar los cambios en las fases de las ondas.
Este microscopio aprovecha las pequeñas diferencias de los índices de refracción
en las distintas partes de una célula y en distintas partes de una muestra de tejido.
La luz que pasa por regiones de mayor índice de refracción experimenta una
deflexión y queda fuera de fase con respecto al haz principal de ondas de luz que
pasaron la muestra. Apara otras longitudes de onda fuera de fase por medio de
una serie de anillos ópticos del objetivo y del condensador, anula la amplitud de la
porción fuera de fase inicial del haz de luz y produce un contraste útil sobre la
imagen. Las partes oscuras de la imagen corresponden a las porciones densas del
espécimen; las partes claras de la imagen corresponden a porciones menos
densas.

Partes: pueden dividirse entre las del sistema mecánico y las del sistema óptico.

● Sistema mecánico: Es equivalente al de un microscopio compuesto

convencional. Este incluye la base, el brazo, el tubo, la platina, el revólver y
los tornillos macrométrico y micrométrico.

● Sistema óptico: similar al de un microscopio convencional, pero incluye

también algunos elementos adicionales. Los elementos básicos son el
objetivo, los oculares, el foco de luz, el condensador y el diafragma.
Adicionalmente también es necesario un anillo de fase y un filtro.

d) Microscopio de fluorescencia.
Es un microscopio óptico convencional al que se le
adapta un accesorio complementario de
iluminación, denominado “fluorescencia”

Fue creado a inicios del siglo XX por los científicos

Carl Reichert, Heinrich Lehmann y August Köhler.
Su función más básica de un microscopio de
fluorescencia es la de permitir que la luz excitada
irradie el espécimen, para luego separar la luz más
débil emitida de la imagen.

Componentes:

● Fluorocromos o Tintes fluorescentes:

Compuestos químicos fluorescentes típicamente algunos grupos

aromáticos combinados a moléculas planas o cíclicas. Poseen la
capacidad de emitir luz tras la excitación por luz.
 ● Fuente de luz:

La luz que se emplea en este microscopio es de ciertos tipos específicos

para lograr la correcta absorción y posterior excitación del fluorocromo.
Filtro de excitación
Es un filtro de banda que solo permite el paso de las longitudes de onda
específicas que son absorbidas por el fluorocromo. Minimizando y evitando
la excitación por otras fuentes fluorescentes.

● Espejo dicroico

Es un segundo filtro un poco más específico, es de tipo color que se emplea

para pasar luz de forma selectiva en una precisa gama de colores.

● Filtro de emisiones.

Es un tercer filtro ya no direccionado a la luz de incidencia si no a la de

emisión de la muestra. Es un filtro de banda que solo permite el paso de las
longitudes especificas emitidas por el tinte fluorescente. Bloqueando así
toda luz no deseada, especialmente la luz de excitación. Así se garantiza
una obtención de fluorescencia clara con fondo oscuro.

Ventajas Desventajas

● Método popular para el estudio del ● Los fluorocromos presentan una

comportamiento en imágenes de falla en la emisión de fluorescencia
células vivas. cuando son sometidos a una foto
blanqueo
● Especificidad en compuestos por la
aplicación de tinciones modificadas ● Susceptibilidad celular a la
para unión a moléculas concretas. fototoxicidad sin antecedentes ante
la exposición a longitudes de onda
● Alta sensibilidad, específicamente 50 cortas.
moléculas por micrómetro cúbico.
● Solo permite la observación de
● Diferenciación molecular en grupo lo estructuras específicas con marcado
que se refiere a que se pueden teñir previo. Lo que solo permite analizar
distintas moléculas de diferentes el solo objetivo del estudio y no un
colores en un mismo estudio. panorama general.

e) Microscopio de luz polarizada.

Es un dispositivo óptico convencional al que se
agregan dos polarizadores, uno de cuarzo y otro de
Nicol. El objetivo de dichos polarizadores es filtrar la
luz, y al final solo transmitir ondas lumínicas que
vibran en un plano específico (o luz polarizada).

Esta metodología de observación se emplea para la

investigación de especímenes y sus propiedades
ópticas. Su uso más frecuente se basa en el estudio
de los minerales, pero también es funcional en la
ciencia de la biología, para estudiar determinados
tejidos en células vivas. Sustancias como la miosina
y la actacina, reaccionan a la birrefringencia
generada por esta metodología.

Está diseñado para observar y fotografiar especímenes que son visibles

principalmente por su naturaleza ópticamente anisotrópica.

Este microscopio se diferencia de uno convencional por incluir un conjunto de

dispositivos de polarización. Los más relevantes, son el filtro de polarización y el
analizador. Estas son láminas fabricadas en polaroid o prismas.

El primer filtro, que se ubica entre el emisor de luz y el condensador, debe girar en
un radio de 360°. El segundo, que se interpone entre la muestra y el lente de
observación, puede girar entre 90° y 360°. Otros componentes de este dispositivo
son los siguientes:

● Condensador polarizador.

● Platina circular.

● Objetivos polarizadores.

● Objetivo visible en el campo visual.

● Lente de Bertrand.

Referencias:

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