Inés Rojas de León
Preguntas de Revisión Bloque II – MOL I
1. Diferencias entre eucariotas y procariotas. Resume en un esquema las principales
diferencias morfológicas y fisiológicas entre los dos tipos de organización celular.
La principal diferencia radica en que en los Procariotas no tienen el material genético separado
del citoplasma y los Eucariotas presentan el material genético organizado en cromosomas
rodeados por una membrana que los separa del citoplasma, es decir, el núcleo.
PROCARIOTAS EUCARIOTAS
ADN en nucleoide Núcleo rodeado por membrana. Cromosomas
Células pequeñas 1-10 µm En general células grandes, (10-100 µm)
División celular por mitosis.
División celular directa, por fisión binaria.
Presenta huso mitótico, o alguna forma de
No hay centríolos, huso mitótico ni microtúbulos.
ordenación de microtúbulos.
Sistemas sexuales escasos, si existe intercambio
Sistemas sexuales frecuentes. Alternancia de fases
sexual se da por transferencia de un donador a
haploides y diploides mediante Meiosis y
un receptor.
Fecundación
Formas anaerobias estrictas, facultativas,
Casi exclusivamente aerobias
microarerofílicas y aerobias
Ausencia de mitocondrias: las enzimas para la
oxidación de moléculas orgánicas están ligadas a Las enzimas están en las mitocondrias
las membranas
Flagelos simples formados por la proteína Flagelos compuestos, (9+2) formados por tubulina
flagelina y otras proteínas
En especies fotosintéticas, las enzimas necesarias Las enzimas para la fotosíntesis se empaquetan en
están ligadas a las membranas. los cloroplastos.
2. ¿Por qué los microorganismos son ubicuos y a qué se debe?
Porque se encuentran en todas partes ya que han desarrollado muchas estrategias adaptativas
que les permiten propagarse a todos los ambientes posibles. Levan millones de años
3. Si vas dando un paseo por la montaña y tienes sed y de pronto ves un arroyo de agua
cristalina. ¿Beberías de esa agua? ¿Por qué?
No, porque aunque parezca que está limpia, se encuentra plagada de microorganismos que no
podemos ver, y podrían ser malos para nuestra salud.
4. ¿Las formas superiores de vida existirían sin los microorganismos?
No, sin su presencia y sin su actuación no sería posible la continuidad de la vida sobre la
superficie de la tierra, es decir, no habría ni vegetales ni animales en nuestro planeta. El
oxígeno que respiramos proviene de la actividad microbiana. Al principio el planeta no tenía
oxígeno.
5. Cita a los padres de la Microbiología. Conoces algunas de sus aportaciones a esta Ciencia.
Antonie van Leewenhoek fue el hombre que describió los primeros microorganismos.
Ferdinand Cohn -Padre de la bacteriología- desarrolló “métodos simples y efectivos” para
evitar la contaminación de medios de cultivo estériles, como el uso del algodón hidrófobo para
cerrar los tubos y los matraces. Descubrió el género Bacillus y el proceso de formación de
endosporas.
John Tyndall demostró la falsedad de la generación espontánea.
Louis Pasteur demostró que en el aire había estructuras muy parecidas a los microorganismos
encontrados en el material putrefacto y usó el calor para eliminar los contaminantes en los
alimentos.
Robert Koch -el abuelo de la clonación- fue el primero que cultivó bacterias en medios de
cultivo sólidos y obtuvo cultivos axénicos o puros. Descubrió el bacilo de la tuberculosis
Mycobacterium tuberculosis y el bacilo del cólera Vibrio cholerae. Trabajó en el aislamiento de
agentes infecciosos y reinfecciones a partir de cultivos puros, experiencias a partir de las cuales
estableció los "Postulados de Koch".
Walter Hesse con la ayuda de su mujer, descubrió el agar como un perfecto gelificante para
sus cultivos, ya que éste se funde a 100ºC, podía mezclarse con caldo líquido y verterse en
recipientes.
Richard Petri fue un microbiólogo alemán a quien se le atribuye la invención de la caja de
Petri, mientras trabajaba como asistente de Robert Koch.
6. ¿Para qué se utiliza en un laboratorio de microbiología (a) el extracto de levadura, (b) la
peptona y (c) el agar?
a) Se utiliza para proporcionar todas las vitaminas y componentes que resulten necesarios para
el crecimiento de las levaduras.
b) Proporciona nitrógeno para sintetizar proteínas
c) Es un gelificante que funde a 100º C, así lo podemos disolver con el caldo de cultivo para
después poder cultivar en medio sólido.
7. ¿Por qué se recomienda enfriar a 45°C el agar antes de verter en las cajas Petri?
Porque si se vierte muy caliente se produce mucha agua de condensación y hay que secar las
cajas antes de su uso. Los microorganismos no creerían formando colonias.
8. ¿Qué características tiene el agar en cuanto a composición química, valor alimenticio y
propiedades físicas?
Es un alga roja y gelatinosa, un complejo de polisacáridos compuesta por dos fracciones
principales: la agarosa, un polímero neutro, y la agaropectina, un polímero con carga
sulfatado.
Es rica en hidratos de carbono, minerales; calcio, yodo y sodio, en menor proporción fósforo y
hierro, vitaminas del agar; A, B, C y E.
Es soluble en agua a 100ºC, gelifica en temperaturas de 32ºC a 45ºC
9. ¿Por qué se deben esterilizar los medios inmediatamente se hayan mezclado sus
componentes?
Para no contaminar el medio y así conseguir un cultivo únicamente con los microorganismos
que queremos tener.
10. Después de 1 hora hemos observado que las placas no se han solidificado. ¿Podrías
explicar por qué no han solidificado?
Porque no había suficiente concentración de agar o las placas se encontraba en una superficie
que impidiese que la temperatura llegase a 45ºC y así solidificarse.
11. Después de esterilizar tubos con agar hemos observado que unos están sólidos y otros
no. ¿Por qué?
Porque hay que homogeneizar nuestro medio de cultivo para que todos se solidifiquen.
12. ¿Por qué se dice que Koch es el abuelo de la clonación?
Por una de las mayores contribuciones que hizo a la ciencia, su método de 1881, que servía
para propagar colonias individuales de bacterias en placas. Esta técnica lo llevó a su segundo
postulado, que es lo que conocemos como clonación.
13. ¿Qué es un cultivo axénico o puro?
Es un cultivo en el que se desarrolla únicamente una sola especie o cepa microbiana.
14. ¿Qué importancia tiene la obtención de un cultivo puro?
Es muy importante que nuestro cultivo sea puro para poder analizar solo el tipo de
microorganismo que deseemos. Si no, nuestro cultivo estaría contaminado de otras especies
que no nos interesa analizar.
15. ¿Cómo podrás verificar que una colonia sobre una placa de agar es un cultivo puro?
Trabajando al lado del mechero bunsen para encontrarnos en condiciones de esterilidad. Lo
comprobamos aislando los microorganismos por agotamiento o segmentación, las colonias se
quedan separadas y comprobamos si nuestro cultivo es puro.
16. Describir una técnica de aislamiento microbiano a partir de una fuente natural.
Por siembra de superficie en placa.
1.- La muestra se pipetea sobre la superficie del agar (0,1 mL o menos)
2.- La muestra se extiende suavemente utilizando el asa de Digralsky.
El resultado será de colonias en suspensión.
17. ¿Por qué es necesario invertir las cajas de Petri durante la incubación?
Para que al generarse vapores no se queden en la tapa y al condesarse caigan gotas al medio
de cultivo, pudiéndolo contaminar y que no se cree un charco de microorganismos en lugar de
formarse colonias.
18. ¿Por qué es mejor marcar los laterales inferiores de las cajas de Petri que en la tapadera?
Para que no nos estorbe a la hora de contar las colonias.
19. ¿Por qué es necesario esterilizar el asa de siembra antes y después de la transferencia de
los microorganismos?
Para no contaminar ni la muestra ni nuestro cultivo con otros microorganismos ni el ambiente.
20. ¿Por qué en la mayoría de los casos el uso del asa de siembra es mejor que el de una
aguja de siembra para los aislamientos por estrías?
Porque con la aguja podemos hacer algún orificio en el cultivo con agar, y la colonia no se
formaría en suspensión del agar sino dentro de éste.
21. ¿Mediante qué técnica podrías contar microorganismos viables en una caja de Petri?
Mediante aislamiento por disoluciones seriadas, tomando 0.1mL de todas las diluciones que
vamos obteniendo y las sembramos en placas de Petri mediante la técnica en superficie.
22. Define el término inoculación en Microbiología.
El término “inoculación” se refiere a la incorporación de una sustancia en un organismo. Puede
realizarse para trasmitir una enfermedad o proporcionar medios de defensa o inmunidad a
dicho organismo
23. ¿Por qué es necesaria la incubación de los microorganismos?
Para poder estudiarlos y ver como se combaten con medicamentos o vacunas.
24. En Microbiología ¿Qué significa el término crecimiento?
Entendemos por crecimiento microbiano el aumento del número de microorganismos a lo
largo del tiempo. Por tanto, no nos referimos al crecimiento de un único microorganismo (ciclo
celular), sino al demográfico. El crecimiento de una población es el aumento del número de
células como consecuencia de un crecimiento individual y posterior división.
25. Describir la técnica de inoculación en tubo por “picadura”.
1.- Esterilizamos la aguja. 2.- Tocamos la muestra.
3.- Realizamos una punción limpia sobre nuestro cultivo de agar semisólido en tubo.
4.- Volvemos a esterilizar la aguja.
26. Consulta las diferentes formas de desarrollo que se pueden observar en la siembra en
tubo con medio líquido, agar vertical inoculado por picadura y agar inclinado sembrado por
estría.
Siembra en tubo con medio líquido: se observa el crecimiento de microorganismos mediante el
enturbamiento del medio de cultivo, la formación de sedimento, desarrollo floculento y
formación de membrana.
Agar vertical inoculado por picadura: Sirve para observar la motilidad.
*Motilidad positiva: Presencia de turbidez difusa en el medio.
*Motilidad negativa: Presencia de crecimiento solo en el sitio de punción.
También podemos observar si los microorganismos son aerobios o anaerobios dependiendo
del lugar donde crezcan, si lo hacen en la superficie será porque necesitan oxígeno
Agar inclinado sembrado por estría: El cultivo tiene que darse por toda la superficie o de lo
contrario el cultivo estará contaminado.
27. Si siembras distintas diluciones de una muestra de un charco con el asa de Digralsky
sobre placas de agar nutritivo. ¿Formarán colonias todos los microorganismos que se
encuentran en ese charco? Razona la respuesta.
No formarán colonias todos en todas las placas, ya que al ir disolviendo cada vez más la
muestra se irán perdiendo algunos microorganismos de la muestra. El 90% no son cultivables.
28. ¿De qué manera podrías estudiar la cantidad global o diversidad de microorganismos que
hay en un ambiente directamente sin necesidad de cultivar y aislar microorganismos?
A través de metagenómiga, se toma ADN del ambiente se lleva a una base de datos y se
cuantifica. Te dice el conjunto de genomas que hay en un ambiente determinado.
29. ¿Por qué algunos microorganismos crecen cerca de la superficie de un medio líquido
mientras que otros se acumulan en el fondo del tubo?
Porque los que crecen en la superficie necesitan oxígeno para poder desarrollarse.
30. ¿Por qué no se puede estar seguro de que una colonia la ha formado un único
microorganismo que fue depositado en la placa?
Porque una misma colonia puede haber surgido de varias células. Puede que haya dos
microorganismos, que uno haga la colonia muy pequeña y otro que la hace mayor la invada.
31. ¿Por qué hay que fijar al calor la extensión antes de teñirla?
Para que se preserven y se fijen en una posición los microrganismos de la forma más parecida
posible a la de las células vivas. Las proteínas se desnaturalizan con el calor y el tinte se
desprendería.
32. ¿Qué característica presenta el aceite de inmersión?
No refracta los rayos de luz.
33. ¿Por qué es necesario teñir las extensiones?
Para observar la morfología y el agrupamiento de los microorganismos. Por el contraste
34. Cita los métodos más frecuentes de conservación de los microorganismos en el
laboratorio.
• Transferencia periódica: 4ºC (metabolismo alto)
• Congelación: -80ºC (glicerol, DMSO)
• Ultracongelación: Nitrógeno líquido (-196ºC)
• Deshidratación: (suelo estéril, discos de papel de filtro estériles)
• Liofilización: (deshidratación por congelación)
35. ¿Por qué es necesario preparar los medios de cultivo con agua destilada o
desmineralizada?
Para que no exista ningún compuesto que pueda perjudicar en el crecimiento del cultivo.
36. ¿Por qué es necesario calibrar el espectrofotómetro al 100% de transmitancia con medio
de cultivo estéril?
Se debe a que el aparato necesita ajustar la cantidad de luz emitida y recibida (desde la
lámpara hasta el detector de luz), por lo cual el agua (debido a sus propiedades ópticas) es
capaz (y solo ella) de realizar dicha operación para que las medidas registradas sean
confiables.
37. ¿Por qué motivo puede ser útil conocer la curva de multiplicación de un
microorganismo?
La curva del crecimiento bacteriano resulta de la representación gráfica de la determinación
periódica del número de células viables por mililitro que existen en un líquido inoculado con
células microbianas provenientes de un cultivo que ha crecido previamente hasta la
saturación.
38. ¿Se obtendría el mismo resultado si cuantificáramos las bacterias presentes en una
muestra por turbidimetría o por diluciones seriadas? ¿Por qué?
Turbidimetría cuento todo, hasta lo que no son bacterias, es un método indirecto y por
disoluciones seriadas sólo cuento las colonias.
39. Calcular el número de unidades formadoras de colonia/ml. Sabiendo que en la dilución
10-5 había 25 colonias de media por placa y que se sembraron con 0.1 ml cada placa.
UFC/mL = 25 . 105 / 0,1 = 2,5 . 107
40. Después de realizar una dilución seriada de una muestra natural, se sembraron 2 placas
de medio de cultivo a partir de las diluciones 10-4 y 10-5. Tras la incubación de las placas a 37
°C durante 24 horas, no apareció ninguna colonia. ¿Significa esto que no había ninguna
bacteria en la muestra problema?
Puede que sí hubiese bacterias pero las diluciones 10-4 y 10-5 estén demasiado diluidas y ya no
aparezcan las bacterias.
