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EVALUACIÓN DEL DESEMPEÑO DE LAS TABLETAS ROSCO™
PARA DETECCION DE β-LACTAMASAS TIPO AMPC.
M. Rapoport, F. Pasteran, C. Lucero, O. Veliz, A. Corso
Servicio Antimicrobianos. Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas INEI-ANLIS Dr. C. G. Malbrán - rapoport@[Link]
INTRODUCCIÓN MATERIALES Y MÉTODOS
En nuestro país la principal causa de resistencia a Los ensayos se realizaron e interpretaron de acuerdo a las recomendaciones del fabricante: En una placa de agar
cefalosporinas de espectro extendido (CEE) en Mueller-Hinton inoculada con una suspensión bacteriana equivalente al 0.5 de Mc Farland, se colocaron las 4
Enterobacterias (ENT) es la producción de β- tabletas ROSCO Neo-SensitabsTM (Rosco Diagnostica A/S, Dinamarca). Luego de incubar en aerobiosis por 16-18hs,
lactamasas de espectro extendido (BLEE). Sin se obtuvo el valor de las zonas de inhibición. INTERPRETACION: Si una o ambas de las combinaciones: CTX-CX,
CAZ-CX produce un incremento ≥ 5mm respecto a la cefalosporina sola, indica ensayo positivo para la
embargo, se reporta con más frecuencia, resistencia a
presencia de AmpC.
CEE mediada por enzimas tipo AmpC (cromosómico-
AmpC-c y/o plasmídico-AmpC-p). El reconocimiento de Se utilizó un panel de 38 ENT (1 Citrobacter freundii, 1 C. koseri, 6 Enterobacter cloacae, 4 Escherichia coli, 1
estas enzimas es crucial para guiar el tratamiento Hafnia alvei, 10 Klebsiella pneumoniae, 1 Morganella morganii, 4 Proteus mirabilis, 1 Providencia stuartii, 4 Shigella
antimicrobiano y evitar su diseminación. A diferencia spp., 4 Salmonella spp., 1 Serratia marcescens) con distintos perfiles de sensibilidad a β-lactamicos. Los
de lo que ocurre para ENT productoras de BLEE, la mecanismos de resistencia fueron previamente caracterizados por métodos moleculares: PCR/secuenciación.
detección de β-lactamasas tipo AmpC no se encuentra
estandarizada en ninguna normativa. Los métodos de RESULTADOS
detección de enzimas tipo AmpC se basan en el uso de
inhibidores como acido boronico (APB) y cloxacilina - El método permitió la detección de la totalidad de las cepas productoras de AmpC-p (como
(CX) ensayando sinergias con CEE y/o cefoxitina. El único mecanismo) y el AmpC-c derreprimido.
APB también es inhibidor de carbapenemasas de clase - No se observaron falsos positivos en cepas no productoras de AmpC.
A (KPC) limitando su especificidad. Ensayo Ensayo
Recientemente, se desarrolló un nuevo método para ID Nro Mecanismo/s AmpC ID Nro Mecanismo/s AmpC
determinar la presencia de estas enzimas en ENT, Kpn 9757 CMY Positivo Kpn ATCC 700603 SHV-18 Negativo
basado en el uso de cuatro tabletas ROSCOTM: Pmi# 9629 CMY Positivo Eco 5306 TEM-19 Negativo
Pmi# 11118 CMY Positivo Ecl GAR16 PER Positivo
1. Cefotaxima 30μg (CTX)
Pmi 9207 CMY Positivo Ecl PLA4 CTXM Negativo
2. Ceftacidima 30μg (CAZ) Pmi 9569 CMY Positivo Kpn 1826 CTXM+PER+imperm Negativo
3. Cefotaxima 30μg + Cloxacilina (CTX-CX) [Link] 11329 CMY Positivo
Ecl 3991 AmpC derrep+imperm Positivo
[Link] 7896 CMY Positivo
4. Ceftacidima 30μg + Cloxacilina (CAZ-CX) Kpn 9171 KPC Negativo
[Link] 13459 CMY Positivo
Cfr GUT8 WT Negativo
Salmonella 11380 CMY Positivo
Sma CEN31 WT Positivo
Eco 9235 CMY-2 Positivo
OBJETIVO Salmonella 5158 MOX Positivo
Ecl HMI23 WT Negativo
Kpn 11979 MOX Positivo Mmo POSB WT Positivo
EVALUAR EL DESEMPEÑO DE LAS [Link] 7782 ACC Positivo Pst 9113 WT Negativo
TABLETAS ROSCO COMBINADAS PARA Kpn 9233 FOX-5 Positivo Salmonela 13694 WT Negativo
LA DETECCION DE β-lactamasas TIPO Kpn 11773 DHA Positivo S. flexnerii 13701 WT Negativo
AmpC EN ENTEROBACTERIAS. Kpn 9236 DHA Positivo Eco ATCC 25922 WT Negativo
Eco 11711 CMY+PER Positivo Cko 7522 WT Negativo
Ref. tabla: WT= Wild Type / salvaje. Kpn= Klebsiella pneumoniae; Pmi= Kpn 11169 CMY+CTXM+imp Negativo
Proteus mirabilis; Eco= Escherichia coli; Ecl= Enterobacter cloacae; Cfr= Salmonella 9833 CMY+CTXM Positivo Limitaciones: No detectó el AmpC inducible en 3/5 cepas
Citrobacter freundii; Sma= Serratia marcescens; Mmo= Morganella morganii; salvajes (1 C. freundii, 1 E. cloacae y 1 P. stuartii). En 2/4
Pst= Providencia stuartii; Cko= Citrobacter koseri. #Pmi productor de CMY Kpn 9375 MOX+CTXM Negativo
con cefoxitina sensible.
cepas productoras de AmpC-p+BLEE simultáneamente
Ecl GUT18 CTXM+AmpC Negativo (MOX+CTX-M y CMY+CTX-M +impermeabilidad), el
AmpC-p AmpC+BLEE BLEE WT: salvaje Ecl HGC7 PER+AmpC Positivo AmpC-p no fue detectado por el método propuesto, siendo
enmascarado por la presencia de BLEE. El mismo efecto se
observó en 2/4 cepas productoras de AmpC-c+BLEE.
Ejemplos de desempeño de las tabletas ROSCO para detección de AmpC
CONCLUSIONES
* El método evaluado en el presente
trabajo resulta excelente para la
detección de mecanismos adquiridos y
transferibles como el AmpC plasmídico
en múltiples especies bacterianas y la
derrepresión del AmpC cromosómico.
Pmi 9629 CMY Kpn 9233 FOX-5 Salm 9833 CMY+CTX-M
Δ CTX-CX / CTX = 6 Δ CTX-CX / CTX = 4 Δ CTX-CX / CTX = 0 * Las limitaciones del método
Δ CAZ-CX / CAZ = 10 Δ CAZ-CX / CAZ = 10 Δ CAZ-CX / CAZ = 7 resultaron de bajo impacto ya que
estuvieron restringidas a cepas
salvajes con altos niveles de
sensibilidad o a cepas multi-resistentes
con más de un mecanismo adquirido de
resistencia a CEE (BLEE).
* Frente a ENT con resistencia a CEE y
resultado de BLEE negativo, resulta de
especial importancia la búsqueda de
Ecl 3991 AmpC-c der+imperm Cko 7522 WT Kpn ATCC 700603 SHV-18 otros mecanismos de resistencia, como
Δ CTX-CX / CTX = 8 Δ CTX-CX / CTX = 1 Δ CTX-CX / CTX = 2
enzimas de tipo AmpC.
Δ CAZ-CX / CAZ = 9 Δ CAZ-CX / CAZ = 0 Δ CAZ-CX / CAZ = 3
