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Métodos de separación y análisis biomolecular

El resumen describe diferentes métodos analíticos, sus principios de funcionamiento, ventajas y desventajas. La ultracentrifugación y la cromatografía de intercambio iónico separan muestras basadas en su densidad, tamaño o carga. La espectrometría de masas identifica compuestos mediante su relación masa/carga. La electroforesis bidimensional y ELISA miden proteínas y antígenos respectivamente. La secuenciación de aminoácidos y la cristalografía de rayos X determinan estructuras proteic
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Métodos de separación y análisis biomolecular

El resumen describe diferentes métodos analíticos, sus principios de funcionamiento, ventajas y desventajas. La ultracentrifugación y la cromatografía de intercambio iónico separan muestras basadas en su densidad, tamaño o carga. La espectrometría de masas identifica compuestos mediante su relación masa/carga. La electroforesis bidimensional y ELISA miden proteínas y antígenos respectivamente. La secuenciación de aminoácidos y la cristalografía de rayos X determinan estructuras proteic
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Método Funcionamiento Desventajas Ventajas

Ultracentrifugación Consiste en someter una Requiere un equipo Es un método rápido y


muestra a una fuerza especializado y costoso. sencillo. No necesita
centrífuga muy alta, lo Puede alterar la una fase estacionaria ni
que provoca la estructura o la actividad reactivos químicos.
separación de sus de las moléculas. Tiene Permite obtener
componentes según su una baja resolución y fracciones puras y
densidad y tamaño. Se capacidad. concentradas.
utiliza para aislar
partículas subcelulares,
macromoléculas o virus.

Cromatografía de Consiste en hacer pasar Requiere un tampón Es uno de los métodos


intercambio iónico una muestra por una para el equilibrio iónico. más potentes para
columna que contiene Tiene un alto coste separar partículas
una resina con grupos operativo por el uso del cargadas. Permite
funcionales iónicos. Los tampón. Sólo puede separar también iones
analitos se retienen en aislar moléculas inorgánicos. Se puede
función de su carga y cargadas. Puede usar tanto con fines
afinidad por los sitios de provocar la analíticos como
intercambio. Se utiliza desnaturalización o la preparativos. Tiene una
para purificar proteínas y modificación de las larga vida útil de las
otros compuestos proteínas. resinas.
cargados.

Espectrometría de Consiste en obtener Requiere que la muestra Es un método muy


masas iones a partir de sea volátil y sensible y preciso.
moléculas orgánicas en térmicamente estable. Permite determinar el
fase gaseosa, que se No siempre puede peso molecular exacto,
separan y se detectan diferenciar entre la fórmula molecular y
según su relación estructuras isómeras o los fragmentos
masa/carga. Se utiliza quirales. Necesita una estructurales de las
para identificar y fuente de ionización moléculas. Se puede
caracterizar compuestos adecuada para cada tipo acoplar a otras técnicas
químicos. de molécula. como la cromatografía
de gases o líquidos.
Existen bases de datos
de espectros de masas
para facilitar la
identificación de
compuestos conocidos.

Electroforesis en Consiste en separar Requiere un equipo Es un método muy


dos dimensiones proteínas u otras específico y un resolutivo y versátil.
macromoléculas según protocolo cuidadoso Permite separar miles
dos propiedades: su para evitar la de proteínas en un solo
punto isoeléctrico (pH en degradación o la gel bidimensional. Se
el que no tienen carga contaminación de las puede combinar con
neta) y su masa muestras. Tiene una otras técnicas como la
molecular. Se utiliza para baja reproducibilidad y espectrometría de
analizar el proteoma de una limitada capacidad masas o el western blot
una célula o tejido. de carga. Puede haber para identificar o
solapamiento o pérdida cuantificar las proteínas
de algunas proteínas separadas.
durante el proceso.

ELISA (Enzyme- Consiste en detectar y Requiere anticuerpos Es un método simple,


Linked medir la presencia o la específicos y rápido y económico.
ImmunoSorbent cantidad de una estandarizados para Permite analizar
Assay) sustancia (antígeno) en cada antígeno a muchas muestras
una muestra mediante el detectar. Puede haber simultáneamente en
uso de anticuerpos interferencias o placas de
específicos marcados reacciones cruzadas microtitulación. Tiene
con una enzima que con otras sustancias una amplia gama de
produce un cambio de presentes en la muestra. aplicaciones clínicas,
color al añadir un Tiene una baja ambientales e
sustrato. Se utiliza para sensibilidad y industriales.
diagnosticar especificidad
enfermedades comparado con otras
infecciosas, alergias o técnicas inmunológicas
cáncer, entre otras más avanzadas.
aplicaciones biomédicas.

Secuenciación de Consiste en determinar el Requiere una cantidad Es un método clásico y


aminoácidos orden de los aminoácidos suficiente y pura de la fundamental para el
que forman una proteína proteína o el péptido a estudio de las proteínas.
o un péptido. Se utiliza secuenciar. Puede haber Permite obtener
para conocer la dificultades para información sobre la
estructura primaria de las secuenciar regiones con identidad, el origen y la
proteínas y su relación aminoácidos evolución de las
con la función biológica. modificados, repetidos o proteínas. Se puede
poco reactivos. Tiene complementar con otras
una baja eficiencia y una técnicas como la
alta complejidad espectrometría de
comparado con otras masas o la
técnicas de cristalografía de rayos X
secuenciación más para obtener una
modernas. caracterización más
completa de las
proteínas.

Cristalografía de Consiste en irradiar un Requiere obtener Es un método muy


rayos X cristal de una sustancia cristales de buena poderoso y preciso para
con rayos X y analizar el calidad y tamaño resolver la estructura
patrón de difracción que adecuado de la molecular a nivel
se produce. Se utiliza sustancia a estudiar, lo atómico. Permite
para determinar la que puede ser difícil o conocer la forma, la
estructura tridimensional imposible en algunos disposición y las
de las moléculas, casos. Puede haber interacciones de las
especialmente las errores o artefactos en moléculas en el
biomoléculas como las la obtención o el análisis espacio. Tiene
proteínas o los ácidos de los datos de numerosas aplicaciones
nucleicos. difracción. Tiene una en química, biología,
limitación en la física, geología y
resolución espacial que materiales.
se puede alcanzar.

Espectroscopía de Consiste en someter una Requiere un equipo Es un método muy versátil y


resonancia muestra a un campo sofisticado y caro. Puede no destructivo. Permite
magnética nuclear magnético y medir la haber solapamiento o obtener información sobre
ensanchamiento de las la estructura, la
(RMN) absorción o emisión de señales espectrales debido estereoquímica, el
radiación a factores como el tamaño ambiente químico y las
electromagnética por molecular, la concentración interacciones moleculares
parte de los núcleos o la temperatura. Tiene una de los compuestos. Se
atómicos que poseen baja sensibilidad puede aplicar tanto a
espín nuclear. Se utiliza comparada con otras muestras sólidas como
para identificar y técnicas espectroscópicas. líquidas o gaseosas. Tiene
importantes aplicaciones
caracterizar compuestos en química, biología,
orgánicos e inorgánicos, medicina y ciencia de
así como para estudiar materiales.
procesos dinámicos
como reacciones
químicas o cambios
conformacionales.

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