1.
Introducción
Como bien sabemos la microbiología se encarga del estudio de microorganismos como
bacterias, hongos, parasitos, virus, entre otros, el realizar estudios a partir de una muestra de
interés, puede ayudar en detectar enfermedades, o bien si esa muestra es apta para el
consumo, como lo son los alimenos. La microbiología de alimentos, permite identificar
microorganismos que se encuentran en los alimentos de manera natural, sea ya bien que lo
contiene a partir del contagio como materia prima, o por contaminación causada por el
ambiente al que son expuestos. El análisis de lo alimentos es importante porque de esa manera
es posible conocer que tipo de microorganismo esta alojado en el alimento, debido a que
consumir un alimento contaminado puede ser perjudicial para la salud, causando en casos
severos, la muerte.
La identificación de microorganismos es posible mediante cultivos en laboratorio, con medios
que favorezcan el crecimiento del microorganismo que se desee identificar. Entre algunas
bacterias que comunmente se encuentran en alimentos están:
Campylobacer jejuni: que se puede encontrar en carne de res, pollo o pescados crudos,
leche cruda y agua no tratada.
Clostridium boulinum: se encuentran en comida húmeda y con poco acido, provoca el
botulismo causando parálisis muscular, esta bacteria se aloja en alimento enlatados,
envasados al vacio.
Clostridium perfringens: produce esposas resistentes al calor, por lo que la hace
peligrosa, se puede alojar en carne de res y productos derivados de ella.
Escherichia coli (patogenica): presente en carne de res, quesos frescos, producto sin
pasteurizar y agua contaminada, produce diversas toxinas que pueden ser mortales.
Salmonella energéticos: bacteria que puede afectar los ovarios de las gallinas,
contaminando los huevos incluso antes de ser expuestos al ambiente.
Staphylocccus aureus: puede estar presentes en productos lácteos, ensaladas, carne de
res y pollo crudo.
En la actualidad existen Normas Oficiales Mexicanas que regulan la contaminación o presencia
de microorganismos en alimentos, basándose en un minimo contenido de cualquier patogeno,
lo que indica que cualquier alimento que sobrepase los límites establecidos no son aptos para
consumo humano.
Cómo procedimiento de análisis bacteriano o microbiologico, implica la normas, puesto que, en
ella se describe la metodología para su toma y transporte de muestra, cultivo, incubación e
identificación.
Si bien durante la practica se habra de identificar la presencia de Staphylococcus aureus en
muestra de queso fresco que es comercializado en mercados, que bien están expuestos a
distintos cambios de clima, así cómo a microorganismo aeróbicos, lo que pueden contaminar el
alimeno, procediendo a realizar el cultivo indicado y pertinente para lograr identificar dicha
bacteria. Siguiendo siempre y tomando en cuenta la NOM-115-SSAI-1999 que describe la
presencia de Staphylococcus aureus en alimentos.
Medio de culivo para staphylococcus.........
2. Objetivo
Cultivar e identificar la presencia de Stapylococcus Aureus en queso fresco comercializado en
mercados mediante la tecnica de Dra**********
3. Hipótesis
El queso fresco comercializado en mercado municipal pesen crecimiento bacteriano de
staphylococcus aureus.
4. Materiales
CANTIDAD MATERIAL
3 Matraz Erlenmeyer 250 mL
3 Probeta de 100 mL
5 Cajas petri
3 Varilla Dragasky
1 licuadora de metal
2 Agitadores
1 Embudo
3 Tubos de ensayo
2 Pipetas
2 Vaso de precipitado
4.1 Muestra biológica
Queso fresco
4.2 Medios de cultivo
Agar base Baird Parker
(agar para termonucleasaa)
4.3 Equipo
Autoclave
Parrilla
Balanza analítica
Microscopio
Campana laminar
Incubadora
5. Metodología
5.1 Preparación de emulsion de tema de huevo
Realizar tratamiento previo: con solución yoduro de potasio limpiar el huevo.
En una probeta colocar60 ml de yema
Aforar a 90 ml con solución salina
Filtrar con gasa esteril
Colocar la yema en un vaso de precipitado
5.2 Preparacion del medio
Pesar 6.63 g de base de agar Baird Parker para 100 ml de agu destilada
Remojar de5 a10 minutos
Calentar agitando fuertemente y hervir por un minuto
Distribuir y esterilizar en autoclave a121 ºC durane30 minutos
Enfriar a45-50 ºC
Agregar 1 ml de telurito de potasio y 5 ml de emulsión de yema de huevo.
5.3 Preparación de la muestra
Pesar 10 g de queso fresco
Colocar en la licuadora 90 ml de solucion salina y agregar los 10 g de queso
Tapar y licuar por medio minuto (30 segundos)
Vacilar a un matraz qu sera dilucion 10 *-1
Colocar 9 ml de solución salina en 3 tubos de ensayo 13*100
Pasar 1 ml de dilución 10*-1 al tubo 1 que sera dilución 10*-2
Repetir el procedimiento tomando ahora del tubo 1 al tubo 2, siendo dilución 10*-3
Repeir un vez más siendo ahora del tubo 2 al tubo 3, siendo dilución 10*-4
5.4 Vaciado en caja e incubación
Vertir en las cajas petri 18 ml del medio de cultivo
Para quitar humedad colocar las cajas semi-abieras en campan laminar por 1 hora
Una vez pasado la hora apar cajas y retirar de la campana
Colocar en el centro de la caja petri, 0.1 ml de cada dilución en cada caja pertri.
Deladear un poco la caja para regar la muestra hacia un borde y con la varilla dragasky
girar sobre la superficie del medio sólido por toda la caja.
Llevar a la incubadora por 24 a 48 horas
5.5 Pruebas bioquímicas
5.5.1 Tincion de Gram
Colocar 3 cosas de agua salina de diferentes tamaños en un portaobjetos
Tomar una muestra de colonia, y disolverla en las gotas de agua
Pasarla por el mechero para fijarla
Cubrir el frotis con cristal violeta por 1 minuto y lmpiar con agua destilada
Colocar gotas de lugol cubriendo el frotis dejandolo por1 minuto, limpiar con agua
Colocar gotas de alcohol-acetona dejándolo actuar por 15 segundos y limpiar con
agua destilada
Cubrir el portaobjetos con safranina por 30 segundos, lavar con agua.
Dejar secar y observar al microscopio. Con aceite de inmersión observar con 100X
5.5.2 prueba catalasa
Se coloca una gota de H2O2 al 3% sobre un portaobjetos
Luego se transfiere una porción de colonia con ayuda de un palillo, sobre el H2O2
realizándose una emulsión.
Si presenta burbujas es prueba positiva lo que indica que es Staphylococcus, de lo
contrario e negaiva y es Streptococcus
5.5.3 prueba coagulasa
Se coloca muestra de sangre en un tubo con coagulante LTA
Se centrifugar para separar el plasma de la sangre
Colocar 1 ml de plasma en tubos segun sean la colonias
Tomar una colonia sospechosa e inocular en el tubo con plasma
Incubar
Observar si hay coagulo a las4 horass, de no haber, esperar a las18 horas
la prueba es positiva en presencia de coagulo, negativa si no hay.
5.5.4 prueba termonucleasa
Preparar agar infusión cerebro-corazón
Colocar un portaobjetos en una caja petri
Vaciar el agar cuidando de que no se esparsa a los costados
Una vez solidifica el medio, hacer hoyos segun las muestras a colocar
Colocar un gota de colonia sospechosa
Colocar sobre la colonia, ácido clorhídrico
Observar pasado10 minutos si se forma un halo transparente
6. Cuestionario
No hay cuestionario
7. Referencias
2.5.2: Coloración de Gram (tinción diferencial). (2022, junio 1). LibreTexts Español; Libretexts.
https://espanol.libretexts.org/Biologia/Microbiolog%C3%ADa/Manual_de_microbiolog
%C3%ADa_general/
02%3A_Fundamentos_de_microscopia_montaje_y_coloraciones_de_muestras/
2.05%3A_Tinciones_comunmente_usadas_en_microbiologia/
2.5.02%3A_Coloracion_de_Gram_(tincion_diferencial)
CaRbajal, A. (2015). Cocos gram positivos catalasa positiva.
https://www.academia.edu/11195939/Cocos_gram_positivos_catalasa_positiva
Carlos. (2022, August 1). MICROORGANISMOS EN LOS ALIMENTOS. FBK México.
https://fbkmexico.com/microorganismos-en-los-alimentos/
CDC. (2023, July 24). Microbios y enfermedades transmitidas por los alimentos. Centers for
Disease Control and Prevention. https://www.cdc.gov/foodsafety/es/foodborne-germs-es.html
