CURSO - TALLER: IDENTIFICACIÓN DE
PARÁSITOS DE IMPORTANCIA CLÍNICA:
ENTEROPARÁSITOS
Blgo. Diego Ramos Torriccelli de la UNFV
Director de Bio Tec Centro de Entrenamiento Lima –Perú
Para la identificación parasitaria
se podrán utilizar diferentes
métodos:
• CUALITATIVOS: Observamos la
presencia de los parásitos y
sus estructuras.
• CUANTITATIVOS: Se identifica
la cantidad de parásitos por
gramo de muestra.
Examen directo en fresco
• Proceso simple y sencillo
• Uso de Lugol o SF 0.85 %
Observación de:
• Quistes, huevos, Oosquistes o
trofozoítos
• Baja sensibilidad, en comparación
con las técnicas de concentración.
• Su sensibilidad aumentara por las
cantidades de muestras que se
evalúen .
Técnicas de concentración:
• Proceso complejo.
• Uso de diferentes sustancias
para su desarrollo.
Observación de:
• Quistes, huevos, oosquistes y
larvas.
• Alta sensibilidad, en
comparación con el examen
directo en fresco.
• Concentrar huevos de ciertos
helmintos y quistes de
protozoos, cuando las
infecciones son muy leves y no
se detectan en preparaciones
directas.
• En toda técnica de
concentración ( Flotación o
sedimentación) en parasitología
es importante realizar un buen
homogenizado y filtrado de la
muestra con agua filtrada.
• Este proceso será el punto de
inicio para las siguientes técnicas
usadas.
Método de sedimentación rápida (TSR, MSR)
(Concentración por sedimentación sin
centrifugación) (Lumbreras y col. 1962):
• Se basa en la gravidez de los huevos que, por
su tamaño y peso sedimentan rápidamente
cuando se suspenden en agua.
• Este método es especialmente útil para la
búsqueda de Fasciola hepatica, Paragonimus
sp. y nemátodos como Ascaris lumbricoides
(huevo fecundado o no fecundado), Trichuris
trichiura, Hymenolepis nana,
Diphyllobothrium pacificum, etc.
Técnica de Faust: Método de concentración por flotación
con sulfato de zinc al 33,3% y densidad 1.180
• Se basa en que los quistes y/o huevos de los parásitos
flotan en la superficie por ser de menor densidad que el
sulfato de zinc a 33,3%, cuya densidad es 1.180.
• Se recomienda controlar la densidad del sulfato de zinc y
usar agua filtrada para el lavado previo de la muestra.
• El exceso de exposición de tiempo al sulfato de zinc
altera la morfología de los quistes y se recomienda su
rápida lectura del concentrado.
• Poco eficaz para huevos de F. hepática, Taenia spp.
AJUSTAR EL SULFATO DE ZINC A 1.2 EN HECES FIJADAS.
METODO DE FAUST ( CONCETRACIÓN POR FLOTACIÓN)
METODO DE WILLIS – MOLLOY (CONCETRACIÓN POR FLOTACIÓN)
• Método muy útil para la identificación de protozoarios, nematodos y
algunos cestodos .NO NECESITA CETRIFUGACIÓN.
• Se utiliza una solución sobresaturada de ClNa 37.7 % (densidad de 1.200)
Método de Ritchie o de sedimentación por
centrifugación y flotación:
• Esta técnica es utilizada para concentrar
quistes de protozoos y huevos de
helmintos.
• Se basa en la concentración de los
quistes y huevos por sedimentación
mediante la centrifugación, con la ayuda
de formol y éter para separar y visualizar
los elementos parasitarios.
• Útil para quistes, Ooquistes y huevos
PROBLEMA QUE EL ETER ETÍLICO ES DE
MUY DIFICIL ACCESO
PROCEDIMIENTO :
• Colocar en el tubo de ensayo 1 a 2 g de muestra de
heces, agregar 8 mL de solución fisiológica,
homogeneizar y centrifugar a 2 000 r.p.m. por 2 a 3
minutos.
• Decantar el sobrenadante, agregar al sedimento 6 mL
de solución de formol al 10%, homogeneizar y dejar
reposar 5 minutos, luego de los cuales se agrega 3 mL
de éter.
• Taponar el tubo y agitar cuidadosamente para evitar la
salida del material.
• Eliminar las capas formadas de sobrenadante, de ser
necesario, con ayuda de un hisopo.
• Retirar la tapa, centrifugar el tubo de 2 000 a 3
000 r.p.m. por 3 minutos.
• Depositar una gota de lugol en la lámina portaobjeto, y
con ayuda de una pipeta Pasteur, tomar una porción del
sedimento para mezclarlo con la solución de lugol.
• Cubrir con una laminilla cubreobjeto y observar al
microscopio
• Las técnicas cuantitativas en parasitología son de gran importancia para
poder identificar la intensidad de la infección por helmintos.
• El Comité de Expertos de la Organización Mundial de la Salud (OMS)
clasifica la intensidad de la infección por helmintos en tres rangos : Leve,
moderado y severa.
MÉTODO CUANTITATIVO DE
KATO – KATZ.
• Se basa en la técnica de Kato y que
permite cuantificar la presencia de
huevos de helmintos. Se expresa
en número de huevos por gramo
de heces (hpg).
• Se utiliza como colorante de
contrastes el verde de malaquita y
glicerina como aclararte.
Resultado.
• El número de huevos encontrados en la
lámina se multiplica por k (k= 24), el resultado
es el número de huevos por gramo de heces
(hpg)
• Deben contarse todos los huevos del
preparado
Huevos de Trichuris
trichuria
Huevos de Ascaris
lumbricoides
Se observo en una muestra de heces huevos de Ascaris lumbricoides y Trichuris
trichuria en donde presento mayor predomino los huevos de Trichuris trichuria
91 000 hpg. Aumento 10X
Método de Ziehl-Neelsen - KINYOUN
(modificado para observación de coccidias:
Cryptosporidium y otros).
• Se basa en el
comportamiento ácido-
resistente de la cubierta
de estos parásitos, los
cuales se tiñen de rojo y
destacan sobre un fondo
verde o azul, dependiendo
del colorante de contraste
usado.
TRICOMICA DE GOMORI
• Permite colorear las estructuras
internas de los protozoos para su
caracterización.
• Esta técnica utiliza muestras de
heces frescas, preservadas con
PVA o fijadas con Schaudinn.
• Es un método rápido y de
utilidad en el estudio de
Entamoeba , Giardia,
Balantidium, Cyclospora y otros
protozoarios.
Procedimiento.
• Preparar un set de placas Petri 15 x 150 mm con los reactivos
correspondientes, sujetar la laminilla con el porta-laminillas y con el
estilete o pinza curva hacer el frotis fino de la muestra sobre la laminilla
• Fijar la muestra con solución Schaudinn por 2 a 5 minutos.
• Pasar por alcohol 70% con 2 ó 3 gotas de tintura de yodo.
• Pasar por un minuto por alcohol 70%.
• Pasar por el colorante chromotrope de 8 a 15 minutos.
• Pasar por alcohol 90% con ácido acético al 1% de 10 a 15 segundos y ver
tono de coloración.
• Pasar por alcohol 95% y alcohol absoluto durante 3 minutos.
• Pasar por xilol de 1 a 5 minutos.
• No debe verse opaco.
• Realizar el montaje con bálsamo de Canada.
GRACIAS
