Bioestructura I
Fases de la apoptosis
2. Ejecución
3. Fagocitosis
1. Decisión 4. Degradación y
Activación presentación
antígenos
Temprana:
de receptores
Desequilibrio Activación
entre factores de proteasas y
inductores e endonucleasas
Intermedia:
Detección
inhibidores
Fragmentación DNA
Tardía: de fosfatidil
Evita liberación de
Emisión de serina (PS) componentes
cuerpos apoptóticos intracelulares
inflamación TGF
Diferencias entre
Apoptosis Necrosis
apoptosis y necrosis.
Mecanismo Programada genéticamente Accidental.
Tamaño celular Disminuye aumenta
Membrana. Se mantiene Se rompe
Orgánulos. Se preservan Se desintegran
Temprana tardía
Fragmentación del DNA fragmentos fragmentos
oligonucleosomales grandes
Fragmentación celular En cuerpos apoptóticos Los contenidos
. ánulos
rodeados por membrana de los org
se liberan
Restos celulares Son reconocidos Inducen
y fagocitados inflamación local.
CARACTERÍSTICAS DE LA APOPTOSIS
Consecuencias de la apoptosis
La célula se fragmenta en cuerpos apoptóticos con PS
en la cara exterior de su membrana
Las células fagocíticas:
• Reconocen PS y fagocitan los cuerpos apoptóticos
• Al fagocitarlos producen mediadores anti-
inflamatorios
Consecuencias de la apoptosis
1. Se impide la liberación de los contenidos
celulares al espacio extracelular
2. Permite muerte celular sin inflamación
3. La apoptosis permite la muerte celular sin
provocar daño a las células adyacentes
MAQUINARIA DE LA MUERTE
CELULAR PROGRAMADA
EN HUMANOS
Maquinaria de la muerte celular en humanos
Caspasas
Sustratos de caspasa
Inhibidores de caspasas
Vías de inducción de apoptosis
Vía extrínseca
Vía intrínseca
CASPASAS
- Son proteasas específicas de aspartato (caspase)
- Se expresan como proenzimas (zimógenos)
- Presentan 3 dominios:
1. Prodominio terminal
2. Subunidad larga (p20) que contiene el centro activo
3. C-terminal que es la subunidad pequeña (p10)
Asp Prodominio terminal
Subunidad larga (p20)
Asp
Subunidad pequeña (p10)
TIPOS DE CASPASAS
- Las caspasas efectoras se activan proteolíticamente por otras
caspasas
- Las caspasas iniciadoras son activadas mediante interacciones
reguladas proteína-proteína.
CASPASAS INICIADORAS
- En el prodominio largo tienen un módulo de interacción proteína-proteína
q permite la asociación con proteínas reguladoras (CD95, Apaf-1...):
- Dominio efector de muerte (DED, death-effector domain).
Caspasas –8 y –10
- Dominio de reclutamiento y activación de caspasas (CARD,
caspase activation and recruitment domain). Caspasas –2 y –9.
- Secuencias distintas pero plegamiento similar: 6 hélices antiparalelas
q tb aparecen en otras proteínas reguladoras de apoptosis (FADD).
MECANISMOS DE ACTIVACIÓN DE CASPASAS
1. Activación por otra caspasa
2. Activación inducida por proximidad
3. Asociación con una subunidad reguladora
1.- ACTIVACIÓN POR OTRAS CASPASAS
- Activación de una caspasa por otra previamente activada:
cascada de caspasas
- Caspasas con prodominio corto: Caspasas efectoras
- Caspasas –3, -6, -7.
- Amplificación e integración de señales
ACTIVACIÓN POR OTRAS CASPASAS
2.- ACTIVACIÓN INDUCIDA POR PROXIMIDAD
- Activación de una caspasa por proximidad: Trimerización de
receptores que reclutan caspasas y se procesan mutuamente.
- Caspasas con prodominio largo: Caspasas iniciadoras.
- Caspasa -8.
- Implicada en vía extrínseca (CD95).
ACTIVACIÓN INDUCIDA POR PROXIMIDAD
3.- ASOCIACIÓN CON UNA SUBUNIDAD
REGULADORA
- Activación de una caspasa a través de un cofactor.
- No se activa por proteolisis sino por cambio conformacional.
- Caspasas con prodominio largo: Caspasas iniciadoras.
- Caspasa -9. Cofactor: Apaf-1. Citocromo c.
- Implicada en vía intrínseca o mitocondrial.
ASOCIACIÓN CON UNA SUBUNIDAD
REGULADORA
Apoptosoma
- La caspasa-3 es la última responsable de los efectos apoptóticos
junto con las caspasas -6 y –7.
- Estas 3 caspasas ejecutoras causan el fenotipo apoptótico:
1) Fragmentación de DNA
2) Alteraciones de la membrana plasmática
3) Translocación PS
INHIBIDORES DE CASPASAS
- Proteínas inhibidoras de apoptosis (IAP).
- Se identificaron en baculovirus. Hay al menos 5 en mamíferos:
- X-linked inhibitor of apoptosis (XIAP)
- c-IAP1
- c-IAP2
- IAP neuronal
- Survivina
- Todos inhiben caspasa –3 y –7 activa y procaspasa-9.
INHIBIDORES DE CASPASAS
Frenan la apoptosis por inhibición, unión y degradación:
1. Dominio repetido IAP de baculovirus (BIR) por el q el IAP se
une e inhibe a las caspasas. Entre 1-4 dominios BIR.
2. Dominio RING q actúa como una ligasa de ubiquitina:
degradación del IAP y de cualquier caspasa unida a él.
3. Dominio CARD: regulación directa o indirecta del
procesamiento de las caspasas. c-IAP1 y c-IAP2
VÍAS DE INDUCCIÓN DE
APOPTOSIS
VÍAS DE INDUCCIÓN DE APOPTOSIS
Existen dos vías de inducción de apoptosis:
3.4.1. Vía extrínseca o vía de los receptores de muerte
3.4.2. Vía intrínseca o vía de la mitocondria
VÍA EXTRÍNSECA
- A través de receptores superficiales: receptores de muerte.
Receptores de la familia de TNFR: CD95, TNFR1, TNFR2. Tb
DR3, TRAIL...
- Requiere trimerización para la transducción de la señal.
- Al receptor activado se le asocia un complejo de proteínas:
dominio de señalización inductor de muerte (DISC, death-
induced signalling domain)
DISC
1. El adaptador FADD se une a través de su dominio de muerte
(DD) al dominio de muerte del receptor activado
2. FADD contiene un dominio efector de muerte (DED) que por
homología atrae procaspasa-8 o FLICE que se activa.
3. Inhibición debida a proteínas con dos dominios DED: proteína
inhibidora de FLICE (FLIP, FLICE-inhibitory protein).
CD95L
CD95
DD DISC
Procaspasa-8 DED
FAAD
c-FLIP Caspasa-8
Bid Caspasa-3
VÍA EXTRÍNSECA
FasL Fas
FAAD
caspasa 8 Bid Vía mitocondrial
caspasa-7 caspasa-3
caspasa-6
Deshidratación
citoplásmica
Externalización Formación Fragmentación
de cuerpos Hidrólisis Fragmentación
DNA nuclear
apoptóticos
Condensación
Cambios apoptóticos cromatina Cambios apoptóticos
extranucleares nucleares
VÍA EXTRÍNSECA
VÍA INTRÍNSECA
- La regulación de la apoptosis en esta vía es debida a la familia de
Bcl-2.
- Bcl-2 fue descubierto como un proto-oncogén en el linfoma
folicular de células B y es homólogo a ced-9.
- Existen 19 miembros que se dividen en tres grupos.
- Cada miembro posee al menos uno de los cuatro motivos
conservados denominados dominios de homología con Bcl-2
(BH): BH1-BH4.
FAMILIA DE Bcl-2
1. Grupo I:
- Actividad anti-apoptótica
- Bcl-2, Bcl-XL, Bcl-w...
- 4 motivos BH: BH1-BH4
- Cola hidrofóbica en el C-terminal
2. Grupo II:
- Actividad pro-apoptótica
- Bax, Bak, Bok...
- Carecen de BH4
3. Grupo III:
- Actividad pro-apoptótica
- Bid, Bik, Bad, Bim...
- Sólo poseen el dominio BH3
- Pueden o no tener región transmembrana
FAMILIA DE Bcl-2
CONTROL DE LA APOPTOSIS POR LA
FAMILIA DE Bcl-2
- Los miembros de la familia de Bcl-2 intentan bloquear el
siguiente movimiento de otro.
- Algunos homodimerizan
- Se forman heterodímeros de miembros pro y anti-apoptóticos
neutralizándose
Gradiente
pro-apoptóticos
Gradiente
Anti-apoptóticos
MITOCONDRIA: CENTRO DE LA MUERTE
CELULAR
La mitocondria no es sólo la central productora de energía de la
célula, también es un arsenal pues secuestra un potente
combinado de proteínas pro-apoptóticas:
1. Citocromo c: Componente junto con Apaf-1 y caspasa
9del apoptosoma
2. Smac/DIABLO (second mitochondria-derived activator
of caspases/direct IAP-binding protein with low pI): es
una proteína que inhibe IAPs secuestrándolas.
Daño genotóxico
Bcl-2 p53
Apaf-1 Bax
citocromo c
Procaspasa-9
Procaspasa-3 Smac/DIABLO
IAPs
caspasa-3
Apoptosoma
INTEGRACIÓN DE LAS DOS VÍAS
FRAGMENTACIÓN DEL DNA
- La caspasa-3 actúa sobre el complejo DNasa activado por caspasa
(CAD) y sobre su inhibidor, iCAD.
iCAD CAD Caspasa-3
APOPTOSIS
- Características definidas
- Regulada genéticamente
- Conservada en la evolución
- Muy regulada: patologías
- Inducida por señales externas e internas
