FACULTAD DE INGENIERÍA

Escuela Académico Profesional de Ingeniería Ambiental

Tesis

Evaluación del tiempo de contacto y la concentración

de nanopartículas de dióxido de titanio en la
desinfección de las bacterias E. coli de las
aguas residuales municipales tratadas

Katherine Gloria Ingaruca Lazo

Para optar el Título Profesional de

Ingeniera Ambiental

Huancayo, 2021
Esta obra está bajo una Licencia "Creative Commons Atribución 4.0 Internacional" .
 ASESOR
Ing. Pablo César Espinoza Tumialán

ii
 AGRADECIMIENTOS

A mi asesor Ms. Ing. Pablo César por brindarme todo su apoyo para la culminación
de este trabajo de investigación, así como a todos los docentes que fueron mi soporte
durante todos los años de estudio en mi prestigiosa alma máter.

Un infinito agradecimiento, por su colaboración y paciencia a los tesistas del grupo

de investigación del Centro de Investigación de Nanotecnología de la Facultad de Ingeniería
Química de la Universidad Nacional del Centro del Perú, al Bach. Orlando Mandujano
Galarza.

A mis padres, por su apoyo ilimitado e incondicional para culminar con el presente
trabajo de investigación y por guiarme a la consecución de mis objetivos y metas.

Agradezco también a una persona muy especial, por cada palabra de aliento y sus
buenos deseos, por su motivación para culminar la investigación de la mejor manera, a Luis
Emerson Arzapalo Amaro.

iii
 DEDICATORIA

A Dios.

A mis padres Ever y Gloria.

A mi compañero Luis, por todo su esfuerzo y

dedicación diaria.

A mis hijas Kaitlyn y Naira.

A mis hermanos Jones y Vladimir.

A mis maestros y compañeros.

iv
 ÍNDICE

ASESOR ........................................................................................................................... ii

AGRADECIMIENTOS ...................................................................................................... iii

DEDICATORIA ................................................................................................................. iv

ÍNDICE .............................................................................................................................. v

ÍNDICE DE FIGURAS ................................................................................................. viii

ÍNDICE DE TABLAS ...................................................................................................... x

RESUMEN........................................................................................................................ xi

ABSTRACT ..................................................................................................................... xii

INTRODUCCIÓN ............................................................................................................ xiii

CAPÍTULO I ..................................................................................................................... 1

1.1. Planteamiento y formulación del problema ......................................................... 1

1.1.1. Planteamiento del problema ........................................................................ 1

1.1.2. Formulación del problema ........................................................................... 3

1.2. Objetivos ............................................................................................................ 4

1.2.1. Objetivo general .......................................................................................... 4

1.2.2. Objetivos específicos ................................................................................... 4

1.3. Justificación e importancia .................................................................................. 4

1.3.1. Justificación e importancia ambiental .......................................................... 4

1.3.2. Justificación e importancia socioeconómica ................................................ 5

1.3.3. Justificación e importancia en Ciencia y Tecnología .................................... 5

1.4. Hipótesis y variables ........................................................................................... 5

1.4.1. Hipótesis general ......................................................................................... 5

1.4.2. Hipótesis específicas ................................................................................... 6

1.4.3. Variables ..................................................................................................... 6

CAPÍTULO II .................................................................................................................... 7

2.1. Antecedentes de la investigación........................................................................ 7

v
 2.1.1. Antecedentes nacionales ............................................................................. 7

2.1.2. Antecedentes internacionales ...................................................................... 8

2.2. Bases teóricas ...................................................................................................10

2.2.1. Planta de Tratamiento de Aguas Residuales Municipales (PTAR) ..............10

2.2.2. Caracterización de bacterias coliformes totales en aguas residuales .........12

2.2.3. Definiciones y clasificación de los nanomateriales ......................................14

2.2.4. Caracterización de las nanopartículas TiO2 ................................................16

2.2.5. Mecanismos de toxicidad de las nanopartículas sobre las bacterias ..........18

2.2.6. Nanopartículas y poblaciones bacterianas..................................................22

2.3. Definición de términos .......................................................................................22

CAPÍTULO III ..................................................................................................................24

3.1. Método, tipo y nivel de la investigación ..............................................................24

3.1.1. Métodos de la investigación........................................................................24

3.1.2. Tipo de la investigación ..............................................................................24

3.1.3. Nivel de la investigación .............................................................................25

3.2. Diseño de la investigación .................................................................................25

3.3. Población y muestra ..........................................................................................26

3.3.1. Población ....................................................................................................26

3.3.2. Muestra ......................................................................................................26

3.4. Técnicas e instrumentos de recolección de datos ..............................................26

3.4.1. Materiales, reactivos y equipos ...................................................................26

3.5. Técnicas de análisis y procesamiento de datos .................................................28

CAPÍTULO IV ..................................................................................................................36

4.1. Resultados del tratamiento y análisis de información .........................................36

4.1.1. Resultados de la cuantificación de las bacterias E. coli del efluente final de la

PTAR de Sicaya .......................................................................................................36

4.1.2. Inoculación de las bacterias E. coli y las NTPs-TiO2 y recuento de colonias en

placa ...................................................................................................................38

vi
 4.1.3. Resultados de la caracterización de nanopartículas ...................................39

4.1.4. Resultados del tiempo de contacto y las concentraciones de nanopartículas

de TiO2 ...................................................................................................................46

4.2. Discusión de resultados .....................................................................................47

CONCLUSIONES ............................................................................................................54

RECOMENDACIONES ....................................................................................................55

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS ................................................................................56

ANEXOS .........................................................................................................................60

vii
 ÍNDICE DE FIGURAS

Figura 01. Inoculación de bacterias en placas Petri 13

Figura 02. Estructura de las NPs-TiO2 17
Figura 03. Toxicidad de las nanopartículas de TiO2 19
Figura 04. Autoclavado de los materiales para la preparación del agar MacConkey 31
Figura 05. Equipo DLS NICOMP PSS Z3000 utilizado para la determinación del
tamaño de las nanopartículas de TiO2 34
Figura 06. Equipo de Microscopia Electrónica de Barrido utilizado para la
caracterización de la morfología y composición de las nanopartículas de TiO2 35
Figura 07. Pesado del agar MacConkey para para la preparación del medio de cultivo 37
Figura 08. Muestras de inoculación forradas con papel kraft y atadas con pabilo 37
Figura 09. Recuento de las colonias de E. coli del efluente final de las aguas residuales
de la PTAR - Alcas - Sicaya 38
Figura 10. Conteo de colonias de bacterias E. coli y NPs-TiO2 (tras el experimento) 39
Figura 11. Histograma de Intensidad de la distribución de las NPs-TiO2 obtenido en el
equipo DLS 39
Figura 12. Histograma de números de distribución de las NPs-TiO2 obtenido en el
equipo DLS 40
Figura 13. Histograma de Volumen de las NPs-TiO2 obtenido en el equipo DLS 40
Figura 14. Histograma de números de distribución de las NPs-TiO2 obtenido en el
equipo DLS (2) 41
Figura 15. Geometría y tamaño de las NPs-TiO2 en el equipo SEM 42
Figura 16. Conglomerado de las NPs-TiO2 en el equipo SEM 43
Figura 17. Imágenes del detector EDS con diferentes espectros en la determinación
de la composición NPs-TiO2 del equipo SEM 44
Figura 18. Composición de las NPs-TiO2 en el primer espectro del equipo SEM con el
detector EDS 45
Figura 19. Composición de las NPs-TiO2 en el segundo espectro del equipo SEM con
el detector EDS 45
Figura 20. Reporte de la composición de las NPs-TiO2 del equipo SEM con el detector
EDS 46
Figura 21. Inhibición de las bacterias E. coli a concentración de 10 ppm de NPs-TiO2 49
Figura 22. Inhibición de las bacterias E. coli con concentraciones de 10, 40, 70 y 100 ppm
de NPs-TiO2 para 720 minutos 50

viii
Figura 23. Inhibición de las bacterias E. coli a concentración de 40 ppm de NPs-TiO2 51
Figura 24. Inhibición de las bacterias E. coli a concentraciones de 10, 40, 70 y 100
ppm de NPs-TiO2 para 180 minutos 53

ix
 ÍNDICE DE TABLAS

Tabla 01. Norma para la calidad del agua residual municipal tratada 7
Tabla 02. Cepas de E. coli 14
Tabla 03. Comparación de las propiedades físicas y termodinámicas de las
nanopartículas de TiO2 18
Tabla 04. Efectos tóxicos de las nanopartículas de TiO2 en bacterias E. coli 19
Tabla 05. Diseño experimental factorial 25
Tabla 06. Resultados del conteo de las bacterias E. coli en placas Petri 36
Tabla 07. Resumen de datos de las mediciones del diámetro hidrodinámico de las
NPs-TiO2 40
Tabla 08. Tiempo de contacto y concentraciones las NPs-TiO2 con las bacterias E. coli 46

x
 RESUMEN

La contaminación por coliformes totales presentes en las descargas de las aguas residuales
tratadas de las plantas de tratamiento de aguas residuales genera daños a la salud y al
ambiente por lo que es necesario mejorar el tratamiento final de estas aguas residuales con
nuevas tecnologías. En el presente trabajo de investigación se realizó la evaluación del
tiempo de contacto de las bacterias E. coli y la concentración de nanopartículas de TiO2 en
la desinfección de las bacterias de las aguas residuales municipales tratadas. Los
experimentos de las nanopartículas de TiO2 y las bacterias E. coli, consideradas como las
representativas de los coliformes totales que se encuentra en los efluentes finales de una
planta de tratamiento de aguas residuales, se realizaron por la metodología del recuento en
placas con diluciones del medio de cultivo agar MacConkey y las bacterias E. coli derivadas
de ATCC® 25922™ conjuntamente con las nanopartículas de TiO2. El tamaño de las
nanopartículas de TiO2 se determinó por la técnica del diámetro hidrodinámico mediante la
Dispersión de Luz Dinámica (DLS) y la morfología, como su composición, se realizó por
medio de la técnica de imágenes de Microscopía Electrónica de Barrido (SEM). Como
conclusión de la investigación se determinó que para un tiempo de contacto de 180 minutos
entre las nanopartículas de TiO2 y las bacterias E. coli ocurre una rápida desinfección de
los coliformes totales. Por otra parte, se concluye que para un tamaño de 11.03 nm de
diámetro de las nanopartículas de TiO2 y una concentración de 10 ppm de las
nanopartículas se produce una inhibición alta de las bacterias E. coli, demostrando que la
aplicación de la nanotecnología alcanza a desinfectar al agua tratada respecto de los
coliformes totales, reflejando que estas aguas tratadas pueden ser empleadas en un
segundo momento en fines agrícolas.

Palabras clave: nanopartículas, anatasa, sonicación, inoculación.

xi
 ABSTRACT

Contamination by total coliforms present in the discharges of treated wastewater from

wastewater treatment plants generates damage to health and the environment, which is
why it is necessary to improve the final treatment of these wastewater with new
technologies. In the present research word, the evaluation of the contact time of E. coli
bacteria and the concentration of TiO2 nanoparticles in the disinfection of bacteria from
treated municipal wastewater was carried out. The experiments on the TiO2 nanoparticles
and the E. coli bacteria, considered as representative of the total coliforms found un the
final effluents of a wastewater treatment plant, were carried out by the methodology of the
plate count with dilutions of the medium MacConkey agar culture and the ATCC® 25922™
derived E. coli bacteria together with TiO2 nanoparticles. The size of the TiO2 nanoparticles
was determined by the hydrodynamic diameter technique using Dynamic Light Scattering
(DLS) the morphology, such as its composition, was carried out by means of the Scanning
Electron Microscopy (SEM) imaging technique. As a conclusion of the research, it was
determined that for a contact time of 180 minutes between the TiO 2 nanoparticles and the
E. coli bacteria, a rapid disinfection of the total coliforms occurs. On the other hand, it is
concluded that for a size of 11.03 nm in diameter of the TiO 2 nanoparticles and a
concentration of 10 ppm of the nanoparticles there is a high inhibition of E. coli bacteria,
showing that the application of nanotechnology reaches a disinfect treated water with
respect to total coliforms, reflecting that these treated water can be used in a second
moment for agricultural purposes.

Keywords: nanoparticles, anatase, sonication, inoculation.

xii
 INTRODUCCIÓN

La contaminación de los recursos hídricos provocado por las descargas de bacterias

patógenas desde los efluentes finales de las plantas de tratamiento de las aguas residuales
municipales ocasiona daños irreversibles al ecosistema de los cuerpos receptores y
generan mayor propagación de las enfermedades. Existen tratamientos biológicos
convencionales para la depuración de los coliformes totales con tecnología de cloración; sin
embargo, sigue existiendo problemas de contaminación que aún falta resolverse, entre los
métodos de desinfección más empleados se encuentra la cloración, ozonificación, luz
ultravioleta, la nanotecnología entre otros. El desarrollo de nuevas alternativas de
tratamiento terciario para las aguas residuales municipales es de interés para la disminución
o desinfección de las bacterias E. coli.

Entre los avances tecnológicos para el tratamiento de las aguas residuales se

encuentra la nanotecnología que proponen alternativas para disminuir la contaminación por
patógenos con nanomateriales que inhiben el crecimiento y en algunos casos tienen
propiedades antibacterianas que actúan dentro del área superficial que generan las
nanopartículas. La efectividad de las inhibiciones de las bacterias E. coli están en su
mayoría afectadas por el tamaño, tiempo y concentración de las nanopartículas (1).

La presente investigación tiene como objetivo principal evaluar el tiempo de contacto

de las bacterias E. coli y la concentración de nanopartículas de TiO2 en la desinfección de
las bacterias de las aguas residuales municipales tratadas; el desarrollo se complementa
en tres capítulos subsiguiente: en el capítulo II se analiza la información bibliográfica de los
antecedentes y los trabajados desarrollados sobre el tema de investigación; el capítulo III
comprende el desarrollo experimental que incluye los materiales, equipos y los
procedimientos, mientras que en el último capítulo se presenta el tratamiento de datos, los
resultados y su discusión respectiva. Finalmente se presentan las conclusiones,
recomendaciones y anexos de la investigación.

La autora.

xiii
 CAPÍTULO I
PLANTEAMIENTO DEL ESTUDIO

1.1. Planteamiento y formulación del problema

1.1.1. Planteamiento del problema

La operación de las Plantas de Tratamiento de Aguas Residuales (PTAR)

por parte de las EPS en el Perú según GTZ/PROAGUA, evidencia muchas
dificultades en disminuir la carga de coliformes totales generando
contaminación de las aguas superficiales. Al no operar adecuadamente una
PTAR, no se llega a cumplir con lo vertido en el D.S. Nº 004-2017-MINAM:
Estándares Nacionales de Calidad Ambiental (ECA) para agua, que exige
un máximo de 1 000 NMP/100ml de coliformes termotolerantes para el uso
de las aguas tratadas con fines agrícolas, o más aún si requiere de cumplir
con 2 000 NMP/100ml para descargas en los cuerpos receptores.

Por otra parte, en el año 2010 se realizó un diagnóstico de las PTAR

municipales de las nueve capitales de las provincias de la región Junín y
como resultado se tuvo que dos capitales de provincias tienen sus plantas
de tratamiento implementados con lagunas de oxidación (Chupaca y Junín),
mientras que en cuatro capitales de provincias (Concepción, Jauja,
Chupaca y Yauli) mantienen en ejecución de proyectos con plantas de
tratamiento aerobia, finalmente se tienen a las cuatro capitales de
provincias restantes (Satipo, Huancayo, Tarma y Chanchamayo) en
elaboración de proyectos; por lo tanto, se siguen implementando sistemas

1
de tratamiento de aguas residuales municipales con tecnologías aerobias,
cuando ya se aplican tecnologías innovadoras del tratamiento de aguas
residuales municipales utilizando Reactores Anaerobios de Flujo
Ascendente (RAFA) que son eficaces para la remoción de materia orgánica.

En la actualidad el proceso de disminución de la carga de los coliformes

totales se realiza mediante el tratamiento avanzado y/o tratamiento terciario
con la adición de cloro gaseoso, pero este reactivo químico no cumple con
disminuir la presencia de coliformes totales, debido a que se opera con un
tiempo de contacto de las nanopartículas muy corto de 30 minutos, o por la
poca adición del cloro que tiene un costo elevado en una planta de
tratamiento de aguas residuales municipales. El utilizar cloro, que es una
tecnología convencional, hasta ahora no ha resuelto el problema de la
presencia de bacterias en los efluentes de las PTAR ni en el tratamiento de
agua con fines de potabilización.

El problema de las afecciones salubres generadas por los microorganismos

patógenos y fecales presente en las aguas residuales municipales,
representadas por la bacteria Escherichia coli (E. coli), impactan a la salud
de las poblaciones, principalmente donde el estado no interviene por
intermedio del Ministerio de Vivienda, Construcción y Saneamiento (MVCS)
al no implementar nuevas tecnologías en el tratamiento de las aguas
residuales municipales. La presencia de las bacterias E. coli generan
enfermedades como: fiebre tifoidea, meningoencefalitis, amebiasis, cólera,
gastroenteritis, entre otras, siendo las causas de morbilidad y mortalidad,
especialmente en niños de la región Junín.

El rápido desarrollo de la nanotecnología ambiental esta cautivado las

nuevas investigaciones en las últimas décadas. La utilización de
nanomateriales ha avanzado rápida y actualmente se vuelven más
efectivas que las tecnologías convencionales, es así como en la actualidad
se utilizan las nanopartículas de TiO2 en el tratamiento de las aguas
residuales con fines de disminuir la contaminación por coliformes totales.

Los efluentes finales de las PTAR generan problemas tanto a la flora y fauna
de los riachuelos y por ello estas aguas residuales tratadas son difícilmente
reutilizables. Aún, cuando las PTAR trabajen bien, estos efluentes siempre

2
 traen consigo los patógenos no removidos en el tratamiento secundario,
pues solo disminuyen las cargas orgánicas y nitrogenadas (ver Anexo 03).

La calidad del agua residual tratada debe cumplir con los Límites Máximos
Permisibles (LMP) para los efluentes de Plantas de Tratamiento de Aguas
Residuales Domésticas o Municipales según el D.S. Nº 003-2010-MINAM
del Ministerio del Ambiente dado el 16 de marzo del 2010. Los LMP
representan la medida de la concentración o del grado de elementos,
sustancias o parámetros físicos, químicos y biológicos, que caracterizan a
una emisión, que al ser excedida causa o puede causar daños a la salud,
al bienestar humano y al ambiente.

Bajo este contexto es necesario investigar y generar nuevas tecnologías

con el uso de nanopartículas de TiO2 como antibacterial en el tratamiento
de las aguas residuales municipales y cuyas aguas tratadas tengan la
finalidad de reutilizarse en fines agrícolas, de modo que se para garantice
la sostenibilidad y seguridad alimenticia de las poblaciones. Resolver este
problema evidenciaría una gran variedad de modificaciones del uso del
agua en el desarrollo futuro y que ofrecería grandes oportunidades seguras
para el uso y reuso de las fuentes de agua no convencional.

1.1.2. Formulación del problema

a) Problema general:

¿A qué períodos de contacto entre las bacterias E. coli y las

nanopartículas de TiO2 se producirá una desinfección de las bacterias
de las aguas residuales municipales tratadas?

b) Problemas específicos:

 ¿Cuál es la cantidad de las bacterias E. coli presentes en el

efluente final de un agua residual municipal tratada?

3
  ¿Cuál es el menor tiempo de contacto entre las bacterias E. coli y
las nanopartículas de TiO2 para una mayor desinfección de las
bacterias de las aguas residuales municipales tratadas?
 ¿A qué concentración de nanopartículas de TiO2 se producirá una
alta eficiencia de la desinfección de las bacterias E. coli de las
aguas residuales municipales tratadas?

1.2. Objetivos

1.2.1. Objetivo general

Evaluar el tiempo de contacto de las bacterias E. coli y la concentración de

nanopartículas de TiO2 en la desinfección de las bacterias de las aguas
residuales municipales tratadas.

1.2.2. Objetivos específicos

 Cuantificar las bacterias E. coli que se encuentran en el efluente final

de un agua residual municipal tratada.
 Evaluar la mayor desinfección de las bacterias E. coli con el menor
tiempo de contacto de las nanopartículas de TiO2 en la desinfección de
las aguas residuales municipales tratadas.
 Hallar la concentración en que las nanopartículas de TiO2 produzcan
una alta eficiencia de la desinfección de las bacterias E. coli de las
aguas residuales municipales tratadas.

1.3. Justificación e importancia

1.3.1. Justificación e importancia ambiental

El presente proyecto de investigación busca generar el uso de

nanopartículas de TiO2 como antibacterial para disminuir la contaminación

4
 de bacterias E. coli consideradas como el de mayor población dentro de
los coliformes totales presente en las aguas residuales tratadas. Esta
disminución de la contaminación ambiental de bacterias mejorará la
calidad de agua residual tratada para ser utilizada en la agricultura.

1.3.2. Justificación e importancia socioeconómica

La utilización de pequeñas cantidades de nanopartículas de TiO2

posibilitan un menor costo de operación en comparación con los costos de
gas cloro que se utiliza en el tratamiento terciario de aguas residuales
municipales. El uso de nanopartículas, también mejorará la gestión social
y económica de las instituciones dedicadas al saneamiento básico como
son: EPS, JASS, municipalidades provinciales y distritales, centros
poblados y comunidades campesinas por tener las mejores ventajas
económicas.

1.3.3. Justificación e importancia en Ciencia y Tecnología

La propiedad antibacterial de las nanopartículas de TiO2 frente a los

coliformes tiene importancia porque genera un área superficial bastante
grande con lo cual se reduce el crecimiento de los microorganismos por el
efecto inhibitorio de las nanopartículas. Al generar esta nueva tecnología
se busca sustituir el uso del cloro en el sistema de tratamiento terciario de
las plantas de tratamiento de aguas residuales municipales.

1.4. Hipótesis y variables

1.4.1. Hipótesis general

H1: Para un determinado tiempo de contacto y una determinada

concentración de nanopartículas de TiO2 se producirá una desinfección
completa de las bacterias E. coli de las aguas residuales municipales
tratadas.

5
1.4.2. Hipótesis específicas

 Para un determinado tiempo de contacto entre las bacterias E. coli y

las nanopartículas de TiO2 ocurrirá una mayor o menor desinfección de
las bacterias de las aguas residuales municipales tratadas.
 Para una determinada concentración de nanopartículas de TiO2
ocurrirá una baja o alta eficiencia de desinfección de las bacterias E.
coli de las aguas residuales municipales tratadas.

1.4.3. Variables

 Variable dependiente:

- Desinfección de las bacterias E. coli.

 Variables independientes:

- Tiempo de contacto de las nanopartículas:

o 60 min.
o 120 min.
o 180 min.
o 720 min.

- Concentración de nanopartículas:
o 10 ppm.
o 40 ppm.
o 70 ppm.
o 100 ppm.

6
 CAPÍTULO II
MARCO TEÓRICO

2.1. Antecedentes de la investigación

2.1.1. Antecedentes nacionales

La exigencia ambiental por ahora permite a las plantas de tratamiento de

las aguas residuales municipales cumplir con la normatividad; pero,
cuando las exigencias sean mayores se tendrán dificultades con la
operación y la calidad de las aguas residuales tratadas y será difícil su
reutilización. Por ahora los límites máximos permitidos para la descarga
coliformes termotolerantes es de 10 000 NMP/100ml, según el D.S. 003-
2010-MINAM.

Tabla 01. Norma para la calidad del agua residual municipal tratada.

LÍMITES MÁXIMOS PERMISIBLES PARA LOS EFLUENTES DE PTAR

LMP DE EFLUENTES PARA

PARÁMETROS UNIDAD VERTIDOS A CUERPOS DE
AGUAS

Aceites y grasas mg/l 20

Coliformes termotolerantes NMP/100ml 10 000

Demanda Bioquímica de Oxígeno mg/l 100

Demanda Química de Oxígeno mg/l 200

pH unidad 6.5 – 8.5

7
 Solidos Totales en Suspensión mg/l 150

Temperatura °C < 35

Fuente: D.S. 003-2010-MINAM, Ministerio del Ambiente (2).

La inactivación y el crecimiento de diferentes bacterias con diferentes

nanopartículas se vienen investigando con fines de mejorar su depuración
de las aguas residuales municipales. Es así que en el trabajo de Barzola
(3) se analizó el método de la inactivación de las bacterias E. coli con
nanopartículas de SiO2 para concentraciones de 20, 120 y 240 mg/l y un
período de contacto de 2 a 6 horas durante el tratamiento de las aguas
residuales municipales en un reactor anaerobio de flujo ascendente.

En nuestra región existen muchas plantas de tratamiento de aguas

residuales instaladas con tecnología de lagunas facultativas y lagunas de
oxidación. En la mayoría de estas plantas no se instalaron tratamiento
terciario para la descontaminación de los coliformes totales y en otras se
lograron instalar con dosificación de cloro y que por problemas de los
costos de operación están paralizados (ver Anexo 03).

2.1.2. Antecedentes internacionales

Los efluentes de las plantas de tratamiento de aguas residuales

municipales deben ser implementados adecuadamente para favorecer la
acción de los nanomateriales y/o nanocompuestos (4, 5). Por un lado, se
lograría la disminución de la contaminación de los coliformes totales y no
obstante estas aguas tratadas contengan compuestos orgánicos e
inorgánicos tendrán gran ventaja de reutilización.

Los contaminantes en las aguas residuales están constituidos de materias

orgánicas, bacterias y microorganismos en diferentes cantidades que
deterioran la calidad de los cuerpos receptores y consecuentemente los
suelos y las aguas subterráneas. Las aguas residuales que ingresan a una
planta de tratamiento de aguas residuales tienen variadas composiciones;
las de mayor peligrosidad son los microorganismos coliformes con 1x105 a

8
1x109 UFC/ml constituidos por estreptococos, fecales, protozoos y
partículas de virus (6).

Para la desinfección de las aguas residuales municipales tratadas se

utilizan nanopartículas metálicas por su efecto bactericida. En estos
últimos años se vienen realizando investigaciones en el campo de la
nanotecnología, que tienen propiedades íntimamente ligadas a su tamaño
y morfología. El área de desarrollo es porque las nanopartículas se
caracterizan por ser altamente reactivas y tienen una gran área superficial
por su tamaño y forma de estos nanomateriales. Los beneficios de la
aplicación de las nanopartículas favorecen las soluciones de los problemas
ambientales como contaminación, tratamiento de las agua para consumo
humano y para el tratamiento de las aguas residuales municipales de gran
auge en la actualidad (7).

Los fenómenos del cambio climático están afectando las reservas de las
cantidades de agua que se tiene disponible en la actualidad. Una de las
alternativas es la reutilización planificada de las aguas residuales tratadas
por la escasez de recursos hídricos de otras fuentes, especialmente en el
país y en nuestra región. La constante demanda de agua para consumo
humano se viene produciendo con frecuencia en los lugares con escasa
disponibilidad hídrica. Estos antecedentes motivan a recurrir tecnologías
disponibles para tratar los efluentes de las Plantas de Tratamiento de
Aguas Residuales Municipales (PTAR) como una fuente alternativa de
recursos hídricos. La instalación de procesos biológicos combinados con
la reactividad química de las nanopartículas se pueden generar aguas de
buena calidad que serían utilizadas para riego agrícola y otros usos (1).

Los costos de operación en una planta de tratamiento de aguas residuales

municipales se incrementan cuando el tratamiento terciario se realiza
mediante la utilización de cloro. Es así, que la reutilización de los efluentes
de las PTAR cuando se trata con cloro tendrían un costo elevado, por
consiguiente, se debe buscar alternativas tecnológicas que disminuyen los
costos de producción y cuyos precios favorezcan a los usuarios agrícolas
y de otros usos, y que contribuyan con la protección ambiental y la
recuperación del 80 % de agua residual (8).

9
2.2. Bases teóricas

2.2.1. Planta de Tratamiento de Aguas Residuales Municipales (PTAR)

 Tratamiento final de las aguas residuales municipales tratadas:

El tratamiento de las aguas residuales municipales tiene diferentes

etapas de tratamiento de acuerdo a la composición de sus
contaminantes. Estas pueden ser desde tratamiento preliminar,
primario, secundario y terciario o llamado tratamiento final. Cada uno
de estos procesos disminuyen los contaminantes; sin embargo, en
algunos casos estos contaminantes llegan hasta al tratamiento final y
también salen en los efluentes. También se conoce que a varias
plantas de tratamiento de aguas residuales municipales ingresan
nanopartículas; pero que en todos los procesos de depuración no
interactúan con las cargas orgánicas para formar matrices orgánicas,
sino que se separan como iones metálicos solubles y que luego salen
en los efluentes finales (8).

En el tratamiento final normalmente se utiliza cloro como desinfectante

para disminuir la carga contaminante de los coliformes totales; sin
embargo, estos coliformes no son eliminados completamente de los
efluentes finales a causa de que los compuestos clorado como el ClO2
no eliminan las bacterias presentes en el agua (9), lo que hace es
únicamente inducir a las bacterias a pasar al estado llamado Viable No
Cultivable (VBNC) y a causa de ello no se desarrollan en algunos
medios de cultivo; pero, pueden activarse nuevamente al encontrar
nuevos medios de cultivos pues siguen estando vivos. Las bacterias
E. coli, como representante de las gramnegativas o de los coliformes
totales mantienen su integridad celular y por su actividad celular tienen
la capacidad de ser cultivables nuevamente. Por las consideraciones
anteriores, la acumulación de los cloratos se mantiene en el agua
residual tratada y otras están en los tejidos de las bacterias y se
trasmiten a los cultivos agrícolas al regar con estas aguas
semitratadas. Por otra parte, al utilizar el gas cloro en el tratamiento

10
 terciario se logra asegurar la letalidad de las bacterias; pero, por su
alto costo resulta de poca aplicabilidad en las plantas de tratamiento
de aguas residuales municipales por la no disponibilidad de recursos
económicos. Además, se corre el riesgo por su manipulación y
requiere de procedimientos y otros recursos para la correcta aplicación
y que solo alcanza a las plantas de tratamiento de gran escala y con
recursos disponibles.

 Nanotecnología en el tratamiento de aguas residuales municipales:

En la investigación de Cervantes et. al. (10) utilizaron nanopartículas

de ZnO y TiO2, para el tratamiento de las aguas residuales
municipales. La adición de nanopartículas fue al reactor biológico de
lodos activados, y analizaron la variación de la concentración de 450,
900, 1 500 y 2 000 mg/l de nanopartículas de ZnO y de nanopartículas
de TiO2 con 500, 1 000, 1 500 y 2 000 mg/l. Los resultados indican que
la eficiencia de remoción de materia orgánica disminuye con la adición
de nanopartículas de ZnO, en cambio, con la adición de las
nanopartículas de TiO2 decrece la eficiencia de remoción de nitrógeno.
No obstante, se confirma que los agregados de las nanopartículas de
TiO2 afectan a las membranas celulares a través de la ruptura de la
membrana celular y en consecuencia provoca la lisis celular. Por estos
antecedentes resulta bastante atractivo la utilización de
nanopartículas de TiO2 en el tratamiento de aguas residuales
municipales.

Con respecto a la toxicidad de las nanopartículas de TiO2 en las

bacterias está comprobado según diferentes investigaciones, y
además indican que favorecen la remoción de la materia orgánica.
Esto significa que la presencia de nanopartículas de TiO2 en el
tratamiento de las aguas residuales no afecta otras características,
pues según los estudios de Westerhoff et. al. (11) indican que a las
plantas de tratamiento de aguas residuales que ingresaron
nanopartículas de TiO2 con tamaños menores a 100 nm y no pudieron
separase en la etapa de sedimentación, porque forman agregados de

11
 titanio por la absorción de la biomasa generando la poca
sedimentación. Ellos también indican que en el efluente de las aguas
residuales tratadas encontraron partículas de TiO2 de tamaños que
varían de 4 a 30 nm de diámetro.

 Nanopartículas en suspensión y aguas residuales:

En el tratamiento de aguas residuales municipales se encuentran

presentes varios tipos de óxidos metálicos que proviene de diferentes
fuentes y principalmente de las descargas pluviales. En el tratamiento
biológico de aguas residuales por lodos activados las nanopartículas
actúan en suspensión las cuales inhiben el crecimiento bacteriano de
la población nitrificante provocando la disminución de las bacterias
nitrosomonas y Nitrobacter (12). Esta toxicidad de las nanopartículas
de TiO2 vienen estudiándose con las bacterias coliformes cuya
población microbiana es altamente perjudicial en las aguas residuales
tratadas.

Los estudios de la toxicidad de las nanopartículas en suspensión

vienen siendo de interés para los investigadores. Por ejemplo, en el
trabajo de Yang et. al. (4) se estudió un sustrato sintético con
características de aguas residuales municipales el efecto del tiempo
de contacto entre las nanopartículas de TiO2 y las bacterias
nitrificantes en plantas de tratamiento biológico por humedales. Las
características de las nanopartículas de TiO2 fueron de un tamaño
promedio de 20 a 1 nm de diámetro, y con una pureza de 99.5 %, los
resultados indican que para una concentración de 1 mg/l de las
nanopartículas de TiO2 ocurre significativamente la funcionabilidad de
los microorganismos presentes en las aguas residuales.

2.2.2. Caracterización de bacterias coliformes totales en aguas residuales

En las aguas residuales municipales existe una comunidad bacteriana de

los cuales la mayor representatividad son del grupo de bacterias coliformes
totales. Este grupo perteneciente a las gramnegativas, son también

12
consideradas como bacterias anaerobias facultativas, lo que quiere decir
que pueden desarrollarse tanto en presencia o ausencia de oxígeno.

Las bacterias E. coli se caracteriza por poseer bacilos de gramnegativo y

su cubierta tiene tres elementos; la membrana citoplasmática, la
membrana externa y, entre ambas, un espacio periplásmico constituido por
péptido-glucano. Esta última estructura le otorga a la bacteria su forma y
rigidez, la cual le permite resistir a presiones osmóticas relativamente altas.
Su crecimiento normalmente se efectúa a la temperatura de entre 35 a
43°C. A temperaturas inferiores a 7°C se puede inhibir su crecimiento
favoreciendo su inocuidad. Del mismo a temperaturas superiores a 70°C
son muy sensibles y se asegura una buena pasteurización de los alimentos
que garantiza su eliminación. El otro parámetro importante es el pH que a
7.2 favorece su crecimiento y desarrollo, y a pH extremos menores a 3.8 y
mayores a 9.5 se evita la proliferación de estas bacterias.

Figura 01. Inoculación de bacterias en placas Petri.

Fuente: Lee et. al. (13).

Las bacterias E. coli tienen múltiples características y facetas. Algunas de

estas características son pocas estudiadas porque fácilmente se adaptan,
mutan y constantemente adquieren nuevos genotipos a partir de los
plásmidos, bacteriófagos, y otros elementos que llegan a transmitirse a su
material genético. Es por ello, que tiene una capacidad de ubicuidad
favoreciendo la aparición reiterada de cepas con nuevas propiedades,
incluyendo capacidades patógenas no fácilmente reconocibles.

13
  Patogenicidad de bacterias E. coli:

Las bacterias E. coli son conocidas como agentes responsables de la

gastroenteritis infantil (14), especialmente en países en vías de
desarrollo, causando la muerte de niños debido a la deshidratación y
a otras complicaciones. Las principales cepas patógenas de las
bacterias E. coli se presentan en la tabla 2.

Tabla 02. Cepas de E. coli.

Cepas de E. coli Modo de transmisión Enfermedad

Enterotoxigénico ETEC ocasiona

Alimentos o ingestión de agua
(ETEC) diarrea sin fiebre.

EPEC ocasiona
Enteropatógeno Los alimentos o agua, el contacto
diarrea acuosa, a
(EPEC) humano directo e indirecto
veces con sangre.

EHEC ocasionan
Enterohemorrágico Alimentos o ingestión, el contacto diarrea consagre, a
(EHEC) humano directo o indirecto veces pueden dañar
los riñones

EIEC provoca
Enteroinvasivo disentería, como la
La ingestión de alimentos o agua
(EIEC) diarrea. La fiebre es
un síntoma común

Fuente: Prescott et. al. (15).

2.2.3. Definiciones y clasificación de los nanomateriales

 Definiciones utilizadas en nanotecnología:

Según el British Standards Institution, las siguientes definiciones son

utilizadas en nanotecnología (15):

- Nanoescala: rango de tamaño aproximado de 1 a 1000 nm.

- Nanociencia: ciencia y el estudio de la materia a nanoescala que
se ocupa de comprender su tamaño y sus propiedades
dependientes de la estructura y compara la aparición de átomos

14
 o moléculas individuales o las diferencias relacionadas con el
material a granel.
- Nanotecnología: manipulación y control de la materia en la
dimensión de nanoescala mediante el uso del conocimiento
científico de diversas aplicaciones industriales y biomédicas.
- Nanomaterial: material con cualquier estructura interna o externa
en la dimensión de nanoescala.
- Nanoobjeto: material que posee una o más dimensiones
periféricas a nanoescala.
- Nanopartículas: nanoobjetos con tres dimensiones externas a
nanoescala. Los términos nanorod o nanoplaca se emplean, en
lugar de nanopartículas (NP) cuando las longitudes de los ejes
más largos y más cortos de un nanoobjeto son diferentes.
- Nanofobia: cuando dos dimensiones exteriores son similares a
nanoescala y una tercera dimensión más grande están presentes
en un nanomaterial.
- Nanocompuesto: estructura multifásica con al menos una fase en
la dimensión de nanoescala.
- Nanoestructura: composición de partes constituyentes
interconectadas en la región de nanoescala.
- Materiales nanoestructurados: materiales que contienen
nanoestructura interna o superficial.

 Clasificación de los nanomateriales:

La clasificación mayor utilizada en las ciencias es los descrito por (15):

- Nanomateriales a base de carbono: contienen carbono y se

encuentran en morfologías como tubos huecos, elipsoides o
esferas. Los fullerenos (C60), los nanotubos de carbono (CNT),
las nanofibras de carbono, el negro de humo, el grafeno (Gr) y las
cebollas de carbono se incluyen en la categoría de
nanomateriales a base de carbono.
- Nanomateriales de base inorgánica: incluyen a las nanopartículas
y los nanomateriales estructurados de metal y óxido metálico.

15
 Estos nanomateriales pueden sintetizarse en metales como
nanopartículas de Au o Ag, óxidos metálicos como nanopartículas
de TiO2 y ZnO.
- Nanomateriales de base orgánica: incluyen nanomateriales
hechos principalmente de materia orgánica, excluyendo los
nanomateriales basados en carbono o inorgánicos. La utilización
de interacciones no covalentes (débiles) para el autoensamblaje
y el diseño de moléculas ayuda a transformar los nanomateriales
orgánicos en estructuras deseadas, como dendrímeros, micelas,
liposomas y nanopartículas de polímeros.
- Nanomateriales compuestos: son nanopartículas y nanopartículas
estructuradas multifásicos con una fase en la dimensión de
nanoescala que puede combinar nanopartículas con otras
nanopartículas o nanopartículas combinados con materiales de
mayor tamaño o con materiales a granel (por ejemplo, nanofibras
híbridas) o más complicadas estructuras, tales como estructuras
metaloorgánicas. Los compuestos pueden ser cualquier
combinación de nanomateriales a base de carbono, de metal o de
base orgánica con cualquier forma de materiales a granel de
metal, cerámica o polímero. Los nanomateriales se sintetizan en
diferentes morfologías, dependiendo de las propiedades
requeridas para la aplicación deseada.

2.2.4. Caracterización de las nanopartículas TiO2

Las nanopartículas de TiO2 se encuentra en tres fases cristalinas: la

anatasa y el rutilo (ambas tetragonales) y la brookita (romboédrica). El
rutilo es un material termodinámicamente muy estable y es la forma más
común de TiO2 que se encuentra en la naturaleza. En cambio, la brookita
y la anatasa son fases metaestables. El TiO2 es anfótero, químicamente
muy estable y posee un fuerte poder oxidante que no es atacado por la
mayoría de los agentes orgánicos e inorgánicos. Además, es un
semiconductor sensible a la luz que absorbe radiación electromagnética
cerca de la región Ultravioleta Visible (UV).

16
Las nanopartículas de TiO2 por lo común es utilizado para inhibir bacterias
E. coli y células tumorales del cáncer. Los efectos que produce las
nanopartículas TiO2 en sistemas biológicos es por la reactividad del
oxígeno que se generan en la superficie del TiO2 durante la actividad
fotocatalítica. Este fenómeno se genera a cercanías de las células
bacterianas que las destruye fácilmente, causando la peroxidación de los
fosfolípidos de la membrana de las células, con la interrupción de su
respiración celular.

Las características morfológicas de las nanopartículas de TiO2 son de gran

interés, que influyen en la mayoría de sus propiedades. Así mismo, sus
características estructurales permiten estudiar la composición y la
naturaleza de unión de los materiales. Las características de las
nanopartículas de TiO2 con tamaños inferiores a 20 nm se determinan con
gran precisión utilizando la técnica de potencial Z con el equipo DLS (16).

La estructura de las nanopartículas de TiO2 pertenecen al sistema

tetragonal y pueden describirse como cadenas de octaedros TiO6 en la que
cada átomo Ti+4 están rodeado de un octaedro de seis átomos de O-2. La
distancia de los enlaces Ti-Ti en la anatasa son mayores, mientras que los
enlaces Ti-O son más cortos que los del rutilo (figura 02) y (tabla 03).

Figura 02. Estructura de las NPs-TiO2.

Nota: a) anastasa, b) rutilo.

Fuente: adaptado de Lin et. al. (17, 25).

17
 Tabla 03. Comparación de las propiedades físicas y termodinámicas de las
nanopartículas de TiO2.

Fase Anastasa Rutilo Brookita

Peso molecular 79.89 79.89 79.89

Estructura cristalina Tetragonal en el cuerpo Tetragonal simple Ortorómbica

Energía de banda
3.20 eV 3.03 eV -
prohibida (Eg)

Densidad (g/cm3) 4.06 4.21 4.13

Índice de refracción 2.48 - 2.56 2.61 - 2.89 2.58 - 2.70

Fuente: adaptado de Lin et. al. (17, 25).

2.2.5. Mecanismos de toxicidad de las nanopartículas sobre las bacterias

Los mecanismos de toxicidad de las nanopartículas en las bacterias

todavía no están bien estudiados y no se entienden completamente. Sin
embargo, la toxicidad de las NPs-TiO2 en las células es provocado cuando
las nanopartículas se unen a la membrana de las bacterias por interacción
electrostática interrumpen la integridad de la membrana bacteriana. La
nanotoxicidad generalmente se desencadena por la inducción del estrés
oxidativo a formar radicales libres, después del contacto con las
nanopartículas (figura 03). En la tabla 04 se presentan los mecanismos de
toxicidad de las nanopartículas de TiO2 sobre las bacterias gramnegativas
de E. coli (18).

Los mecanismos de toxicidad de las nanopartículas dependen mucho de

la composición, modificación de la superficie y sus propiedades intrínsecas
de las nanopartículas. Esta situación indica que son muy complicados los
mecanismos de toxicidad y depende de muchos factores como químicos,
físicos y termodinámicos. Las nanopartículas de ZnO y TiO2 tienen un
potencial mutagénico débil hacia las bacterias Salmonella typhimurium;
pero, para las bacterias E. coli son tóxicas bajo la influencia de la
iluminación UV y que están disminuyen en un período de tiempo mayores
a 60 minutos (18).

18
 Figura 03. Toxicidad de las nanopartículas de TiO2.

Fuente: adaptado de Alikhani et. al. (20).

Tabla 04. Efectos tóxicos de las nanopartículas de TiO2 en bacterias E.

coli.

Propiedad
fisicoquímica de la Dosis de aplicación Mecanismo de acción de toxicidad
NPs-TiO2

No tóxico en condiciones de
50 nm 20 mg/l
oscuridad.

5 – 40 nm (Tamaño Penetración en células hasta

30 µg/ml
definido por SEM). provocar el efecto de lysis.

Fotoactivación del efecto bactericida

de los promotores de TiO2.
20 nm (ST-01). 10 mg/l Peroxidación de los polinsaturados
fofolípidos de la membrana con
pérdida de actividad respiratoria.

TiO2: Ataque celular por generación

40 60 nm (Tamaño
8 y 80 ng/ml oxidativa y toxicidad Generación de
de poro en TEM).
mutación en sistemas activos.

C. metallidurans. TiO2 La resistencia de C. metallidurans

< 25 nm (tamaño se internaliza en las está relacionada a la sobre
definido por TEM). bacterias, pero no expresión de los componentes
causa la muerte. protectores o por sistemas de flujo.

Fuente: adaptado de Alikhani et. al. (20).

19
 Factores de toxicidad de las nanopartículas:

La toxicidad de las nanopartículas (15), pueden deberse a los

siguientes factores:

- Dosis y efecto del tiempo de contacto: el número de

nanopartículas que penetran en las células depende directamente
de la concentración molar de las nanopartículas en el medio y el
tiempo de contacto con las bacterias.
- Efecto de agregación y concentración: el aumento de la
concentración de nanopartículas promueve un estado de
agregación. La mayoría de los agregados de nanopartículas de
tamaños micrométricos no pueden penetrar en las células y de
este modo pierden su toxicidad.
- Efecto del tamaño de partícula: las nanopartículas tienen una
toxicidad mayor o menor dependiente de su tamaño. Por ejemplo,
las nanopartículas de Ag con un diámetro de aproximadamente
10 nm tienen una mayor capacidad de penetrar y perturbar los
sistemas celulares de muchos organismos que los iones de Ag+ y
de aquellas nanopartículas que tienen diámetros entre 20 y 100
nm.
- Efecto de forma de partícula: las nanopartículas exhiben toxicidad
dependiente de su forma, es decir, tienen diferentes niveles de
toxicidad. Por ejemplo, las fibras de asbesto de 10 μm de longitud
pueden causar cáncer de pulmón, mientras que las fibras de
asbesto más pequeñas de unos 5 a 10 μm pueden causar
mesotelioma y las fibras de 2 μm de longitud pueden causar
asbestosis.
- Efecto de la superficie: el efecto toxicológico de las nanopartículas
aumenta al disminuir el tamaño de las partículas porque aumenta
su área superficial.
- Efecto de la estructura cristalina: basados en la estructura
cristalina, las nanopartículas pueden presentar diferentes tipos de
absorción celular, mecanismo oxidativo y localización subcelular.
Por ejemplo, los dos polimorfos cristalinos de TiO2 (rutilo y

20
 anatasa) muestran una toxicidad diferente. En la oscuridad, las
nanopartículas de rutilo de 200 nm provocan daños en el ADN por
oxidación, mientras que las nanopartículas de anatasa de 200 nm
no provocan daños en el ADN en condiciones oscuras.
- Efecto de funcionalización de superficie: las propiedades
superficiales de las nanopartículas muestran efectos drásticos
relacionados con la translocación y los procesos de oxidación
posteriores.
- Efecto de pre exposición: la actividad fagocítica celular puede ser
estimulada por un tiempo de exposición más corto o por la
exposición previa de concentraciones más bajas de
nanopartículas.

 Efectos fotocatalíticos del TiO2:

La fotocatálisis es una técnica utilizada para la purificación y el

tratamiento de varios tipos de aguas residuales. El efecto de la
fotocatálisis tiene una capacidad eficiente para inactivar el organismo
patógeno, como las bacterias, presentes en las aguas residuales. Las
nanopartículas de TiO2 son utilizadas ampliamente por su poder
fotocalizador y su alto poder antimicrobiano. El uso de las
nanopartículas de TiO2 en polvo generan dificultades para su
separación posterior. Pero, si a estas nanopartículas de TiO2 son
modificadas con otros materiales aumentan su área superficial,
entonces estas nanopartículas modificadas mejoran la actividad
antimicrobiana (1). Se ha demostrado que el grafeno, los nanotubos
de carbono y otros nanomateriales carbonosos poseen una buena
capacidad de adsorción para la erradicación de contaminantes del
agua residual, y que además tienen estructuras y propiedades únicas
para optimizar a los fotocatalizadores de TiO2 (19). Por otro lado, si las
nanopartículas de TiO2 se utilizan en concentraciones menores a 0.1
ml en solución se facilita el proceso antibacterial de las bacterias E.
coli para un período de tiempo de contacto de 30 minutos a 3 horas
(13).

21
 2.2.6. Nanopartículas y poblaciones bacterianas

En los lechos bacterianos de los tratamientos biológicos de humedales el

contacto de nanopartículas de TiO2 con poblaciones microbianas donde
ocurre la inhibición se da en períodos de 5 a 60 días, para concentraciones
menores a 50 mg/l (4). Sin embargo, a medida que la concentración de
TiO2 disminuye de 10, 5 hasta 1 mg/l la supervivencia de las bacterias E.
coli aumentan hasta un 36 %, sin embargo, cuando el tiempo de contacto
disminuye y la concentración de nanopartículas de TiO2 aumenta hasta 1
g/l la inhibición bacteriana llega a un 50 % provocando el cambio
morfológico celular dando lugar a la contracción y fragmentación de las
células (13). Estos antecedentes nos permiten estudiar la concentración
de las nanopartículas de TiO2 y el tiempo de contacto con las bacterias E.
coli.

2.3. Definición de términos

 Contaminación del agua: incorporación al agua de materias extrañas, como

microorganismos, productos químicos, residuos industriales y de otros tipos, o
aguas residuales. Estas materias deterioran la calidad del agua y la hacen inútil
para otros usos (13).
 Desinfección de agua: es la eliminación de microorganismos patógenos que no
han sido exterminados en fases iniciales del tratamiento de agua (13).
 E. coli: es un bacilo gramnegativo de la familia de las enterobacterias que se
encuentra en el tracto gastrointestinal de humanos y animales de sangre
caliente (13).
 Membranas: son las barreras delgadas entre dos fases, a través de las cuales,
bajo la acción de una fuerza (normalmente una diferencia de presión o de
concentración) tiene lugar un transporte (20).
 Nanocompuestos: son materiales compuestos por dos o más componentes, en
los cuales, al que se encuentra en mayor porcentaje, se le llama matriz y al de
menor porcentaje, carga. La carga debe tener tamaño nanométrico (13).
 Nanopartícula: es una partícula con una dimensión menor a 100 nm (13).

22
 Nanotecnología: es el estudio, diseño, creación, síntesis, manipulación y
aplicación de materiales, aparatos y sistemas funcionales a través del control
de la materia a nanoescala, y la explotación de fenómenos y propiedades de la
materia a nanoescala (13).
 Purificación de agua: dependiendo del origen del agua a tratar, se implementan
procesos de purificación de agua. Algunos de ellos pueden ser sedimentación,
filtración, desalinización, ósmosis inversa, etc. (19, 28).
 pH: es el logaritmo de la reciproca de la concentración de ion hidrogeno en una
sustancia o medio y que puede ser medida en un rango de 1-14, si su valor se
encuentra entre 1-6 el pH es ácido, si se encuentra entre 8-14, su pH es básico
(13).
 Toxicidad bactericida: es aquel que produce la muerte de una bacteria (19, 26).

23
 CAPÍTULO III
METODOLOGÍA

3.1. Método, tipo y nivel de la investigación

3.1.1. Métodos de la investigación

El método general de investigación es científico (13) y en el desarrollo de

la investigación se explica la ocurrencia del fenómeno de inhibición de las
bacterias E. coli para las variables del tiempo de contacto y la
concentración de las nanopartículas de TiO2. Es así que se buscó explicar
a qué período de contacto se produce la propiedad antibacterial de las
nanopartículas y en que rango de concentración ocurre esta inhibición
bacteriana de la bacteria E. coli que es la más representativa de los
coliformes totales los cuales se encuentran en los efluentes finales de las
plantas de tratamiento de las aguas residuales municipales. La descripción
de los hechos de inhibición se explica y comparan con las investigaciones
desarrolladas por otros investigadores.

3.1.2. Tipo de la investigación

El tipo de Investigación es aplicado, que busca la generación de

conocimiento con aplicación directa al tratamiento de aguas residuales
municipales tratadas. Esta investigación se fundamenta en los hallazgos

24
 tecnológicos de la investigación básica, la cual contribuye con el proceso
de enlace entre la teoría y los resultados de la presente investigación (13).

3.1.3. Nivel de la investigación

El nivel de Investigación es explicativo, mediante el establecimiento de

relaciones causa-efecto. El interés es explicar cómo las variables del
tiempo de contacto y la concentración de las nanopartículas de TiO2
contribuyen con la desinfección de las bacterias E. coli presentes en las
aguas residuales tratadas (13).

3.2. Diseño de la investigación

Para determinar el porcentaje de desinfección de las bacterias E. coli, se utilizó el

diseño experimental factorial: N° de pruebas = 2k.

Donde:

- 2: representa el número de niveles.

- k: representa el número de variables independientes.

Para el proyecto se utilizaron dos variables independientes con cuatro niveles como
se muestra en la tabla 05.

Tabla 05. Diseño experimental factorial.

Concentración de NPs-TiO2 Tiempo de contacto de NPs- Desinfección de las bacterias
(ppm) TiO2 (min) E. coli (UFC)

10 60 Y111

10 120 Y121

10 180 Y131

10 720 Y141

40 60 Y211

40 120 Y221

25
 40 180 Y231

40 720 Y241

70 60 Y311

70 120 Y321

70 180 Y331

70 720 Y341

100 60 Y411

100 120 Y421

100 180 Y431

100 720 Y441

Fuente: elaboración propia.

3.3. Población y muestra

3.3.1. Población

La población fue el efluente final de la planta de tratamiento de las aguas

residuales municipales de nombre Alcas que pertenece al distrito de
Sicaya, provincia de Huancayo.

3.3.2. Muestra

La muestra estuvo constituida por 5 litros de aguas residuales de la PTAR

que se utilizó para el análisis de las bacterias E. coli presentes en el agua
residual. La unidad de análisis se complementó con 15 ml del medio de
cultivo agar MacConkey.

3.4. Técnicas e instrumentos de recolección de datos

3.4.1. Materiales, reactivos y equipos

26
 Materiales:

- Micropipetas.
- Placas Petri.
- Tubos de ensayo.
- Matraz Erlenmeyer.
- Asa de siembra.
- Vasos de precipitación.
- Fiola.
- Piseta.
- Lunas de reloj.
- Varilla.
- Mangueras.
- Bolsas negras.
- Buretas.
- Ganchos.
- Soportes.
- Cronómetro.
- Papel aluminio.
- Máscara de seguridad.
- Tijeras.
- Algodón.
- Pabilo.
- Papel kraft.
- Papel filtro.
- Pinzas.
- Mechero de Bunsen.

 Reactivos:

- Escherichia coli derivado de ATCC® 25922™.

- Nanopartículas de dióxido de titanio (TiO2).
- Agar MacConkey.
- Alcohol.
- Etanol.

27
  Equipos e instrumentos:

- Microscopía Electrónica de Barrido de Emisión de Campo (SEM):

marca TESCAN, modelo MIRA3-LMU del Centro de Investigación
de Nanotecnología de la Facultad de Ingeniería Química de la
Universidad Nacional del Centro del Perú (fecha del protocolo de
instalación: 09 mayo 2019 - ver Anexo 10).
- Analizador de Nanopartículas y Analizador de Potencial Z (DLS):
marca NICOMP PSS Z3000, del Centro de Investigación de
Nanotecnología de la Facultad de Ingeniería Química de la
Universidad Nacional del Centro del Perú (fecha de la certificación
de análisis: 18 diciembre 2019 - ver Anexo 10).
- Sonicador: marca BRANSON, Modelo SFX250 y con tensión en
línea de 100 a 120 V, a 50/60 Hz. Incluye 3 tipos de
disruptor/homogeneizador (calibración: 04 octubre 2019).
- pHmetro digital: con agitador magnético, marca EZODO, modelo:
PL-700ALS (calibración: 06 enero 2020).
- Termómetro digital: tipo lapicero, marca BOECO, modelo TP101.
- Autoclave horizontal: marca STURDY, modelo SA-232 de 16
litros, con una temperatura de esterilización hasta 120 °C
(calibración: 26 noviembre 2019).
- Mufla Horno de Cámara: marca PROTHERM, modelo ECO
110/15 con capacidad de 15 litros, temperatura máxima 1100°C
(calibración: 05 diciembre 2019).
- Balanza: de precisión modelo 400. 400 g/0.001 g, marca VWR
americana (calibración: 24 setiembre 2019).
- Contador de colonias digital: marca LKB 2002.

3.5. Técnicas de análisis y procesamiento de datos

 Método de análisis:

- Protocolo para el traslado de las muestras al laboratorio:

28
 La metodología seguida para el registro de datos de campo, toma de
muestra, la conservación y preservación de la misma (agua residual
tratada de la PTAR de Alcas del distrito de Sicaya) se realizó mediante el
“Protocolo Nacional para el Monitoreo de la Calidad de los Recursos
Hídricos Superficiales” aprobado por la Resolución Jefatural N° 010-2016-
ANA de la Autoridad Nacional del Agua del Ministerio de Desarrollo Agrario
y Riego. Los anexos que corresponden al protocolo para el traslado de las
muestras al laboratorio de nanotecnología de la Universidad Nacional del
Centro del Perú se presentan en el Anexo 11; los procedimientos
principales fueron:

o Para la toma de las muestras se utilizaron los materiales y equipos de

monitoreo que recomienda el protocolo.
o La toma de muestra se realizó a las 9:00 horas del día 11 de diciembre
del año 2019.
o Las muestras se tomaron según el registro del anexo I del protocolo y
ésta se realizó a una profundidad aproximadamene de 30 cm.
o Durante la toma de muestra para el análisis del parámetro
microbiológico de la bacteria E. coli se utilizaron dos recipientes de
vidrio estéril con capacidad de 500 ml del cual se dejó un volumen de
166.7 ml para la aireacción respectiva.
o El rotulado y etiquetado de la muestra se realizó de acuerdo al anexo
VII del protocolo.
o Una vez que la muestra llegó al laboratorio se preservó a 4°C en un
refrigerador.
o Los análisis de las muestras se realizaronel mismo día 11 de diciembre
del año 2019 a partir de las 11 a.m.

- Método de recuento en placa para la caracterización de las bacterias E.

coli de la PTAR de Sicaya:

La preparación del medio de cultivo se realizó después de esterilizar los

materiales en la mufla horno a 160°C por el espacio de 30 minutos. Las
pruebas se realizaron con 4 pipetas de 1 ml y 12 placas Petri, todos ellos
debidamente envueltos en papel kraft. La preparación del agar MacConkey

29
 se realizó utilizando 150 ml de agua destilada y 7.5 g de agar MacConkey
que fueron mezclados en un matraz de 250 ml para luego aforar en una
fiola de 500 ml. La muestra de agua residual rotulado como AS-01
procedente de la PTAR Alcas del distrito de Sicaya se filtró y se diluyó en
concentraciones de 10-1, 10-2 y 10-3. Con las pipetas graduadas se tomaron
disoluciones de 1 ml de cada dilución y se puso a las placas Petri
conjuntamente con el agar MacConkey preparado anteriormente. Se
esperó a que se solidifique, configurando la mezcla, y seguidamente se
puso a la incubadora a 37°C por un tiempo de 48 horas. Finalmente, se
realizó la lectura de las placas para determinar las colonias formadas de
color rojo/rosado de cada placa con el agar MacConkey, siempre teniendo
en cuenta la dilución que se tuvo al inicio de la preparación de la muestra.

- Activación de las bacterias E. coli:

Las cepas bacterias puras de E. coli adquiridas del laboratorio

especializado Gen Lab del Perú S.A.C. de la ciudad de Lima, se llegó a
activar con el siguiente procedimiento (20):

o El cultivo inicial de las bacterias E. coli se realizó en el medio de cultivo

Luria Bertani a un pH de 7.4 las cuales fueron incubados a 37°C
durante 24 horas.
o Las bacterias E. coli fueron recolectadas en pellets desde su fase de
crecimiento exponencial y luego se centrifugaron a 500 rpm con una
solución buffer salina de fosfato durante 10 minutos.
o Los pellets de las bacterias E. coli recolectados y centrifugadas
nuevamente se suspenden en solución buffer salina de fosfato a un
pH de 7.2.
o Finalmente, estos pellets de bacterias en suspensión se diluyen en
agua Milli-Q en celdas de vidrio Pírex para obtener una densidad de 1
x 105 UFC/ml.

- Preparación del agar MacConkey:

30
 Antes de iniciar la preparación del agar MacConkey, se pusieron a
esterilizar todos los materiales en la mufla horno a 150°C por el espacio de
30 minutos. La preparación del agar MacConkey se realizó con 150 ml de
agua destilada y un peso de 7.5 g de agar MacConkey para luego mezclar
en un matraz de 250 ml; se llevó a calentamiento agitando constantemente.
Tan pronto se presenta la ebullición se cierra el matraz con algodón, se
forra con papel kraft y se ata con pabilo. Una vez logrado la dilución y una
mezcla homogénea se procedió a esterilizar el matraz en la autoclave a
121°C por el tiempo de 15 minutos.

Figura 04. Autoclavado de los materiales para la preparación del agar MacConkey.

Fuente: propia.

- Preparación del medio de cultivo:

Antes de preparar el medio de cultivo, toda el área de trabajo se desinfecto

con alcohol para luego prender el mechero Bunsen. Una vez prendido el
mechero se procede a sacar el agar MacConkey y tomando una alícuota
de 15 ml del agar se coloca en 6 placas Petri (una de ellas para control sin
la presencia de la bacteria E. coli). Seguidamente se toman 5 colonias
uniformes de las bacterias E. coli haciendo uso de las asas de siembra y
se adiciona a las placas Petri. Esta operación se realizó lo más rápido

31
 posible ante de que se produzca la solidificación de la solución. El medio
de cultivo de las 6 placas Petri fueron puestas en la incubadora por el
período de 24 horas y a 37ºC.

- Preparación de la solución de TiO2:

La preparación de la solución de TiO2 se hizo para las concentraciones de

10, 40, 70 y 100 ppm. El procedimiento fue el siguiente:

o Se pesó 1 g de NPs-TiO2-A015 comercial de marca mKNANO.

o En un vaso de precipitación de 250 ml se adicionó 100 ml de agua ultra
pura y el peso de las NPs-TiO2.
o La solución preparada se agitó en un agitador magnético a 800 rpm
durante 15 minutos.
o Posteriormente se realizó la dilución de la solución en una fiola de 100
ml para la concentración deseada.
o Las diluciones de las soluciones acuosas preparadas anteriormente
se llevan a un baño ultrasónico por el espacio de 30 minutos a 24 kHz,
para lograr la dispersión de las nanopartículas

- Inoculación de las bacterias E. coli y las NPs-TiO2:

Con el medio de cultivo y la solución de nanopartículas de TiO2 se

procedieron a la incubación siguiendo los siguientes pasos:

o Para la inoculación se toma 1 ml del medio de cultivo y se inocula en

una placa Petri que contiene agar MacConkey.
o Seguidamente se adiciona 1 gota de NPs-TiO2 en la zona central de
la placa.
o Una vez inoculada en la placa Petri se lleva a la incubadora por el
tiempo de 24 horas a 37ºC.
o Se realiza el mismo procedimiento para las diferentes concentraciones
NPs-TiO2.
o Al mismo tiempo se trabaja con muestras control al cual no se adiciona
las NPs-TiO2, estas muestras son en número de tres.

32
- Recuento de colonias en placa:

o Después del periodo de incubación se retira la placa Petri inoculada y

mediante el contador de colonias se procede al conteo y el registro de
los datos.
o El conteo de las colonias se realizó a cada hora en forma periódica
hasta la tercera hora y luego se dejó de contar hasta las 12 horas
posteriores.
o Después del conteo de las colonias de color rojo/rosado de cada placa
se aplica el factor de dilución.
o Cada lectura se va comparando con las tres muestras control.
o Los resultados del conteo de tres muestras se promedian y comparan
con las tres muestras control.
o Se repite el procedimiento para cada experimento.

- Caracterización de las nanopartículas de TiO2:

La caracterización de las nanopartículas de TiO2 se ha realizado utilizando

la técnica del diámetro hidrodinámico mediante la Dispersión de Luz
Dinámica (DLS) y también se realizó mediante la técnica de imágenes de
Microscopía Electrónica de Barrido (SEM). Las nanopartículas de óxido de
titanio fueron adquiridas de la empresa MK Impex Corporation, Div.
mkNANO de Canadá quiénes utilizaron el método de síntesis industrial el
de Sol-Gel anatasa.

o Dispersión de Luz Dinámica (DLS):

En la determinación del tamaño de las nanopartículas de TiO2 se utilizó

0.01 g de las nanopartículas la cuál fue adicionado a 100 ml de agua
destilada, esta solución fue agitada por un espacio de 10 minutos en
el sonicador Branson para lograr la dispersión de las nanopartículas.
La muestra de 1 ml de solución, antes de ser colocado a la celda del
equipo DLS, se filtró con una membrana de 0.24 mm. La prueba se
realizó a 25°C en modo “Sizing” del equipo DLS NICOMP PSS Z300.

33
 Figura 05. Equipo DLS NICOMP PSS Z3000 utilizado para la determinación del
tamaño de las nanopartículas de TiO2.

Fuente: propia.

o Microscopia Electrónica de Barrido (SEM):

La determinación de la morfología y composición de las nanopartículas

de TiO2 se realizó en el equipo de Microscopía Electrónica de Barrido
de Campo marca TESCAN, modelo MIRA3-LMU del Centro de
Investigación de Nanotecnología de la Facultad de Ingeniería Química
de la Universidad Nacional del Centro del Perú. El detector SE trabajó
a 10 kV, 15 mm y 50 µm. La preparación de la muestra se realizó de
la siguiente manera (21):

 Se prepararon soluciones acuosas de NPs-TiO2 a 100 ppm.

 La solución preparada anteriormente se llegó a homogenizar en
el sonicador Branson a 40 KHz por 10 minutos.
 La filtración de la solución se realizó en equipo de filtración al
vacío en membranas de 0.44 micrómetros.
 Las membranas se colocaron sobre crisoles y se secaron en el
horno a 150ºC durante 5 horas.
 En las portas muestras del SEM o llamados “stubs” se colocaron
cintas de carbono y sobre ellas se puso las muestras secas de las
nanopartículas del TiO2.

34
 Los “stubs” con las muestras de las NPs-TiO2 se metalizaron con
el equipo DENTON VACUUM Desk V, por un período de 10
minutos utilizando el metalizador de oro.
 Las muestras preparadas y metalizadas fueron colocadas en las
portamuestras del equipo SEM para su análisis respectivo.

Figura 06. Equipo de Microscopia Electrónica de Barrido utilizado para la

caracterización de la morfología y composición de las nanopartículas de TiO2.

Fuente: propia.

35
 CAPÍTULO IV
RESULTADOS Y DISCUSIÓN

4.1. Resultados del tratamiento y análisis de información

4.1.1. Resultados de la cuantificación de las bacterias E. coli del efluente final de

la PTAR de Sicaya

Los resultados de la tabla 06 indican la cuantificación de las bacterias E.

coli presentes en el efluente final de la PTAR Alcas del distrito de Sicaya
que se realizó mediante el recuento de placas. La caracterización del agua
residual se ha realizado solamente para el parámetro de bacterias y no una
caracterización completa (2). El resultado promedio de 710 UFC/ml de
bacterias E. coli presentes en las aguas tratadas de la PTAR nos indica
que todavía existe contaminación y es necesario tratar estas aguas para el
reuso. La normatividad vigente para los efluentes finales de las PTAR
permite 10 000 NMP/100ml de coliformes termotolerantes como límite
máximo permisible.

Tabla 06. Resultados del conteo de las bacterias E. coli en placas Petri.
UFC/ml
Nº de muestra
A B

1 710 750

2 680 820

36
 3 610 720

Promedio 710

Fuente: elaboración propia.

El análisis de las bacterias E. coli que se realizó a las muestras de aguas

residuales del efluente final de la PTAR de Alcas ha seguido la metodología
del conteo en placas Petri.

En la investigación de Haq et. al. (30) utilizaron el medio de cultivo agar

Muller-Hinton para analizar el efecto de las nanopartículas de TiO2 en la
bacteria E. coli, en cambio en el presente trabajo se hizo con el medio de
cultivo de agar MacConkey, el cual fue pesado (figura 07), para luego
proceder a la inoculación (figura 08) y finalmente se realizó el recuento de
placas (figura 09).

Figura 07. Pesado del agar MacConkey para para la preparación del medio de cultivo.

Fuente: propia.

Figura 08. Muestras de inoculación forradas con papel kraft y atadas con pabilo.

Fuente: propia.

37
 Figura 09. Recuento de las colonias de E. coli del efluente final de las aguas residuales
de la PTAR - Alcas - Sicaya.

Fuente: propia.

4.1.2. Inoculación de las bacterias E. coli y las NTPs-TiO2 y recuento de colonias

en placa

El medio de cultivo de agar MacConkey con una concentración inicial

constante de 1x105 UFC/ml de bacterias E. coli derivadas ATCC® 25922™
se ha inoculado con diferentes soluciones de nanopartículas de TiO2 desde
10 hasta 100 ppm. La experimentación se realizó con dos replicas para
tener los resultados consistentes. Antes de los experimentos, la
inoculación se mantuvo constante durante las primeras 48 horas a una
temperatura de 37°C. Una vez iniciado los experimentos se varió el tiempo
de contacto inicialmente y luego la concentración de las NPs-TiO2, en
ambos casos se han cuantificado las bacterias E. coli por conteo de las
placas (figura 10). El procedimiento experimental se realizó de acuerdo a
Lee et. al. (13) que utilizaron nanopartículas de TiO2 en polvo y que la
cuantificación se hizo mediante la densidad óptica con el equipo UV-
Visible. Los resultados del conteo de colonias se procesaron teniendo en
cuenta las diluciones preparadas que variaron desde 1x10-1 hasta 1x 10-4.
Experimento similar realizaron M. Sadiq et. al. (21) con concentraciones de
NPs-TiO2 que variaron entre 50 y 100 ppm para un período de contacto de
4 a 6 horas, asimismo se utilizaron concentraciones de NPs-TiO2 desde
9.7 hasta 19.5 ppm de TiO2 que se encuentran dentro del rango de
concentraciones de nanopartículas realizadas en la presente investigación.

38
 Figura 10. Conteo de colonias de bacterias E. coli y NPs-TiO2 (tras el experimento).

Fuente: propia.

4.1.3. Resultados de la caracterización de nanopartículas

 Resultados de la caracterización de nanopartículas de TiO2 por DLS:

La caracterización del diámetro hidrodinámico promedio de las

nanopartículas de TiO2 se realizó mediante el equipo de DLS. En las
figuras 11, 12 y 13 se presentan los histogramas de la distribución de
las nanopartículas según su intensidad, número y volumen de
muestra. Se hicieron tres corridas a diferentes diluciones de muestra.

Figura 11. Histograma de Intensidad de la distribución de las NPs-TiO2 obtenido en

el equipo DLS.

Fuente: elaboración propia.

39
 Figura 12. Histograma de números de distribución de las NPs-TiO2 obtenido en el
equipo DLS.

Fuente: elaboración propia.

Figura 13. Histograma de Volumen de las NPs-TiO2 obtenido en el equipo DLS.

Fuente: elaboración propia.

En la tabla 07, se presentan los diámetros de las nanopartículas de

TiO2 que predominan de acuerdo a la intensidad, número y volumen
de la muestra. El promedio del diámetro hidrodinámico da como
resultado 11.03 ± 1.23 nm (ver complemento en el Anexo 06).

Tabla 07. Resumen de datos de las mediciones del diámetro

hidrodinámico de las NPs-TiO2.
Medida de Desviación % Volumen
diámetro (nm) estándar
11.40 1.60 100

40
 Intensidad - Pico 1 11.00 1.00 100

Volumen - Pico 1 10.70 1.10 100

Número - Pico 1 11.03 1.23 100

Fuente: elaboración propia.

Estos resultados concuerdan con la información proporcionada por los

fabricantes, pues indican que el tamaño es menor a 15 nm del
producto MKN-TiO2-A015; se debe considerar que la técnica utilizada
por los fabricantes es diferente al DLS. Una primera determinación del
tamaño hidrodinámico de las nanopartículas resultó de 112.0 nm, con
una desviación de 14.5 nm (figura 14). Esta primera aproximación
concuerda con los determinados por Ochoa et. al. (23), quienes
trabajaron en su investigación con nanopartículas de TiO2 anatasa del
tamaño comprendido entre 20 nm y 769 nm.

Figura 14. Histograma de números de distribución de las NPs-TiO2 obtenido en el

equipo DLS (2).

Fuente: elaboración propia.

 Resultados de la caracterización de nanopartículas de TiO2 por SEM:

La caracterización morfológica, estructura y composición de las

nanopartículas de TiO2 se realizaron por Microscopia Electrónica de
Barrido (SEM). De los resultados de las imágenes, que se presentan
en las figuras 15 y 16, se afirma que las NPs-TiO2 están aglomeradas

41
en gran parte toxicidad (9), sin embargo, estas nanopartículas tienen
diámetros menores a 200 nm. En la figura 15 se aprecia que las
nanopartículas tienen una morfología semiesférica. El espectro de las
muestras de nanopartículas se produjo para una fuerte intensidad
máxima de titanio a 10.0 keV, según las especificaciones de la
estructura y propiedad física de las nanopartículas de TiO2 (figura 02
y tabla 03).

Figura 15. Geometría y tamaño de las NPs-TiO2 en el equipo SEM.

Fuente: elaboración propia.

42
 Figura 16. Conglomerado de las NPs-TiO2 en el equipo SEM.

Fuente: elaboración propia.

Esta característica morfológica de semiesfera de las nanopartículas de

TiO2 van a influenciar en las propiedades de toxicidad (16).

 Resultados de la composición de las nanopartículas de TiO2 por EDS

del SEM:

Se realizó el análisis de composición semicuantitativa de las

nanopartículas de TiO2 en el equipo de microscopía electrónica de
barrido (24). Las imágenes se obtuvieron con el software Aztec del
detector de EDS de la empresa Oxford Instruments (figura 17).

43
 Figura 17. Imágenes del detector EDS con diferentes espectros en la determinación
de la composición NPs-TiO2 del equipo SEM.

Fuente: elaboración propia.

El análisis de composición semicuantitativa de las nanopartículas de

TiO2 se realizó con diferentes espectros (figuras 18 y 19) de la
muestra. Los resultados de composición pueden tener variación
dependiendo de los espectros, es por ello que se realizó varios
espectros con la finalidad de disponer una información exacta de la
composición de las nanopartículas similar a lo realizado por Tombini
et. al. (9).

44
 Figura 18. Composición de las NPs-TiO2 en el primer espectro del equipo SEM con
el detector EDS.

Fuente: elaboración propia.

Figura 19. Composición de las NPs-TiO2 en el segundo espectro del equipo SEM
con el detector EDS.

Fuente: elaboración propia.

El reporte final de la composición de las nanopartículas de TiO 2 de

acuerdo al software del detector del EDS nos indica una pureza de
99 % que certifica las especificaciones técnicas del producto MKN-
TiO2-A015 (catálogo del producto).

45
 Figura 20. Reporte de la composición de las NPs-TiO2 del equipo SEM con el
detector EDS.

Fuente: elaboración propia.

4.1.4. Resultados del tiempo de contacto y las concentraciones de nanopartículas

de TiO2

Los experimentos para la comprobación del tiempo de contacto entre las

NPs-TiO2 y las bacterias E. coli se realizaron por un período de 24 horas y
estos fueron para cada uno de los experimentos, a diferencia de la
investigación que realizó Alhadrami et. al. (28) por un espacio de 48 horas.
En una primera etapa se realizaron los conteos de las unidades formadoras
de colonias a cada hora. El conteo de cada experimento se inició a las 7
a.m. hasta las 10 a.m., luego se realizó el último conteo a las 10 p.m. de la
noche. En cada experimento se varió las concentraciones de 10, 40, 70 y
100 ppm de nanopartículas de TiO2.

Tabla 08. Tiempo de contacto y concentraciones las NPs-TiO2 con las

bacterias E. coli.

Concentraciones TiO2 (ppm)

Tiempo (min) 10 40 70 100

E. coli (UFC/ml)

0 100 000 100 000 100 000 100 000

46
 60 83 400 87 200 94 900 99 600

120 65 000 76 200 81 200 89 500

180 39 300 49 700 64 300 75 600

720 840 4 700 7 600 11 200

Fuente: elaboración propia.

Estos resultados de la tabla anterior indican que las nanopartículas si

actúan con inhibidoras del crecimiento bacteriano de las E. coli, pues
disminuyen considerablemente su cantidad. Las pruebas se realizaron a
diferentes tiempos de contacto para identificar la mayor eficacia de
toxicidad con diferentes concentraciones de nanopartículas que variaron
desde 10 a 100 ppm NPs-TiO2, a diferencia del trabajo de Haghi et. al. (31)
que realizaron sus experimentos hasta una concentración de 400 ppm.
Antes de poner en contacto la solución de nanopartículas y el medio de
cultivo con las bacterias E. coli se tuvieron que sonicar las muestras de
nanopartículas hasta lograr una adecuada dispersión y no formar los
aglomerados de NPs-TiO2. Este procedimiento facilito la inoculación en la
parte central de la placa Petri. La concentración inicial de 105 UFC/ml han
sido constantes para todos los experimentos. Esta única concentración de
bacterias fue con fines de comprobar la efectividad de la inhibición de las
bacterias E. coli para las variables del tiempo de contacto y concentración
de las NPs-TiO2.

4.2. Discusión de resultados

 Discusión de los resultados de la inoculación y conteo de las bacterias E. coli:

El período de incubación para los experimentos del tiempo de contacto y la

concentración de las NPs-TiO2 se mantuvieron en 24 horas antes de realizar
los conteos de las colonias de células de E. coli. En el trabajo de M. Sadiq et.
al. (21) se realizaron incubaciones de 48 horas que fue aplicada para la
cuantificación de las bacterias E. coli presentes en las aguas residuales
municipales. El menor período de inoculación de las bacterias E. coli de 24
horas es muy posible que afecto la actividad microbiana porque solamente

47
durante las primeras horas han disminuido las colonias entre un 10 a 20 % de
las bacterias iniciales inoculadas (tabla 08). Esto se produjo al comparar los
resultados del conteo con las muestras control, pues teníamos que incluir
controles positivos (inoculo con nanopartículas y medios nutritivos, sin
bacterias) y por otro lado control negativo (inoculo con medios nutritivos sin
nanopartículas) como lo recomiendan los autores citados (21).

En el trabajo de Sen et. al. (24) realizaron el experimento con nanopartículas

de TiO2 que tenían modificaciones con grupos sulfonados hasta un 3 % con la
finalidad de modificar la superficie y mejorar sus propiedades para una alta
estabilidad coloidal, baja viscosidad y aumento de la conductividad térmica y
electroquímica. En el presente trabajo solamente se utilizó nanopartículas de
TiO2 sin modificación alguno, por ello existe una baja eficiencia de inhibición a
diferencia de Khan et. al. (16) que adicionaron alizarina para conseguir
terminales hidroxilos de las nanopartículas de TiO2 anatasa lo cual favorece la
inhibición de bacterias a temperaturas ambiente.

Los resultados de las imágenes del SEM que muestran la aglomeración (figura
16) de las nanopartículas de TiO2 deben haber influenciado en una poca
toxicidad sobre las bacterias E. coli (16), y por consiguiente, un bajo
rendimiento principalmente para aquellas concentraciones de nanopartículas
mayores a 40 ppm pues llegaron a disminuir hasta un 4x103 UFC/ml que resulta
muy desfavorable.

La variedad de los tamaños de las nanopartículas de TiO2 utilizadas estuvieron

probablemente entre 10 y 100 nm según los resultados de la primera y última
evaluación de la técnica de dispersión de luz dinámica (DLS). El tamaño
promedio de 11.03 de diámetro de las nanopartículas deben haber sido
afectado por la heterogeneidad y la aglomeración que existió de acuerdo a los
análisis de imágenes del SEM. Esta diferencia de tamaños ha perjudicado una
alta toxicidad de las nanopartículas de TiO2 en las bacterias E. coli. Este efecto
de antibacteriano de las nanopartículas de TiO2 también se produjeron en los
trabajos de Ochoa et. al. (23) y Lin et. al. (25) para diámetros menores de 25
nm de las nanopartículas de TiO2.

48
 Las concentraciones de nanopartículas utilizadas en los experimentos
estuvieron dentro del rango de 10 a 100 ppm. Con la concentración de 10 ppm
de TiO2 se ha conseguido disminuir las bacterias E. coli desde 1x105 UFC/ml
hasta 840 UFC/ml durante el período de contacto de 24 horas, este resultado
se compara con lo realizado por Moura y Van Houten (26) que realizaron los
experimentos en 48 horas con concentraciones de 10 y 40 ppm de TiO2
logrando una alta toxicidad de las bacterias E. coli.

 Discusión de los resultados del tiempo de contacto y la concentración de las

nanopartículas TiO2 con las bacterias E. coli:

La inhibición del crecimiento bacteriano tiene relación con el tiempo de contacto

y la concentración de las nanopartículas. Para una concentración de 10 ppm
de NPs-TiO2 y un período de contacto de 180 minutos (figura 21) se logra inhibir
la cantidad de 16 600 UFC/ml que resulta muy bajo a comparación de lo
estudiado por Planchon et. al. (27), que, con esa misma concentración, logra
generar toxicidad de las bacterias E. coli hasta en un 63 % de UFC/ml. Esta
baja inhibición se debe a la poca dispersión de las NPs-TiO2 lo cual hizo que la
toxicidad disminuya, pues se tiene entendido que a menores concentraciones
de nanopartículas se genera gran área superficial que provoca mayor toxicidad;
a diferencia de que a mayor concentración de las nanopartículas la actividad
antibacterial se demora e inclusive ya no genera inhibición bacteriana la cual
puede durar varios días (21).

120000

100000

80000
UFC/ml

60000
39300
40000

20000

0
0 100 200 300 400 500 600 700 800
Tiempo (min)

Figura 21. Inhibición de las bacterias E. coli a concentración de 10 ppm de NPs-TiO2.

Fuente: elaboración propia.

49
Por otra parte, está demostrado que la actividad fotocatalítica de las
nanopartículas de TiO2 son eficaces para la inhibición de las bacterias E. coli
para concentraciones menores a 1x104 UFC/ml que se producen inclusive en
20 minutos de contacto (26).

La letalidad de la toxicidad de las nanopartículas de TiO2 sobre las bacterias E.

coli suceden en aproximadamente 60 minutos (27) cuando se genera un área
superficial grande, a concentraciones menores de 100 ppm de TiO2, la causa
de esta toxicidad es por el principio de adsorción de las nanopartículas a la
pared celular bacteriana. La poca inhibición lograda en los experimentos se
debe al tamaño de las nanopartículas utilizadas que variaron de 11.03 hasta
100 nm y a la poca dispersión de las nanopartículas que generaron pequeños
agregados en suspensión (27). El otro factor es no haber controlado el pH,
porque las bacterias a bajos pH tienen mayor resistencia a los tóxicos.

La inhibición para todos los casos de estudio con concentraciones de 10, 40,
70 y 100 ppm de TiO2 ocurrieron en forma gradual durante los primeros minutos
hasta llegar a los 180 minutos (figura 22). Esta baja inhibición también sucede
en la investigación de Alhadrami et. al. (28).quienes utilizan concentraciones
de 100, 200, 400, 600 y 800 ppm de TiO2. Por otra parte, para períodos de
contacto mayores a 180 minutos, la inhibición de las bacterias E. coli con las
partículas TiO2 disminuyen gradualmente hasta los 720 minutos de contacto.

120000 10 ppm

40 ppm
100000
70 ppm
80000
UFC/ml

60000

40000

20000

0
0 200 400 600 800
Tiempo (min)

Figura 22. Inhibición de las bacterias E. coli con concentraciones de 10, 40, 70 y 100 ppm de
NPs-TiO2 para 720 minutos.

Fuente: elaboración propia.

50
Para una concentración de 40 ppm de nanopartículas de TiO2 el efecto de la
inhibición sobre las bacterias E. coli desciende muy lentamente hasta los 120
minutos llegando a una concentración de 762 00 UFC/ml de bacterias E. coli.
Sin embargo, después de ese período de contacto ocurre una rápida inhibición
hasta los 49 700 UFC/ml de bacterias (figura 22 y 23).

120000

100000

80000
UFC/ml

60000
49700
40000

20000

0
0 100 200 300 400 500 600 700 800
Tiempo (min)

Figura 23. Inhibición de las bacterias E. coli a concentración de 40 ppm de NPs-TiO2.

Fuente: elaboración propia.

Para las concentraciones superiores a 40 ppm de NPs-TiO2 la inhibición de las

bacterias E. coli siguen la misma tendencia de disminución rápida hasta llegar
a los 180 minutos (figura 22). En cambio, para el período de contacto de 720
minutos con una concentración de 40 ppm de las NPS-TiO2 terminan por debajo
de los 11 200 UFC/ml (figura 23) indicándonos que llega a su máxima inhibición
las bacterias E. coli. Estos resultados nos proporcionan información de que es
posible controlar la inhibición o crecimiento de las bacterias E. coli utilizando
las nanopartículas de TiO2 para cumplir con los requerimientos de la
normatividad que indican como límite máximo de 10 000 NMP/ml de coliformes
termotolerantes en los efluentes de las plantas de tratamiento de aguas
residuales.

Una baja eficiencia de inactivación de las bacterias E. coli puede ser atribuido
a la utilización del medio de cultivo de agar MacConkey que fueron puesto en
contacto directo con las nanopartículas de TiO2 y no se adicionó una fuente de
materia orgánica que poseen las aguas residuales que aceleran la actividad
fotocatalítica (29). Cuando en el medio existe fuente de carbono se logra

51
disminuir tanto la materia orgánica y los coliformes totales (6) solo que la
eficiencia de remoción se prolonga por un período de 14 horas para la materia
orgánica y en 50 minutos para la inhibición del 23 % de los coliformes totales.
La fotocatálisis y fotolisis pueden tener mayor eficiencia de inhibición para los
coliformes totales llegando inclusive a un 80 % en tan solo 20 minutos; pero,
esto es para concentraciones bajas de 1x102 UFC/ml de bacterias E. coli y que
para una mayor concentración bacteriana de 1x107 UFC/ml se logra inhibir en
un período de contacto de 120 minutos. El efecto de la fotocatálisis se confirma
en los estudios de Haq et. al. (30) quienes trabajaron con una concentración de
100 mg/l de TiO2 en 24 horas con una temperatura de 37°C logrando una
inhibición de las bacterias E. coli.

Los factores de toxicidad del TiO2 que influyeron en la desinfección de las

bacterias E. coli fueron principalmente la concentración y el tamaño de las
nanopartículas. Según los resultados la mayor efectividad de desinfección se
produjo para una concentración de 10 ppm de las nanopartículas de TiO2 y
cuando aumentan las concentraciones disminuyen la eficiencia de desinfección
(31). El poco efecto de toxicidad a mayor concentración de nanopartículas es
porque se forman agregados de nanopartículas cuyos tamaños micrométricos
no penetran en las células para provocar la toxicidad, y que además el efecto
toxicológico disminuye por una mayor área superficial del agregado. Estas
aglomeraciones de las nanopartículas de TiO2 modifican el tamaño inicial que
en algunos caso posiblemente han llegado a los 100 nm (figura 16) de la
microscopia electrónica de barrido (27).

La toxicidad también está relacionada con las concentraciones de las

nanopartículas y su composición. La adición de vanadio a las nanopartículas
de TiO2 anatasa generan una mayor toxicidad; pues, en la oscuridad aumentan
su poder fotocatalítico que inhiben las bacterias E. coli (32); esto sucede para
concentraciones mayores de 17 mg/l y para un período de contacto menor a 3
horas. El efecto tóxico de las nanopartículas de TiO2 se atribuye a la
descomposición de las membranas externas de las bacterias por la reactividad
del oxígeno, principalmente por los radicales hidroxilos (OH), que conduce a la
peroxidación de fosfolípidos y finalmente a la muerte celular (22).

52
 120000

100000

80000

UFC/ml
60000

40000

20000

0
0 50 100 150 200
Tiempo (min)

Figura 24. Inhibición de las bacterias E. coli a concentraciones de 10, 40, 70 y 100 ppm de
NPs-TiO2 para 180 minutos.

Fuente: elaboración propia.

Existen una gran cantidad de bacterias que pertenecen al grupo de coliformes

que se encuentran en las aguas residuales municipales, algunos de los cuales
tienen crecimientos diferentes que varían en función del tiempo, y que otras
bacterias sobreviven a las condiciones fotocatalíticas del TiO2 e inclusive
algunas se inhibirán inmediatamente (29). Como las bacterias E. coli están
consideradas como patogénicas y son las más representativas de este grupo,
las cuales se inhiben como máximo hasta los 720 minutos; las nanopartículas
de TiO2 se pueden considerar como una alternativa para el tratamiento final de
los efluentes de las plantas de tratamiento de aguas residuales municipales
(figura 24).

53
 CONCLUSIONES

1. La mayor desinfección de las bacterias E. coli de las aguas residuales municipales

tratadas se producen para tiempos de contacto menores de 60 minutos para las
concentraciones de 10 y 40 ppm de NPs-TiO2.
2. La cuantificación de las bacterias E. coli del efluente final del agua residual municipal
tratada de la PTAR de Alcas del distrito de Sicaya que tienen instalado dos lagunas
facultativas primarias y dos lagunas secundarias fue de 710 UFC/ml.
3. La mayor desinfección de las bacterias E. coli de las aguas residuales municipales
tratadas se produce a los 180 minutos del tiempo de contacto con las nanopartículas
de TiO2.
4. Una alta eficiencia de desinfección de las bacterias E. coli de las aguas residuales
municipales tratadas ocurre para una concentración de 10 ppm de nanopartículas de
TiO2 con un tamaño de partículas de 11.03 nm.
5. Al utilizar nanopartículas de TiO2 en el tratamiento final de las aguas residuales
municipales se logra disminuciones menores a 1 000 NMP/ml de las bacterias E. coli
cumpliéndose con el Estándar de Calidad Ambiental para agua de riego de vegetales.

54
 RECOMENDACIONES

1. La caracterización de las bacterias E. coli se debe realizar con otros métodos para
mejorar los resultados y también incluir los análisis de las otras bacterias que están
presentes en los coliformes totales.
2. El tamaño de las nanopartículas influye en la desinfección de las bacterias E. coli, por
lo que se recomienda utilizar nanopartículas de TiO2 menores a 30 nm para darle
mayor poder fotocatalítico.
3. Para mejorar el tiempo de contacto de las bacterias E. coli se recomienda utilizar
nanomateriales compuestos, modificados o aquellos nanomateriales a base de
carbono.
4. Se recomienda mejorar la sonicación de la muestra de nanopartículas que se analizan
en el SEM para lograr una mayor dispersión y la identificación de la estructura
morfológica de las nanopartículas de TiO2.
5. Por el período de contacto de 180 minutos de las nanopartículas de TiO2 y las bacterias
E. coli es necesario mejorar estos resultados modificando la utilización de otro tipo de
inoculaciones y las recomendaciones anteriores.

55
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59
ANEXOS

60
Anexo 01. Matriz de consistencia.

Problema general Objetivo general Hipótesis general

Para un determinado tiempo de contacto y una

¿A qué períodos de contacto entre las bacterias E. Evaluar el tiempo de contacto de las bacterias E. coli
determinada concentración de nanopartículas de TiO2
coli y las nanopartículas de TiO2 se producirá una y la concentración de nanopartículas de TiO2 en la
se producirán una desinfección completa de las
completa desinfección de las bacterias de las aguas desinfección de las bacterias de las aguas residuales
bacterias E. coli de las aguas residuales municipales
residuales municipales tratadas? municipales tratadas.
tratadas.

Problemas específicos Objetivos específicos Hipótesis específicas

Para un determinado tiempo de contacto entre las

¿Cuál es la cantidad de las bacterias E. coli Cuantificar las bacterias E. coli que se encuentran en
bacterias E. coli y las nanopartículas de TiO2 ocurrirá
presentes en el efluente final de un agua residual el efluente final de un agua residual municipal
una mayor o menor desinfección de las bacterias de las
municipal tratada? tratada.
aguas residuales municipales tratadas.

¿Cuál es el menor tiempo de contacto entre las Evaluar la mayor desinfección de las bacterias E. coli Para una determinada concentración de nanopartículas
bacterias E. coli y las nanopartículas de TiO2 para con el menor tiempo de contacto de las de TiO2 ocurrirá una baja o alta eficiencia de
una mayor desinfección de las bacterias de las nanopartículas de TiO2 en la desinfección de las desinfección de las bacterias E. coli de las aguas
aguas residuales municipales tratadas? aguas residuales municipales tratadas. residuales municipales tratadas.

¿A qué concentración de nanopartículas de TiO2 se Hallar la concentración en que las nanopartículas de

producirá una alta eficiencia de la desinfección de las TiO2 produzcan una alta eficiencia de la desinfección
bacterias E. coli de las aguas residuales municipales de las bacterias E. coli de las aguas residuales
tratadas? municipales tratadas.

Fuente: elaboración propia.

61
Anexo 02. Operacionalización de las variables.

Tipo de variables Denominación de la variable Descripción de la variable Dimensión Indicadores Instrumentos

Tiempo que permanecen las nanopartículas de TiO2

Tiempo de contacto de las
Independiente (X1) en un volumen de aguas residuales hasta que las Tiempo minutos Cronómetro
nanopartículas.
bacterias E. coli sean desinfectadas

Cantidad de nanopartículas de TiO2 en miligramos

Concentración de ppm (partes
Independiente (X2) que produce efecto en las bacterias E. coli en un litro Cantidad Balanza
nanopartículas. por millón)
del efluente final de las aguas residuales tratadas

Número de bacterias E. coli que mueren a UFC

Desinfección de las bacterias consecuencia de actividad antimicrobial de las (Unidades Contador de
Dependiente (Y) Número
E. coli. nanopartículas de TiO2. Formadoras colonias
de colonias)

Fuente: elaboración propia.

62
Anexo 03. Panel fotográfico - Planteamiento del problema.

Fotografía 01. Contaminación de los efluentes de PTAR Alcas - Sicaya, antes de la mejora de la operación de
la planta.

Fotografía 02. Efluente final de la PTAR Alcas - Sicaya después de la mejora de la operación.

63
Fotografía 03. Planta de tratamiento de aguas residuales municipales de Quiullacocha, Sicaya - Huancayo.

Fotografía 04. Efluente final de la planta de tratamiento de aguas residuales municipales de Quiullacocha,
Sicaya - Huancayo.

64
 Fotografía 05. Planta de tratamiento de aguas residuales municipales de Chupaca - Junín.

Fotografía 06. Sistema de tratamiento terciario con cloro de la planta de tratamiento de aguas residuales
municipales de Chupaca - Junín.

65
Fotografía 07. Alimentación del cloro en el tratamiento terciario de la planta de tratamiento de aguas
residuales municipales de Chupaca - Junín.

66
Anexo 04. Resultados del análisis de coliformes termotolerantes de la PTAR Alcas - Sicaya
por la empresa SAG S.A.C.

67
Anexo 05. Panel fotográfico - Caracterización y análisis de las aguas residuales de la PTAR
de Alcas - Sicaya.

Fotografía 08. Punto de toma de muestra del efluente final de la PTAR Alcas - Sicaya realizado por la
empresa SAG S.A.C.

Fotografía 09. Punto de toma de muestra del efluente final de la PTAR Alcas - Sicaya para la realización del
análisis de E. coli.

68
 Fotografía 10. Mechero Bunsen y la preparación del medio de cultivo.

Fotografía 11. Recuento de colonias durante la caracterización de las aguas residuales de la PTAR de Alcas -
Sicaya.

69
Anexo 06. Resultados de la caracterización del tamaño de las nanopartículas de TiO2 con
el equipo DLS.

70
71
72
73
74
75
76
77
Anexo 07. Fotografías de la caracterización de las nanopartículas de TiO2 con el SEM.

Fotografía 12. NPs-TiO2-A015 marca mKNANO adquiridas de la empresa M.K Impex Corporation, Div.
mkNANO de Canadá.

Fotografía 13. Metalización de las muestras de NPs-TiO2 para el análisis en el SEM.

78
Fotografía 14. Muestras preparadas para el análisis de morfología, estructura y composición en el SEM.

79
 Fotografía 15. Ingreso de las muestras al equipo SEM.

Fotografía 16. Mapeo para la determinación de la morfología y estructura del TiO2 en el equipo SEM.

Fotografía 17. Mapeo de la muestra para la determinación de la composición de la muestra de TiO 2 en el

equipo SEM.

80
Anexo 08. Resultados del tiempo de contacto y concentración de NPs-TiO2 con las
bacterias E. coli.

Resultados para la concentración de nanopartículas de 10 ppm

Primer conteo Segundo conteo Promedio del conteo

Tiempo Concentración
(min) TiO2 (ppm) Bacterias E. coli Bacterias E. coli Bacterias E. coli
(UFC/ml) (UFC/ml) (UFC/ml)

0 10 100 000 100 000 100 000

60 10 84 250 82 550 83 400

120 10 65 480 64 520 65 000

180 10 36 300 42 300 39 300

720 10 1 240 440 840

Fuente: elaboración propia.

Resultados para la concentración de nanopartículas de 40 ppm

Primer conteo Segundo conteo Promedio del conteo

Tiempo Concentración
(min) TiO2 (ppm) Bacterias E. coli Bacterias E. coli Bacterias E. coli
(UFC/ml) (UFC/ml) (UFC/ml)

0 40 100 000 100 000 100 000

60 40 86 990 87 410 87 200

120 40 77 120 75 280 76 200

180 40 48 600 50 800 49 700

720 40 4 950 4 450 4 700

Fuente: elaboración propia.

81
 Resultados para la concentración de nanopartículas de 70 ppm

Primer conteo Segundo conteo Promedio del conteo

Tiempo Concentración
(min) TiO2 (ppm) Bacterias E. coli Bacterias E. coli Bacterias E. coli
(UFC/ml) (UFC/ml) (UFC/ml)

0 70 100 000 100 000 100 000

60 70 95 230 94 570 94 900

120 70 82 700 79 700 81 200

180 70 63 410 65 190 64 300

720 70 7 530 7 670 7 600

Fuente: elaboración propia.

Resultados para la concentración de nanopartículas de 100 ppm

Primer conteo Segundo conteo Promedio del conteo

Tiempo Concentración
(min) TiO2 (ppm) Bacterias E. coli Bacterias E. coli Bacterias E. coli
(UFC/ml) (UFC/ml) (UFC/ml)

0 100 100 000 100 000 100 000

60 100 99 110 100 090 99 600

120 100 90 560 88 440 89 500

180 100 76 910 74 290 75 600

720 100 9 480 12 920 11 200

Fuente: elaboración propia.

82
Anexo 09. Gráficas del tiempo de contacto y concentración de NPs-TiO2 con las bacterias
E. coli.

Gráfico 01. Comportamiento de la toxicidad de la concentración de 70 ppm de NPs-TiO2.

120000

100000

80000
UFC/ml

60000

40000

20000

0
0 100 200 300 400 500 600 700 800
Tiempo (min)

Fuente: elaboración propia.

Gráfico 02. Comportamiento de la toxicidad de la concentración de 100 ppm de NPs-TiO2.

120000

100000

80000
UFC/ml

60000

40000

20000

0
0 100 200 300 400 500 600 700 800
Tiempo (min)

Fuente: elaboración propia.

83
Anexo 10. Certificados y constancias de calibración de los instrumentos.

Certificado de análisis del equipo DLS.

84
85
86
87
88
89
90
91
Protocolo de instalación SEM y EDS.

92
93
94
95
Anexo 11. Documentos utilizados para el traslado de las muestras al laboratorio.

96
97
98
99
100
Anexo 12. Costo del tratamiento con nanopartículas de dióxido de titanio en la desinfección
de bacterias E. coli para aguas residuales municipales tratadas.

Costos totales anualizados del tratamiento con nanopartículas de TiO2.

Caudal (mg/d) Costos estimados de inversión (dólares)

Dosis de Tratamiento Estimado
PPTS MPLL Desinfección Descloración Total
TiO2 (mg/l) de sólidos de O/M
1 2.25 2 180 000 60 000 280 000 13 100
Nota: mg/d = miligramos por día; PPTS = promedio de períodos de tiempo seco; MPLL = máximos de períodos
de lluvia.
Fuente: elaboración propia.

101