PRÁCTICA N° 7
MITOCONDRIAS Y CADENA RESPIRATORIA
MITOCONDRIAL
I. INTRODUCCIÓN.
Las mitocondrias, cloroplastos y muchas bacterias producen ATP por un
mecanismo de membrana conocido como acoplamiento quimiosmótico.
Producen la mayor parte del ATP de una célula animal, utilizando la energía
producida en la oxidación de azúcares, ácidos grasos y aminoácidos.
Las mitocondrias son organelos constituidos por una membrana porosa externa
y una membrana interna altamente permeable y plegada (crestas
mitocondriales) que contiene gran parte del mecanismo requerido para la
respiración aerobia. La porosidad de la membrana externa es resultado de la
presencia de proteínas integrales denominadas porinas. La arquitectura de la
membrana interna y la aparente fluidez de su bicapa, facilitan la interacción de
los componentes requeridos durante el transporte de electrones y la formación
de ATP. La membrana interna rodea una matriz mitocondrial parecida a un gel
que contiene; además de proteínas, enzimas que producen NADH y FADH2 a
partir de la oxidación de Acetil CoA, un sistema genético que incluye DNA, RNA,
ribosomas y todos los mecanismos necesarios para transcribir y traducir
información genética.
La mitocondria es el centro del metabolismo oxidativo de la célula que convierte
los productos del catabolismo de carbohidratos, grasas y proteínas en energía
química almacenada en ATP. Piruvato y NADH son productos de la glucólisis; el
piruvato, es transportado a través de la membrana mitocondrial interna, donde
sufre descarboxilación y se combina con la coenzima A para formar acetil-CoA,
que se condensa con oxalacetato para formar citrato, el cual ingresa al ciclo del
ácido tricarboxílico (ciclo de Krebs). Los 20 aminoácidos se desdoblan para
formar piruvato, acetil-CoA o intermediarios del ciclo del ácido tricarboxílico.
Por lo tanto, dicho ciclo es el camino en el cual convergen las principales vías
metabólicas de la célula.
En la membrana mitocondrial interna, los electrones de alta energía son cedidos
por el NADH y el FADH2, pasan a lo largo de la cadena de transporte de electrones
(cadena respiratoria) y se combinan finalmente con oxígeno molecular (02) en
una reacción energéticamente favorable, liberando energía que se emplea para
generar un gradiente electroquímico de protones (H+). El movimiento
controlado de protones que regresan a través de la membrana por medio de una
enzima sintetizadora de ATP se emplea para la formación de ATP en el sitio
catalítico de la enzima. El bombeo de protones es llevado a cabo por tres grandes
complejos enzimáticos respiratorios embebidos en la membrana.
La cadena transportadora de electrones contiene cuatro tipos diferentes de
transportadores: citocromos que contienen hem, flavoproteínas que contienen
nucieótidos con flavina, proteínas de hierro y azufre, y quinonas. Flavoproteinas
y quinonas pueden aceptar y donar átomos de hidrógeno, en tanto que
citocromos y proteínas de hierro y azufre sólo aceptan y donan electrones.
El gradiente electroquímico de protones resultante a través de la membrana
mitocondrial interna es utilizado para producir ATP mediante el flujo de H+ hacia
la matriz a través de la ATP sinteasa, una enzima que está localizada en la
membrana mitocondrial interna.
La enzima que cataliza la formación de ATP es un complejo de múltiples
proteínas denominado ATP sinteasa que contiene dos partes diferentes: una
cabeza (FI) que se proyecta al interior de la matriz e incluye un sitio catalítico, y
una basal (Fo) integrada a la bicapa de lípidos formando un canal a través del
cual se conducen protones desde el espacio intermembrana hasta la enzima.
Las proteínas que constituyen una mitocondria pueden ser codificadas en el DNA
mitocondrial y sintetizadas en el organelo, o también pueden ser sintetizadas en
el citoplasma e importadas al organelo luego de la traducción.
Si bien la mayor cantidad del DNA, en la mayoría de los eucariontes se encuentra
en el núcleo, también aparece en los cloroplastos y en las mitocondrias de
animales, vegetales y hongos. Estas organelas son los principales sitios de
formación de ATP, durante la fosforilación oxidativa en las mitocondrias y la
fotosíntesis en los cloroplastos. Mitocondrias y cloroplastos de eucariontes
actuales que evolucionaron de bacterias captadas por endocitosis, contienen
DNA circulares que codifican proteínas esenciales para la función de las
organelas.
II. PROCEDIMIENTO Y OBSERVACIÓN DE MUESTRAS.
2.1. Observación de Mitocondrias en Túbulos Renales
➢ En láminas preparadas .de muestras de riñón y coloreadas con la técnica de
hematoxilina fosfotungstica, en el citoplasma de las células cúbicas que
tapizan los Túbulos renales; observar al microscopio con diferentes
aumentos las mitocondrias como gránulos finos de color magenta o lila
oscuro.
➢ Dibujar, colorear y poner los nombres que les correspondan a las
mitocondrias de las muestras observadas
40X 100X
2.2. Observación de la Morfología Estructural Mitocondrial.
En proyecciones de multimedia de esquemas y figuras, los alumnos estudiarán,
analizarán y reconocerán en las mitocondrias:
• La morfología estructural mitocondrial.
• Los componentes de la cadena respiratoria mitocondrial, el transporte de
electrones y la fosforílación oxidativa.
III. PREGUNTAS DE EVALUACIÓN.
1. Indicar y esquematizar con un dibujo las partes de la mitocondria.
2. Mencione las diferencias entre la membrana interna y externa mitocondrial
3. Mencionar las principales vías metabólicas que se producen en la
mitocondria
4. ¿Cuáles son los componentes de la cadena respiratoria mitocondrial?
5. ¿Qué es la fosforilación oxidativa y cuales son sus componentes?
6. ¿En qué consiste el Ciclo de Kreps?
7. ¿En qué consiste la beta oxidación de ácidos grasos?
8. Mencione las partes de la ATP sintetasa
9. Mencione 3 inhibidores de la cadena de fosforilación oxidativa
10. Mencione 3 tejidos celulares que presenten mayor cantidad de
mitocondrias.
11. ¿Qué papel juegan las mitocondrias en el envejecimiento celular?
